JP6664220B2 - 海草を含む化粧品組成物 - Google Patents
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Description
本出願は、全ての有用な目的のために、2012年11月15日に出願されたシリアル番号61/726,722の仮出願の利益を請求し、その明細書及び図面は、参照としてここに組み込まれる。
本発明は、皮膚等におけるヘモオキシゲナーゼ1型の活性を増加することによる、目の下の皮膚のくまの出現を含む目の下の皮膚の外観を改善するための化粧品活性成分に関する。より特には、本発明は、海草であるフクス ベシクロスス(Fucus Vesiculosus)の抽出物を含む化粧品活性成分に関する。
そのため、これらのくまの出現を減少することを主張して、多数の化粧品又はスキンケア製品が市場に存在している。
帯藻類の1種である。それは、幾つかの太平洋地域並びに北海及びバルト海においても観察することができる。
膚に適用された場合、複数の美容上の利点を提供する。より特には、本発明の化粧品活性成分は、皮膚細胞中のHO−1を刺激し、非常に良好な抗酸化効力及び抗炎症効力を提供する。本発明のフクス抽出物は、コラーゲンを刺激することが示されており、また、線及び皺の外観における有利な効果も有し得る。複数の美容上の利点に起因して、本発明の抽出物は、化粧品製剤において、唯一の化粧品活性成分として使用し得るが、しかし、幾つかの態様においては、そのような抽出物を1種以上の更なる化粧品活性成分と組み合わせて使用することが望ましいままである。有利な更なる化粧品活性成分の例は、皮膚を白くする(skin whitening)化粧品成分又は皮膚を明るくする(skin lightening)化粧品成分である。
フクス ベシクロスス バイオマスを商業的供給業者から入手し、そのようなバイオマスの種々の抽出を以下に示すようにして行った。
1.5%の粗く砕かれたフクス ベシクロスス バイオマスを95%の脱イオン水に添加し、終夜室温でプロップ混合(prop mixed)した。結果として得られた混合物をフィルターソックスを通して粗い濾過(coarse−filtered)に付し、その後、0.22ミクロンの最終細孔径まで、珪藻土を伴う積層されたディスクフィルター、続いてキャニスターフィルターを通して精密濾過された。
10%の粗く砕かれたフクス ベシクロスス バイオマスを90%の15%PEG溶液に添加し、終夜室温で比例混合した。結果として得られた混合物をフィルターソックスを通して粗い濾過(coarse−filtered)に付し、その後、0.22ミクロンの最終細孔径まで、珪藻土を伴う積層されたディスクフィルター、続いてキャニスターフィルターを通して精密濾過された。
フクス抽出物を調製し、ヘムオキシゲナーゼ1刺激、抗酸化効力及び抗炎症効力のためのスクリーニングを行った。試験のプロトコールを以下に記載する。
正常なヒトの表皮のケラチン生成細胞及び正常なヒトの皮膚線維芽細胞を、24時間フクス水抽出物(0.5%、1%及び2%の濃度)で処理し、細胞を1回PBSで洗浄し、
全てのRNAを細胞から抽出し、ヘムオキシゲナーゼ1遺伝子のために特異的なプライマーセットを使用するRT−PCR反応における鋳型として使用した。結果は、ハウスキーピング遺伝子により標準化され、未処理の対照と比較する2を底とする対数として表された。結果のグラフを図1−Aに示した。同様のアッセイをフクスPEG抽出物(0.1%、0.3%及び1%の濃度)のために行った。結果のグラフを図1−Bに示した。
