JP6783516B2 - カリシウイルス不活化効果を有する組成物 - Google Patents

Description

本発明は、食品衛生、医療、福祉などの分野において、日常行う衛生管理、とくに対象物表面に適用し、ノロウイルスを代表としたカリシウイルス科のウイルス不活化効果を有する組成物に関する。

カリシウイルス科の代表的なウイルスであるノロウイルスは近年、厚生労働省が行っている食中毒統計においても、最も患者数の多い食中毒の原因ウイルスとして知られ、ノロウイルスに汚染された食品を摂取することで食中毒を引き起こす。

ノロウイルスは少量（１０個〜１００個）でもヒトに十分感染する力を有しており、環境中においても長期間生存できる。そのため、二次感染を引き起こし、一人の感染者が原因で何百、何千人に感染症を引き起こす可能性がある。

感染経路としては、たとえば、ノロウイルスに汚染された食品を調理した調理器具やヒトの手を介して、他の食品に汚染が広がるケースがある。また、ノロウイルス患者の糞便中には数週間に渡り、ウイルスが排出されるので、患者の手を介して環境表面（トイレ周辺、ドアノブ、手すり、テーブルなど）が汚染され、二次感染を引き起こすケースもある。さらには、ノロウイルス患者が嘔吐した際に、その処理が不十分であったことが原因で環境中にウイルスが残存し、多数の二次感染者を出すケースも少なくない。

したがって、食品を取り扱う施設のみならず、医療施設、福祉施設および公共施設などにおいてもノロウイルス対策はとても重要な課題となっており、ノロウイルス不活化効果を有する組成物の発明が望まれている。

しかしながら、ヒトに感染するノロウイルスは、現在のところ実験室における培養系が確立されていない。そこで、ノロウイルスの不活化効果を評価するために、その代替ウイルスとして、同じカリシウイルス科のネコカリシウイルスが用いられている。また、近年では、よりノロウイルスと遺伝子系統的に近い、マウスノロウイルスが培養できるようになり、ノロウイルスの代替ウイルスとして用いられるようになっている（非特許文献１、非特許文献２）。

カリシウイルスは物理化学的抵抗性が強く、ウイルスを不活化するのは非常に困難である。たとえば、消毒用アルコールでは短時間でのウイルス不活化効果は低く、逆性石けんについてもほとんど不活化効果は得られない。

そのため、ノロウイルス不活化の一般的な方法としては、次亜塩素酸ナトリウム（200ppm以上）や加熱や熱湯による処理（８５℃以上）が利用されている。しかし、次亜塩素酸ナトリウムや加熱による処理は対象となる環境表面の材質や素材に悪影響を及ぼす可能性がある。また、熱湯による処理は対象表面や素材にかけた時点で温度が低下してしまい、温度を保持させるのが難しいという問題がある。

一方、ジデシルジメチルアンモニウムクロリド（ＤＤＡＣ）、ベンザルコニウム塩化物（ＢＡＣ）あるいはポリヘキサメチレンビグアニド系化合物（ＰＨＭＢ）単独ではカリシウイルスに対する不活化効果は得られないが、ＤＤＡＣ、エタノールおよびアルカリ剤を組み合わせると、ネコカリシウイルスに対する不活化効果が高まり、環境表面の消毒剤としての利用が期待できるという報告がある（非特許文献３）

また、特許第４９７５９８７号には、ＰＨＭＢを０．０５〜０．５重量％含むとともに、アルコールを４０〜８０重量％含み、ｐＨを９〜１２の範囲に調整したノロウイルス不活化効果を有する組成物が開示されている（特許文献１）

そして、特許第５２５５４９５号では、ビス型のカチオン系界面活性剤である１，４ − ビス（３ ，３’−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ） ブタンジブロマイドを０．０１質量％以上、エチレンジアミン四酢酸を０．０００６２５質量％以上含有する殺カリシウイルス剤組成物が開示されている（特許文献２）

上記のような、ＤＤＡＣやＰＨＭＢおよびエタノールにアルカリ剤を加えた製剤はｐＨが９以上であるため、使用用途によっては材質に影響を及ぼしたり、取扱いに注意が必要であるなどの安全面の問題がある。

