JP6531234B1

JP6531234B1 - ウイルス不活性化剤、ノロウイルス不活性化剤及び衛生資材

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Publication number: JP6531234B1
Application number: JP2019071423A
Authority: JP
Inventors: 貴弘守屋; 恵太尾崎
Original assignee: Niitaka Co Ltd
Current assignee: Niitaka Co Ltd
Priority date: 2018-04-05
Filing date: 2019-04-03
Publication date: 2019-06-12
Anticipated expiration: 2039-04-03
Also published as: JP2019182853A

Abstract

【課題】タンパク質汚れ存在下でも充分なウイルス不活性化効果を示すウイルス不活性化剤を提供する。【解決手段】エタノールと、アミノ酸と、アルカリ剤とを含むことを特徴とするウイルス不活性化剤。【選択図】なし

Description

本発明は、ウイルス不活性化剤、ノロウイルス不活性化剤及び衛生資材に関する。

ウイルスには、エンベロープを有するエンベロープウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）や、エンベロープを有さないノンエンベロープウイルス（例えば、ノロウイルス）が存在している。
これらのウイルスの中には、ヒトに感染するものもあり、感染予防のために従来からウイルス不活性化剤が用いられていた。

近年、ノロウイルス（ヒトノロウイルス）による感染性胃腸炎あるいは食中毒の発生が一年を通じて多発しており、特に１１〜３月が発生のピークとなっている。ノロウイルスは、カリシウイルス科、ノロウイルス属に分類されるエンベロープを持たないＲＮＡウイルス（以下、「ノロウイルス等」と記載する）であり、アルコール（エタノール、イソプロパノール等）、熱、酸性（胃酸等）、又は、乾燥等に対して強い抵抗力を有する。潜伏期間は１〜２日であると考えられており、嘔気、嘔吐、下痢の主症状が出るが、腹痛、頭痛、発熱、悪寒、筋痛、咽頭痛、倦怠感等を伴うこともある。

ノロウイルス等の感染経路の一つとして経口感染が知られており、ノロウイルス等に汚染された食物や水等を経口摂取することにより感染が成立する。
そのため、飲食店、給食施設、工場など食品を調理加工する場においては、食物や水等がノロウイルス等に汚染されないようにすることが求められている。

ノロウイルス等による汚染を防ぐ手段として、食物、食器、調理台、調理器具等のノロウイルスを不活性化する方法がある。
ノロウイルス等を完全に不活性化させる方法としては、加熱処理が知られている。
しかし、飲食店、給食施設、工場など食品を調理加工する場において、常に、食器、調理台、調理器具等を加熱処理することは現実的でなく、食物の種類によっては加熱処理により風味が損なわれてしまう場合がある。つまり、加熱処理は、飲食店、給食施設、工場など食品を調理加工する場において、ノロウイルス等を不活性化する方法として適していなかった。

また、ノロウイルス等を不活性化させる方法として、塩素系漂白剤（次亜塩素酸ナトリウム等）を用いる方法も知られている。しかし、塩素系漂白剤は、金属に対する腐食作用、皮膚等に対する刺激作用、衣類に対する漂白作用等がある。そのため、その使用が制限されるという欠点があり、特に、人体に対する安全性への配慮から作業者の手指、食器、調理台、調理器具等にこれらの薬剤類を用いることは適当とはいえず、まして食物に直接触れさせることも適当とはいえなかった。
そのため、人体に対し安全であり、ノロウイルス等を不活性化できる方法が望まれていた。

ヒトノロウイルスは、培養細胞を用いても増殖させることができない。
そのため、ヒトノロウイルスの不活性化に対する各種消毒剤等の消毒効果の検証には、代替ウイルスとしてネコカリシウイルス（ＦＣＶ）やマウスノロウイルス（ＭＮＶ）が広く用いられている。ＦＣＶ及びＭＮＶは、形態的特徴やゲノムの構造から、ヒトノロウイルスに近縁なウイルスであることが明らかにされている。

例えば、非特許文献１には、エタノールを主成分とした中性または酸性のウイルス不活性化剤を用いたＦＣＶ及びＭＮＶの不活性化試験が記載されている。

ＧＥＵＮＷＯＯＰａｒｋ他，ＪＦｏｏｄＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎ２０１０Ｎｏ；Ｖｏｌ．７３：２２３２−２２３８ "Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆｓｅｖｅｎｈａｎｄｓａｎｉｔｉｚｅｒｓａｇａｉｎｓｔｍｕｒｉｎｅｎｏｒｏｖｉｒｕｓ，ｆｅｌｉｎｅｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ，ａｎｄＧＩＩ．４ｎｏｒｏｖｉｒｕｓ"

非特許文献１に記載されたウイルス不活性化剤は、実験室レベルでの試験において、ＦＣＶ及びＭＮＶにある程度効果を示す。
しかし、このようなウイルス不活性化剤を、実際に飲食店、給食施設、工場などで使用する場合、充分なウイルス不活性化効果を示せなかった。

このようにウイルス不活性化剤の効果が充分に発揮されない原因は、環境中の汚れ、特にタンパク質汚れであると考えられた。
環境中のタンパク質汚れは、ウイルスの周囲に付着することになる。ウイルスの周囲のタンパク質汚れは、ウイルスの保護膜のように働き、エタノール及びその他の不活性化成分がウイルスと接触することを阻害すると考えられる。
そのため、非特許文献１に記載されたようなウイルス不活性化剤は、その効果を充分に発揮できなくなると考えられる。

