JP6511817B2

JP6511817B2 - 細胞培養容器

Info

Publication number: JP6511817B2
Application number: JP2015004285A
Authority: JP
Inventors: 智紀赤井; 琢磨馬塲; 将慶籠田
Original assignee: Dai Nippon Printing Co Ltd
Current assignee: Dai Nippon Printing Co Ltd
Priority date: 2015-01-13
Filing date: 2015-01-13
Publication date: 2019-05-15
Anticipated expiration: 2035-01-13
Also published as: JP2016129495A

Description

本発明は培養細胞の観察に適した細胞培養容器に関する。

培養系で精子と卵子とを体外受精させて受精卵（接合子）を作製して、さらに受精卵を卵割、桑実胚、胚盤胞の段階を経て、透明帯から孵化した脱出胚盤胞の段階まで培養することが可能となり、この卵割から胚盤胞の段階にある受精卵を子宮に移植して産子を得る補助的生殖技術（ＡＲＴ）が、家畜領域のみならずヒトの不妊医療でも確立されている。

体外受精においては、容器中に培養液のドロップを作り、この中に受精卵を入れて体外培養するマイクロドロップ法が用いられることが多い。従来、このマイクロドロップ法には、細胞培養容器として、底面が単一平面の、直径が３０〜６０ｍｍのシャーレが使用され、シャーレの底面に、培養液のドロップを、間隔をあけて複数個作製する方法が使用されてきた。しかし通常のシャーレでドロップを作成するとドロップ形成位置が定まらず、振動等でドロップがずれてしまうといった問題があった。ドロップがずれてしまうと、その中で培養して観察していた受精卵の特定が難しくなるという問題があった。そこで特許文献１等では、ドロップの位置が制御でき、受精卵培養作業時や培養時の振動による影響を抑制できる細胞培養容器が開示されている。

特許文献１には図８Ａ、８Ｂに示す細胞培養容器８００が開示されている。細胞培養容器８００は、容器底部８１０と容器底部８１０の周縁から起立した外周壁部８２０と、容器底部８１０から起立した周壁部８３０とを備える。周壁部８３０により囲われた上方に開口した空間が、細胞及び培養液を収容するための収容空間８４０である。収容空間８４０の底を形成する面上には、細胞を位置決めするための複数の窪み８５０が形成されている。細胞培養容器８００を用い、培養液のマイクロドロップを収容空間８４０内に保持し、細胞を窪み８５０に配置することで、マイクロドロップ及び細胞の位置を固定することが可能になる。

特許第４７２４８５４号公報

従来の細胞培養容器８００での周壁部８３０は、収容空間８４０に向いた内壁面８３１と、収容空間８００の外側に向いた外壁面８３２と、内壁面８３１及び外壁面８３２の開口側端を接続する上面８３３とを有するものであった。

細胞培養容器８００の周壁部８３０で囲われた収容空間８４０に細胞を含む培養液のドロップを保持して培養を行う場合、収容空間８００内を観察するために顕微鏡が用いられる。しかし、細胞培養容器８００の全面から観察したい対象物を探そうとすると、周壁部８３０の上面８３３にも対象物が保持されてしまう恐れがあるため、細胞が配置されている収容空間８００の底から焦点をずらして上面８３３も観察する必要があった。

観察したい対象物としては、培養対象である細胞等には限らず、異物等も考えられる。異物管理は細胞培養において非常に重要である。細胞培養時に存在する異物によって細胞が様々な影響を受け、発育阻害や機能喪失、特性の変化などが生じる場合があるからである。また、異物の存在は細胞の品質評価にも影響を与える。特に顕微鏡等での光学的な観察の邪魔になる。更に、培養液を解析する際にもデータのノイズ要因となる。更に、再生医療や不妊治療を目的として細胞培養する場合、細胞とともに異物までも移植されてしまうことが考えられ、大きな問題となる。異物のサイズが小さい場合、例えば、収容空間８００の全体を顕微鏡で観察することが行われている。

そこで本発明は、周壁部により囲われた細胞及び培養液を収容するための収容空間が形成された細胞培養容器であって、周壁部の表面上における細胞や異物の意図せぬ保持の可能性が低減された細胞培養容器を提供することを解決課題とする。

そこで本明細書では上記課題を解決する手段として以下の発明を開示する。
（１）
細胞及び培養液を収容するための収容空間が形成された細胞培養容器であって、
前記収容空間は、容器底部から起立した周壁部により囲われた、上方に開口した空間であり、
前記周壁部は、前記収容空間に向いた内壁面と、前記収容空間の外側に向いた外壁面とを有し、
前記内壁面と前記外壁面とは開口側端において交差している
ことを特徴とする細胞培養容器。
（２）
前記内壁面と前記外壁面とが交差した部分が、平面視において、前記収容空間の開口を囲う連続した線である、上記（１）に記載の細胞培養容器。
上記（１）の発明によれば、周壁部の開口側端部に上面が存在しないため、周壁部の表面上に細胞や異物が保持される可能性が低い。
上記（２）の発明によれば、周壁部の開口側端部が、平面視において実質的に幅のない線状の頂部を形成するため、周壁部の開口側端部に細胞や異物が保持される可能性が更に低い。

本発明によれば、周壁部により囲われた細胞及び培養液を収容するための収容空間が形成された細胞培養容器であって、周壁部の表面上における細胞や異物の意図せぬ保持の可能性が低減された細胞培養容器が提供される。

本発明の実施形態１に係る細胞培養容器１００の平面図の模式図である。図１Ａに示す細胞培養容器１００のＸ−Ｘ断面の模式図である。本発明の実施形態２に係る細胞培養容器１００の断面の模式図である。本発明の実施形態３に係る細胞培養容器１００の断面の模式図である。本発明の実施形態４に係る細胞培養容器１００の断面の模式図である。本発明の実施形態５に係る細胞培養容器１００の断面の模式図である。比較例である細胞培養容器６００の断面の模式図である。本発明の実施形態６に係る細胞培養容器１００の平面図の模式図である。図７Ａに示す細胞培養容器１００のＸ−Ｘ断面の模式図である。特許文献１に開示されている従来の細胞培養容器８００の平面図の模式図である。図８Ａに示す従来の細胞培養容器８００のＹ−Ｙ断面の模式図である。面の傾斜角の定義を説明する図である。上下方向に沿った平面に沿った、周壁部１２０の端面の模式図である。実施形態３の効果を説明するための図である。実施形態４の変更例１での周壁部１２０の模式図である。実施形態４の変更例２での周壁部１２０の模式図である。

