JP6513802B2 - ナノ粒子検出のためのレーザー光結合 - Google Patents
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Description
出願当初の特許請求の範囲に記載された事項をそのまま以下に付記する。
[1]1つのレーザーダイオード(60)と、1つの平凸レンズ(70)と、1つの標準的な厚さ0.17mmのカバーガラス(15)と、1つの乾燥系対物レンズ(40)と、1つのCCDカメラ(200)とを含む、特定のレーザー光結合(図1A,図1B)によって特徴付けられる、サブ回折ナノ粒子の検出方法。これら5つの要素の単純だが特定の光学配置は、直径100nmまでのサイズのサブ回折球状ナノ粒子(55)を検出することを可能にする。光源は、0.17mmの厚さを有するむきだしのスライドカバーガラス(15)のリムに合焦されたレーザービーム(10)を生成することができる、100mWの出力を放出する、波長405nmのレーザーダイオード(60)である。むきだしのカバーガラス(15)は、通常の直角表面を有し、傾斜した端面のない、標準的な未処理のものであることを意味している。レーザービーム(10)は、スライドカバーガラス(15)の平面に対して、直径0.15mmの円形スポット及び25±2度の入射角で、カバーガラス(15)のリムにぶつかる。スネルの法則により、レーザービームが空気−ガラス境界面を通過したとき、レーザービームは25度から16度にその入射角を変える。これは、カバーガラス上にエバネッセント波を生成することができる内部反射を得るための十分条件であり、透明溶液中に分散し、カバーガラス上に位置されたナノ粒子を励起させるために十分に高性能である。Z軸上のエバネッセント波の場の侵入深さは、その中にナノ粒子が分散されている水又はグリセリンである溶液の屈折率に依存して、50nmから700nmまで変化可能である。検出されたナノ粒子から生成された光信号は、乾燥系対物レンズ(40)及びCCDカメラ(200)を使用して捕らえられる。結果として生じた像は、CCDカメラの前の適切なバンドパスフィルターの挿入に依存して、あるいは依存することなく、蛍光で、あるいは散乱モードで捕らえることができる。ナノ粒子の検出は、むきだしのカバーガラス(15)の内側にレーザービームの内部反射(45)によって生成されたエバネッセント波の場(50)の内部で、ガラス−液体境界面で、それに近接して、カバーガラス(15)上に生じる。対物レンズ(40)の焦点(130)は、スライドカバーガラス(15)における内部反射(45)によって生じた光の線と交差するところに合わせられる。ナノ粒子(55)が、ナノ粒子(55)を含む溶液用入口(25)及び溶液用出口(30)を有する、カバーガラス(15)とスライドガラス(20)との間に得られる、線形流路にそれらを挿入することによって、表面に堆積されている。スライドガラス(20)及びカバーガラス(15)は、流路の内部境界を規定しているシリコーン薄膜と一緒に貼り付けられている。そして、スライドガラスは、リニアステージ(150)の可動スライド側へ統合されたスライドガラスホルダー(35)に留まる。
[2][1]に記載の方法の適用が、油浸対物レンズの使用を必要としないという事実によって特徴付けられる、重力がない状態でのサブ回折ナノ粒子の検出方法。それ故、重力がない状態でのその振る舞いを修正しうる、サブ回折ナノ粒子検出方法の関連する要素がない。
[3]サブ回折ナノ粒子を検出可能な、小型かつ軽量で自家動力式のポータブル光学デバイス(図9)であって、その動作原理は、[1]に記載の方法によって特徴付けられる。6.5dm 3 の最大サイズを有する光学デバイスは、カバーガラス表面の自動2次元XY走査中さえもレーザー光結合を与えるために、注意深く組み立てられ統合されたいくつかのモジュール、すなわち、1つのレーザーモジュール(図2)と、1つのLEDモジュール(図3)と、1つの機械モジュール(図4)と、1つの顕微鏡モジュール(図5)と、1つの電子モジュール(図7)とからなる。これら全てのモジュールが、自動XY走査中、光結合(図1B)の有効性を保証することができる完全な光学電気機械ユニット(図8)をもたらすように設計され単一実施形態へと統合されている。モジュールは、以下のように記載される。レーザーモジュール(図2)は、1つのレーザーダイオード(60)と、1つの平凸レンズ(70)と、2つのミラー(85,90)と、2つのミラーホルダー(75,80)とからなり、これらの要素の全てが、同じアルミニウム筐体(115)の内部に配置されている。