JP6606948B2 - 識別対象の塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンであるか否かを判定する方法、核酸誘導体及びキット - Google Patents
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[1]核酸試料中の識別対象の塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンであるか否かを判定する方法であって、前記核酸試料である第一核酸と、5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基を有する第二核酸と、前記第一核酸と相補的な領域及び前記第二核酸と相補的な領域を有する第三核酸とをハイブリダイズさせ、前記塩基と前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基とを近接させる工程(a)と、前記塩基と前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基との結合反応を行い、前記塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンであった場合には、前記第一核酸と前記第二核酸とが結合した第四核酸が生成される工程(b)と、前記第四核酸の存在を検出し、前記第四核酸が検出された場合には前記塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンであると判定し、前記第四核酸が検出されなかった場合には前記塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンではないと判定する工程(c)と、を備える、方法。
[2]前記塩基と前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基との結合がエステル結合である、[1]に記載の方法。
[3]前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基が下記式(1)で表される基である、[1]又は[2]に記載の方法。
[4]前記第四核酸は、塩基性条件下で前記第一核酸及び前記第二核酸に開裂する、[1]〜[3]のいずれかに記載の方法。
[5]前記塩基と前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基との結合が配位結合である、[1]に記載の方法。
[6]前記第二核酸が固相上に固定化されている、[1]〜[5]のいずれかに記載の方法。
[7]前記第四核酸の存在が蛍光物質を用いて検出される、[1]〜[6]のいずれかに記載の方法。
[8]前記第四核酸の存在が電気泳動を用いて検出される、[1]〜[6]のいずれかに記載の方法。
[9]前記第四核酸の存在が電気化学的に検出される、[1]〜[6]のいずれかに記載の方法。
[10]前記第四核酸の存在が紫外線吸収量の測定により検出される、[1]〜[6]のいずれかに記載の方法。
[11]下記式(2)で表される核酸誘導体。
[12]核酸試料中の識別対象の塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンであるか否かの判定用キットであって、5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基を有する第二核酸と、前記核酸試料である第一核酸と相補的な領域及び前記第二核酸と相補的な領域を有する第三核酸と、を備える、キット。
[13]前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基が下記式(1)で表される基である、[12]に記載のキット。
[14]縮合剤を更に備える、[12]又は[13]に記載のキット。
1実施形態において、本発明は、核酸試料中の識別対象の塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンであるか否かを判定する方法であって、前記核酸試料である第一核酸と、5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基を有する第二核酸と、前記第一核酸と相補的な領域及び前記第二核酸と相補的な領域を有する第三核酸とをハイブリダイズさせ、前記塩基と前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基とを近接させる工程(a)と、前記塩基と前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基との結合反応を行い、前記塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンであった場合には、前記第一核酸と前記第二核酸とが結合した第四核酸が生成される工程(b)と、前記第四核酸の存在を検出し、前記第四核酸が検出された場合には前記塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンであると判定し、前記第四核酸が検出されなかった場合には前記塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンではないと判定する工程(c)と、を備える方法を提供する。
[工程(a)]
図1に示すように、本工程では、第一核酸と第二核酸と第三核酸とをハイブリダイズさせ、塩基Xと5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基Yとを近接させる。
本工程では、近接させた塩基Xと5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基Yとの結合反応を行う。その結果、塩基Xが5−ヒドロキシメチルシトシンであった場合には、第一核酸と第二核酸とが結合した第四核酸が生成される。また、塩基Xが5−ヒドロキシメチルシトシン以外の塩基であった場合には、第四核酸は生成されない。図1においては、塩基Xが5−ヒドロキシメチルシトシンであるため、第四核酸が生成される。図1中、Zは第一核酸と第二核酸との結合部位を表す。
本工程において、上記の第四核酸の存在を検出し、第四核酸が検出された場合には塩基Xが5−ヒドロキシメチルシトシンであると判定し、第四核酸が検出されなかった場合には塩基Xが5−ヒドロキシメチルシトシンではないと判定する。
1実施形態において、本発明は、下記式(2)で表される核酸誘導体を提供する。式(2)中、WはO、S又はNHを表し、R1はリボース又はデオキシリボースを表し、R4はデオキシリボースを表し、R2、R3及びR5はポリヌクレオチドを表す。
1実施形態において、本発明は、核酸試料中の識別対象の塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンであるか否かの判定用キットであって、5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基を有する第二核酸と、前記核酸試料である第一核酸と相補的な領域及び前記第二核酸と相補的な領域を有する第三核酸と、を備える、キットを提供する。
縮合剤としては、上述したものと同様のものが挙げられる。
Claims (11)
- 核酸試料中の識別対象の塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンであるか否かを判定する方法であって、
前記核酸試料である第一核酸と、5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基を有する第二核酸と、前記第一核酸と相補的な領域及び前記第二核酸と相補的な領域を有する第三核酸とをハイブリダイズさせ、前記塩基と前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基とを近接させる工程(a)と、
前記塩基と前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基との結合反応を行い、前記塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンであった場合には、前記第一核酸と前記第二核酸とが結合した第四核酸が生成される工程(b)と、
前記第四核酸の存在を検出し、前記第四核酸が検出された場合には前記塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンであると判定し、前記第四核酸が検出されなかった場合には前記塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンではないと判定する工程(c)と、を備え、
前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基が下記式(1)で表される基であり、
前記結合反応が縮合剤を用いた脱水縮合である、方法。
- 前記塩基と前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基との結合がエステル結合である、請求項1に記載の方法。
- 前記第四核酸は、塩基性条件下で前記第一核酸及び前記第二核酸に開裂する、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記塩基と前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基との結合が配位結合である、請求項1に記載の方法。
- 前記第二核酸が固相上に固定化されている、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第四核酸の存在が蛍光物質を用いて検出される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第四核酸の存在が電気泳動を用いて検出される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第四核酸の存在が電気化学的に検出される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記第四核酸の存在が紫外線吸収量の測定により検出される、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 下記式(2)で表される核酸誘導体。
- 核酸試料中の識別対象の塩基が5−ヒドロキシメチルシトシンであるか否かの判定用キットであって、
5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基を有する第二核酸と、
前記核酸試料である第一核酸と相補的な領域及び前記第二核酸と相補的な領域を有する第三核酸と、
脱水縮合剤と、を備え、
前記5−ヒドロキシメチルシトシン特異的結合基が下記式(1)で表される基である、キット。
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