JP6843845B2 - 1,4−ジ−(4−メチルチオフェニル)−3−フタロイルアゼチジン−2−オンおよびその誘導体 - Google Patents
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Description
本発明は、化合物1,4−ジ−(4−メチルチオフェニル)−3−フタロイルアゼチジン−2−オン(1,4-di-(4-methylthiophenyl)-3-phtaloylazetidine-2-one)およびその誘導体、それらの合成方法およびそれらの使用、特に、それらの治療的使用、とりわけ、エンドカンナビノイド系の過剰活動に関連する病状の治療における使用、ならびに、純粋に審美的目的のため、とりわけ、体重減少を可能にするためのそれらの使用に関する。
・R1およびR2は、同一または異なっていてもよく、水素原子またはCOR3、SO2R4もしくはCONR5R6基を表すか;またはそれらを有する窒素原子と共に、少なくとも1個のさらなるヘテロ原子、C=O基、アリール基またはヘテロアリール基を含んでなる5員または6員複素環を形成し;
・R3、R4、R5およびR6は、独立に、水素原子、またはアリールもしくはヘテロアリール基を表し、前記基は、ハロゲン原子、OR7、NR8R9、SR10、S(O)R11、SO2R12、SO2NR13R14、OCOR15、NR16COR17、NR18C(O)OR19、CO2R20、CONR21R22、OCO2R23、OCONR24R25、COR26、ニトロ(NO2)、シアノ(CN)、オキソ(=O)およびCF3から選択される1個以上の基で置換されていてもよく;かつ
・R7〜R26は、独立に、水素原子または(C1−C6)アルキル、アリールもしくはアリール−(C1−C6)アルキル基を表す]。
(1)例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの薬学的に許容可能な無機酸とともに形成されるか;または例えば、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸(camphosulphonic acid)、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプタン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシナフトエ酸、2−ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、2−ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸、サリチル酸、コハク酸、ジベンゾイル−L−酒石酸、酒石酸、p−トルエンスルホン酸、トリメチル酢酸、トリフルオロ酢酸などの薬学的に許容可能な有機酸とともに形成される、薬学的に許容可能な酸付加塩および
(2)親化合物中に存在する酸性プロトンが金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオンもしくはアルミニウムイオンで置換されている場合に形成されるか;または例えば、ジエタノールアミン、エタノールアミン、N−メチルグルカミン、トリエタノールアミン、トロメタミンなどの薬学的に許容可能な有機塩基と;または例えば、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウムなどの薬学的に許容可能な無機塩基と配位結合させた、薬学的に許容可能な塩基付加塩。
・R1およびR2は、同一または異なっていてもよく、水素原子またはCOR3、SO2R4もしくはCONR5R6基を表し;かつ
・R3、R4、R5およびR6は、独立に、水素原子、またはアリール、好ましくは、フェニル、もしくはヘテロアリール基、例えば、ピリジンなどを表し、前記基は、ハロゲン原子、OR7、NR8R9、SR10、S(O)R11、SO2R12、SO2NR13R14、OCOR15、NR16COR17、NR18C(O)OR19、CO2R20、CONR21R22、OCO2R23、OCONR24R25、COR26、ニトロ(NO2)、シアノ(CN)およびCF3、有利には、ハロゲン原子、OR7、NR8R9、SR10、S(O)R11、SO2R12、OCOR15、CO2R20、OCO2R23、COR26、ニトロ(NO2)、シアノ(CN)およびCF3、有利には、ハロゲン原子、OR7、NR8R9、SO2R12、およびCF3から選択される1個以上の基で置換されていてもよく;R7〜R26は上記で定義した通りである。
・R1およびR2は、同一または異なっていてもよく、水素原子またはCOR3、SO2R4もしくはCONR5R6基を表し;