光源として使用されるレーザーダイオード(60)は、熱電冷却器(65)を装備している。レーザーダイオード(60)は、図1A並びに図1Bに示されるようなスライドカバーガラス(15)のリムに光を合焦させる平凸レンズ(70)上にレーザービーム(10)を放射する。光学デバイス(図9)のサイズを最小化するために、レーザービーム(10)は、まず、専用のホルダー(75,80)に位置された2つのミラー(85,90)によって反射されて、スロット(95)を通過してアルミニウム筐体(115)から出る。レーザーモジュールは、25±2度(図1B,図2)に等しいレーザービーム(10)の入射角を有するように構築されている。入射角は、特定のレーザー光結合に適合するために、サービスホール(255)によってX及びY軸で正確に調節されることができる。LEDモジュール(図3)は、1つの多色RGB3ワットチップLED(100)と、1つの光彩絞り(105)と、対物レンズの焦点(130)にLED光線を投影することができる1つのコンデンサレンズ(110)とからなる。光彩絞り(105)は、チップのRGB遠隔制御を提供するために、内部IR受信フォトダイオード(135)に向けられた選択的な正方形ミラー(125)のための側方の区画室を有する。LEDモジュール(図3)の要素(100,105,110,125,135)は、円筒形容器(120)に組み込まれている。LEDモジュールの使用は、固液界面でカバーガラス(15)上に焦点を得るために、Z軸上の対物レンズの初期制御を容易にする。スライドガラスホルダー(35)のXY操作用の機械モジュール(図4)は、移動式の2つのブロックと、これらの間に位置されたアルミニウム筐体(115)とからなる。移動式の第1のブロックは、1つのX軸リニアステージ(150)と、ギヤ(165)によって連結された1つのDCモーター(140)とを有する。リニアステージ(150)及びDCモーター(140)は、アルミニウム筐体(115)の上部に位置され、それと統合されている。移動式の第2のブロックは、1つのY軸リニアステージ(155)と、軸箱と連結された1つのDCモーター(145)とを有する。第2のブロックのリニアステージ(155)及びDCモーターは、ベースプレート(235)の上部に位置され、それと統合されている。リニアステージ(150)は、それと一緒に組み込まれたスライドガラスホルダー(35)の、X軸上の移動を決定する一方、リニアステージ(155)は、アルミニウム筐体(115)の、それに固定された要素(35,140,150,165)及びそれの内部に固定された要素(60,65,70,75,80)の、Y軸上の移動を決定する。顕微鏡モジュール(図5)は、対物レンズホルダー(160)と、Z軸リニアステージ(275)と、2つのステップモーター(195,280)と、1つの乾燥系対物レンズ(40)と、2つのミラー(180,185)と、1つのフィルターホイール(190)と、1つのCCDカメラ(200)とからなる。対物レンズホルダー(160)が、リニアステージ(275)の可動スライドにロックされ、1つのステップモーター(280)が、軸箱によってそのリニアステージと連結されている。これら2つの要素は、後方垂直面(240)に統合されている。ミラーホルダー(170,175)は、一方(170)が垂直後方プレート(240)と統合され、他方(175)がベースプレート(235)に統合されている。ステップモーター(195)及びCCDカメラ(200)は、ベースプレート(235)に統合されている。ステップモーター(195)の回転軸は、軸箱によってフィルターホイール(190)に連結されている。顕微鏡モジュール(図5)は、XY軸に固定されており、対物レンズホルダー(160)にねじ留めされた乾燥系対物レンズ(40)から、焦点を得るためにZ軸上で移動することができる。顕微鏡モジュール(図5)は、LEDモジュール(図3)で試料を照射するおかげで、CCDカメラ(200)のUSB出力を通して、透過広視野顕微鏡法で像を捕らえてビデオ映像を記録するための能力を光学デバイス(図9)に提示する。光透過の場合には、像及びビデオ映像は、460nmの青色、530nmの緑色、630nmの赤色である3つの異なる波長で捕らえられる。光学機械ユニット(図6)は、XY走査中、正しい光結合(図1B)を提供するために必要である。光学機械ユニットは、レーザーモジュール(図2)と、XY操作用の機械モジュール(図4)と、顕微鏡モジュール(図5)とを有する。光学機械ユニット(図6)は、スライドガラスのレーザー走査中、13×13mmのXY領域において、[1]に記載の光結合を維持して像の焦点を保つ。