BR112020014446A2

BR112020014446A2 - Métodos para administrar imunoterapia de receptor de antígeno quimérico em combinação com agonista de 4-1bb

Info

Publication number: BR112020014446A2
Application number: BR112020014446-0A
Authority: BR
Inventors: William Y. GO; Adrian Woolfson
Original assignee: Pfizer Inc.; Kite Pharma, Inc.
Priority date: 2018-01-15
Filing date: 2019-01-15
Publication date: 2020-12-29
Also published as: AU2019206724A1; WO2019140425A1; CA3087481A1; EP3740285A1; US20210023134A1; CN111867680A; TW201932593A; RU2020127210A; SG11202006416TA; MX2020007543A; KR20200110356A; JP2021510738A; IL275733A

Abstract

a revelação fornece um método de tratamento de um linfoma de célula b ou leucemia, que inclui linfoma difuso de células b grandes (dlbcl) que compreende uma imunoterapia de célula t geneticamente modificada de receptor de antígeno quimérico dirigido a cd19 (car) em combinação com um agonista de 4-1bb (cd137). alguns aspectos da revelação se referem a métodos de tratamento e monitoramento da seguinte infusão de terapia de célula t fornecida no mesmo.

Description

“MÉTODOS PARA ADMINISTRAR IMUNOTERAPIA DE RECEPTOR DE ANTÍGENO QUIMÉRICO EM COMBINAÇÃO COM AGONISTA DE 4-1BB”

CAMPO DA TÉCNICA

[001]A presente revelação refere-se, de modo geral, a terapias de célula T e, mais especificamente, a terapias de combinação de imunoterapias de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 que compreendem um receptor de antígeno quimérico (CAR) e um agonista de 4-1BB (CD137).

ANTECEDENTES

[002]Os cânceres humanos são, por sua natureza, compreendidos de células saudáveis que se submeteram a uma conversão genética ou epigenética para se tornarem células de câncer anormais. Sendo assim, as células de câncer começam a expressar proteínas e outros antígenos que são distintos daqueles expressos por células saudáveis. Esses antígenos de tumor anormais podem ser usados pelo sistema imunológico inato do corpo para especificamente alvejar e exterminar células de câncer.

Entretanto, as células de câncer empregam diversos mecanismos para impedir que as células imunes, como linfócitos T e B, alvejem com sucesso as células de câncer.

[003]Os receptores de antígeno quiméricos (CARs), que compreendem domínios de ligação com capacidade para interagir com um antígeno de tumor particular, permitem que células T induzidas para expressar os mesmos alvejem e exterminem células de câncer que expressam o antígeno de tumor particular que os mesmos reconhecem.

[004]4-1BB (também chamado de CD137, TNFRSF9, etc.) é uma proteína transmembranar da superfamília de receptor de Fator de Necrose Tumoral (TNFRS). 4- 1BB promove a proliferação, sobrevivência celular e produção de citocinas intensificada (Croft, 2009, Nat Rev Immunol 9:271 a 285).

SUMÁRIO

[005]Conforme descrito em detalhes abaixo, a presente revelação se baseia, em parte, na descoberta surpreendente de que os métodos de administração revelados no presente documento levam à imunoterapia de célula T anti-CD19 CAR aprimorada.

[006]Qualquer aspecto da modalidade descrita no presente documento pode ser combinado com qualquer aspecto ou modalidade conforme revelado no presente documento, exceto onde o contexto indica em contrário. Embora a presente invenção fosse descrita em conjunto com a descrição detalhada da mesma, a descrição antecedente é destinada a ilustrar e não limitar o escopo da presente invenção, que é definido pelo escopo das reivindicações anexas. Outros aspectos, vantagens e modificações estão dentro do escopo das reivindicações a seguir.

[007]Em um aspecto, a revelação fornece um método para tratar um linfoma de célula B ou leucemia em um paciente que precisa do mesmo que compreende administrar uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e um agonista de 4-1BB (CD137).

[008]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19, é geneticamente modificada para expressar um receptor de antígeno quimérico (CAR), sendo que o dito CAR compreende um fragmento variável de cadeia única anti-CD19 (scFv) ligado a domínios co-estimulatórios CD28 e CD3-zeta.

[009]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é uma imunoterapia autóloga.

[010]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é um imunoterapia alogênica.

[011]Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas ex vivo. Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas por transdução viral. Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas por transdução retroviral. Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas por transdução lentiviral.

[012]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é axicabtageno ciloleucel.

[013]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é uma molécula de ligação a antígeno ou fragmento da mesma.

[014]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende três CDRs de uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e três CDRS de uma sequência de aminoácidos de região VL apresentada em SEQ ID NO: 3.

[015]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende: (a) uma H-CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:5; (b) uma H-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:6; (c) uma H-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:7; (d) uma L- CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:8; (e) uma L-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:9; e (f) uma L-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:10.

[016]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo monoclonal completamente humano.

[017]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) compreende uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e uma sequência de aminoácidos de região VL conforme apresentado em SEQ ID NO: 3.

[018]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) compreende uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada conforme apresentado em SEQ ID NO:2 e uma sequência de aminoácidos de cadeia leve conforme apresentado em SEQ ID NO:4, com a condição de que o resíduo de lisina C-terminal de SEQ ID NO:2 esteja opcionalmente ausente.

[019]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é utomilumabe.

[020]Em algumas modalidades, o linfoma de célula B ou leucemia é selecionado a partir do grupo que consiste em leucemia linfoide aguda (ALL), linfoma relacionado a AIDS, linfoma de células B grandes positivo para ALK, linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica crônica, CLL), linfoma de Hodgkin clássico, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma de células B grandes mediastinal primário (PMBCL), linfoma folicular, linfoma de células B grandes intravascular, linfoma de células B grandes que surge em doença de Castleman multicêntrica associada a HHV8, granulomatose linfomatoide, linfoma linfoplasmocítico, linfoma de células do manto (MCL), linfoma de célula B de zona marginal (MZL), linfoma de tecido linfático associado à mucosa (MALT), Nodal linfoma de célula B de zona marginal (NMZL), linfoma de Hodgkin predominante de linfócito nodular, linfoma de não Hodgkin, linfoma plasmablástico, linfoma de sistema nervoso central primário, linfoma de efusão primário, linfoma de zona marginal esplênico (SMZL), e macroglobulinemia de Waldenström, linfoma de células B grandes refratário ou recidivo, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) não especificado de outro modo, linfoma de células B de alto grau e DLBCL que surge de linfoma folicular.

[021]Em algumas modalidades, o linfoma de célula B é selecionado a partir do grupo que consiste em linfoma de células B grandes refratário ou recidivo, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) não especificado de outro modo, linfoma de células B grandes mediastinal primário (PMBCL), linfoma de células B de alto grau e DLBCL que surge de linfoma folicular. Diversos tipos de linfoma adicionais são descritos na revisão de 2016 da classificação da Organização Mundial de Saúde de neoplasmas linfoides encontrados em Swerdlow et al., Blood 2016 127:2375-2390; doi: https://doi.org/10.1182/blood-2016-01-643569.

[022]Em algumas modalidades, o linfoma de célula B é linfoma difuso de células B grandes refratário ou recidivo.

[023]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e o agonista de 4-1BB (CD137) são administrados após duas ou mais linhas de terapia sistêmica em um paciente. Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e o agonista de 4- 1BB (CD137) são administrados a pacientes não expostos ao tratamento. Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e o agonista de 4-1BB (CD137) são administrados aos pacientes que não receberam outra terapia sistêmica antes da administração da imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e do agonista de 4-1BB (CD137).

[024]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é administrada ao paciente por meio de infusão intravenosa em uma dose entre cerca de 1 × 106 e cerca de 2 × 106 células T viáveis positivas para CAR por kg de peso corporal até uma dose máxima de cerca de 1 x 10 8 células T viáveis positivas para CAR.

[025]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é administrada apenas uma vez.

[026]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é administrada mais de uma vez.

[027]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é administrado por meio de infusão intravenosa.

[028]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é administrado em uma dose que se situa na faixa de cerca de 1 mg a cerca de 200 mg.

[029]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é administrado em uma dose de cerca de 1 mg, cerca de 10 mg, cerca de 100 mg ou cerca de 200 mg. Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é administrado em uma dose que se situa na faixa de cerca de 1 a 200 mg, cerca de 1 a 150 mg, cerca de 1 a 125 mg, cerca de 1 a 100 mg, cerca de 10 a 200 mg, cerca de 10 a 150 mg, cerca de 10 a 125 mg, cerca de 10 a 100 mg, cerca de 25 a 200 mg, cerca de 25 a 150 mg, cerca de 25 a 125 mg, cerca de 25 a 100 mg, cerca de 30 a 200 mg, cerca de 30 a 150 mg, cerca de 30 a 125 mg, cerca de 30 a 100 mg, cerca de 50 a 200 mg, cerca de 50 a 150 mg, cerca de 50 a 125 mg, 50 a 100 mg ou cerca de 100 a 200 mg.

[030]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e o agonista de 4-1BB (CD137) são administrados simultaneamente.

[031]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é administrada antes do agonista de 4-1BB (CD137)).

[032]Em algumas modalidades, a primeira dose do agonista de 4-1BB (CD137) é administrada no dia seguinte da infusão de imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19.

[033]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é administrada após o agonista de 4-1BB (CD137).

[034]Em algumas modalidades, a dosagem de agonista de 4-1BB (CD137) continua até que os pacientes demonstrem remissão completa, doença progressiva/sem resposta. Em algumas modalidades, o agonista 4-1BB (CD137)) é administrado durante cerca de 1 ano.

[035]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é administrado cerca de cada 4 semanas. Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é administrado mensalmente. Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é administrado cerca de cada 28 dias. Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é administrado cerca de cada 30 dias.

[036]Em algumas modalidades, o paciente é administrado com um regime de quimioterapia de condicionamento antes da administração da imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e do agonista de 4-1BB (CD137).

[037]Em um aspecto, a presente invenção fornece uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e um agonista de 4-1BB (CD137) para uso em um método para tratar um linfoma de célula B ou leucemia em um paciente que precisa do mesmo.

[038]Em um aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar um linfoma de célula B ou leucemia em um paciente que precisa do mesmo que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c) monitorar o paciente após a administração acerca de sinais e sintomas de uma reação adversa.

[039]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é uma imunoterapia autóloga.

[040]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é um imunoterapia alogênica.

[041]Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas ex vivo.

[042]Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas por transdução viral.

[043]Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas por transdução retroviral.

[044]Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas por transdução lentiviral.

[045]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19, é geneticamente modificada para expressar um receptor de antígeno quimérico (CAR), sendo que o dito CAR compreende um fragmento variável de cadeia única anti-CD19 (scFv) ligado a domínios co-estimulatórios CD28 e CD3-zeta.

[046]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é axicabtageno ciloleucel.

[047]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é uma molécula de ligação de antígeno ou fragmento da mesma.

[048]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende três CDRs de uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e três CDRS de uma sequência de aminoácidos de região VL apresentada em SEQ ID NO: 3.

[049]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado ou porção de ligação a antígeno do mesmo que compreende: (a) uma H-CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:5; (b) uma H-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:6; (c) uma H-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:7; (d) uma L- CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:8; (e) uma L-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:9; e (f) uma L-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:10.

[050]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo monoclonal completamente humano.

[051]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) compreende uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e uma sequência de aminoácidos de região VL conforme apresentado em SEQ ID NO: 3.

[052]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) compreende uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada conforme apresentado em SEQ ID NO:2 e uma sequência de aminoácidos de cadeia leve conforme apresentado em SEQ ID NO:4, com a condição de que o resíduo de lisina C-terminal de SEQ ID NO:2 esteja opcionalmente ausente.

[053]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é utomilumabe.

[054]Em algumas modalidades, o linfoma de célula B ou leucemia é selecionado a partir do grupo que consiste em leucemia linfoide aguda (ALL), linfoma relacionado a AIDS, linfoma de células B grandes positivo para ALK, linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica crônica, CLL), linfoma de Hodgkin clássico, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma de células B grandes mediastinal primário (PMBCL), linfoma folicular, linfoma de células B grandes intravascular, linfoma de células B grandes que surge em doença de Castleman multicêntrica associada a HHV8, granulomatose linfomatoide, linfoma linfoplasmocítico, linfoma de células do manto (MCL), linfoma de célula B de zona marginal (MZL), linfoma de tecido linfático associado à mucosa (MALT), Nodal linfoma de célula B de zona marginal (NMZL), linfoma de Hodgkin predominante de linfócito nodular, linfoma de não Hodgkin, linfoma plasmablástico, linfoma de sistema nervoso central primário, linfoma de efusão primário, linfoma de zona marginal esplênico (SMZL), e macroglobulinemia de Waldenström, linfoma de células B grandes refratário ou recidivo, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) não especificado de outro modo, linfoma de células B de alto grau e DLBCL que surge de linfoma folicular.

[055]Em algumas modalidades, o linfoma de célula B é selecionado a partir do grupo que consiste em linfoma de células B grandes refratário ou recidivo, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) não especificado de outro modo, linfoma de células B grandes mediastinal primário, linfoma de células B de alto grau e DLBCL que surge de linfoma folicular.

[056]Em algumas modalidades, o linfoma de célula B é linfoma difuso de células B grandes refratário.

[057]Em algumas modalidades, a reação adversa é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de liberação de citocinas (CRS), uma toxicidade neurológica, uma reação de hipersensibilidade, uma infecção grave, uma citopenia e hipogamaglobulinemia.

[058]Em um aspecto, a presente invenção fornece uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e um agonista de 4-1BB (CD137) para uso em um método para tratar um linfoma de célula B ou leucemia em um paciente que precisa do mesmo que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4- 1BB (CD137); e (c) monitorar o paciente após a administração acerca de sinais e sintomas de uma reação adversa.

[059]Em um aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar linfoma difuso de células B grandes refratário em um paciente que precisa do mesmo que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c) monitorar o paciente após a administração acerca de alterações em marcadores de fenótipo e ativação de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) de paciente.

[060]Em um aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar linfoma difuso de células B grandes refratário após duas ou mais linhas de terapia sistêmica em um paciente que precisa do mesmo que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c) monitorar o paciente após a administração acerca de alterações em marcadores de fenótipo e ativação de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) de paciente.

[061]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é uma imunoterapia autóloga.

[062]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é um imunoterapia alogênica.

[063]Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas ex vivo.

[064]Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas por transdução retroviral.

[065]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19, é geneticamente modificada para expressar um receptor de antígeno quimérico (CAR), sendo que o dito CAR compreende um fragmento variável de cadeia única anti-CD19 (scFv) ligado a domínios co-estimulatórios CD28 e CD3-zeta.

[066]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é axicabtageno ciloleucel.

[067]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é uma molécula de ligação de antígeno ou fragmento da mesma.

[068]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende três CDRs de uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e três CDRS de uma sequência de aminoácidos de região VL apresentada em SEQ ID NO: 3.

[069]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado ou porção de ligação a antígeno do mesmo que compreende: (a) uma H-CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:5; (b) uma H-CDR2 conforme apresentado em

SEQ ID NO:6; (c) uma H-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:7; (d) uma L- CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:8; (e) uma L-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:9; e (f) uma L-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:10.

[070]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137)) é um anticorpo monoclonal completamente humano.

[071]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) compreende uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e uma sequência de aminoácidos de região VL conforme apresentado em SEQ ID NO: 3.

[072]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) compreende uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada conforme apresentado em SEQ ID NO:2 e uma sequência de aminoácidos de cadeia leve conforme apresentado em SEQ ID NO:4, com a condição de que o resíduo de lisina C-terminal de SEQ ID NO:2 esteja opcionalmente ausente.

[073]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é utomilumabe.

[074]Em algumas modalidades, os marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente compreendem um marcador de célula pan-T, marcador de célula T citotóxica, marcador de célula T de diferenciação, marcador de diferenciação, receptor de IL-2, marcador de ativação, PD1, 4-1BB, marcador de célula T auxiliar, marcador de granulócito, marcador de célula B, marcador de monócito/macrófago, marcador de célula NK e/ou identificação de axicabtageno ciloleucel.

[075]Em algumas modalidades, os marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente são monitorados por um painel que compreende anticorpos para CD3, CD8, CD45RA, CCR7, CD122, CD27, CD28, CD95 e/ou CD19 CAR.

[076]Em algumas modalidades, os marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente são monitorados por um painel que compreende anticorpos para CD3, CD8,

CD45RA, CCR7, CD57, CD107α, CD279 e/ou CD19 CAR.

[077]Em algumas modalidades, os marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente são monitorados por um painel que compreende anticorpos para CD3, CD8, CD45RA, CCR7, CD25, CD69, CD137 e/ou CD19 CAR.

[078]Em algumas modalidades, os marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente são monitorados por um painel que compreende anticorpos para CD3, CD4, CD8, CD66b, CD19, CD14, CD56 e/ou CD19 CAR.

[079]Em algumas modalidades, os marcadores são determinados por um ensaio de citometria de fluxo.

[080]Em um aspecto, a presente invenção fornece uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e um agonista de 4-1BB (CD137) para uso em um método para tratar linfoma difuso de células B grandes refratário em um paciente que precisa do mesmo que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c) monitorar o paciente após a administração acerca de alterações em marcadores de fenótipo e ativação de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) de paciente.

[081]Em um aspecto, a presente invenção fornece uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e um agonista de 4-1BB (CD137) para uso em um método para tratar linfoma difuso de células B grandes refratário após duas ou mais linhas de terapia sistêmica em um paciente que precisa do mesmo que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c) monitorar o soro de paciente após a administração acerca de níveis de quimiocina, citocina e/ou efetor imune.

[082]Em um aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar linfoma difuso de células B grandes refratário em um paciente que precisa do mesmo que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c) monitorar o soro de paciente após a administração acerca de níveis de quimiocina, citocina e/ou efetor imune.

[083]Em um aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar linfoma difuso de células B grandes refratário após duas ou mais linhas de terapia sistêmica em um paciente que precisa do mesmo que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c) monitorar o soro de paciente após a administração acerca de níveis de quimiocina, citocina e/ou efetor imune.

[084]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é uma imunoterapia autóloga.

[085]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é um imunoterapia alogênica.

[086]Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas ex vivo.

[087]Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas por transdução retroviral.

[088]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19, é geneticamente modificada para expressar um receptor de antígeno quimérico (CAR), sendo que o dito CAR compreende um fragmento variável de cadeia única anti-CD19 (scFv) ligado a domínios co-estimulatórios CD28 e CD3-zeta.

[089]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é axicabtageno ciloleucel.

[090]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é uma molécula de ligação de antígeno ou fragmento da mesma.

[091]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende três CDRs de uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e três CDRS de uma sequência de aminoácidos de região VL apresentada em SEQ ID NO: 3.

[092]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende: (a) uma H-CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:5; (b) uma H-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:6; (c) uma H-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:7; (d) uma L- CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:8; (e) uma L-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:9; e (f) uma L-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:10.

[093]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo monoclonal completamente humano.

[094]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) compreende uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e uma sequência de aminoácidos de região VL conforme apresentado em SEQ ID NO: 3.

[095]Em algumas modalidades, o 4-1BB (CD137) compreende uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada conforme apresentado em SEQ ID NO:2 e uma sequência de aminoácidos de cadeia leve conforme apresentado em SEQ ID NO:4, com a condição de que o resíduo de lisina C-terminal de SEQ ID NO:2 está opcionalmente ausente.

[096]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é utomilumabe.

[097]Em algumas modalidades, o soro de paciente é monitorado acerca de IL-

15, IL-7, IL-2, IL-6, IL1α, IL-1β, IL-17α, TNFα, TNFβ, GM-CSF, CRP, SAA, IL-13, IL-4, IL- 5, IL-10, IFNγ, IL-12p40, IL-12p70, IL-16, IL-8, MCP-1, MCP-4, MIP-1α, MIP-1β, IP-10, TARC, Eotaxina, Eotaxina-3, MDC, Granzima A, Granzima B, sFASL, Perforina, FGF-2, sICAM-1, sVCAM-1, VEGF, VEGF-C, VEGF-D, PLGF, IL1Rα, IL1Rβ, e/ou Ferritina.

[098]Em algumas modalidades, os níveis de quimiocina, citocina e/ou efetor imune são determinados com o uso de um ensaio multiplex.

[099]Em um aspecto, a presente invenção fornece uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e um agonista de 4-1BB (CD137) para uso em um método para tratar linfoma difuso de células B grandes refratário após duas ou mais linhas de terapia sistêmica em um paciente que precisa do mesmo que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137) ; e (c) monitorar o soro de paciente após a administração acerca de níveis de quimiocina, citocina e/ou efetor imune.

[0100]Em um aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar linfoma difuso de células B grandes refratário em um paciente que precisa do mesmo que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c) analisar a resposta do paciente após a administração acerca da regressão [resposta completa (CR) ou resposta parcial (PR)], refratária ao tratamento [doença progressiva (PD)], recidiva ou persistente sem evidência de progressão ou regressão completa [PR prolongada ou doença estável (SD)].

[0101]Em um aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar linfoma difuso de células B grandes refratário após duas ou mais linhas de terapia sistêmica em um paciente que precisa do mesmo que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c) analisar a resposta do paciente após a administração acerca da regressão [resposta completa (CR) ou resposta parcial (PR)], refratária ao tratamento [doença progressiva (PD)], recidiva ou persistente sem evidência de progressão ou regressão completa [PR prolongada ou doença estável (SD)].

[0102]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é uma imunoterapia autóloga.

[0103]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é um imunoterapia alogênica.

[0104]Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas ex vivo.

[0105]Em algumas modalidades, as células T são geneticamente modificadas por transdução retroviral.

[0106]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19, é geneticamente modificada para expressar um receptor de antígeno quimérico (CAR), sendo que o dito CAR compreende um fragmento variável de cadeia única anti-CD19 (scFv) ligado a domínios co-estimulatórios CD28 e CD3-zeta.

[0107]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é axicabtageno ciloleucel.

[0108]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é uma molécula de ligação a antígeno ou fragmento da mesma.

[0109]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende três CDRs de uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e três

CDRS de uma sequência de aminoácidos de região VL apresentada em SEQ ID NO: 3.

[0110]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado ou porção de ligação a antígeno do mesmo que compreende: (a) uma H-CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:5; (b) uma H-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:6; (c) uma H-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:7; (d) uma L- CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:8; (e) uma L-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:9; e (f) uma L-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:10.

[0111]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137)) é um anticorpo monoclonal completamente humano.

[0112]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) compreende uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e uma sequência de aminoácidos de região VL conforme apresentado em SEQ ID NO: 3.

[0113]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) compreende uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada conforme apresentado em SEQ ID NO:2 e uma sequência de aminoácidos de cadeia leve conforme apresentado em SEQ ID NO:4, com a condição de que o resíduo de lisina C-terminal de SEQ ID NO:2 esteja opcionalmente ausente.

[0114]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é utomilumabe.

[0115]Em algumas modalidades, a análise da resposta do paciente após a administração acerca da regressão [resposta completa (CR) ou resposta parcial (PR)], refratária ao tratamento [doença progressiva (PD)], recidiva ou persistente sem evidência de progressão ou regressão completa [PR prolongada ou doença estável (SD)] compreende monitorar marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente que compreende um marcador de célula pan-T, marcador de célula T citotóxica, marcador de célula T de diferenciação, marcador de diferenciação, receptor de IL-2, marcador de ativação, PD1, 4-1BB, marcador de célula T auxiliar, marcador de granulócito, marcador de célula B, marcador de monócito/macrófago, marcador de célula NK e/ou identificação de axicabtageno ciloleucel.

[0116]Em algumas modalidades, os marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente são monitorados por um painel que compreende anticorpos para CD3, CD8, CD45RA, CCR7, CD122, CD27, CD28, CD95 e/ou CD19 CAR.

[0117]Em algumas modalidades, os marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente são monitorados por um painel que compreende anticorpos para CD3, CD8, CD45RA, CCR7, CD57, CD107α, CD279 e/ou CD19 CAR.

[0118]Em algumas modalidades, os marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente são monitorados por um painel que compreende anticorpos para CD3, CD8, CD45RA, CCR7, CD25, CD69, CD137 e/ou CD19 CAR.

[0119]Em algumas modalidades, os marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente são monitorados por um painel que compreende anticorpos para CD3, CD4, CD8, CD66b, CD19, CD14, CD56 e/ou CD19 CAR.