・R3、R4およびR5は、独立に、ハロゲン原子、OR7、NR8R9、SR10、S(O)R11、SO2R12、SO2NR13R14、OCOR15、NR16COR17、NR18C(O)OR19、CO2R20、CONR21R22、OCO2R23、OCONR24R25、COR26、ニトロ(NO2)、シアノ(CN)およびCF3、有利には、ハロゲン原子、OR7、NR8R9、SR10、S(O)R11、SO2R12、OCOR15、CO2R20、OCO2R23、COR26、ニトロ(NO2)、シアノ(CN)およびCF3、有利には、ハロゲン原子、OR7、NR8R9、SO2R12、およびCF3から選択される基で置換されていてよい、アリール基、好ましくは、フェニルを表し、R7〜R26は、上記で定義した通りであり;かつ
・R6は水素原子を表す。
(i)4−メチルチオベンズアルデヒドと4−メチルチオアニリンとを縮合して、下記式(IV):
(ii)得られた式(IV)の化合物と下記式(V):
(iii)場合により、好ましくは、メチルヒドラジンの作用により、式(IA)の化合物のフタロイル化アミン官能基を脱保護して、下記式(IF):
(iv)工程(ii)または工程(iii)で得られた化合物を回収する工程。
(i)4−メチルチオベンズアルデヒドと4−メチルチオアニリンとを縮合して、下記式(IV):
(ii)工程(i)で得られた式(IV)の化合物と下記式(V):
その後、式(IA)の化合物を回収する工程。
(i)4−メチルチオベンズアルデヒドと4−メチルチオアニリンとを縮合して、式(IV)の化合物を得る工程;
(ii)工程(i)で得られた式(IV)の化合物と式(V)のケテンとの間でシュタウディンガー付加環化する工程;
(iii)好ましくは、メチルヒドラジンの作用により、工程(ii)で得られた式(IA)の化合物のフタロイル化アミン官能基を脱保護して、下記式(IF):
その後、場合により、そのようにして得られた式(IF)の化合物と式R1−Xおよび/またはR2−X’[式中、R1−XおよびR2−X’は、上記で定義した基R1およびR2の、活性化形態、例えば、塩化アシル、塩化スルホニルおよびアリールイソシアネートなどである]の化合物とをカップリングする工程;および
(iv)工程(iii)で得られた化合物を回収する工程。
(i)4−メチルチオベンズアルデヒドと4−メチルチオアニリンとを縮合して、式(IV)の化合物を得る工程;
(ii)ジクロロリン酸フェニルなどのカップリング剤を用いて、トリエチルアミンなどのプロトン受容体の存在下で、工程(i)で得られた式(IV)の化合物とin situで得られた式(V)のケテンとの間でシュタウディンガー付加環化する工程;
(iii)好ましくは、メチルヒドラジンの作用により、工程(ii)で得られた式(IA)の化合物のフタロイル化アミン官能基を脱保護して、式(IF)の化合物を得る工程、その後、場合により、そのようにして得られた式(IF)の化合物とN−フタロイルグリシンとを、ジクロロリン酸フェニルなどのカップリング剤を用いて、トリエチルアミンなどのプロトン受容体の存在下でカップリングして、式
(iv)工程(ii)または工程(iii)で得られた化合物を回収する工程。
1.材料
融点は、Electrothermal社製IA9300装置を用いて決定され、未補正であると報告されている。
MP℃=143〜144(ジイソプロピルオキシド)。
1H-NMR (CDCl3): δ 2.51, s, 3H, 4-SCH3;: 2.54, s, 3H, 4’-SCH3; 7.18, d, 2H, H3H5, J = 6.7 Hz; 7.29, d, 2H, H2H6; 7.30, d, 2H, H3’H5’, J = 8.4 Hz; 7.80, d, 2H, H2’H6’; 8.41, s, 1H, HC=N。
MS (ESI) m/z (%): 274[M+H]+
IR (KBr, cm-1): 1552.53 (ν C=N)。
MP℃=118〜120(ジエチルエーテル)
1H-NMR (CDCl3): δ 2.44, s, 3H, CH 3; 2.49, s, 3H, CH 3; 5.26, d, 1H, Ha; 5.33, d, 1H, Hb (JHaHb = 2.4Hz); 7.18, d, 2 arom.H, (J = 8.4Hz); 7.25-7.30, m, 4 arom.H; 7.78, m, 2H, H4’’-H5’’; 7.88, m, 2H, H3’’-H6’’。
13C-NMR (100.6 MHz, CDCl) 16.45(CH3); 16.50(CH3); 60.99(Cb); 62.77(Ca); 118.15(2C); 123.85(C3’’-C6’’); 126.63(2C); 127.00(2C); 127.91(2C); 131.65(C2’’-C7’’); 132.10(C1); 134.14(C4-C1’); 134.61(C4’’-C5’’); 140.11(C4’); 161.75(C1’’-C8’’); 166.65(Cc)。
MS (ESI) m/z (%): 461.6 [M+H]+
IR (KBr, cm-1): 3064, ν CHar; 2974, 2922, 2835, ν CHaliph; 1759, 1714, ν C=O.