本発明の細胞培養容器を、図面に示す実施形態を参照して説明するが、本発明の範囲はこれらの実施形態には限定されない。なお、本明細書の図面では各構成の寸法及び形状に関わらず同じ機能を有する構成は同じ符号を付しており、特段の相違点を除き説明を省略する。

＜傾斜角について＞
後述する実施形態１〜７の詳細を説明する前に、周壁部の内壁面と外壁面との傾斜角について説明する。以下の説明で参照する符号は実施形態１〜７を説明するための符号と同じとした。

本発明において「上下方向」とは、本発明の細胞培養容器１００を水平面上に載置した状態で収容空間１４０に培養液等の液体を収容したときに該液体の深さ方向（すなわち鉛直方向）と一致する方向を指す。そして本発明において、上下方向に沿って収容空間１４０の底から開口に向かう方向を上方、上下方向に沿って収容空間の開口から底に向かう方向を下方とする。

本発明では面の傾斜角を以下のように定義する。図９に示すように、部材Ｘの表面である面Ｓ上の点Ｐを通る法線をＮとし、前記点Ｐを通る上下方向（上記で定義した通り）に沿った仮想直線をＬとし、法線Ｎのうち点Ｐから部材Ｘの存在しない側の半直線部分をＮ_１とし、仮想直線Ｌのうち点Ｐから上方側の半直線部分をＬ_１としたとき、法線Ｎと仮想直線Ｌとの成す角のうち、半直線部分Ｎ_１と、点Ｐと、半直線部分Ｌ_１との間に形成される角θ_１を、面Ｓの点Ｐの位置での傾斜角と定義する。周壁面１２０の内壁面１２３又は外壁面１２４の全体又はある一部分の傾斜角とは、該全体又は該一部分に含まれる点を点Ｐとし、周壁部１２０を部材Ｘとし、内壁面１２３又は外壁面１２４を面Ｓとしたときの、上記で定義した点Ｐの位置での傾斜角θ_１を指す。

本発明の細胞培養容器１００は、周壁部１２０を備える。周壁部１２０は、収容空間１４０に向いた内壁面１２３と、収容空間１４０の外側に向いた外壁面１２４とを有する。

本発明の細胞培養容器１００を水平面上に載置した状態で平面視したときの収容空間の重心を通り且つ上下方向に沿った平面による周壁部１２０の端面の模式図を図１０に示す。

周壁部１２０の内壁面１２３の傾斜角は、開口側端またはその近傍において好ましくは０°よりも大きく、より好ましくは１０°以上であり、特に好ましくは３０°以上であり、好ましくは９０°以下であり、より好ましくは７５°以下、特に好ましくは６５°以下である。ただし開口側端１５０においては内壁面１２３の傾斜角は０°であっても好ましい。外壁面１２４の開口側端またはその近傍での傾斜角が９０°である場合には内壁面１２３の開口側端またはその近傍での傾斜角は９０°未満であることが好ましい。周壁部１２０の内壁面１２３は、開口側端またはその近傍において、ほぼ一定の傾斜で開口側端まで延びていている（実施形態１、２、３、５、７、実施形態４変形例２等）、或いは、開口側端に近づくほど傾斜が小さくなる（実施形態４、実施形態４変形例１等）ことが好ましい。

周壁部１２０の外壁面１２４の傾斜角は、開口側端またはその近傍において好ましくは０°よりも大きく、より好ましくは１０°以上であり、特に好ましくは３０°以上であり、好ましくは９０°以下であり、より好ましくは７５°以下、特に好ましくは６５°以下、である。ただし開口側端１５０においては外壁面１２４の傾斜は０°であっても好ましい。内壁面１２３の開口側端またはその近傍での傾斜角が９０°である場合には外壁面１２４の開口側端またはその近傍での傾斜角が９０°未満であることが好ましい。周壁部１２０の外壁面１２４は、開口側端またはその近傍において、ほぼ一定の傾斜で開口側端まで延びていている（実施形態１、２、３、５、７、実施形態４変形例２等）、或いは、開口側端に近づくほど傾斜が小さくなる（実施形態４、実施形態４変形例１等）ことが好ましい。

本発明において内壁面又は外壁面の「開口側端またはその近傍」とは、例えば、内壁面又は外壁面の、底側端から開口側端までの上下方向に沿った幅を１００としたとき、内壁面又は外壁面の開口側端から底側端に向けて上下方向に沿って好ましくは２０以下、より好ましくは１０以下、好ましくは３以上、より好ましくは５以上の部分を指す。

周壁部１２０の内壁面１２３の開口側端の近傍よりも底側端寄りの部分の傾斜角は特に限定されず、好ましくは０°以上であり、より好ましくは０°よりも大きく、より好ましくは１０°以上であり、特に好ましくは３０°以上であり、好ましくは９０°以下であり、より好ましくは９０°未満であり、より好ましくは７５°以下であり、特に好ましくは６５°以下である。

周壁部１２０の外壁面１２４の開口側端の近傍よりも底側端寄りの部分の傾斜角は特に限定されず、例えば０°以上であり、好ましくは０°よりも大きく、より好ましくは１０°以上であり、特に好ましくは３０°以上であり、好ましくは１４０°以下であり、より好ましくは１２０°以下であり、より好ましくは９０°以下であり、より好ましくは９０°未満であり、より好ましくは７５°以下であり、特に好ましくは６５°以下である。

内壁面１２３及び外壁面１２４はそれぞれ、底側端から開口側端に向かって傾斜角がほぼ一定であってもよいし（例えば実施形態１、２、３、７）、底側端から開口側端に向かって連続的または段階的に傾斜角が変化するように形成されていてもよい（例えば実施形態４、５）。或いは、内壁面１２３及び／又は外壁面１２４の開口側端またはその近傍以外の部分に階段状に立ち上がった１つ又は複数の段付き部が形成されていてもよい（例えば実施形態２の外壁面１２４）。

以下、本発明の各実施形態について図面を参照して説明する。

＜実施形態１（図１Ａ，１Ｂ）＞
図１Ａおよび図１Ｂに、本発明の細胞培養容器１００の実施形態１を示す。
細胞培養容器１００は容器底部１１０と、容器底部１１０の周縁に立設した外周壁部１３０とを含み、容器底部１１０から起立した周壁部１２０を更に含む。

