JP6738432B2 - 抗pcsk9抗体およびその使用 - Google Patents
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Description
PCSK9はPCSK9遺伝子によりコードされ、ヒト常染色体のlp33−p34.3に位置され、主に小胞体で合成され、まず72kDaの不活性前駆体構造を形成した後、自動的な触媒により、第152位および第153位の残基の箇所が切断されて、14kDaの前駆体ドメイン、および触媒ドメインとC末端ドメインを含む57KDaの成熟断片を形成する(Benjannet、Rhaindsら、2004)。前駆体ドメインは、非共有結合で触媒ドメインに結合され、成熟断片が正しく折り畳まれ、小胞体から輸送されることに必須である。
PCSK9遺伝子の突然変異は、機能獲得型(D347Y、S127R、F216L、L82X、Y142Xなど)および機能喪型(R46L、Y142X、C679)(Abifadel、Varretら、2003)に分けることができ、その中で、機能獲得型突然変異は異なるタンパク質との相乗作用により、PCSK9の親和性を改変し、またはPCSK9自体の切断に対するタンパク質分解酵素の感度を高め、LDLRに対するPCSK9の分解を増加して、血中のLDL−cレベルを向上させ、ADHまたは早期発症アテローム性動脈硬化症を誘導する。
研究によると、PCSK9は肝実質細胞と神経細胞の分化に大きな影響を与え(Seidah、Benjannetら、2003)、同時に低密度リポタンパク質受容体(LDLR)の発現を調節して、コレステロールの合成および代謝に関与する。研究により、精製PCSK9タンパク質をHepG2細胞培養培地に添加すると、その細胞表面のLDLRが減少し、用量依存効果(Lagace、Curtisら、2006)を呈するが、肝細胞でPCSK9を過剰発現したマウスのLDLRレベルは有意に減少されたが、LDLR mRNAの発現レベルは減少しなかった(Lambert、Charltonら. 2009)ため、PCSK9が転写後の機構によりLDLRレベルを調節することを見出した。
LDLR分子は、5つの主要なドメインからなり、第一はシステインに富むリガンド結合領域であり、第二は上皮成長因子(EGF)前駆体相同性ドメインであり、三つのEGF様反復配列(EGF−A、EGF−B、EGF−C)および一つのβ螺旋構造、一つの糖認識ドメイン、一つの膜貫通ドメインを含み、細胞質尾部は細胞質内への移動に必要な配列を含む。
要約すると、現在PCSK9は、異常脂質血症および関連する心臓血管疾患の重要な標的となり、それに対するモノクローナル抗体は広範な適用可能性を有する。
および/または軽鎖CDRのCDR1、CDR2およびCDR3のアミノ酸配列が以下のそれぞれのアミノ酸配列またはその変異体からなる群より選択される、PCSK9に結合できる抗体またはその機能的断片を提供する。
本明細書で使用される用語「機能的断片」は、例えばFv、scFv(SCは単鎖を意味する)、Fab、F(ab’) 2 、Fab’、scFv−Fc断片または二重特異性抗体(diabody)、或いは化学修飾またはリポソームに組み込むことにより半減期を増加できる任意の断片を指し、前記化学修飾は、例えばポリエチレングリコール(「ポリエチレングリコール化、PEG化」、Fv−PEG、scFv−PEG、Fab−PEG、F(ab’) 2 −PEGまたはFab’−PEGのポリエチレングリコール化断片と呼ばれる)などのポリ(アルキレン)グリコールを添加することであり(「PEG」はポリエチレングリコールである)、前記断片はEGFR結合活性を有する。好ましくは、前記機能的断片はそれが由来する抗体の重鎖または軽鎖の可変部分の配列からなり、またはそれらを含み、前記部分の配列はそれが由来する抗体と同一の結合特異性および十分な親和性を保持し、PCSK9に対して、好ましくはそれが由来する抗体の親和性の少なくとも1/100に等しく、より好ましくは少なくとも1/10に等しい。この機能的断片は少なくとも5個アミノ酸を含み、好ましくは、それが由来する抗体配列の10、15、25、50および100個の連続したアミノ酸を含む。
および/または軽鎖CDRのCDR1、CDR2およびCDR3のアミノ酸配列は以下のそれぞれのアミノ酸配列またはその変異体からなる群より選択される。
本発明の抗体またはその機能的断片は、ヒト化されていてもよい。ヒト化抗体を調製する方法は、当業者に周知である。例えば、本発明のヒト化抗PCSK9抗体は、本発明のCDR配列をヒト抗体可変領域に転移させることによって調製することができる。前記ヒト化抗体は、抗抗体反応(AAR)およびヒト抗マウス抗体応答(HAMA)を起こさず、抗抗体中和により迅速に除かれず、免疫効果機能を発揮する。
既知配列のヒトPCSK9遺伝子のcDNA(北京義▼神舟社製 ▼は堯に羽)を鋳型とし、上流プライマーを5’−GTACACTAGTCACCATGGGCACCGTCAGCTC−
3’とし、下流プライマーを5’−GATCCTCGAGCCTGGAGCTCCTGG
GAGG−3’として、PCRによりヒトPCSK9の細胞外ドメインを増幅した。増幅
産物をspeIおよびXhoIで二重消化した後、自己構築した真核生物の発現プラスミド系(pSecCAGA2ECD)にクローニングした。このプラスミドを、PEIにより293E細胞にトランスフェクトした6日後、培養上清を回収し、アフィニティークロマトグラフィーによりヒトPCSK9細胞外ドメインのタンパク質を精製した。
