JP6567915B2

JP6567915B2 - 耐塩性ショウロ菌株

Info

Publication number: JP6567915B2
Application number: JP2015154250A
Authority: JP
Inventors: 典宏霜村; 翔太仲野
Original assignee: Tottori University
Current assignee: Tottori University
Priority date: 2015-08-04
Filing date: 2015-08-04
Publication date: 2019-08-28
Anticipated expiration: 2035-08-04
Also published as: JP2017029097A

Description

本発明はきのこの育種に関する。詳細には、本発明は耐塩性ショウロ菌株に関する。

ショウロは海岸林で発生する食用のきのこである。ショウロは宿主のマツ科樹種の根に感染して共生する外生菌根菌である。ショウロには高級食材としての需要もあるが、その子実体の生産量は年々減少し、最近ではごく僅かしか子実体が得られない。本発明者らは、これまでに、新たなショウロ子実体生産技術を開発している（特許文献１）。

近年の研究により、ショウロなどの外生菌根菌が樹木に塩ストレス耐性を付与する機能を有することが明らかになっている（非特許文献１）。そこで、津波の被災地のような塩害地域での旺盛に生育できる耐塩性ショウロ菌株を育成できれば、そのショウロ菌株を付加した樹木を塩害地域に導入することで海岸林の環境修復が可能になる。

特開２０１２−０８０８１１号公報

Langenfeld-Heyser R, Gao J, Ducic T, Tach Ph, Lu CF, Fritz E, Gafur A and Polle A (2007) Mycorrhiza 17:121-131

上記の事情に鑑みると、耐塩性に優れたショウロ菌株を育種することが必要であった。

本発明者らは上記課題を解決せんと鋭意研究を重ねた。本発明者らは耐塩性菌糸体を選抜し、それらを交雑してＦ１菌株を得て、そのなかから極めて耐塩性の高い菌株を選抜することに成功し、本発明を完成させた。

すなわち、本発明は以下のものおよび方法を提供する：
（１）独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託され、受託番号ＮＩＴＥＰ−０２０５９を付与された耐塩性ショウロ菌株、
（２）（１）に記載の耐塩性ショウロ菌株の子孫または変異株、および
（３）（１）記載の耐塩性ショウロ菌株または（２）記載の耐塩性ショウロ菌株の子孫または変異株を宿主樹木の根に感染させ、次いで、宿主樹木を塩害地域に移植することを特徴とする、塩害地域の環境修復方法。

本発明は耐塩性に優れたショウロ菌株を提供する。本発明の耐塩性ショウロ菌株を用いることにより塩害地域の海岸林の環境修復が可能になるだけでなく、貴重な食材とされるショウロを供給することが可能となる。

図１は、異なるＮａＣｌ濃度条件におけるショウロのコロニー形成を示す写真である。図２は、耐塩性ショウロ交雑菌株の育成手順を説明する図である。図３は、野生株および耐塩性菌株（ハイブリッド５）の菌糸成長に及ぼすＮａＣｌの影響を示すグラフである。

１の態様において、本発明は、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託され、受託番号ＮＩＴＥＰ−０２０５９を付与された耐塩性ショウロ菌株に関するものである。本発明の耐塩性ショウロ菌株は、高塩濃度培地にショウロ野生株の胞子を撒き、発芽菌糸体を交雑させて交配二次菌糸を得て、特に耐塩性の高い交雑株を選択することにより得られたものである。

かかる耐塩性ショウロ菌株の取得に使用する高塩濃度培地の種類や組成は特に限定されないが、培地中の食塩（ＮａＣｌ）濃度を１５０ｍＭ以上とするのが好ましく、例えば３００ｍＭとしてもよい。耐塩性ショウロ菌株の取得に好ましい培地としては、３００ｍＭのＮａＣｌを含有する１／５ＭＭＮ培地（組成：ＣａＣｌ_２０．０１ｇ、ＮａＣｌ１７．５ｇ、ＫＨ_２ＰＯ_４０．１ｇ、（ＮＨ_４）_２ＨＰＯ_４０．０５ｇ、ＭｇＳＯ_４・７Ｈ_２Ｏ０．０３ｇ、ＦｅＣｌ_３（１％液）０．２６ｍｌ、チアミンＨＣｌ２０．０μｇ、麦芽エキス１．０ｇ、ショ糖２．０ｇ、寒天２０．０ｇ、蒸留水１，０００ｍｌ）が例示されるが、これに限定されない。