収容空間１４０は、細胞及び培養液を収容するための空間であって、周囲が周壁部１２０により囲われ上方に開口した空間である。

実施形態１では、容器底部１１０のうち、収容空間１４０の底を形成する部分を収容空間底部１１１と称し、周壁部１２０と外周壁部１３０とを接続する部分を外縁底部１１２と称する。

実施形態１では、周壁部１２０は、逆円錐状の内壁部１２１と、内壁部の上端に接続され下方に延びる円筒状の外壁部１２２とが組み合わされており、内壁部１２１と外壁部１２２との間が中空構造となるように存在するように構成されている。ただし当該中空構造は必要な構成ではなく、図１０、１２、１３に示す周壁部１２０のように、周壁部１２０全体が中実の構造を有していてよい。

１つの細胞培養容器１００に含まれる収容空間１４０の個数は図示した例では１のみであるが、２以上、例えば２〜４であってもよい。

外周壁部１３０の開口端である上端の内周側輪郭を平面視したときの図形の形状は、例えば円状（円形および楕円形を含む）等の任意の形状であることができ、好ましくは円形であり、その開口幅（前記図形において、該図形の重心を間に介して対向する、該図形の周縁上の一対の点の間の距離の最大値）は好ましくは３０〜６０ｍｍである。

次に周壁部１２０の特徴について詳述する。
本発明の細胞培養容器１００では、周壁部１２０は、収容空間１４０に向いた内壁面１２３と、収容空間１４０の外側に向いた外壁面１２４とを有する。

ここで収容空間に向いた内壁面は、周壁部の側面のうち収容空間を囲う面であり、本発明の細胞培養容器を水平面上に載置した状態で平面視したときの収容空間の内側に向いた面である。収容空間の外側に向いた外壁面は、周壁部の側面のうち、本発明の細胞培養容器を水平面上に載置した状態で平面視したときの収容空間の外側に向いた面である。内壁面及び外壁面はともに、本発明の細胞培養容器を水平面上に載置した状態で平面視したときの収容空間の重心を通り上下方向に沿った仮想直線に対して、該仮想直線に垂直に投影した場合に、点ではなく線として投影される。図示する実施形態では、内壁面１２３は収容空間１４０の外側に向いた面を含まず、外壁面１２４は収容空間１４０に向いた面を含まない。

内壁面１２３と外壁面１２４とは開口側端において交差していることを特徴とする。ここで内壁面１２３と外壁面１２４とが開口側端において「交差」しているとは、本発明の細胞培養容器１００を水平面上に載置した状態で平面視したときの収容空間の重心を通り且つ上下方向に沿った、周壁部１２０の断面上で、内壁面１２３と外壁面１２４とが開口側端において実質的に交わっていることを意味する。「実質的に交わっている」とは、前記断面上で内壁面１２３と外壁面１２４とが開口側端において交わっている、或いは、実質的に幅を有さない面を介して接続していることを指し、「実質的に幅を有さない」は次段落で説明する通りである。この構成により、細胞培養時には、周壁部１２０の開口側端部上に細胞、異物等が安定に保持されることはできず、内壁面１２３と外壁面１２４のどちらかを伝って落下する。このため、細胞培養時に細胞、異物等が周壁部１２０の開口側端に載った状態で残存する可能性が低減される。

より好ましくは、図１Ａ，Ｂに示すように、内壁面１２３と外壁面１２４とが交差した部分が、本発明の細胞培養容器１００を水平面上に載置した状態での平面視（本発明では単に「平面視」ともいう）において、収容空間１４０の開口を囲う連続した線１５０である。線１５０は、内壁面１２３の開口側端での傾斜角と、外壁面１２４の開口側端での傾斜角とが共に０°である場合を除いて形成され、周壁部１２０の開口側端の表面は線１５０を境に傾斜が不連続に変化する。このとき、周壁部１２０の開口側端の表面は、細胞培養容器１００を水平面上に載置した状態で平面視したときの収容空間１４０の重心を通り上下方向に沿った仮想平面による断面において、線１５０を頂点として折れ曲がった形状となる。線１５０は実質的に幅を有さない。ここで「実質的に幅を有さない」とは、培養対象細胞と比較して平面視での幅が全くない又は幅が十分に小さいことを指し、例えば培養対象細胞の幅の１／２以下、好ましくは１／１０以下、より好ましくは１／２０であり、例えば卵細胞又は胚を培養する細胞培養容器１００では線１５０は平面視において５０μｍ以下、好ましくは１０μｍ以下の幅を有していてもよい。この場合、細胞培養時に細胞、異物等が周壁部１２０の開口側端に載った状態で保持される可能性が大幅に低減されることから好ましい。更に好ましい実施形態では、内壁面１２３と外壁面１２４とが交差して線１５０を形成するとき、細胞培養容器１００を水平面上に載置した状態で平面視したときの収容空間１４０の重心を通り上下方向に沿った平面による断面上で、内壁面１２３と外壁面１２４とが線１５０において成す、周壁部１２０内に形成される角θ_２（図１０参照）は、好ましくは９０°以下、より好ましくは４５°以下、より好ましくは２０°以下であり、特に好ましくは１０°以下である。θ_２が小さいほど周壁部１２０の開口側端が先鋭の形状となり、細胞培養時に細胞、異物等が周壁部１２０の開口側端に載った状態で保持される可能性が更に低減される。

なお、内壁面１２３と外壁面１２４との交差部分は適宜面取りされていてもよい。このとき、内壁面１２３と外壁面１２４との交差部分は上下方向に垂直な平坦面が形成されないように面取りされていることが好ましく、丸みを帯びた面が形成されるように面取りされていることがより好ましい。面取りされている場合の交差部分の丸みを帯びた面は、細胞培養容器１００を水平面上に載置した状態で平面視したときの収容空間１４０の重心を通り上下方向に沿った仮想平面による断面において、曲率半径が好ましくは１００μｍ以下、より好ましくは５０μｍ以下、特に好ましくは１０μｍ以下の円弧の一部と近似できる面であることが好ましい。このとき内壁面１２３と外壁面１２４との交差部分に細胞、異物等が保持される可能性が低いため好ましい。

実施形態１において、周壁部１２０の内壁面１２３の開口側端及びその近傍での傾斜角、及び、周壁部１２０の内壁面１２３の開口側端の近傍よりも底側端寄りの部分での傾斜角の好ましい範囲は＜傾斜角について＞で説明した通りである。更に好ましくは、内壁面１２３の傾斜角は底側端から開口側端に至るまでの全体において、内壁面１２３の開口側端およびその近傍での傾斜角の好ましい範囲として挙げた範囲内である。図示する実施形態１では底から開口に向かって収容空間１４０が広がるように内壁面１２３が形成されており、内壁面１２３の傾斜角は底側端から開口側端に至るまでほぼ一定であるが、この形態には限定されない。