化合物JM−00.266の別の合成経路を開発した。それは、イミン(化合物IV)をN−フタロイルグリシンと接触させ、プロトン受容体としてのトリエチルアミンの存在下でカップリング剤であるジクロロリン酸フェニルによってin situでケテンを生成することにある。この方法の利点は、塩化チオニルの使用を回避することであり、その取扱いおよび除去は注意を要し得る。
加えて、化合物JM−00.266上のフタロイル化アミン官能基の脱保護を行った。アミン官能基の離脱は、塩化メチレン中でのメチルヒドラジンの作用によりうまく完了した。
実験式:C17H18N2S2O;分子量:330.47; M = 134°C (AcOEt)。
IR (KBr, cm-1): 3350-3061 (νCHar); 2981-2835 (νCHaliph); 1728 (vC=O)。
1H-NMR, δ(ppm), DMSO-d6: 2.43, s, 3H, SCH3(benzald); 2.49, s, 3H, SCH3(anil); 3.66, 2H, NH 2; 3.92, d, 1H, (NCHlact); 4.73, d, 1H, (COCHlact), J= 2.0 Hz; 7.18-7.34, m, 8 Har。
13C-NMR, δ(ppm), DMSO-d6: 14.73; 15.54; 65.41; 70.82; 117.75; 124.31; 126.41; 126.91; 127.52; 128.91; 132.41; 132.51; 133.08; 134.30; 135.01; 138.14; 168.80.
MS (ESI) m/z (%): 331 [M+H]+
先に製造したアミンから出発して、化合物JM−00266の優れた同族誘導体(HR−0133)を合成することが考えられた。この誘導体は、HR−0131上のフタロイルグリシンの縮合から生じ、ラクタム環とフタロイル置換基との間に空間が導入された構造を表す。
実験式:C27H23N3S2O4;分子量:517.63; M = 190-192°C (iPrOiPr)。
IR (KBr, cm-1): 3348 (νCHar); 2998-2918 (νCHaliph); 1728, 1693 (vC=O)。
1H-NMR, δ(ppm), DMSO-d6: 2.43, s, 3H, SCH 3(benzald); 2.49, s, 3H,S CH 3(anil); 4.37, s, 2H, CH 2; 4.72, dd, 1H, (COCHlact), J = 2.4 Hz, J = 7.6 Hz; 5.05, d, 1H, (NCHlact), J = 2.4 Hz; 7.18, d, 2H, H2H6benzald, J = 8.8 Hz; 7.23, d, 2H, H3H5benzald, J = 8.8 Hz; 7.29, d, 2H, H3H5anil, J = 8.4 Hz; 7.40, d, 2H, H2H6anil, J = 8.4 Hz; 7.90-7.98, m, 4H, FtarH, 9.20, d, 1H, NH, J = 7.6 Hz。
13C-NMR, δ(ppm), DMSO-d6: 14.62; 15.39; 40.33; 61.49; 65.08; 117.86(2C); 123.44(2C); 126.34(2C); 127.35(2C); 127.39; 131.88; 133.09(2C); 133.19(2C); 134.40; 134.80(2C); 141.00; 163.98; 166.98; 167.59(2C)。
MS (ESI) m/z (%): 518 [M+H]+。
1.材料および方法
1.1.in vitro研究
1.1.1.肝臓移植片培養
マウスの肝臓を、ペントバルビタールナトリウム麻酔(50mg/kg)下、酸素で飽和したハンクス培地(pH7.4)で、in situで潅流した。次に、肝臓を同じ培地中でBrendel/Vitronスライサー(Tucson、AZ、米国)を用いて切片にした。次いで、肝臓切片(約200μm)を、制御された雰囲気(5%CO2)下で、酸素処理し不活化ウシ胎仔血清(10%)および抗生物質/抗真菌薬カクテル(1%)を補給したウィリアム培地E(WME)中で21時間インキュベートし、これに、試験すべき拮抗薬またはビヒクルのいずれかを加える。
全メッセンジャーRNA(mRNA)抽出を、Tri Reagent(Euromedex、フランス)を用いて行い、Bio−Rad社製iScript(商標)Reverse Transcription super mixキット(Bio−Rad、フランス)を用いてmRNA 1μgから相補的DNA(cDNA)の連続合成を行った。
