CN107106744B - 生物流体的顺序处理 - Google Patents

Abstract

用于通过在中空圆柱形离心处理室(300)中的处理步骤来顺序处理不透明和透明生物流体如全血、单采血液、骨髓血液、脐带血、血沉棕黄层或培养的细胞的方法，中空圆柱形离心处理室为一次性套件的一部分。根据处理室中的给定处理配置，选自洗涤、孵育、转导、分离、密度梯度分离、稀释和体积调整中的至少三种不同程序分别进行一次或重复多次。每种程序涉及通过活塞(310)的位移进入处理室的输入、处理室中的操作和来自处理室的输出。至少三种不同程序依次顺序链式进行，以构成处理室及其一次性套件中的整个顺序操作。第一个应用是孵育，其用于将人血细胞或干细胞与磁珠结合。第二个应用是转导，病毒通过转导将外来遗传物质插入人血细胞或干细胞。第三个应用是修复生物流体以实现可重现的血细胞或干细胞的浓度和体积。

Description

生物流体的顺序处理

发明领域

本发明涉及用于通过包括洗涤、孵育、转导、分离、密度梯度分离、稀释和体积调整的方法步骤处理生物流体如全血、单采血液、骨髓血液、脐带血、血沉棕黄层或培养的细胞的系统。

发明背景

EP-B-0 912 250(C.FELL)(其内容通过引用并入本文)描述了用于将生物流体处理和分离成组分的系统，其包括用于接收待分离的生物流体和分离的组分的一组容器，以及可选的一个或多个另外的用于添加剂溶液的容器。中空离心机处理室可通过处理室与旋转驱动单元的接合而围绕旋转轴旋转。处理室具有用于待处理的生物流体和用于处理的生物流体组分的轴向入口/出口。该入口/出口进入可变体积的分离空间，其中进行生物流体的整个离心处理。处理室包括从处理室的端壁延伸的大致圆柱形壁，该大致圆柱形壁在其中限定中空处理室，其占据与旋转轴同轴的中空开放圆柱形空间，轴向入口/出口设置在所述端壁与大致圆柱形壁同轴，以进入中空处理室。处理室在大致圆柱形壁内包含可轴向移动的构件，例如活塞。可变体积的分离空间由处理室的上部通过大致圆柱形壁和容纳在处理室的大致圆柱形壁中的可轴向移动的构件限定，其中可移动构件的轴向移动改变分离空间的体积，可移动构件在处理室内可轴向移动，以在离心处理之前或期间通过入口使选定量的待处理的生物流体进入分离空间，并且在离心处理期间或之后通过出口从分离空间排出处理的生物流体组分。提供了用于监视可移动构件的位置从而控制进入的生物流体的量和分离的组分的排出的手段。该系统还包括分配阀配置，用于建立处理室与所选定的容器之间的选择性连通，或用于将处理室和容器不连通。

根据EP-B-1 144 026，此类系统布置成以分离和非分离运输模式操作，这提供了使用包括先前未设想的新应用的系统的更大可能性，例如造血干细胞的分离和通常的实验室处理。

根据EP-B-0 912 250和EP-B-1 144 026的系统设计用于使用作为构成封闭的无菌环境的一次性套件的一部分的处理或混合室来操作分离生物流体，并且已经被证明对于许多分离应用、特别是对于来自供体或患者的组分的在线分离是多价的。该系统已由Biosafe SA以商标Sepax商业化。

以前使用Sepax系统主要用于处理血液和血液衍生物产品，其含有成体干细胞，例如来自如骨髓、脐带血或患者动员后的外周血的血液来源的血沉棕黄层中悬浮的造血干细胞、间充质干细胞或脂肪来源的干细胞。

迄今为止最典型的应用是血液或血液衍生物的体积减少处理。通过这样做，血浆和大多数红细胞被耗尽，并且基本上包含悬浮在剩余血浆中的白细胞和干细胞以及红细胞的血沉棕黄层被收集在可选择的体积中。根据所选择的最终体积，可以根据用户的需要添加更多的血浆和红细胞。