内壁面１２３は好ましくは、円錐状または円錐台状の部分を含む。円錐状または円錐台状の部分は、培養容器の底部側に、円錐の頂点または円錐台の上面および下面のうち面積の狭い方がくるように形成される。円錐状には、円錐および楕円錐、これらに類似の形状、例えば、円錐または楕円錐の頂点が丸みを帯びている形状、円錐面が外側に膨らんでいる形状、円錐面が内側に凹んでいる形状などが含まれる。円錐台状には、円錐台および楕円錐台、これらに類似の形状、例えば、円錐台または楕円錐台の上面または下面と円錐面との接合部が丸みを帯びている形状、円錐面が外側に膨らんでいる形状、円錐面が内側に凹んでいる形状などが含まれる。内壁面１２３は、上記に限らず、多角錐状、多角錐台状などの形態であってもよい。

実施形態１において、周壁部１２０の外壁面１２４の開口側端及びその近傍での傾斜角、及び、周壁部１２０の外壁面１２４の開口側端の近傍よりも底側端寄りの部分での傾斜角の好ましい範囲は、それぞれ＜傾斜角について＞で説明した通りである。より好ましくは、外壁面１２４の傾斜角は底側端から開口側端に至るまでの全体が、外壁面１２４の開口側端およびその近傍での傾斜角の好ましい範囲として挙げた範囲内である。図示する実施形態１では外壁面１２４の傾斜角は底側端から開口側端に至るまでほぼ一定であるが、この形態には限定されない。

周壁部１２０の内壁面１２３及び外壁面１２４の傾斜角が上記の範囲である場合に、細胞培養時に細胞、異物等が周壁部１２０の開口側端に載った状態で保持される可能性を特に効果的に低減することができる。

実施形態１では、内壁面１２３と外壁面１２４との傾斜角の大小関係は特に限定されないが、典型例としては、少なくとも開口側端及びその近傍において、内壁面１２３の傾斜角が、外壁面１２４の傾斜角よりも小さい例が挙げられ、この場合は内壁面１２３の開口側端及びその近傍での傾斜角は好ましくは１０°以上、より好ましくは２０°以上、特に好ましくは３０°以上、好ましくは７０°以下、より好ましくは６０°以下、特に好ましくは５０°以下であり、外壁面１２４の開口側端及びその近傍での傾斜角は好ましくは３０°以上、より好ましくは５０°以上、好ましくは９０°以下、より好ましくは８５°以下、特に好ましくは８０°以下である。

収容空間１４０の底は、収容空間底部１１１の上面である収容空間底面１１３により形成される。細胞培養容器１００は通常、収容空間底面１１３が水平となるように設置され使用される。収容空間底面１１３の周縁及び周壁部１２０の開口側端（実施形態１では線１５０と同じ）を上下方向に沿って平面視したときの形状は特に限定されないが、好ましくは互いに相似であり、好ましくはそれぞれ円状（円形および楕円形を含む）である。

なお、本発明において収容空間底面は好ましくは平面であるが、これには限定されない。底面が平面でない場合は、底面の周縁の線を含む平面を「収容空間底面」とみなす。平面でない底面としては、中央部が上方に突出した凸面や、中央部が下方に窪んだ凹面が例示できる。

収容空間１４０は小容量の培養液、例えば１０μｌ〜１００μｌの培養液のドロップを収容できるように構成されており、且つ、収容空間底面１１３の面積は、１０μｌ〜１００μｌの培養液のドロップによって収容空間底面１１３の全面を覆うことが可能であり、ドロップの高さが０．３５ｍｍ以上、より好ましくは０．５ｍｍ以上となる面積であることが好ましい。したがって、収容空間底面１１３の面積は、好ましくは０．７５ｍｍ^２以上、より好ましくは３ｍｍ^２以上、さらに好ましくは９ｍｍ^２以上であり、好ましくは８０ｍｍ^２以下、より好ましくは２０ｍｍ^２以下、更に好ましくは１６ｍｍ^２以下である。収容空間底面１１３の面積を０．７５ｍｍ^２以上とすることにより、複数の細胞、好ましくはヒト受精卵を、互いが重なることなく、収容空間底面１１３に配置して培養することができる。複数の細胞、特に受精卵を、同じ系で培養することにより、培養液内部に蓄積したタンパク質、ホルモン、酵素等の細胞分泌物が互いの細胞に作用するパラクライン効果を期待できる。また、細胞同士が平面上で重なっていると、顕微鏡等による細胞や受精卵の評価が困難であることから、底面は一定の面積を有することが好ましい。また、後述する実施形態６のように、収容空間底面１１３に、細胞の位置決めをするための窪みを形成する場合も、底面はある程度の面積を有することが好ましい。また、収容空間底面１１３の面積を、８０ｍｍ^２以下とすることにより、小容量の培養液のドロップでも、底面の全面を覆うことが可能になり、すなわち、ドロップが収容空間底面１１３上で大きく移動することを防止できる。収容空間底面１１３の最大幅（該底面の輪郭を平面視した図形において、該図形の重心を間に介して対向する、該図形の周縁上の一対の点の間の距離の最大値であり、該底面が円の場合は直径）は好ましくは１ｍｍ以上、より好ましくは２ｍｍ以上、更に好ましくは３．５ｍｍ以上であり、好ましくは１０ｍｍ以下、より好ましくは５ｍｍ以下、更に好ましくは４．５ｍｍ以下である。

収容空間１４０に収容できる液体の最大の容量は、例えば１００μｌ〜３ｍｌ、特に２００μｌ〜１ｍｌである。この容量を一定以下とすることにより、細胞分泌物によるオートクライン効果や複数の細胞の相互作用によるパラクライン効果を期待できる。また、たとえば受精卵培養時には２日間培養後に培養液を半分だけ新しい培養液に交換するなどの作業を行う培養手法を実施することもある。これらの作業時には、培養液が２００μｌ以上あることで作業が容易となる。

本発明の細胞培養容器１００の材質は特に制限されない。具体的には、金属、ガラス、およびシリコン等の無機材料、プラスチック（例えば、ポリスチレン樹脂、ポリエチレン樹脂、ポリプロピレン樹脂、ＡＢＳ樹脂、ナイロン、アクリル樹脂、フッ素樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリウレタン樹脂、メチルペンテン樹脂、フェノール樹脂、メラミン樹脂、エポキシ樹脂、塩化ビニル樹脂）で代表される有機材料を挙げることができる。細胞培養容器１００は、当業者に公知の方法で製造することができる。例えば、プラスチック材料からなる培養容器を製造する場合には、慣用の成形法、例えば射出成形により製造することができる。