GGGGCTG−3’をSEQ ID No.:43、下流プライマーに5’−GATC
CTCGAGCCCTCACGCTACTGG−3’SEQ ID No.:44を用い
て、PCRによりLDLR細胞外断片を増幅した。増幅産物をNheIおよびXhoIで二重消化した後、自己構築した真核生物の発現プラスミド系にクローニングした。このプラスミドを、PEIにより293E細胞にトランスフェクトした6日後、培養上清を回収し、LDLR細胞外ドメインを精製した。
ヒトPCSK9細胞外ドメインのタンパク質のSDS−PAGE電気泳動像を図1に示す。
ATGGGCACCG TCAGCTCCAG GCGGTCCTGG TGGCCGCTGC CACTGCTGCT GCTGCTGCTG 61
CTGCTCCTGG GTCCCGCGGG CGCCCGTGCG CAGGAGGACG AGGACGGCGA CTACGAGGAG 121
CTGGTGCTAG CCTTGCGTTC CGAGGAGGAC GGCCTGGCCG AAGCACCCGA GCACGGAACC 181
ACAGCCACCT TCCACCGCTG CGCCAAGGAT CCGTGGAGGT TGCCTGGCAC CTACGTGGTG 241
GTGCTGAAGG AGGAGACCCA CCTCTCGCAG TCAGAGCGCA CTGCCCGCCG CCTGCAGGCC 301
CAGGCTGCCC GCCGGGGATA CCTCACCAAG ATCCTGCATG TCTTCCATGG CCTTCTTCCT 361
GGCTTCCTGG TGAAGATGAG TGGCGACCTG CTGGAGCTGG CCTTGAAGTT GCCCCATGTC 421
GACTACATCG AGGAGGACTC CTCTGTCTTT GCCCAGAGCA TCCCGTGGAA CCTGGAGCGG 481
ATTACCCCTC CACGGTACCG GGCGGATGAA TACCAGCCCC CCGACGGAGG CAGCCTGGTG 541
GAGGTGTATC TCCTAGACAC CAGCATACAG AGTGACCACC GGGAAATCGA GGGCAGGGTC 601
ATGGTCACCG ACTTCGAGAA TGTGCCCGAG GAGGACGGGA CCCGCTTCCA CAGACAGGCC 661
AGCAAGTGTG ACAGTCATGG CACCCACCTG GCAGGGGTGG TCAGCGGCCG GGATGCCGGC 721
GTGGCCAAGG GTGCCAGCAT GCGCAGCCTG CGCGTGCTCA ACTGCCAAGG GAAGGGCACG 781
GTTAGCGGCA CCCTCATAGG CCTGGAGTTT ATTCGGAAAA GCCAGCTGGT CCAGCCTGTG 841
GGGCCACTGG TGGTGCTGCT GCCCCTGGCG GGTGGGTACA GCCGCGTCCT CAACGCCGCC 901
TGCCAGCGCC TGGCGAGGGC TGGGGTCGTG CTGGTCACCG CTGCCGGCAA CTTCCGGGAC 961
GATGCCTGCC TCTACTCCCC AGCCTCAGCT CCCGAGGTCA TCACAGTTGG GGCCACCAAT 1021
GCCCAGGACC AGCCGGTGAC CCTGGGGACT TTGGGGACCA ACTTTGGCCG CTGTGTGGAC 1081
CTCTTTGCCC CAGGGGAGGA CATCATTGGT GCCTCCAGCG ACTGCAGCAC CTGCTTTGTG 1141
TCACAGAGTG GGACATCACA GGCTGCTGCC CACGTGGCTG GCATTGCAGC CATGATGCTG 1201
TCTGCCGAGC CGGAGCTCAC CCTGGCCGAG TTGAGGCAGA GACTGATCCA CTTCTCTGCC 1261
AAAGATGTCA TCAATGAGGC CTGGTTCCCT GAGGACCAGC GGGTACTGAC CCCCAACCTG 1321
GTGGCCGCCC TGCCCCCCAG CACCCATGGG GCAGGTTGGC AGCTGTTTTG CAGGACTGTG 1381
TGGTCAGCAC ACTCGGGGCC TACACGGATG GCCACAGCCA TCGCCCGCTG CGCCCCAGAT 1441
GAGGAGCTGC TGAGCTGCTC CAGTTTCTCC AGGAGTGGGA AGCGGCGGGG CGAGCGCATG 1501
GAGGCCCAAG GGGGCAAGCT GGTCTGCCGG GCCCACAACG CTTTTGGGGG TGAGGGTGTC 1561
TACGCCATTG CCAGGTGCTG CCTGCTACCC CAGGCCAACT GCAGCGTCCA CACAGCTCCA 1621
CCAGCTGAGG CCAGCATGGG GACCCGTGTC CACTGCCACC AACAGGGCCA CGTCCTCACA 1681
GGCTGCAGCT CCCACTGGGA GGTGGAGGAC CTTGGCACCC ACAAGCCGCC TGTGCTGAGG 1741