光学機械ユニットは、光学デバイス(図9)に、CCDカメラ(200)を介して、レーザーモジュールでの照明によって、内部反射顕微鏡法で像を捕らえる能力を与える。特に、光学フィルター(図1A)なしで散乱モードで像を得ることが可能であり、一方、蛍光モードでの像又はビデオ映像は、フィルターホイールに位置され関心のある蛍光波長に集中された光学フィルター(図5)の助けを借りて得られる。電子モジュール(図7)は、マイクロプロセッサーを装備し、12Vの電気プラグ(210)によって電力を供給され、USBポート(205)を介してプログラム可能な第1の電子基板(215)と、第1のものの上に位置され、それと直接相互連結され、マイクロプロセッサーも装備した第2の電子基板(220)とを有する。これら2つの電子基板は、スライドガラスホルダー(35)のXY移動用の2つのDCモーター(140,145)と、レーザーモジュール(図2)のスイッチのオン/オフの切り替えのためのレーザーダイオード(60)と、LEDモジュール(図3)のスイッチのオン/オフの切り替えのためのLEDチップ多色RGB(100)と、Z軸上の焦点及びフィルターホイール(190)を制御する2つのステップモーター(195,280)と、タッチスクリーン外部インターフェース(270)とを管理するために使用される。光学電気機械ユニット(図8)は、光学機械ユニット(図6)と、LEDモジュール(図3)と、電子モジュール(図7)との統合の結果である。このユニットは、20×22×13cmにそれぞれ等しい幅×長さ×高さの最大サイズを有するアルミニウムプレート(235,240,245,250,260,265)からなる1つの平行六面体の筐体と、7×10cmにそれぞれ等しい直径の最大サイズを有するLEDモジュール用の1つの円筒形容器(120)とである2つの体積形状に組み込まれている。全体積が6.5dm 3 である光学電気機械ユニット(図8)は、2つの異なる視点からスライドカバーガラス(15)を照射することができ、一方は、LEDモジュールでの照射のおかげで透過広視野顕微鏡法であり、一方は、レーザーモジュール(図2)での照射のおかげで内部反射蛍光/散乱顕微鏡法である。これら2つの光信号は、単独で、又は両方同時に、CCDカメラ(200)から捕らえられる。フィルターホイール(190)は、CCDカメラの前に配置され、像又はビデオ映像を捕らえるために、1つのステップモーター(195)によって、散乱、あるいは蛍光で、関心のある波長を選択することを可能にする。
[4]異なる重力がある状態で、又は重力が全くない状態で、サブ回折ナノ粒子光学センサとして動作する能力がある、[2]に記載の方法を実行する、[3]に記載されるように設計された光学デバイス(図9)。これは、光学センサの特定の構成のおかげで可能であり、その要素は、全て重力の影響を受けない。特に、Y軸リニアステージ(155)と、ギヤードモーター(145)と、ミラーホルダー(175)と、CCDカメラ(200)と、電子基板(225)と、2つの電子基板(215)のうちの1つが、ベースプレート(235)にロックされている。逆に、ミラーホルダー(170)と、リニアステージ(275)と、LEDモジュール支持体(230)とが、垂直後方プレート(240)にロックされている。ベースプレート(235)及び垂直後方プレート(240)は、アルミニウムでできており、正確に90度に調整されている。スライドガラスホルダー(35)と、ベースプレート(235)と、上側プレート(260)とは、平行であり、0.01mmの精度で調整されている。右側プレート(245)、左側プレート(250)及び垂直前方プレート(265)である残りのプレートは、光学電気機械ユニット(図8)が組み込まれた平行六面体を完成している。スライドガラスホルダー(35)は、上側プレート(260)と円筒形容器(120)との間に位置され、光学デバイス(図9)の外部にただ一つの要素が配置されている。油も他の液体も、対物レンズに使用されない。
Claims (10)
- レーザーモジュールと、顕微鏡モジュールとを具備する光学デバイスであって、
前記レーザーモジュールは、スライドカバーガラス(15)のリムにぶつかるように合焦された平凸レンズ(70)上にレーザービーム(10)を放射するレーザーダイオード(60)からなり、
前記スライドカバーガラスは、XY平面として規定される平面であり、
前記レーザービーム(10)は、前記XY平面に対して25°±2°の入射角で前記スライドカバーガラス(15)の前記リムにぶつかり、