HEK293T/17(ATCC)細胞をDMEM 10%FCS中で培養し、その後、96ウェルプレート(96-well plates plates)に30000細胞/ウェルで播種した。24時間後、細胞を、百日咳毒素(PTX)を有するまたは有さないpcDNA3.1−mCB1(50ng)およびpGlo(100ng)プラスミドによるFuGENE HD(Promega)により一時的トランスフェクションに付した。対照アッセイでは、細胞を、PTXを有するまたは有さない空のpcDNA3(EV)およびpGloベクターでトランスフェクトした。48時間後(トランスフェクションの24時間後)、細胞を、10%FCSを含むCO2非依存性培地中に2%GloReagentとともに2時間入れた(80μL/ウェル)。
1.2.1.消化管通過
本明細書で非吸収性マーカーとして使用されるアラビアガム中に懸濁された木炭の経口投与によって、胃および腸の通過を測定した。簡潔に述べると、短時間の絶食後、木炭の経口投与前に対象となる分子JM−00.266(すなわち、化合物IA)(10mg/kg)の存在または不在下でC57BL/6マウスにアナンダミド(10mg/kg)を腹膜内(i.p.)注射した。25分後、腸を完全に除去するために、動物を頸椎脱臼により犠牲にした。幽門の始まりと木炭ボーラスの位置との間の距離を測定した。
リモナバント様分子の短期効果、ならびにCB1Rに対するそれらの選択性を評価するために、野生型C57BL/6マウスおよびCB1R−/−マウスに、ビヒクルまたはJM−02.003もしくはJM−00.266(すなわち、化合物IA)(10mg/kg)のi.p.注射の10分後に経口糖負荷試験(2g/kgでのOGTT、)を行った。血糖は、Contour(登録商標)TS血糖モニター(参照番号81574201、Bayer HealthCare)および反応性ストリップ(参照番号81574274、Bayer HealthCare)を用いてグルコース経口投与後t=0、t=15分、t=30分、t=45分、t=60分、t=90分、およびt=120分の時点で測定した。
インスリン耐性試験の間にインスリン感受性に対する分子JM−00.266(すなわち、化合物IA)の短期効果を測定した。この目的のために、ビヒクルまたはJM−00.266(すなわち、化合物IA)(10mg/kg)のi.p.注射の10分後に野生型C57BL/6マウスに即効性インスリン(0.5IU/kg;参照番号YT60088、Actrapid(登録商標))を腹膜内注射した。血糖は、血糖モニターを用いてインスリンi.p.注射後t=0、t=15分、t=30分、t=45分、t=60分、t=90分、およびt=120分の時点で測定した。
血漿インスリンのアッセイは、ALPCO(商標)マウスインスリンELISAキット(参照番号AKRIN−011T、ALPCO Diagnostics)を用い、供給者の指示に従って行った。OGTT中、経口グルコースボーラス(2g/kg)の投与後t=0、t=30、t=60、t=120分の時点で血液サンプルを採取した。
1.3.1.動物の食餌、食物摂取および体組成
対象となる分子の長期効果を判定するために、C57BL/6マウスを、高ショ糖、高脂肪食(HSHF:30%粗脂肪、33.5%炭水化物;参照番号E15126−34,;参照番号E15126−34、SSNIFF、ゾースト、ドイツ)を用いて20週間肥満させた。その後、これらのマウスに30日の間毎日リモナバント、JM−00.266(すなわち、化合物IA)またはビヒクルのi.p.注射を行った。並行して、処置開始後2日ごとに体重および食物摂取をモニタリングした。
リモナバントまたは分子JM−00.266(すなわち、化合物IA)での長期処置の終了時に赤外線モニタリングシステムによりマウスの自発的運動を測定した。この目的のために、動物を個別に43×43cmプレキシガラスボックス(MED associates)に20分間入れた。16個のパルス赤外線ビーム2系列を対向壁に2.5cm離して配置し、100ms分解能で歩行X−Y移動を記録した。中心は中央の32×32cmの正方形と定義した。自発運動情報に加えて、この試験により、新規性または不安惹起環境に応じた抗不安作用を予測することが可能になる。オープンフィールドで測定した変数は、全歩行活動(単位、cm)、エントリー数および中央エリアで過ごした時間、ならびに中央で移動した距離を移動した総距離で割ったものである。
Dimension Vista Intelligent Lab System(Siemens、Saint−Denis、フランス)により好適な試薬を用いて総コレステロール、トリグリセリドおよび肝臓マーカーをアッセイした。