CCACGAGGTC AGCCCAACCA GTGCGTGGGC CACAGGGAGG CCAGCATCCA CGCTTCCTGC 1801
TGCCATGCCC CAGGTCTGGA ATGCAAAGTC AAGGAGCATG GAATCCCGGC CCCTCAGGAG 1861
CAGGTGACCG TGGCCTGCGA GGAGGGCTGG ACCCTGACTG GCTGCAGTGC CCTCCCTGGG 1921
ACCTCCCACG TCCTGGGGGC CTACGCCGTA GACAACACGT GTGTAGTCAG GAGCCGGGAC 1981
GTCAGCACTA CAGGCAGCAC CAGCGAAGAG GCCGTGACAG CCGTTGCCAT CTGCTGCCGG 2041
AGCCGGCACC TGGCGCAGGC CTCCCAGGAG CTCCAGTGA
ATGGGGCCCT GGGGCTGGAA ATTGCGCTGG ACCGTCGCCT TGCTCCTCGC CGCGGCGGGG ACTGCAGTGG GCGACAGATG CGAAAGAAAC GAGTTCCAGT GCCAAGACGG GAAATGCATC 121 TCCTACAAGT GGGTCTGCGA TGGCAGCGCT GAGTGCCAGG ATGGCTCTGA TGAGTCCCAG 181 GAGACGTGCT TGTCTGTCAC CTGCAAATCC GGGGACTTCA GCTGTGGGGG CCGTGTCAAC 241 CGCTGCATTC CTCAGTTCTG GAGGTGCGAT GGCCAAGTGG ACTGCGACAA CGGCTCAGAC 301 GAGCAAGGCT GTCCCCCCAA GACGTGCTCC CAGGACGAGT TTCGCTGCCA CGATGGGAAG 361 TGCATCTCTC GGCAGTTCGT CTGTGACTCA GACCGGGACT GCTTGGACGG CTCAGACGAG 421 GCCTCCTGCC CGGTGCTCAC CTGTGGTCCC GCCAGCTTCC AGTGCAACAG CTCCACCTGC 481 ATCCCCCAGC TGTGGGCCTG CGACAACGAC CCCGACTGCG AAGATGGCTC GGATGAGTGG 541 CCGCAGCGCT GTAGGGGTCT TTACGTGTTC CAAGGGGACA GTAGCCCCTG CTCGGCCTTC 601 GAGTTCCACT GCCTAAGTGG CGAGTGCATC CACTCCAGCT GGCGCTGTGA TGGTGGCCCC 661 GACTGCAAGG ACAAATCTGA CGAGGAAAAC TGCGCTGTGG CCACCTGTCG CCCTGACGAA 721 TTCCAGTGCT CTGATGGAAA CTGCATCCAT GGCAGCCGGC AGTGTGACCG GGAATATGAC 781 TGCAAGGACA TGAGCGATGA AGTTGGCTGC GTTAATGTGA CACTCTGCGA GGGACCCAAC 841 AAGTTCAAGT GTCACAGCGG CGAATGCATC ACCCTGGACA AAGTCTGCAA CATGGCTAGA 901 GACTGCCGGG ACTGGTCAGA TGAACCCATC AAAGAGTGCG GGACCAACGA ATGCTTGGAC 961 AACAACGGCG GCTGTTCCCA CGTCTGCAAT GACCTTAAGA TCGGCTACGA GTGCCTGTGC 1021 CCCGACGGCT TCCAGCTGGT GGCCCAGCGA AGATGCGAAG ATATCGATGA GTGTCAGGAT 1081 CCCGACACCT GCAGCCAGCT CTGCGTGAAC CTGGAGGGTG GCTACAAGTG CCAGTGTGAG 1141 GAAGGCTTCC AGCTGGACCC CCACACGAAG GCCTGCAAGG CTGTGGGCTC CATCGCCTAC 1201 CTCTTCTTCA CCAACCGGCA CGAGGTCAGG AAGATGACGC TGGACCGGAG CGAGTACACC 1261 AGCCTCATCC CCAACCTGAG GAACGTGGTC GCTCTGGACA CGGAGGTGGC CAGCAATAGA 1321 ATCTACTGGT CTGACCTGTC CCAGAGAATG ATCTGCAGCA CCCAGCTTGA CAGAGCCCAC 1381 GGCGTCTCTT CCTATGACAC CGTCATCAGC AGGGACATCC AGGCCCCCGA CGGGCTGGCT 1441 GTGGACTGGA TCCACAGCAA CATCTACTGG ACCGACTCTG TCCTGGGCAC TGTCTCTGTT 1501 GCGGATACCA AGGGCGTGAA GAGGAAAACG TTATTCAGGG AGAACGGCTC CAAGCCAAGG 1561 GCCATCGTGG TGGATCCTGT TCATGGCTTC ATGTACTGGA CTGACTGGGG AACTCCTGCC 1621 AAGATCAAGA AAGGGGGCCT GAATGGTGTG GACATCTACT CGCTGGTGAC TGAAAACATT 1681 