经常使用Sepax技术的第二个应用是洗涤应用。如果在48小时内没有使用，干细胞浓缩产品通常是冷冻保存的。一旦含有干细胞的细胞产品需要移植，就进行解冻程序，然后推荐使用洗涤程序来消除由残留的有毒二甲基亚砜(DMSO)产生的移植过程中的副作用。

第三个应用由将密度梯度介质与想要减小体积的所需产品混合组成。在沉淀过程中，梯度密度介质将在离心过程中在血浆和单核细胞和淋巴细胞群体之后但在粒细胞和红细胞之前产生一层。Sepax技术能够提取悬浮在不含红细胞的介质中的白细胞和干细胞。当供体和受体之间存在轻微或重大不相容时，这尤其适用于移植。

迄今为止使用Sepax技术进行的大多数应用都集中在处理含有干细胞的血液和血液衍生物，并且其体积有限，通常比880ml低得多。此外，已知的Sepax应用基本上限于对产品进行最常见的一种单一处理功能，例如体积浓缩或洗涤应用。Sepax的另一个限制是待处理的产品在产品中都含有红细胞，并且该设备使用光学传感器作为确定红细胞与活塞间隙(in-piston gap)之间的过渡的基本元件。

已知用于处理生物流体的其它系统，例如WO 2009/072003的系统，其包含包括离心机滚筒和耦合样品分离单元的样品处理单元。这样的系统可以执行顺序处理程序，但是它们的配置和操作与Sepax系统是截然不同的，因为它们不提供用于改进具有其固有局限性的Sepax系统的有用指导。

发明概述

本发明涉及用于通过在中空圆柱形离心处理或混合室中的包括洗涤、孵育、转导、分离、密度梯度分离、稀释和体积调整的工艺步骤顺序处理不透明和透明的生物流体如全血、单采血液、骨髓血液、脐带血、血沉棕黄层或培养的细胞的方法，其用于处理或混合生物流体和/或将生物流体与试剂和/或稀释剂混合，其中离心处理室在其大致圆柱形壁内容纳有可轴向移动的构件，例如活塞，其可轴向移动以改变处理室内的分离空间的体积以使生物流体进入分离空间或从分离空间输出生物流体，其中处理室是含有生物流体和试剂和/或稀释剂的一次性套件的一部分，一次性套件构成封闭的无菌环境。

根据本发明，使用单个处理室作为一次性套件的一部分，进行选自洗涤、孵育、转导、分离、密度梯度分离、稀释和体积调整中的至少三种不同程序；根据处理室中的给定处理配置，每种程序进行一次或重复多次。每种所述程序涉及通过轴向移动可移动构件而产生的进入处理室、处理室中的操作和通过轴向移动可移动构件而产生的来自处理室的输出。至少三种不同程序在处理室中依次顺序链式进行，以构成作为处理室及其一次性套件中的整个顺序操作的不同程序的链式顺序。所有生物流体、用于执行所有所述至少三种不同程序所必需的试剂和/或稀释剂包含在用于整个顺序操作的单个一次性套件的封闭无菌环境中。

在一个应用中，顺序进行以下程序：预洗；加入试剂并孵育；后洗。该应用例如用于将磁珠与人血细胞或干细胞结合。

在另一个应用中，顺序进行以下程序：洗涤；稀释；离心分离；稀释；产品的体积调整。该应用例如用于用淋巴细胞T细胞或其他人细胞的病毒转导。

在又一个应用中，顺序进行以下程序：初步解冻；洗涤；取样和稀释；体积调整/提取。该应用例如用于多剂量的细胞产品的修复配量(recondition dosing)。

作为说明，各种程序通常涉及以下步骤。

洗涤程序通常涉及以下步骤：用基于细胞的产品填充处理室，用洗涤溶液填充处理室的剩余容积，以给定的G力并在给定时间t期间旋转，提取洗涤溶液于废物袋中，并最终提取含有细胞的期望的最终体积于输出收集袋中。

