JP6721145B2 - メモリーインバリアントnkt細胞マーカー - Google Patents
メモリーインバリアントnkt細胞マーカー Download PDFInfo
- Publication number
- JP6721145B2 JP6721145B2 JP2016536003A JP2016536003A JP6721145B2 JP 6721145 B2 JP6721145 B2 JP 6721145B2 JP 2016536003 A JP2016536003 A JP 2016536003A JP 2016536003 A JP2016536003 A JP 2016536003A JP 6721145 B2 JP6721145 B2 JP 6721145B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- klrg1
- inkt
- invariant nkt
- positive
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 title claims description 442
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 title 1
- 101000971533 Homo sapiens Killer cell lectin-like receptor subfamily G member 1 Proteins 0.000 claims description 201
- 102100021457 Killer cell lectin-like receptor subfamily G member 1 Human genes 0.000 claims description 199
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 141
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 100
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 53
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 50
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 31
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 28
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 claims description 25
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 claims description 24
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 21
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 17
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 13
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 8
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 99
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 84
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 40
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 39
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 38
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 35
- VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 1-O-(alpha-D-galactosyl)-N-hexacosanoylphytosphingosine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H]([C@H](O)[C@H](O)CCCCCCCCCCCCCC)CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQFKFAKEUMHBLV-BYSUZVQFSA-N 0.000 description 23
- 230000004044 response Effects 0.000 description 20
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 18
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 18
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 18
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 18
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 15
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 15
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 13
- 208000001382 Experimental Melanoma Diseases 0.000 description 12
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 12
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 12
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 12
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 12
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 11
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 11
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 11
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 10
- YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 2,5-dimethoxy-4-bromophenethylamine Chemical compound COC1=CC(CCN)=C(OC)C=C1Br YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 9
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 9
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 9
- 241000545067 Venus Species 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 102100036013 Antigen-presenting glycoprotein CD1d Human genes 0.000 description 8
- 101000716121 Homo sapiens Antigen-presenting glycoprotein CD1d Proteins 0.000 description 8
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 8
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 7
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 6
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 6
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 5
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 5
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 5
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 101000608935 Homo sapiens Leukosialin Proteins 0.000 description 4
- 101001109501 Homo sapiens NKG2-D type II integral membrane protein Proteins 0.000 description 4