また、環境表面や手指に使用することを想定した場合には速乾性や即効性が求められることが多いが、１，４ − ビス（３ ，３’−（１−デシルピリジニウム）メチルオキシ） ブタンジブロマイドとエチレンジアミン四酢酸との組み合わせは、これらの点に関して劣っている。

特許第４９７５９８７号公報 特許第５２５５４９５号公報

「Ｍｕｒｉｎｅ Ｎｏｒｏｖｉｒｕｓ：ａ Ｍｏｄｅｌ Ｓｙｓｔｅｍ Ｔｏ Ｓｔｕｄｙ Ｎｏｒｏｖｉｒｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ」Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．８０，Ｎｏ．１１，５１０４−５１１２（２００６） 「Ｃｏｍｐａｔａｔｉｖｅ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ Ｓｅｖｅｎ Ｈａｎｄ Ｓａｎｉｔｉｚｅｒｓ ａｇａｉｎｓｔ Ｍｕｒｉｎｅ Ｎｏｒｏｖｉｒｕｓ，Ｆｅｌｉｎｅ Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｕｓ， ａｎｄ ＧＩＩ．４ Ｎｏｒｏｖｉｒｕｓ」，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｏｏｄ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｖｏｌ．７３，Ｎｏ．１２，２２３２−２２３８（２０１０） 「ノロウイルス代替のネコカリシウイルスおよび各種微生物に有効なエタノール製剤の開発」、防菌防黴、Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１１，７２５−７３２（２００７）

本発明は短時間でカリシウイルス科のウイルスを不活化でき、且つ、安全性や材質に及ぼす影響が少ないカリシウイルス不活化効果を有する組成物を提供することにある。

エタノールやＰＨＭＢやＤＤＡＣはアルカリ（ｐＨ９〜１２）にすることでカリシウイルスに対する効果が得られていたが、速乾性に優れ、安全で、かつ、材質に及ぼす影響が少ないより中性付近（ｐＨ６〜９）での有効性は得られない。

本発明では速乾性に優れ、ｐＨ６〜９でカリシウイルス不活化効果を有する組成物について鋭意研究を重ねた結果、低級アルコールを４０〜９５ｗｔ％含む水溶液に、ポリヘキサメチレングアニジン系化合物を添加した組成物がｐＨ６〜９付近であるにも関わらずカリシウイルスに対して２分以内にウイルス不活化効果を有することを見出した。

本発明によれば、低級アルコールとポリヘキサメチレングアニジン系化合物を組み合わせることでｐＨ６〜９でもカリシウイルスに短時間で不活化効果を有する組成物を得ることができる。また、本発明は低級アルコールを配合し、ｐＨも６〜９と中性付近であるため、速乾性に優れ、安全で、かつ、材質に及ぼす影響が少ないカリシウイルス不活化効果を有する組成物である。

本発明は（ a ）０．０５〜０．５ｗｔ％のポリヘキサメチレングアニジン系化合物、（ b ）４０〜９５ｗｔ％の低級アルコールまたは２つ以上のこれらの混合物を含有したカリシウイルス不活化効果を有する組成物ある。

ポリヘキサメチレングアニジン系化合物は通常、ポリヘキサメチレングアニジン塩酸塩（ＰＨＭＧＨ）あるいはポリヘキサメチレングアニジンリン酸塩（ＰＨＭＧＰ）の形で販売されている。

本発明の組成物中に含まれるポリヘキサメチレングアニジン系化合物の配合量は、０．０５〜０．５ｗｔ％である。ポリヘキサメチレングアニジン系化合物が０．０５ｗｔ％であるとカリシウイルス不活化効果が不十分であり、０．５ｗｔ％を超えるとカリシウイルス不活化効果に大きく変化はみられなくなる。また、０．５ｗｔ％を超えた場合には手肌への優しさが低下し、環境表面などの材質に及ぼす影響が大きくなる。