[0120]Em algumas modalidades, os marcadores são determinados por um ensaio de citometria de fluxo.

[0121]Em algumas modalidades, o soro de paciente é monitorado acerca de IL- 15, IL-7, IL-2, IL-6, IL1α, IL-1β, IL-17α, TNFα, TNFβ, GM-CSF, CRP, SAA, IL-13, IL-4, IL- 5, IL-10, IFNγ, IL-12p40, IL-12p70, IL-16, IL-8, MCP-1, MCP-4, MIP-1α, MIP-1β, IP-10, TARC, Eotaxina, Eotaxina-3, MDC, Granzima A, Granzima B, sFASL, Perforina, FGF-2, sICAM-1, sVCAM-1, VEGF, VEGF-C, VEGF-D, PLGF, IL1Rα, IL1Rβ, e/ou Ferritina.

[0122]Em algumas modalidades, os níveis de quimiocina, citocina e/ou efetor imune são determinados com o uso de um ensaio multiplex.

[0123]Em um aspecto, a presente invenção fornece uma imunoterapia de célula

T geneticamente modificada dirigida a CD19 e um agonista de 4-1BB (CD137) para uso em um método para tratar linfoma difuso de células B grandes refratário após duas ou mais linhas de terapia sistêmica em um paciente que precisa do mesmo que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c) analisar a resposta do paciente após a administração acerca da resposta completa (CR), resposta parcial (PR), doença estável (SD) ou doença progressiva (PD).

[0124]A presente invenção fornece também uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e um agonista de 4-1BB (CD137) para uso nos métodos de tratamento revelados; e também o uso de uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e um agonista de 4-1BB (CD137) na fabricação de um medicamento para uso nos métodos de tratamento revelados.

[0125]Outros recursos e vantagens da revelação ficarão evidentes a partir da seguinte descrição detalhada, que inclui os Exemplos e as reivindicações.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

[0126]Os desenhos são para propósitos de ilustração apenas, não para limitação.

[0127]A Figura 1 ilustra o projeto de estudo que avalia a segurança e a eficácia de KTE-C19 (axicabtageno ciloleucel) em combinação com utomilumabe em sujeitos com linfoma de células B grandes refratário ou linfoma difuso de células B grandes refratário (DLBCL).

[0128]A Figura 2A a 2C representa a relação entre níveis de CAR anti-CD19 no sangue durante os primeiros 28 dias após a infusão (AUC0-28) com A. taxa de resposta objetiva (ORR) (remissão completa (CR) ou remissão parcial (PR)), B. (NE), e desenvolvimento de toxicidade neurológica de Grau ≥3 ou C. síndrome de liberação de citocinas (CRS). A Figura 3 mostra resultados de quimioterapia de linfodepleção e indução de CAR T anti-CD19 de programas imunológicos principais durante os primeiros 28 dias após a infusão. Os analitos mostrados foram elevados em ≥50% de pacientes com indução ≥2 vezes acima da linha de base de um painel de 44 medidos. Os analitos séricos foram medidos com MSD®, Luminex® e Quantikine® ELISA. CRP, proteína C- reativa; GM-CSF, fator estimulante de colônia de granulócito-macrófago; IFN, interferon; IL, interleucina; MCP-1, proteína quimiotática para monócitos 1; SAA, amiloide sérica A.

[0129]A Figura 4 representa biomarcadores associados tanto a CRS grau ≥3 como à toxicidade neurológica de grau ≥3. A associação entre níveis de pico de analitos séricos e a associação com CRS ou toxicidade neurológica de grau ≥3 são mostradas.

Os níveis de pico após a infusão de Axi-cel™ foram usados na comparação. AUC, área sob a curva; CRS, síndrome de liberação de citocinas; IFN, interferon; IL, interleucina, MCP, proteína quimiotática para monócitos; NE, eventos neurológicos.

[0130]A Figura 5A a 5H Células T CAR Anti-CD19 demonstram a polifuncionalidade ampla em cocultura com células de tumor CD19+. A-D. Citocinas: A.

IL-2, B. IL-4, C. Granzima B, D. IFNγ, E-H. Marcadores de superfície: E. CD69, F.

CD107α, G. CD137, H. PD1.

[0131]A Figura 6 mostra uma programação de coleta de biópsia proposta para possibilitar a análise de amostras que abrange quatro categorias gerais de resposta: 1) regressão [resposta completa (CR) ou resposta parcial (PR)], 2) refratária ao tratamento [doença progressiva (PD)], 3) recidiva ou 4) persistente sem evidência de progressão ou regressão completa [PR prolongada ou doença estável (SD)].

[0132]A Figura 7 ilustra uma programação de coleta de amostra de biomarcador exemplificadora. Axi-cel: axicabtageno ciloleucel; CAR: receptor de antígeno quimérico; ELISA: ensaio de imunossorvente ligado a enzima; qPCR: reação em cadeia de polimerase quantitativa.

[0133]A Figura 8 ilustra uma programação de coleta de biópsia pareada exemplificadora.

[0134]A Figura 9 ilustra esquemas de processamento de amostra para biópsias com agulha de núcleo.

[0135]A Figura 10 representa uma vista esquemática de marcadores e abordagens de análise para avaliar as amostras de biópsia de paciente.

[0136]A Figura 11 mostra a sequência de anticorpo (Cadeia pesada: SEQ ID NO: 2, Cadeia leve: SEQ ID NO: 4) e recursos estruturais de utomilumabe.

[0137]A Figura 12 representa o mecanismo de ação de utomilumabe.

[0138]A Figura 13 ilustra um outro projeto de estudo que avalia a segurança e a eficácia de KTE-C19 (axicabtageno ciloleucel) em combinação com utomilumabe em sujeitos com linfoma de células B grandes refratário ou linfoma difuso de células B grandes refratário (DLBCL).

[0139]A Figura 14A a 14B. A produção de IL-2 pelas células T CAR anti-CD19.

As células foram incubadas com o anticorpo de ferramenta (0,33 μg/ml) na presença do anticorpo de controle (A) ou Utomilumabe (B) durante 16 horas. O primeiro ponto de dados no eixo geométrico X representa o anticorpo de ferramenta sozinho. Os dados representam a média de poços em triplicata.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0140]A presente invenção se refere a um método para tratar uma doença ou distúrbio em um paciente que compreende administrar axicabtageno ciloleucel (KTE- C19) em combinação com utomilumabe (PF-05082566) um anticorpo monoclonal de IgG2 completamente humano de agonista de 4-1BB (CD137). Axicabtageno ciloleucel é uma suspensão de células de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 que compreende as próprias células T do paciente coletadas e geneticamente modificadas ex vivo por meio de transdução retroviral para expressar um receptor de antígeno quimérico (CAR) que compreende um fragmento variável de cadeia única anti-CD19 FMC63 (scFv) ligado a domínios co-estimulatórios de CD28 e CD3-zeta. Consultar, por exemplo, Neelapu et al., Clin. Adv. Hem. Onc., Vol. 15, Edição 2 (2017). Em algumas modalidades, a doença ou distúrbio é linfoma, como linfoma difuso de células B grandes refratário (DLBCL) ou leucemia, como leucemia linfoide aguda (ALL).

[0141]Para preparar a imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19, as próprias células T de um paciente podem ser coletadas e geneticamente modificadas ex vivo por meio de transdução retroviral para expressar um receptor de antígeno quimérico (CAR) que compreende um fragmento variável de cadeia única anti-CD19 de murino (scFv) ligado a domínios co-estimulatórios de CD28 e CD3- zeta. Em algumas modalidades, o CAR compreende um fragmento variável de cadeia única anti-CD19 de murino (scFv) ligado a domínio co-estimulatório de CD3-zeta e 4- 1BB. As células T CAR anti-CD19 podem ser expandidas e infundidas de volta no paciente, onde reconhecem e eliminam as células-alvo que expressam CD19.

YESCARTATM (Axi-celTM; axicabtageno ciloleucel) é um exemplo de tal imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19. Consultar Kochenderfer, et al., (J Immunother 2009;32:689 a 702). As terapias de CAR dirigidas a CD19 adicionais incluem JCAR017, JCAR015, JCAR014, Kymriah (tisagenlecleucel). Consultar Sadelain et al., Nature Rev. Cancer Vol. 3 (2003), Ruella et al., Curr Hematol Malig Rep., Springer, NY (2016) e Sadelain et al. Cancer Discovery (abril de 2013).

[0142]A imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 pode ser preparada a partir das células mononucleares de sangue periférico do paciente, que são tipicamente obtidas através de um procedimento de leucaferese padrão. As células mononucleares podem ser enriquecidas para células T e ativadas com anticorpo anti-CD3 na presença de IL-2, então, transduzidas com o vetor retroviral incompetente de replicação que contém o transgene de CAR anti-CD19. As células T transduzidas podem ser expandidas em cultura celular, lavadas, formuladas em uma suspensão e/ou criopreservadas. Tipicamente, o produto que compreende células T autólogas geneticamente modificadas precisa passar por um teste de esterilidade antes da liberação para o transporte como uma suspensão congelada em um recipiente de infusão específico para paciente como uma bolsa de infusão. Tipicamente, o produto é descongelado antes da infusão.

[0143]Além de células T, a imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 pode conter células NK e NK-T. Em algumas modalidades, a formulação de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 contém cerca de 5% de dimetilsulfóxido (DMSO) e cerca de 2,5% de albumina (humana) (v/v).

[0144]As células T alogênicas e/ou autólogas geneticamente modificadas dirigidas a CD19 podem se ligar a células de câncer que expressam CD19 e células B normais. Certos estudos têm demonstrado que, após o engate de célula T CAR anti- CD19 com as células-alvo que expressam CD19, os domínios co-estimulatórios de CD28 e de ativação de CD3-zeta disparam as cascatas de sinalização a jusante que levam à ativação de célula T, proliferação, aquisição de funções efetoras e secreção de quimiocinas e citocinas inflamatórias. Essa sequência de eventos levam ao extermínio de células que expressam CD19.

[0145]A molécula de ligação ao antígeno ou fragmento da mesma que se liga a 4-1BB e é adequada para a presente invenção é um anticorpo 4-1BB. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo de agonista de 4-1BB. Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende três CDRs de uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e três CDRS de uma sequência de aminoácidos de região VL apresentada em SEQ ID NO: 3. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga a 4-1BB humano. Em algumas modalidades, o anticorpo de 4-1BB compreende (a) uma H-CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:5; (b) uma H-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:6; (c) uma H-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:7; (d) uma L-CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:8; (e) uma L-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:9; e (f) uma L-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:10. Em algumas modalidades, o anticorpo de CD137 (4-1BB) compreende (1) uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1, e (2) uma sequência de aminoácidos de região VL conforme apresentado em SEQ ID NO:3. Em algumas modalidades, o anticorpo de 4-1BB compreende uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada conforme apresentado em SEQ ID NO:2 e uma sequência de aminoácidos de cadeia leve conforme apresentado em SEQ ID NO:4, com a condição de que o resíduo de lisina C-terminal da SEQ ID NO:2 esteja opcionalmente ausente. Em algumas modalidades, o anticorpo de 4-1BB é um anticorpo monoclonal completamente humano. Utomilumabe é um exemplo de anticorpo monoclonal completamente humano que se liga a 4-1BB humano.

[0146]O agonismo de 4-1BB em células T CAR anti-CD19 manipuladas pode intensificar a atividade antitumoral de axicabtageno ciloleucel através dos seguintes mecanismos: (1) aumento da viabilidade de células T CAR anti-CD19 através da regulação de modo crescente de proteínas anti-apoptóticas, (2) intensificação de proliferação e expansão de célula T CAR anti-CD19 e (3) contribuição para a resposta imunológica de célula T.

DEFINIÇÕES

[0147]De modo que a presente invenção possa ser mais prontamente entendida, certos termos são em primeiro lugar definidos abaixo. As definições adicionais para os termos a seguir e outros termos são apresentadas ao longo do relatório descritivo.

[0148]Conforme usado neste relatório descritivo e nas reivindicações anexas, as formas singulares “um”, “uma, “o” e “a” incluem os referentes no plural, a menos que o contexto indique claramente de outro modo.

[0149]Exceto onde especificamente declarado ou óbvio a partir do contexto, conforme usado no presente documento, o termo “ou” é entendido como sendo inclusivo e abrange tanto “ou” como “e”.

[0150]O termo “e/ou", quando usado no presente documento, deve ser tomado como revelação específica de cada um dentre dois recursos ou componentes especificados com ou sem o outro. Dessa forma, o termo “e/ou”, conforme usado em uma frase como “A e/ou B” no presente documento, destina-se a incluir A e B; A ou B; A (sozinho); e B (sozinho). De modo semelhante, o termo “e/ou”, como usado em uma frase como “A, B e/ou C”, destina-se a abranger cada um dentre os seguintes aspectos: A, B e C; A, B ou C; A ou C; A ou B; B ou C; A e C; A e B; B e C; A (sozinho); B (sozinho); e C (sozinho).

[0151]Os termos “por exemplo” e “isto é”, conforme usado no presente documento, são usados meramente a título de exemplo, sem limitação pretendida, e não devem ser interpretados como se referindo apenas àqueles itens explicitamente enumerados no relatório descritivo.

[0152]Os termos “ou mais”, “pelo menos”, “mais de” e similares, por exemplo, “pelo menos um” são entendidos como incluindo, porém sem limitação, pelo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28,

29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149 ou 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1.000, 2.000, 3.000, 4.000, 5.000 ou mais que o valor declarado. Também está incluído qualquer número ou fração maior entre os mesmos.

[0153]De modo contrário, o termo “não mais que” inclui cada valor menos o valor declarado. Por exemplo, “não mais que 100 nucleotídeos” inclui 100, 99, 98, 97, 96, 95, 94, 93, 92, 91, 90, 89, 88, 87, 86, 85, 84, 83, 82, 81, 80, 79, 78, 77, 76, 75, 74, 73, 72, 71, 70, 69, 68, 67, 66, 65, 64, 63, 62, 61, 60, 59, 58, 57, 56, 55, 54, 53, 52, 51, 50, 49, 48, 47, 46, 45, 44, 43, 42, 41, 40, 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 e 0 nucleotídeos.

Também está incluído qualquer número ou fração menor entre os mesmos.

[0154]Os termos “pluralidade”, “pelo menos dois”, “dois ou mais”, “pelo menos segundo” e similares são entendidos como incluindo, porém sem limitação, pelo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149 ou 150, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1.000, 2.000, 3.000, 4.000, 5.000 ou mais. Também está incluído qualquer número ou fração maior entre os mesmos.

[0155]Ao longo do relatório descritivo, a palavra “compreender, ou variações como “compreende” ou “compreendendo, serão entendidas como implicando a inclusão de um elemento, número inteiro ou etapa declarado, ou grupo de elementos, números inteiros ou etapas, mas não a exclusão de qualquer outro elemento, número inteiro ou etapa, ou grupo de elementos, números inteiros ou etapas. É entendido que onde quer que os aspectos sejam descritos no presente documento com a linguagem “compreender”, os aspectos de outro modo análogos descritos em termos de “consistindo em” e/ou “consistindo essencialmente em” também são fornecidos.

[0156]Exceto onde especificamente declarado ou evidente a partir do contexto, conforme usado no presente documento, o termo “cerca de” se refere a um valor ou composição que está dentro de uma faixa de erros aceitável para o valor ou composição particular, conforme determinado por um versado na técnica, que dependerá, em parte, de como o valor ou composição é medido ou determinado, isto é, as limitações do sistema de medição. Por exemplo, “cerca de” ou “aproximadamente” pode significar dentro de um ou mais de um desvio padrão por prática na técnica. “Cerca de” ou “aproximadamente” pode significar uma faixa de até 10% (isto é, ± 10%). Dessa forma, “cerca de” pode ser entendido como estando dentro de 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, 0,1%, 0,05%, 0,01% ou 0,001% maior ou menor que o valor declarado. Por exemplo, cerca de 5 mg podem incluir qualquer quantidade entre 4,5 mg e 5,5 mg. Adicionalmente, particularmente em relação a processos ou sistemas biológicos, os termos podem significar até uma ordem de magnitude ou até 5 vezes um valor. Quando composições ou valores particulares são fornecidos na presente revelação, exceto onde especificado em contrário, deve ser presumido que o significado de “cerca de” ou “aproximadamente” esteja dentro de uma faixa de erros aceitável para aquela composição ou valor particular.

[0157]Conforme descrito no presente documento, qualquer faixa de concentração, faixa de porcentagem, faixa de razão ou faixa de número inteiro deve ser entendida como sendo inclusiva do valor de qualquer número inteiro dentro da faixa citada e, quando for adequado, frações da mesma (como um décimo e um centésimo de um número inteiro), exceto onde indicado em contrário.

[0158]Unidades, prefixos e símbolos usados no presente documento são fornecidos com o uso da sua forma aceitável do Sistema Internacional de Unidades (SI).

As faixas numéricas são inclusivas dos números que definem as faixas.

[0159]Exceto onde definido em contrário, todos os termos técnicos e científicos usados no presente documento têm o mesmo significado conforme comumente entendido por uma pessoa com habilidade comum na técnica à qual esta revelação está relacionada. Por exemplo, Juo, “The Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology”, 2a edição, (2001), CRC Press; “The Dictionary of Cell & Molecular Biology”, 5 a edição, (2013), Academic Press; e “The Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology”, Cammack et al. eds., 2a edição, (2006), Oxford University Press, fornecem àqueles versados na técnica um dicionário geral para muitos dos termos usados nesta revelação.

[0160]“Administrar” se refere à introdução física de um agente a um sujeito, com o uso de qualquer um dentre os diversos métodos e sistemas de entrega conhecidos pelos versados na técnica. As vias de administração exemplificadoras para as formulações reveladas no presente documento incluem vias intravenosas, intramusculares, subcutâneas, intraperitoneais, espinhais ou outras vias de administração parenterais, por exemplo, por injeção ou infusão. A frase “administração parenteral”, conforme usado no presente documento, significa modos de administração além de administração entérica e tópica, normalmente por injeção, e inclui, sem limitação, infusão e injeção intravenosa, intramuscular, intra-arterial, intratecal, intralinfática, intralesional, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutânea, subcuticular, intra-articular, subcapsular, subaracnoide, intraespinhal, epidural e intrasternal, bem como eletroporação in vivo. Em algumas modalidades, a formulação é administrada através de uma via não parenteral, por exemplo, por via oral. Outras vias não parenterais incluem uma via de administração tópica, epidérmica ou mucosa, por exemplo, de modo intranasal, vaginal, retal, sublingual ou tópico. A administração também pode ser realizada, por exemplo, uma vez, uma pluralidade de vezes e/ou durante um ou mais períodos prolongados.

[0161]O termo “agonista” se refere a uma molécula de ligação a antígeno, conforme definido no presente documento, que mediante a ligação a 4-lBB, (1) estimula ou ativa 4-lBB, (2) intensifica, aumenta, promove, induz ou prolonga uma atividade, função ou presença de 4-lBB, ou (3) intensifica, aumenta, promove ou induz a expressão de 4-lBB.

[0162]O termo “anticorpo” (Ab) inclui, sem limitação, uma imunoglobulina de glicoproteína que se liga especificamente a um antígeno. Em geral, um anticorpo pode compreender pelo menos duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) interconectadas por ligações de dissulfeto ou uma molécula de ligação ao antígeno das mesmas. Cada cadeia H compreende uma região variável de cadeia pesada (abreviada no presente documento como VH) e uma região constante de cadeia pesada. A região constante de cadeia pesada compreende três domínios constantes, CH1, CH2 e CH3.

Cada cadeia leve compreende uma região variável de cadeia leve (abreviada no presente documento como VL) e uma região constante de cadeia leve. A região constante de cadeia leve compreende um domínio constante, CL. As regiões VH e VL podem ser adicionalmente subdivididas em regiões de hipervariabilidade, as chamadas regiões determinantes de complementaridade (CDRs), intercaladas com regiões que estão mais conservadas, chamadas regiões framework (FR). Cada VH e VL compreende três CDRs e quatro FRs, dispostas a partir da terminação amino à terminação carbóxi na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 e FR4. As regiões variáveis das cadeias pesadas e leves contêm um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões constantes do Abs podem mediar a ligação da imunoglobulina a fatores ou tecidos hospedeiros, que incluem diversas células do sistema imunológico (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (C1q) do sistema complementar clássico.

[0163]Os anticorpos podem incluir, por exemplo, anticorpos monoclonais, anticorpos produzidos de modo recombinante, anticorpos monoespecíficos, anticorpos multiespecíficos (que incluem anticorpos biespecíficos), anticorpos humanos, anticorpos manipulados, anticorpos humanizados, anticorpos quiméricos, imunoglobulinas, anticorpos sintéticos, anticorpos tetraméricos que compreendem duas moléculas de cadeia pesada e duas moléculas de cadeia leve, um monômero de cadeia leve de anticorpo, um monômero de cadeia pesada de anticorpo, um dímero de cadeia leve de anticorpo, um dímero de cadeia pesada de anticorpo, um par de anticorpo de cadeia leve e anticorpo de cadeia pesada, intracorpos, fusões de anticorpo (às vezes denominadas no presente documento como “conjugados de anticorpo”), anticorpos heteroconjugados, anticorpos de domínio único, anticorpos monovalentes, anticorpos de cadeia única ou Fvs de cadeia única (scFv), anticorpos camelizados, affycorpos, fragmentos Fab, fragmentos F(ab’)2, Fvs ligados a dissulfeto (sdFv), anticorpos anti-idiotípicos (anti-Id) (que incluem, por exemplo, anticorpos anti-anti-Id), minicorpos, anticorpos de domínio, anticorpos sintéticos (às vezes denominados no presente documento como “miméticos de anticorpo”) e fragmentos de ligação a antígeno de qualquer um dos acima. Em algumas modalidades, os anticorpos descritos no presente documento se referem a populações de anticorpo policlonal.

[0164]Uma “molécula de ligação a antígeno”, “porção de ligação a antígeno” ou “fragmento de anticorpo” se refere a qualquer molécula que compreende as partes de ligação a antígeno (por exemplo, CDRs) do anticorpo a partir do qual a molécula é derivada. Uma molécula de ligação a antígeno pode incluir as regiões determinantes de complementaridade (CDRs) antigênicas. Os exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, mas não se limitam a, fragmentos Fab, Fab', F(ab')2 e Fv, dAb, anticorpos lineares, anticorpos scFv e anticorpos multiespecíficos a partir de moléculas de ligação a antígeno. Os pepticorpos (isto é, moléculas de fusão de Fc que compreendem domínios de ligação de peptídeo) são um outro exemplo de moléculas de ligação a antígeno adequadas. Em algumas modalidades, a molécula de ligação a antígeno se liga a um antígeno em uma célula de tumor. Em algumas modalidades, a molécula de ligação a antígeno se liga a um antígeno em uma célula envolvida em uma doença hiperproliferativa ou a um antígeno bacteriano ou viral. Em algumas modalidades, a molécula de ligação a antígeno se liga a CD19. Em algumas modalidades, a molécula de ligação a antígeno se liga a 4-1BB (CD137). Em modalidades adicionais, a molécula de ligação a antígeno é um fragmento de anticorpo que se liga especificamente ao antígeno, que inclui uma ou mais das regiões determinantes de complementaridade (CDRs) do mesmo. Em modalidades adicionais, a molécula de ligação a antígeno é um fragmento variável de cadeia única (scFv). Em algumas modalidades, a molécula de ligação a antígeno compreende ou consiste em avímeros.

[0165]Um “antígeno” se refere a qualquer molécula que provoca uma resposta imunológica ou tem capacidade para ser ligado por um anticorpo ou uma molécula de ligação a antígeno. A resposta imunológica pode envolver produção de anticorpos ou a ativação de células imunologicamente competentes específicas, ou ambas. Um versado na técnica iria compreender prontamente que qualquer macromolécula, que inclui virtualmente todas as proteínas ou peptídeos, pode servir como um antígeno. Um antígeno pode ser expresso de modo endógeno, isto é, expresso por DNA genômico, ou pode ser expresso de forma recombinante. Um antígeno pode ser específico para um certo tecido, como uma célula de câncer, ou pode ser amplamente expresso. Além disso, os fragmentos de moléculas maiores podem agir como antígenos. Em algumas modalidades, os antígenos são antígenos de tumor.