前記スライドカバーガラス(15)は、約0.17mmの厚さであり、
前記顕微鏡モジュールは、前記スライドカバーガラス(15)に垂直に位置されている光学デバイス。 - 前記スライドカバーガラスは、スライドガラスホルダー(35)上に配置される顕微鏡用スライドガラス(20)に接着されている、請求項1に記載の光学デバイス。
- 前記レーザービーム(10)は、第1のホルダー(75)に取り付けられた第1のミラー(85)に向けられて、第2のホルダー(80)に取り付けられた第2のミラー(90)に向けられ、
前記レーザーダイオードは、筐体(115)に閉じ込められ、
前記筐体(115)は、スロット(95)を有し、前記レーザービーム(10)が前記XY平面に対して25°±2°の角度で前記スロット(95)を出る、請求項2に記載の光学デバイス。 - LEDモジュールと、機械モジュールと、電子モジュールとをさらに具備し、
前記LEDモジュールは、乾燥系対物レンズ(40)の同軸上に、前記スライドカバーガラス(15)に垂直に配置され、
前記機械モジュールは、XY操作用であり、移動式の第1のブロックが、X軸に対して、前記スライドガラスホルダー(35)の、及びそれに挿入された前記顕微鏡用スライドガラス(20)のX軸上の移動を可能にし、第2のブロックが、前記スライドガラスホルダー(35)の、及び前記筐体(115)に属しそれにロックされた要素の移動を可能にし、
前記顕微鏡モジュールは、前記LEDモジュールに沿って、前記スライドカバーガラス(15)に垂直な乾燥系対物レンズ(40)の光軸を備えた前記スライドカバーガラスの下に位置されている、請求項3に記載の光学デバイス。 - 6.5dm3の最大サイズを有する、請求項1ないし4のいずれか1に記載の光学デバイス。
- 請求項1に記載のサブ回折ナノ粒子を検出可能な、小型かつ軽量で自家動力式のポータブル光学デバイスであって、
6.5dm3の最大サイズを有し、
スライドカバーガラス(15)の表面の自動2次元XY走査中さえもレーザー光結合を与えるために、組み立てられ統合された、1つのレーザーモジュールと、1つのLEDモジュールと、1つの機械モジュールと、1つの顕微鏡モジュールと、1つの電子モジュールとからなり、
これら全てのモジュールが、前記自動2次元XY走査中、光結合の有効性を保証することができる完全な光学電気機械ユニットをもたらすように設計され単一実施形態へと統合されており、
前記レーザーモジュールは、1つのレーザーダイオード(60)と、1つの平凸レンズ(70)と、2つのミラー(85,90)と、2つのミラーホルダー(75,80)とからなり、
これらの要素の全てが、同じアルミニウム筐体(115)の内部に配置され、
光源として使用される前記レーザーダイオード(60)は、熱電冷却器(65)を装備しており、前記スライドカバーガラス(15)のリムに光を合焦させる平凸レンズ(70)上にレーザービーム(10)を放射し、前記光学デバイスのサイズを最小化するために、前記レーザービーム(10)は、専用のホルダー(75,80)に位置された2つのミラー(85,90)によって初めに反射されて、スロット(95)を通過して前記アルミニウム筐体(115)から出て、
前記レーザーモジュールは、25±2度に等しい前記レーザービーム(10)の入射角を有するように構築されており、
前記入射角は、特定のレーザー光結合に適合するために、サービスホールによってX及びY軸で正確に調節されることができ、
前記LEDモジュールは、1つの3ワットの多色RGBのLEDチップ(100)と、1つの光彩絞り(105)と、乾燥系対物レンズの焦点(130)にLED光線を投影することができる1つのコンデンサレンズ(110)とからなり、
前記光彩絞り(105)は、前記多色RGBのLEDチップ(100)の遠隔制御を提供するために、内部IR受信フォトダイオード(135)に向けられた選択的な正方形ミラー(125)のための側方の区画を有し、
前記LEDモジュールの要素(100,105,110,125,135)は、円筒形容器(120)に組み込まれており、
前記LEDモジュールの使用は、固液界面での前記スライドカバーガラス(15)上に焦点を得るために、Z軸上の対物レンズの初期制御を容易にし、
スライドガラスホルダー(35)のXY操作用の機械モジュールは、移動式の2つのブロックと、これらの間に位置された前記アルミニウム筐体(115)とからなり、
移動式の第1のブロックは、1つのX軸リニアステージ(150)と、ギヤ(165)によって連結された1つのDCモーター(140)とを有し、