血糖制御に対する処置の長期効果を評価するために、耐糖能(OGTT)およびインスリン感受性(ITT)を処置の前および後に評価した。従って、OGTTについては、マウスに強制的にグルコース(2g/kg)を与え、ITTについては、マウスにインスリン(0.5IU/kg)のi.p.注射を行った。いずれの場合も、Contour(登録商標)TS血糖モニター(参照番号81574201、Bayer HealthCare)および反応性ストリップ(参照番号81574274、Bayer HealthCare)を用いたグルコース経口摂取後t=0、t=15分、t=30分、t=45分、t=60分、t=90分、およびt=120分の時点で血糖を測定した。
1.4.1 高脂肪食、低脂肪食に関連する食物摂取および動物の体重
対象となる化合物JM−00.266(すなわち、化合物IA)の長期効果を判定するために、C57BL/6マウスを、高脂肪食(30%粗脂肪、33.5%炭水化物;参照番号E15126−34、SSNIFF、ゾースト、ドイツ)用いて15週間肥満させた。その後、これらのマウスに低脂肪食(5%脂質;標準食AO4;UAR、エピネー−シュル−オルジュ、フランス)を施し、JM−00.266(すなわち、化合物IA)またはビヒクルの経口用量を43日間にわたって毎日昼頃与えた。処置の開始から2日ごとに動物の体重を測定した。
血糖制御に対する処置の長期効果を評価するために、耐糖能を処置期間の最後に評価した。マウスにグルコース(2g/kg)の腹膜内注射を行い、その後、血糖を、My Life Pura血糖モニター(Ypsomed、パリ、フランス)を用いてグルコース注射後t=0、t=15分、t=30分、t=45分、t=60分、t=90分、およびt=120分の時点で測定した。
このアプローチの選択は、M6の投与がグルコース負荷に先行するときに耐糖能が非常に明確に改善されることを前の結果が示しているという事実によって正当化される。
C57BL/6マウスを、高脂肪食(35%粗脂肪、25.3%炭水化物;参照番号E15742−34、SSNIFF、ゾースト、ドイツ)を用いて15週間肥満させた。その後、同じ食餌で維持したマウスに、飼料に組み込んだJM−00.266(すなわち、化合物IA)またはビヒクルの経口用量を43日間にわたって毎日与えた。処置の開始から2日ごとに動物の体重を測定した。
血糖制御に対する処置の長期効果を評価するために、耐糖能を処置期間の最後に評価した。マウスに、グルコース(2g/kg)の腹膜内注射を行い、その後、血糖を、My Life Pura血糖モニター(Ypsomed、パリ、フランス)を用いてグルコース注射後t=0、t=15分、t=30分、t=45分、t=60分、t=90分、およびt=120分の時点で測定した。
全メッセンジャーRNA(mRNA)抽出を、Tri−Reagent(Euromedex、フランス)を用いて行い、Bio−Rad社製iScript(商標)Reverse Transcription super mixキット(Bio−Rad、フランス)を用いてmRNA 1μgから相補的DNA(cDNA)の連続合成を行った。遺伝子発現は、半定量的リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応(RT−PCR)により評価した。以下に記載する使用プライマーは、Primer3Plusソフトウェア(http://www.bioinformatics.nl/cgi-25 bin/primer3plus/primer3plus.cgi)を用いて選択し、MWG−Biotech社が合成した。遺伝子発現の半定量は、各PCRの有効性を考慮し、レポーター遺伝子、TATAボックス結合タンパク質(TBP)で標準化することにより得られた。
2.1.化合物JM−00.246、JM−02.003、JM−01.1006、JM−00.242およびJM−00.266(すなわち、化合物IA)に関する短期in vitroおよびin vivo実験(急性注射)。
2.1.1.Ob/ObマウスにおけるCB1Rの肝臓発現に対する候補分子JM−00.246、JM−02.003、JM−01.006、JM−00.266(すなわち、化合物IA)およびJM−00.242の効果
研究室で以前に実施された研究は、作動薬または拮抗薬の存在下で培養された肝臓移植片においてCB1R発現を調節することが可能であることを示した(Jourdan et al. 2012)。例えば、肝臓移植片におけるCB1R発現は、SR141716(すなわち、リモナバント)での処置後に低下する。結果として、本明細書ではこのin vitroモデルを用いて、CB1R発現を改変するそれらの能力に基づいて候補分子を予め選択した。
CB1Rに拮抗するJM−02.003、JM−01.006およびJM−00.266(すなわち、化合物IA)の能力をCB1Rトランスフェクト細胞モデルにおいてcAMPの変化を測定することにより試験した(GloSensor cAMPアッセイ)。