CAGTGGCCCA ATGGCATCAC CCTAGATCTC CTCAGTGGCC GCCTCTACTG GGTTGACTCC 1741 AAACTTCACT CCATCTCAAG CATCGATGTC AACGGGGGCA ACCGGAAGAC CATCTTGGAG 1801 GATGAAAAGA GGCTGGCCCA CCCCTTCTCC TTGGCCGTCT TTGAGGACAA AGTATTTTGG 1861 ACAGATATCA TCAACGAAGC CATTTTCAGT GCCAACCGCC TCACAGGTTC CGATGTCAAC 1921 TTGTTGGCTG AAAACCTACT GTCCCCAGAG GATATGGTTC TCTTCCACAA CCTCACCCAG 1981 CCAAGAGGAG TGAACTGGTG TGAGAGGACC ACCCTGAGCA ATGGCGGCTG CCAGTATCTG 2041 TGCCTCCCTG CCCCGCAGAT CAACCCCCAC TCGCCCAAGT TTACCTGCGC CTGCCCGGAC 2101 GGCATGCTGC TGGCCAGGGA CATGAGGAGC TGCCTCACAG AGGCTGAGGC TGCAGTGGCC 2161 ACCCAGGAGA CATCCACCGT CAGGCTAAAG GTCAGCTCCA CAGCCGTAAG GACACAGCAC 2221 ACAACCACCC GACCTGTTCC CGACACCTCC CGGCTGCCTG GGGCCACCCC TGGGCTCACC 2281 ACGGTGGAGA TAGTGACAAT GTCTCACCAA GCTCTGGGCG ACGTTGCTGG CAGAGGAAAT 2341 GAGAAGAAGC CCAGTAGCGT GAGGG
(2.1 ヒトPCSK9組換えタンパク質のビオチン標識)
ヒトPCSK9タンパク質とDMSOに溶解したビオチン−xx−NHSを1:10比率で混合し、4℃で2時間放置して、反応混合物を10kD限外濾過カラムに通して、ビオチン標識ヒトPCSK9と遊離したビオチンを単離した。
ヒトPCSK9とLDLRとの結合能を試験するために、コーティング緩衝液が入った96ウェルマイクロタイタープレートに、1μg/mlLDLRを加え、緩衝液中4℃で一晩インキュベートした。翌日に、ウェル中の溶液を捨て、洗浄緩衝液で3回洗浄した。次に、2%ミルクを含むPBS溶液を添加して、60分間ブロッキングした。洗浄緩衝液で3回洗浄した後100μlの種々の濃度のビオチン標識ヒトPCSK9を添加し、室温で1時間インキュベートし、洗浄緩衝液で3回洗浄した。HRP−ストレプトアビジンを洗浄緩衝液で1:10000倍に希釈して、室温で1時間インキュベートし、洗浄緩衝液で3回洗浄した後、50μlのTMB基質溶液を添加して発色させた。室温で8分間反応させた後、100μlの2Mの塩酸溶液で反応を終了させ、450nmで吸光度を読み取った。
図2から分かるように、ヒトPCSK9組換えタンパク質は用量依存的にLDLRと特異的に結合した。
(3.1 293F−LDLR安定形質転換細胞株の構築)
ピューロマイシン(puromycin)スクリーニング系を有するLDLR全長配列を含む構築した真核細胞発現プラスミドをPEIにより293F接着細胞にトランスフェクションした。トランスフェクションの24時間後、293F−LDLR安定形質転換細胞バンクが形成されるまで、ピューロマイシン(2μg/ml)によりスクリーニングを行った。同時に、限界希釈によって1ウェル当たり0.8個の細胞を96ウェルに播種した。15日後に、293F−LDLRモノクローナル抗体を選択し、継代させて293F−LDLR安定形質転換細胞株を形成した。
種々の濃度のビオチン標識ヒトPCSK9のD347Y組換えタンパク質と293F−LDLR安定形質転換細胞を混合し、4℃で15分間インキュベートした。FACS緩衝液(20mMTris、100mMNaCl、2mMCa2+、1%FBS、pH7.4)で3回溶出し、ストレプトアビジン アロフィコシアニン(straptavidin allophycocyanin)(SA−APC、2μg/ml)を添加し、4℃で20分間インキュベートした。FACS緩衝液で3回溶出した後、フローサイトメトリーで検出した。
図3に示すように、構築したヒトPCSK9 D347Y組換えタンパク質は、用量依存的に特異的に293F−LDLR細胞上のLDLRに結合した。
hPCSK9とLDLRの結合能をさらに検証するために、種々の濃度のビオチン標識ヒトPCSK9 D347Y組み換えタンパク質とHepG2細胞を混合し、4℃で15分間インキュベートした。PBSで3回溶出した後、ストレプトアビジン アロフィコシアニン(SA−APC 2μg/ml)を加え、4℃で20分間インキュベートした。FACS緩衝液で3回溶出した後、フローサイトメトリーで検出した。
図4に示すように、上記の結果と一致して、ヒトPCSK9組換えタンパク質は、HepG2細胞上のLDLRに特異的に結合する。
(4.1 免疫動物)
抗原としてヒトPCSK9組換えタンパク質を、免疫アジュバント(フロイントアジュバント)と等しい量で混合し、5匹の6週齢の雌FVBマウスに対して免疫を行った。最初の免疫の後、1週間に1回追加免疫を行い、合計4回の免疫を行った。