また、非特許文献１に記載されたウイルス不活性化剤は、酸性であるので、使用時の金属腐食性が問題となることがあった。

本発明は、上記問題点を鑑みてなされた発明であり、本発明の目的は、タンパク質汚れ存在下でも充分なウイルス不活性化効果を示すウイルス不活性化剤を提供することである。

すなわち、本発明のウイルス不活性化剤は、エタノールと、アミノ酸と、アルカリ剤とを含むことを特徴とする。

本発明のウイルス不活性化剤はエタノールを含む。
ウイルスにエタノールを接触させることにより、ウイルスを不活性化することができる。

本発明のウイルス不活性化剤は、アミノ酸及びアルカリ剤を含む。
アミノ酸の分子内の窒素原子の非共有電子対は、アルカリ剤との相乗効果によってウイルスの膜構造を変化させることができると考えられる。
このような作用により、ウイルスを不活性化することができると考えられる。

また、アルカリ剤により、ウイルス不活性化剤を中性〜弱アルカリ性に調整しやすくなる。

本発明のウイルス不活性剤では、上記アミノ酸は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、トレオニン（スレオニン）、システイン、メチオニン、プロリン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、ヒスチジン、リシン、シスチン、テアニン、タウリン、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、アルギニングルタミン酸塩、リシンアスパラギン酸塩及びリシングルタミン酸塩からなる群から選択される少なくとも１種であることが望ましい。
これらのアミノ酸は、アルカリ剤との相乗効果によってウイルスを不活性化するのに適している。

また、本発明のウイルス不活性化剤では、上記アミノ酸は、アルギニン、ヒスチジン及びリシンからなる群から選択される少なくとも１種であることが望ましい。
これらのアミノ酸は塩基性アミノ酸である。塩基性アミノ酸は、分子内に複数の窒素原子を有する。そのため、アルカリ剤との相乗効果によるウイルスの膜構造の変化を、より効果的に起こすことができる。

本発明のウイルス不活性化剤では、上記アルカリ剤は、炭酸塩、炭酸水素塩、リン酸二水素塩、リン酸水素二塩及びリン酸三塩からなる群から選択される少なくとも１種であることが望ましい。また、上記アルカリ剤は、ナトリウム塩、カリウム塩及びアンモニウム塩からなる群から選択される少なくとも１種の塩であることが望ましい。
これらのアルカリ剤は、ウイルス不活性化効果を向上させることができる。

本発明のウイルス不活性化剤では、上記ウイルス不活性化剤中の上記エタノールの質量濃度は、８．０５〜８５．７０重量％であることが望ましい。
ウイルス不活性化剤中のエタノールの質量濃度が８．０５重量％未満であると、エタノールの質量濃度が低いので、エタノールが含まれることによるウイルス不活性化効果が発揮されにくくなる。
ウイルス不活性化剤中のエタノールの質量濃度が８５．７０重量％を超えると、ウイルス不活性化剤中のエタノールの質量濃度が高すぎ、引火しやすくなる。

本発明のウイルス不活性化剤では、上記ウイルス不活性化剤中の上記アミノ酸の質量濃度は、０．０５〜５．００重量％であることが望ましい。
ウイルス不活性化剤中のアミノ酸の質量濃度が、０．０５重量％未満であると、アミノ酸を含むことによるウイルス不活性化効果が発揮されにくい。
ウイルス不活性化剤中のアミノ酸の質量濃度が、５．００重量％を超えると、保管中にアミノ酸が析出しやすくなる。また、アミノ酸を含むことによるウイルス不活性化効果の向上が上限に近づき経済的でない。

本発明のウイルス不活性化剤では、上記ウイルス不活性化剤中の上記アルカリ剤の質量濃度は、０．０５〜１０．００重量％であることが望ましい。
ウイルス不活性化剤中のアルカリ剤の質量濃度が、０．０５重量％未満であると、アルカリ剤を含むことによるウイルス不活性化効果が発揮されにくい。
ウイルス不活性化剤中のアルカリ剤の質量濃度が、１０．００重量％を超えると、ｐＨが強アルカリ性になりやすく、また、保管中にアルカリ剤が析出しやすくなり、扱いにくくなる。

本発明のウイルス不活性化剤は、さらに酸剤を含むことが望ましい。また、上記酸剤としては、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、リン酸、酒石酸、フィチン酸、アジピン酸、グルコン酸及びコハク酸からなる群から選択される少なくとも１種であることが望ましい。
ウイルス不活性化剤が酸剤を含むことで、ウイルス不活性化効果がさらに向上する。また、酸剤を用いることにより、ウイルス不活性化剤のｐＨを調整することができる。

上記ウイルス不活性化剤中の上記酸剤の質量濃度は、０．００１〜２．００重量％であることが望ましい。
ウイルス不活性化剤中の酸剤の質量濃度が、０．００１重量％未満であると、酸剤の質量濃度が低すぎ、エタノールのウイルス不活性化効果を充分に増強させにくくなる。
ウイルス不活性化剤中の酸剤の質量濃度が、２．００重量％を超えると、酸剤の質量濃度が高すぎ、ウイルス不活性化剤を噴霧等した際に、べとつきやすくなり、また、酸剤の析出が生じやすくなる。また、ｐＨが低くなりやすく身体に使用した際、又は、身体に付着した際に刺激性が現れる。