選択した分子のin vivo効果を評価するために、本発明者らは、単一回のi.p.注射によりマウスの炭水化物代謝を調節することができたかどうかを判定しようとした。実際、最近の研究では、AEA(CB1R作動薬)の単一回のi.p.注射に応答するCB1R活性化が耐糖能およびインスリン抵抗性を変化させることが示された(Liu et al., 2012)。
JM−00.266(すなわち、化合物IA)のi.p.注射に応答して観察される血糖制御における改善が、インシュリン分泌の増加および/またはより良好なインスリン感受性による可能性があるかどうかを知るために、インスリン耐性試験(ITT)と同様に、グルコースボーラスの経口投与の後に血漿インスリンアッセイを行った。
CB1Rの活性化が胃腸運動を強く阻害することは、文献に明らかに示されている(Di Marzo et al., 2008)。これに基づいて、本発明者らは、強制給餌により投与した非吸収性木炭ボーラスの消化管に沿ったin vivo進行を測定することにより、分子JM−00.266(すなわち、化合物IA)が、CB1R作動薬(AEA)によって誘発された胃不全麻痺を改善することができるかどうかを知ろうとした。試験した実験モデルでは、予想通り、通過はAEAによって強く阻害される。興味深いことに、JM−00.266(すなわち、化合物IA)の注射は、作動薬の効果を事前に完全になくし、胃腸管通過を正常化する(図5)。これらのデータは、第1に、消化管がJM−00.266(すなわち、化合物IA)の標的であること、第2に、この分子がCB1Rに対する作動薬の効果を相殺すること、すなわち、消化管に受容体に対する拮抗作用を及ぼすことができることを示している。
化合物JM−00.266(すなわち、化合物IA)の長期効果を判定するために、C57BL/6マウスを、20週間投与する高ショ糖、高脂肪食を用いて肥満させた。その後、これらのマウスに、SR141716(すなわち、リモナバント)(10mg/kg)、JM−00.266(すなわち、化合物IA)(10mg/kg)またはビヒクルのi.p.注射を30日の間毎日与えた。
肝臓酵素であるアラニンアミノトランスフェラーゼ(ALT)、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ(AST)、小腸型アルカリ性ホスファターゼ(ALPI)、ガンマGTおよび総ビリルビンは、細胞損傷のマーカーである。化合物JM−00.266(すなわち、化合物IA)の肝臓毒性の可能性を検出するために、これらのマーカーを血漿中で測定した。
オープンフィールド試験は、ストレスの多い環境を表す照明のついた囲い内で、赤外線ビーム系により、動物の活動を測定することにある。オープンフィールドで測定した変数は、全歩行活動およびエントリー数および中央エリアで過ごした時間である。この試験により、自発運動の測定に加えて、動物の不安状態について知ることが可能になる。
処置期間中、2日間ごとに、食物摂取および体重を測定した。図7Aは、処置した動物の食物摂取が、JM−00.266(すなわち、化合物IA)での処置によって、ビヒクルを受けた対照マウスのものと比較して変わらないことを示す。SR141716(すなわち、リモナバント)を受けたマウスのみが食物摂取を一時的に減少させる。
炭水化物代謝に対する化合物JM−00.266(すなわち、化合物IA)の長期効果を評価するために、糖負荷試験(OGTT 2g/kg)を処置の前および処置の終わりに行った。結果は、JM−00.266およびSR141716(すなわち、リモナバント)での処置の30日後の肥満マウスにおける基礎血糖値(図8A)および耐糖能(図8B)の有意な改善を示す。
化合物JM−00.266(すなわち、化合物IA)の長期投与によって誘導される血糖制御の改善がインスリン抵抗性の改善に関連し得るかどうかを知るために、ITTを使用して、インスリン感受性に対する処置の効果を測定した。この試験は、処置の開始前に検出された肥満マウスのインスリン抵抗性がSR141716(すなわち、リモナバント)およびJM−00.266(すなわち、化合物IA)の30日間の投与後に改善されることを示す(図9)。インスリン注射により誘導される血糖の低下は、JM−00.266(すなわち、化合物IA)で処置したマウスではSR141716(すなわち、リモナバント)で処置したマウスよりも顕著であることに留意すべきである。
2.3.1.体重に対する効果
図10のグラフに示されている結果が示す通り:
・肥満マウス(46.21±1.18g)を高脂肪食(30%粗脂肪、33.5%炭水化物)(VEH+HF)で維持すると、それらのマウスの体重は安定したままであり;
・30%粗脂肪を含む高脂肪食の代わりに低脂肪食(5%脂質)(VEH+LF)を肥満マウス(46.01±0.84g)に供給すると、それらのマウスは体重を減らし;
・肥満マウス(45.83±0.82g)に5%脂質を含む低脂肪食を供給し、化合物M6(M6+LF)を与えると、それらのマウスの体重は大幅に減少する。