最後の免疫強化後、マウスの大腿付近のリンパ節を取って、生理食塩水中ですり潰した後、豊富なリンパ球を含む懸濁液を採集して、従来のエレクトロポレーション法でそれとSP20細胞と融合させた。融合した細胞を、HATを含有するRPMI−1640完全培地中を含む96ウェルに分注し、37℃で5%CO2で培養した。
20000個の種々のモノクローナルハイブリドーマ細胞において、ELISA反応により、ヒトPCSK9タンパク質と結合できる抗体を分泌する1220個のクローンをスクリーニングした。この1220個抗体のうち15個はビオチン標識ヒトPCSK9がHepG2上のLDLRと結合することを阻害し得る。我々は、阻害能のトップの5個について、後続実験を行った。
図5のように、フロー結果は参照抗体と一致して、候補の5つのモノクローナル抗体3G12、1A5および1B5、1B11および2B12が全て効果的にヒトPCSK9と結合して、LDLRに対する分解を抑制することを示している。
ELISAにより、モノクローナルマウス候補抗体3G12、1A5および1B5、1B11および2B12と、ヒトPCSK9、マウスPCSK9およびカニクイザルPCSK9間の交差反応を行った。実験結果は、他社で報告した抗PCSK9抗体とは異なり、我々が用意した抗PCSK9マウス抗体は異なる種のPCSK9と交差反応をすることができる。これは動物実験が容易になり、時間を節約することができる。実験結果は表1に示す。
表2に示されるように、ForteBio社の機器により種々のマウス抗体とhPCSK9との間の結合定数を測定した。これは、調製したマウス抗体がヒトPCSK9に特異的に結合できることを示している。
96ウェルマイクロタイタープレートを、4μg/mlストレプトアビジン(streptavidin)でコーティングして、37℃で90分間インキュベートした。次いで、ウェル内の溶液を捨て、洗浄緩衝液で3回洗浄し、2%ミルクを含むPBSで60分間ブロッキングした。洗浄緩衝液で3回洗浄した後、各ウェルに100μlの2μg/mlビオチン標識ヒトPCSK9を添加し、37℃で1時間インキュベートし、洗浄緩衝液で3回洗浄した。次いで種々の比率で希釈したキメラ抗体を添加し、37℃で1時間インキュベートし、洗浄緩衝液で3回洗浄した後、洗浄緩衝液でHPR標識マウス抗ヒトIgG(H+L)を1:5000倍希釈し、室温で1時間インキュベートした。洗浄緩衝液で3回洗浄した後、100μlのTMB基質溶液を添加して発色させ、室温で10分間反応させた後、100μlの2M塩酸溶液で反応を終了させ、450nmで吸光度を読み取った。
図6から分かるように、マウス抗体はヒトPCSK9に特異的に結合でき、参照抗体と比べて、2B12、3G12はより良好な結合能を有する。
図9と表3の結果から分かるように、様々のマウス由来のモノクローナル抗体はヒトPSCK9と結合できて、LDL取り込みへの効果を阻害する。そのIC50値は約1μg/mLである。
候補のハイブリドーマ細胞を培養し、1000rpm遠心分離によって細胞を収集し、全RNAをトリゾールで抽出した。これを鋳型として、最初のcDNAを合成した後、最初のcDNAを次の鋳型として用いて、ハイブリドーマ細胞の対応する可変領域DNA配列を増幅した(Jones and Bendig、1991)。50μl反応系において、1μlのcDNA、5μlの10×PCR緩衝液、それぞれ1μl(25pmol)の上流および下流プライマー、1μlのdNTP、21μlの25mmolPLMgCl2、39μlのH2Oを加え、95℃で10分間、変性前処理をし、1μLのTaq酵素を加えて、温度サイクルを入力し、PCR増幅を行った。反応条件は94℃で1分間変性、58℃で1分間アニーリング、72℃で15秒間の伸長を32サイクル行い、次いで72℃で10分間保温した。
SEQ ID No.:31 DIQMTQSPSSLSASLGDKVTITCKASQDINKYIDWYQHKPGKGPRLLIHYTSTLQPGIPSRFSGSGSGRDYSFSISNLEPEDIATYYCVQYDDLWTFGGGTKLEIK
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SEQ ID NO:33 DIQMTQSPSSLSASLGGKVTITCKASQDINKYIDWYQHKPGKSPRLLIHYASTLQPGIPSRFSGSGSGRDYSFSISNLEPEDIATYYCLQYDDLWTFGGGTKLEIK
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SEQ ID No.:23 HCDR2:YISYSGTTNYNPSLKS
SEQ ID No.:24 HCDR3:REGHYSWFPY
SEQ ID No.:39 DIQMTQSPASLSASVGETVTITCRASENIYSYLAWYQQKQENSPQLLVYNAYTLADGVPSRFSGSGSGTQFSLKIISLQPEDFGNYYCQHHYRTPPTFGGGTKLEIK
SEQ ID No.:25 LCDR1:RASENIYSYLA
SEQ ID No.:26 LCDR2:NAYTLAD
SEQ ID No.:27 LCDR3:QHHYRTPPT
SEQ ID No.:40 QVQLQQSGAVLVRPGTSIKVSCKASGYAFTNYLIEWIKKRPGQGLEWIGMINPGSGDTNFNEKFKAKATLTADKSSTTAYMQLNSLTFDDSAVYFCARSSQLGLPYWGQGTLVTVSA