- 102100039564 Leukosialin Human genes 0.000 description 4
- 101100181106 Mus musculus Klra8 gene Proteins 0.000 description 4
- 101100094860 Mus musculus Slc22a6 gene Proteins 0.000 description 4
- 102100022680 NKG2-D type II integral membrane protein Human genes 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 4
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- 102100027207 CD27 antigen Human genes 0.000 description 3
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101000914511 Homo sapiens CD27 antigen Proteins 0.000 description 3
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 3
- 101000994375 Homo sapiens Integrin alpha-4 Proteins 0.000 description 3
- 101001043809 Homo sapiens Interleukin-7 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 3
- 102100032818 Integrin alpha-4 Human genes 0.000 description 3
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 3
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 3
- 102100021593 Interleukin-7 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- -1 Tbx21 Proteins 0.000 description 3
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 3
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 230000003778 catagen phase Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 3
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 3
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 3
- 238000010208 microarray analysis Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 2
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 2
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 238000011510 Elispot assay Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010039471 Fas Ligand Protein Proteins 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 102100029098 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 102100035133 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Human genes 0.000 description 2
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 2
- 101100445364 Mus musculus Eomes gene Proteins 0.000 description 2
- 101100127368 Mus musculus Klrg1 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 241000736091 Sphingobium yanoikuyae Species 0.000 description 2
- 101100445365 Xenopus laevis eomes gene Proteins 0.000 description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N brefeldin A Chemical compound O[C@@H]1\C=C\C(=O)O[C@@H](C)CCC\C=C\[C@@H]2C[C@H](O)C[C@H]21 KQNZDYYTLMIZCT-KQPMLPITSA-N 0.000 description 2
- JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N brefeldin-A Natural products CC1CCCC=CC2(C)CC(O)CC2(C)C(O)C=CC(=O)O1 JUMGSHROWPPKFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000023135 chemokine (C-C motif) ligand 4 production Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 238000003114 enzyme-linked immunosorbent spot assay Methods 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 102000050855 human KLRG1 Human genes 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 210000005007 innate immune system Anatomy 0.000 description 2
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 230000023768 macrophage inflammatory protein-1 alpha production Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000513 principal component analysis Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 102000006306 Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010083359 Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N C16 ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@@H](CO)[C@H](O)C=CCCCCCCCCCCCCC YDNKGFDKKRUKPY-JHOUSYSJSA-N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000725101 Clea Species 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 108010079362 Core Binding Factor Alpha 3 Subunit Proteins 0.000 description 1
- 102000012666 Core Binding Factor Alpha 3 Subunit Human genes 0.000 description 1
- 239000000055 Corticotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 101150089023 FASLG gene Proteins 0.000 description 1
- 102000015212 Fas Ligand Protein Human genes 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 208000022072 Gallbladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 208000005331 Hepatitis D Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000896557 Homo sapiens Eukaryotic translation initiation factor 3 subunit B Proteins 0.000 description 1