本発明のウイルス不活性化剤では、上記ウイルス不活性化剤のｐＨは、８〜１２であることが望ましい。
ノロウイルス等には、エタノールを含み、かつ、中性〜アルカリ性のウイルス不活性化剤に対し耐性を示すものも存在する（例えば、ネコカリシウイルス等）。
そのため、一般的に、ウイルス不活性化剤は酸性の状態で使用されることになる。
しかし、ウイルス不活性化剤が酸性であると、皮膚刺激性が強いという問題がある。
本発明のウイルス不活性化剤は、アミノ酸を含むのでｐＨが８〜１２であっても、充分なウイルス不活性化効果を示す。また、ウイルス不活性化剤の皮膚刺激性が充分に低減されている。

本発明のノロウイルス不活性化剤は、上記本発明のウイルス不活性化剤からなることを特徴とする。
上記本発明のウイルス不活性化剤は、ノロウイルス等に対して高いウイルス不活性化効果を示す。

本発明の衛生資材は、上記本発明のウイルス不活性化剤、又は、上記本発明のノロウイルス不活性化剤を含むことを特徴とする。
本発明のウイルス不活性化剤又はノロウイルス不活性化剤は、ウイルス不活性化効果を示すので、このようなウイルス不活性化剤を含む本発明の衛生資材を用いることにより、ウイルス感染を防ぐことができる。

以下、本発明のウイルス不活性化剤について具体的な実施形態を示しながら説明する。しかしながら、本発明は、以下の実施形態に限定されるものではなく、本発明の要旨を変更しない範囲において適宜変更して適用することができる。

本発明のウイルス不活性化剤は、エタノールと、アミノ酸と、アルカリ剤とを含むことを特徴とする。

本発明のウイルス不活性化剤は、エタノールを含む。
ウイルスにエタノールを接触させることにより、ウイルスを不活性化することができる。

本発明のウイルス不活性化剤では、ウイルス不活性化剤中のエタノールの質量濃度は、８．０５〜８５．７０重量％であることが望ましく、２４．６９〜７４．７０重量％であることがより望ましく、３３．３８〜６０．００重量％であることがさらに望ましい。
ウイルス不活性化剤中のエタノールの質量濃度が８．０５重量％未満であると、エタノールの質量濃度が低いので、エタノールが含まれることによるウイルス不活性化効果が発揮されにくくなる。
ウイルス不活性化剤中のエタノールの質量濃度が８５．７０重量％を超えると、ウイルス不活性化剤中のエタノールの質量濃度が高すぎ、引火しやすくなる。

本発明のウイルス不活性化剤では、上記アミノ酸は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、トレオニン（スレオニン）、システイン、メチオニン、プロリン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、ヒスチジン、リシン、シスチン、テアニン、タウリン、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、アルギニングルタミン酸塩、リシンアスパラギン酸塩及びリシングルタミン酸塩からなる群から選択される少なくとも１種であることが望ましい。
これらのアミノ酸は、アルカリ剤との相乗効果によってウイルスを不活性化するのに適している。

なお、本発明のウイルス不活性化剤を製造する際に、アミノ酸は、アミノ酸塩の態様で使用してもよい。特に、アミノ酸塩を構成するアミノ酸が塩基性アミノ酸である場合、アミノ酸塩は塩酸塩であることが望ましい。

本発明のウイルス不活性化剤では、上記ウイルス不活性化剤中の上記アミノ酸の質量濃度は、０．０５〜５．００重量％であることが望ましく、０．０５〜３．００重量％であることがより望ましく、０．１０〜２．００重量％であることがさらに望ましい。
ウイルス不活性化剤中のアミノ酸の質量濃度が、０．０５重量％未満であると、アミノ酸を含むことによるウイルス不活性化効果が発揮されにくい。
ウイルス不活性化剤中のアミノ酸の質量濃度が、５．００重量％を超えると、使用時にアミノ酸が析出しやすくなる。また、アミノ酸を含むことによるウイルス不活性化効果の向上が上限に近づき経済的でない。

本発明のウイルス不活性化剤は、アルカリ剤を含む。アルカリ剤により、ウイルス不活性化剤を中性〜弱アルカリ性に調整しやすくなる。

本発明のウイルス不活性化剤では、上記アルカリ剤は、炭酸塩、炭酸水素塩、リン酸二水素塩、リン酸水素二塩、リン酸三塩からなる群から選択される少なくとも１種であることが望ましい。
また、上記アルカリ剤は、ナトリウム塩、カリウム塩及びアンモニウム塩からなる群から選択される少なくとも１種の塩であることが望ましい。
上記アルカリ剤の内、特に望ましいものは、炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸アンモニウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素アンモニウム、リン酸三カリウムである。
これらのアルカリ剤は、ウイルス不活性化効果を向上させることができる。
なお、本発明のウイルス不活性化剤では、これらアルカリ剤を１種類だけ含んでいてもよく、複数種類含んでいてもよい。