[0166]O termo “derivado de anticorpo” ou “derivado” de um anticorpo se refere a uma molécula que tem capacidade para se ligar ao mesmo antígeno (por exemplo, 4- 1BB) ao qual o anticorpo se liga e compreende uma sequência de aminoácidos do anticorpo ligado a uma entidade molecular adicional. A sequência de aminoácidos do anticorpo que está contida no derivado de anticorpo pode ser uma cadeia pesada de comprimento completo, uma cadeia leve de comprimento completo, qualquer porção ou porções de uma cadeia pesada de comprimento completo, qualquer porção ou porções da cadeia leve de comprimento completo do anticorpo, qualquer outro fragmento (ou fragmentos) de um anticorpo ou o anticorpo completo. A entidade molecular adicional pode ser uma molécula química ou biológica. Os exemplos de entidades moleculares adicionais incluem grupos químicos, aminoácidos, peptídeos, proteínas (como enzimas, anticorpos) e compostos químicos. A entidade molecular adicional pode ter qualquer utilidade, como para uso como um agente de detecção, identificação, marcador, agente farmacêutico ou terapêutico. A sequência de aminoácidos de um anticorpo pode ser fixada ou ligada à entidade molecular adicional por meio de acoplamento químico, fusão genética, associação não covalente ou de outro modo. O termo “derivado de anticorpo” também abrange anticorpos quiméricos, anticorpos humanizados e moléculas que são derivadas de modificações das sequências de aminoácidos de um anticorpo 4-1BB, como substituições, adições e inserções de aminoácidos de conservação.

[0167]O termo “anticorpo humano” se refere a anticorpos que têm regiões variáveis e constantes (se presentes) derivadas de sequências de imunoglobulina de linha germinativa humana. Os anticorpos humanos da presente invenção podem incluir resíduos de aminoácidos não codificados por sequências de linha germinativa humana (por exemplo, mutações introduzidas por mutagênese aleatória ou sítio-específica in vitro ou por mutação somática in vivo). O termo “anticorpo humano” não se destina a incluir anticorpos quiméricos ou humanizados que compreendem resíduos de ligação ao antígeno não humano.

[0168]“Imunoterapia de células T autólogas geneticamente modificadas dirigidas a CD19” se refere a uma suspensão de células T positivas para receptor de antígeno quimérico (CAR). Um exemplo de tal imunoterapia é axicabtageno ciloleucel (também conhecido como Axi-cel™, YESCARTA™), desenvolvido pela Kite Pharmaceuticals, Inc.

[0169]O termo “neutralizar” se refere a uma molécula de ligação a antígeno, scFv, anticorpo ou um fragmento do mesmo que se liga a um ligante e impede ou reduz o efeito biológico desse ligante. Em algumas modalidades, a molécula de ligação a antígeno, scFv, anticorpo ou um fragmento do mesmo, bloqueia diretamente um sítio de ligação no ligante ou de outro modo altera a capacidade do ligante de se ligar através de meios indiretos (como alterações estruturais ou energéticas no ligante). Em algumas modalidades, a molécula de ligação a antígeno, scFv, anticorpo ou um fragmento do mesmo impede que a proteína à qual está ligada desempenhe uma função biológica.

[0170]O termo “anticorpo monoclonal” se refere a um anticorpo obtido a partir de uma população de anticorpos substancialmente homogêneos, isto é, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos exceto pelas mutações de ocorrência natural possíveis que podem estar presentes em quantidades menores. Os anticorpos monoclonais são altamente específicos, sendo diretamente contra a um sítio antigênico único. Adicionalmente, em contraste com as preparações de anticorpo policlonal que incluem anticorpos diferentes dirigidos contra determinantes diferentes (epítopos), cada anticorpo monoclonal é dirigido contra um único determinante no antígeno. Em adição à sua especificidade, os anticorpos monoclonais são vantajosos pelo fato de que podem ser sintetizados não contaminadas por outros anticorpos. O modificador “monoclonal” não deve ser interpretado como exigindo a produção do anticorpo por meio de qualquer método particular. Por exemplo, os anticorpos monoclonais podem ser preparados pela metodologia de hibridoma ou podem ser produzidos com o uso de métodos de DNA recombinante em células de planta, animal eucariótico ou bacterianas (consulte, por exemplo, a patente n° 4.816.567). Os anticorpos monoclonais também podem ser isolados a partir de bibliotecas de anticorpos de fago com o uso das técnicas descritas em Clackson et al., Nature, 352: 624 a 628 (1991) e Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 a 597 (1991), por exemplo.

[0171]O termo “autólogo” se refere a qualquer material derivado do mesmo indivíduo ao qual deve ser posteriormente introduzido novamente. Por exemplo, o método de terapia celular autóloga manipulada (eACT™) descrito no presente documento envolve a coleta de linfócitos a partir de um paciente, que são então manipulados para expressar, por exemplo, um construto de CAR e, então, administrados de volta ao mesmo paciente.

[0172]O termo “alogênico” se refere a qualquer material derivado de um indivíduo que é, então, introduzido em outro indivíduo da mesma espécie, por exemplo, transplante alogênico de células T.

[0173]Os termos “transdução” e “transduzido” se referem ao processo pelo qual o DNA estranho é introduzido em uma célula através de vetor viral (consulte Jones et al., “Genetics: principles and analysis,” Boston: Jones & Bartlett Publ. (1998)). Em algumas modalidades, o vetor é um vetor retroviral, um vetor de DNA, um vetor de RNA, um vetor adenoviral, um vetor baculoviral, um vetor viral de Epstein Barr, um vetor papovaviral, um vetor viral de vaccinia, um vetor viral de herpes simplex, um vetor associado a adenovírus, um vetor lentiviral ou qualquer combinação dos mesmos.

[0174]Um “câncer” se refere a um grupo amplo de várias doenças caracterizadas pelo crescimento descontrolado de células anormais no corpo. O crescimento e a divisão celular não regulada resultam na formação de tumores malignos que invadem os tecidos vizinhos e também podem sofrer metástases para partes distantes do corpo através do sistema linfático ou da corrente sanguínea. Um “câncer” ou “tecido de câncer” pode incluir um tumor. Os exemplos de cânceres que podem ser tratados pelos métodos revelados no presente documento incluem, mas não estão limitados a, cânceres do sistema imunológico, incluindo linfoma, leucemia, mieloma e outras malignidades de leucócitos.

Em algumas modalidades, os métodos revelados no presente documento podem ser usados para reduzir o tamanho de tumor de um tumor derivado de, por exemplo, câncer ósseo, câncer pancreático, câncer de pele, câncer da cabeça ou pescoço, melanoma maligno cutâneo ou intraocular, câncer uterino, câncer de ovário, câncer retal, câncer da região anal, câncer de estômago, câncer testicular, câncer uterino, carcinoma das trompas de falópio, carcinoma do endométrio, carcinoma do colo do útero, carcinoma da vagina, carcinoma da vulva, mieloma múltiplo, doença de Hodgkin, linfoma não Hodgkin (NHL), linfoma primário de células B grandes mediastinais (PMBC), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma folicular (FL), linfoma folicular transformado, linfoma esplênico da zona marginal (SMZL), câncer do esôfago, câncer do intestino delgado, câncer do sistema endócrino, câncer da glândula tireoide, câncer da glândula paratireoide, câncer da glândula adrenal, sarcoma de tecidos moles, câncer de uretra, câncer de pênis, leucemia crônica ou aguda, leucemia mieloide aguda, leucemia mieloide crônica, leucemia linfoblástica aguda (ALL) (incluindo ALL não de células T), leucemia linfocítica crônica (CLL), tumores sólidos da infância, linfoma linfocítico, câncer da bexiga, câncer de rim ou ureter, carcinoma da pelve renal, neoplasma do sistema nervoso central (SNC), linfoma primário do SNC, angiogênese tumoral, tumor no eixo espinhal, glioma de tronco cerebral, adenoma hipofisário, sarcoma de Kaposi, câncer epidermoide, câncer de células escamosas, linfoma de células T, cânceres induzidos ambientalmente, incluindo aqueles induzidos por amianto, outras malignidades de células B e combinações dos ditos cânceres. Em algumas modalidades, o câncer é mieloma múltiplo. O câncer particular pode ser responsivo à quimioterapia ou radioterapia ou o câncer pode ser refratário. Um câncer refratário se refere a um câncer que não é passível de intervenção cirúrgica e o câncer é inicialmente não responsivo à quimioterapia ou radioterapia ou o câncer se torna não responsivo ao longo do tempo.

[0175]Um “tumor”, conforme usado no presente documento, se refere a uma massa anormal de tecido que resulta quando as células se dividem mais do que deveriam ou não morrem quando deveriam. Os tumores podem ser benignos (não cancerígenos) ou malignos (câncer). Os tumores também são denominados de “neoplasmas”. Um “tumor sólido” é uma massa anormal de tecido que normalmente não contém cistos ou áreas líquidas. Os tumores sólidos podem ser benignos (não cancerígenos) ou malignos (câncer). Diferentes tipos de tumores sólidos são nomeados pelo tipo de células que os formam. Os exemplos de tumores sólidos são sarcomas e carcinomas. Por outro lado, os “tumores líquidos”, por exemplo, linfomas e leucemias (também denominados como câncer do sangue) geralmente não formam tumores sólidos.

[0176]Um “efeito antitumoral”, conforme usado no presente documento, se refere a um efeito biológico que pode apresentar uma diminuição no volume de tumor, uma diminuição no número de células de tumor, uma diminuição na proliferação de células de tumor, uma diminuição no número de metástases, um aumento na sobrevivência isenta de progressão ou global, um aumento na expectativa de vida ou melhora de vários sintomas fisiológicos associados ao tumor. Um efeito antitumoral também pode se referir à prevenção da ocorrência de um tumor, por exemplo, uma vacina.

[0177]Uma “citocina”, conforme usado no presente documento, se refere a uma proteína de não anticorpo que é liberada por uma célula em resposta ao contato com um antígeno específico, em que a citocina interage com uma segunda célula para mediar uma resposta na segunda célula. “Citocina”, conforme usado no presente documento, destina-se a referir às proteínas liberadas por uma população de células que agem em uma outra célula como mediadores intercelulares. Uma citocina pode ser expressa de modo endógeno por uma célula ou administrada a um sujeito. As citocinas podem ser liberadas por células imunes, incluindo macrófagos, células B, células T e mastócitos para propagar uma resposta imunológica. As citocinas podem induzir várias respostas na célula receptora. As citocinas podem incluir citocinas homeostáticas, quimiocinas, citocinas pró-inflamatórias, efetores e proteínas de fase aguda. Por exemplo, as citocinas homeostáticas, incluindo interleucina (IL) 7 e IL-15, promovem a sobrevivência e proliferação de células imunes, e as citocinas pró-inflamatórias podem promover uma resposta inflamatória. Os exemplos de citocinas homeostáticas incluem, mas não estão limitados a, IL-2, IL-4, IL-5, IL-7, IL-10, IL-12p40, IL-12p70, IL-15 e interferon (IFN) gama.

Os exemplos de citocinas pró-inflamatórias incluem, mas não estão limitados a, IL-1a, IL- 1b, IL-6, IL-13, IL-17a, fator de necrose tumoral (TNF) alfa, TNF-beta, fator de crescimento de fibroblastos (FGF) 2, fator estimulador de colônias de macrófagos de granulócitos (GM-CSF), molécula de adesão intercelular solúvel 1 (sICAM-1), molécula de adesão vascular solúvel 1 (sVCAM-1), fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), VEGF-C , VEGF-D e fator de crescimento placentário (PLGF). Os exemplos de efetores incluem, mas não estão limitados a, granzima A, granzima B, ligando Fas solúvel (sFasL) e perforina. Os exemplos de proteínas de fase aguda incluem, mas não estão limitados a, proteína C reativa (CRP) e amiloide sérico A (SAA).

[0178]“Quimocinas” são um tipo de citocina que medeia a quimiotaxia celular ou movimento direcional. Os exemplos de quimiocinas incluem, mas são estão limitados a, IL-8, IL-16, eotaxina, eotaxina-3, quimiocina derivada de macrófagos (MDC ou CCL22), proteína quimiotática 1 de monócitos (MCP-1 ou CCL2), MCP-4 , proteína inflamatória macrofágica 1α (MIP-1α, MIP-1a), MIP-1β (MIP-1b), proteína induzida por gama 10 (IP- 10) e quimiocina regulada por timo e ativação (TARC ou CCL17).

[0179]Uma “quantidade terapeuticamente eficaz”, “dose eficaz”, “quantidade eficaz” ou "dosagem terapeuticamente eficaz" de um agente terapêutico, por exemplo, células T CAR manipuladas, é qualquer quantidade que, quando usada sozinha ou em combinação com um outro agente terapêutico, protege um sujeito contra o surgimento de uma doença ou promove a regressão da doença evidenciada por uma diminuição na gravidade dos sintomas da doença, um aumento na frequência e duração de períodos isentos de sintomas da doença ou uma prevenção de comprometimento ou incapacidade devido à aflição da doença. A capacidade de um agente terapêutico para promover a regressão da doença pode ser avaliada com o uso de uma variedade de métodos conhecidos pelo profissional versado, como em seres humanos durante ensaios clínicos, em sistemas de modelo de animal preditivos de eficácia em seres humanos ou por meio da análise da atividade da agente em ensaios in vitro.

[0180]O termo “linfócito”, conforme usado no presente documento, inclui células natural killer (NK), células T ou células B. As células NK são um tipo de linfócito citotóxico

(tóxico para células) que representam um componente principal do sistema imunológico inerente. As células NK rejeitam tumores e células infectadas por vírus. As mesmas funcionam através do processo de apoptose ou morte celular programada. Foram chamadas de “natural killers" devido ao fato de que não exigem ativação para exterminar células. As células T desempenham um papel importante na imunidade mediada por células (sem envolvimento de anticorpo). Seus receptores de células T (TCRs) se diferenciam por si mesmos de outros tipos de linfócitos. O timo, um órgão especializado do sistema imunológico, é principalmente responsável pela maturação da célula T.

Existem seis tipos de células T, a saber: Células T auxiliares (por exemplo, células CD4+), células T citotóxicas (também conhecidas como TC, linfócitos T citotóxicos, CTL, célula T-killer, célula T citolítica, células T CD8+ ou célula T killer), Células T de memória ((i) as células-tronco TSCM de memória, como células virgens, são CD45RO-, CCR7+, CD45RA+, CD62L+ (L-selectina), CD27+, CD28+ e IL-7Rα+, mas também expressam grandes quantidades de CD95, IL-2Rβ, CXCR3 e LFA-1, e mostram inúmeros atributos funcionais distintos de células de memória); (ii) as células TCM de memória central expressam L-selectina e o CCR7, secretam IL-2, mas não IFNγ ou IL-4; e (iii) as células TEM efetoras de memória, no entanto, não expressam L-selectina ou CCR7, mas produzem citocinas efetoras como IFNγ e IL-4), células T reguladoras (Tregs, células T supressoras ou células T reguladoras CD4+ CD25+), células T Natural Killer (NKT) e células T Gama Delta. As células B, por outro lado, desempenham um papel principal na imunidade humoral (com envolvimento de anticorpos). Isso produz anticorpos e antígenos e desempenha o papel de células apresentadoras de antígenos (APCs) e se transforma em células B de memória após a ativação por meio da interação antigênica.

Nos mamíferos, as células B imaturas são formadas na medula óssea, de onde seu nome é derivado.

[0181]O termo “geneticamente modificado”, “geneticamente manipulado” ou “manipulado” se refere a um método para modificar o genoma de uma célula, incluindo, mas não se limitando a, deletar uma região de codificação ou não codificação ou uma porção da mesma ou inserir uma região de codificação ou uma porção da mesma. Em algumas modalidades, a célula que é modificada é um linfócito, por exemplo, uma célula T, que pode ser obtida a partir de um paciente ou um doador. A célula pode ser modificada para expressar um construto exógeno, como, por exemplo, um receptor de antígeno quimérico (CAR) ou um receptor de célula T (TCR), que é incorporado no genoma da célula.

[0182]Uma “resposta imunológica” se refere à ação de uma célula do sistema imunológico (por exemplo, linfócitos T, linfócitos B, células natural killer (NK), macrófagos, eosinófilos, mastócitos, células dendríticas e neutrófilos) e macromoléculas solúveis produzidas por qualquer uma dessas células ou pelo fígado (incluindo Abs, citocinas e complemento) que resulta no alvejamento seletivo, ligação a, dano a, destruição e/ou eliminação do corpo de um vertebrado de patógenos invasores, células ou tecidos infectados por patógenos, células cancerígenas ou outras células anormais ou, nos casos de autoimunidade ou inflamação patológica, células ou tecidos humanos normais.

[0183]O termo “se liga seletivamente” ou “se liga seletivamente a” ou “alvejamento seletivo” com referência à interação de uma molécula de ligação, conforme definido no presente documento, (por exemplo, um anticorpo) com seu parceiro de ligação (por exemplo, um antígeno), se refere à capacidade da molécula de ligação de discriminar entre um antígeno de interesse a partir de uma espécie animal (como 4-1BB humano) e um antígeno diferente a partir da mesma espécie animal (como CD40 humano) sob um determinado conjunto de condições. Diz-se que uma molécula de ligação de 4-1BB se liga seletivamente ao 4-1BB humano se se ligar ao 4-1BB humano em uma EC50 abaixo de 10 por cento da EC50 na qual se liga ao CD40 humano ou CD134 humano, conforme determinado em um ensaio in vitro.

[0184]O termo “imunoterapia” se refere ao tratamento de um sujeito afetado com ou em risco de contrair ou sofrer uma recorrência de uma doença por meio de um método que compreende induzir, intensificar, suprimir ou de outro modo modificar uma resposta imunológica. Os exemplos de imunoterapia incluem, mas não estão limitados a, terapias de células T. A terapia de células T pode incluir terapia de células T adotiva, imunoterapia de linfócito de infiltração de tumor (TIL), terapia de célula autóloga, terapia de célula autóloga manipulada (eACT™) e transplante de célula T alogênica. No entanto, um versado na técnica reconheceria que os métodos de condicionamento revelados no presente documento intensificariam a eficácia de qualquer terapia de célula T transplantada. Os exemplos de terapias de célula T são descritos nas Publicações de Patente n° U.S. 2014/0154228 e 2002/0006409, Patente n° U.S. 7.741.465, Patente n° U.S. 6.319.494, Patente n° U.S. 5.728.388 e Publicação PCT n° WO 2008/081035.

[0185]As células T da imunoterapia podem vir de qualquer fonte conhecida na técnica. Por exemplo, as células T podem ser diferenciadas in vitro a partir de uma população de células-tronco hematopoiéticas, ou as células T podem ser obtidas a partir de um sujeito. As células T podem ser obtidas, por exemplo, a partir de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs), medula óssea, tecido linfonodal, sangue do cordão umbilical, tecido do timo, tecido a partir de um sítio de infecção, ascites, derrame pleural, tecido do baço e tumores. Além disso, as células T podem ser derivadas a partir de uma ou mais linhagens de células T disponíveis na técnica. As células T também podem ser obtidas a partir de uma unidade de sangue coletada de um sujeito com o uso de qualquer número de técnicas conhecidas pelo versado na técnica, como separação e/ou aférese de FICOLL™. Os métodos adicionais para isolar células T para uma terapia de célula T são revelados na Publicação de Patente n° U.S. 2013/0287748, que está incorporada ao presente documento a título de referência em sua totalidade.

[0186]O termo “terapia de célula autóloga manipulada”, que pode ser abreviado como “eACT™”, também conhecido como transferência de células adotiva, é um processo pelo qual as células T do próprio paciente são coletadas e subsequentemente alteradas de forma genética para reconhecer e alvejar um ou mais antígenos expressos na superfície celular de uma ou mais células de tumor ou malignidades específicas. As células T podem ser manipuladas para expressar, por exemplo, receptores de antígeno quimérico (CAR). As células T (+) positivas para CAR são manipuladas para expressar um fragmento variável de cadeia única extracelular (scFv) com especificidade para um antígeno de tumor particular ligado a uma parte de sinalização intracelular que compreende pelo menos um domínio co-estimulatório e pelo menos um domínio de ativação. O CAR scFv pode ser projetado para alvejar, por exemplo, CD19, que é uma proteína transmembranar expressa por células na linhagem de células B, que inclui todas as células B normais e malignidades de célula B, que incluem, mas não estão limitadas a, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) não especificado de outro modo, linfoma de células B grandes mediastinal primário, linfoma de células B de alto grau e DLBCL que surge de linfoma folicular, NHL, CLL e ALL de não célula T. As terapias de célula T CAR e construtos exemplificadores são descritos na publicações de patente n° U.S.

2013/0287748, 2014/0227237, 2014/0099309 e 2014/0050708, e essas referências estão aqui incorporadas a título de referência em sua totalidade.

[0187]Um “paciente”, conforme usado no presente documento, inclui qualquer ser humano que é afetado com um câncer (por exemplo, um linfoma ou uma leucemia).

Os termos “sujeito” e “paciente” são usados de forma intercambiável no presente documento.

[0188]Conforme usado no presente documento, o termo “célula in vitro” se refere a qualquer célula que é cultivada ex vivo. Em particular, uma célula in vitro pode incluir uma célula T.

[0189]Os termos “peptídeo,” “polipeptídeo” e “proteína” são usados de forma intercambiável, e se referem a um composto compreendido de resíduos de aminoácidos ligados de modo covalente por ligações peptídicas. Uma proteína ou peptídeo contém pelo menos dois aminoácidos, e nenhuma limitação é colocada sobre o número máximo de aminoácidos que podem compreender uma sequência de peptídeos ou proteínas. Os polipeptídeos incluem qualquer peptídeo ou proteína que compreende dois ou mais aminoácidos unidos uns aos outros por ligações peptídicas. Conforme usado no presente documento, o termo se refere tanto a cadeias curtas, que também são comumente denominadas na técnica como peptídeos, oligopeptídeos e oligômeros, por exemplo, como a cadeias mais longas, que são, em geral, denominadas na técnica como proteínas, das quais existem muitos tipos. “Polipeptídeos” incluem, por exemplo, fragmentos biologicamente ativos, polipeptídeos substancialmente homólogos, oligopeptídeos, homodímeros, heterodímeros, variantes de polipeptídeos, polipeptídeos modificados, derivados, análogos, proteínas de fusão, entre outros. Os polipeptídeos incluem peptídeos naturais, peptídeos recombinantes, peptídeos sintéticos ou uma combinação dos mesmos.

[0190]“Estimulação”, conforme usado no presente documento, se refere a uma resposta primária induzida por meio da ligação de uma molécula estimulatória com seu ligante cognato, em que a ligação medeia um evento de transdução de sinal. Uma “molécula estimulatória” é uma molécula em uma célula T (por exemplo, o complexo de receptor de célula T (TCR)/CD3) que se liga especificamente a um ligante estimulatório cognato presente em uma célula apresentadora de antígeno. Um “ligante estimulatório”

é um ligante que quando presente em uma célula apresentadora de antígeno (por exemplo, um APC, uma célula dendrítica, uma célula B e similares) pode se ligar especificamente a uma molécula estimulatória em uma célula T, mediando assim uma resposta primária pela célula T, que inclui, mas não se limita a, ativação, iniciação de uma resposta imunológica, proliferação e similares. Os ligantes estimulatórios incluem, mas não se limitam a, um anticorpo anti-CD3, uma molécula MHC classe I carregada com um peptídeo, um anticorpo anti-CD2 superagonista e um anticorpo anti-CD28 superagonista.

[0191]Um “sinal co-estimulatório”, conforme usado no presente documento, se refere a um sinal, que em combinação com um sinal primário (Sinal 1), como ligação e/ou ativação de TCR/CD3, leva a uma resposta de célula T, como, porém sem limitação, proliferação e/ou regulação ascendente ou regulação descendente de moléculas principais.