光学顕微鏡での観察のためには、細胞培養容器１００は光透過性の材料により形成されていることが好ましい。

本発明の細胞培養容器１００は、受精卵の発育を促進するような表面処理又は表面コートがなされていてもよい。特に、受精卵の発育を促進するために、他の器官の細胞（例えば、子宮内膜細胞や卵管上皮細胞）と共培養をする場合、これらの細胞をあらかじめ細胞培養容器１００の収容空間１４０に面する表面１１３、１２３に接着させる必要がある。このような場合に、細胞培養容器１００の表面１１３、１２３に細胞接着性の材料をコートすると有利である。

本発明の細胞培養容器１００を用いて培養し、必要に応じて観察する細胞としては、特に限定されないが、例えば、受精卵、卵細胞、ＥＳ細胞（胚性幹細胞）及びｉＰＳ細胞（人工多能性幹細胞）が挙げられる。卵細胞は、未受精の卵細胞を指し、未成熟卵母細胞及び成熟卵母細胞が含まれる。受精卵は、受精後、卵割により２細胞期、４細胞期、８細胞期と細胞数が増えてゆき、桑実胚を経て、胚盤胞へと発生する。受精卵には、２細胞胚、４細胞胚及び８細胞胚などの初期胚、桑実胚、胚盤胞（初期胚盤胞、拡張胚盤胞及び脱出胚盤胞を含む）が含まれる。胚盤胞は、胎盤を形成する潜在能力がある外部細胞と胚を形成する潜在能力がある内部細胞塊からなる胚を意味する。ＥＳ細胞は胚盤胞の内部細胞塊から得られる未分化な多能性又は全能性細胞を指す。ｉＰＳ細胞は、体細胞（主に線維芽細胞）へ数種類の遺伝子（転写因子）を導入することにより、ＥＳ細胞に似た分化万能性を持たせた細胞を指す。すなわち、本発明において培養の対象となる細胞には、受精卵や胚盤胞のように複数の細胞の集合体も包含される。本発明の細胞培養容器１００は、哺乳動物及び鳥類の細胞、特に哺乳動物の細胞の培養に好適である。哺乳動物は、温血脊椎動物を指し、例えば、ヒト及びサルなどの霊長類、マウス、ラット及びウサギなどの齧歯類、イヌ及びネコなどの愛玩動物、ならびにウシ、ウマ及びブタなどの家畜が挙げられる。本発明の細胞培養容器１００は、ウシの受精卵の培養に特に好適である。

以下、図面に示す他の実施形態を説明するが、本発明の範囲はこれらの実施形態には限定されない。また、本明細書の図面では各構成の寸法及び形状に関わらず同じ機能を有する構成は同じ符号を付しており、上記実施形態１との特段の相違点を除き説明を省略する。

＜実施形態２（図２）＞
図２に、本発明の細胞培養容器１００の実施形態２を示す。
実施形態２に係る細胞培養容器１００は、実施形態１と異なり、外周壁部１３０及び外縁底部１１２を備えず、容器底部１１０から起立した周壁部１２０自体が容器の外周壁部を構成している。実施形態２では容器底部１１０としては収容空間底部１１１を備える。

図２に示す実施形態２では、外壁面１２４の開口側端の近傍以外の部分に階段状に立ち上がった段付き部１２５が１つ形成されていているが、段付き部１２５は必須の構成ではない。

図２に示す実施形態２では、外壁部１２２が、実施形態１における外周壁部１３０と同様の形態、寸法であり、内壁部１２１が、実施形態１における外周壁部１３０の開口側端部まで延長した形態である。この実施形態２では、線１５０の平面視における形状は、例えば円状（円形および楕円形を含む）等の任意の形状であることができ、好ましくは円形であり、その開口幅（前記図形において、該図形の重心を間に介して対向する、該図形の周縁上の一対の点の間の距離の最大値）は好ましくは３０〜６０ｍｍであり、収容空間１４０の容量は、５００μｌ〜１０ｍｌである。実施形態２における他の部分の構造、形状、寸法、角度等の特徴は、実施形態１に関して上述したのと同様であることができる。或いは、実施形態２の変形例として、実施形態２における周壁部１２０（内壁部１２１、外壁部１２２を含む）の寸法、形状、角度、収容空間１４０の容量を実施形態１と同様とした変形例、すなわち、実施形態１において外縁底部１１２と外周壁部１３０とが存在しない変形例が挙げられる。

実施形態２では実施形態１について上述したのと同様の効果が実現できる。
実施形態２における他の部分の構造、形状、寸法、角度等の特徴は、実施形態１に関して上述したのと同様であることができる。

＜実施形態３（図３）＞
図３に、本発明の細胞培養容器１００の実施形態３を示す。
実施形態３は、少なくとも開口側端及びその近傍において、内壁面１２３の傾斜角が外壁面１２４の傾斜角よりも大きい例であり、実施形態１に包含される一例である。

実施形態３では内壁面１２３の開口側端及びその近傍での傾斜角は好ましくは３０°以上、より好ましくは５０°以上、好ましくは９０°以下、より好ましくは８５°以下、特に好ましくは８０°以下であり、外壁面１２４の開口側端及びその近傍での傾斜角は好ましくは１０°以上、より好ましくは２０°以上、特に好ましくは３０°以上、好ましくは７０°以下、より好ましくは６０°以下、特に好ましくは５０°以下である。実施形態３では、更に好ましくは、内壁面１２３及び外壁面１２４の傾斜角は底側端から開口側端に至るまでの全体において、内壁面１２３及び外壁面１２４の開口側端およびその近傍での傾斜角の好ましい範囲として挙げた上記範囲内であり、且つ、内壁面１２３の傾斜角のほうが外壁面１２４の傾斜角よりも大きい。