なお、アルカリ剤が、炭酸塩や炭酸水素塩であると、ウイルス不活性化剤に含まれているアミノ酸の作用により、これらのアルカリ剤がエタノールへ溶けやすくなる。そのため、本発明のウイルス不活性化剤の溶解性及び低温安定性が向上する。

本発明のウイルス不活性化剤では、上記ウイルス不活性化剤中の上記アルカリ剤の質量濃度は、０．０５〜１０．００重量％であることが望ましく、０．１０〜５．００重量％であることがより望ましく、０．１０〜３．００重量％であることがさらに望ましく、０．２０〜２．００重量％であることがよりさらに望ましい。
ウイルス不活性化剤中のアルカリ剤の質量濃度が、０．０５重量％未満であると、アルカリ剤を含むことによるウイルス不活性化効果が発揮されにくい。
ウイルス不活性化剤中のアルカリ剤の質量濃度が、１０．００重量％を超えると、ｐＨが強アルカリ性になりやすく、また、使用時にアルカリ剤が析出しやすくなり、扱いにくくなる。

本発明のウイルス不活性化剤では、上記ウイルス不活性化剤のｐＨは、８〜１２であることが望ましく、８〜１１であることがより望ましい。
ノロウイルス等には、エタノールを含み、かつ、中性〜アルカリ性のウイルス不活性化剤に対し耐性を示すものも存在する（例えば、ネコカリシウイルス等）。
そのため、一般的に、ウイルス不活性化剤は酸性の状態で使用されることになる。
しかし、ウイルス不活性化剤が酸性であると、皮膚刺激性が強いという問題がある。
本発明のウイルス不活性化剤は、アミノ酸を含むのでｐＨが８〜１２であっても、充分なウイルス不活性化効果を示す。また、ウイルス不活性化剤の皮膚刺激性が充分に低減されている。

本発明のウイルス不活性化剤は、さらに酸剤を含むことが望ましい。また、上記酸剤としては、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、リン酸、酒石酸、フィチン酸、アジピン酸、グルコン酸及びコハク酸からなる群から選択される少なくとも１種であることが望ましい。
ウイルス不活性化剤が酸剤を含むことで、ウイルス不活性化効果がさらに向上する。また、酸剤を用いることにより、ウイルス不活性化剤のｐＨを調整することができる。
なお、本発明のウイルス不活性化剤では、これら酸剤を１種類だけ含んでいてもよく、複数種類含んでいてもよい。

上記ウイルス不活性化剤中の上記酸剤の質量濃度は、０．００１〜２．００重量％であることが望ましく、０．０１〜１．００重量％であることがより望ましい。
ウイルス不活性化剤中の酸剤の質量濃度が、０．００１重量％未満であると、酸剤の質量濃度が低すぎ、エタノールのウイルス不活性化効果を充分に増強させにくくなる。
ウイルス不活性化剤中の酸剤の質量濃度が、２．００重量％を超えると、酸剤の質量濃度が高すぎ、ウイルス不活性化剤を噴霧等した際に、べとつきやすくなり、また、酸剤の析出が生じやすくなる。また、ｐＨが低くなりやすく身体に使用した際、又は、身体に付着した際に刺激性が現れる。

本発明のウイルス不活性化剤は、さらに無機塩を含んでいてもよい。
このような無機塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、塩化アンモニウム、臭化ナトリウム、臭化カリウム、臭化カルシウム、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸アンモニウム、硝酸カリウム、チオシアン酸カリウム、チオシアン酸アンモニウム等が挙げられる。
ウイルス不活性化剤がこれらの無機塩を含むと、ウイルスの周囲のタンパク質汚れを塩溶又は塩析させることができ、エタノールをウイルスに接触させやすくなる。
その結果ウイルス不活性化効果を向上させることができる。
なお、本発明のウイルス不活性化剤は、これらの無機塩を１種類だけ含んでいてもよく、複数種類含んでいてもよい。

本発明のウイルス不活性化剤は、さらに凝集剤を含んでいてもよい。
凝集剤としては、ポリグルタミン酸及びその塩等が挙げられる。
凝集剤は、環境中のタンパク質汚れを凝集させることができ、タンパク質汚れをウイルスの周囲から分離させることができる。
ウイルスの周囲からタンパク質汚れが分離されると、エタノールとウイルスとが直接接触する。そのため、エタノールの作用が発揮されるのでウイルスが不活性化されることになる。

本発明のウイルス不活性化剤は、さらに界面活性剤を含んでいてもよい。
ウイルス不活性化剤が界面活性剤を含むと、汚れ等を洗浄する洗浄剤としても用いることができる。
なお、本発明のウイルス不活性化剤では、これら界面活性剤を１種類だけ含んでいてもよく、複数種類含んでいてもよい。