上記のような高塩濃度培地で得られた発芽菌糸体（２菌株）を適切な培地にて共培養し、菌糸接触部位を公知のクランプ検定培地に移し、クランプのある菌糸を交配二次菌糸として得て、上記のような高塩濃度培地で成長を観察し、耐塩性ショウロ菌株を得ることができる。

本発明において、上記方法により、極めて耐塩性の高い交雑Ｆ１菌株（ハイブリッド５と命名）が得られた。ハイブリッド５は、３００ｍＭのＮａＣｌを含む１／５ＭＭＮ平板寒天培地培地上での菌糸成長量がショウロ野生株の２倍以上であった。ハイブリッド５はまた、３００ｍＭのＮａＣｌを含む１／５ＭＭＮ平板寒天培地培地（寒天２％）上、２５℃において２０日間の菌糸成長量が５０ｍｍ以上であった。

上記耐塩性ショウロ菌株ハイブリッド５は、受託番号ＮＩＴＥＰ−０２０５９として独立行政法人製品評価技術基盤機構（ＮＩＴＥ）特許微生物寄託センター（ＮＰＭＤ）に寄託されている。

本発明は、もう１つの態様において、上記ハイブリッド５の子孫または変異株を提供する。ハイブリッド５の子孫は、ハイブリッド５の胞子から生じる耐塩性ショウロ菌株であると定義される。ハイブリッド５の子孫はハイブリッド５と同等またはそれ以上の耐塩性を有する。その特徴として、例えば、３００ｍＭのＮａＣｌを含む１／５ＭＭＮ平板寒天培地培地上での菌糸成長量が野生株の約２倍以上であること、あるいは３００ｍＭのＮａＣｌを含む１／５ＭＭＮ平板寒天培地培地（寒天２％）上、２５℃において２０日間の菌糸成長量が５０ｍｍ以上であること等が挙げられる。ハイブリッド５の変異株は、自然変異株であってもよく、公知の方法で作成された変異株であってもよい。食用とするには自然変異株が好ましい。ハイブリッド５の変異株はハイブリッド５と同等またはそれ以上の耐塩性を有する。その性質はハイブリッド５の子孫に関して説明したものと同様である。

本発明の耐塩性ショウロ菌株（ハイブリッド５）は、３００ｍＭという高い食塩濃度においても旺盛な生育を示す。そして、ショウロ菌株を付加した樹木は塩ストレス耐性が向上する。したがって、本発明の耐塩性ショウロ菌株またはその子孫もしくは変異株を根に付加した樹木を、塩害を受けた地域に移植することで海岸林の環境修復をすることができる。その際に、本発明者らが開発した、宿主根にショウロ菌を人工感染させる方法（特開２０１２−０８０８１１号公報）を用いれば、効率よくショウロ菌を感染させることができ、子実体も得ることができる。したがって、本発明は、塩害地域の環境修復を可能にするのみならず、貴重食材であるショウロ子実体を得ることも可能にするという優れた効果を有する。

以下に実施例を示して本発明をより詳細かつ具体的に説明する。

１．ＮａＣｌストレ条件下での菌株の選抜
ショウロ野生株（ＭＣＬＲｒ０２〜ＭＣＬＲｒ１１の１０株）の新鮮な子実体の一部を切り取り、３００ｍＭのＮａＣｌを含む１／５濃度ＭＭＮ液体培地中に懸濁して、胞子懸濁液（１．０ｘ１０^６〜１．０ｘ１０^７個／ｍｌ）を得た。胞子懸濁液の一定量を、ＮａＣｌ（０ｍＭ、５０ｍＭ、１５０ｍＭ、３００ｍＭ）を含む１／５濃度ＭＭＮ寒天培地（寒天濃度２％）に撒き、２５℃で２０日間培養した。