- 101000988834 Homo sapiens Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000984186 Homo sapiens Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4 Proteins 0.000 description 1
- 101001023379 Homo sapiens Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 1
- 101000819111 Homo sapiens Trans-acting T-cell-specific transcription factor GATA-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000662009 Homo sapiens UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase Proteins 0.000 description 1
- 206010020460 Human T-cell lymphotropic virus type I infection Diseases 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 1
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 231100000416 LDH assay Toxicity 0.000 description 1
- 241000283953 Lagomorpha Species 0.000 description 1
- 102100025578 Leukocyte immunoglobulin-like receptor subfamily B member 4 Human genes 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 102100033486 Lymphocyte antigen 75 Human genes 0.000 description 1
- 101710157884 Lymphocyte antigen 75 Proteins 0.000 description 1
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 101710116782 Lysosome-associated membrane glycoprotein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 102000013460 Malate Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010026217 Malate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 208000032271 Malignant tumor of penis Diseases 0.000 description 1
- 238000000585 Mann–Whitney U test Methods 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 101100013967 Mus musculus Gata3 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N N-acetylsphinganine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCC[C@@H](O)[C@H](CO)NC(C)=O CRJGESKKUOMBCT-VQTJNVASSA-N 0.000 description 1
- 230000006051 NK cell activation Effects 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 208000002471 Penile Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010034299 Penile cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108091008773 RAR-related orphan receptors γ Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108010092262 T-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000031673 T-Cell Cutaneous Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 1
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 description 1
- 102100021386 Trans-acting T-cell-specific transcription factor GATA-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 108091005956 Type II transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100037921 UDP-N-acetylglucosamine pyrophosphorylase Human genes 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 206010047741 Vulval cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000004354 Vulvar Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000710886 West Nile virus Species 0.000 description 1
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006786 activation induced cell death Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 208000020990 adrenal cortex carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000007128 adrenocortical carcinoma Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012197 amplification kit Methods 0.000 description 1
- 230000002155 anti-virotic effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N ceramide Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)C(=O)NC(CO)C(O)C=CCCC=C(C)CCCCCCCCC ZVEQCJWYRWKARO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000009850 completed effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 1
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 1
- 201000007241 cutaneous T cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003568 cytokine secretion assay Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 239000006274 endogenous ligand Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000006277 exogenous ligand Substances 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N fluorescamine Chemical compound C12=CC=CC=C2C(=O)OC1(C1=O)OC=C1C1=CC=CC=C1 ZFKJVJIDPQDDFY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 201000010175 gallbladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000003500 gene array Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 150000002339 glycosphingolipids Chemical class 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000005252 hepatitis A Diseases 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 201000010284 hepatitis E Diseases 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002843 lactate dehydrogenase assay Methods 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- KNJDBYZZKAZQNG-UHFFFAOYSA-N lucigenin Chemical compound [O-][N+]([O-])=O.