孵育程序通常涉及以下步骤：用基于细胞的产品填充处理室，用孵育珠填充处理室，以规则的时间间隔通过处理室的双向混合进行孵育，并最后提取并收集孵育的产品于收集袋中。

转导程序通常涉及以下步骤：用基于细胞的产品填充处理室中的细胞产品，用生物病毒填充处理室，以给定的G力并在给定时间t期间旋转进行转导，提取转导的产品于输出收集袋中。

分离程序通常涉及以下步骤：用基于细胞的产品填充处理室，通过在给定的G力并在给定时间t期间旋转将产品分离成组分，从室中提取出不需要的组分于废物袋中和含有细胞的组分层于输出收集袋中。

密度梯度程序通常涉及以下步骤：用梯度密度介质填充旋转处理室，用基于细胞的产品缓慢填充旋转处理室，通过在给定的G力并在给定时间t期间旋转将溶液分离成组分，从室中提取出不需要的组分于废物袋中和含有细胞的组分层和部分梯度密度介质于输出收集袋中。

浓缩程序通常涉及以下步骤：用基于细胞的产品填充处理室，通过在给定的G力并在给定时间t期间离心浓缩细胞，从室中提取出不需要的组分于废物袋中和通过收集压实的细胞于输出收集袋中。

稀释程序通常涉及以下步骤：如果需要实现所需的最终细胞浓度，则表征初始的基于细胞的产品；用基于细胞的产品填充处理室；基于所需的体积或细胞浓度稀释比，继续用预先计算的盐水溶液体积填充处理室，或用于将细胞悬浮在介质和滋养溶液中；处理室以规则的时间间隔双向混合，以便在处理室填充和从处理室提取流体期间混合稀释或悬浮的细胞溶液；从室中提取出稀释的细胞溶液于输出收集袋中。替代处理选择是基于所需的稀释比例将计算出的盐水或介质溶液的体积填充到处理室中，然后从室中提取出含有细胞产品的盐水或介质溶液于输出收集袋中。

体积调整程序通常涉及以下步骤：用基于细胞的产品或预稀释溶液填充处理室，选择所需输出体积和剂量的数量，通过自动切换到不同的袋子、或者在每个剂量之后暂停并要求用户选择应该提取下一剂量的目的袋子从处理室中提取多个剂量。

处理室通常包括可移动活塞，并且通过红外传感器监测活塞(或其他可移动构件)的位置。

在一个整个顺序操作的处理室中处理的液体体积可以高达处理室的最大处理体积的十六倍。例如，一个整个顺序操作的体积可以是处理室的最大处理体积的四倍、八倍或十六倍，其可以由上述处理室中的分离空间的最大体积表示。

处理室有利地与两个外部夹紧阀相关联，该两个外部夹紧阀控制一次性套件的管道用于选择两个生物添加剂，用于在不需要用户干预的情况下切换一次性套件的袋子。

用于执行本发明方法的系统通常包括容纳一次性组件的中空离心或混合处理室的机柜，例如根据已知的Sepax技术。

链式进行不同程序的本发明方法的一个优点是它可以处理比以前可能的更大的体积，例如高达4升，而先前处理的体积至多880ml。因此克服了先前提出的Sepax技术的体积限制。

此外，已经有可能将处理扩展到所有类型的白细胞(血小板、单核细胞、淋巴细胞、粒细胞)，而先前的处理基本上限于干细胞和红细胞。这是通过使用具有设计用于在处理透明流体时准确测量活塞位置的算法的红外传感器替代先前用于红细胞的光学传感器而实现的。

Sepax系统有利地由两个夹紧阀完成，用于(通过软件)自动选择两种生物添加剂(例如病毒)，用于填装(priming)室和随后用介质溶液切换以用于再悬浮，用于切换袋而无需用户干预。

本发明的第一个应用由孵育组成，其用于将磁珠与人血细胞或干细胞(如淋巴细胞T细胞、B细胞或造血干细胞)结合。第二个应用是转导，病毒通过转导将外来遗传物质插入人血细胞或干细胞。第三个应用是指修复生物流体以实现可重现的血细胞或干细胞的浓度和体积。

