JP6467521B2 - ストレプトマイセスおよびそれを用いてミルベマイシンa4を製造する方法 - Google Patents
ストレプトマイセスおよびそれを用いてミルベマイシンa4を製造する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6467521B2 JP6467521B2 JP2017549454A JP2017549454A JP6467521B2 JP 6467521 B2 JP6467521 B2 JP 6467521B2 JP 2017549454 A JP2017549454 A JP 2017549454A JP 2017549454 A JP2017549454 A JP 2017549454A JP 6467521 B2 JP6467521 B2 JP 6467521B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- milbemycin
- streptomyces
- fermentation
- medium
- powder
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 title claims description 43
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 29
- VOZIAWLUULBIPN-LRBNAKOISA-N milbemycin A4 Chemical compound C1C[C@H](C)[C@@H](CC)O[C@@]21O[C@H](C\C=C(C)\C[C@@H](C)\C=C\C=C/1[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\1)O)C[C@H]4C2 VOZIAWLUULBIPN-LRBNAKOISA-N 0.000 title description 54
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 63
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 63
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 31
- FXWHFKOXMBTCMP-WMEDONTMSA-N milbemycin Natural products COC1C2OCC3=C/C=C/C(C)CC(=CCC4CC(CC5(O4)OC(C)C(C)C(OC(=O)C(C)CC(C)C)C5O)OC(=O)C(C=C1C)C23O)C FXWHFKOXMBTCMP-WMEDONTMSA-N 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 13
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 13
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 claims description 12
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 claims description 12
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 10
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 10
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 10
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 8
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 8
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 8
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 8
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 7
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 claims description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 claims description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 claims description 6
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000005273 aeration Methods 0.000 claims description 5
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 4
- 241000187391 Streptomyces hygroscopicus Species 0.000 claims description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 4
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 claims description 2
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 claims description 2
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 claims description 2
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 2
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 claims description 2
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 2
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims description 2
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 claims description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 2
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 2
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 2
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 2
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 2
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 claims description 2
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 claims description 2
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000010902 straw Substances 0.000 claims 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 54
- ZLBGSRMUSVULIE-GSMJGMFJSA-N milbemycin A3 Chemical compound O1[C@H](C)[C@@H](C)CC[C@@]11O[C@H](C\C=C(C)\C[C@@H](C)\C=C\C=C/2[C@]3([C@H](C(=O)O4)C=C(C)[C@@H](O)[C@H]3OC\2)O)C[C@H]4C1 ZLBGSRMUSVULIE-GSMJGMFJSA-N 0.000 description 28
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 25
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 14
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 13
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 10