本発明の組成物中に含まれる低級アルコールとしては、エタノール、イソプロパノール、ノルマルプロパノールから選ばれ、これら単独あるいは２つ以上を組み合わせて用いる。組成物中のアルコール含有量は４０〜９５ｗｔ％、特に５０〜８０ｗｔ％であるのが好ましい。アルコールの含有量が４０ｗｔ％未満であるとカリシウイルス不活化効果が不十分となる。

安全性および環境表面などの材質に及ぼす影響を考慮する上で、本発明の組成物のｐＨは重要であり、６〜９、特に７〜８の中性であることが好ましい。ｐＨを調整する場合はｐＨ調整剤を適量添加する。ｐＨ調整剤としては、有機酸、無機酸、あるいは有機塩、無機塩などを用いる。例えば、乳酸、クエン酸、リンゴ酸、グルコン酸、リン酸、乳酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リンゴ酸ナトリウム、グルコン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、炭酸ナトリウム、リン酸三ナトリウム、炭酸水素ナトリウムなどが挙げられる。

本発明の組成物はヒトの手指や皮膚の消毒、および環境表面・器具等の消毒に用いることができる。環境表面・器具とは特にノロウイルスに汚染されている可能性が高い、ヒトが手でよく触れる部分が主であり、具体的にトイレ周辺（便座、便器、便器フタ、水洗レバー）、ドアノブ、電気スイッチ、手すり、テーブル、医療器具などである。

本発明の効果を確認するため、カリシウイルス科でノロウイルスの代替として用いられるネコカリシウイルスおよびマウスノロウイルスの不活化試験を行った。また、材質に及ぼす影響を評価するため、金属腐食性試験を行った。

（ウイルス不活化試験の内容）
［使用ウイルス］
ネコカリシウイルスＦ９株（ＦＣＶ）およびマウスノロウイルスＳ７株（ＭＮＶ）を用いた。
［使用細胞］
ＦＣＶは猫腎臓細胞（ＣＲＦＫ）を用いた。ＭＮＶはＲＡＷ２６４細胞（ＲＡＷ）を用いた。
［培養に用いる培地］
ＦＣＶにはＤｕｌｂｅｃｃｏ‘ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ 培地（ＤＭＥＭ）を用い、血清は新生仔ウシ血清（ＮＣＳ）を用いた。ＭＮＶにはＥａｇｌｅ‘ｓ ｍｉｎｉｍｕｍ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ 培地（ＭＥＭ）を用い、血清はウシ胎児血清（ＦＢＳ）を用いた。
［ウイルス不活化試験］
試験薬剤０．９ｍＬにウイルス液を０．１ｍＬ加え、２０℃で一定時間作用させた。作用後、ＦＣＶはＤＭＥＭ（１０％ＮＣＳ配合）で１０倍希釈して反応停止後、ＤＭＥＭ（２％ＮＣＳ配合）で段階希釈し、あらかじめ９６穴プレートで培養していたＣＲＦＫに接種し、３７℃、５％ＣＯ２条件下で３日間培養した。ＭＮＶはＭＥＭ（１０％ＦＢＳ配合）で１０倍希釈して反応停止後、ＭＥＭ（１０％ＦＢＳ配合）段階希釈し、あらかじめ９６穴プレートで培養していたＲＡＷに接種し、３７℃、５％ＣＯ２条件下で４日間培養した。培養後、細胞変性効果を確認し、ウイルス感染価（ＴＣＩＤ５０）を求め、対数減少値を算出した。
［判定基準］
◎：対数減少値４以上（または対数減少値３以上で検出限界以下）
○：対数減少値３以上
△：対数減少値２〜３
×：対数減少値２未満
◎、○であれば実用上有効とした。
［試験薬剤］
試験薬剤は実施例１〜６、比較例１〜６の薬剤を用いた。各薬剤の組成は結果と共に示される下記表１および２中に示すとおりである。表１は本発明の好適な実施例について示した。表２はポリヘキサメチレングアニジン化合物とポリヘキサメチレンビグアニド（ＰＨＭＢ）のｐＨによるウイルス不活化効果比較について示した。

