JP6726468B2 - 発酵飲料およびその製造方法 - Google Patents
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そこで、微生物により生産される3HBを、より効率よく人が摂取可能な形態として提供できる技術が求められており、また、人が3HBを摂取した場合に、3HBがそのまま人体に有効に作用するとは限らず、3HBを人体により有効に作用させられる形態で提供することがさらに求められる。
前記好気発酵工程は、前記果菜汁に含まれる糖質のほぼ全量が資化されるまで実行され、
前記嫌気発酵工程は、前記好気発酵工程により生成したポリ3ヒドロキシ酪酸のほぼ全量が3ヒドロキシ酪酸に分解されるまで実行され、
前記ハロモナス菌が、ハロモナス・エスピー(HaIomonassp.)KM−1株(FERMBP−10995)である点にある。
また、好気発酵工程において生産されたPHBは嫌気発酵工程において3HBに変換され発酵液中に溶出する。そのため、嫌気発酵工程は、3HBの原料となるPHBの存在する範囲で行えば、効率の良い3HB生産に寄与できる。つまり、PHBの生成状況と、3HBの生成状況を知ることにより、発酵液中の糖質を十分に減少させて3HBとして発酵飲料中に含有させることができるようになる。
また、KM−1株は糖質を資化して種々の有機酸を生成することが知られている微生物であり、糖質を好気発酵する際にPHBを体内に蓄積する性質を有することが知られている。さらにKM−1株は体内に蓄積したPHBを嫌気条件下で3HBとして体外に排出することも知られており、発酵条件の管理により容易に3HBを溶液中に取り出すことができるようになる。したがってKM−1株を用いて、好気発酵後、嫌気発酵することにより製造された発酵飲料は、発酵液中により確実性高く3HBを含有するとともに、種々の発酵生成物を含有するものとなっている。
また、果菜汁としては、オレンジ、ブドウ、リンゴ、バナナ、マンゴー、グレープフルーツ、サトウキビなどの果実、野菜、穀物(これらを総称して果菜と称するものとする)を原料とすることができるが、その他の果菜由来の果菜汁も用いることができ、上記例示のものに限られるものではない。
糖質及びポリ3ヒドロキシ酪酸を含有しない点にある。
また、糖質を含有したほうが風味、栄養の観点で望ましい場合は、好気発酵を早めに終了することで果菜汁由来の糖質を残すこともできるし、嫌気発酵終了後に改めて任意の糖質を添加してもよいが、3HBが、脳や体内において糖質をうまく利用できないアルツハイマー病、糖尿病の患者の症状を改善させる効果を持つことが知られており、この症状の改善効果は糖質が共存しない環境でより効果的に発揮されるため、特に、たとえば糖尿病患者に対しては、グルコースを含有しない飲料を与えた方がよい。
本発明の実施形態にかかる発酵飲料の製造方法は、果菜汁に3HB生産性のハロモナス菌を添加して発酵プロセスを行い、得られた発酵液からハロモナス菌を分離除去するものである。
こうして得られた発酵液は、pHがアルカリ性のため3HBは塩の状態で存在する。3HBを酸の状態としたほうが風味等の観点で望ましい場合は、塩酸等でpHを3〜4程度として飲料に供することもできる。pHを酸性にした場合に混濁夾雑物が発生した場合は、上記遠心分離、膜分離等の方法で除去してもよい。また、ハロモナス菌を除去する前にpHを3〜4程度とし、混濁夾雑物とハロモナス菌を同時に遠心分離、膜分離等の方法で除去してもよい。
また、発酵液には培地およびpH制御に由来する塩がたとえば0.1〜1.0M程度の範囲で含まれる。これを除去したほうが好ましい場合は、電気透析などの脱塩装置で除去することができる。
本発明に係る発酵飲料の製造方法で用いるハロモナス菌は、
(i)無機塩と単一若しくは複数の有機炭素源を含む培地にて好気的に増殖し、3HB又はその塩を菌体外の培地中に生産させることを特徴とするハロモナス菌
もしくは
(ii)無機塩と単一若しくは複数の有機炭素源を含む培地にて好気的に増殖し、PHBを自らの菌体内にて蓄積した後、嫌気条件下で3HB又はその塩を菌体外の培養液に分泌産生することを特徴とするハロモナス菌
に該当する。
このようなハロモナス菌は、酸化的代謝も嫌気的代謝も使い分けることができ、遊離酸素の存在の有無にかかわらず生存が可能で、且つ、遊離酸素の存在下のほうが生育し易い傾向となる、所謂、通性嫌気性菌の性質を有する菌体である。
上述のハロモナス菌は、0.1〜1.0Mの塩濃度を適とする好塩性を有し、時には塩を含まない培地においても生育する細菌である。そして、上述のハロモナス菌は、通常はpH5〜12程度の培地にて生育する。
上述の(ii)のハロモナス菌として、例えば、ハロモナス・エスピー(HaIomonassp.)KM−1株が挙げられる。ハロモナス・エスピーKM−1株は、平成19年7月10日付で、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター(〒305−8566茨城県つくば市東1−1−1中央第6)に受託番号FERMP−21316として寄託されている。また、この菌株は、現在国際寄託に移管されており、その受託番号はFERMBP−10995である。当該ハロモナス・エスピーKM−1株の16SrRNA遺伝子は、DDBJにAccessionNumberAB477015として登録されている。