界面活性剤としては、脂肪酸エステル等を用いてもよい。
また、脂肪酸エステルとしては、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル等が挙げられる。
グリセリン脂肪酸エステルとしては、モノグリセリン脂肪酸エステルであってもよく、ポリグリセリン脂肪酸エステルであってもよい。例えば、モノグリセリンカプリル酸エステル、モノグリセリンカプリン酸エステル、モノグリセリンラウリン酸エステル、ジグリセリンカプリル酸エステル、ヘキサグリセリンラウリン酸エステル、デカグリセリンラウリン酸エステル等が挙げられる。
ショ糖脂肪酸エステルとしては、ショ糖カプリン酸エステル、ショ糖ラウリン酸エステル、ショ糖ミリスチン酸エステル、ショ糖パルミチン酸エステル、ショ糖ステアリン酸エステル、ショ糖オレイン酸エステル、ショ糖べヘン酸エステル、ショ糖エルカ酸エステル等が挙げられる。
ソルビタン脂肪酸エステルとしては、ソルビタンモノ脂肪酸エステルであってもよく、ソルビタンジ脂肪酸エステルであってもよく、ソルビタントリ脂肪酸エステルであってもよい。また、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル等であってもよい。

本発明のウイルス不活性化剤は、さらにウイルス不活性化効果を有する化合物を含んでいてもよい。
このような化合物としては、例えば、緑茶抽出物、紫茶抽出物、マキベリー抽出物、ブドウ抽出物、カンカニクジュヨウ抽出物、月見草種子抽出物、ウーロン茶抽出物、ピーナツ種皮抽出物、ビルベリー抽出物、ヒバマタ科の海藻から抽出された海藻抽出物等の天然物抽出物が挙げられる。

また、本発明のウイルス不活性化剤には、上記の成分以外に保湿剤、エモリエント剤、香料、色素、陽イオン界面活性剤、増粘剤、消炎剤等を含んでいてもよい。

本発明のウイルス不活性化剤は、インフルエンザウイルス等のエンベロープウイルスや、ノロウイルス等のノンエンベロープウイルスに対してウイルス不活性化効果を示す。
特に、本発明のウイルス不活性化剤は、ノロウイルスに対して高いウイルス不活性化効果を示す。
そのため、本発明のウイルス不活性化剤は、ノロウイルス不活性剤として使用することが望ましい。
なお、本明細書において、「ノロウイルス不活性化剤」とは、ネコカリシウイルス、マウスノロウイルス及びヒトノロウイルスからなる群から選択される少なくとも１種のウイルスに対して使用されるウイルス不活性化剤を意味する。

本発明のウイルス不活性化剤は、ネコカリシウイルスを試験ウイルスとした下記タンパク質汚れ存在時ネコカリシウイルス感染力価測定において、作用時間１分におけるウイルス感染力価（対数）の値が、作用時間０分におけるウイルス感染力価（対数）の値より２．０以上減少していることが望ましく、４．０以上減少していることがより望ましい。
本発明のウイルス不活性化剤が、このようなウイルス不活性化効果を奏すると、カリシウイルス科ウイルスの感染を防止することができる。

（タンパク質汚れ存在時ネコカリシウイルス感染力価測定）
（１）ネコカリシウイルスを、ネコ腎由来株化細胞であるＣＲＦＫ細胞（ＡＴＣＣＣＣＬ−９４）に感染させて細胞を培養する。
（２）次に、ネコカリシウイルスが感染したかどうかを細胞変性効果（Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔ：ＣＰＥ）により確認する。
細胞変性効果を確認した後、培養細胞の凍結融解を繰り返すことにより、培養細胞を破砕する。
（３）牛肉エキス（ナカライテスク社製）０．１ｇをＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地で溶解して１０％肉エキス液を作製し、遠心分離後の培養細胞破砕液の上清と、１０％肉エキスとを１：１の割合（容量）で混合し、ウイルス溶液とする。
（４）ウイルス不活性化剤と、ウイルス溶液とを９：１の割合（容量）で混合し、室温で１分経過後、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地で１００倍希釈することにより、ウイルス不活性化剤のウイルスに対する作用を停止させる。
この工程により得られた溶液をウイルス不活性化剤１分作用ウイルス溶液とする。
（５）ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地と、ウイルス溶液とを９：１の割合（容量）で混合した直後、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地で１００倍希釈することにより、得られた溶液をウイルス不活性化剤０分作用ウイルス溶液とする。
（６）ウイルス不活性化剤０分作用ウイルス溶液、ウイルス不活性化剤１分作用ウイルス溶液を、それぞれ、ＯＰＴＩ−ＭＥＭ培地により１０倍段階希釈する。ＣＲＦＫ細胞を培養した９６ｗｅｌｌマイクロプレートの培地を捨て、段階希釈液を１００μＬずつ加える。
（７）ウイルス不活性化剤０分作用ウイルス溶液及びウイルス不活性化剤１分作用ウイルス溶液の段階希釈液が加えられたＣＲＦＫ細胞を３７℃、５％ＣＯ_２の条件で、４日間培養する。
（８）培養したＣＲＦＫ細胞のＣＰＥを指標にＴＣＩＤ_５０（ＴｉｓｓｕｅＣｕｌｔｕｒｅＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｏｓｅ５０％）により各ウイルス溶液のウイルス感染力価（対数）を定量する。
（９）上記（１）〜（８）の工程を３回独立に行い、ウイルス不活性化剤０分作用ウイルス溶液を用いて算出されたウイルス感染力価の平均値を、作用時間０分におけるウイルス感染力価とし、ウイルス不活性化剤１分作用ウイルス溶液を用いて算出されたウイルス感染力価の平均値を、作用時間１分におけるウイルス感染力価の値とする。