表１から本発明にかかる組成物である実施例１〜６は１分間の作用でもＦＣＶに対して優れた不活化効果を示しており、実施例１、２および５についてはＭＮＶに対しても優れた不活化効果を示すことがわかる。一方、エタノールおよびＰＨＭＧＰをそれぞれ単独で配合した比較例１および２に関しては、ＦＣＶに対する不活化効果は低かった。

また、表２から本発明にかかる低級アルコールにＰＨＭＧＨおよびＰＨＭＧＰを配合した、実施例１、５および６は２分間の作用で非常に優れたＦＣＶ不活化効果を示しているのに対し、低級アルコールにＰＨＭＢを配合し、ｐＨを７付近に調整した比較例３については優れた効果は得られなかった。低級アルコールにＰＨＭＧＨ、ＰＨＭＧＰあるいはＰＨＭＢを配合し、ｐＨを１１．７〜１１．８のアルカリ域に調整した比較例４〜６は、共に優れたＦＣＶ不活化効果を示し、その効果は同等であった。

（金属腐食性試験の内容）
［試験方法］
ステンレス（ＳＵＳ３０４、ＳＵＳ４３０）およびアルミニウムのテストピースを試験薬剤に浸漬し、室温で１週間静置した。試験前後の外観変化を観察し、金属腐食性の有無を確認した。
［試験薬剤］
試験薬剤としては、ＦＣＶに対して高い不活化効果を示した実施例５（ｐＨ７．４）および比較例６（ｐＨ１１．７、ＰＨＭＢ配合）を用いた。

表３から、実施例５ではステンレスおよびアルミニウムのテストピースに対する金属腐食性はみられなかった。一方、比較例６はステンレステストピースに対する金属腐食性はみられなかったが、アルミニウムテストピースに対して金属腐食性がみられた。このように実施例５はカリシウイルスに対する効果が高い上に、金属に及ぼす影響も少ないことを確認した。

以上の結果より、低級アルコールにポリヘキサメチレングアニジン化合物を配合した組成物はカリシウイルス科のＦＣＶおよびＭＮＶ両方のウイルスに対して優れた効果を発揮し、かつ、金属など材質に及ぼす影響が少ない点で先行技術よりも優れている。

本発明によれば、低級アルコールとポリヘキサメチレングアニジン化合物を組み合わせることで、ノロウイルスを代表としたカリシウイルス科のウイルスに対して優れた不活化効果を発揮する組成物を得ることができる。本発明は低級アルコールを配合し、ｐＨは６〜９の組成物であることから、速乾性に優れ、安全で、かつ、材質に及ぼす影響が少ないことを特徴としており、手指消毒や環境表面および物品の消毒に利用できる。

Claims (5)

1. 以下、（ａ）および（ｂ）を含み、ｐＨが６〜９の範囲にある、カリシウイルス不活化用即効性組成物
   （ａ）０．０５〜０．５ｗｔ％のポリヘキサメチレングアニジン系化合物
   （ｂ）５０〜９５ｗｔ％のエタノールまたはエタノールとイソプロパノール及びノルマルプロパノールの少なくとも１種との混合物。
2. カリシウイルス科のネコカリシウイルスおよびマウスノロウイルスの少なくとも一方に対してウイルス不活化効果を有する請求項１に記載の組成物。
3. ヒトの手指若しくは皮膚の消毒、または環境表面若しくは器具の消毒に用いられる、請求項１または２に記載する組成物。
4. ５０〜９５ｗｔ％のエタノールまたはエタノールとイソプロパノール及びノルマルプロパノールの少なくとも１種との混合物を含む水溶液にカリシウイルス不活化即効作用を付与する方法であって、前記水溶液に０．０５〜０．５ｗｔ％となる割合でポリヘキサメチレングアニジン系化合物を配合し、水溶液のｐＨを６〜９に調整することを特徴とする、前記方法。
5. 前記方法が、同時に、エタノールとポリヘキサメチレングアニジン系化合物を含有する水溶液の金属腐食性を抑制する方法でもある、請求項４に記載する方法。