実施形態３のように内壁面１２３を比較的大きな傾斜の面とすることにより、収容空間１４０に収容された液体に気泡が含まれていた場合に気泡が内壁面１２３の近傍に集まり易いという利点がある。その機構は以下の通りである。図１１は実施形態３の細胞培養容器１００の収容空間１４０に培養液Ｄを収容したときの、培養液Ｄの液面Ｄ_Ｓの縁部が内壁面１２３と接する部分を鉛直方向の平面に沿って切った端面の模式図である。Ｈは水平面を示し、Ｅは、培養液Ｄの液面Ｄ_Ｓと内壁面１２３との接点を示し、θ_３は内壁面１２３の培養液Ｄに対する接触角を示す。内壁面１２３の傾斜角θ_１がθ_３よりも大きい場合、培養液Ｄの液面Ｄ_Ｓは、接点Ｅにおいて高く、接点Ｅから収容空間１４０の内方に近づくほど低くなる。収容空間１４０に収容された培養液Ｄに気泡が含まれている場合、気泡は接点Ｅの近傍に集まり易く、培養液Ｄの液面の中央部の観察が容易である。

＜実施形態４（図４）及び実施形態４の変形例１、２（図１２、１３）＞
図４に、本発明の細胞培養容器１００の実施形態４を示す。
実施形態４では内壁面１２３は底側領域１２３（１）と、開口側領域１２３（２）により構成される。内壁面１２３の開口側領域１２３（２）は傾斜角が開口側端に近づくほど減少し、開口側端で０°となるように形成された曲面を含む。一方、外壁面１２４もまた、底側領域１２４（１）と、開口側領域１２４（２）により構成される。外壁面１２４の開口側領域１２４（２）は傾斜角が開口側端に近づくほど減少し、開口側端で０°となるように形成された曲面を含む。そして、内壁面１２３と外壁面１２４とは、傾斜角がともに０°である開口側端において交差し、周壁部１２０の開口側端の表面は、細胞培養容器１００を水平面上に載置した状態で平面視したときの収容空間１４０の重心を通り上下方向に沿った仮想平面による断面において折れ曲がった部分のない、傾斜が連続的に変化する一つながりの曲面を形成する。この場合は、内壁面１２３と外壁面１２４とが交差した部分は、平面視において明確な線を形成しない。実施形態４における、内壁面１２３と外壁面１２４との交差部分の丸みを帯びた面は、前記仮想平面による断面において、曲率半径が好ましくは１００μｍ以下、より好ましくは５０μｍ以下、特に好ましくは１０μｍ以下の円弧の一部と近似できる面であることが好ましい。実施形態４によっても、周壁部１２０の開口側端に上下方向に垂直な平坦面が形成されないため、細胞培養時に細胞、異物等が周壁部１２０の開口側端に保持されにくく好ましい。

実施形態４の変形例１としては、図示する実施形態４において、内壁面１２３の開口側領域１２３（２）及び外壁面１２４の開口側領域１２４（２）がともに開口側端に近づくほど傾斜角が減少するが、図１２に示すように、内壁面１２３の開口側領域１２３（２）及び外壁面１２４の開口側領域１２４（２）の少なくとも一方、好ましくは両方の開口側端の傾斜角が０°よりも大きい例である。実施形態４の変形例１では、周壁部１２０の開口側端の表面は、内壁面１２３と外壁面１２４とが交差する部分を境に傾斜が不連続に変化する折れ曲がりのある曲面となり、当該部分は、平面視において、収容空間１４０の開口を囲う連続した線１５０を形成する。

実施形態４の変形例２としては、図示する実施形態４において、内壁面１２３の開口側領域１２３（２）及び外壁面１２４の開口側領域１２４（２）がそれぞれ、図１３に示すように、ほぼ一定の傾斜で開口側端まで延びた例である。実施形態４の変形例２では、内壁面１２３と外壁面１２４とが交差する部分は、平面視において、収容空間１４０の開口を囲う連続した線１５０を形成する。

実施形態４の上記変形例１及び２では、実施形態１等と同様に、周壁部１２０の開口側端部は尖った形状となるため、細胞培養時に細胞、異物等が周壁部１２０の開口側端に載った状態で保持される可能性が低減されることから好ましい。

内壁面１２３の開口側領域１２３（２）の傾斜角は、＜傾斜角について＞において内壁面１２３の開口側端及びその近傍での傾斜角の範囲として説明した通りであり、好ましくは１０°以上であり、より好ましくは２０°以上であり、特に好ましくは３０°以上であり、好ましくは７０°以下であり、より好ましくは６０°以下であり、特に好ましくは５０°以下である。内壁面１２３の開口側領域１２３（２）の傾斜角が上記の各下限値以上の場合、対象物が留まりにくく、収容空間底面１１３に落ちやすいため有利であり、上記の各上限値以下の場合、周壁部１２０の高さを低く構成できるため有利である。

内壁面１２３の底側領域１２３（１）の傾斜角は、＜傾斜角について＞において内壁面１２３の開口側端の近傍よりも底側端寄りの部分での傾斜角の範囲として説明した通りであり、好ましくは３０°以上であり、より好ましくは５０°以上であり、特に好ましくは７０°以上であり、好ましくは９０°以下であり、より好ましくは８５°以下であり、特に好ましくは８０°以下である。より好ましくは、内壁面１２３の底側領域１２３（１）での傾斜角はほぼ一定である。内壁面１２３の底側領域１２３（１）の傾斜角が上記の各下限値以上の場合、対象物が留まりにくく、収容空間底面１１３に落ちやすいため有利であり、上記の各上限値以下の場合、収容空間１４０が上方に近づくほど広がる形状となるため収容空間１４０の容積を大きくすることができ有利である。

実施形態４及び変形例１、２のより好ましい実施形態では、内壁面１２３の、底側端から開口側端までの上下方向に沿った幅を１００としたとき、内壁面１２３の底側端から開口側端に向けて上下方向に沿って好ましくは５０以上、より好ましくは６０以上、特に好ましくは７０以上、好ましくは９０以下、より好ましくは８０以下の部分が底側領域１２３（１）である。また、内壁面１２３の、底側端から開口側端までの上下方向に沿った幅を１００としたとき、内壁面１２３の開口側端から底側端に向けて上下方向に沿って好ましくは５０未満、より好ましくは４０未満、特に好ましくは４０未満、好ましくは１０超、より好ましくは２０超の部分が開口側領域１２３（２）である。このように内壁面１２３の幅に占める、底側領域１２３（１）の幅の割合が開口側領域１２３（２）の幅の割合より大きい場合は、底側領域１２３（１）の高さ（上下方向幅）を調節することで、収容空間１４０の容積を所望の容積に設計することが容易となる。