[O-][N+]([O-])=O.C12=CC=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C2)C2=C1C1=C(C=CC=C2)C2=[N+](C)C2=CC=CC=C12 KNJDBYZZKAZQNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001515942 marmosets Species 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 230000006386 memory function Effects 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000005962 mycosis fungoides Diseases 0.000 description 1
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 1
- VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N newbouldiamide Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)C(O)C(O)C(CO)NC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC VVGIYYKRAMHVLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000003499 nucleic acid array Methods 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 208000025638 primary cutaneous T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000013515 script Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000007493 shaping process Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000029387 trophoblastic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 201000005102 vulva cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56972—White blood cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2851—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
- C12Q1/24—Methods of sampling, or inoculating or spreading a sample; Methods of physically isolating an intact microorganisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
これまで、iNKT細胞の活性化を利用した免疫療法(iNKT細胞活性化療法)が開発されている。一つには、患者体内のiNKT細胞の機能回復を目的に、患者より採取されたiNKT細胞をin vitroで増殖させて体内に戻す方法がある。別の方法としては、患者末梢血から採取した樹状細胞(DC)にα‐GalCerをロードしたもの(DC/Gal)を、再び患者体内に戻すことでiNKT細胞を活性化させる方法が開発され、樹状細胞療法とも呼ばれる。当該方法は、臨床試験により安全性及び効果が立証されている(非特許文献14-17)。
また、iNKT細胞の活性化とDC成熟化を引き起こす、CD1d陽性細胞を用いた新たな免疫誘導用細胞製剤が開発されている(特許文献1)。
即ち、本発明は下記の通りである:
[2]KLRG1の発現の検出が、KLRG1を特異的に認識する抗体を用いて行われる、[1]の方法。
[3]iNKT細胞活性化療法に対する患者の応答性を予測するための方法であって、
(1)インバリアントNKT細胞リガンドをパルスしたCD1d陽性細胞投与による、対象患者由来生体試料における、KLRG1陽性インバリアントNKT細胞数の変化を測定すること;及び
(2)(1)において測定したKLRG1陽性インバリアントNKT細胞数の変化と、インバリアントNKT細胞リガンドをパルスした抗原提示細胞による抗腫瘍療法に対する患者の応答性とを相関付けることを含む、方法。
[4]KLRG1陽性インバリアントNKT細胞数の変化の測定が、KLRG1を特異的に認識する抗体を用いて行われる、[3]の方法。
[5]リンパ球含有試料から、KLRG1陽性且つインバリアントNKT細胞受容体陽性の細胞画分を単離することを含む、メモリーインバリアントNKT細胞の単離方法。
[6]KLRG1陽性、且つインバリアントNKT細胞受容体陽性の細胞の単離が、KLRG1を特異的に認識する抗体及びインバリアントNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dを用いて行われる、[5]の方法。
[7]KLRG1を特異的に認識する抗体を含む、メモリーインバリアントNKT細胞検出用試薬。
[8]更にインバリアントNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dを含む、[7]の試薬。
[9]KLRG1を特異的に認識する抗体を含む、インバリアントNKT細胞リガンドをパルスした抗原提示細胞による抗腫瘍療法に対する患者の応答性を予測するための診断試薬。
[10]更にインバリアントNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dを含む、[9]記載の試薬。
[11]KLRG1を特異的に認識する抗体、及びインバリアントNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dを含む、メモリーインバリアントNKT細胞単離用試薬。
[12]インバリアントNKT細胞リガンドをパルスした抗原提示細胞による抗腫瘍療法に対する患者の応答性の予測において使用するための、KLRG1を特異的に認識する抗体、又は該抗体及びインバリアントNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dを含む組み合わせ。
[13]インバリアントNKT細胞リガンドをパルスした抗原提示細胞による抗腫瘍療法に対する患者の応答性を予測するための診断試薬を製造するための、KLRG1を特異的に認識する抗体、又は該抗体及びインバリアントNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dを含む組み合わせの使用。
メモリーiNKT細胞はKLRG1、ccl3、ccl4およびグランザイムAを特異的に発現しているため、iNKT細胞におけるKLRG1、ccl3、ccl4および/またはグランザイムAの発現を確認することでナイーブiNKT細胞と識別することができる。
以上より、メモリーiNKT細胞の識別マーカーは、KLRG1、ccl3、ccl4および/またはグランザイムAであり、好ましくはKLRG1である。
一態様において、メモリーiNKT細胞は、ナイーブiNKT細胞と比較して高い発現量のCD43、CD49d、Ly6C、NKG2D、FasLおよび/またはIFN-γが確認され、ナイーブiNKT細胞と比較して低い発現量のCD69、CD127および/またはCD27が確認される。さらに、メモリーiNKT細胞の特徴として、NK細胞とは異なりLPAM-1、Ly49Dおよび/またはLy49Hの発現が検出されないか、顕著に低い発現量である。
従って、上記のメモリーiNKT細胞の識別マーカーに加えて、CD43、CD49d、Ly6C、NKG2D、CD69、CD127、CD27、 LPAM-1、Ly49Dおよび/またはLy49Hの発現レベルを検出する方法を、メモリーiNKT細胞の識別の判断に利用できる。
iNKT細胞を、試料中の他の細胞から識別する方法としては、iNKT細胞の細胞表面マーカーであるNKT ligand-CD1d dimer又はtetramer complex陽性(ヒトであればVa24+Vb11+, 6B11陽性)を指標として、フローサイトメトリーを行う方法など、当業者であれば適宜公知の方より選択できる。
また、iNKT細胞の識別する方法として、iNKT細胞リガンドを利用した方法も挙げられる。iNKT細胞は、iNKT細胞受容体を介して、CD1d分子上に提示されたiNKT細胞リガンドを特異的に認識するので、例えばiNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dを用いて、細胞表面上のiNKT細胞受容体の発現を検出することにより、iNKT細胞を、試料中の他の細胞から識別することができる。iNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dは、iNKT細胞に特異的に結合する。従って、iNKT細胞は、「インバリアントNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1d」陽性の細胞として、試料中の他の細胞から識別される。