- 241000894007 species Species 0.000 description 9
- 101100397225 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) isp3 gene Proteins 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N Ethyl methanesulfonate Chemical compound CCOS(C)(=O)=O PLUBXMRUUVWRLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101000610620 Homo sapiens Putative serine protease 29 Proteins 0.000 description 6
- 102100040345 Putative serine protease 29 Human genes 0.000 description 6
- 241001564572 Streptomyces milbemycinicus Species 0.000 description 6
- 239000000642 acaricide Substances 0.000 description 5
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 4
- WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 2-nitrosoguanidine Chemical compound NC(N)=NN=O WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 4
- 101150045440 ISP1 gene Proteins 0.000 description 4
- 101100353471 Mus musculus Prss28 gene Proteins 0.000 description 4
- 101100509103 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) ish1 gene Proteins 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000895 acaricidal effect Effects 0.000 description 4
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 4
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 101100397226 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) isp4 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000187180 Streptomyces sp. Species 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 2
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 2
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001274789 Streptomyces bingchenggensis BCW-1 Species 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 description 2
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 2
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 2
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 2
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 241001446247 uncultured actinomycete Species 0.000 description 2
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 244000060011 Cocos nucifera Species 0.000 description 1
- 235000013162 Cocos nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 244000257039 Duranta repens Species 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 1
- 241000220324 Pyrus Species 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 101100397227 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) isp5 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 244000061458 Solanum melongena Species 0.000 description 1
- 235000002597 Solanum melongena Nutrition 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241001454295 Tetranychidae Species 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 235000006468 Thea sinensis Nutrition 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 description 1
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 239000010866 blackwater Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- OLOZVPHKXALCRI-UHFFFAOYSA-L calcium malate Chemical compound [Ca+2].[O-]C(=O)C(O)CC([O-])=O OLOZVPHKXALCRI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940016114 calcium malate Drugs 0.000 description 1
- 239000001362 calcium malate Substances 0.000 description 1
- 235000011038 calcium malates Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000012272 crop production Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000001056 green pigment Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 235000021017 pears Nutrition 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000009394 selective breeding Methods 0.000 description 1
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004071 soot Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008939 whole milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
- 239000001052 yellow pigment Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/181—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system, e.g. Salinomycin, Septamycin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