附图概述

将参考附图通过示例进一步描述本发明，其中：

图1A是本发明的第一个应用的流程图；

图1B是第一个应用的完整图。

图2A是本发明的第二个应用的流程图；

图2B是第二个应用的完整图。

图3A是本发明的第三个应用的流程图；和

图3B是第三个应用的完整图。

图4是用于容纳用于执行根据本发明的方法的设备的处理室的机柜的透视图。

图5是可用于进行给定应用的根据本发明的方法中的一次性套件(kit或set)的图。

发明详述

应用1：将磁珠与人血细胞或干细胞结合

第一个应用涉及人血细胞或干细胞(如淋巴细胞T细胞、淋巴细胞B细胞或造血干细胞)与磁珠的混合。

本应用说明了顺序进行以下程序：洗涤、稀释、孵育和洗涤。

第一阶段是预处理基于细胞的产品，通常来自用于收集外周血干细胞的单采血液程序，很少也来自骨髓采集，以便去除不必要的元件，例如人血小板、聚集物、凝块、细胞碎片，还可以通过添加生物营养物来水化细胞。如果产品先前是冷冻保存的，也应通过该阶段去除冷冻保护剂溶液如二甲基亚砜。

然后，第二步涉及向预处理的生物产品中加入一定剂量的试剂，如磁珠或着色介质，或一定剂量的染料。

第三步涉及溶液的孵育。该步的目的是将磁珠结合到目标细胞，或使活化的细胞着色以使其对光动力学处理高度敏感，或通过不同机制将其他溶液与目标细胞结合。在该阶段期间，可以在分离室中在环境温度下、在给定的时间内进行孵育，通常开始于10分钟至2小时，典型的时间为30分钟，同时不断混合溶液。也可以在受控的温度、时间和血袋中经由装置例如在WO 2014/181158 A1中描述的并且由Biosafe SA以商标Smart-Max商业化的装置中进行恒定混合而完成。这样的装置用于在受控温度下混合包含在柔性储存袋中的生物样品，所述柔性储存袋可以用于除了储存之外用于收集、冷冻储存或运输生物样品。

最后，最后一步是除去过量试剂的另一洗涤步骤，例如未连接到目标细胞的未结合磁珠，以避免不正确选择或计数目标细胞，或通过介质交换来停止着色过程，或通过上清液然后将细胞悬浮于新鲜介质中去除其他溶液。

完成所有这些步骤并且所有这些步骤都是在自动化系统和无菌环境下顺序进行的，例如使用上述的Sepax技术。

图1A和1B中示出了该第一个应用。如图1A所示，该方法的应用包括预洗步骤10，然后加入试剂20并孵育30。通过循环40重复n次加入试剂20并孵育30。然后将最终孵育的产品进行后洗步骤50。

如图1B中所示：

·预洗步骤10涉及洗涤通常来自单采血液程序的基于细胞的产品，如果适用则去除血小板和去除DMSO。将产品重新悬浮至给定体积以使细胞不太过浓缩并防止细胞脱水。

·加入试剂步骤20涉及加入具体体积的磁珠和/或细胞染色剂或活化试剂，

·在孵育步骤30中，在(例如Sepax系统的)离心处理和分离室内或外的具体时间期间将细胞与添加的试剂混合。如果在外进行，则将细胞袋放在像Smart-Max这样的设备上用于混合和温度控制。

·若适用，后洗步骤50用于去除试剂(例如珠)

应用2：淋巴细胞T细胞的病毒转导

第二个应用涉及通过添加病毒的淋巴细胞T细胞或其它人细胞如造血干细胞的转导。

本应用说明了顺序进行以下程序：洗涤、稀释、转导、稀释、体积调整。

第一阶段是通过执行洗涤程序来预处理基于细胞的产品，其通常来自用于收集外周血干细胞的单采血液程序或来自细胞培养过程的扩增细胞，以去除不需要的元件，例如人血小板、聚集物、凝块、细胞碎片。一旦不需要的元件去除，细胞也通过添加生物营养物再水化，并且可以悬浮在固定的所需体积中。如果先前已经培养了细胞，也应去除培养基培养物，如果产品先前是冷冻保存的，也应去除二甲基亚砜。