前記X軸リニアステージ(150)及び前記DCモーター(140)は、前記アルミニウム筐体(115)の上部に位置され、それと統合されており、
移動式の第2のブロックは、1つのY軸リニアステージ(155)と、軸箱と連結された1つのDCモーター(145)とを有し、
前記第2のブロックの前記Y軸リニアステージ(155)及び前記DCモーターは、ベースプレート(235)の上部に位置され、それと統合されており、
前記X軸リニアステージ(150)は、それに組み込まれた前記スライドガラスホルダー(35)のX軸上の移動を決定する一方、前記Y軸リニアステージ(155)は、前記アルミニウム筐体(115)、それに固定された要素(35,140,150,165)、及びそれの内部に固定された要素(60,65,70,75,80)のY軸上の移動を決定し、
前記顕微鏡モジュールは、対物レンズホルダー(160)と、Z軸リニアステージ(275)と、2つのステップモーター(195,280)と、1つの乾燥系対物レンズ(40)と、2つのミラー(180,185)と、1つのフィルターホイール(190)と、1つのCCDカメラ(200)とからなり、
前記対物レンズホルダー(160)は、前記Z軸リニアステージ(275)の可動スライドにロックされ、
1つのステップモーター(280)が、軸箱によってそのリニアステージと連結され、
前記Z軸リニアステージ(275)及び1つのステップモーター(280)が、後方垂直プレート(240)と統合され、
ミラーホルダー(170,175)は、一方(170)が前記後方垂直プレート(240)と統合され、他方(175)が前記ベースプレート(235)と統合され、
ステップモーター(195)及び前記CCDカメラ(200)が、前記ベースプレート(235)と統合され、
前記ステップモーター(195)の回転軸が、軸箱によって前記フィルターホイール(190)に連結され、
前記顕微鏡モジュールは、XY軸上で固定されており、前記対物レンズホルダー(160)にねじ留めされた乾燥系対物レンズ(40)から、焦点を得るためにZ軸上で移動でき、
前記顕微鏡モジュールは、前記LEDモジュールで試料を照射するおかげで、前記CCDカメラ(200)のUSB出力を介して、透過広視野顕微鏡で像を捕らえてビデオ映像を記録するための能力を前記光学デバイスに提示し、
光透過の場合には、像及びビデオ映像は、460nmの青色、530nmの緑色、630nmの赤色である3つの異なる波長で捕らえられ、
光学機械ユニットは、XY操作中、正しい光結合を提供するために必要であり、
前記レーザーモジュール、前記XY操作用の機械モジュール及び前記顕微鏡モジュールを含む前記光学機械ユニットは、スライドガラスのレーザー走査中、13×13mmのXY領域において、光結合を維持して像の焦点を保ち、前記レーザーモジュールで照射することによって内部反射顕微鏡で像をCCDカメラ(200)によって捕らえる能力を前記光学デバイスに与え、
特に、光学フィルターなしで散乱モードで像を得ることを可能にし、一方、蛍光モードでの像又はビデオ映像が、前記フィルターホイールに位置され関心のある蛍光波長に集中された光学フィルターの助けを借りて得られ、
前記電子モジュールは、マイクロプロセッサーを装備し、12Vの電気プラグ(210)によって電力を供給され、USBポート(205)を介してプログラム可能な、第1の電子基板(215)と、前記第1の電子基板の上に位置され、それと直接相互接続され、マイクロプロセッサーも装備した第2の電子基板(220)とを有し、
前記2つの電子基板は、前記スライドガラスホルダー(35)のXY移動用の前記2つのDCモーター(140,145)と、前記レーザーモジュールのオン/オフの切り替えのための前記レーザーダイオード(60)と、前記LEDモジュールのオン/オフの切り替えための多色RGBのLEDチップ(100)と、Z軸上の前記焦点及び前記フィルターホイール(190)を制御する前記2つのステップモーター(195,280)と、タッチスクリーンインターフェース(270)とを管理するために使用され、
光学電気機械ユニットは、前記光学機械ユニットと、前記LEDモジュールと、前記電子モジュールとの間の統合の結果であり、
前記光学電気機械ユニットは、20×22×13cmにそれぞれ等しい幅×長さ×高さの最大サイズを有するアルミニウムプレート(235,240,245,250,260,265)からなる1つの平行六面体の筐体と、7×10cmにそれぞれ等しい直径×高さの最大サイズを有するLEDモジュール用の1つの円筒形容器(120)とである2つの体積形状に組み込まれており、