[0192]Um “ligante co-estimulatório”, conforme usado no presente documento, inclui uma molécula em uma célula apresentadora de antígeno que se liga especificamente a uma molécula co-estimulatória cognata em uma célula T. A ligação do ligante co-estimulatório fornece um sinal que medeia uma resposta de célula T, que inclui, porém sem limitação, proliferação, ativação, diferenciação e similares. Um ligante co- estimulatório induz um sinal, isto é, em adição ao sinal primário fornecido por uma molécula estimulatória, por exemplo, por meio da ligação de um complexo de receptor de célula T (TCR)/CD3 com uma molécula de complexo de histocompatibilidade principal (MHC) carregada com peptídeo. Um ligante co-estimulatório pode incluir, porém sem limitação, 3/TR6, ligante, agonista ou anticorpo de 4-1BB que se liga todos dentre receptor de ligante, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), ligante de CD30, CD40, CD7, CD70, CD83, mediador de entrada de vírus da herpes (HVEM), antígeno de leucócito humano

G (HLA-G), ILT4, transcrição semelhante à imunoglobulina (ILT) 3, ligante co- estimulatório induzível (ICOS-L), molécula de adesão intercelular (ICAM), ligante que se liga especificamente a B7-H3, receptor beta de linfotoxina, proteína A relacionada à cadeia de MHC classe I (MICA), proteína B relacionada à cadeia de MHC classe I (MICB), ligante de OX40, PD-L2 ou morte programada (PD) L1. Um ligante co-estimulatório inclui, sem limitação, um anticorpo que se liga especificamente com uma molécula co- estimulatória presente em uma célula T, como, porém sem limitação, 4-1BB, B7-H3, CD2, CD27, CD28, CD30, CD40, CD7, ICOS, ligante que se liga especificamente com CD83, antígeno associado à função de linfócito 1 (LFA-1), receptor de célula natural killer C (NKG2C), OX40, PD-1 ou membro de superfamília de fator de necrose tumoral 14 (TNFSF14 ou LIGHT).

[0193]Uma “molécula co-estimulatória” tem capacidade para mediar uma resposta co-estimulatória pela célula T, como, porém sem limitação, proliferação. A co- estimulação é muitas vezes denominada de “Sinal 2”. As moléculas co-estimulatórias incluem, mas não se limitam a, 4-1BB/CD137, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD 33, CD 45, CD100 (SEMA4D), CD103, CD134, CD137, CD154, CD16, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD22, CD247, CD27, CD276 (B7-H3), CD28, CD29, CD3 (alfa; beta; delta; epsilon; gama; zeta), CD30, CD37, CD4, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD5, CD64, CD69, CD7, CD80, ligante CD83, CD84, CD86, CD8alfa, CD8beta, CD9, CD96 (Tático), CDl-la, CDl-lb, CDl-lc, CDl-ld, CDS, CEACAM1, CRT AM, DAP-10, DNAM1 (CD226), receptor gama Fc, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM- 1, ICAM-1, ICOS, Ig alfa (CD79a), IL2R beta, IL2R gama, IL7R alfa, integrina, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGBl, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, LIGHT, LIGHT (membro da superfamília de fator de necrose tumoral 14; TNFSF14), LTBR, Ly9 (CD229), antígeno associado à função de linfócito 1 (LFA-1

(CDl la/CD18), molécula MHC classe I, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX40, PAG/Cbp, PD-1, PSGL1, SELPLG (CD162), molécula de ativação linfocítica de sinalização, SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A; Lyl08), SLAMF7, SLP-76, TNF, TNFr, TNFR2, receptor de ligante Toll, TRANCE/RANKL, VLA1 ou VLA-6, ou fragmentos, truncamentos ou combinações dos mesmos.

[0194]Um “domínio co-estimulatório”, conforme usado no presente documento, se refere a toda ou uma porção (fragmento, truncamentos) ou combinações dos mesmos de uma molécula co-estimulatória manipulada em um CAR. Em algumas modalidades, um domínio co-estimulatório é derivado de 4-1BB/CD137, B7-H3, BAFFR, BLAME (SLAMF8), BTLA, CD 33, CD 45, CD100 (SEMA4D), CD103, CD134, CD137, CD154, CD16, CD160 (BY55), CD18, CD19, CD19a, CD2, CD22, CD247, CD27, CD276 (B7-H3), CD28, CD29, CD3 (alfa; beta; delta; epsilon; gama; zeta), CD30, CD37, CD4, CD4, CD40, CD49a, CD49D, CD49f, CD5, CD64, CD69, CD7, CD80, ligante de CD83, CD84, CD86, CD8alpha, CD8beta, CD9, CD96 (Tático), CDl-la, CDl-lb, CDl-lc, CDl-ld, CDS, CEACAM1, CRT AM, DAP-10, DNAM1 (CD226), Fc receptor gama, GADS, GITR, HVEM (LIGHTR), IA4, ICAM-1, ICAM-1, ICOS, Ig alfa (CD79a), IL2R beta, IL2R gama, IL7R alfa, integrina, ITGA4, ITGA4, ITGA6, ITGAD, ITGAE, ITGAL, ITGAM, ITGAX, ITGB2, ITGB7, ITGBl, KIRDS2, LAT, LFA-1, LFA-1, LIGHT, LIGHT (membro de superfamília de fator de necrose tumoral 14; TNFSF14), LTBR, Ly9 (CD229), antígeno associado à função de linfócito 1 (LFA-1 (CDl la/CD18), molécula MHC classe I, NKG2C, NKG2D, NKp30, NKp44, NKp46, NKp80 (KLRF1), OX40, PAG/Cbp, PD-1, PSGL1, SELPLG (CD162), molécula de ativação de linfócito de sinalização, SLAM (SLAMF1; CD150; IPO-3), SLAMF4 (CD244; 2B4), SLAMF6 (NTB-A; Lyl08), SLAMF7, SLP-76, TNF, TNFr, TNFR2, receptor de ligante Toll, TRANCE/RANKL, VLA1, ou VLA-6, ou fragmentos, truncamentos ou combinações dos mesmos. Em algumas modalidades, um domínio co-estimulatório é derivado de CD28, 4-1BB, CD8, CD16, ICOS.

[0195]Os termos “reduzir” e “diminuir” são usados de forma intercambiável no presente documento e indicam qualquer alteração que é menor que o original. “Reduzir” e “diminuir” são termos relativos, que exige uma comparação entre pré e pós-medições.

“Reduzir” e “diminuir” incluem depleções completas.

[0196]“Tratamento” ou “tratar” um sujeito se refere a qualquer tipo de intervenção ou processo realizado no, ou a administração de um agente ativo a, sujeito com o objetivo de reverter, aliviar, melhorar, inibir, desacelerar ou prevenir o início, progressão, desenvolvimento, gravidade ou recorrência de um sintoma, complicação ou condição, ou indícios bioquímicos associados a uma doença. Em algumas modalidades, “tratamento” ou “tratar” inclui uma remissão parcial. Em uma outra modalidade, “tratamento” ou “tratar” inclui uma remissão completa.

[0197]Os termos “anticorpo de 4-lBB”, “anticorpo de CD137” e “anticorpo de 4- 1BB (CD137)” são usados de forma intercambiável e se referem a um anticorpo, conforme definido no presente documento, com capacidade para se ligar ao receptor de 4-lBB (CD137) humano. Os termos “4-lBB” e “receptor de 4-lBB” são usados de forma intercambiável no presente pedido, e incluem o receptor de 4-lBB humano, bem como variantes, isoformas e homólogos de espécie dos mesmos. Consequentemente, uma molécula de ligação, conforme definido e revelado no presente documento, também pode se ligar a 4-lBB a partir de espécies diferentes da humana. Em outros casos, uma molécula de ligação pode ser completamente específica para o 4-1BB humano e pode não exibir espécies ou outros tipos de reatividade cruzada. Um exemplo de tal anticorpo de 4-1BB é utomilumabe (PF-05082566) desenvolvido por Pfizer Inc. Um outro exemplo de um anticorpo de 4-1BB é urelumabe (BMS-663513).

[0198]Conforme usado no presente documento, os vinte aminoácidos convencionais e suas abreviações seguem o uso convencional. Consultar Immunology— A Synthesis (2a Edição, E. S. Golub e D. R. Gren, Eds., Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991)).

[0199]Vários aspectos da revelação são descritos em detalhe adicional nas seguintes subseções.

Receptores de Antígeno Quiméricos

[0200]Os receptores de antígeno quiméricos (CARs ou CAR-Ts) são receptores geneticamente modificados. Esses receptores manipulados podem ser prontamente inseridos em e expressos por células imunes, que incluem células T de acordo com as técnicas conhecidas na técnica. Com um CAR, um único receptor pode ser programado para tanto reconhecer um antígeno específico como, quando ligado àquele antígeno, ativar a célula imune para atacar e destruir a célula que contém esse antígeno. Quando esses antígenos existem em células de tumor, uma célula imune que expressa o CAR pode alvejar e exterminar a célula de tumor.

Células T manipuladas e Uso

[0201]Uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 para o tratamento de pacientes com linfoma de células B grandes refratário ou recidivo após duas ou mais linhas de terapia sistêmica, que incluem linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) não especificado de outro modo, linfoma de células B grandes mediastinal primário, linfoma de células B de alto grau e DLBCL que surge de linfoma folicular é descrito na presente invenção. Em algumas modalidades, a imunoterapia dirigida a CD19 é autóloga. Em algumas modalidades, a imunoterapia dirigida a CD19 é alogênica. Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 é axicabtageno ciloleucel (Axi-cel™, YESCARTA™).

[0202]A célula da presente revelação pode ser obtida através de células T obtidas a partir de um sujeito. As células T podem ser obtidas, por exemplo, a partir de células mononucleares de sangue periférico, medula óssea, tecido linfonodal, sangue do cordão umbilical, tecido do timo, tecido a partir de um sítio de infecção, ascites, derrame pleural, tecido do baço e tumores. Além disso, as células T podem ser derivadas a partir de uma ou mais linhagens de células T disponíveis na técnica. As células T também podem ser obtidas a partir de uma unidade de sangue coletada de um sujeito com o uso de qualquer número de técnicas conhecidas pelo versado na técnica, como separação e/ou aférese de FICOLL™. Em algumas modalidades, as células coletadas por aférese são lavadas para remover a fração plasmática, e colocadas em um tampão ou meio adequado para o processamento subsequente. Em algumas modalidades, as células são lavadas com PBS. Conforme será observado, uma etapa de lavagem pode ser usada, como com o uso de um fluxo semiautomatizado através de centrífuga, por exemplo, o processador de célula CobeTM 2991, o Baxter CytoMateTM ou similares. Em algumas modalidades, as células lavadas são ressuspensas em um ou mais tampões biocompatíveis ou outra solução salina com ou sem tampão. Em algumas modalidades, os componentes indesejados da amostra de aférese são removidos. Os métodos adicionais para isolar células T para uma terapia de célula T são revelados na Publicação de Patente n° U.S.

2013/0287748, que está incorporado ao presente documento a título de referência, em sua totalidade.

[0203]Em algumas modalidades, as células T são isoladas a partir de PBMCs por meio da lise dos glóbulos vermelhos e depleção dos monócitos, por exemplo, com o uso de centrifugação através de um gradiente PERCOLL™. Em algumas modalidades, uma subpopulação específica de células T, como células T CD4+, CD8+, CD28+, CD45RA+ e CD45RO+ é adicionalmente isolada por técnicas de seleção positiva ou negativa conhecidas na técnica. Por exemplo, o enriquecimento de uma população de células T por seleção negativa pode ser realizado com uma combinação de anticorpos dirigidos a marcadores de superfície exclusivos das células selecionadas negativamente. Em algumas modalidades, a classificação e/ou seleção celular através de imunoaderência magnética negativa ou citometria de fluxo que usa um coquetel de anticorpos monoclonais dirigidos a marcadores de superfície celular presentes nas células selecionadas negativamente. Por exemplo, para enriquecer células CD4+ por meio de seleção negativa, um coquetel de anticorpo monoclonal inclui tipicamente anticorpos para CD8, CD11b, CD14, CD16, CD20 e HLA-DR. Em algumas modalidades, a citometria de fluxo e classificação de célula são usadas para isolar as populações de células de interesse para uso na presente revelação.

[0204]Em algumas modalidades, as PBMCs são usadas diretamente para a modificação genética com as células imunes (como CARs) com o uso de métodos conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, após o isolamento das PBMCs, os linfócitos T são adicionalmente isolados, e os linfócitos T tanto citotóxicos como auxiliares são classificados em subpopulações de células T efetoras, de memória e virgens antes ou após a expansão e/ou modificação genética.

[0205]Em algumas modalidades, as células CD8+ são adicionalmente classificadas em células efetoras, de memória central e virgens por meio da identificação de antígenos de superfície celular que estão associados a cada um desses tipos de células CD8+. Em algumas modalidades, a expressão de marcadores fenotípicos de células T de memória central inclui CCR7, CD3, CD28, CD45RO, CD62L e CD127 e é negativa para granzima B. Em algumas modalidades, as células T de memória central são células T CD8+, CD45RO+ e CD62L+. Em algumas modalidades, as células T efetoras são negativas para CCR7, CD28, CD62L e CD127 e positivas para granzima B e perforina. Em algumas modalidades, as células T CD4+ são adicionalmente classificadas em subpopulações. Por exemplo, as células auxiliares T CD4+ podem ser classificadas em células efetoras, de memória central e virgens por meio da identificação de populações de células que têm antígenos de superfície celular.

[0206]Uma sequência adequada para uso de acordo com a invenção pode ser encontrada no depósito GenBank n° HM852952.1 (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/305690546). Adicionalmente, os métodos para produzir e/ou fabricar células T que expressam receptores de antígeno quiméricos foram descritos, por exemplo, Publicação PCT n° WO2015120096, cujo conteúdo está incorporado ao presente documento a título de referência, em sua totalidade. Em algumas modalidades, as células imunes, por exemplo, células T, são geneticamente modificadas após o isolamento com o uso de métodos conhecidos, ou as células imunes são ativadas e expandidas (ou diferenciadas no caso de progenitores) in vitro antes de ser geneticamente modificadas. Em uma outra modalidade, as células imunes, por exemplo, células T, são geneticamente modificadas com os receptores de antígeno quiméricos descritos no presente documento (por exemplo, transduzidas com um vetor viral que compreende uma ou mais sequências de nucleotídeos que codificam um CAR) e, então, são ativadas e/ou expandidas in vitro. Os métodos adicionais para ativar e expandir células T são conhecidos na técnica e são descritos, por exemplo, nas patentes n° U.S. 6.905.874; 6.867.041; e 6.797.514; e publicação PCT n° WO 2012/079000, cujo conteúdo está incorporado ao presente documento a título de referência, em sua totalidade. Em geral, tais métodos incluem colocar PBMC ou células T isoladas em contato com um agente estimulatório e agente co-estimulatório, como anticorpos anti- CD3 e anti-CD28, em geral, fixadas a uma microesfera ou outra superfície, em um meio de cultura com citocinas adequadas, como IL-2. Os anticorpos anti-CD3 e anti-CD28 fixados à mesma microesfera servem como uma célula apresentadora de antígeno “substituta” (APC). Um exemplo é o sistema Dynabeads®, um sistema estimulador/ativador de CD3/CD28 para ativação fisiológica de células T humanas. Em outras modalidades, as células T são ativadas e estimuladas para proliferar com células alimentadoras e anticorpos e citocinas adequadas com o uso de métodos como aqueles descritos nas patentes n° U.S. 6.040.177 e 5.827.642 e publicação PCT n° WO 2012/129514, cujo conteúdo está incorporado ao presente documento a título de referência, em sua totalidade.

[0207]Em algumas modalidades, as células T são obtidas a partir de um sujeito doador. Em algumas modalidades, o sujeito doador é paciente humano afetado com um câncer ou um tumor. Em algumas modalidades, o sujeito doador é um paciente humano não afetado com um câncer ou um tumor.

[0208]Em algumas modalidades, a composição compreende um carreador, diluente, solubilizante, emulsificante, conservante e/ou adjuvante farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a composição compreende um excipiente.

[0209]Em algumas modalidades, a composição é selecionada para entrega parenteral, para inalação ou para entrega através do trato digestivo, como por via oral. A preparação de tais composições farmaceuticamente aceitáveis está dentro da habilidade de um versado na técnica. Em algumas modalidades, os tampões são usados para manter a composição em pH fisiológico ou em um pH ligeiramente mais baixo, tipicamente dentro de uma faixa de pH de cerca de 5 a cerca de 8. Em algumas modalidades, quando a administração parenteral é contemplada, a composição está na forma de uma solução aquosa parentalmente aceitável livre de pirogênios que compreende uma composição descrita no presente documento, com ou sem agentes terapêuticos adicionais, em um veículo farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, o veículo para injeção parenteral é água destilada estéril em que a composição descrita no presente documento, com ou sem pelo menos um agente terapêutico adicional, é formulada como uma solução isotônica estéril, adequadamente preservada. Em algumas modalidades, a preparação envolve a formulação da molécula desejada com compostos poliméricos (como ácido polilático ou ácido poliglicólico), microesferas ou lipossomas, que fornecem a liberação sustentada ou controlada do produto, que devem ser, então, entregues através de injeção de depósito. Em algumas modalidades, os dispositivos de entrega de fármaco implantáveis são usados para introduzir a molécula desejada.

[0210]Em algumas modalidades, os métodos para tratar um câncer em um sujeito que necessita do mesmo compreendem uma terapia de célula T. Em algumas modalidades, a terapia de célula T revelada no presente documento é Terapia de Célula Autóloga manipulada (eACT™). De acordo com essa modalidade, o método pode incluir coletar células sanguíneas do paciente. As células sanguíneas isoladas (por exemplo, células T) podem ser, então, manipuladas para expressar um CAR ou um TCR revelado no presente documento. Em uma modalidade particular, as células T CAR ou as células T TCR são administradas ao paciente. Em algumas modalidades, as células T CAR ou as células T TCR tratam um tumor ou um câncer no paciente. Em algumas modalidades, as células T CAR ou células T TCR reduzem o tamanho de um tumor ou um câncer.

[0211]Em algumas modalidades, as células T doadoras para uso na terapia de célula T são obtidas a partir do paciente (por exemplo, para uma terapia de célula T autóloga). Em outras modalidades, as células T doadoras para uso na terapia de célula T são obtidas a partir de um sujeito que não é o paciente. As células T podem ser administradas em uma quantidade terapeuticamente eficaz. Por exemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz das células T pode ser pelo menos cerca de 10 4 células, pelo menos cerca de 105 células, pelo menos cerca de 106 células, pelo menos cerca de 107 células, pelo menos cerca de 108 células, pelo menos cerca de 109 ou pelo menos cerca de 1010. Em uma outra modalidade, a quantidade terapeuticamente eficaz das células T é de cerca de 104 células, cerca de 105 células, cerca de 106 células, cerca de 107 células ou cerca de 108 células. Em algumas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz das células T CAR é de cerca de 2 X 10 6 células/kg, cerca de 3 X 106 células/kg, cerca de 4 X 106 células/kg, cerca de 5 X 106 células/kg, cerca de 6 X 106 células/kg, cerca de 7 X 106 células/kg, cerca de 8 X 106 células/kg, cerca de 9 X 106 células/kg, cerca de 1 X 107 células/kg, cerca de 2 X 107 células/kg, cerca de 3 X 107 células/kg, cerca de 4 X 107 células/kg, cerca de 5 X 107 células/kg, cerca de 6 X 107 células/kg, cerca de 7 X 107 células/kg, cerca de 8 X 107 células/kg ou cerca de 9 X 107 células/kg. Em algumas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz das células T viáveis positivas para CAR está entre cerca de 1 × 10 6 e cerca de 2 × 106 células T viáveis positivas para CAR por kg de peso corporal até uma dose máxima de cerca de 1 x 108 células T viáveis positivas para CAR.

Métodos de tratamento

[0212]Os métodos revelados no presente documento podem ser usados para tratar um câncer em um sujeito, reduzir o tamanho do tumor, exterminar células de tumor, prevenir a proliferação celular de tumor, prevenir o crescimento de um tumor, eliminar um tumor de um paciente, prevenir recidiva de um tumor, prevenir metástase de tumor, induzir a remissão em um paciente ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, os métodos induzem uma resposta completa. Em outras modalidades, os métodos induzem uma resposta parcial.

[0213]A presente invenção fornece também uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e um agonista de 4-1BB (CD137) para uso nos métodos de tratamento revelados; e também o uso de uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e um agonista de 4-1BB (CD137) na fabricação de um medicamento para uso nos métodos de tratamento revelados.

[0214]Os cânceres que podem ser tratados incluem tumores que não são vascularizados, não ainda substancialmente vascularizados ou vascularizados. O câncer também pode incluir tumores sólidos ou não sólidos. Em algumas modalidades, o câncer é um câncer hematológico. Em algumas modalidades, o câncer é dos glóbulos brancos.

Em outras modalidades, o câncer é das células plasmáticas. Em algumas modalidades, o câncer é leucemia, linfoma ou mieloma. Em algumas modalidades, o câncer é leucemia linfoide aguda (ALL) adulta e/ou pediátrica (que inclui ALL de não célula T), linfoma relacionado a AIDS, linfoma de células B grandes positivo para ALK, leucemia linfoide aguda (ALL) e linfoistiocitose hemofagocítica (HLH), leucemia polilinfocítica de célula B, leucemia linfoide aguda de célula B (“BALL”), neoplasma de célula dendrítica plasmacitoide blástica, linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia mieloide crônica (CML), leucemia mielogenosa crônica (CML), doença granulomatosa crônica ou aguda, leucemia crônica ou aguda, linfoma de Hodgkin clássico, linfoma de células B grandes difuso refratário, linfoma de células B grandes difuso (DLBCL), linfoma folicular, linfoma folicular (FL), leucemia de células cabeludas, síndrome hemofagocítica (Síndrome de Ativação de Macrófagos (MAS), Doença de Hodgkin, linfoma intravascular de células B grandes, granuloma de células grandes, linfoma de células B grandes que surge na doença de Castleman multicêntrica associada ao HHV8, granulomatose linfomatoide, Linfoma linfoplasmacítico, deficiência de adesão de leucócitos, condições linfoproliferativas malignas, linfoma de tecido linfático associado à mucosa (MALT), linfoma de células do manto (MCL), linfoma de zona marginal (MZL), gamapatia monoclonal de significado indeterminado (MGUS), mieloma múltiplo, mielodisplasia e síndrome mielodisplásica (MDS), doenças mieloides incluindo, porém sem limitação, leucemia mieloide aguda (AML), linfoma de células B de zona marginal nodal (NMZL), linfoma de Hodgkin predominante de linfócito nodular, linfoma não Hodgkin (NHL), distúrbios proliferativos de células plasmáticas (por exemplo, mieloma assintomático (mieloma múltiplo latente ou mieloma indolente), linfoma plasmablástico, neoplasma de célula dendrítica plasmocitoide, plasmacitomas (por exemplo, discrasia das células plasmáticas; mieloma solitário; plasmacitoma solitário; plasmacitoma extramedular; e plasmocitoma múltiplo), síndrome de POEMS (síndrome de Crow-Fukase; doença de Takatsuki; síndrome de PPE), linfoma primário do sistema nervoso central, linfoma de derrame primário, linfoma de células B grandes mediastinal primário (PMBCL), linfoma folicular de células pequenas ou células grandes, linfoma da zona marginal esplênica (SMZL), amiloidose de cadeia leve amiloide sistêmica, leucemia linfoide aguda de células T (“TALL”), linfoma de células T, linfoma folicular transformado, macroglobulinemia de Waldenstrom ou uma combinação dos mesmos.

[0215]Em algumas modalidades, o câncer é leucemia linfoide aguda (ALL), linfoma relacionado a AIDS, linfoma de células B grandes positivo para ALK, linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica crônica, CLL), linfoma de Hodgkin clássico, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma de células B grandes mediastinal primário (PMBCL), linfoma folicular, linfoma de células B grandes intravascular, linfoma de células B grandes que surgem em doença de Castleman multicêntrica associada a HHV8, granulomatose linfomatoide, linfoma linfoplasmocítico, linfoma de células do manto (MCL), linfoma de célula B de zona marginal (MZL), linfoma de tecido linfático associado à mucosa (MALT), Nodal linfoma de célula B de zona marginal (NMZL), linfoma de Hodgkin predominante de linfócito nodular, linfoma de não Hodgkin, linfoma plasmablástico, linfoma de sistema nervoso central primário, linfoma de efusão primário, linfoma de zona marginal esplênico

(SMZL) e macroglobulinemia de Waldenström, linfoma de células B grandes refratário ou recidivo, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) não especificado de outro modo, linfoma de células B de alto grau e DLBCL que surge de linfoma folicular.