外壁面１２４の開口側領域１２４（２）の傾斜角は、＜傾斜角について＞において外壁面１２４の開口側端及びその近傍での傾斜角の範囲として説明した通りであり、好ましくは１０°以上であり、より好ましくは２０°以上であり、特に好ましくは３０°以上であり、好ましくは７０°以下であり、より好ましくは６０°以下であり、特に好ましくは５０°以下である。外壁面１２４の開口側領域１２４（２）の傾斜角が上記の各下限値以上の場合、対象物が留まりにくく、外周空間１６０の底に落ちやすいため有利であり、上記の各上限値以下の場合、周壁部１２０の高さを低く構成できるため有利である。

外壁面１２４の底側領域１２４（１）の傾斜角は、＜傾斜角について＞において外壁面１２４の開口側端の近傍よりも底側端寄りの部分での傾斜角の範囲として説明した通りであり、好ましくは３０°以上であり、より好ましくは５０°以上であり、特に好ましくは７０°以上であり、好ましくは９０°以下であり、より好ましくは８５°以下であり、特に好ましくは８０°以下である。より好ましくは、外壁面１２４の底側領域１２４（１）での傾斜角はほぼ一定である。外壁面１２４の底側領域１２４（１）の傾斜角が上記の各下限値以上の場合、対象物が留まりにくく、外周空間１６０の底に落ちやすいため有利であり、上記の各上限値以下の場合、本発明の細胞培養容器１００を射出成形により製造する際に、抜きテーパーがあるため製造し易いため有利であり、また、外周空間１６０が上方に近づくほど広がる形状となるため外周空間１６０の容積を大きくすることができ有利である。

実施形態４及び変形例１、２のより好ましい実施形態では、外壁面１２４の、底側端から開口側端までの上下方向に沿った幅を１００としたとき、外壁面１２４の底側端から開口側端に向けて上下方向に沿って好ましくは５０以上、より好ましくは６０以上、特に好ましくは７０以上、好ましくは９０以下、より好ましくは８０以下の部分が底側領域１２４（１）である。また、外壁面１２４の、底側端から開口側端までの上下方向に沿った幅を１００としたとき、外壁面１２４の開口側端から底側端に向けて上下方向に沿って好ましくは５０未満、より好ましくは４０未満、特に好ましくは３０未満、好ましくは１０超、より好ましくは２０超の部分が開口側領域１２４（２）である。このように外壁面１２４の底側領域１２４（１）の割合が開口側領域１２４（２）より大きい場合は、底側領域１２４（１）の高さ（上下方向幅）を調節することで、外周空間１６０の容積を所望の容積に設計することが容易となる。

実施形態４及び変形例１、２における他の部分の構造、形状、寸法、角度等の特徴は、実施形態１に関して上述したのと同様であることができる。

＜実施形態５（図５）＞
図５に、本発明の細胞培養容器１００の実施形態５を示す。
実施形態５の細胞培養容器１００は、周壁部１２０の外壁面１２４が、傾斜角が９０°よりも大きい底側領域１２４（３）を少なくとも含み、且つ、内壁面１２３と外壁面１２４とが開口側端において交差していることを特徴とする。実施形態５の細胞培養容器１００はまた、周壁部１２０の底側端から外側に張り出した外縁底部１１２と、外縁底部１１２の周縁に立設した外周壁部１３０とを備え、外周壁部１３０と、外縁底部１１２と、周壁部１２０とに囲われ上方に開口した外周空間１６０が形成されていることを特徴とする。

実施形態１、３、４のように外周壁部１３０と外縁底部１１２とを備える細胞培養容器１００を用いる細胞培養では、外周壁部１３０と、外縁底部１１２と、周壁部１２０とに囲われた外周空間１６０に、収容空間１４０とは異なる液体を収容して培養する場合がある。この用いられ方において、図１Ａ，Ｂで図示するように周壁部１２０の外壁面１２４の傾斜角が底側端から開口側端まで９０°に近い角度でほぼ一定である場合や、図３で図示するように周壁部１２０の外壁面１２４の傾斜角が底側端から開口側端まで９０°未満の角度でほぼ一定である場合や、図４で図示する実施形態４のように周壁部１２０の外壁面１２４の傾斜角が９０°に近い角度の部分と９０°未満の角度の部分との組み合わせである場合には、使用時の振動により外周空間１６０に収容された液体が収容空間１４０に流入し易い。

上記問題点を解決する手段としては図６に示す比較例の細胞培養容器６００が考えられる。細胞培養容器６００は、実施形態１等における周壁部１２０が、周壁部６１０に置換されたものである。周壁部６１０は、内壁部１２１と、外壁部１２２と、内壁部１２１及び外壁部１２２の開口側端を連結する上壁部６０２とにより構成されており、外周空間１６０に面する外壁面１２４の傾斜角は９０°よりも大きい。この構成によれば、外壁面１２４の開口側端よりも下方の位置に液面が位置するように外周空間１６０に液体を収容する場合には、培養時に振動等を受けても外周空間１６０内の液体が収容空間１４０に流入し難いという利点がある。しかし図６に示す比較例の細胞培養容器６００では、内壁面１２３と外壁面１２４との開口側端が交差しておらず、傾斜角がほぼ０°である上壁部６０２により連結されているため、上壁部６０２上に細胞、異物等が保持され易いという問題がある。

図５に示す実施形態５は上記の問題を解決することを意図したものである。すなわち、壁面１２４の底側領域１２４（３）の傾斜角は９０°よりも大きく、好ましくは９５°以上であり、より好ましくは１００°以上であり、好ましくは１４０°以下であり、より好ましくは１２０°以下であることにより、外壁面１２４の底側領域１２４（３）の開口側端よりも下方の位置に液面が位置するように外周空間１６０に液体を収容する場合には、培養時に振動等を受けても外周空間１６０内の液体が収容空間１４０に流入し難い。しかも内壁面１２３と外壁面１２４とが開口側端において交差している構成により、実施形態１等と同様に、周壁部１２０の開口側端に細胞、異物等が保持され難い。

外壁面１２４の、底側端から開口側端までの上下方向に沿った幅を１００としたとき、外壁面１２４の底側端から開口側端に向けて上下方向に沿って好ましくは５０以上、より好ましくは６０以上、特に好ましくは７０以上、好ましくは９０以下、より好ましくは８０以下の部分が上記傾斜角を有する底側領域１２４（３）である。底側領域１２４（３）は、より好ましくは、上記の範囲内でほぼ一定の傾斜角を有する面により構成される。