本発明のウイルス不活性化剤は、マウスノロウイルスを試験ウイルスとした下記タンパク質汚れ存在時マウスノロウイルス感染力価測定において、作用時間１分におけるウイルス感染力価（対数）の値が、作用時間０分におけるウイルス感染力価（対数）の値より２．０以上減少していることが望ましく、４．０以上減少していることがより望ましい。
本発明のウイルス不活性化剤が、このようなウイルス不活性化効果を奏すると、カリシウイルス科ウイルスの感染を防止することができる。

（タンパク質汚れ存在時マウスノロウイルス感染力価測定）
（１）マウスノロウイルスを、マウスのマクロファージ由来細胞株であるＲＡＷ２６４．７細胞（ＡＴＣＣＴＩＢ−７１）に感染させて細胞を培養する。
（２）次に、マウスノロウイルスが感染したかどうかを細胞変性効果（Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔ：ＣＰＥ）により確認する。
細胞変性効果を確認した後、培養細胞の凍結融解を繰り返すことにより、培養細胞を破砕する。
（３）牛肉エキス（ナカライテスク社製）０．１ｇをＤＭＥＭ培地で溶解して１０％肉エキス液を作製し、遠心分離後の培養細胞破砕液の上清と、１０％肉エキスとを１：１の割合（容量）で混合し、ウイルス溶液とする。
（４）ウイルス不活性化剤と、ウイルス溶液とを９：１の割合（容量）で混合し、室温で１分経過後、１０％牛胎児血清含有ＤＭＥＭ培地で１００倍希釈することにより、ウイルス不活性化剤のウイルスに対する作用を停止させる。
この工程により得られた溶液をウイルス不活性化剤１分作用ウイルス溶液とする。
（５）１０％牛胎児血清含有ＤＭＥＭ培地と、ウイルス溶液とを９：１の割合（容量）で混合した直後、１０％牛胎児血清含有ＤＭＥＭ培地で１００倍希釈することにより、得られた溶液をウイルス不活性化剤０分作用ウイルス溶液とする。
（６）ウイルス不活性化剤０分作用ウイルス溶液及びウイルス不活性化剤１分作用ウイルス溶液を、それぞれ、１０％牛胎児血清含有ＤＭＥＭ培地により、１０倍段階希釈する。１ウェルにＲＡＷ２６４．７細胞を５０μＬずつ分注した９６ｗｅｌｌマイクロプレートに、各段階希釈液を５０μＬずつ加える。
（７）ウイルス不活性化剤０分作用ウイルス溶液及びウイルス不活性化剤１分作用ウイルス溶液の段階希釈液が加えられたＲＡＷ２６４．７細胞を３７℃、５％ＣＯ_２の条件で、４日間培養する。
（８）培養したＲＡＷ２６４．７細胞のＣＰＥを指標にＴＣＩＤ_５０（ＴｉｓｓｕｅＣｕｌｔｕｒｅＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｏｓｅ５０％）により各ウイルス溶液のウイルス感染力価（対数）を定量する。
（９）上記（１）〜（８）の工程を３回独立に行い、ウイルス不活性化剤０分作用ウイルス溶液を用いて算出されたウイルス感染力価の平均値を、作用時間０分におけるウイルス感染力価とし、ウイルス不活性化剤１分作用ウイルス溶液を用いて算出されたウイルス感染力価の平均値を、作用時間１分におけるウイルス感染力価の値とする。

本発明のウイルス不活性化剤は、インフルエンザウイルスを試験ウイルスとした下記タンパク質汚れなし時インフルエンザウイルス感染力価測定において、作用時間１分におけるウイルス感染力価（対数）の値が、作用時間０分におけるウイルス感染力価（対数）の値より２．０以上小さいことが望ましく、４．０以上小さいことがより望ましい。
本発明のウイルス不活性化剤が、このようなウイルス不活性化効果を奏すると、インフルエンザウイルスの感染を防止することができる。

（タンパク質汚れなし時インフルエンザウイルス感染力価測定）
（１）インフルエンザウイルスを、イヌ腎臓尿細管上皮細胞由来株化細胞であるＭＤＣＫ細胞に感染させて細胞を培養する。
（２）次に、インフルエンザウイルスが感染したかどうかを細胞変性効果（Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃｅｆｆｅｃｔ：ＣＰＥ）により確認する。
細胞変性効果を確認した後、培養細胞の凍結融解を繰り返すことにより、培養細胞を破砕する。
（３）次に、得られた培養細胞破砕液を遠心分離し、上清をウイルス溶液とする。
（４）ウイルス不活性化剤と、ウイルス溶液とを９：１の割合（容量）で混合し、室温で１分経過後、２μｇ／ｍＬトリプシン（牛脾臓由来結晶）を含むＥＭＥＭ培地（以下、トリプシン含有ＥＭＥＭ培地）で１００倍希釈することにより、ウイルス不活性化剤のウイルスに対する作用を停止させる。
この工程により得られた溶液をウイルス不活性化剤１分作用ウイルス溶液とする。
（５）トリプシン含有ＥＭＥＭ培地と、ウイルス溶液とを９：１の割合（容量）で混合した直後、トリプシン含有ＥＭＥＭ培地で１００倍希釈することにより、得られた溶液をウイルス不活性化剤０分作用ウイルス溶液とする。
（６）ウイルス不活性化剤０分作用ウイルス溶液、ウイルス不活性化剤１分作用ウイルス溶液を、それぞれ、トリプシン含有ＥＭＥＭ培地により１０倍段階希釈した。ＭＤＣＫ細胞を培養した９６ｗｅｌｌマイクロプレートの培地を捨て、段階希釈液を１００μＬずつ加えた。
（７）ウイルス不活性化剤０分作用ウイルス溶液及びウイルス不活性化剤１分作用ウイルス溶液の段階希釈液が加えられたＭＤＣＫ細胞を３７℃、５％ＣＯ_２の条件で、４日間培養する。
（８）培養したＭＤＣＫ細胞のＣＰＥを指標にＴＣＩＤ_５０（ＴｉｓｓｕｅＣｕｌｔｕｒｅＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＤｏｓｅ５０％）により各ウイルス溶液のウイルス感染力価（対数）を定量する。
（９）上記（１）〜（８）の工程を３回独立に行い、ウイルス不活性化剤０分作用ウイルス溶液を用いて算出されたウイルス感染力価の平均値を、作用時間０分におけるウイルス感染力価とし、ウイルス不活性化剤１分作用ウイルス溶液を用いて算出されたウイルス感染力価の平均値を、作用時間１分におけるウイルス感染力価の値とする。