異なるＮａＣｌ濃度条件下（０ｍＭ、５０ｍＭ、１５０ｍＭ、３００ｍＭ）におけるショウロのコロニー形成を調べた結果を図１に示す。ＮａＣｌ濃度の上昇とともにコロニー数が減少し、３００ｍＭのＮａＣｌを含有する１／５濃度ＭＭＮ寒天平板培地上ではコロニーはほとんど認められなかった。以下の実験において、１／５濃度ＭＭＮ寒天平板培地のＮａＣｌ濃度を３００ｍＭとすることにした。

上記１０株の胞子懸濁液を３００ｍＭのＮａＣｌを含有する１／５濃度ＭＭＮ寒天平板培地に撒いて（０．１ｍｌ／プレート）、２０日後に分離できた発芽菌糸体数を表１に示す。
[表１]
表１．３００ｍＭＮａＣｌ含有平板培地において分離できたショウロ菌株数

子実体番号分離できた発芽菌糸体数
ＭＣＬＲｒ０２７
ＭＣＬＲｒ０３０
ＭＣＬＲｒ０４０
ＭＣＬＲｒ０５０
ＭＣＬＲｒ０６０
ＭＣＬＲｒ０７２０
ＭＣＬＲｒ０８０
ＭＣＬＲｒ０９１５
ＭＣＬＲｒ１００
ＭＣＬＲｒ１１０

２．交雑株の育成
発芽菌糸体を分離できたＭＣＬＲｒ０２、ＭＣＬＲｒ０７、ＭＣＬＲｒ０９のなかから２菌株を選択し、それらの発芽菌糸体（一次菌糸）を共培養し、菌糸接触部位を切り取って新たな培地に移植した。用いた培地は０．１％麦芽エキス、０．２％ツイン８０、２％寒天を含むクランプ検定培地（ｐＨ７）であった。７〜１５日間培養し、クランプ結合の有無を調べ、クランプのある菌糸を交配二次菌糸として分離した。上記手順を図２に示した。

クランプを形成した菌株をＮａＣｌ（０ｍＭ、５０ｍＭ、１５０ｍＭ、３００ｍＭ）を含有する１／５濃度ＭＭＮ寒天平板培地に移植し、２５℃で２０日間培養して菌糸成長量を調べた。比較のため、野生株についても同様の実験を行った。実験結果を図３に示す。ＮａＣｌ存在下で最も菌糸成長量が多かった菌株をハイブリッド５と命名した。ハイブリッド５はＮａＣｌ（０〜３００ｍＭ）の影響を殆ど受けずに成長し、３００ｍＭのＮａＣｌを含む１／５ＭＭＮ平板寒天培地培地（寒天２％）上、２５℃において２０日間の菌糸成長量が５０ｍｍ以上であった。また、同条件下で、ハイブリッド５の菌糸成長量は、野生株の約２倍以上であった。ハイブリッド５は鳥取大学農学部附属菌類きのこ遺伝資源研究センターのカルチャーコレクションに登録番号ＴＵＦＣ１００９４８として登録された。ハイブリッド５は、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに２０１５年５月２９日に受領され、受託番号ＮＩＴＥＰ−０２０５９を付与された（通知年月日２０１５年７月２７日）。

本発明は、塩害地域の環境修復に役立つほか、高級食材であるショウロの生産にも役立つので、環境事業や食品産業において利用可能である。

本発明の耐塩性ショウロ菌株ハイブリッド５は、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに２０１５年５月２９日に受領され、受託番号ＮＩＴＥＰ−０２０５９を付与された（通知年月日２０１５年７月２７日）。

Claims

独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センターに寄託され、受託番号ＮＩＴＥＰ−０２０５９を付与された耐塩性ショウロ菌株。
３００ｍＭのＮａＣｌを含む１／５ＭＭＮ平板寒天培地培地（寒天２％）上、２５℃において２０日間の菌糸成長量が５０ｍｍ以上である、請求項１記載の耐塩性ショウロ菌株の子孫または変異株。
請求項１記載の耐塩性ショウロ菌株または請求項２記載の耐塩性ショウロ菌株の子孫または変異株を宿主樹木の根に感染させ、次いで、宿主樹木を塩害地域に移植することを特徴とする、塩害地域の環境修復方法。