図11のグラフに示されている結果が示す通り:1日1回経口投与する化合物M6(JM−00.266)(10mg/kg)またはビヒクルでの処置の43日後に、低脂肪食(M6+LF)を受けたマウスは、各対照、ビヒクルと低脂肪食(VEH+LF)およびビヒクルと高脂肪食(VEH+HF)と比較してより良好な耐糖能を示す。
2.4.1.体重に対する効果
図12のグラフに示されている結果が示す通り:高脂肪食(35%粗脂肪)を受けた肥満マウス(46.81±3.02g)を、食事中に1日1回投与の割合にて化合物M6で処置する(M6)と、それらはビヒクルで処置したマウス(VEH)よりも体重を多く減らす。
図13のグラフに示されている結果が示す通り:食事と同時に投与する化合物M6での処置の28日後に、マウスは、食事と同時でのビヒクルの投与で処置したマウスよりも良好な耐糖能を示す。
M6での処置は、試験した組織におけるNAPE−PLDの発現の低下をもたらし、エンドカンナビノイドトーンの低下を示唆した。
肥満は、エンドカンナビノイド系(ECS)のエンドカンナビノイド1受容体(CB1R)依存性過剰活動化に関連している。従って、CB1Rの不活性化は、肥満関連代謝障害に対抗するための治療戦略を構成する。CB1R逆作動薬であるSR141716(リモナバント)は、最初の市販抗肥満薬であったが、中枢CB1Rの遮断に起因する神経精神医学的副作用のために、市場から速やかに撤退された。しかしながら、末梢CB1Rを標的とする作用は、それ自体で肥満症および特定の肥満関連疾患を治療するための治療的解決策を構成し得る。実際、食物摂取の減少が、体重減少および代謝パラメーターの改善の主要原因であると思われる場合でも、動物およびヒトにおけるいくつかの研究は、末梢CB1Rが脂質およびグルコース代謝の調節にも関与し得ることを示している(Nogueiras et al., 2008; Osei-Hyiaman et al., 2008)。従って、エンドカンナビノイド系の不活性化の有益な長期的効果は、食物摂取に対する中枢効果と、脂肪組織、肝臓、骨格筋および膵臓に対する末梢効果の両方に起因することが示唆された。末梢CB1Rの役割は、末梢性拮抗薬によるこれらの受容体の遮断が肥満マウスの心血管代謝リスクを低下させることを示す2010年のTamらの研究によって明らかに示されている。2つの最近の研究もまたこの概念と一致している。第1の研究は、内臓脂肪組織におけるエンドカンナビノイド系活性の低下が、肥満マウスにおいて観察される肝臓脂肪症の逆転に有利な脂肪細胞代謝の正常化に関連することを示唆する(Jourdan et al., 2010)。第2の研究は、in vitroアプローチにより、肝臓CB1Rの不活性化が脂肪酸ベータ酸化の刺激につながることを示している(Jourdan et al., 2012)。従って、エンドカンナビノイドCB1受容体(CB1R)拮抗薬として作用する化合物の使用は、公衆衛生上重大な影響を与えるメタボリックシンドロームなどの疾患における食物摂取ならびに炭水化物および脂質代謝の調節制御において疑う余地のなく興味深い。さらに、末梢CB1Rに対する活性を保有するが血液脳関門を通過しない化合物の開発により、リモナバント生成分子の臨床使用の困難性を回避することが可能となる。
(1)CB1受容体に対する逆作動薬特性を有すること、
(2)わずかな末梢作用しかなく、そのため、開発における過去の試みから生じる化合物の場合と同様に有害な向精神薬の副作用を生じる可能性が低いこと、
(3)肥満の状況において、特に、耐糖能およびインスリン感受性を改善することによって、かつ血中トリグリセリドを減少させることによって、炭水化物−脂質代謝に対して有益な効果を有すること、および
(4)化合物のin vivoでの強力な拮抗作用を示す、胃腸運動に対するアナンダミド(天然CB1R作動薬)の阻害作用を妨げる能力、ならびに胃不全麻痺の治療におけるその有用性を有すること。
・低脂肪食の補助として投与されたこの化合物は、高脂肪食で最初に肥満させたマウスのカロリー制限によって誘発される体重減少を増強し、耐糖能を改善させる。これらの結果により、この種の化合物と、正常カロリー食および/または食物摂取を負に調節することが知られている化合物とを組み合わせる処置を想定することができる;
・食事中に投与されたこの化合物は、高脂肪食によって肥満させ処置中にこの同じ食餌を受けたマウスの体重減少を促進し、耐糖能を改善させる。これらの結果により、対象となる化合物を、好ましくは、食事の直前および/または食事中に、投与するためのプロトコールを想定することができる;
・エンドカンナビノイド系活性、脂肪合成活性、およびマクロファージ浸潤についての様々なマーカーに対するこの化合物のin vivo効果は、とりわけ、エンドカンナビノイドトーンの低下、組織における脂質合成の低下、脂肪生成経路に関与するグルコースの使用の減少およびマクロファージ浸潤の減少を示唆する。