また、別の態様では、採取した試料とiNKT細胞リガンドをパルスしたCD1d発現細胞と共培養し、iNKT細胞を増殖させて試料中のiNKT細胞の占める割合を増強させた後に、上述のフローサイトメトリー法、可溶性CD1dを用いた方法などによって他の細胞と識別することができる。
(1)インバリアントNKT細胞リガンドをパルスしたCD1d陽性細胞投与による、対象患者由来生体試料における、KLRG1等の識別マーカー陽性インバリアントNKT細胞数の変化を測定すること;及び
(2)上記(1)において測定したKLRG1等の識別マーカー陽性インバリアントNKT細胞数の変化と、iNKT細胞活性化療法に対する患者の応答性とを相関付けること、を含む方法を提供する。
「CD1d陽性細胞へのインバリアントNKT細胞リガンドのパルス」とは、iNKT細胞リガンドを細胞表面上のCD1d分子に、該リガンドがiNKT細胞へ提示され得るように、配置することをいう。CD1d陽性細胞へのiNKT細胞リガンドのパルスは、iNKT細胞リガンドをCD1d陽性細胞へ接触させることにより達成することが出来る。例えばiNKT細胞リガンドを含有する生理的な培養液中でCD1d陽性細胞を培養する。この場合、培養液中のiNKT細胞リガンドの濃度は、iNKT細胞リガンドの種類により適宜設定することが可能であるが、例えば、1〜10000ng/ml好ましくは10〜1000ng/mlである。更に、培養後にCD1d陽性細胞を、iNKT細胞リガンドを含まない培養液や生理的な水溶液で洗浄し、フリーのiNKT細胞リガンドを除去することにより、iNKT細胞リガンドをパルスしたCD1d陽性細胞が単離される。
腫瘍の種類としては、iNKT細胞リガンドが治療的に有効な腫瘍であれば特に限定されない。腫瘍としては、例えば、肺癌(小および/または非小細胞)、脳腫瘍、胃癌、食道癌、肝臓癌、膵臓癌、腎臓癌、膀胱癌、乳癌、卵巣癌、子宮癌、精巣癌、皮膚癌、骨肉腫、結腸直腸癌、慢性リンパ性白血病、急性リンパ性白血病、急性非リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、ACTH生成腫瘍、副腎皮質癌、皮膚T細胞性リンパ腫、子宮内膜癌、ユーイング肉腫、胆嚢癌、頭頸部癌、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、メラノーマ、中皮腫、多発性骨髄腫、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、卵巣(胚細胞)癌、陰茎癌、前立腺癌、網膜芽腫、軟組織肉腫、扁平上皮細胞癌、甲状腺癌、栄養膜新生物、膣癌、外陰癌、ウィルムス腫瘍等を挙げることが出来る。
感染症は、病原体の感染によって引き起こされる疾患を指し、例えばヒト免疫不全ウイルス(HIV)、肝炎ウイルス(例、A型、B型、C型、D型及びE型肝炎ウイルス)、インフルエンザウイルス、単純ヘルペスウイルス、西ナイル熱ウイルス、ヒトパピローマウィルス、脳炎ウイルス、ヒトT細胞白血病ウイルス(例、HTLV−I)などのウイルスの病原体によって引き起こされるウイルス感染症;マラリア、トリパノソーマ、トキソプラズマなどの原虫により引き起こされる原虫感染症;肺炎球菌、チフス菌、赤痢菌などの細菌によって引き起こされる細菌感染症などが挙げられる。
本明細書中で挙げられた特許及び特許出願明細書を含む全ての刊行物に記載された内容は、本明細書での引用により、その全てが明示されたと同程度に本明細書に組み込まれるものである。
試薬
以下のモノクローナル抗体(mAbs)をBD Biosciences、e-Bioscience、R&D Systems又はBiolegendから購入した:抗マウスCD1d (1B1)、-CD3 (145-2C11)、-CD4 (GK1.5)、-CD11c (HL3)、-CD19 (6D5)、-CD25 (PC61)、-CD27(LG.3A10)、-CD28(37.51)、CD43(S7)、-CD44 (IM7)、-CD62L (MEL-14)、-CD69(H1.2F3)、-CD107a (1D4B)、-CD122 (TM-b1)、-CD127 (A7R34)、-IL15Ra、-Ly49H(3D10)、-NK1.1 (PK136)、-Ly49D(4E5)、-NKG2D(CX5)、-Ly6C(AL-21)、-Klrg1(2F1)、-PD1 (29F-1A12)、-IFN-γ (XMG1.2)、-T-bet(eBio4B10)、-Eomes(Dan11mag)、CD1d-dimerix、TCR Vb screening panel はBDから購入した。解析においては、FACS CaliburTM又はCanto II装置、及びCELLQuestTM、 Diva (BD Biosciences)、又はFlowJo (Tree Star)ソフトウェアを使用した。α‐GalCerは、RIKENのY. Ishiiにより合成され提供された。iGB3はAlexis Biochemicalsから購入した。Sphingobium yanoikuyaeのGSLはKawaharaらの報告(Kawahata et al., 2006.Microbiol Immunol 50, 67-71)に従って精製された。
病原体フリーの6〜8週齢のC57BL/6マウスをCLEA Japanから購入した。B6マウス、Jα18-/-マウス及びiNKTクローンマウスを、特定病原体除去条件下で維持し、施設のガイドラインに従って処置した。B16メラノーマ及びNIH3T3細胞株をAmerican Type Culture Collectionから購入した。高レベルのCD1dを発現するB16 (CD1d-B16)、NIH3T3 (CD1d-NIH3T3) 及びHEK293 (CD1d-293)細胞をレトロウイルス形質導入により作成した。
骨髄由来DCsをGM-CSFの存在下で作成し、6日目に100 ng/ml α-GalCerで48時間パルスし、LPSで成熟化した。いくつかの試験においては、他のNKTリガンドである、10 μg/ml iGB3又はGSLを、α-GalCerの代わりに、パルスに用いた。脾臓、肺及び肝臓からの単核球(MNCs)を単離した。簡潔に言うと、脾臓を押して70 μmセルストレイナーを通すことにより、脾細胞を得て、ACK lysing buffer (GIBCO)により赤血球を溶血し、RPMIで2回洗浄した。肺及び肝臓のMNCsの単離のため、組織をcollagenase D (Roche)で消化し、次にpercoll gradients (40/60 %) (Amersham PharmaciaBiotec)に積層し、900 gで20分遠心分離した。
100 ng/ml α-GalCer 存在下又は非存在下で16時間培養することにより、IFN-γ分泌細胞についてのエリスポットアッセイを行った。リガンド依存的IFN-γスポットの数を顕微鏡でカウントした。
製造者の指示書(Miltenyi Biotec Inc.)に従い、iNKT細胞からのIFN-γ遊離を、サイトカイン分泌検出キットを用いて決定した。簡潔に言うと、IFN-γ捕捉試薬とともに細胞を氷上で5分間インキュベートし、次に5%FCSを含む温めたRPMIで希釈し、引き続き37℃にて45分間インキュベートした。2回洗浄後、細胞を冷たいMACS緩衝液に再懸濁し、PE-結合IFN-γ検出試薬とともに4℃にて10分間インキュベートし、引き続き他の細胞表面マーカーで染色した。フローサイトメトリーによる解析のためのiNKT細胞の細胞内サイトカイン染色のため、単離された肺MNCsを、Golgi Plug (BD Bioscience)の存在下、10 μg/ml固相化抗CD3抗体及び2 μg/ml可溶性抗CD28抗体により2時間刺激し、抗CD16/32抗体でプレインキュベートすることにより抗体のFcγRへの非特異的結合をブロックし、洗浄し、着目する細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体とともにインキュベートした。次に、Cytofix-Cytoperm Plus (BD Bioscience)中で細胞を透過処理し、抗IFN-γ mAbで染色した。
製造者の指示書(Takara Bio Company)に従い、LDHアッセイキットを用いて、肺MNCsのB16メラノーマ細胞に対する細胞傷害活性を解析した。簡潔に言うと、1x104個のB16メラノーマ細胞を、ナイーブ又はDC/Galで免疫したマウスからのプールした肺MNCとともに、種々のエフェクター/ターゲット(E/T)比で16時間培養した。培養上清をテトラゾリウム塩を含有する、新たに調製したReaction Mixtureとともにインキュベートし、490 nmにおける吸光度を測定した。データは、3回の独立した試験のトリプリケイトウェルの平均値±s.d.である。バックグラウンドのコントロール値を引いた後、細胞傷害値(%)を以下のように算出した。
細胞傷害性(%)={(エッフェクター:ターゲット細胞混合-エフェクター細胞コントロール)-スポンテニアス標的細胞コントロール}/(最大値 標的コントロール-スポンテニアス標的細胞コントロール)x100
単離したiNKT細胞の試料から抽出した全RNAを、GeneChip Mouse Genome 430 2.0 Arrayによるマイクロアレイ解析に用いた;全ての手順は、製造者の指示書(Affymetrix)に従って行った。データはGeneSpring software (Agilent Technologies)を用いて解析した。