ちなみに、上述したようなハロモナス菌の生育特性等に鑑みて、本発明に係る発酵飲料の製造方法において用いるハロモナス菌として、ハロモナス・エスピーKM−1株以外に、ハロモナス・パンテラリエンシス(HaIomonaspanteIIeriensis=ATCC700273)、ハロモナス・カンピサリス(HaIomonascampisaIis=ATCC700597)等も挙げることができる。
例えば、ナトリウムを無機塩として用いる場合は、NaCl、NaNO3、NaHCO3、Na2CO3等を用いればよい。これらの無機塩は、上述のハロモナス菌にとって窒素源やリン源となるような化合物を用いることが好ましい。
窒素源は、硝酸塩、亜硝酸塩、アンモニウム塩、尿素等を用いればよく、特に限定はされないが、例えばNaNO3、NaNO2、NH4Cl、尿素等の化合物を用いればよい。これらの中でも尿素が特に好ましい。
窒素源の使用量は、菌体の生育に影響を及ぼすことなく、本発明の3HB又はその塩の生産目的が達成される範囲において適宜設定すればよく、具体的には、培養初期の培地100mL当たり通常であれば硝酸塩として500mg程度以上とすればよく、より好ましくは1000mg程度以上、更に好ましくは1250mg程度以上である。
なお、窒素源として尿素を用いる場合には、培養初期の培地100mL当たり、200mg以上とすればよいが、より好ましくは400〜700mg程度とすることにより、3HB又はその塩をより高効率に産生させることも可能である。
リン源は、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩等を用いればよく、特に限定はされないが、例えばK2HPO4、KH2PO4等の化合物を用いればよい。
リン源の使用量も、上記の窒素源の使用量と同様の観点から適宜設定すればよく、具体的には、リン酸二水素塩として培地100mL当たり通常は50〜400mg程度とすればよく、より好ましくは100〜200mg程度である。
これらの無機塩は単一で用いてもよいし、2種以上を組み合わせて用いてもよい。
その他の化合物等も含めた無機塩は、総量で通常は0.1〜2.5M程度となる濃度で用いればよく、好ましくは0.2〜1.0M程度、より好ましくは0.2〜0.5M程度である。
培地の有機炭素源は、オレンジ、ブドウ、リンゴ、バナナ、マンゴー、グレープフルーツ、サトウキビのジュースに含まれる糖質等を用いることができる。
グルコース濃度約20g/Lの濃縮還元オレンジジュース1500mLに対して、無機塩類及び窒素源としての尿素を加えて仕込原料液とした。
炭酸水素ナトリウム :3.78g
炭酸ナトリウム :1.59g
リン酸水素2カリウム:3.0 g
窒素源
尿素 :9.15g
スクロース濃度10%のサトウキビ搾汁1500mLに対して無機塩類及び窒素源としての尿素を加えて仕込原料液とした。
炭酸水素ナトリウム :3.78g
炭酸ナトリウム :1.59g
リン酸水素2カリウム:3.0 g
窒素源
尿素 :7.5g
先の実施形態ではオレンジ果汁、サトウキビ搾汁由来の発酵飲料を例示したが、ブドウ、リンゴ、バナナ、マンゴー、グレープフルーツ等の果菜汁を用いても同様に3HB含有の発酵飲料を製造できることが確認されており、その他の果菜汁一般に同様の発酵工程を行えることは明らかであるので、発酵原料液の種類は問わないものとする。なお、果菜汁を原料とすれば、人の飲用に好適な味覚を実現できるので好ましい。また、不溶固形成分濃度の低い(透明度の高い)果汁(ブドウ、リンゴ等)であれば、濾過操作等が簡便かつ十分に行いやすい点で好ましい。また、オレンジ、グレープフルーツ等の果汁は、元来の酸味を生かした発酵飲料とすることができ得る点から好ましい。
2 :撹拌装置
3 :通気装置
4 :取り出し部
5 :供給部
6 :pH調整剤添加部
7 :膜分離装置
8 :タンク
Claims (7)
- 3ヒドロキシ酪酸生産性のハロモナス菌を果菜汁に添加して好気発酵させる好気発酵工程と、前記好気発酵工程で得られた発酵液を嫌気発酵させる嫌気発酵工程とを順に行い、
前記好気発酵工程は、前記果菜汁に含まれる糖質のほぼ全量が資化されるまで実行され、
前記嫌気発酵工程は、前記好気発酵工程により生成したポリ3ヒドロキシ酪酸のほぼ全量が3ヒドロキシ酪酸に分解されるまで実行され、
前記ハロモナス菌が、ハロモナス・エスピー(HaIomonassp.)KM−1株(FERMBP−10995)である発酵飲料の製造方法。 - 前記果菜汁が、オレンジ、ブドウ、リンゴ、バナナ、マンゴー、グレープフルーツより選ばれる果実およびサトウキビからなる群から選ばれる少なくとも一種の果菜の搾汁である請求項1に記載の発酵飲料の製造方法。
- 前記好気発酵工程は、20℃〜40℃、pH7〜10の条件下で実行されるとともに、前記嫌気発酵工程はpH7〜10の条件下で実行される請求項1又は2に記載の発酵飲料の製造方法。
- 前記嫌気発酵工程により得られた発酵液から前記ハロモナス菌を分離除去する分離除去工程を備える請求項1〜3のいずれか一項に記載の発酵飲料の製造方法。
- 請求項1〜4のいずれか一項に記載の発酵飲料の製造方法により製造された発酵飲料。
- 3ヒドロキシ酪酸および果菜汁を含有するとともに、前記果菜汁に含有される糖質を3ヒドロキシ酪酸生産性のハロモナス菌により発酵した場合に生成する発酵生成物を含有し、
糖質及びポリ3ヒドロキシ酪酸を含有しない発酵飲料。 - 前記果菜汁がオレンジ、ブドウ、リンゴ、バナナ、マンゴー、グレープフルーツより選ばれる果実の搾汁であり、前記発酵生成物として酢酸及び乳酸の少なくとも一方を含有する請求項6に記載の発酵飲料。
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