SEQ ID No.:28 HCDR1:NYLIE
SEQ ID No.:29 HCDR2:MINPGSGDTNFNEKFKA
SEQ ID No.:30 HCDR3:SSQLGLPY
ヒト血球(北京血液研究所)由来の重鎖定常領域Fc断片および軽鎖k/£定常領域をクローニングし、pCDNA3.1プラスミドに組み込んで改変した。
前記重鎖および軽鎖配列の断片はGenScript社により合成し、重鎖をBspqIにより消化し、軽鎖断片をBspqIにより消化した後、対応するpCDNA3.1プラスミドにそれぞれ組み込み、配列測定により正しいクローンを獲得した。その後の実験材料は、この一連のプラスミドを細胞にトランスフェクションした後、精製して得た。上記の実験と同様に、重鎖および軽鎖をマウスの重鎖定常領域のFc断片と軽鎖K/£定常領域を含む改変されたpCDNA3.1プラスミドにクローニングした。
96ウェルマイクロタイタープレートを、4μg/mlストレプトアビジン(streptavidin)でコーティングして、37℃で90分間インキュベートした。次いで、ウェル内の溶液を捨て、洗浄緩衝液で3回洗浄し、2%ミルクを含むPBSで60分間ブロッキングした。洗浄緩衝液で3回洗浄した後、 各ウェルに100μlの2μg/mlビオチン標識ヒトPCSK9を添加し、37℃で1時間インキュベートした後洗浄緩衝液で3回洗浄した。次いで様々な比率で希釈したキメラ抗体を添加し、37℃で1時間インキュベートし、洗浄緩衝液で3回洗浄した。洗浄緩衝液でHPR標識マウス抗ヒトIgG(H+L)を1:5000倍希釈し、室温で1時間インキュベートし、洗浄緩衝液で3回洗浄した。100μlのTMB基質溶液を添加して発色させ、室温で10分間反応させた後、100μlの2M塩酸溶液で反応を終了させ、450nmで吸光度を読み取った。
図10に示すように、3G12キメラ抗体およびマウス由来の抗体の両方は、ヒトPCSK9に特異的に結合することができる。
構築したキメラ抗体(10μg/ml)とビオチン標識ヒトPCSK9(400ng/ml)を混合し、室温で60分間インキュベートした。次いで、混合物をHepG2細胞に添加し、すぐにFL−LDL(5μg/ml)も添加して、37℃で3時間インキュベートし、PBSで3回溶出した後、試料をフローサイトメトリーで測定した。
図11のように、構築した3G12キメラ抗体は、LDL取り込みに対するヒトPCSK9の影響を阻害することができる。
上記のようにして得られたハイブリドーマ細胞から分泌された抗体の可変領域配列によるヒト化を行った。簡単に言えば、ヒト化過程は下記の工程を含む。A.各ハイブリドーマ細胞から分泌された抗体の遺伝子配列とヒト胚性抗体の遺伝子配列を並べ、高い相同性を有する配列を同定する;B.HLA−DRの親和性を分析考察して、低親和性のヒト胚性フレームワーク配列を選択する;C.コンピュータシミュレーション技術を用いて、可変領域分析による空間立体結合および分子ドッキングによる周囲のフレームワークアミノ酸配列を推測した。静電気、ファンデルワールス力、親水性、疎水性およびエントロピーを計算することによって、各ハイブリドーマ細胞から分泌される抗体遺伝子配列中でPCSK9と作用可能であり、立体構造を維持する重要なアミノ酸個体を分析して、それを選択されたヒト胚性遺伝子のフレームワークに接合する。これを元にして、必ず保留すべきであるフレームワーク領域のアミノ酸部位を標記し、ランダムプライマーを合成し、ファージライブラリーを作成して、ヒト化抗体ライブラリーをスクリーニングする(Pini,A.ら.(1998). Design and Use of a Phage Display Library:HUMAN ANTIBODIES WITH 10 SUBNANOMOLAR AFFINITY AGAINST A MARKER OF ANGIOGENESIS ELUTED FROM A TWO−DIMENSIONAL GEL.,Journal of Biological Chemistry, 273(34):21769−21776)。これに基づいて、我々は以下の複数のヒト化抗体を得た。それは下記のクローン32および77を含む。ただし、32と77の軽鎖は同じである。
(SEQ ID No.:45、軽鎖アミノ酸配列)DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINKYIDWYQHKPGKAPKLLIHYASTLQPGVPSRFSGSGSGRDYTFTISSLQPEDIATYYCLQYDDLWTFGQGTKVEIK
(SEQ ID No.:46、軽鎖ヌクレオチド配列)GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGAGCGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACCTGCCAGGCCAGCCAGGACATCAACAAGTACATCGACTGGTACCAGCACAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCCACTACGCCAGCACCCTGCAGCCCGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCAGCGGCAGCGGCAGAGACTACACCTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCCGAGGACATCGCCACCTACTACTGCCTGCAGTACGACGACCTGTGGACCTTCGGCCAGGGCACCAAGGTGGAGATCAAG