外壁面１２４の開口側端の近傍における傾斜角は実施形態１について説明した通りである。より好ましくは、外壁面１２４の開口側領域１２４（４）は、１０°以上９０°未満、好ましくは３０以上７０°以下のほぼ一定の傾斜角を有する領域である。外壁面１２４の、底側端から開口側端までの上下方向に沿った幅を１００としたとき、外壁面１２４の開口側端から底側端に向けて上下方向に沿って好ましくは５０未満、より好ましくは４０未満、特に好ましくは３０未満、好ましくは１０超、より好ましくは２０超の部分が上記傾斜角を有する開口側領域１２４（４）である。

一方、内壁面１２３の傾斜角は開口側端において外壁面１２４と交差できるように適宜設定することができ、好ましい傾斜角の範囲は＜傾斜角について＞で説明した通りである。より好ましくは、図５に示すように、内壁面１２３が底側領域１２３（３）と開口側領域１２３（４）とを含む。

内壁面１２３の底側領域１２３（３）の傾斜角は好ましくは０より大きくより好ましくは１５°以上、好ましくは９０°以下、より好ましくは８０°以下である。内壁面１２３の底側領域１２３（３）は、より好ましくは、上記の範囲内でほぼ一定の傾斜角を有する面により構成される。内壁面１２３の、底側端から開口側端までの上下方向に沿った幅を１００としたとき、内壁面１２３の底側端から開口側端に向けて上下方向に沿って好ましくは５０以上、より好ましくは６０以上、特に好ましくは７０以上、好ましくは９０以下、より好ましくは８０以下の部分が上記傾斜角を有する底側領域１２３（３）である。

内壁面１２３の開口側領域１２３（４）の傾斜角は好ましくは１０°以上、より好ましくは３０°以上、好ましくは９０°以下、より好ましくは７０°以下である。内壁面１２３の開口側領域１２３（４）は、より好ましくは、上記の範囲内でほぼ一定の傾斜角を有する面により構成される。内壁面１２３の、底側端から開口側端までの上下方向に沿った幅を１００としたとき、内壁面１２３の開口側端から底側端に向けて上下方向に沿って好ましくは５０未満、より好ましくは４０未満、特に好ましくは３０未満、好ましくは１０超、より好ましくは２０超の部分が上記傾斜角を有する開口側領域１２３（４）である。

実施形態５における他の部分の構造、形状、寸法、角度等の特徴は、実施形態１に関して上述したのと同様であることができる。

＜実施形態６（図７Ａ、７Ｂ）＞
本発明の細胞培養容器１００は、収容空間１４０の底を形成する面である、収容空間底面１１３に、細胞を位置決めするための窪み１１４が形成されていることが更に好ましい。本発明のこの実施形態を実施形態６として図７Ａ、図７Ｂに示す。

図７Ａ、図７Ｂに示す実施形態６に係る細胞培養容器１００は、収容空間底面１１３に窪み１１４が複数形成されている点を除いて、実施形態１に係る細胞培養容器１００と同様の構成を備える。窪み１１４内に細胞を配置することにより、細胞の移動を抑制することができ、細胞をそれぞれ特定した上で評価や判定を行うことができる。この窪みの形状は特に制限されないが、開口部の外縁が円形であり、窪みの壁面が、最も低い位置から外縁に進むに従って高くなるように傾斜した曲面を有することが好ましい。窪みの壁面は、好ましくは円錐状または円錐台状の部分を含む。円錐状または円錐台状の部分は、培養容器の底部側に、円錐の頂点または円錐台の上面および下面のうち面積の狭い方がくるように形成される。円錐状には、円錐および楕円錐、これらに類似の形状、例えば、円錐または楕円錐の頂点が丸みを帯びている形状、円錐面が外側に膨らんでいる形状、円錐面が内側に凹んでいる形状などが含まれる。円錐台状には、円錐台および楕円錐台、これらに類似の形状、例えば、円錐台または楕円錐台の上面または下面と円錐面との接合部が丸みを帯びている形状、円錐面が外側に膨らんでいる形状、円錐面が内側に凹んでいる形状などが含まれる。なお、窪み１１４は、上記に限らず、多角錐状、多角錐台状などの形態であってもよい。

窪み１１４の寸法は、少なくとも１つの細胞を収容可能な寸法であれば特に制限されない。ここで、窪みの寸法は、窪み１１４の開口部の外縁が形成する図形の最長径の長さをさす。従って、窪み１１４の開口部の外縁が円形である場合、その直径は、培養する細胞の最大寸法と同じかそれより大きいものとなる。本発明の細胞培養容器により受精卵を培養する場合、胚盤胞の段階まで培養することが望ましいため、円形の開口部の直径は、胚盤胞の段階の細胞の最大寸法より大きいものであることが望ましい。胚盤胞の段階の細胞の最大寸法は通常１００μｍ〜２８０μｍであることから、円形の開口部の直径は、通常１００μｍ以上である。

例えば、ヒト受精卵の場合、窪み１１４の開口部の直径は、通常１００μｍ以上、好ましくは２００μｍ以上、さらに好ましくは２５０μｍ以上であり、通常１０００μｍ以下、好ましくは９００μｍ以下、さらに好ましくは８００μｍ以下である。また、窪み１１４の開口部の直径は、Ｘ＋α（ここでＸは細胞の最大寸法を表す）と規定することもできる。ここで、αは、好ましくは０．０１ｍｍ以上、さらに好ましくは０．０２ｍｍ以上である。

実施形態６における他の部分の構造、形状、寸法、角度等の特徴は、実施形態１に関して上述したのと同様であることができる。

１００：細胞培養容器
１４０：収容空間
１１０：容器底部
１２０：周壁部
１２３：内壁面
１２４：外壁面
１５０：平面視において収容空間１４０の開口を囲う連続した線

Claims

細胞及び培養液を収容するための収容空間が形成された細胞培養容器であって、
前記収容空間は、容器底部から起立した周壁部により囲われた、上方に開口した空間であり、
前記収容空間の底を形成する底面の面積は０．７５ｍｍ ^２以上であり、
前記周壁部は、前記収容空間に向いた内壁面と、前記周壁部の側面のうち、前記細胞培養容器を水平面上に載置した状態で平面視したときの前記収容空間の外側に向いた面である外壁面とを有し、
前記外壁面は、前記細胞培養容器を水平面上に載置した状態で平面視したときの前記収容空間の重心を通り上下方向に沿った仮想直線に垂直に投影した場合に、線として投影される面であり、
前記内壁面と前記外壁面とは開口側端において交差している
ことを特徴とする細胞培養容器。
前記内壁面と前記外壁面とが交差した部分は、平面視において、前記収容空間の開口を囲う連続した線である、請求項１に記載の細胞培養容器。