[0216]Em algumas modalidades, o câncer é um mieloma. Em algumas modalidades, o câncer é mieloma múltiplo. Em algumas modalidades, o câncer é uma leucemia. Em algumas modalidades, o câncer é leucemia mieloide aguda.

[0217]As moléculas de ligação e composições farmacêuticas fornecidas pela presente revelação são úteis para propósitos terapêuticos, de diagnóstico ou outros propósitos, como intensificação de uma resposta imunológica, tratamento de câncer, intensificação da eficácia de terapias de combinação, intensificação da eficácia de vacina ou tratamento de doenças autoimunes. Em alguns aspectos, a presente revelação fornece um método para tratar um distúrbio em um mamífero, que compreende administrar ao ser humano que necessita de tratamento uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e um agonista de 4-1BB.

[0218]Em algumas modalidades, o distúrbio é um câncer. Uma variedade de cânceres em que 4-1BB é implicada, se malignos ou benignos e se primários ou secundários, pode ser tratada ou prevenida com um método fornecido pela revelação.

Os exemplos de tais câncer incluem cânceres de pulmão como carcinoma broncogênico (por exemplo, carcinoma de célula escamosa, carcinoma de célula pequena, carcinoma de célula grande e adenocarcinoma), carcinoma de célula alveolar, adenoma brônquico, hamartoma condromatoso (não canceroso) e sarcoma (canceroso); câncer do coração como mixoma, fibromas e rabdomiomas; cânceres ósseos como osteocondromas, condromas, condroblastomas, fibromas condromixoides, osteomas osteoides, tumores de células tumores de células gigantes, condrossarcoma, mieloma múltiplo,

osteossarcoma, fibrossarcomas, histiocitomas fibroso malignos, tumor de Ewing

(sarcoma de Ewing) e sarcoma de célula do retículo; câncer de cérebro como gliomas

(por exemplo, glioblastoma multiforme), astrocitomas anaplásticos, astrocitomas,

oligodendrogliomas, meduloblastomas, cordoma, Schwannomas, ependimomas,

meningiomas, adenoma pituitário, pinealoma, osteomas, hemangioblastomas,

craniofaringiomas, cordomas, germinomas, teratomas, cistos dermoides e angiomas;

cânceres em sistema digestivo como leiomioma, carcinoma epidermoide,

adenocarcinoma, leiomiossarcoma, adenocarcinomas de estômago, lipomas intestinais,

neurofibromas intestinais, fibromas intestinais, pólipos em intestino grosso e cânceres colorretais; cânceres de fígado como adenomas hepatocelular, hemangioma, carcinoma hepatocelular, carcinoma fibrolamelar, colangiocarcinoma, hepatoblastoma e angiossarcoma; cânceres de rim como adenocarcinoma de rim, carcinoma de célula renal, hipernefroma, e carcinoma de célula transicional da pélvis renal; cânceres de bexiga; cânceres hematológicas como leucemia linfocítica aguda (linfoblástica), leucemia mieloide aguda (mielocítica, mielogenosa, mieloblástica, mielomonocítica), leucemia linfocítica crônica (por exemplo, síndrome de Sezary e leucemia de células cabeludas),

leucemia mielocítica crônica (mieloide, mielogenosa, granulocítica), linfoma de Hodgkin,

linfoma não Hodgkin, linfoma de célula B, micose fungoide e distúrbios mieloproliferativos

(que incluem distúrbios mieloproliferativos como policitemia vera, mielofibrose,

trombocitemia e leucemia mielocítica crônica); cânceres de pele como carcinoma de célula basal, carcinoma de célula escamosa, melanoma, sarcoma de Kaposi e doença de Paget; cânceres de cabeça e pescoço; cânceres relacionados ao olho como retinoblastoma e melanocarcinoma intraocular; cânceres de sistema reprodutivo masculino como hiperplasia prostática benigna, câncer de próstata e cânceres testiculares (por exemplo, seminoma, teratoma, carcinoma embrionário e coriocarcinoma); câncer de mama; cânceres de sistema reprodutivo feminino como câncer uterino (carcinoma do endométrio), câncer cervical (carcinoma cervical), câncer dos ovários (carcinoma de ovário), carcinoma vulvar, carcinoma vaginal, câncer da trompa de falópio e mola hidatiforme; câncer de tiroide (que inclui câncer papilar, folicular, anaplástico ou medular); feocromocitomas (glândula adrenal); crescimentos não cancerosos das glândulas paratireoides; cânceres pancreáticos; e cânceres hematológicos como leucemias, mielomas, linfomas não Hodgkin e linfomas de Hodgkin.

[0219]Em algumas modalidades, os métodos compreende adicionalmente administrar um ou mais agentes quimioterápicos. Em algumas modalidades, o agente ou agentes quimioterápicos são quimioterápicos de linfodepleção (pré-condicionamento) selecionado. Os regimes de tratamento de pré-condicionamento benéficos são apresentados, por exemplo, na patente n° U.S. 9.855.298, juntamente com biomarcadores benéficos correlativos descritos no pedido de patente PCT n° PCT/US2016/034885, cujo conteúdo está incorporado ao presente documento a título de referência, em sua totalidade. Esses descrevem, por exemplo, métodos para condicionar um paciente que necessita de uma terapia de célula T que compreende administrar ao paciente doses benéficas especificadas de ciclofosfamida (CYTOXAN TM) (entre cerca de 200 mg/m2/dia e cerca de 2.000 mg/m2/dia) e doses especificadas de fludarabina (FLUDARATM) (entre cerca de 20 mg/m2/dia e cerca de 900 mg/m2/dia). Um tal regime de doses preferencial envolve tratar um paciente que compreende administrar diariamente ao paciente cerca de 500 a 600 mg/m 2/dia de ciclofosfamida e cerca de 30 mg/m 2/dia de fludarabina durante três dias antes da administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz de células T manipuladas ao paciente. As doses de célula preferenciais incluem, mas não se limitam a, 1 x 106 a cerca de 5 x 106 células T CAR manipuladas/kg.

[0220]Em algumas modalidades, a molécula de ligação a antígeno (como um agonista de 4-1BB (CD137)), células transduzidas (ou de outro modo manipuladas) (como CARs), e o agente quimioterápico são administrados, cada um, em uma quantidade eficaz para tratar a doença ou condição no sujeito.

[0221]Em algumas modalidades, as composições que compreende células imunes efetoras que expressam CAR reveladas no presente documento podem ser administradas em conjunto com qualquer número de agentes quimioterápicos. Os exemplos de agentes quimioterápicos incluem agentes alquilantes como tiotepa e ciclofosfamida ; sulfonatos de alquila como busulfano, improsulfano e piposulfano; aziridinas como benzodopa, carboquona, meturedopa e uredopa; etilenoiminas e metilamelaminas que incluem altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosfaoramida e síntese de trimetilolomelamina; mostardas de nitrogênio como clorambucil, clornafazina, colofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, cloridrato de óxido de mecloretamina, melfalano, novembicina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, uracil mostarda; nitrosureias como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina, ranimustina; antibióticos como aclacinomisinas, actinomicina, autramicina, azaserina, bleomicinas, cactinomicina, caliceamicina, carabicina, carminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorubicina, detorubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, doxorrubicina, epirubicina, esorubicina, idarubicina, marcelomicina, mitomicinas, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicinas, peplomicina, potfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; anti- metabólitos como metotrexato e 5-fluorouracil (5-FU); análogos de ácido fólico como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina como fludarabina, 6-mercaptopurina, tiamiprina, tioguanina; análogos de pirimidina como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, dideoxiuridina, doxifluridina,

enocitabina, floxuridina, 5-FU; andrógenos como calusterona, propionato de dromostanolona, epitiostanol, mepitiostano, testolactona; anti-adrenais como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; repositor de ácido fólico como ácido frolínico;

aceglatona; glicosídeo de aldofosfamida; ácido aminolevulínico; amsacrina; bestrabucil;

bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elformitina; acetato de eliptínio; etoglucida; nitrato de gálio; hidroxiureia; lentinana; lonidamina; mitoguazona;

mitoxantrona; mopidamol; nitracrina; pentostatina; fenamet; pirarubicina; ácido podofilínico; 2-etil hidrazida; procarbazina; PSK®; razoxana; sizofirano; espirogermânio;

ácido tenuazônico; triaziquona; 2, 2',2''-triclorotrietilamina; uretano; vindesina;

dacarbazina; mannomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina;

arabinosídeo (“Ara-C”); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides, por exemplo, paclitaxel

(TAXOLTM, Bristol-Myers Squibb) e doxetaxel (TAXOTERE®, Rhone-Poulenc Rorer);

clorambucil; gemcitabina; 6-tioguanina; mercaptopurina; metotrexato; análogos de platina como cisplatina e carboplatina; vinblastina; platina; etoposídeo (VP-16); ifosfamida;

mitomicina C; mitoxantrona; vincristina; vinorelbina; navelbina; novantrona; teniposídeo;

daunomicina; aminopterina; xeloda; ibandronato; CPT-11; inibidor de topoisomerase

RFS2000; difluorometilomitina (DMFO); derivados de ácido retinoico como Targretin TM

(bexaroteno), PanretinTM, (alitretinoina); ONTAKTM (denileukin diftitox); esperamicinas;

capecitabina; e sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos ou derivados de qualquer um do exposto acima.

Em algumas modalidades, as composições que compreendem células imunes efetoras que expressam CAR e/ou TCR reveladas no presente documento podem ser administradas em conjunto com um agente anti-hormonal que age para regular ou inibir a ação de hormônio em tumores como antiestrogênicos que incluem, por exemplo,

tamoxifeno, raloxifeno, 4(5)-imidazóis de inibição de aromatase, 4-hidroxitamoxifeno,

trioxifeno, keoxifeno, LY117018, onapristona e toremifeno (Fareston); e anti-androgênios como flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida, e goserelina; e sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos ou derivados de qualquer um do exposto acima.

As combinações de agentes quimioterápicos também são administradas onde adequado, que inclui, porém sem limitação, CHOP, isto é, ciclofosfamida (Cytoxan®), Doxorubicina (hidroxidoxorubicina), Vincristina (Oncovin®) e Prednisona.

[0222]Em algumas modalidades, o agente quimioterápico é administrado de modo simultâneo, sequencial em qualquer ordem ou separadamente com a administração de uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e/ou agonista de 4-1BB. Em algumas modalidades, o agente quimioterápico é administrado de modo simultâneo ou dentro de uma semana após a administração de uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e/ou agonista de 4-1BB. Em outras modalidades, o agente quimioterápico é administrado a partir de cerca de 1 a cerca de 4 semanas ou de cerca de 1 semana a cerca de 1 mês, cerca de 1 semana a cerca de 2 meses, cerca de 1 semana a cerca de 3 meses, cerca de 1 semana a cerca de 6 meses, cerca de 1 semana a cerca de 9 meses, ou cerca de 1 semana a cerca de 12 meses após a administração de uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e/ou agonista de 4-1BB. Em algumas modalidades, o agente quimioterápico é administrado pelo menos 1 mês antes de administrar uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e/ou agonista de 4-1BB. Em algumas modalidades, os métodos compreendem adicionalmente administrar dois ou mais agentes quimioterápicos.

[0223]Uma variedade de agentes terapêuticos adicionais pode ser usada em conjunto com as composições descritas no presente documento. Por exemplo, os agentes terapêuticos adicionais potencialmente úteis incluem inibidores de PD-1 como nivolumabe (OPDIVO®), pembrolizumabe (KEYTRUDA®), pembrolizumabe, pidilizumabe (CureTech) e atezolizumabe (Roche).

[0224]Os agentes terapêuticos adicionais adequados para uso em combinação com as composições e métodos revelados no presente documento incluem, mas não se limitam a, ibrutinibe (IMBRUVICA®), ofatumumabe (ARZERRA®), rituximabe (RITUXAN®), bevacizumabe (AVASTIN®), trastuzumabe (HERCEPTIN®), trastuzumabe emtansina (KADCYLA®), imatinibe (GLEEVEC®), cetuximabe (ERBITUX®), panitumumabe (VECTIBIX®), catumaxomabe, ibritumomabe, ofatumumabe, tositumomabe, brentuximabe, alemtuzumabe, gemtuzumabe, erlotinibe, gefitinibe, vandetanibe, afatinibe, lapatinibe, neratinibe, axitinibe, masitinibe, pazopanibe, sunitinibe, sorafenibe, toceranibe, lestaurtinibe, axitinibe, cediranibe, lenvatinibe, nintedanibe, pazopanibe, regorafenibe, semaxanibe, sorafenibe, sunitinibe, tivozanibe, toceranibe, vandetanibe, entrectinibe, cabozantinibe, imatinibe, dasatinibe, nilotinibe, ponatinibe, radotinibe, bosutinibe, lestaurtinibe, ruxolitinibe, pacritinibe, cobimetinibe, selumetinibe, trametinibe, binimetinibe, alectinibe, ceritinibe, crizotinibe, aflibercept, adipotida, denileucina diftitox, inibidores de mTOR como Everolimus e Temsirolimus, inibidores de hedgehog como sonidegib e vismodegibe, inibidores de CDK como inibidor de CDK (palbociclibe).

[0225]Em algumas modalidades, a composição que compreende células imunes CAR é administrada com um agente anti-inflamatório. Os fármacos ou agentes anti- inflamatórios podem incluir, porém sem limitação, esteroides e glucocorticoides (que incluem betametasona, budesonida, dexametasona, acetato de hidrocortisona, hidrocortisona, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisolona, prednisona, triamcinolona), fármacos anti-inflamatórios não esteroides (NSAIDS) que incluem aspirina, ibuprofeno, naproxeno, metotrexato, sulfasalazina, leflunomida, medicamentos anti-TNF, ciclofosfamida e micofenolato. Os NSAIDs exemplificadores incluem ibuprofeno, naproxeno, naproxeno sódico, inibidores de Cox-2 e sialilatos. Os analgésicos exemplificadores incluem acetaminofeno, oxicodona, tramadol de cloridrato de proporxifeno. Os glucocorticoides exemplificadores incluem cortisona, dexametasona, hidrocortisona, metilprednisolona, prednisolona ou prednisona. Os modificadores de resposta biológica exemplificadores incluem moléculas dirigidas contra marcadores de superfície celular (por exemplo, CD4, CD5, etc.), inibidores de citocina, como os antagonistas de TNF, (por exemplo, etanercept (ENBREL®), adalimumabe (HUMIRA®) e infliximabe (REMICADE®), inibidores de quimiocina e inibidores de molécula de adesão. Os modificadores de resposta biológica incluem anticorpos monoclonais, bem como formas recombinantes de moléculas. DMARDs exemplificadores incluem azatioprina, ciclofosfamida, ciclosporina, metotrexato, penicilamina, leflunomida, sulfasalazina, hidroxicloroquina, Gold (oral (auranofina) e intramuscular), e minociclina.

[0226]Em algumas modalidades, as composições descritas no presente documento são administradas em conjunto com uma citocina. Os exemplo de citocinas são linfocinas, monocinas e hormônios de polipeptídeo tradicionais. Estão incluídos entre as citocinas os hormônios de crescimento como hormônio de crescimento humano, hormônio de crescimento humano de N-metionila e hormônio de crescimento bovino; hormônio da paratireoide; tiroxina; insulina; proinsulina; relaxina; prorelaxina; hormônios de glicoproteína como hormônio estimulante de folículo (FSH), hormônio estimulante da tireoide (TSH) e hormônio luteinizante (LH); fator de crescimento hepático (HGF); fator de crescimento de fibroblasto (FGF); prolactina; lactogênio placentário; substância de inibição de mulleriano; peptídeo associado à gonadotropina de camundongo; inibina; activina; fator de crescimento endotelial vascular; integrina; trombopoietina (TPO); fatores de crescimento de nervo (NGFs) como NGF-beta; fator de crescimento de plaquetas;

fatores de crescimento de transformação (TGFs) como TGF-alfa e TGF-beta; fator de crescimento semelhante à insulina I e II; eritropoietina (EPO, Epogen®, Procrit®); fatores osteoindutivos; interferons como interferon-alfa, beta e gama; fatores estimulantes de colônia (CSFs) como macrófago-CSF (M-CSF); granulócito-macrófago-CSF (GM-CSF); e granulócito-CSF (G-CSF); interleucinas (ILs) como IL-1, IL-1alpha, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; IL-15, um fator de necrose tumoral como TNF- alfa ou TNF-beta; e outros fatores de polipeptídeo que incluem LIF e ligante de kit (KL).

Conforme usado no presente documento, o termo citocina inclui proteínas a partir de fontes naturais ou de cultura celular recombinante, e equivalentes biologicamente ativos das citocinas de sequência nativa.

Administração de axicabtageno ciloleucel e utomilumabe Farmacodinâmica e Farmacocinética após infusão de Axi-cel™

[0227]YESCARTA™ (axicabtageno ciloleucel; Axi-cel™; KTE-C19) é uma terapia de célula T de receptor de antígeno quimérico (CAR) autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 que é aprovada pela Food and Drug Administration (FDA) dos Estados Unidos para o tratamento de pacientes adultos com linfoma de células B grandes recidiva ou refratário (r/r) após duas ou mais linhas de terapia sistêmica. As indicações aprovadas incluem linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) não especificado de outro modo, linfoma de células B grandes mediastinal primário (PMBCL), linfoma de células B de alto grau e DLBCL que surge de linfoma folicular.

[0228]No ensaio clínico ZUMA-1 pivotante de Axi-cel™ para o tratamento de linfoma de células B grandes r/r, foram elucidadas as relações de farmacocinética (PK) e farmacodinâmica (PD) principais que descrevem a relação entre a expansão de célula T CAR anti-CD19 (PK) e níveis de citocinas séricas (PD) em relação ao resultado clínico (Locke et al. CT019 - Primary results from ZUMA-1: a pivotal trial of axicabtageno ciloleucel (axicel; KTE-C19) in patients with refractory aggressive non-Hodgkin lymphoma (NHL). In: Proceedings of the 107th Annual Meeting of the American Association for Cancer Research; 1 a 5 de abril de 2017; Washington, DC. Philadelphia (PA):AACR;

2017. Resumo 4292). A Figura 2 representa a relação entre níveis de CAR anti-CD19 no sangue durante os primeiros 28 dias após a infusão (AUC0-28) com resposta objetiva (CR ou PR) e desenvolvimento de toxicidade neurológica de Grau ≥3 ou síndrome de liberação de citocinas (CRS). A expansão de células T CAR foi associada à resposta objetiva e à toxicidade neurológica de grau ≥3 mas a CRS de grau ≥3.

[0229] A Figura 3 destaca a quimioterapia de linfodepleção e indução de CAR T anti-CD19 de programas imunológicos principais durante os primeiros 28 dias após a infusão. Os biomarcadores distintos apresentam pico dentro de 7 dias após o tratamento de Axi-cel™. Os analitos mostrados foram avaliados em ≥50% de pacientes com indução ≥2 vezes acima da linha de base de um painel de 44 medidos. Os analitos séricos foram medidos com MSD®, Luminex® e Quantikine™ ELISA.

[0230] A Figura 4 mostra biomarcadores associados tanto a CRS de grau ≥3 como à toxicidade neurológica de grau ≥3. A associação entre níveis de pico de analitos séricos e a associação com CRS ou toxicidade neurológica de grau ≥3 são mostradas.

Os níveis de pico após a infusão de Axi-cel™ foram usados na comparação. As células T CAR anti-CD19 mostram polifuncionalidade ampla em co-cultura (Figura 5). A co- regulação de marcadores de ativação para células T ativadas em células CD8+ através de todos os produtos avaliados. As células T CD4+ demonstraram um padrão similar (dados não mostrados). Consultar Perez et al, ASH 2015, “Pharmacodynamic Profile and Clinical Response in Patients with B-Cell Malignancies of Anti-CD19 CAR T Cell Therapy” (Também como resumo n° 2042).

Dosagem e Administração de axicabtageno ciloleucel

[0231]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 indicada para o tratamento de pacientes adultos com linfoma de células B grandes refratário é administrada após duas ou mais linhas de terapia sistêmica. Em algumas modalidades, uma bolsa de infusão de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 compreende uma suspensão de células T positivas para receptor de antígeno quimérico (CAR) em aproximadamente 68 ml. A dose alvo pode ser entre cerca de 1 × 10 6 e cerca de 2 × 106 células T viáveis positivas para CAR por kg de peso corporal, com um máximo de 2 × 108 células T viáveis positivas para CAR. Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 é Axi-cel™ (YESCARTA™, axicabtageno ciloleucel).

[0232]Em algumas modalidades, a imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 é para uso autólogo. A identidade do paciente precisa corresponder aos identificadores de paciente na bolsa de infusão e cassete de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19. Se as informações sobre a identificação específica de paciente não corresponder ao paciente pretendido, a imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 não pode ser administrada.

[0233]Em algumas modalidades, a disponibilidade de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 precisa ser confirmada antes de iniciar o regime de linfodepleção.

[0234]Em algumas modalidades, o paciente é pré-tratado antes da infusão de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 com a administração de quimioterapia de linfodepleção. Em algumas modalidades, um regime de quimioterapia de linfodepleção de ciclofosfamida a cerca de 500 mg/m 2 IV e fludarabina a cerca de 30 mg/m2 IV é administrado no quinto, quarto e terceiro dia antes da infusão de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19.

[0235]Em algumas modalidades, o paciente é pré-medicado antes da infusão de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 por meio da administração de acetaminofeno a cerca de 650 mg através da boca e difenidramina a cerca de 12,5 mg por via intravenosa ou pela boca aproximadamente 1 hora antes da infusão de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19.

[0236]Em algumas modalidades, o uso profilático de esteroides sistêmicos é evitado à medida que podem interferir com a atividade da imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19.

Preparação de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 para infusão

[0237]A temporização do descongelamento e infusão de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 é coordenada. Em algumas modalidades, o tempo de infusão é confirmado antecipadamente, e o tempo inicial do descongelamento de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 é ajustado de modo que esteja disponível para a infusão quando o paciente estiver pronto.

[0238]Em algumas modalidades, a identidade de paciente é confirmada antes do descongelamento de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19. Antes da preparação de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19, a identidade do paciente é correlacionada com os identificadores de paciente no cassete de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19. Em algumas modalidades, a bolsa de produto de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 não é removida do cassete se as informações sobre a identificação específica de paciente não corresponderem ao paciente pretendido.

[0239]Em algumas modalidades, uma vez que a identificação de paciente é confirmada, a bolsa de produto de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 é removida do cassete e as informações de paciente na identificação de cassete são confirmadas como correspondendo à identificação de bolsa.

[0240]Em algumas modalidades, o método compreende inspecionar a bolsa de produto acerca de quaisquer violações da integridade do recipiente como rupturas ou rachaduras antes do descongelamento. Em algumas modalidades, a bolsa de infusão é colocada dentro de uma segunda bolsa estéril de acordo com diretivas locais.

[0241]Em algumas modalidades, o método compreende descongelar a imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 em aproximadamente 37 °C com o uso de um banho-maria ou método de descongelamento a seco, até que não exista gelo visível na bolsa de infusão. Em algumas modalidades, o método compreende misturar ou agitar o conteúdo da bolsa para dispersar nódulos de material celular. Em algumas modalidades, o conteúdo da bolsa é misturado delicadamente ou agitado. Em algumas modalidades, o método compreende inspecionar a bolsa acerca da presença de nódulos de célula visíveis remanescentes ou a agitação é continuada. Os nódulos pequenos de material celular devem se dispersar com a mistura manual delicada. Em algumas modalidades, o método não compreende uma lavagem, centrifugação e/ou ressuspensão de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 em novo meio antes da infusão.

[0242]Em algumas modalidades, uma vez descongelada, a imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 pode ser armazenada à temperatura ambiente (20 °C a 25 °C) durante até 3 horas.

Administração

[0243]Em algumas modalidades, os métodos presentemente revelados de administração de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 compreendem uma ou mais dentre as seguintes etapas ou como considerações: Assegurar que tocilizumabe e o equipamento de emergência estejam disponíveis antes da infusão e durante o período de recuperação.

NÃO usar um filtro de leucodepleção.

O acesso venoso central é recomendado para a infusão de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19.

Confirmar se a identidade do paciente corresponde aos identificadores de paciente na bolsa de produto de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19.

Preparar a tubagem com solução salina normal antes da infusão.