各iNKT細胞サブセットを高純度に単離した。全RNAを抽出し、SMARTer RACE cDNA amplification kit (Clontech)を用いて逆転写を行いファーストストランドcDNAを合成した。ユニバーサル・ミックスプライマー及びTCRβ定常領域配列に特異的なプライマーの両方をセカンドストランド増幅のために用い、高純度のTCRβ PCR産物を得て、これを次に、Roche 454-GS Junior systemを用いた長リードのハイスループットDNA配列解析に供した。TCRβレパトワ配列の全てのリードをUSEARCHアルゴリズム(http://drive5.com/usearch/)に基づくPerl scriptsを用いて解析した。各クラスターにおけるV領域コンセンサス配列をIMGTサイト(http://www.imgt.org/IMGT_vquest/share/textes/ )上で検索した。
マウスを1x106のDC/Galにより、又はそれなしで免疫した。4か月後、マウスに2x105 B16 メラノーマ細胞を静脈内に注入した。14日後、マウスを屠殺し、肺転移の数を解析した。いくつかの試験において、マウスを300 μg/マウスの抗NK1.1抗体で、B16細胞の摂取の2日前から1週間に2回処置した。
iNKT細胞による遺伝子発現を評価するため、FACSソートしたiNKT細胞を、遺伝子特異的なプライマーをプールした混合物(各0.2 μM)と共に、CellsDirect One-Step qRT-PCR Kit (Invitrogen)を用いて、RNAを精製することなく、直接cDNA合成及び前増幅に供した。前増幅の18サイクル(各サイクル:95℃ 30秒間, 60℃ 4分間)の後、アリコットを、FastStart Universal Probe Master (Roche)、遺伝子特異的フォワード及びリバースプライマー、及び対応するFAM標識加水分解プローブ(Universal Probe Library Set, Roche)を用いた定量的PCRに用いた。定量的PCRは、ABI PRISM 7000 (Applied Biosystems)上で行った。遺伝子発現を、HPRT1を内部標準として用いたΔΔCT法により測定した。
1x105のソートしたKLRG1+又はKLRG1- iNKT細胞を10 μg/mlの固相化CD3抗体+10 μg/ml可溶性CD28抗体で24時間刺激した。培養上清を、IFN-γ産生についてELISA(BD)により、CCL3及びCCL4産生についてLuminex (Bio-Rad)により、解析した。
インビボiNKT細胞のターンオーバーを評価するため、1 μgのBrdUを、DC/Galによる免疫の直前にマウスの腹腔内へ投与した;次に、7日間、0.8 mg/mlのBrdUを含有する飲水を自由摂取で与えた。iNKT細胞を適切なmAbで標識し、次にBrdUによる標識を、固定した細胞について、BrdU Flow Kit (Becton Dickinson)を用いて評価した。後者について、細胞を、氷上で、100 μlのCytofix-Cytoperm緩衝液中で20分間固定し、perm-wash緩衝液で洗浄し、氷上で、100 μlのCytoperm Plus Buffer中で10分間インキュベートした。細胞を、氷上で、Cytofix-Cytoperm bufferにより5分間再固定し、300μg/mlのDNaseで37℃にて1時間処理し、フローサイトメトリー解析のため、抗BrdU抗体により室温にて20分間染色した。
Mann-Whitney U-testを用いて差異を解析した。P<0.05を統計学的有意とした。
実施例1:肺におけるKLRG1陽性iNKT細胞の長期間の持続
本発明者らは、以前、DC/Galが、マウス脾臓において2〜4日間にわたり、IFN-γ産生iNKT細胞の集団の増大を誘導するが、1週間後には細胞数が初期値のレベルに戻ることを報告している(Fujii et al., 2002. Nature Immunology 3, 867)。本試験において、本発明者らは、野生型又は担腫瘍マウスの肺において、IFN-γ産生iNKT細胞の増加した数が、DC/Galによる処理後に長期間に亘り持続することを見出した(図1a-c)。同様に、これらの免疫したマウスにおける肺単核球(MNCs)は、腫瘍細胞に対して抗腫瘍活性を示した(図1d)。
定常状態におけるCD4- iNKTは、抗腫瘍性iNKT細胞サブセットであることが報告されているが(Crowe, N. Y. et al., 2005. J. Exp. Med. 202, 1279)、ナイーブiNKT細胞と比較してDC/Gal注入マウスの肺におけるiNKT細胞のCD4-又はCD4+サブセットの割合やIFN-γ産生能に違いは見いだせず、iNKT細胞上のCD4マーカーは、長期間生存した抗腫瘍性のiNKT細胞の単純なマーカーとしては有用ではなかった。
従って、これらの有効なiNKT細胞の特異的なマーカーを探索するため、1ヶ月前にDC/Galで免疫したマウスのiNKT細胞を遺伝子アレイで解析した(図1e)。その結果、DC/Gal処理マウスからのiNKT細胞ではKLRG1 の発現が特異的に検出された。
C57BL/6マウスに対して、樹状細胞、CD1d導入NIH3T3細胞、α-GalCerをロードした樹状細胞(DC/Gal)、α-GalCerをロードしたCD1d導入B16メラノーマ細胞(CD1d-B16/Gal)、又はα-GalCerをロードしたCD1d導入NIH3T3細胞(CD1d-NIH3T3/Gal)を投与後に、KLRG1陽性iNKT細胞の増殖を検出した。細胞を投与しなかったナイーブマウス、樹状細胞またはCD1d導入NIH3T3細胞を投与したマウスではKLRG1陽性iNKT細胞を検出することが出来なかった。一方、DC/Gal、CD1d-B16/Gal、又はCD1d-NIH3T3/Galを投与したマウスではKLRG1陽性iNKT細胞の増殖が確認された(図2a)。
フローサイトメトリーによって、KLRG1陽性iNKT細胞に発現されているKLRG1以外の表面分子の発現を調べたところ、ナイーブ細胞よりもCD43、CD49d、Ly6C 及びNKG2Dをより強く発現し、CD69、CD127及びCD27をより弱く発現していたことが示された(図2b)。CD4発現に関して調べたところ、KLRG1陽性iNKT細胞群では同等の割合でCD4+細胞及びCD4-細胞が含まれていたが、ナイーブiNKT細胞はCD4+細胞をより多く有していた。また、KLRG1陽性iNKT細胞は、LPAM-1、Ly49D 及びLy49HといったNK細胞活性化/メモリーマーカーは発現していなかった。続いて、iNKT細胞の増殖のキネティクスを検討するため、DC/Galで免疫した後の2日から12週までの間、KLRG1陽性iNKT細胞の頻度を解析した。その結果、増殖は、DC/Gal投与の2日後から始まっており(図2c)、全iNKT細胞の絶対数は強力に増殖し、その後定常レベルにまで減少した(図2d)。興味深いことに、KLRG1陽性iNKT細胞は増殖してDC/Gal投与の30日後まで減少し、退縮期の後は肺及び肝臓において維持されるが、脾臓では維持されなかった(図2e)。
DC/Galによる免疫後に長期間維持されたKLRG1陽性iNKT細胞について、サイトカイン、ケモカイン及び細胞傷害性分子の定量的リアルタイムPCRを行って評価した。KLRG1陽性iNKT細胞ではccl3、ccl4 及びgranzyme Aの発現が確認され、ナイーブiNKT細胞又はKLRG1陰性iNKT細胞よりも高いレベルのIFN-γ及びfasL転写物を発現した(図3a)。続いて、DC/Galを投与したマウスからのKLRG1陽性iNKT細胞はgranzyme Aを高レベルで発現するが、ナイーブマウスのiNKT細胞では発現しないことをタンパク質レベルで確認した(図3b)。抗CD3+抗CD28 mAbsによるインビトロ刺激後のLAMP-1 (CD107a)発現で評価したところ、KLRG1陽性iNKT細胞の脱顆粒も亢進していた。
DC/Galを投与したマウス又はナイーブマウスからのiNKT細胞におけるIFN-γ産生を刺激して2時間後に評価すると、KLRG1陽性iNKT細胞のIFN-γ MFIはナイーブiNKT細胞のそれよりも圧倒的に高かった(図3c)。同様にKLRG1陽性iNKT細胞により産生されたIFN-γ、CCL3及びCCL4の量を比較しても高かった(図3d)。一方、KLRG1陽性iNKT細胞はIL-4、IL-10及びIL-17を産生しなかった。
以上より、KLRG1陽性iNKT細胞はナイーブiNKT細胞に比べて低い活性化の閾値を持ち、産生するサイトカインの種類も定常状態のiNKT細胞とは全く異なり、メモリーiNKT細胞として別個の機能を有することが示された。
次に、転写因子について調べた結果、KLRG1陽性iNKT細胞ではeomes、tbx21及びrunx3の発現が、ナイーブiNKT細胞よりも高いことを見出した(図3e)。一方、KLRG1陽性iNKT細胞におけるGATA3及びRORγの発現は、ナイーブiNKT細胞よりも低かった(図3e)。KLRG1陽性iNKT細胞のIFN-γ産生による効果を検証するため、DC/Galを投与したマウスの4か月後に、B16メラノーマ静注にして腫瘍細胞の転移について検討した。まず、インビボにおいてIFN-γ産生KLRG1陽性iNKT細胞の頻度が増加したことを確認し(図3f)、B16メラノーマ投与の2週間後に長期生存耐性の基準として、肺における腫瘍転移の数をカウントした。DC/Galを投与したマウスにおいては、転移発生が抑えられ、NK1.1抗体によって処理されたマウスでは転移が見られた(図3g)。この結果より、KLRG1陽性iNKT細胞による高い抗腫瘍効果が示された。