次に、本発明のウイルス不活性化剤、及び、本発明のノロウイルス不活性化剤の用途を説明する。
本発明のウイルス不活性化剤、又は、本発明のノロウイルス不活性化剤は、手洗い液、中性洗剤、消臭剤に加えてもよい。
本発明のウイルス不活性化剤、又は、本発明のノロウイルス不活性化剤を含む手洗い液、洗浄剤、消臭剤等は、ポンプボトルやスプレーボトルに詰められていてもよい。

また衛生資材に用いてもよい。このような衛生資材は、本発明の衛生資材でもある。

本発明の衛生資材は、上記本発明のウイルス不活性化剤、又は、上記本発明のノロウイルス不活性化剤を含むことを特徴とする。
本発明のウイルス不活性化剤は、ウイルス不活性化効果を奏するので、このようなウイルス不活性化剤を含む衛生資材を用いることにより、ウイルス感染を防ぐことができる。

本発明の衛生資材は、特に限定されるものではないが、例えば、マスク、使い捨て手袋、使い捨て布巾、ティッシュペーパー、ウエットティッシュ等があげられる。

以下に本発明をより具体的に説明する実施例を示すが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

（実施例１）
エタノールが５０．００重量％、アルギニンが０．７５重量％、炭酸水素ナトリウムが０．５０重量％、クエン酸が０．５０重量％、グリセリン脂肪酸エステルが０．１０重量％、ショ糖脂肪酸エステルが０．１０重量％となるようにこれら化合物と、水とを混合して実施例１に係るウイルス不活性化剤を作製した。

（実施例２〜１８）及び（比較例１〜７）
ウイルス不活性化剤の材料の種類及び割合を表１及び表２に示すように変更した以外は、実施例１と同様に実施例２〜１８及び比較例１〜７に係るウイルス不活性化剤を作製した。
なお、表１中「％」は重量％を意味する。

（タンパク質汚れ存在時ネコカリシウイルス感染力価測定）
ウイルス不活性化剤として、実施例１〜１７及び比較例１〜６に係るウイルス不活性化剤を用い、上記（タンパク質汚れ存在時ネコカリシウイルス感染力価測定）の方法に基づき、作用時間０分におけるウイルス感染力価の値と、作用時間１分におけるウイルス感染力価の値との差を算出して評価した。評価基準は以下の通りである。結果を表１及び表２に示す。
Ａ：４．０以上の感染力価の減少（充分な効果あり）
Ｂ：２．０以上、４．０未満の感染力価の減少（効果あり）
Ｃ：２．０未満の感染力価の減少（効果なし）

（タンパク質汚れなし時ネコカリシウイルス感染力価測定）
ウイルス不活性化剤として、実施例１〜１７及び比較例１〜６に係るウイルス不活性化剤を用い、上記（タンパク質汚れ存在時ネコカリシウイルス感染力価測定）の（３）工程において、１０％肉エキスを混合せず、遠心分離後の培養細胞破砕液の上清をウイルス溶液とした以外は、上記（タンパク質汚れ存在時ネコカリシウイルス感染力価測定）と同様にタンパク質汚れなし時ネコカリシウイルス感染力価測定を行った。
作用時間０分におけるウイルス感染力価の値と、作用時間１分におけるウイルス感染力価の値との差を算出して評価した。評価基準は上記（タンパク質汚れ存在時ネコカリシウイルス感染力価測定）の評価基準と同様である。結果を表１及び表２に示す。

（タンパク質汚れ存在時マウスノロウイルス感染力価測定）
ウイルス不活性化剤として、実施例１〜１７及び比較例１〜６に係るウイルス不活性化剤を用い、上記（タンパク質汚れ存在時マウスノロウイルス感染力価測定）の方法に基づき、作用時間０分におけるウイルス感染力価の値と、作用時間１分におけるウイルス感染力価の値との差を算出して評価した。評価基準は以下の通りである。結果を表１及び表２に示す。
Ａ：４．０以上の感染力価の減少（充分な効果あり）
Ｂ：２．０以上、４．０未満の感染力価の減少（効果あり）
Ｃ：２．０未満の感染力価の減少（効果なし）