正常なヒトの表皮のケラチン生成細胞(NHEK)及び正常なヒトの皮膚線維芽細胞を、3日間フクス水抽出物(1%及び2%の濃度)でそれぞれ処理した。細胞はその後、プロテアーゼ阻害剤のカクテルを含むRIPA緩衝液中における溶解によりウエスタンブロット法のために加工された。該溶解物は15秒間超音波処理され、12000gで10分間遠心分離され、BCAアッセイによるタンパク質含有量のために上澄みが定量された。ヘムオキシゲナーゼ1タンパク質のレベルは、その後、4−20%アクリルアミド勾配ゲル中の電気泳動、ニトロセルロース膜への転写及びマウス 抗−ヒト ヘムオキシゲナーゼ1抗体及びマウス 抗−β−アクチン抗体を用いる90分間のブロッティング(タンパク質負荷を標準化するために)により解析された。洗浄の後、該膜は、60分間、HRP結合抗−マウス抗体でブロッティングされた。ヘムオキシゲナーゼ1及びβ−アクチンのバンドを溶解し、Kodak Image Station 4000Rにおける化学発光により定量した。結果を、ヘムオキシゲナーゼ1のバンドの標準化された強度として、図2−A(ケラチン生成細胞)及び図2−B(線維芽細胞)に示した。
該アッセイは、DPPH法を用いて行われた。100μLのサンプル又は標準物質(Trolox−VitaminE)を96ウェルプレートにおいて、100μLの100μMのDPPH溶液と混合し、室温で20分間混合し、吸収を510nmで読み込んだ。結果は、トロロックス当量として表示した。0.5%、1%、2%及び5%の濃度のフクス水抽出物の効力のグラフを図3に示した。
正常なヒトの表皮のケラチン生成細胞をフクス抽出物で処理し、同時にIL−1bにより終夜刺激した。上澄みのIL−8レベルをELISAキット(R&Dシステム、ミネアポリス州、MN55413、USA)により計測した。結果を未処理対照(フクス無しだがIL−1b使用)のパーセンテージとして表示した。0.5%、1%及び2%の濃度のフクス水抽出物の効力のグラフを図4に示した。
参照としてここに組み込まれる、“インビトロ測定のための免疫アッセイ方法(Immunoassay method for in vitro measurements)”と表題された2012年6月20日に提出された米国特許出願公開第13/528087号明細書に記述されている方法を使用してコラーゲン1をアッセイした。本発明のフクス水抽出物で処理した後、細胞を専用の溶菌液で破壊し、沈着したコラーゲンIを1次抗体であるヒト抗−コラーゲンI(Interchim、モンリュソン、フランス)及びDELFIA Europium(Perkin Elmer、クルタブフ、フランス)プローブと結合した二次抗体である抗−IgGにより検出した。沈着したコラーゲンの量に比例するユーロピウム関連の蛍光を計測した。結果をPBS対照のコラーゲンパーセンテージとして表示した。結果を図5に示した。
本発明の化粧品活性成分を含む例示的なクリーム化粧製品は以下の通り:
液晶クリーム:
以下の表1に示された相Aを大きなビーカー内でプロップ混合機(prop mixer)を用いて混合した。ガムが膨張するまで混合した。75℃に加熱した。以下の表1に示された相Bをサイドのビーカー内でプロップ混合機を用いて混合した。均一になるまで水浴中で80℃まで加熱した。相Bを相Aに添加し、均一になるまでSilversonホモジナイザー(2000−4000rpm)を用いて混合した。スイープ混合(sweep mix)(50rpm)に移動し、冷却を開始した。40℃以下で、均一になるまでホモジナイザー(3000−5000rpm)下で相CをABに添加した。スイープに戻し、30℃で滴下した。
Claims (2)
- ヒトの皮膚におけるヘムオキシゲナーゼ1型の活性を増加する局所用組成物を製造するための化粧品活性成分の使用であって、前記化粧品活性成分は、フクスベシクロスス(Fucus Vesiculosus)の抽出物を含む、前記使用。
- 請求項1記載の使用であって、前記化粧品活性成分は、局所用組成物の総質量に基づき0.01質量%乃至10質量%の濃度で前記組成物中に組み込まれる請求項1記載の使用。
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