然后，第二阶段由将含有后来用于转导的病毒的溶液稀释在阶段1中预处理的生物产品组成。在这种情况下，通常将含有病毒的溶液引入含有细胞的离心室内。

第三阶段由1200至1700g的高速旋转组成，以将细胞从悬浮介质中分离出来，使其与病毒紧密接触以起始转导过程。通过在高g力下旋转，T淋巴细胞将与介质分离并粘附到离心室的外表面。同时，插入腔室的病毒将扩散到分离室中的流体中，而紧密接触将起始T淋巴细胞与病毒的转导过程。

然后，在高速旋转过程结束时，将溶液用培养基溶液或盐水溶液稀释，以达到所需的最终体积。

最后，如果需要多次使用剂量以供以后使用，整个溶液可以分至一个或几个溶液袋。

图2A和2B中示出了该第二个应用。如图2A所示，该方法的应用包括洗涤步骤60，接着稀释70和高速旋转操作80，然后是稀释90，以及任选的分装步骤100，用于将产品分至n个袋子。

如图2B中所示：

·洗涤步骤60用洗脱缓冲液洗涤通常来自单采血液程序或细胞培养物的基于细胞的产品。

·在稀释步骤70中，将具体体积的病毒加入到Sepax系统分离室内的细胞中。

·然后，通过高g力和长旋转持续时间在Sepax离心处理室中进行高速旋转步骤80，以使病毒与细胞紧密接触。

·在稀释步骤90中，添加培养基以达到目标体积。

·在分装步骤100中，将总体积分至n个较小的袋子。这需要手动介入改变袋子和打开/关闭夹具。

应用3：修复配量(冷冻后，包括用于患者输注的准确配量)

本应用说明了顺序进行以下步骤：洗涤、分离、稀释、体积调整。

通常，在标准的自体移植设置中，在预处理患者中进行单采血液程序。由于患者的预处理而富集血液细胞和造血干细胞的外周血在患者进行化学疗法或放射治疗期间被冷冻保存。一旦患者已完成治疗，患者细胞在被移植之前被解冻和修复。

第三个应用是可重复的自动化方法，用于从冷冻保存的单采血液溶液开始获得具有相同血细胞或干细胞浓度的多个剂量的细胞产品。

第一阶段涉及在受控温度和混合环境下解冻细胞产品，例如使用WO 2014/181158A1中描述并且由Biosafe SA以商标Smart-Max商业化的装置。这样的装置用于在受控温度下混合包含在柔性储存袋中的生物样品，所述柔性储存袋可以用于除了储存之外用于收集、冷冻储存或运输生物样品。

然后，第二阶段由进行洗涤程序组成，其将消除冷冻保护剂溶液、在冷冻保存过程中形成的聚集物或者甚至凝块。

然后，第三个阶段由取一个样本来测量细胞浓度组成。通过细胞浓度计算所需的等级(tierce)技术(如细胞计数器或流式细胞仪)分析样本。一旦计算了细胞的实际密度，就可以在自动Sepax平台上调整稀释因子，以达到所需的细胞浓度。前两个步骤允许独立于收集过程或患者而获得可重现和均匀的细胞浓度。

一旦获得了目标细胞的浓度，Sepax系统允许用户选择应分到每个袋子上的体积，或包含总细胞溶液的袋子数量。通过这样做，可以实现固定数量的袋子或每袋的体积剂量，全部含有相同的细胞浓度。

图3A和3B中示出了该第三个应用。如图3A所示，该方法的应用包括解冻步骤110，接着洗涤120，采样130和稀释140。第一提取步骤150将x ml提取到袋子，经由循环160重复n次，第二提取步骤170提取y ml到质量控制袋，该步骤通过循环180重复m次，通常仅一次。