DC/Galを投与したマウスにおいてiNKTがメモリー段階でより長く生存することができるかを検証するため、パルス及び追跡試験を行った。KLRG1陽性iNKT細胞は、DC/Gal処理の後7日間BrdUを取り込みを行ったが、投与1ヶ月後のマウスにおいても依然としてBrdUが陽性であったことから、KLRG1陽性iNKT細胞が維持されていたことが示された(図4a)。
メモリーiNKT細胞生存を直接的に立証するため、本発明者らはKLRG1陽性iNKT細胞を別のJα18KOマウスに養子的に移入した。このケースにおいては、Vα14+iNKTクローンマウスからのiNKT細胞を用いた。該マウスはVα14NTマウスとして以前に樹立したものであり、CD1d dimer陽性venus陽性として移入した細胞を追跡することが可能になる(参照;Watarai, H. et al., 2010. Blood 115, 230-237)。DC/Galを投与したVα14+iNKTクローンマウスからのKLRG1陽性iNKT細胞は、DC/Galを投与した野生型マウスからのiNKT細胞と同様の特徴を示した。Jα18-/- マウスへ移入したKLRG1陽性Vα14陽性venus陽性iNKT細胞は、DC/Galに再び遭遇すると、二次応答において増殖した(図4b)。この結果は、KLRG1陽性iNKT細胞が抗原に対して再応答が可能であることを示唆する。次に、生理的条件をよりよく反映するため、少数のナイーブVα14陽性venus陽性iNKT細胞(即ち、KLRG1陰性 iNKT細胞)をC57BL/6マウスへ移入した。Vα14陽性iNKT クローンマウスからのVα14陽性iNKT細胞のC57BL/6マウスへの養子的移入により、抗原に晒されたことのあるiNKT細胞と胸腺から新たに発生したiNKT細胞との識別が可能となった。3ヶ月前にナイーブVα14陽性venus陽性iNKT細胞を移入したC57BL/6マウスにおいては、Vα14陽性venus陽性iNKT細胞は、ほとんど検出されなかったが、該細胞を移入し、その後DC/Galで免疫したマウスにおいては、3か月後にKLRG1陽性 Vα14陽性venus陽性iNKT細胞を検出することができた(図4c)。増殖したVα14陽性venus陽性iNKT細胞では、KLRG1の発現が継続して認められた(図4d)。
以上の結果より、メモリーiNKT細胞は、メモリーNK細胞と同様に、末梢で長期間生存することができ、リコール抗原応答に関与することが示唆された。
従って、KLRG1陽性iNKT細胞は同じ抗原を特異的に認識し、これに応答することができる。即ち、メモリーT細胞と同様に、メモリーiNKT細胞は、自己再生し、長期間生存し、肺及び肝臓においては10〜70倍を超える増殖能を伴って、二次応答を開始することができる。
iNKT細胞TCRのα鎖がインバリアント(不変)であることがよく知られているが、β鎖においてはより可変性があるものの、それは主にはVβ7、Vβ8及びVβ2に限定されている。そこで、メモリーiNKT細胞の抗原選択の証拠を探すため、フローサイトメトリーを用いて、ナイーブマウス、α-GalCerをロードしたDCを投与したマウス及びDC/GalでブーストしたマウスにおいてiNKT細胞のTCRVβレパートリーを評価した(図5b)。ナイーブiNKT細胞と比較して、DC/Galを投与したマウス、又はDC/Galを注入しDC/Galでブーストしたマウスにおいて特定のVβレパートリーの集積は見出されなかった。一方、DC/GSL又はDC/Gal-DC/GSLでブーストしたマウスにおいて、他のTCRVβ陽性iNKT細胞の減少を伴った、TCRVβ8.1+/8.2+iNKTの増加が認められ、DC/iGB3を注入した、又はDC/Gal- DC/iGB3でブーストしたマウスにおいては、TCRVβ7+iNKT細胞の増加が認められた(図5b)。
次に、プールしたiNKT細胞の群から大規模RNA配列解析を用いて、Vβ相補性決定領域(CDR1β、CDR2β及びCDR3β)を解析した。初期の配列解析において、ナイーブマウス、DC/Galを投与してDC/GalでブーストしたマウスによるTCR Vβ使用の主なパターン、即ち、Vβ2、Vβ7及びVβ8遺伝子、がFACS解析により見出されたパターンと類似することを見出した(図5b)。CDR1及びCDR2のクラスタリング後、更に詳細にRNA配列を解析した結果、KLRG1陽性 iNKT細胞のCDR1β及びCDR2βが、ナイーブiNKT細胞のそれとほとんど完全に一致することを見出した。
Claims (13)
- インバリアントNKT細胞におけるKLRG1の発現を検出することを含む、メモリーインバリアントNKT細胞の検出方法。
- KLRG1の発現の検出が、KLRG1を特異的に認識する抗体を用いて行われる、請求項1記載の方法。
- iNKT細胞活性化療法に対する患者の応答性を予測するための方法であって、
(1)インバリアントNKT細胞リガンドをパルスしたCD1d陽性細胞投与による、対象患者由来生体試料における、KLRG1陽性インバリアントNKT細胞数の変化を測定すること;及び
(2)(1)において測定したKLRG1陽性インバリアントNKT細胞数の変化と、インバリアントNKT細胞リガンドをパルスした抗原提示細胞による抗腫瘍療法に対する患者の応答性と
を相関付けることを含む、方法。 - KLRG1陽性インバリアントNKT細胞数の変化の測定が、KLRG1を特異的に認識する抗体を用いて行われる、請求項3記載の方法。
- リンパ球含有試料から、KLRG1陽性且つインバリアントNKT細胞受容体陽性の細胞画分を単離することを含む、メモリーインバリアントNKT細胞の単離方法。
- KLRG1陽性、且つインバリアントNKT細胞受容体陽性の細胞の単離が、KLRG1を特異的に認識する抗体及びインバリアントNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dを用いて行わ
れる、請求項5記載の方法。 - KLRG1を特異的に認識する抗体を含む、メモリーインバリアントNKT細胞検出用試薬。
- 更にインバリアントNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dを含む、請求項7記載の試薬。
- KLRG1を特異的に認識する抗体を含む、インバリアントNKT細胞リガンドをパルスした抗原提示細胞による抗腫瘍療法に対する患者の応答性を当該抗体を用いて検出または単離されたインバリアントNKT細胞上のKLRG1の発現量またはKLRG1を発現したインバリアントNKT細胞の数に基づいて予測することに用いるための診断試薬。
- 更にインバリアントNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dを含む、請求項9記載の試薬。
- KLRG1を特異的に認識する抗体、及びインバリアントNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dを含む、メモリーインバリアントNKT細胞単離用試薬。
- KLRG1を特異的に認識する抗体及びインバリアントNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dを含む、インバリアントNKT細胞リガンドをパルスした抗原提示細胞による抗腫瘍療法に対する患者の応答性を当該抗体を用いて検出若しくは当該抗体と当該パルスした可溶性CD1dを用いて単離されたインバリアントNKT細胞上のKLRG1の発現量またはKLRG1を発現したインバリアントNKT細胞の数に基づいて予測することに用いるための、組み合わせ。
- KLRG1を特異的に認識する抗体、又は該抗体及びインバリアントNKT細胞リガンドをパルスした可溶性CD1dを含む組合せの使用であって、インバリアントNKT細胞リガンドをパルスした抗原提示細胞による抗腫瘍療法に対する患者の応答性を当該抗体を用いて検出若しくは当該抗体と当該パルスした可溶性CD1dを用いて単離されたインバリアントNKT細胞上のKLRG1の発現量またはKLRG1を発現したインバリアントNKT細胞の数に基づいて予測することに用いるための診断試薬を製造するための使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014152394 | 2014-07-25 | ||
JP2014152394 | 2014-07-25 | ||
PCT/JP2015/071157 WO2016013672A1 (ja) | 2014-07-25 | 2015-07-24 | メモリーインバリアントnkt細胞マーカー |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2016013672A1 JPWO2016013672A1 (ja) | 2017-05-25 |
JP6721145B2 true JP6721145B2 (ja) | 2020-07-08 |
Family
ID=55163194
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016536003A Expired - Fee Related JP6721145B2 (ja) | 2014-07-25 | 2015-07-24 | メモリーインバリアントnkt細胞マーカー |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10416160B2 (ja) |
EP (1) | EP3190415B1 (ja) |
JP (1) | JP6721145B2 (ja) |
WO (1) | WO2016013672A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3512553A4 (en) * | 2016-09-16 | 2021-01-06 | The Brigham and Women's Hospital, Inc. | KLRG1 DEPLETION THERAPY |