Infundir todo o conteúdo da bolsa de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 dentro de 30 minutos por meio de gravidade ou uma bomba peristáltica. A imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 é estável à temperatura ambiente durante até 3 horas após o descongelamento.

Agitar delicadamente a bolsa de produto durante a infusão de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 para impedir formação de nódulos de célula.

Depois que todo o conteúdo da bolsa de produto é infundido, enxaguar a tubagem com solução salina normal na mesma taxa de infusão para assegurar que todo o produto é entregue.

A imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 contém células sanguíneas humanas que são geneticamente modificadas com vetor retroviral incompetente de replicação. Seguir as precauções universais e diretivas de biossegurança locais para o manuseio e descarte para evitar a transmissão potencial de doenças infecciosas.

Monitoramento

[0244]Em algumas modalidades, a administração de imunoterapia de célula T autóloga geneticamente modificada dirigida a CD19 ocorre em uma instalação de cuidados com a saúde certificada. Em algumas modalidades, os métodos revelados no presente documento compreendem monitorar os pacientes pelo menos diariamente durante 7 dias na instalação de cuidados com a saúde certificada, após a infusão, acerca de sinais e sintomas de CRS e toxicidades neurológicas. Em algumas modalidades, os pacientes são instruídos a permanecerem dentro da proximidade da instalação de cuidados com a saúde certificada durante pelo menos 4 semanas após a infusão.

Gerenciamento de reações adversas graves

[0245]Em algumas modalidades, o método compreende o gerenciamento de reações adversas. Em algumas modalidades, a reação adversa é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de liberação de citocinas (CRS), uma toxicidade neurológica, uma reação de hipersensibilidade, uma infecção grave, uma citopenia e hipogamaglobulinemia.

[0246]Em algumas modalidades, os sinais e sintomas de reações adversas são selecionados do grupo que consiste em febre, hipotensão, taquicardia, hipoxia e calafrios, incluem arritmias cardíacas (que inclui fibrilação atrial e taquicardia ventricular), parada cardíaca, insuficiência cardíaca, insuficiência renal, síndrome do vazamento capilar, hipotensão, hipóxia, toxicidade de órgãos, linfoistocitose hemofagocítica/síndrome de ativação de macrófagos (HLH/MAS), convulsão, encefalopatia, dor de cabeça, tremor, tontura, afasia, delírio, ansiedade por insônia, anafilaxia, neutropenia febril, trombocitopenia, neutropenia e anemia.

Agonistas de receptor de proteína 4-1BB (CD-137)

[0247]O receptor de proteína 4-1BB (CD-137) é encontrado em certas células T (principalmente em CD8+, mas também em células T de memória CD4+) e células natural killer (NK). (Fisher, T.S., Kamperschroer, C., Oliphant, T. et al. Cancer Immunol Immunother (2012) 61: 1.721. https://doi.org/10.1007/s00262-012-1237-1; Westwood JA, Potdevin Hunnam TCU, Pegram HJ, Hicks RJ, Darcy PK, Kershaw MH (2014) Routes of Delivery for CpG and Anti-CD137 for the Treatment of Orthotopic Kidney Tumors in Mice.

PLoS ONE 9(5): e95847. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0095847). 4-1BB também pode ser mencionado como TNFRSF9; superfamília de receptor de fator de necrose tumoral, membro 9 ; ILA; 4-1BB; CD137; CDw137; membro 9 da superfamília de receptor de fator de necrose tumoral; antígeno de CD137. As moléculas de ligação de 4-1BB, que incluem utomilumabe, são adicionalmente descritas na patente n° U.S. 8.337.850, que está incorporada ao presente documento a título de referência em sua totalidade.

[0248]Utomilumabe é a designação comum para PF-05082566, uma imunoterapia de investigação e anticorpo monoclonal de IgG2 completamente humano (mAb). Conforme mostrado na Figura 12, quando utomilumabe (PF-05082566) se liga a 4-1BB, foi observado como estimulando e aumentando o número de células imunes. A combinação de utomilumabe (PF-05082566) com um inibidor de checkpoint, como anti- PD-1/anti-PD-L1, ou outras imunoterapias, pode amplificar a resposta imunológica.

(Gopal A, Barlett N, Levy R, et al. A Phase I study of PF-05082566 (anti-4-1BB) + rituximab in patients with CD20+ NHL. J Clin Oncol 33, 2015 DOI:

10.1200/jco.2015.33.15_suppl.3004; Tolcher MD, Anthony W. Phase 1b trial investigating utomilumab (a 4-1BB agonist) in combination with a checkpoint inhibitor. Apresentação oral na 52a Reunião Anual da American Society of Clinical Oncology 2016 (ASCO).

http://meetinglibrary.asco.org/content/125783?media=sl. Acessada em 27 de fevereiro de 2017.; A Study of PF-05082566 as a Single Agent and in Combination with Rituximab.

https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT01307267?term=PF-05082566&rank=3. Acessada em 27 de fevereiro de 2017.)

[0249]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende três CDRs de uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e três CDRS de uma sequência de aminoácidos de região VL apresentada em SEQ ID NO: 3.

[0250]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB é um anticorpo isolado ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende: (a) uma H-CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:5; (b) uma H-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:6; (c) uma H-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:7; (d) uma L-CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:8; (e) uma L-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:9; e (f) uma L-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:10.

[0251]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB é um anticorpo isolado, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1. Em algumas modalidades, o anticorpo, ou porção de ligação a antígeno, compreende uma sequência de aminoácidos de região VL conforme apresentado em SEQ ID NO:3.

[0252] Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB é um anticorpo isolado, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e uma sequência de aminoácidos de região VL conforme apresentado em SEQ ID NO:3.

[0253]Em algumas modalidades, o anticorpo de agonista de 4-1BB isolado é uma IgG2.

[0254]Em algumas modalidades, o agonista de 4-1BB é um anticorpo completamente humano.

[0255]Em alguns aspectos, a presente invenção fornece uma composição farmacêutica que compreende um anticorpo, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, descrita no presente documento e um carreador farmaceuticamente aceitável.

[0256]Em algumas modalidades, o anticorpo isolado de agonista de 4-1BB compreende uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada conforme apresentado em SEQ ID NO:2 e uma sequência de aminoácidos de cadeia leve conforme apresentado em SEQ ID NO:4, com a condição de que o resíduo de lisina C-terminal da SEQ ID NO:2 esteja opcionalmente ausente.

Dosagem e Administração de utomilumabe

[0257]O termo “quantidade terapeuticamente eficaz” ou “dose terapeuticamente eficaz” de uma molécula de ligação se refere a uma quantidade que é eficaz para um propósito terapêutico pretendido. Por exemplo, no tratamento de câncer, os exemplos de efeitos benéficos ou desejáveis incluem a inibição de crescimento ou espalhamento adicional de células de câncer, morte de células de câncer, inibição de recorrência de câncer, redução de dor associada ao câncer ou sobrevivência aprimorada do mamífero.

A quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de 4-1BB normalmente se situa na faixa de cerca de 0,001 a cerca de 500 mg/kg, e mais normalmente cerca de 0,01 a cerca de 200 mg/kg, do peso corporal do mamífero. Por exemplo, a quantidade pode ser de cerca de 0,3 mg/kg, cerca de 1 mg/kg, cerca de 3 mg/kg, cerca de 5 mg/kg, cerca de 10 mg/kg, cerca de 50 mg/kg, cerca de 100 mg/kg ou cerca de 200 mg/kg de peso corporal do mamífero. Em algumas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de 4-1BB se situa na faixa de cerca de 0,01 a 30 mg/kg de peso corporal do mamífero. Em algumas outras modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo de 4-1BB se situa na faixa de cerca de 0,05 a 15 mg/kg de peso corporal do mamífero. O nível de dosagem preciso a ser administrado pode ser prontamente determinado por um versado na técnica e dependerá de vários fatores, como o tipo e a gravidade do distúrbio a ser tratado, a molécula de ligação particular empregada, a via de administração , o tempo de administração, a duração do tratamento, a terapia adicional particular empregada, a idade, sexo, peso, condição, estado geral de saúde e histórico médico anterior do paciente que é tratado e fatores similares bem conhecidos nas técnicas médicas.

[0258]Em algumas modalidades, a dose terapeuticamente eficaz de um anticorpo de 4-1BB está entre cerca de 1 a cerca de 200 mg. Em algumas modalidades, a dose terapeuticamente eficaz de um anticorpo de 4-1BB está entre cerca de 1 a cerca de 100 mg. Uma composição ou molécula de ligação é normalmente administrada em múltiplas ocasiões. Os intervalos entre as doses podem ser, por exemplo, semanais, mensais, a cada três meses ou anuais. Um regime de tratamento exemplificador acarreta a administração uma vez por semana, uma vez a cada duas semanas, uma vez a cada três semanas, uma vez a cada quatro semanas, uma vez ao mês, uma vez a cada três meses ou uma vez a cada três a seis meses. Os regimes de dosagem para um anticorpo de 4- 1BB podem incluir cerca de 1 mg/kg de peso corporal ou cerca de 3 mg/kg de peso corporal através de administração intravenosa, com o uso de um dentre os seguintes cronogramas de dosagem: (i) a cada quatro semanas para seis dosagens, então, a cada três meses; (ii) a cada três semanas; (iii) cerca de 3 mg/kg de peso corporal uma vez seguido de cerca de 1 mg/kg de peso corporal a cada três semanas.

[0259]Em algumas modalidades, um anticorpo monoclonal completamente humano de agonista de 4-1BB é administrado em uma dose de cerca de 1 mg, cerca de 2 mg, cerca de 3 mg, cerca de 4 mg, cerca de 5 mg, cerca de 7,5 mg, cerca de 10 mg, cerca de 15 mg, cerca de 20 mg, cerca de 25 mg, cerca de 30 mg, cerca de 40 mg, cerca de 50 mg, cerca de 75 mg, cerca de 100 mg, cerca de 125 mg, cerca de 150 mg, cerca de 175 mg, cerca de 200 mg. Em algumas modalidades, uma dosagem de anticorpo monoclonal completamente humano de agonista de 4-1BB continua até que os pacientes demonstrem remissão completa, doença progressiva/sem resposta, ou durante cerca de 1 ano. Em algumas modalidades, um anticorpo monoclonal completamente humano de agonista de 4-1BB é administrado cerca de cada 4 semanas. Em algumas modalidades, um anticorpo monoclonal completamente humano de agonista de 4-1BB é administrado mensalmente.

[0260]A presente revelação é adicionalmente ilustrada pelos exemplos a seguir que não devem ser interpretados como limitação adicional. O conteúdo de todas as figuras e todas as referências, patentes e pedidos de patente publicados citados ao longo desta revelação são expressamente incorporados ao presente documento a título de referência, em sua totalidade.

EXEMPLOS Exemplo 1: Estudos clínicos de linfoma de células B grandes refratário

[0261]A terapia de combinação com axicabtageno ciloleucel em combinação com utomilumabe pode ser usada para tratar pacientes com câncer de modo eficaz. Esse exemplo ilustra um estudo multicêntrico que avalia a segurança e a eficácia de KTE-C19 (axicabtageno ciloleucel) em combinação com utomilumabe em sujeitos com linfoma de células B grandes refratário ou linfoma difuso de células B grandes refratário (DLBCL) após pelo menos 2 linhas de terapia sistêmica anteriores. O ensaio é separado em duas fases distintas, designadas como Fase 1 e Fase 2.

[0262]Durante a Fase 1, aproximadamente 3 a 9 ou 3 a 24 sujeitos com linfoma de células B grandes refratário ou DLBCL refratário são inscritos em um projeto 3 + 3 em até 3 ou 4 de 6 coortes para avaliar a segurança dos regimes de combinação de KTE- C19 e utomilumabe. O KTE-C19 é administrado em uma dose fixa ou única, e a dose de utomilumabe administrada em doses crescentes ou é aumentada sequencialmente em cada uma das 3 coortes. O objetivo principal da Fase 1 é avaliar a segurança dos regimes de combinação de KTE-C19 e utomilumabe e identificar a dose e a temporização mais adequados de utomilumabe para avançar para a Fase 2. A incidência de eventos adversos definidos como toxicidades limitadoras de dose (DLT) é um ponto final primário.

[0263]Na Fase 2, aproximadamente 22 ou 24 sujeitos são inscritos para receber o tratamento de combinação com KTE-C19 e utomilumabe, com base na dose e no cronograma selecionado após uma análise dos dados da porção de Fase 1. O objetivo principal da Fase 2 é avaliar a eficácia de KTE-C19 e utomilumabe, conforme medido pela taxa de resposta completa (CR) em sujeitos com linfoma de células B grandes refratário ou DLBCL refratário. Os objetivos secundários incluem uma avaliação da segurança e tolerabilidade de KTE-C19 em combinação com utomilumabe e a avaliação de pontos finais adicionais de eficácia. O ponto final primário da Fase 2 é a taxa de resposta completa (resposta completa [CR] de acordo com o Critério de Resposta do Grupo de Trabalho Internacional revisado [IWG]) para linfoma maligno (Cheson et al. J Clin Oncol 25:579 a 586 (2007)) ou Classificação de Lugano (Cheson et al., 2014), conforme determinadas pelos investigadores do estudo.

[0264]Independentemente da coorte ou fase do estudo, cada sujeito passa pelos seguintes períodos de estudo: Triagem Inscrição/Leucaférese

Terapia de ponte, se aplicável Quimioterapia de condicionamento Tratamento de combinação (KTE-C19 e utomilumabe) Avaliação pós-tratamento Acompanhamento a longo prazo

[0265]Conforme mostrado na Figura 1 e na Figura 13, os pacientes são submetidos à inscrição e leucaférese, seguidos pela quimioterapia de linfodepleção de condicionamento nos dias 5, 4 e 3 antes do início do tratamento de combinação com KTE-C19 e utomilumabe. Os pacientes recebem um regime de quimioterapia de condicionamento que consiste em fludarabina a 30 mg/m2/dia e ciclofosfamida a 500 mg/m2/dia, administrado por 3 dias. No dia 0, o tratamento com KTE-C19 compreende uma única infusão de células T autóloga transduzidas por CAR, administrada por via intravenosa, em uma dose alvo de 2 x 106 células T CAR anti-CD19/kg. Sob circunstâncias em que os sujeitos respondem inicialmente e subsequentemente recidivem, os sujeitos podem ser elegíveis para um segundo curso de quimioterapia de condicionamento e KTE-C19.

[0266]O tratamento com Utomilumabe compreende uma infusão intravenosa dada aproximadamente a cada quatro semanas. A primeira dose é administrada no dia seguinte da infusão de KTE-C19 e a dosagem continua até que os pacientes demonstrem remissão completa, doença progressiva/sem resposta ou durante cerca de 1 ano, o que ocorrer primeiro. Em um projeto de estudo mostrado na Figura 1, os sujeitos da Coorte 1 recebem cerca de 1 mg de utomilumabe, os sujeitos da Coorte 2 recebem cerca de 10 mg de utomilumabe e os sujeitos da Coorte 3 recebem cerca de 100 mg de utomilumabe.

Em um outro projeto de estudo mostrado na Figura 13, o utomilumabe começará em uma dose fixa de 10 mg no Dia 1 na Coorte 1 e os regimes de utomilumabe administrados estão descritos na Tabela 1 abaixo. Tabela 1. Regimes de Utomilumabe Nível de Dose Coorte Primeira Administração de Utomilumabe 1 Dia 1 10 mg 1A Dia 21 2 Dia 1 30 mg 2A Dia 21

3. Dia 1 100 mg 3A Dia 21

[0267]Em pontos no tempo específicos, os sujeitos são submetidos aos seguintes procedimentos: coleta de consentimento informado, histórico médico geral, incluindo tratamentos anteriores para NHL, exame físico, incluindo sinais vitais e situação de desempenho, e avaliações neurológicas. Os sujeitos também são submetidos a coletas de sangue para hemograma completo (CBC), painéis de química, citocinas, proteína C reativa, subconjuntos de linfócitos, anticorpos anti-KTE-C19, avaliação ADA, retrovírus competente para replicação (RCR) e análise de células T CAR anti-CD19. As mulheres com potencial para engravidar são submetidas a um teste de gravidez de urina ou soro.

[0268]Os sujeitos também são submetidos a eletrocardiograma de linha de base (ECG), ecocardiograma (ECHO), imaginologia por ressonância magnética cerebral (MRI), tomografia por emissão de pósitrons - tomografia computadorizada (PET-CT) e leucaférese.

[0269]A Taxa de Resposta Objetiva (CR + PR) deve ser determinada de acordo com os Critérios de Resposta de IWG revisados para Linfoma Maligno (Cheson, 2007) e determinada pelos Critérios de Resposta de IWG para Linfoma Maligno ou Classificação de Lugano (Cheson et al. Journal of Clinical Oncology 32, n° 27 (setembro de 2014) 3.059 a 3.067). A duração da resposta é avaliada. A Sobrevivência livre de progressão (PFS) por avaliação de investigador de acordo com os Critérios de Classificação de Resposta de Lugano (Cheson et al., 2014) é avaliada.

[0270]As determinações farmacocinéticas incluem os parâmetros PK de utomilumabe, conforme os dados permitem: concentração plasmática máxima (Cmax), tempo até a concentração plasmática máxima (Tmax), área sob a curva de tempo de concentração plasmática do tempo de 0 a t horas após a dose (AUC0-t, onde t é dependente do analito), depuração plasmática aparente (CL/F) ou depuração sistêmica (CL) e volume aparente de distribuição (V/F) ou volume de distribuição em estado estacionário (Vss) de cada analito após a dosagem única e múltipla.

[0271]Os marcadores moleculares, celulares e solúveis no sangue periférico e/ou tecido de tumor e/ou fezes que podem ser relevantes para o mecanismo de ação ou resposta/resistência ao tratamento de estudo, incluindo o perfil molecular para a célula ABC/GBC de subtipos de DLBCL de origem são avaliados.

[0272]A sobrevida global e a incidência de eventos adversos e alterações clinicamente significativas nos valores de laboratório de segurança são determinadas.

Adicionalmente, é avaliada a incidência de anticorpos anti-KTE-C19 e avaliações de imunogenicidade de anticorpos antifármacos (ADA) e anticorpos neutralizantes (Nab) contra o utomilumabe.

[0273]Os níveis de expressão de PD-L1 nas células de tumor e células do microambiente de tumor na linha de base, os níveis de KTE-C19 no sangue e os níveis de citocinas e outros marcadores no soro também podem ser avaliados durante o estudo.

[0274]Além disso, os estudos exploratórios são realizados para explorar marcadores moleculares, celulares e solúveis na linha de base e pós-tratamento (por exemplo, porém sem limitação, perfil mutacional de linha de base, perfil de microbioma de linha de base e alterações em perfis de expressão genética, linfócitos de infiltração de tumor e níveis de citocinas) no sangue periférico e/ou tecido de tumor e/ou fezes que podem ser relevantes para o mecanismo de ação do ou resposta/resistência ao tratamento do estudo.

[0275]Também são avaliadas as frequências de atrasos de dose de utomilumabe para toxicidades agudas contínuas após KTE-C19. Esse estudo usa um projeto de braço único para estimar a taxa de resposta completa verdadeira em pacientes com linfoma de células B grandes refratário ou DLBCL recidivo ou refratário tratados com a combinação de utomilumabe e KTE-C19. Com um tamanho total de amostra de 25 ou 27 pacientes em qualquer determinado cronograma de dosagem, dos quais pelo menos 3 pacientes foram tratados na porção de Fase 1, uma taxa de CR observada de 60% rende 95% de confiança de que a estimativa da taxa de CR verdadeira está entre 39% e 79% ou a meia largura máxima do intervalo de confiança de 95% de que a estimativa da taxa de CR verdadeira não é maior que 21%.

[0276] Os critérios de elegibilidade para o estudo estão descritos abaixo: Em um aspecto, os Critérios de Inclusão Principais incluem: Linfoma de células B grandes histologicamente comprovado, incluindo os seguintes tipos definidos por (Swerdlow et al, 2016):  DLBCL não especificado de outro modo (ABC/GCB)  HGBCL com ou sem MYC e BCL2 e/ou reorganização de BCL6  DLBCL que surge de FL  Linfoma de células B grandes rico em células T/histiócitos  DLBCL associado à inflamação crônica  DLBCL cutâneo primário, tipo perna  Vírus Epstein-Barr (EBV) + DLBCL  Doença refratária à quimioterapia, definida como um ou mais dentre os seguintes:  Nenhuma resposta à segunda ou maiores linhas de terapia o PD como melhor resposta ao regime terapêutico mais recente o PD como melhor resposta após pelo menos 2 ciclos da última linha de terapia com duração de SD não maior que 6 meses da última dose de terapia

OU  Refratário pós-ASCT oProgressão da doença ou recidiva ≤ 12 meses após ASCT (precisa ter recorrência comprovada por biópsia em sujeitos recidivados) ose a terapia de resgate for dada após ASCT, o sujeito precisa não ter tido resposta ou ter recidivado após a última linha de terapia Pelo menos 1 lesão mensurável de acordo com a Classificação de Lugano (Cheson et al. 2014). Lesões que foram anteriormente irradiadas serão consideradas mensuráveis apenas se a progressão tiver sido documentada após a conclusão da radioterapia.

O sujeito precisa ter recebido terapia anterior adequada que inclui no mínimo: Anticorpo monoclonal anti-CD20, exceto quando o investigador determina que o tumor é negativo para CD20, e Um regime de quimioterapia que contém antraciclina Nenhuma evidência, suspeita e/ou histórico de envolvimento do sistema nervoso central (CNS) no linfoma Pelo menos 2 semanas ou 5 meias-vidas, o que for menor, precisam ter decorrido desde qualquer terapia sistêmica anterior no momento em que o indivíduo está planejado para leucaférese As toxicidades devido à terapia anterior precisam ser estáveis e recuperadas para ≤ Grau 1 (exceto para toxicidades clinicamente não significativas, como alopecia)  Idade de 18 anos ou mais

 Situação de desempenho do Grupo de Oncologia Cooperativo Oriental (ECOG - Eastern Cooperative Oncology Group) de 0 ou 1.  Contagem absoluta de neutrófilos (ANC) 1.000/μl  Contagem de plaquetas 75.000/μl;  Contagem absoluta de linfócitos 100/μl  Função renal, hepática, pulmonar e cardíaca adequada, definida como: Depuração da creatinina (estimada por Crockcroft Gault) 60 ml/min Alanina aminotransferase/aspartato aminotransferase ALT/AST em soro ≤ 2,5 x limite superior do normal (ULN) Bilirrubina total ≤ 1,5 mg/dl, exceto em sujeitos com síndrome de Gilbert.

Fração de ejeção cardíaca ≥ 50% e nenhuma evidência de derrame pericárdico dentro de 180 dias, desde que o sujeito não tenha recebido tratamento à base de antraciclina ou tenha experimentado um evento cardíaco ou alteração em situação de desempenho Nenhum derrame pleural clinicamente significativo Saturação inicial de oxigênio> 92% no ar ambiente Os indivíduos do sexo feminino com potencial para engravidar precisam ter um teste de gravidez de urina ou soro negativo (indivíduos do sexo feminino que foram submetidos à esterilização cirúrgica ou que estão em pós-menopausa durante pelo menos 2 anos não são considerados como tendo potencial para engravidar) Em um outro aspecto, os Critérios de Inclusão Principais incluem:  DLBCL histologicamente confirmado  Documentação de que a doença é refratária após pelo menos 2 linhas de terapia sistêmica  Documentação da doença mensurável de linha de base

 Uma biópsia (arquivada ou Triagem/recente) deve ser coletada na Triagem  Expectativa de vida estimada em 3 meses  Pelo menos 18 anos de idade  Situação de desempenho (PS) do Grupo de Oncologia Cooperativo Oriental (ECOG) de 0 ou 1.

 Os pacientes precisam ter uma função adequada da medula óssea, incluindo:  Contagem absoluta de neutrófilos (ANC) 1,5 x 109/l;  Contagem de plaquetas 100 x 109/l;  Hemoglobina 8 g/dl.

 Os pacientes precisam ter função hepática adequada, incluindo:  Nível total de bilirrubina 1,5 × limite superior de normal (ULN);  Aspartato aminotransferase (AST) e alanina aminotransferase (ALT) 2,5 x ULN.

 Os pacientes precisam ter uma função renal adequada, conforme evidenciado por uma depuração de creatinina de 60 ml/min conforme calculado com o uso da equação de Cockcroft-Gault.

Em um aspecto, os Critérios de Exclusão Principais incluem: PMBCL histologicamente comprovado Histórico da transformação de Richter de CLL Terapia anticâncer sem fármaco anterior, incluindo terapia de células T de receptor de antígeno quimérico (CAR) (célula T CAR) ou outra terapia de célula T geneticamente modificada Histórico de reação de hipersensibilidade grave e imediata atribuída a aminoglicosídeos

Presença ou suspeita de infecção fúngica, bacteriana, viral ou outra infecção que não é controlada ou que exige antimicrobianos IV para o gerenciamento.

UTI simples e faringite bacteriana não complicada são permitidas se responder ao tratamento ativo e após a consulta com o Monitor Médico do patrocinador

Histórico de infecção de HIV ou infecção aguda ou crônica de hepatite B ou C ativa.

Os sujeitos com histórico de infecção por hepatite precisam ter eliminado sua infecção, conforme determinado por testes sorológicos e genéticos padrão, de acordo com as diretrizes atuais da Sociedade de Doenças Infecciosas da América (IDSA -

Infectious Diseases Society of America) ou as diretrizes de países aplicáveis

Presença de qualquer linha ou dreno residente (por exemplo, tubo de nefrostomia percutânea, cateter de Foley residente, dreno biliar ou cateter pleural/peritoneal/pericárdico). Os cateteres de acesso venoso central dedicados, como um cateter Port-a-Cath ou Hickman, são permitidos

Os sujeitos com células malignas do líquido cefalorraquidiano detectáveis,

metástases cerebrais ou histórico de linfoma do sistema nervoso central (SNC) com base na avaliação clínica

Histórico ou presença de distúrbio do SNC, como distúrbio de convulsão,

isquemia/hemorragia cerebrovascular, demência, doença cerebelar ou qualquer doença autoimune com envolvimento do SNC

Os sujeitos com envolvimento de linfoma ventricular cardíaco ou atrial

Histórico de infarto do miocárdio, angioplastia ou stent cardíaco, angina instável ou outra doença cardíaca clinicamente significativa dentro dos 12 meses após a inscrição

Requisito para terapia urgente devido a efeitos de massa tumoral (por exemplo,

compressão de vasos sanguíneos, obstrução intestinal ou envolvimento gástrico transmural)

Imunodeficiência primária Histórico de doença autoimune (por exemplo, Crohn, artrite reumatoide, lúpus sistêmico), que resulta em lesão de órgão terminal ou que exige imunossupressão sistêmica/agentes de modificação de doença sistêmica dentro dos últimos 2 anos.

Pacientes com histórico de hipotireoidismo relacionado à doença autoimune em uma dose estável de hormônio de reposição da tireoide e pacientes com diabetes mellitus tipo 1 controlada em um regime de insulina estável podem ser elegíveis para esse estudo.

Histórico de trombose venosa profunda sintomática ou embolia pulmonar dentro de 6 meses da inscrição Qualquer condição médica propensa a interferir na avaliação da segurança ou eficácia do tratamento de estudo Histórico de reação de hipersensibilidade imediata grave a qualquer um dos agentes usados nesse estudo Vacina viva ≤ 6 semanas antes do início planejado da quimioterapia de condicionamento Mulheres com potencial para engravidar que estejam grávidas ou amamentando devido aos efeitos potencialmente perigosos da quimioterapia preparatória no feto ou na criança. Indivíduos do sexo feminino que se submeteram à esterilização cirúrgica ou que estão em pós-menopausa durante pelo menos 2 anos não são consideradas com potencial para engravidar.

Sujeitos de ambos os sexos que não desejam praticar o controle da natalidade a partir do momento de consentimento até 90 dias após a última dose de utomilumabe e pelo menos 6 meses após a conclusão da quimioterapia de condicionamento Histórico de malignidade diferente de câncer de pele não melanoma in situ (por exemplo, colo do útero, bexiga, mama) ou câncer de próstata de baixo grau (Gleason ≤

6) ou vigilância sem quaisquer planos de tratamento, a menos que esteja livre de doença durante pelo menos 3 anos Transplante autólogo de células-tronco dentro de 6 semanas da inscrição planejada Transplante de órgão anterior, incluindo transplante alogênico de células-tronco (SCT) Terapia alvejada para CD19 anterior, com a exceção de sujeitos que receberam axicabtageno ciloleucel (KTE-C19) nesse estudo e são elegíveis para o retratamento Uso de qualquer terapia anticâncer padrão ou experimental dentro de 2 semanas antes da inscrição, incluindo terapia citorredutora e radioterapia, imunoterapia ou terapia de citocina (exceto para eritropoietina) Tratamento anterior com inibidor de PD-L1, inibidor de PD-1, anti-CTLA4, anti- CD137 (4-1BB), anti-OX40 ou outra terapia de ativador ou bloqueio de checkpoint imune Tratamento com agentes imunoestimulantes sistêmicos (incluindo, porém sem limitação, interferon e IL-2) dentro de 6 semanas ou 5 meias-vidas do fármaco, o que for menor, antes da primeira dose de utomilumabe Histórico de fibrose pulmonar idiopática, pneumonia em organização (por exemplo, bronquiolite obliterante), pneumonite induzida por fármaco, pneumonite idiopática ou evidência de pneumonite ativa por varredura por TC torácica na triagem.

Histórico de pneumonite por radiação no campo de radiação (fibrose) é permitido No julgamento do investigador, é improvável que o sujeito conclua todas as visitas ou procedimentos de estudo exigidos pelo protocolo, incluindo visitas de acompanhamento, ou cumpra os requisitos de participação do estudo.

Em um outro aspecto, os Critérios de Exclusão Principais incluem:

Linfoma sintomático do sistema nervoso central (SNC) com base na avaliação clínica Transplante de órgão anterior, incluindo SCT alogênico anterior Terapia anterior com um agonista de 4-1BB Uso de qualquer terapia anticâncer padrão ou experimental dentro de 2 semanas antes da inscrição, incluindo terapia citorredutora e radioterapia, imunoterapia ou terapia de citocina (exceto para eritropoietina) Transplante autólogo de células-tronco dentro de 3 semanas da inscrição Terapia alvejada para CD19 anterior, com a exceção de sujeitos que receberam KTE-C19 nesse estudo e são elegíveis para o retratamento Uso de qualquer terapia anticâncer sem fármaco, incluindo terapia de célula T de receptor de antígeno quimérico (CAR) (célula T CAR).

Histórico de doença autoimune, que exige imunossupressão sistêmica dentro dos últimos 2 anos. Diagnóstico de qualquer outra malignidade 3 anos antes da primeira dose do tratamento de estudo, com a exceção de: (i) câncer de pele de células escamosas ou célula basal adequadamente tratado, (ii) carcinoma in situ da mama ou colo do útero, ou (iii) câncer de próstata de baixo grau (Gleason 6) na vigilância sem quaisquer planos de intervenção de tratamento (por exemplo, cirurgia, radiação ou castração).

Exemplo 2: Plano de avaliação para axicabtageno ciloleucel (KTE-C19, Axi-cel™) e Utomilumabe

[0277]Certos aspectos da resistência ao KTE-C19 serão adicionalmente avaliados. O plano de avaliação de tratamento, que compreende a avaliação da farmacocinética, farmacodinâmica, biomarcadores de tumor e imunológicos e também características do produto, suporta o estudo multicêntrico que avalia a segurança,

eficácia e o mecanismo de ação do Axi-cel™ em combinação com o anticorpo de agonista de 4-1BB (CD137) utomilumabe em sujeitos com linfoma de células B grandes refratário ou DLBCL refratário descritos no Exemplo 1. Através da análise translacional, o plano de avaliação determina se a regulação ascendente rápida dos níveis de CD137 da superfície da célula T CAR anti-CD19 leva à capacidade de resposta à ativação acionada por agonista, levando ao aumento da expansão e da atividade clínica. O mecanismo de ação da resistência no microambiente de tumor (TME) e os mecanismos de toxicidade neurológica (CSF) também podem ser investigados.

[0278]A análise é realizada de biópsias de tumores com agulha de núcleo pareadas (pré e pós-dose) colhidas em pontos no tempo coincidentes com a expansão de células T CAR anti-CD19 periférica de pico para entender melhor a biologia das células T CAR no TME e o possível impacto de utomilumabe. A biópsia de agulha de núcleo é realizada com um procedimento de biópsia de agulha de núcleo guiada por ultrassom ou tomografia computadorizada (TC) com o uso de uma agulha de 18 G ou 20 G, e é realizada de acordo com as diretrizes institucionais para obter 3 a 6 amostras de núcleo de tumor. Uma análise imunoistoquímica (IHC) e perfilagem de transcrição de RNA é realizada em tecido de tumor congelado ou embebido em parafina fixa com formalina (FFPE) a partir de biópsias de agulhas de núcleo pré e pós-dose de pacientes com linfoma de células B grandes refratário ou DLBCL r/r. Os métodos citométricos de fluxo também são usados para análise de BM criopreservada.

[0279]O plano de avaliação pode incluir uma estratégia de coleta agressiva para reunir líquido cefalorraquidiano (CSF) em sujeitos que são observados como desenvolvendo toxicidade neurológica de Grau 2 ou superior para entender o mecanismo de ação da resistência no TME e também os mecanismos de toxicidade neurológica (CSF).

[0280]As estratégias de coleta e análise de amostras podem fornecer evidências diretas da migração de células T CAR para o microambiente de tumor, bem como a ativação, destruição celular em alvo e persistência. A avaliação das características de célula de tumor e do microambiente pode estabelecer a eficácia de CAR em relação a atributos de doença histológicos e moleculares.

[0281]A estratégia de coleta de biomarcador (Figura 6) constrói um banco de amostras derivado de pacientes tratados que se enquadram em quatro categorias amplas de resposta, conforme definido pelos recursos de resposta objetiva: 1) regressão [resposta completa (CR) ou resposta parcial (PR)], 2) refratária ao tratamento [doença progressiva (PD)], 3) recidiva ou 4) persistente sem evidência de progressão ou regressão completa [PR prolongada ou doença estável (SD)]. A avaliação da doença persistente (PR ou SD prolongada) fornece informações mecanicistas em relação ao confinamento imunológico de lesões tumorais. Além disso, os dados derivados de material de biópsia pareado podem elucidar mecanismos potenciais de resistência ou recidiva que permitem tanto o projeto racional de produtos de CAR da próxima geração como ensaios clínicos projetados para usar abordagens combinatórias voltadas para o aumento da resposta imunológica.

[0282]Um cronograma de coleta generalizado para amostras de arquivo de tumor, sangue [células mononucleares do sangue periférico (PBMC), soro/plasma] e CSF destinadas à análise está resumido na Figura 7. A estratégia de coleta de sangue inclui coletas de amostras na linha de base, dias 7, 14, 28 e meses 3, 6, 9, 12, 15, 18, 24 e também nos Dias 2 e 6 após cada administração de utomilumabe. As amostras de sangue são usadas para a determinação de níveis de biomarcador sérico (citocina) e células T CAR anti-CD19.

[0283]Os ensaios de citometria de fluxo são realizados para avaliação de subconjuntos de leucócitos presentes antes da transdução/expansão e também da situação de ativação de células T no material de aférese do paciente. O material de aférese do paciente criopreservado é avaliado com o Painel de aférese 1 e 2 resumido na Tabela 2. Tabela 2. Painel de citometria de fluxo para caracterização de aférese Painel de aférese 1 Painel de aférese 2 Anticorpo Lógica Anticorpo Lógica CD3 Marcador de célula pan-T CD3 Marcador de célula pan-T CD4 Marcador de célula T CXCR3 Recrutamento de efetor de auxiliar quimiocina CD8 Marcador de célula T CD8 Marcador de célula T citotóxica citotóxica CD66b Marcador de granulócito CCR7 Marcador de célula T de diferenciação CD19 Marcador de célula B CD45RA Marcador de célula T de diferenciação CD14 Marcador de CD27 Marcador de ativação monócito/macrófago CD56 Marcador de célula NK CD28 Marcador de ativação CD95 Marcador de ativação CD122 Marcador de diferenciação (IL-2 receptor)

[0284]Os ensaios de citometria de fluxo são realizados para avaliação de eficiência de transdução e também para avaliar o fenótipo e situação de ativação de célula T de amostra de produto de KTE-C19 que foram liberadas para a infusão de paciente. O produto pré-infusão criopreservado é avaliado com os Painéis de produto 1 a 3 resumidos na Tabela 3. Tabela 3. Painel de citometria de fluxo para caracterização de produto pré-infusão Painel de aférese 1 Painel de aférese 2 Painel de aférese 3 Anticorpo Lógica Anticorpo Lógica Anticorpo Lógica CD3 Marcador de CD3 Marcador de CD3 Marcador de célula pan-T célula pan-T célula pan-T CD8 Marcador de CD8 Marcador de CD8 Marcador de célula T célula T célula T citotóxica citotóxica citotóxica

CD45RA Marcador de CD45RA Marcador de CD45RA Marcador de célula T de célula T célula T diferenciação de de diferenciação diferenciação CCR7 Marcador de CCR7 Marcador de CCR7 Marcador de célula T de célula T célula T diferenciação de de diferenciação diferenciação CD122 Marcador de CD57 Marcador de CD25 Marcador de diferenciação ativação ativação (receptor de IL-2) CD27 Marcador de CD107α Marcador de CD69 Marcador de ativação ativação ativação CD28 Marcador de CD279 Marcador de CD137 Marcador de ativação ativação ativação (PD-1) (4-1BB) CD95 Marcador de CAR de Identificação CAR de Identificação ativação CD19 de KTE-C19 CD19 de KTE-C19 CAR de Identificação de CD19 KTE-C19

[0285]Os ensaios de citometria de fluxo são usados para avaliação de expressão de superfície de vários marcadores principais à medida que se referem ao fenótipo e à ativação de PBMCs de paciente longitudinais com o uso de Painéis de PBL 1 a 4 mostrados na Tabela 4. Esses dados são usados para monitorar o fenótipo, persistência e expansão de KTE-C19 pós-infusão. Além do monitoramento de nível de CAR, o painel 4 (Tabela 4) é projetado para interrogar níveis em populações de PBMC que são impactados pelo condicionamento e atividade de CAR fora de tumor e em alvo (isto é, células B normais).

[0286]As amostras sanguíneas do paciente longitudinal são processadas em PBMC criopreservada. A PBMC de paciente longitudinal criopreservada é coletada no Dia 5, Dia 0, Dia 7, Semana 2, Semana 4 (Na Semana 4 antes de utomilumabe, então, Dia 30 e Dia 36). Para alinhar com a administração de utomilumabe, a coleta de sangue adicional inclui retiradas a cada 4 semanas antes de utomilumabe, 2 e 6 dias após cada administração de utomilumabe. No acompanhamento a longo prazo, o sangue é retirado a cada 3 meses até 2 anos para monitorar a reconstituição imune. Tabela 4. Painel de citometria de fluxo para avaliação de PBMC pós-infusão Painel de aférese 1 Painel de aférese 2 Anticorpo Lógica Anticorpo Lógica CD3 Marcador de célula pan-T CD3 Marcador de célula pan-T CD8 Marcador de célula T citotóxica CD8 Marcador de célula T citotóxica CD45RA Marcador de célula T de CD45RA Marcador de célula T de diferenciação diferenciação CCR7 Marcador de célula T de CCR7 Marcador de célula T de diferenciação diferenciação CD122 Marcador de diferenciação CD57 Marcador de ativação (receptor de IL-2) CD27 Marcador de ativação CD107α Marcador de ativação CD28 Marcador de ativação CD279 Marcador de ativação (PD- 1) CD95 Marcador de ativação CAR de Identificação de KTE-C19 CD19 CAR de Identificação de KTE-C19 CD19 Painel de aférese 3 Painel de aférese 4 Anticorpo Lógica Anticorpo Lógica CD3 Marcador de célula pan-T CD3 Marcador de célula pan-T CD8 Marcador de célula T citotóxica CD4 Marcador de célula T auxiliar CD45RA Marcador de célula T de CD8 Marcador de célula T diferenciação citotóxica CCR7 Marcador de célula T de CD66b Marcador de granulócito diferenciação CD25 Marcador de ativação CD19 Marcador de célula B CD69 Marcador de ativação CD14 Marcador de monócito/macrófago CD137 Marcador de ativação (4-1BB) CD56 Marcador de célula NK CAR de Identificação de KTE-C19 CAR de Identificação de KTE-C19 CD19 CD19 BD Para determinar contagens Trucount absolutas de leucócitos no sangue

[0287]Um ensaio quantitativo de reação em cadeia de polimerase (qPCR) pode ser usado para o monitoramento longitudinal da presença, expansão e persistência de células T CAR anti-CD19 no sangue periférico. A PBMC criopreservada pós-infusão é usada para monitorar os níveis e a depuração de células marcadas por gene ao longo do tempo. A PBMC de paciente longitudinal criopreservada é coletada no Dia 5, Dia 0, Dia 7, Semana 2, Semana 4 (Na Semana 4 antes de utomilumabe, então, Dia 30 e Dia 36).

Para alinhar com a administração de utomilumabe, a coleta de sangue adicional inclui retiradas a cada 4 semanas antes de utomilumabe, 2 e 6 dias após cada administração de utomilumabe. No acompanhamento a longo prazo, o sangue é retirado a cada 3 meses por até 2 anos para monitorar a presença de células T CAR anti-CD19 persistentes.

[0288]É usado um ensaio de co-cultura para caracterização detalhada de produto de CAR anti-CD19. Uma abordagem de ELISA MSD®, Luminex® e Quantikine® de 44 analitos, juntamente com a citometria de fluxo de múltiplos parâmetros, é usada para avaliação da produção de citocinas e da situação de ativação de células T (Tabela 5). Os tipos de amostra incluem produto criopreservado, células K562 manipuladas para expressar CD19 (alvo de CAR) e células K562 manipuladas para expressar NGFR (evidência de atividade fora do alvo). As células T colhidas a partir da co-cultura são analisadas com o uso do painel de caracterização de produto descrito na Tabela 3. Tabela 5. Painel de co-cultura de citocina (MSD®, Luminex®) Citocinas Marcadores e Citocinas de Quimiocinas Efetores homeostáticas citocinas imunomodulação imunes imunes inflamatórias IL-15 IL-6 IL-13 IL-8 Granzima A IL-7 IL-1α IL-4 MCP-1 Granzima B IL-2 IL-1β IL-5 MCP-4 sFASL IL-17α IL-10 MIP-1α Perforina TNFα IFN-у MIP-1β sCD137 TNFβ IL-12p40 IP-10 GM-CSF IL-12p70 TARC IL-16 Eotaxina Eotaxina-3

MDC

[0289]Os ensaios multiparamétricos podem ser usados para avaliação de níveis séricos longitudinais de quimiocina, citocina e efetores imunes para monitorar as alterações de expressão de analito sérico no contexto da expansão, fenótipo e persistência de células T CAR anti-CD19. Os recursos de resposta objetiva e correlatos de segurança são avaliados em relação às alterações observadas nos analitos séricos.

As amostras de soro de paciente longitudinal são processadas e criopreservadas. As amostras de soro longitudinais (Dia 5, Dia 0, Q3D começando no dia 1 e, então, a cada dois dias através de hospitalização, Semana 2, Semana 4) e coleta de sangue adicional incluem retiradas a cada 4 semanas antes de utomilumabe, 2 e 6 dias após cada administração de utomilumabe para alinhar com a administração de utomilumabe. A avaliação pode incluir os analitos descritos na Tabela 6. Tabela 6. Painel de analito de soro (MSD®, Luminex® e Quantikine®) Citocinas Marcador Citocinas de Quimiocin Efetore Citocinas Outros homeostátic es e imunomodula as s angiogênic as imunes citocinas ção imunes as inflamatóri as IL-15 IL-6 IL-13 IL-8 Granzi FGF-2 IL1Rα ma A IL-7 IL-1α IL-4 MCP-1 Granzi sICAM-1 IL1Rβ ma B IL-2 IL-1β IL-5 MCP-4 sFASL sVCAM-1 Ferriti na IL-17α IL-10 MIP-1α Perforin VEGF a TNFα IFN-у MIP-1β VEGF-C TNFβ IL-12p40 IP-10 VEGF-D GM-CSF IL-12p70 TARC PLGF CRP IL-16 Eotaxina SAA Eotaxina- 3

MDC

[0290]As amostras de soro de paciente são avaliadas pré-infusão (linha de base), no Dia 28 e 3 meses após a infusão acerca de anticorpos anti-KTE-C19 ou anti-

utomilumabe. As amostras de soro que mostram evidência de formação de anticorpos anti-KTE-C19 e/ou anti-utomilumabe são avaliadas quanto à presença de formação de anticorpos neutralizantes.

[0291]O líquido cefalorraquidiano (CSF), bem como quaisquer amostras adicionais do sujeito (por exemplo, líquido pleural) pode ser coletado a partir de pacientes que desenvolvem toxicidade neurológica ou CRS para permitir a avaliação de níveis de citocinas e quimiocinas inflamatórias e níveis e fenótipos de células T CAR anti-CD19 de infiltração. Os painéis de citometria de fluxo e MSD/Luminex descritos anteriormente são aproveitados para essa avaliação.

[0292]Um resumo da análise de amostra a ser realizada é fornecido na Tabela 7.

Tabela 7. Plano de análise da amostra Item Análises de amostra a serem realizadas 1 SANGUE: Células T e B; Fluxo; PBMC Longitudinal 2 SANGUE: células T CAR Fluxo; PBMC Longitudinal 3 SANGUE: CITOCINAS (MSD e Luminex); Soro / plasma Longitudinal SANGUE: células T CAR 4 PCR; PBMC Longitudinal 5 Soro/ plasma: sCD137; Linha de base e longitudinal FFPE: IHC (alvo e exploratório) expressão de CD3, Ki-67, CD8, CD137, PD1 e PDL1 em tumor e células imunes de infiltração de tumor que 6 incluem células T CAR e estroma; Biópsia pós-dose e linha de base FFPE: Classificação Molecular: COO (assinatura gênica preferencial em 7 relação à Hans); Linha de base FFPE: Marcadores de atividade de célula T CAR; Biópsia pós-dose e linha 8 de base 9 FFPE: RNA (análise de transcrição); Biópsia pós-dose e linha de base 10 FFPE: Escore imunológico (IHC); Biópsia pós-dose e linha de base FFPE: Classificação Molecular: subtipos: BCL2/MYC D/T positivo ; Linha 11 de base (FISH e IHC) 12 FFPE: DNA (sequenciamento); Biópsia pós-dose e linha de base 13 Sequenciamento TCR/ BCR Exemplo 3: Análise de biópsia de tecido pareada

[0293]A coleta de biópsias de tumor com agulha de núcleo ocorre na linha de base (pré-condicionamento) e na pós-infusão de célula T de produto, no dia 7 a 14 ou em torno do dia 7 a 14, coincidindo amplamente com o pico de expansão de produto no sangue. O cronograma de coleta de biópsia pareado é mostrado na Figura 8. FFPE de biópsia de agulha de núcleo será criado em campânulas de 120 ml que contêm 60 ml de formalina tamponada neutra (fixador para FFPE), criofrascos de 1,5 ml (FFT) e identificações adequadas. O material de biópsia de agulha de núcleo é colocado no fixador (3 a 4 núcleos) para processamento em FFPE. Os núcleos remanescentes (1 a 2) são colocados imediatamente em um criofrasco de 1,5 ml para o congelamento rápido em nitrogênio líquido (LN2) ou pasta fluida de gelo seco/etanol. As amostras podem ser armazenadas a -80 °C. A Figura 9 resume os esquemas de processamento de amostra para biópsias de agulha de núcleo.