如图3B中所示：

·解冻操作110用于解冻细胞产品。

·在洗涤操作120中，除去冷冻保护剂。

·在采样操作130中，洗涤的细胞被提取到输出袋中进行采样。此操作需要手动取样的步骤。

·在稀释步骤140中，调整用于患者配量的细胞浓度。

·第一提取步骤150将给定体积的细胞提取到转移袋以用于准确的患者配量。这需要手动介入改变袋子和打开/关闭夹具。

·第二个提取步骤170制备最后m个袋子用于质量控制(无菌度测试)。通常m＝1。

图4是用于容纳用于进行本发明的设备的处理室的机柜200的透视图，所述设备是根据EP-B-0 912 250和EP-B1 144 026的系统的一部分，其内容是在此通过引用并入本文。如图所示，机柜200具有前部，其具有向上突出的部分圆柱形壳体210，其顶部具有用于容纳系统的大致圆柱形的离心处理室(未示出)内的摆动闭合件220。在其凸出的前部，部分圆柱形壳体210具有用于观察插入的圆柱形处理室及其内容物的窗口215。在机柜200的后部是向上延伸的柱(示出部分剖视)，用于悬挂一次性套件的袋子。另外，在机柜200的后部还有用于根据集成软件显示处理协议的参数的显示屏240。机柜200的侧面250是平坦的，并且这些平坦侧面250中的至少一个设置有两个夹紧阀260，其具有用于容纳与机壳200相关联的一次性套件的管道的槽270，该管道通向支撑在机柜侧面250上的一次性套件的两个袋。夹紧阀260上方是用于引导管道的突出部265。这两个夹紧阀260可以布置成通过与机壳200相关联的软件自动选择两个生物添加剂，例如病毒，用于填装处理室，并随后用介质溶液切换用于重新悬浮，从而实现切换袋而无需用户干预。

图5示意性地示出了用于根据本发明的方法中的一次性套件(set或kit)的布局，以进行所有三个所述应用。一次性套件包括离心处理室300，其包含限定室300中具有可变体积的处理空间320的可移动构件或活塞310。室300经由管路330连接到五通阀340。阀340的一个出口通过管路350连接，该管路350分支出以连接到用于盐水溶液或其它溶液的输入尖状物(input spike)304，以及连接到用于盐水溶液或各种其它产品的袋394a和304b。阀340的另一出口通过管路360连接到废物袋303。阀340的第三出口经由管路370和过滤器372连接到输入尖状物301，用于连接血袋或其他生物流体袋。阀340的第四出口通过管路380连接到一组输出尖状物302，并分支出到收集袋305。管路380还通向采样端口382和采样枕384。

各种管路配有夹紧阀352，该夹紧阀352可以在一次性套件被设置时手动启动，或者一些可在使用期间自动操作，参见例如图4的磁力操作夹紧阀260。

所描述的套件或一次性套件形成封闭的无菌环境，甚至与连接到尖状物301、302和304的袋子。

珠洗涤

对于珠洗涤应用，一个或两个单采血液单元可以经由输入尖状物301连接到套件。然后单采血液单元通过输入过滤器372过滤，用于去除任何碎片、凝块和任何不需要的残留物。

预洗步骤由洗涤细胞组成，并且为此，洗涤溶液如盐水溶液NaCl使用尖状物304连接或填充于一个可用袋304a中。一旦预洗步骤完成，废液被重新定向于废物袋303中，而细胞保留在室300中。

然后第二步骤由在处理室300中加入包括磁珠的试剂组成，其已填充于第二可用袋304b中。然后在室300内进行孵育步骤。

最后，通过泵送与预洗步骤中相同的盐水溶液来完成后洗步骤，最后将带有磁珠的孵育细胞提取于收集袋305中，或者于由尖状物302连接的任何定制袋中。

转导

病毒转导应用的第一步由以下组成：将单采血液单元与输入尖状物301连接，将盐水溶液与尖状物304连接，将含有病毒的溶液加入袋304a中，将用于细胞营养的介质加入袋304b中，最后通过尖状物302连接多达三个袋子的多个输出袋。

第一步由以下组成：通过在1中输入袋泵送单采血液单元，然后通过由尖状物304连接的盐水溶液洗涤，然后将细胞保留在室300中，并将病毒溶液(来自袋304a)加入到室300中，以高旋转力离心溶液，然后将溶液悬浮在来自袋304b的介质中，最后将溶液于连接到尖状物302的最多三个袋子中分成等同或不同的体积。