EP3595683A1 (en) * | 2017-03-15 | 2020-01-22 | Orca Biosystems, Inc. | Compositions and methods for hematopoietic stem cell transplants |
AU2018358019B2 (en) | 2017-11-03 | 2023-05-11 | Nouscom Ag | Vaccine T cell enhancer |
WO2019169229A1 (en) * | 2018-03-01 | 2019-09-06 | Nextcure, Inc. | Klrg1 binding compositions and methods of use thereof |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101050829B1 (ko) | 2008-10-02 | 2011-07-20 | 서울대학교산학협력단 | 항 pd-1 항체 또는 항 pd-l1 항체를 포함하는 항암제 |
US8581022B2 (en) | 2009-07-01 | 2013-11-12 | National University Corporation Chiba University | Method of identifying a compound for preventing and/or treating an autoimmune disease |
JP2013034459A (ja) | 2011-08-11 | 2013-02-21 | Toyama Univ | ナチュラルキラーt細胞およびその取得方法 |
BR112014009962A2 (pt) | 2011-10-27 | 2019-09-24 | Nkt Therapeutics Inc | anticorpos humanizados para inkt |
-
2015
- 2015-07-24 US US15/328,997 patent/US10416160B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2015-07-24 EP EP15824832.8A patent/EP3190415B1/en not_active Not-in-force
- 2015-07-24 WO PCT/JP2015/071157 patent/WO2016013672A1/ja active Application Filing
- 2015-07-24 JP JP2016536003A patent/JP6721145B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20170227540A1 (en) | 2017-08-10 |
EP3190415A1 (en) | 2017-07-12 |
WO2016013672A1 (ja) | 2016-01-28 |
EP3190415A4 (en) | 2018-01-17 |
US10416160B2 (en) | 2019-09-17 |
JPWO2016013672A1 (ja) | 2017-05-25 |
EP3190415B1 (en) | 2019-05-01 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7034125B2 (ja) | Carの抗腫瘍活性のための毒性管理 | |
RU2730984C1 (ru) | Фармацевтическая композиция для лечения злокачественного новообразования | |
US11207393B2 (en) | Regulatory T cell PD-1 modulation for regulating T cell effector immune responses | |
JP7186196B2 (ja) | 腫瘍免疫寛容を破綻させるためのyapの阻害方法 | |
US20190092875A1 (en) | Depleting tumor-specific tregs | |
EP3241561A1 (en) | Chimeric antigen receptor (car) with antigen binding domains to the t cell receptor beta constant region | |
JP7534303B2 (ja) | 新規のlilrb4抗体およびその使用 | |
US20220332823A1 (en) | Methods of treating cancer | |
JP2017517488A (ja) | 抗cd19キメラ抗原受容体を使用する癌の処置 | |
Gámez-Díaz et al. | Immune checkpoint deficiencies and autoimmune lymphoproliferative syndromes | |
JP2009514528A (ja) | Nkg2d陽性cd4+細胞による免疫応答の負の免疫調節法 | |
JP6721145B2 (ja) | メモリーインバリアントnkt細胞マーカー | |
KR20220022050A (ko) | 지속적인 임상 이익을 위한 암 바이오마커 | |
JP2017533207A (ja) | Slamf1アンタゴニスト及びその使用 | |
BR112020014446A2 (pt) | Métodos para administrar imunoterapia de receptor de antígeno quimérico em combinação com agonista de 4-1bb | |
KR20220110176A (ko) | 항-kir3dl3 항체 및 이의 용도 | |
US10746726B2 (en) | Method for assessing therapeutic effect of anti-cancer agent having anti-CD4 antibody as active ingredient | |
US20220213198A1 (en) | Method of treatment | |
CN115697405A (zh) | 用于治疗或预防Th2介导的疾病的含有PD-1激动剂的药物组合物 | |
Palmeri et al. | Tregs constrain CD8+ T cell priming required for curative intratumorally anchored anti-4-1BB immunotherapy | |
Tu | Ly49 receptors and MHC-I interactions, and their implications in cancer immunosurveillance | |
Besneux | Elucidating the role of regulatory T cells in colorectal cancer progression | |
JP2022521541A (ja) | 免疫機能を増強するための細胞、組成物、及び方法 | |
WO2023242578A1 (en) | Dosage regimen for a combination therapy consisting oftcr-engineered t-cells in combination with a pd-1 axis binding antagonist | |
Rashighi et al. | CXCL10, an IFN-γ-induced chemokine, is required for the development of depigmentation in a mouse model of vitiligo |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD03 | Notification of appointment of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7423 Effective date: 20180523 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20180523 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20180529 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180724 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190806 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191002 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20191112 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200108 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200511 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200604 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6721145 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |