JP6700282B2 - 生物学的液体の連続処理 - Google Patents
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Description
第1の用途は、磁気ビーズとのリンパ球T細胞、リンパ球B細胞又は造血幹細胞のようなヒト血液細胞又は幹細胞の磁気ビーズの混合に関する。
・予備洗浄工程10は、通常は、アフェレーシス工程、血小板除去、及び適用可能であればDMSO除去から細胞をベースとする生成物を洗浄することを含む。生成物を所定の容量に再懸濁して、濃縮されすぎていない細胞を得、細胞の脱水を防止する。
・試薬添加工程20は、特定量の磁気ビーズ及び/又は細胞染色剤又は活性化試薬を加えることを含む。
・インキュベーション工程30では、細胞を遠心処理し、分離チャンバの内部又は外部、例えばSepaxシステムで、特定の時間、添加試薬と混合する。これが外で実施される場合、混合及び温度制御のためにSmart−Maxのような装置に細胞バッグを設置する。
・後洗浄工程50は、試薬(例えば、ビーズ)を除去する。
第2の用途は、ウイルスの添加による、リンパ球T細胞又は造血幹細胞のような他のヒト細胞の形質導入に関する。
・洗浄工程60は、通常、アフェレーシス処理又は細胞培養由来の細胞をベースとする生成物を洗浄緩衝液で洗浄する。
・希釈工程70では、特定量のウイルスがSepaxシステムの分離チャンバ内の細胞に添加される。
・次いで、これをSepax遠心処理チャンバ内で、高いg力及び長いスピン持続時間を有する高回転工程80に供する。
・希釈工程90では、培地を加えて目標の容量に到達させる。
・分割工程100では、全容量がn個の小さなバッグに分割される。これには、バッグの交換やクランプの開閉を手動で行う必要がある。
この用途は、以下の処理:洗浄、分離、希釈、容量調整の順次実行を示す。
・解凍操作110は細胞生成物を解凍するのに役立つ。
・洗浄操作120において、凍結保護剤が除去される。
・サンプリング操作130において、洗浄された細胞はサンプリングのために出力バッグに抽出される。この操作には、試料を採取するための手動工程が必要である。
・希釈工程140では、細胞濃度が患者の用量に合わせて調整される。
・第1の抽出ステップ150は、正確な患者への投薬のために、所定量の細胞を移送バッグに抽出する。これには、バッグの交換及びクランプの開閉を手動で行う必要がある。
・第2の抽出工程170は、品質管理(無菌試験)のための最後のm個のバッグを準備する。通常、m=1である。
ビーズ洗浄の用途のためには、1又は2個のアフェレーシス血液ユニットを、入力スパイク301を介してキットに接続してもよい。次いで、血液成分除去ユニットを、入力フィルタ372でろ過して、残渣、凝固物及び不要な残留物を除去する。
ウイルス形質導入の用途では、最初の工程は、アフェレーシスユニットを入力スパイク301と接続し、生理食塩水をスパイク304で接続し、ウイルスを含む溶液をバッグ304aに添加し、バッグ304b内の細胞栄養素を除去し、最後にスパイク302を介して複数の出力バッグを3つ以下のバッグに接続する。
この用途では、まず凍結保存された血液ユニットが解凍される。次いで、解凍された血液溶液のバッグが入力スパイク301に接続され、溶液がチャンバ300に圧送される。次いで、前に接続された生理食塩水がスパイク304を介して接続され、又は利用可能なバッグ304aがチャンバ300内でアフェレーシスユニットの洗浄のために使用される。細胞が洗浄されると、チャンバ300内の一部又は全ての細胞溶液が収集バッグ305内で抽出され、次いでサンプリングポート382を介して細胞濃度を測定するために採取される試料が採取される。次いで、用量は、再びチャンバ300の内部にポンプ輸送され、スパイク304又は利用可能なバッグ304aに接続されたバッグからの生理食塩水で希釈され、次いで出力スパイク302に接続された、いくつかのバッグに分割される。
Claims (11)
- 生物学的液体の処理又は混合のための中空円筒遠心処理チャンバ内での洗浄、インキュベーション、形質導入、分離、密度勾配分離、希釈及び容量調整を含む処理工程、及び/又は上記生物学的液体を試薬及び/又は希釈剤と混合することによる、全血、アフェレーシス血液、骨髄血液、臍帯血、軟膜又は培養細胞のような、不透明な生物学的液体及び透明な生物学的液体の連続的処理方法であって、上記遠心処理チャンバが、処理チャンバ内の分離スペースの容量を変化させるために、その概ね円筒形である壁内にピストンのような軸方向に可動な部材を有し、上記分離スペースに生物学的液体を入力し又は上記分離スペースから生物学的液体を出力し、上記処理チャンバが、上記生物学的液体と試薬及び/又は希釈剤とを含む使い捨てセットの一部であり、上記使い捨てセットは密閉された無菌環境を構成している方法であって、
単一の使い捨てセットの一部としての単一の処理チャンバを使用し、洗浄(分離処理としての予備洗浄及び後洗浄を含む)、インキュベーション、形質導入、分離、密度勾配分離、希釈及び容量調整から選択される少なくとも3つの異なる処理を実行し;上記各処理は、単一の使い捨てセットの処理チャンバ内の所与の処理プロファイルに従って1回行われるか、又は複数回繰り返され;上記各処理は、上記可動部材を軸方向に移動させることによって生ずる処理チャンバ内への取り入れ、上記チャンバ内での操作、及び上記可動部材を軸方向に移動させることによって生じる処理チャンバからの出力を含み;上記少なくとも3つの異なる処理が、処理チャンバ内で連続的に連鎖して、処理チャンバ及びその単一の使い捨てセット内の全体的な連続操作として、異なる処理の連鎖を構成し、全ての生物学的液体、少なくとも3つの異なる処理の全てを実施するために必要な試薬及び/又は希釈剤は、全体的な連続操作のために使用される単一の使い捨てセットの閉鎖された無菌環境に含まれることを特徴とする、方法。 - 上記処理チャンバ内の全体的な連続的動作を構成する上記連鎖した処理が、以下の(i)、(ii)及び(iii)の連続的処理のうちの1つを有する、請求項1に記載の方法。
(i)予備洗浄;試薬の添加及びインキュベーション;後洗浄、
(ii)洗浄;希釈;遠心分離;希釈;生成物の容量調整、並びに
(iii)予備解凍;洗浄;サンプリング及び希釈;容量調整/抽出。 - 以下の処理:予備洗浄、試薬の添加及びインキュベーション;後洗浄が連続的に実施される、請求項2に記載の方法。
- 磁性ビーズをヒト血球細胞又は幹細胞と結合させる、請求項3に記載の方法。
- 以下の処理:洗浄;希釈;遠心分離;希釈;生成物の容量調整が連続的に実施される、請求項2に記載の方法。
- リンパ球T細胞又は他のヒト細胞によるウイルス形質導入のためのものである、請求項5に記載の方法。
- 以下の処理:予備解凍;洗浄;サンプリング及び希釈;容量調整/抽出が連続的に実施される、請求項2に記載の方法。
- 複数回用量の細胞産物の再調整用である、請求項7に記載の方法。
- 前記可動部材の位置が赤外線センサによって監視される、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- 1つの全体的な連続操作のための1つの使い捨てセットの処理チャンバ内で処理される液体の量が、処理チャンバの最大処理容量の4〜16倍である、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 上記処理チャンバが、使用者の介入なしで上記使い捨てセットのバッグを切り替えるための2つの生物学的添加物を選択するための、上記使い捨てセットのチューブを制御する2つの外部ピンチバルブを伴っている、請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。
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