JP6806539B2 - 唾液中の脳由来神経栄養因子の測定方法 - Google Patents
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Description
被験個体から採取した唾液を凍結しないで0℃以上30℃以下に維持する準備工程と、
前記準備工程後に、前記唾液中のBDNFの濃度を測定する測定工程と、
を備える、方法。
(2)前記準備工程は、前記唾液を10℃以上30℃以下の温度で維持する工程である、(1)に記載の方法。
(3)前記準備工程は、前記唾液を前記温度で168時間以内維持する工程である、(1)又は(2)に記載の方法。
(4)前記準備工程は、前記唾液を前記温度で12時間以上維持する工程である、(3)に記載の方法。
(5)前記測定工程は、抗BDNF抗体を用いる抗原抗体反応を実施する工程である、(1)〜(4)のいずれかに記載の方法。
(6)前記測定工程は、酵素結合免疫吸着法を実施する工程である、(5)に記載の方法。
(7)前記測定工程は、BDNF200pg/ml以下の濃度における標準曲線の回帰式の相関係数が0.99以上である測定方法によって前記脳由来神経栄養因子を測定する工程である、(1)〜(6)のいずれかに記載の方法。
(8)唾液中のBDNFを測定するための唾液の準備方法であって、
前記脳由来神経栄養因子の測定に先立って、被験個体から採取した唾液を凍結することなく0℃以上30℃以下維持する準備工程、を備える、方法。
本測定方法は、被験個体から採取した唾液を凍結しないで0℃以上30℃以下に維持する準備工程と、前記準備工程後に、前記唾液中の脳BDNFの濃度を測定する測定工程と、を備えることができる。
本測定方法における準備工程は、採取した唾液を冷凍することなく、BDNFの抗体反応性を低下させない温度で維持する工程とすることができる。冷凍を回避しつつBDNF抗体反応性を低下させない温度で維持することで冷凍によるBDNFの抗体との反応性の低下を回避して、BDNFの測定精度や正確性を確保することができる。
測定工程は、唾液中のBDNFを測定できる方法であれば特に限定するものではないが、例えば、抗BDNF抗体を用いる抗原抗体反応を実施することによりBDNFを測定することができる。特異性、簡易性等の観点から他の方法より有利だからである。
(2)検体である唾液を前記固相体表面に供給し(それにより固相体上の抗BDNF抗体と接触させ)、
(3)必要に応じて固相体表面を洗浄し、
(4)標識化(酵素修飾)抗BDNF抗体(抗体a)、ビオチン又はDNFで修飾された抗BDNF抗体(抗体b)を固相体表面に供給し
(5)抗体aの標識に基づき、BDNF量を測定する、
抗体bに結合する標識化アビジン又は標識化抗DNF抗体を供給を経てこれらの標識に基づきBDNFを測定する。
本明細書に開示される、BDNFを測定するための唾液の準備方法(以下、本準備方法ともいう。)は、BDNFの測定に先立って、被験個体から採取した唾液を凍結することなく0℃以上30℃以下に維持する準備工程、を備えることができる。こうした方法によると、凍結及び解凍に伴う操作やこうした操作に伴うタンパク質の変性による誤差を回避して、凍結するよりも高精度で正確性の高いBDNFの測定が可能となる。また、かかる準備工程を伴うことにより、唾液採取から唾液中のBDNFの測定までの間、唾液を待機させることができる。このため、唾液について効率的なBDNF測定の実施が可能となる。また、採取した唾液を、回収して集約してBDNF測定を実施するのにも都合がよい。
唾液の採取方法と前処理方法に関して検討を行った。唾液をマイクロチューブに吐出する方法と、吐出した唾液を一度−20℃で凍結させる方法、サリベット(Sarstedt社製)で採取する方法、サリベットで採取した唾液を一度−20℃で凍結させる方法を比較した。それぞれの検体はBDNF測定前に10,000rpmで10分間遠心分離し、上清を測定に供した。なお、サリベットを採取したときは、スポンジに含浸させた唾液を遠心分離(1500〜3000gで2分程度)して清澄唾液を採取してBDNF測定及び凍結に供した。
次いで、唾液の保存温度に関して検討を行った。サリベットで採取した唾液を室温(常温)と37℃で保管し、BDNFの変動を評価した。BDNFの測定方法は、先と同様とした。結果を図2に示す。
Claims (8)
- 唾液中の脳由来神経栄養因子の測定方法であって、
被験個体から採取した唾液を凍結しないで10℃以上30℃以下に維持する準備工程と、
前記準備工程直後に、前記唾液中の脳由来神経栄養因子の濃度を測定する測定工程と、
を備える、方法。 - 前記準備工程は、前記唾液を15℃以上30℃以下の温度で維持する工程である、請求項1に記載の方法。
- 前記準備工程は、前記唾液を前記温度で168時間以内維持する工程である、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記準備工程は、前記唾液を前記温度で12時間以上維持する工程である、請求項3に記載の方法。
- 前記測定工程は、抗脳由来神経栄養因子抗体を用いる抗原抗体反応を実施する工程である、請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
- 前記測定工程は、酵素結合免疫吸着法を実施する工程である、請求項5に記載の方法。
- 前記測定工程は、脳由来神経栄養因子200pg/ml以下の濃度における標準曲線の回帰式の決定係数が0.99以上である測定方法によって前記脳由来神経栄養因子を測定する工程である、請求項1〜6のいずれかに記載の方法。
- 睡液の凍結を経ないで脳由来神経栄養因子を測定するための唾液の準備方法であって、
前記脳由来神経栄養因子の測定に先立って、被験個体から採取した唾液を凍結することなく10℃以上30℃以下で維持する準備工程、を備える、方法。
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