（タンパク質汚れなし時マウスノロウイルス感染力価測定）
ウイルス不活性化剤として、実施例１〜１７及び比較例１〜６に係るウイルス不活性化剤を用い、上記（タンパク質汚れ存在時マウスノロウイルス感染力価測定）の（３）工程において、１０％肉エキスを混合せず、遠心分離後の培養細胞破砕液の上清をウイルス溶液とした以外は、上記（タンパク質汚れ存在時マウスノロウイルス感染力価測定）と同様にタンパク質汚れなし時マウスノロウイルス感染力価測定を行った。
作用時間０分におけるウイルス感染力価の値と、作用時間１分におけるウイルス感染力価の値との差を算出して評価した。評価基準は上記（タンパク質汚れ存在時マウスノロウイルス感染力価測定）の評価基準と同様である。結果を表１及び表２に示す。

（タンパク質汚れなし時インフルエンザウイルス感染力価測定）
ウイルス不活性化剤として、実施例１〜１８及び比較例１〜７に係るウイルス不活性化剤を用い、上記（タンパク質汚れなし時インフルエンザウイルス感染力価測定）の方法に基づき、作用時間０分におけるウイルス感染力価の値と、作用時間１分におけるウイルス感染力価の値との差を算出して評価した。評価基準は以下の通りである。結果を表１及び表２に示す。
Ａ：４．０以上の感染力価の減少（充分な効果あり）
Ｂ：２．０以上、４．０未満の感染力価の減少（効果あり）
Ｃ：２．０未満の感染力価の減少（効果なし）

（溶解性試験及び低温安定性）
アルカリ剤として、炭酸塩又は炭酸水素塩が用いられた実施例１〜４、６、７、９〜１１及び１４〜１６に係るウイルス不活性化剤、並びに、比較例１及び２に係るウイルス不活性化剤について、溶解性試験及び低温安定性試験を行った。これらの評価手順は以下の通りである。結果を表３に示す。
溶解性試験：各ウイルス不活性化剤の材料を混合して、２０℃、５００ｒｐｍで５分攪拌後、各ウイルス不活性化剤の状態を目視で観察した。評価基準は以下の通りである。
Ａ：完全にアルカリ剤が溶解していた。
Ｂ：アルカリ剤が完全に溶解しておらず、底に残留していた。
低温安定性試験：各ウイルス不活性化剤を調合し、−７℃、２４時間静置した後、各ウイルス不活性化剤の状態を目視で観察した。評価基準は以下の通りである。
Ａ：完全にアルカリ剤が溶解していた。
Ｂ：アルカリ剤が析出していた。

Claims

エタノールと、アミノ酸と、アルカリ剤とを含むことを特徴とするウイルス不活性化剤。
前記アミノ酸は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、トレオニン（スレオニン）、システイン、メチオニン、プロリン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン、ヒスチジン、リシン、シスチン、テアニン、タウリン、アスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、アルギニングルタミン酸塩、リシンアスパラギン酸塩及びリシングルタミン酸塩からなる群から選択される少なくとも１種である請求項１に記載のウイルス不活性化剤。
前記アミノ酸は、アルギニン、ヒスチジン及びリシンからなる群から選択される少なくとも１種である請求項１又は２に記載のウイルス不活性化剤。
前記アルカリ剤は、炭酸塩、炭酸水素塩、リン酸二水素塩、リン酸水素二塩及びリン酸三塩からなる群から選択される少なくとも１種である請求項１〜３のいずれかに記載のウイルス不活性化剤。
前記アルカリ剤は、ナトリウム塩、カリウム塩及びアンモニウム塩からなる群から選択される少なくとも１種の塩である請求項４に記載のウイルス不活性化剤。
前記ウイルス不活性化剤中の前記エタノールの質量濃度は、８．０５〜８５．７０重量％である請求項１〜５のいずれかに記載のウイルス不活性化剤。
前記ウイルス不活性化剤中の前記アミノ酸の質量濃度は、０．０５〜５．００重量％である請求項１〜６のいずれかに記載のウイルス不活性化剤。
前記ウイルス不活性化剤中の前記アルカリ剤の質量濃度は、０．０５〜１０．００重量％である請求項１〜７のいずれかに記載のウイルス不活性化剤。
さらに酸剤を含む請求項１〜８のいずれかに記載のウイルス不活性化剤。
前記酸剤は、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、リン酸、酒石酸、フィチン酸、アジピン酸、グルコン酸及びコハク酸からなる群から選択される少なくとも１種である請求項９に記載のウイルス不活性化剤。
前記ウイルス不活性化剤中の前記酸剤の質量濃度は、０．００１〜２．００重量％である請求項９又は１０に記載のウイルス不活性化剤。
前記ウイルス不活性化剤のｐＨは、８〜１２である請求項１〜１１のいずれかに記載のウイルス不活性化剤。
請求項１〜１２のいずれかに記載されたウイルス不活性化剤からなることを特徴とするノロウイルス不活性化剤。
請求項１〜１２のいずれかに記載のウイルス不活性化剤、又は、請求項１３に記載のノロウイルス不活性化剤を含むことを特徴とする衛生資材。