[0294]A análise a seguir é realizada em biópsia de tecido pareada para avaliar o efeito antitumoral de produtos no contexto de linfoma de células B grandes refratário ou DLBCL r/r: IHC - Infiltrado imunológico Detecção de CD19 CAR (abordagem de hibridação in situ, FISH e ISH) CD25 e CD107α (evidência de ativação e degranulação de CAR) Ki-67 (evidência de expansão intra-tumoral de CAR) PD-1 (evidência de exaustão de CAR) IHC - Tumor CD19 (antígeno alvo de CAR) CD22 (prevalência em lesões negativas para CD19) PD-L1/2 (resistência mediada por checkpoint) Caspase 3 (evidência de morte celular de tumor dirigida a CAR)

Análise/objetivos adicionais da IHC Avaliação da proximidade de célula de tumor/célula T CAR Desenvolvimento de detecção de produto de CAR Desenvolvimento de parceiro de recurso de imaginologia correlativa

[0295]Adicionalmente, as análises de transcrição e sequenciamento de tumor podem ser realizadas com o uso de NanoString (Immunosign™) para análise de expressão genética com o uso de formatos de amostra fresca ou fixa (isto é, FFPE). Os conjuntos de códigos disponíveis comercialmente foram desenvolvidos para determinar padrões de expressão no infiltrado imune (painel imune PanCancer - composição de infiltrado, evidência de regulação de checkpoint) e também marcadores de inflamação (painel de Inflamação humana - marcadores adicionais para fornecer evidências de ativação). A criação de painéis personalizados “adequados à finalidade” pode ser projetada Alternativamente, a micromatriz de conteúdo maior pode ser buscada para expandir o escopo dos genes analisados quanto à expressão (isto é, plataformas de micromatriz de conteúdo alto Almac ou Agilent). A Figura 10 mostra uma vista esquemática de marcadores e abordagens de análise que podem ser empregados para avaliar amostras de biópsia de paciente.

[0296]A análise IHC é usada para determinar a presença, fenótipo e função de células T de produto, expressão de tecido de tumor do alvo de produto e sua localização de microambiente relativa. A presença prolongada de células T ativadas dentro do tecido de tumor iria indicar uma reação imune localizada a longo prazo ou um confinamento mediado imunologicamente de tumor, como mecanismo de ação primário para PRs duráveis. A presença de células T negativas para CAR dentro de tais lesões pode sugerir um emprego potencial de células T endógenas que reconhecem alvos de tumor não relacionados.

[0297]A presença de um microambiente de tumor anti-inflamatório (presença de Treg, expressão de tumor PD-L1/2 regulada de modo ascendente, etc.) pode ser avaliada por meio da análise de biópsias a partir de lesões recidivas ou novas. Uma análise da expressão alvo, juntamente com outros marcadores (por exemplo, CD22 ou outros antígenos de CD relevantes), bem como o algoritmo Hans completo, incluindo o monitoramento da desregulação de c-myc, bcl-2, bcl-6 (relevante para a indicação de NHL), para documentar a evolução do tumor, a perda de alvo potencial e a expressão de outros alvos podem ser realizadas. Adicionalmente, a análise da presença e fenótipo de células T de produto dentro das lesões de tumor pode ser determinada.

[0298]A análise de transcrição de célula única pode ser realizada com o uso de produto de pré-infusão (antígeno virgem e experimentado) e PBLs de paciente longitudinais criopreservados (por exemplo, do Dia 5, Dia 0, Dia 7, Semana 2, Semana 4, Mês 3, Mês 6, Mês 9, Mês 12, Mês 15, Mês 18, Mês 24, Mês 36, Mês 48, Mês 60, Mês 72 e anualmente, depois disso conforme aplicável). O produto de pré-infusão e PBLs longitudinais são analisados no nível de célula única quanto a padrões de expressão de transcrições de RNA com o uso de um painel de ensaio racionalmente projetado. O projeto de painel inclui marcadores para identificação de células T CAR e também marcadores de linhagem, ativação e exaustão Exemplo 4: Monitoramento de doença residual mínima (MRD) e BCR/ TCR Doença residual mínima (MRD)

[0299]A tecnologia de Adaptive Biotechnologies ClonoSIGHT® é usada para medir MRD de maneira altamente sensível. A avaliação do DNA do tumor circulante (ctDNA) no diagnóstico e durante o curso de terapia com o uso da plataforma de sequenciamento de alto rendimento da Adaptive para identificação e medição de genes de imunoglobulina específicos de tumor é avaliada em uma amostra de pré-tratamento seguido de monitoramento longitudinal. A avaliação de marcadores genéticos de doença tem uma sensibilidade de 10e-6 e é realizada com o uso de sangue periférico de paciente.

Essa abordagem pode demonstrar monitoramento superior de doença em relação à imaginologia por TC e também a depuração de doença molecular quando uma CR é determinada.

[0300]As amostras adaptativas (sangue periférico) coletadas no período de inscrição (calibração), aspirado iniciado no momento da avaliação OR, longitudinalmente a cada 3 meses até 1 ano, mês 18 e mês 24 são usadas para suportar MRD em sujeitos determinados como sendo submetidos a uma resposta completa (CR) Monitoramento BCR/TCR

[0301]A tecnologia Adaptive Biotechnologies ImmunoSEQ® é usada para caracterizar a diversidade de receptor de células B (BCR) nas biópsias de DLBCL ou linfoma de células B grandes refratário em série (pré-infusão, pós-infusão e recidiva). A avaliação de diversidade de BCR pode ser usada para identificar ou confirmar clones malignos durante o curso da terapia, bem como confirmar a recidiva do tumor original em oposição a malignidades secundárias. Em segundo lugar, o sequenciamento de BCR de linfócitos de sangue periférico é usado para confirmar a recuperação de repertório de células B normais.

[0302]A avaliação de diversidade de TCR no produto pré-infusão, sangue pós- infusão e biópsias seriais é usada para entender as alterações de diversidade de células T durante o curso do tratamento. O monitoramento da expansão de sequências de TCR específicas para CAR T originalmente presentes no produto que se expande e se torna dominante nas lesões sanguíneas ou tumorais pode informar sobre a presença e natureza de clones de células T reativos que desempenham um papel significativo na depuração de tumor. Os dados dessa natureza podem ser usados para identificar clones de células T que, de preferência, expandem e erradicam células de tumor por meio de mecanismos de “espalhamento de epítopos”, envolvendo reatividade contra epítopos não relacionados, como aqueles associados a neoantígenos.

[0303]Os tipos de amostra e a temporização necessária para suportar MRD em sujeitos determinados como sendo submetidos a uma resposta completa (CR) para o sequenciamento de BCR incluem biópsia de tumor pré-infusão, biópsia de tumor pós- infusão (Dia 7 a 14), biópsia de tumor de recidiva, PBMC longitudinal (conforme aplicável Mês 3, Mês 6, Mês 12, Mês 18, Mês 24).

[0304]Os tipos de amostra e a temporização necessária para suportar MRD em sujeitos determinados como sendo submetidos a uma resposta completa (CR) para o sequenciamento de TCR incluem biópsia de tumor pré-infusão, biópsia de tumor pós- infusão (Dia 7 a 14), biópsia de tumor de recidiva, células T CAR de produto, células T submetidas à aférese, PBMC longitudinal (Dia 14, Dia 28, Mês 3, Mês 6 e Mês 12).

Exemplo 5:

[0305]Esse estudo examinou o efeito de Utomilumabe nas células T CAR anti- CD19. Nesse estudo, as células foram incubadas com um anticorpo de ferramenta, que foi anteriormente mostrado como estimulando ou ativando as células T CAR; na presença ou ausência de Utomilumabe. A produção ou níveis de várias citocinas, quimiocinas e moléculas efetoras (analitos) foi usada para avaliar os efeitos potenciais. As células T CAR anti-CD19 foram geradas a partir de células mononucleares de sangue periférico de sujeitos saudáveis (A, B, C, D e E). As células T CAR anti-CD19 em meio R10 (1 x 10 6 células/ml) foram incubadas de um dia para o outro a 37 °C e CO 2 a 5%. As placas de 96 poços foram revestidas com o anticorpo de ferramenta (0,33 μg/ml), Utomilumabe (concentração de titulação de 0 a 100 μg/ml por uma diluição de 3 vezes) ou um anticorpo de controle que não se liga a 4-1BB (concentração de titulação de 0 a 100 μg/ml por uma diluição de 3 vezes) de um dia para o outro a 4 °C. As placas revestidas foram lavadas duas vezes com o uso do meio R10 (RPMI 1640 com 10% de FBS) e adicionadas com 1 x 105 células T CAR anti-CD19. O volume final total de cada poço foi ajustado para 200 μl com o uso de meio R10. Após a incubação de um dia para o outro a 37 °C e 5% de CO2, os sobrenadantes foram colhidos e analisados com o uso do ensaio multiplex MILLIPLEX MAP Human CD8+ T Cell Magnetic Bead Panel Premixed 17 Plex - Immunology Multiplex Assay. O fold change de pico foi calculado dividindo-se a saída de analito na presença de Utomilumabe por aquele na presença do anticorpo de controle na concentração correspondente. A diferença em vezes de pico através da concentração de titulação para cada analito é mostrada na Tabela 8.

[0306]Os resultados mostraram que, na presença de Utomilumabe, os níveis ou produção de várias citocinas, quimiocinas e moléculas efetoras pelas células T CAR anti- CD19 (que foram estimuladas pelo anticorpo de ferramenta) foram aumentados (Tabela 8). Os níveis ou produção de IL-2 foram aumentados 1,9 a 25,9 vezes em comparação com aqueles na presença do anticorpo de controle, exceto o sujeito E, em que foi observado um aumento não específico da produção de IL-2 (Figura 14). A produção de IL-2 estava abaixo do limite de quantificação nas células que foram incubadas apenas com Utomilumabe ou apenas com o anticorpo de controle, em cada caso sem o anticorpo de ferramenta (dados em triplicata não mostrados). Isso mostra que o Utomilumabe sozinho não estimulou as células T CAR anti-CD19 a produzir IL-2.

[0307]Todas as publicações, patentes, pedidos de patentes, sequências sob os números de acesso ao banco de dados citados e referências, incluindo informações de prescrição que são mencionadas neste relatório descritivo, estão incorporados ao presente documento a título de referência com a mesma abrangência como se cada publicação, patente ou pedido de patente individual fosse específica e individualmente indicado como estando incorporado a título de referência.

No entanto, a citação de uma referência no presente documento não deve ser interpretada como um reconhecimento de que tal referência é técnica anterior à presente invenção.

Até o ponto em que qualquer uma das definições ou termos fornecidos nas referências incorporadas a título de referência se difere dos termos e discussão fornecidos no presente documento, os presentes termos e definições controlam.

Tabela 8. Fold change de pico da produção de analito por células T CAR anti-CD19 Suje GM- sCD IFN IL- Granzi IL- Granzi sF IL- IL- IL- IL- sFA MIP- MIP- TNF Perfor ito CSF 137 -γ 10 ma A 13 ma B AS 2 4 5 6 SL 1α 1β -α ina 25 5, 2, A 1,7 2,4 1,1 6,1 1,0 2,4 1,0 1,0 4,8 2,5 1,0 1,0 1,0 1,5 ,9 2 3 20, 14, 23 10 24, 2, B 10,4 4,4 6,9 2,6 15,4 1,0 3,7 5,5 5,0 5,8 2,1 4 3 ,7 ,3 6 1 3, 5, 132 1, C 3,3 2,2 3,9 3,0 1,7 2,0 1,0 1,0 2,0 1,0 2,5 1,9 1,5 2 7 ,3 9 2, 2, 1, D 2,0 1,4 2,0 3,5 1,2 1,7 2,2 1,0 2,2 1,7 2,1 1,7 1,7 1,5 9 5 0 1, 1, 1, E 1,6 1,8 1,9 1,9 1,4 1,7 1,9 1,0 1,7 1,5 1,7 1,7 1,9 1,1 9 8 3

SEQUÊNCIAS E NÚMEROS DE SEQ ID

[0308]A presente revelação compreende várias sequência de polipeptídeos.

Para conveniência, a Tabela 9 abaixo correlaciona cada sequência com sua descrição e SEQ ID NO correspondentes. Tabela 9. Números de SEQ ID Utomilumabe SEQ ID NO: 1. EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYSFS

VH TYWISWVRQMPGKGLEWMGKIYPGDSYTN YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASD

TAMYYCARGYGIFDYWGQGTLVTVSS Utomilumabe SEQ ID NO: 2. EVQLVQSGAEVKKPGESLRISCKGSGYSFS

HC TYWISWVRQMPGKGLEWMGKIYPGDSYTN YSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASD TAMYYCARGYGIFDYWGQGTLVTVSSASTK GPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFP EPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS LSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKV DKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPP KPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQF NWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVS VLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEK TISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVS LTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTT PPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVF

SCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK Utomilumabe SEQ ID NO: 3. SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDNIGDQ

VL YAHWYQQKPGQSPVLVIYQDKNRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATY

TGFGSLAVFGGGTKLTVL Utomilumabe SEQ ID NO: 4. SYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDNIGDQ

LC YAHWYQQKPGQSPVLVIYQDKNRPSGIPER FSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCATY TGFGSLAVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLF PPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWK ADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLS LTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPT

ECS Utomilumabe SEQ ID NO: 5. STYWIS H-CDR1

Utomilumabe SEQ ID NO: 6. KIYPGDSYTNYSPSFQG H-CDR2 Utomilumabe SEQ ID NO: 7. RGYGIFDY H-CDR3 Utomilumabe SEQ ID NO: 8. SGDNIGDQYAH L-CDR1 Utomilumabe SEQ ID NO: 9. QDKNRPS L-CDR2 Utomilumabe SEQ ID NO: 10 ATYTGFGSLAV L-CDR3

.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Método para tratar um linfoma de célula B ou leucemia em um paciente que precisa do mesmo CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e um agonista de 4- 1BB (CD137).

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é uma imunoterapia autóloga ou alogênica.

3. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 e 2, CARACTERIZADO pelo fato de que as células T são geneticamente modificadas ex vivo.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, CARACTERIZADO pelo fato de que as células T são geneticamente modificadas por transdução viral, transdução retroviral ou transdução lentiviral.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19, é geneticamente modificada para expressar um receptor de antígeno quimérico (CAR), sendo que o dito CAR compreende um fragmento variável de cadeia única anti-CD19 (scFv) ligado a domínios co-estimulatórios CD28 e CD3-zeta.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é axicabtageno ciloleucel.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o agonista de 4-1BB (CD137) é uma molécula de ligação a antígeno ou fragmento da mesma.

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende três CDRs de uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e três CDRS de uma sequência de aminoácidos de região VL apresentada em SEQ ID NO: 3.

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo isolado, ou porção de ligação a antígeno do mesmo, que compreende: (a) uma H-CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:5; (b) uma H-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:6; (c) uma H-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:7; (d) uma L- CDR1 conforme apresentado em SEQ ID NO:8; (e) uma L-CDR2 conforme apresentado em SEQ ID NO:9; e (f) uma L-CDR3 conforme apresentado em SEQ ID NO:10.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o agonista de 4-1BB (CD137) é um anticorpo monoclonal completamente humano.

11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o agonista de 4-1BB (CD137) compreende uma sequência de aminoácidos de região VH conforme apresentado em SEQ ID NO:1 e uma sequência de aminoácidos de região VL apresentada em SEQ ID NO: 3.

12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o agonista de 4-1BB (CD137) compreende uma sequência de aminoácidos de cadeia pesada conforme apresentado em SEQ ID NO:2 e uma sequência de aminoácidos de cadeia leve conforme apresentado em SEQ ID NO:4, com a condição de que o resíduo de lisina C-terminal de SEQ ID NO:2 esteja opcionalmente ausente.

13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o agonista de 4-1BB (CD137) é utomilumabe.

14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o linfoma de célula B ou leucemia é selecionado a partir do grupo que consiste em leucemia linfoide aguda (ALL), linfoma relacionado a AIDS, linfoma de células B grandes positivo para ALK, linfoma de Burkitt, leucemia linfocítica crônica, CLL), linfoma de Hodgkin clássico, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), linfoma de células B grandes mediastinal primário (PMBCL), linfoma folicular, linfoma de células B grandes intravascular, linfoma de células B grandes que surge em doença de Castleman multicêntrica associada a HHV8, granulomatose linfomatoide, linfoma linfoplasmocítico, linfoma de células do manto (MCL), linfoma de célula B de zona marginal (MZL), linfoma de tecido linfático associado à mucosa (MALT), Nodal linfoma de célula B de zona marginal (NMZL), linfoma de Hodgkin predominante de linfócito nodular, linfoma de não Hodgkin, linfoma plasmablástico, linfoma de sistema nervoso central primário, linfoma de efusão primário, linfoma de zona marginal esplênico (SMZL), e macroglobulinemia de Waldenström, linfoma de células B grandes refratário ou recidivo, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) não especificado de outro modo, linfoma de células B de alto grau e DLBCL que surge de linfoma folicular.

15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o linfoma de célula B é selecionado a partir do grupo que consiste em linfoma de células B grandes refratário ou recidivo, linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) não especificado de outro modo, linfoma de células B grandes mediastinal primário (PMBCL), linfoma de células B de alto grau e DLBCL que surge de linfoma folicular.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o linfoma de célula B é linfoma difuso de células B grandes refratário.

17. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e o agonista de 4-1BB (CD137)) são administrados após duas ou mais linhas de terapia sistêmica em um paciente.

18. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é administrada ao paciente por meio de infusão intravenosa em uma dose entre cerca de 1 × 106 e cerca de 2 × 106 células T viáveis positivas para CAR por kg de peso corporal até uma dose máxima de cerca de 1 x 10 8 células T viáveis positivas para CAR.

19. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é administrada apenas uma vez.

20. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 19, CARACTERIZADO pelo fato de que a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é administrada mais de uma vez.

21. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o agonista de 4-1BB (CD137) é administrado por meio de infusão intravenosa.

22. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o agonista de 4-1BB (CD137) é administrado em uma dose que se situa na faixa de cerca de 1 mg a cerca de 200 mg.

23. Método, de acordo com a reivindicação 22, CARACTERIZADO pelo fato de que o agonista de 4-1BB (CD137) é administrado em uma dose de cerca de 1 mg, cerca de 10 mg, cerca de 30 mg, cerca de 100 mg ou cerca de 200 mg.

24. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e o agonista de 4-1BB (CD137) são administrados simultaneamente.

25. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 23, CARACTERIZADO pelo fato de que a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é administrada antes do agonista de 4-1BB (CD137).

26. Método, de acordo com a reivindicação 25, CARACTERIZADO pelo fato de que a primeira dose do agonista de 4-1BB (CD137) é administrada no dia seguinte da infusão de imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19.

27. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, CARACTERIZADO pelo fato de que a imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 é administrada após o agonista de 4-1BB (CD137).

28. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que a dosagem de agonista de 4-1BB (CD137) continua até que os pacientes demonstrem remissão completa, doença progressiva/sem resposta ou durante cerca de 1 ano.

29. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o agonista de 4-1BB (CD137) é administrado cerca de a cada 4 semanas.

30. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que o paciente é administrado com um regime de quimioterapia de condicionamento antes da administração da imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19 e do agonista de 4-1BB (CD137).

31. Método, de acordo com qualquer das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende adicionalmente monitorar o paciente após a administração acerca de sinais e sintomas de uma reação adversa.

32. Método, de acordo com a reivindicação 31, CARACTERIZADO pelo fato de que a reação adversa é selecionada a partir do grupo que consiste em síndrome de liberação de citocinas (CRS), uma toxicidade neurológica, uma reação de hipersensibilidade, uma infecção grave, um citopenia e hipogamaglobulinemia.

33. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende adicionalmente monitorar o paciente após a administração acerca de alterações em marcadores de fenótipo e ativação de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) do paciente.

34. Método, de acordo com a reivindicação 33, CARACTERIZADO pelo fato de que os marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente compreendem marcador de célula pan-T, marcador de célula T citotóxico, marcador de célula T de diferenciação, marcador de diferenciação, IL-2 receptor, marcador de ativação, PD1, 4- 1BB, marcador de célula T auxiliar, marcador de granulócito, marcador de célula B, marcador de monócito/macrófago, marcador de célula NK e/ou identificação de axicabtageno ciloleucel.

35. Método, de acordo com a reivindicação 33 ou 34, CARACTERIZADO pelo fato de que os marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente são monitorados por um painel que compreende anticorpos para CD3, CD4, CD8, CD45RA, CCR7, CD122, CD27, CD28, CD95, CD57, CD107α, CD279, CD25, CD69, CD137, CD66b, CD19, CD14, CD56 e/ou CD19 CAR.

36. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 33 a 35, CARACTERIZADO pelo fato de que os marcadores são determinados por um ensaio de citometria de fluxo.

37. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende adicionalmente monitorar o soro de paciente após a administração acerca de níveis de quimiocina, citocina e/ou efetor imune.

38. Método, de acordo com a reivindicação 37, CARACTERIZADO pelo fato de que o soro de paciente é monitorado acerca de IL-15, IL-7, IL-2, IL-6, IL1α, IL-1β, IL-17α, TNFα, TNFβ, GM-CSF, CRP, SAA, IL-13, IL-4, IL-5, IL-10, IFNγ, IL-12p40, IL-12p70, IL- 16, IL-8, MCP-1, MCP-4, MIP-1α, MIP-1β, IP-10, TARC, Eotaxina, Eotaxina-3, MDC, Granzima A, Granzima B, sFASL, Perforina, FGF-2, sICAM-1.

39. Método, de acordo com a reivindicação 37, CARACTERIZADO pelo fato de que os níveis de quimiocina, citocina e/ou efetor imune são determinados com o uso de um ensaio multiplex.

40. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende adicionalmente analisar a resposta do paciente após a administração acerca da regressão [resposta completa (CR) ou resposta parcial (PR)], refratária ao tratamento [doença progressiva (PD)], recidiva ou persistente sem evidência de progressão ou regressão completa [PR prolongada ou doença estável (SD)].

41. Método, de acordo com a reivindicação 40, CARACTERIZADO pelo fato de que a análise da resposta do paciente após a administração compreende analisar os marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente que compreendem marcador de célula pan-T, marcador de célula T citotóxico, marcador de célula T de diferenciação, marcador de diferenciação, IL-2 receptor, marcador de ativação, PD1, 4-1BB, marcador de célula T auxiliar, marcador de granulócito, marcador de célula B, marcador de monócito/macrófago, marcador de célula NK e/ou identificação de axicabtageno ciloleucel.

42. Método, de acordo com a reivindicação 41, CARACTERIZADO pelo fato de que os marcadores de fenótipo e ativação de PBMCs de paciente são monitorados por um painel que compreende anticorpos para CD3, CD4, CD8, CD45RA, CCR7, CD122, CD27, CD28, CD95, CD57, CD107α, CD279, CD25, CD69, CD137, CD66b, CD19, CD14, CD56 e/ou CD19 CAR.

43. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 40 a 42, CARACTERIZADO pelo fato de que o soro de paciente é monitorado acerca de IL-15, IL-7, IL-2, IL-6, IL1α, IL-1β, IL-17α, TNFα, TNFβ, GM-CSF, CRP, SAA, IL-13, IL-4, IL-5, IL-10, IFNγ, IL-12p40, IL-12p70, IL-16, IL-8, MCP-1, MCP-4, MIP-1α, MIP-1β, IP-10, TARC, Eotaxina, Eotaxina-3, MDC, Granzima A, Granzima B, sFASL, Perforina, FGF-2, sICAM-1, sVCAM-1, VEGF, VEGF-C, VEGF-D, PLGF, IL1Rα, IL1Rβ, e/ou Ferritina.

44. Método para tratar um linfoma de célula B ou leucemia em um paciente que precisa do mesmo CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c)monitorar o paciente após a administração acerca de sinais e sintomas de uma reação adversa.

45. Método para tratar linfoma difuso de células B grandes refratário em um paciente que precisa do mesmo CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19;

(b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c)monitorar o paciente após a administração acerca de alterações em marcadores de fenótipo e ativação de células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) de paciente.

46. Método para tratar linfoma difuso de células B grandes refratário em um paciente que precisa do mesmo CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c)monitorar o soro de paciente após a administração acerca de níveis de quimiocina, citocina e/ou efetor imune.

47. Método para tratar linfoma difuso de células B grandes refratário em um paciente que precisa do mesmo CARACTERIZADO pelo fato de que compreende: (a) administrar ao paciente uma imunoterapia de célula T geneticamente modificada dirigida a CD19; (b) administrar ao paciente um agonista de 4-1BB (CD137); e (c) analisar a resposta do paciente após a administração acerca da regressão [resposta completa (CR) ou resposta parcial (PR)], refratária ao tratamento [doença progressiva (PD)], recidiva ou persistente sem evidência de progressão ou regressão completa [PR prolongada ou doença estável (SD)].