Claims (16)
- 下記式(I)の化合物またはその薬学的に許容可能な塩および/もしくは溶媒和物:
・R1およびR2は、同一または異なっていてもよく、水素原子またはCOR3、SO2R4もしくはCONR5R6基を表すか;またはそれらを有する窒素原子と共に、少なくとも1個のさらなるヘテロ原子、C=O基、アリール基またはヘテロアリール基を含んでなる5員または6員複素環を形成し;
・R3、R4、R5およびR6は、独立に、水素原子、またはアリールもしくはヘテロアリール基を表し、前記基は、ハロゲン原子、OR7、NR8R9、SR10、S(O)R11、SO2R12、SO2NR13R14、OCOR15、NR16COR17、NR18C(O)OR19、CO2R20、CONR21R22、OCO2R23、OCONR24R25、COR26、ニトロ(NO2)、シアノ(CN)、オキソ(=O)およびCF3から選択される1個以上の基で置換されていてもよく;かつ
・R7〜R26は、独立に、水素原子または(C1−C6)アルキル、アリールもしくはアリール−(C1−C6)アルキル基を表す]。 - R1およびR2は、それらを有する窒素原子と共に、下記式(II)または(III)の複素環を形成する、請求項1に記載の化合物:
- ・R1およびR2は、同一または異なっていてもよく、水素原子またはCOR3、SO2R4もしくはCONR5R6基を表し;
・R3、R4およびR5は、独立に、ハロゲン原子、CF3およびSO2R12から選択される基で置換されていてもよい、アリール基を表し、ここで、R12は(C1−C6)アルキル基を表し;かつ
・R6は水素原子を表す、
請求項1に記載の化合物。 - R1は水素原子であり、かつR2はCOR3、SO2R4もしくはCONR5R6基を表し、ここで、R3、R4、R5およびR6は、請求項1または3に記載の通りである、請求項1または3に記載の化合物。
- 以下の化合物から選択される、請求項1に記載の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩および/もしくは溶媒和物:
- 以下の工程を含んでなる、請求項1〜5のいずれか一項に記載の式(I)の化合物を製造するための方法:
(i)4−メチルチオベンズアルデヒドと4−メチルチオアニリンとを縮合して、下記式(IV):
(ii)得られた式(IV)の組成物と下記式(V):
(iii)場合により、式(IA)の化合物のフタロイル化アミン官能基を脱保護して、下記式(IF):
その後、場合により、そのようにして得られた式(IF)の化合物と式R1−Xおよび/またはR2−X’[式中、R1−XおよびR2−X’は、請求項1に記載の基R1およびR2の、活性化形態、塩化スルホニルおよびアリールイソシアネートである]の化合物とをカップリングする工程;および
(iv)工程(ii)または工程(iii)で得られた化合物を回収する工程。 - 有効成分として、請求項1〜5のいずれか一項に記載の式(I)の少なくとも1つの化合物と、少なくとも1つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含んでなる、医薬組成物。
- 末梢エンドカンナビノイドCB1受容体の逆作動薬としてのin vitroの使用のための、請求項7に記載の医薬組成物。
- 請求項1〜5のいずれか一項に記載の式(I)の少なくとも1つの化合物と、少なくとも1つの許容される賦形剤とを含んでなる、非治療用組成物。
- 医薬品としての使用のための、請求項7または8に記載の医薬組成物。
- エンドカンナビノイド系の過剰活動に関連する疾患の予防または治療における使用のための、請求項7または8に記載の医薬組成物。
- 前記疾患は、肥満および肥満関連代謝障害、インスリン抵抗性、糖尿病および関連合併症、肝臓脂肪症、肝線維症、肝硬変、腎線維症、腎症、心筋症、胃不全麻痺、骨および/または軟骨の損失、筋肉の喪失、ならびに不妊問題から選択される、請求項11に記載の使用のための医薬組成物。
- 対象にバランスの取れた正常カロリー食を摂取させる、請求項11または12に記載の使用のための医薬組成物。
- 前記組成物は、対象にその対象の食前および/またはその間に投与される、請求項11〜13のいずれか一項に記載の使用のための医薬組成物。
- 同時、別々または逐次の投与のための、請求項1〜5のいずれか一項に記載の式(I)の化合物、およびエンドカンナビノイド系の過剰活動に関連する疾患を予防または治療するための治療薬を含む、組合せ製剤。
- 体重増加を促進および/もしくは加速するため、または体重増加を減速および/もしくは減少させるための、請求項9に記載の非治療用組成物。
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