(SEQ ID No.:47、重鎖アミノ酸配列)
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSISSYGIHWIRQSPGKGLEWIGVIWRGGITDYNAPFMSRVTISKDNSKNQVSFKLSSVTAADTAVYYCANHRDWGQGTLVTVSS
(SEQ ID No.:48、重鎖ヌクレオチド配列)CAGGTGCAGCTGCAGGAAAGCGGCCCGGGCCTGGTGAAACCGAGCCAGACCCTGAGCCTGACCTGCACCGTGAGCGGCTTTAGCATTAGCAGCTATGGCATTCATTGGATTCGCCAGAGCCCGGGCAAAGGCCTGGAATGGATTGGCGTGATTTGGCGCGGCGGCATTACCGATTATAACGCGCCGTTTATGAGCCGCGTGACCATTAGCAAAGATAACAGCAAAAACCAGGTGAGCTTTAAACTGAGCAGCGTGACCGCGGCGGATACCGCGGTGTATTATTGCGCGAACCATCGCGATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
(SEQ ID No.:49、重鎖アミノ酸配列)QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSISSYGVHWIRQSPGKGLEWIGVIWRGGSTDYNAAFMSRVTISKDNSKNQVSFKLSSVTAADTAVYYCANHRDWGQGTLVTVSS
(SEQ ID No.:50、重鎖ヌクレオチド配列)CAGGTGCAGCTGCAGGAAAGCGGCCCGGGCCTGGTGAAACCGAGCCAGACCCTGAGCCTGACCTGCACCGTGAGCGGCTTTAGCATTAGCAGCTATGGCGTGCATTGGATTCGCCAGAGCCCGGGCAAAGGCCTGGAATGGATTGGCGTGATTTGGCGCGGCGGCAGCACCGATTATAACGCGGCGTTTATGAGCCGCGTGACCATTAGCAAAGATAACAGCAAAAACCAGGTGAGCTTTAAACTGAGCAGCGTGACCGCGGCGGATACCGCGGTGTATTATTGCGCGAACCATCGCGATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
96ウェルマイクロタイタープレートを、0.1μg/mlストレプトアビジン(streptavidin)でコーティングして、37℃で60分間インキュベートした。次いで、ウェル内の溶液を捨て、洗浄緩衝液で3回洗浄した。2%BSAを含むPBS溶液で60分間ブロッキングした。洗浄緩衝液で3回洗浄した後、各ウェルに100μlの2μg/mlビオチン標識のヒトPCSK9を添加し、37℃で30分間インキュベートした後洗浄緩衝液で3回洗浄した。次いで種々の比率で希釈したヒト化抗体を添加し、37℃で1時間インキュベートした。洗浄緩衝液で3回洗浄した後、洗浄緩衝液でHPR標識マウス抗ヒトIgG(H+L)を1:10000倍希釈し、室温で1時間インキュベートした。洗浄緩衝液で3回洗浄した後、100μlのTMB基質溶液を添加して発色させ、室温で30分間反応させた後、100μlの2M塩酸溶液で反応を終了させ、450nmで吸光度を読み取った。
図12に示すように、ヒト化後、ヒトPCSK9に対する結合能は変化せず、その結合のEC50値は約5ng/mlであった。
異なる濃度勾配で希釈されたヒト化抗体および参照抗体(開始濃度は10μg/mlであり、2倍の濃度勾配で希釈)とHuPCSK9−D347Y(2.5μg/ml)を、室温で30分間インキュベートし、HepG2細胞に添加して、37℃、7% C02で1時間インキュベートした。続いて、DiI−LDL(5μg/ml)を添加し、37℃、7%CO2で5時間インキュベートした。PBSで4回洗浄し、Tecan M1000 Pro蛍光検出器(Ex 554nm/ Em 571nm)で蛍光検出を行った。
図13に示すように、ヒト化抗体は、PCSK9とLDLRの結合を効率的に阻害し、LDLに対するHepG2細胞の取り込みを促進し、IC50値は約1μg/mlであった。
カニクイザルをモデルとして、異なる投与量条件(3、10、30mg/kg)で、異なる投与時における、皮下注射および単回投与の血清におけるLDL−cの変化、および抗体濃度の変化を観察した。
図14に示すように、検出により、異なる投与量で、血清におけるLDL−cの含有量は有意に減少し、投与した7日後、LDL−Cレベルが70%減少されたことを見出した。同時に、キメラ抗体と比較して、ヒト化抗体の半減期が有意に増加した。
ADDIN EN.REFLIST Abifadel, M., et al. (2003). “M
utations in PCSK9 cause autosomal dominant hypercholesterolemia.”Nat Genet 34(2)
: 154−156.