修复和配量

本应用首先解冻冷冻保存的血液单元。然后将解冻的血液溶液袋连接到输入尖状物301，并将溶液泵入室300。然后，预先连接的盐水溶液通过尖状物304连接，或者可用袋403a用于洗涤室300中的单采血液单元。一旦细胞洗涤完成，将室300中的部分或全部细胞溶液提取于收集袋305中，随后通过采样端口382采集用于测量细胞浓度的样本。然后，可将体积再次泵入室300内，用来自连接到尖状物304或可用袋304a的袋的盐水溶液稀释，然后分至连接在输出尖状物302上的几个袋中。

该套件任选地在需要将样本取出于层流之外的情况下包括具有采样枕头384的冷冻制备管路，并且在最终溶液需要加入用于进一步冷冻的冷冻保护剂溶液的情况下，在管道路径386中包括DMSO耐受剂(resistant)。

Claims (14)

1.用于通过在中空圆柱形离心处理室中的选自洗涤、孵育、转导、分离、稀释和体积调整的处理步骤顺序处理不透明和透明的生物流体的方法，其用于处理生物流体和/或将生物流体与试剂混合，其中离心处理室在其大致圆柱形壁内容纳有可轴向移动的构件，其可轴向移动以改变处理室内的分离空间的体积以使生物流体进入分离空间或从分离空间输出生物流体，其中处理室是含有生物流体和试剂的一次性套件的一部分，一次性套件构成封闭的无菌环境，

其特征在于，使用单个处理室作为单个一次性套件的一部分，进行选自包括作为分开程序的预洗涤和后洗涤的洗涤、孵育、转导、分离、稀释和体积调整中的至少三种不同程序；根据单个一次性套件的处理室中的给定处理配置，每种所述程序进行一次或重复多次；每种所述程序涉及通过轴向移动可移动构件而产生的进入处理室的输入、处理室中的操作和通过轴向移动可移动构件而产生的来自处理室的输出；至少三种不同程序在处理室中依次顺序链式进行，以构成不同的链式顺序的程序作为处理室及其单个一次性套件中的整个顺序操作，所有生物流体、用于执行所有至少三种不同程序所必需的试剂包含在用于整个顺序操作的单个一次性套件的封闭无菌环境中。

2.根据权利要求1的方法，其中分离是密度梯度分离。

3.根据权利要求1的方法，其中生物流体是全血、单采血液、骨髓血液、脐带血、血沉棕黄层或培养的细胞。

4.根据权利要求1的方法，其中可轴向移动的构件是活塞。

5.根据权利要求1的方法，其中构成处理室中整个顺序操作的链式序列包括以下步骤（i）、（ii）和（iii）顺序中的一个：

（i）预洗涤；加入试剂并孵育；后洗涤，

（ii）洗涤；稀释；离心分离；稀释；产品的体积调整，以及

（iii）初步解冻；洗涤；取样和稀释；体积调整/提取。

6.根据权利要求5的方法，其中顺序地进行以下步骤：预洗涤；加入试剂和孵育；后洗涤。

7.根据权利要求6的方法，其中加入试剂和孵育是用于将人血细胞或干细胞与磁珠结合。

8.根据权利要求5的方法，其中依次进行以下步骤：洗涤；稀释；离心分离；稀释；产品的体积调整。

9.根据权利要求8的方法，其用于与淋巴细胞T细胞或其他人细胞的病毒转导。

10.根据权利要求5的方法，其中按顺序进行以下步骤：初步解冻；洗涤；取样和稀释；体积调整/提取。

11.根据权利要求10的方法，其用于多剂量的细胞产品的修复配量。

12.根据前述权利要求1-11中任一项的方法，其中可移动构件的位置由红外传感器监测。

13.根据前述权利要求1-11中任一项的方法，其中在一个整体连续操作的一个一次性套件的处理室中处理的液体体积是处理室的最大处理体积的四至十六倍。

14.根据前述权利要求1-11中任一项的方法，其中处理室与两个外部夹紧阀相关联，两个外部夹紧阀控制一次性套件的管道用于选择两个生物添加剂，用于在不需要用户干预的情况下切换一次性套件的袋子。

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