全体積が6.5dm3である前記光学電気機械ユニットは、前記LEDモジュールで照射するおかげで透過広視野顕微鏡であるという点と、レーザーモジュールで照射するおかげで内部反射蛍光/散乱顕微鏡であるという点である異なる2点の観点から、前記スライドカバーガラス(15)を照射することができ、
これら2つの光信号は、単独で、又は両方同時に、CCDカメラ(20)から捕らえられ、
前記フィルターホイール(190)は、前記CCDカメラの前に配置され、像又はビデオ映像を捕らえるために、1つのステップモーター(195)によって、散乱、あるいは蛍光で、関心のある波長を選択することを可能にする光学デバイス。 - サブ回折ナノ粒子の検出方法であって、
請求項1ないし6のいずれか1に記載の光学デバイスを利用可能にするステップと、
前記レーザービーム(10)が、前記スライドカバーガラス(15)がその上に配置される前記XY平面に対して25°±2°の入射角で前記スライドカバーガラス(15)の前記リムにぶつかるようにして、前記スライドカバーガラス(15)に、前記スライドカバーガラス(15)に位置されたナノ粒子を励起させるエバネッセント波を生成するステップと、
前記励起されたナノ粒子によって生成された光信号を捕らえるステップと、を具備する、サブ回折ナノ粒子の検出方法。 - 前記検出方法は、重力のない状態で実行される、請求項7に記載のサブ回折ナノ粒子の検出方法。
- 1つのレーザーダイオード(60)と、
1つの平凸レンズ(70)と、
1つの標準的な厚さ0.17mmのカバーガラス(15)と、
1つの乾燥系対物レンズ(40)と、
1つのCCDカメラ(200)と、を含む、特定のレーザー光結合によって特徴付けられ、
これら5つの要素の単純だが特定の光学配置は、直径100nmまでのサイズのサブ回折球状ナノ粒子(55)を検出することを可能にし、
光源は、0.17mmの厚さを有するむきだしのスライドカバーガラス(15)のリム上に合焦されたレーザービーム(10)を生成することができる、100mWの出力を放出する、波長405nmのレーザーダイオード(60)であり、
むきだしのカバーガラス(15)は、通常の直角表面を有し、傾斜した端面のない、標準的な未処理のものであり、
前記レーザービーム(10)は、スライドカバーガラス(15)の平面に対して、直径0.15mmの円形スポット及び25±2度の入射角で、カバーガラス(15)のリムにぶつかり、スネルの法則により、レーザービームが空気−ガラス境界面を通過したとき、レーザービームは25度から16度にその入射角を変え、これは、カバーガラス上にエバネッセント波を生成することができる内部反射を得るための十分条件であり、透明溶液中に分散し、カバーガラス上に位置されたナノ粒子を励起させるために十分に高性能であり、Z軸上のエバネッセント波の場の侵入深さは、その中にナノ粒子が分散されている水又はグリセリンである溶液の屈折率に依存して、50nmから700nmまで変化可能であり、
検出されたナノ粒子から生成された光信号は、乾燥系対物レンズ(40)及びCCDカメラ(200)を使用して捕らえられ、結果として生じた像は、CCDカメラの前の適切なバンドパスフィルターの挿入に依存して、あるいは依存することなく、蛍光で、あるいは散乱モードで捕らえることができ、
ナノ粒子の検出は、むきだしのカバーガラス(15)の内側にレーザービームの内部反射(45)によって生成されたエバネッセント波の場(50)の内部で、ガラス−液体境界面で、それに近接してカバーガラス(15)上に生じ、
対物レンズ(40)の焦点(130)は、スライドカバーガラス(15)における内部反射(45)によって生じた光の線と交差するところに合わせられ、ナノ粒子(55)が、ナノ粒子(55)を含む溶液用入口(25)及び溶液用出口(30)を有する、カバーガラス(15)とスライドガラス(20)との間に得られる、線形流路にそれらを挿入することによって、表面に堆積され、
スライドガラス(20)及びカバーガラス(15)は、フローチャンネルの内部境界を規定しているシリコーン薄膜と一緒に貼り付けられ、前記スライドガラスは、リニアステージ(150)の可動スライド側へ統合されたスライドガラスホルダー(35)に留まる、請求項7又は8に記載のサブ回折ナノ粒子の検出方法。 - 重力がない状態で、本方法の適用が、油浸対物レンズの使用を必要とせず、重力がない状態でのその振る舞いを修正しうる、サブ回折ナノ粒子検出方法の関連する要素がないという事実によって特徴付けられる、請求項9に記載のサブ回折ナノ粒子の検出方法。
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