Abifadel, M., et al. (2003). “Mutations
in PCSK9 cause autosomal dominant hypercholesterolemia.”Nat Genet 34(2): 154−156
.
Benjannet, S., et al. (2004). “NARC−1/PC
SK9 and its natural mutants zymogen cleavage and effects on the low density lipoprotein (LDL) receptor and LDL cholesterol.”Journal of Biological Chemistry 279(
47): 48865−48875.
Fisher, T. S., et al. (2007). “Effects o
f pH and Low Density Lipoprotein (LDL) on PCSK9−dependent LDL Receptor Regulation.”Journal of Biological Chemistry 282(2
8): 20502−20512.
Jones, S. T. and M. M. Bendig (1991). “R
apid PCR−cloning of full−length mouse immunoglobulin variable regions.”Bio/Techn
ology 9(1): 88−89.
Lagace, T. A., et al. (2006). “Secreted
PCSK9 decreases the number of LDL receptors in hepatocytes and inlivers of parabiotic mice.”Journal of Clinical Investig
ation 116(11): 2995−3005.
Lambert, G., et al. (2009). “Molecular b
asis of PCSK9 function.”Atherosclerosis
203(1): 1−7.
Seidah, N. G., et al. (2003). “The secre
tory proprotein convertase neural apoptosis−regulated convertase 1 (NARC−1): liver regeneration and neuronal differentiation.”Proceedings of the National Academ
y of Sciences 100(3): 928−933.
Zhang, D.−W., et al. (2007). “Binding of
Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9 to Epidermal Growth Factor−like Repeat A of Low Density Lipoprotein Receptor Decreases Receptor Recycling and Increases Degradation.”Journal of Biologica
l Chemistry 282(25): 18602−18612.
Claims (12)
- 重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む、抗体またはその抗原結合断片であって、前記重鎖可変領域および前記軽鎖可変領域が、下記(i)〜(v)のいずれかである、抗体またはその抗原結合断片:
(i)重鎖可変領域のアミノ酸配列がSEQ ID No.32であり、軽鎖可変領域のアミノ酸配列がSEQ ID No.31である;
(ii)重鎖可変領域のアミノ酸配列がSEQ ID No.34であり、軽鎖可変領域のアミノ酸配列がSEQ ID No.33である;
(iii)重鎖可変領域のアミノ酸配列がSEQ ID No.36であり、軽鎖可変領域のアミノ酸配列がSEQ ID No.35である;
(iv)重鎖可変領域のアミノ酸配列がSEQ ID No.38であり、軽鎖可変領域のアミノ酸配列がSEQ ID No.37である、
(v)重鎖可変領域のアミノ酸配列がSEQ ID No.40であり、軽鎖可変領域のアミノ酸配列がSEQ ID No.39である。 - キメラ抗体、ヒト化抗体または完全ヒト抗体である、請求項1に記載の抗体またはその抗原結合断片。
- アミノ酸配列番号(SEQ ID No.):47もしくは49のアミノ酸配列の重鎖、およびアミノ酸配列番号(SEQ ID No.):45のアミノ酸配列の軽鎖、または、
アミノ酸配列番号(SEQ ID No.):47もしくは49のアミノ酸配列をコードするヌクレオチドによりコードされる重鎖、およびアミノ酸配列番号(SEQ ID No.:)45のアミノ酸配列をコードするヌクレオチドによりコードされる軽鎖を含む、抗体またはその抗原結合断片。 - 請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片をコードする単離された核酸分子。
- 請求項4に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
- 請求項4に記載の核酸分子を含む宿主細胞。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、請求項4に記載の核酸分子、請求項5に記載の発現ベクター、請求項6に記載の宿主細胞、またはそれらの任意の組み合わせ、および薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、請求項4に記載の核酸分子、請求項5に記載の発現ベクター、または請求項6に記載の宿主細胞の、脂質異常症と関連する心臓血管疾患を治療する医薬の製造における使用。
- 前記疾患が、高脂血症と高コレステロール血症である、請求項8に記載の使用。
- 請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、請求項4に記載の核酸分子、請求項5に記載の発現ベクター、または請求項6に記載の宿主細胞の、LDLに対する細胞への取り込みを促進する医薬の製造における使用。
- 治療剤と結合した請求項1〜3のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片を含む、免疫複合体。
- 前記治療剤が毒素、放射性同位体、薬剤または細胞毒性物質である、請求項11に記載の免疫複合体。
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