- C12N15/76—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora for Actinomyces; for Streptomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
- C12R2001/55—Streptomyces hygroscopicus
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
0.5mlの発酵液に4.5mlの75%エタノールを加える。得られた混合物を均質に混合し、15分間3000rpmで遠心分離する。上澄み液を取って試料を注入する。
HPLCカラム:Zorbex RX−C8、150mm×4.6mm、5μm
UV吸収波長:240nm
温度制御:22℃
HPLC流動相条件:表9に示す。
注入量:10μl。
スクロースは、Guangxi Dongmen Nanhua Sugar Industry Co., Ltd.の製品である。
酵母エキスは、Zhejiang Dongcheng Pharmaceutical Co., Ltd.の製品である。
酵母エキスペーストは、Hefei Laisi Biological Engineering Co., Ltd.の製品である。
ペプトンは、Huzhou Confluence Biological science and technology Co., Ltd.の製品である。
糖蜜は、Guangdong Jiangmen Biological science and technology Co., Ltd.の製品である。
脱脂粉乳は、Hulunbeier Sanyuan Milk Co.,Ltd.の製品である。
コーンパルプは、Shandong Shouguang Juneng Golden Corn Co., Ltd.の製品である。
大豆ケーキ粉末は、Ningbo Beilun Jiangnan Oil Co., Ltd.の製品である。
綿実ケーキ粉末は、Beijing Kang Mingwei Medium Technology Co., Ltd.の製品である。
グルテン粉末は、Beijing Kang Mingwei Medium Technology Co., Ltd.の製品である。
本発明のストレプトマイセスHS7522は、ミルベマイシン産生菌であるStreptomyces milbemycinicus CGMCC No.7677(中国特許CN103789339A参照)に基づいて、(NTG、EMS、UV等の突然変異誘発手段を含む)多数回の突然変異誘発および選択育成によって得られた、高比率のミルベマイシンA4を有する菌種である。原始菌種と比べて、菌種の外観が大きく変化し、形態学的突然変異体に属する。
以下の実験は、「Streptomyces鑑定マニュアル」、「actinomyceteの分類と鑑定」および「一般細菌系統鑑定マニュアル」を参照して行った。
以下の実験は、「Streptomyces鑑定マニュアル」、「actinomyceteの分類と鑑定」および「一般細菌系統鑑定マニュアル」を参照して行った。温度試験以外は、培養はすべて、28℃で、7〜10日間行った。
ISP2上で良好に増殖した本発明の菌糸を収集し、ガラスビーズを含んだTSB液体培地に接種し、28℃でインキュベーターに置き、250r/分で2〜4日間振盪培養した。その後、遠心分離で菌糸を収集し、無菌水で2回洗浄し、4℃で保存して使用に備えた。
リバースプライマー1495Rは、5’−CTACGGCTACCTTGTTACGA−3’(SEQ ID No.2)である。
脱イオン水 14.25μL
10×PCRバッファー 2.0μL
dNTP混合物 0.5μL
Taqポリメラーゼ 0.25μL
プライマー1(27F) 1.0μL
プライマー2(1495R) 1.0μL
DNAテンプレート 1.0μL(濃度に基づいて定量した)。
CN101100651Aによって報告されているように、ミルベマイシン産生菌である、Gause氏No.1 培地上のStreptomyces bingchengsis sp.nov CGMCC No.1734のコロニーの表面は灰色(黒色の吸水斑があった)で、コロニーの背面は黄灰色で、黄褐色の色素が産生された。一方、Gause氏No.1 培地上の本発明のストレプトマイセスHS7522のコロニーの表面は白色で、コロニーの背面はベージュ褐色で、色素は産生されなかった。
〔(1) 斜面上の菌糸の製造および培養〕
斜面胞子培地の処方(g/L):酵母エキス2、麦芽エキス2、スクロース10、脱脂粉乳1.2、寒天20であり、消毒前のpH7.0〜7.2、試験管30×200mm、充填体積20mLであり、121℃で20分間滅菌した後、培地を50〜60℃に冷却し、斜面を形成した。その後、斜面に菌糸リングを接種した。28±1℃の温度で10日間培養した後、菌糸が成熟した。
種培地の処方(g/L):酵母エキス5、ペプトン5、スクロース20、脱脂粉乳3、K2HPO4 0.8であり、消毒前のpHは6.8〜7.2であった。振盪フラスコの充填体積は250mLであり、三角フラスコは30mLであった。種培地を121℃で20分間滅菌した。菌の接種量は105〜106c.f.u./mLであり、培養温度は28±1℃であり、振盪機内にて48時間、250rpmで振盪培養した。
発酵培地の処方(g/L):酵母エキス5、スクロース100、脱脂粉乳11、大豆ケーキ粉末10、綿実ケーキ粉末14、K2HPO4 1、FeSO4・7H2O 0.1、ZnSO4 0.02、CaCO3 5、CuSO4 0.05、Na2MoO4 0.5であった。振盪フラスコの充填体積は250mLであり、三角フラスコは30mLであった。発酵培地を121℃で20分間滅菌した。その後、10%(体積百分率)の接種量で種培地を接種し、振盪機内にて温度28±1℃、250rpmで14日間振盪培養し、発酵後、発酵液をHPLCで測定した。
0.5mlの発酵培地に4.5mlの75%エタノールを加える。得られた混合物を均質に混合し、15分間3000rpmで遠心分離する。上澄み液を取って試料を注入する。
HPLCカラム:Zorbex RX−C8、150mm×4.6mm、5μm
UV吸収波長:240nm
温度制御:22℃
HPLC流動相条件は以下の通りであった。
〔(1) 種タンクでの種培地の製造〕
種培地10L(種培地の処方については実施例5を参照。同時に、泡を消す薬剤として0.25%の消泡剤を添加した)を、15Lの種タンクに投入した。121℃で30分間、蒸気滅菌を行った。冷却後、200mlの振盪フラスコ種培地をその中に接種し、その後、温度28±1℃、撹拌速度150rpmで、通気量1vvmにて、48時間培養した。
発酵培地の処方は実施例5と同様であり、ただし、泡を消す薬剤として0.25%の消泡剤の添加を要した。発酵槽の体積は50Lであり、供給材料の体積は35Lであった。消毒前の発酵培地のpHは7.0〜7.6であった。121℃で25分間、蒸気滅菌を行った。冷却後、その中に約3.5Lの種タンク培地を接種し、温度28±1℃で発酵させ、最低150rpmの撹拌速度で撹拌し、溶存酸素は35%以上であった。通気量は0.6vvmであり、14日間発酵培養し、その後、発酵槽を解放した。発酵後、実施例5に示すように発酵液をHPLCで測定した。発酵液においては、ミルベマイシンA4の含量は4100mg/Lであり、ミルベマイシンA3の含量は962mg/Lであると測定され、ミルベマイシンA4の含量が、A3およびA4の総含量の81%を占めた。
〔(1) 種タンクでの種培地の製造〕
種培地8T(種培地の処方については実施例5を参照。同時に、泡を消す薬剤として0.25%の消泡剤を添加した)を、15Tの種タンクに投入した。121℃で35分間、蒸気滅菌を行った。消毒後、培地の体積は10Tであった。冷却後、2Lの振盪フラスコ種培地をその中に接種し、その後、温度28±1℃、撹拌速度100rpmで、通気量0.8vvmにて、48時間培養した。
発酵培地の処方は実施例5と同様であり、ただし、泡を消す薬剤として0.25%の消泡剤の添加を要した。発酵槽は70Tであり、供給材料の体積は55Tであった。消毒前のpHは6.8〜7.6であった。121℃で35分間、蒸気滅菌を行った。冷却後、約6Tの種タンク培地をその中に接種し、温度28±1℃で発酵させ、最低50rpmの撹拌速度で撹拌し、溶存酸素は35%以上であった。通気量は0.5vvmであり、14日間発酵培養し、その後、発酵槽を解放した。発酵後、実施例5に示すように発酵液をHPLCで測定した。ミルベマイシンA4の含量は4020mg/Lであり、ミルベマイシンA3の含量は961mg/Lであると測定され、ミルベマイシンA4の含量が、A3およびA4の総含量の80.7%を占めた。
種培地の処方(g/L):酵母エキス5、ペプトン5、スクロース40、K2HPO4 0.5であり、消毒前のpHは7.0〜7.4であった。振盪フラスコの充填体積は250mLであり、三角フラスコは25mLであった。種培地を121℃で20分間滅菌した。実施例5の斜面から1×2cmの面積を有する菌塊片を掘り出して種瓶に接種し、28±1℃で45時間培養した。上記種培地の2.5mLを発酵培地に接種した(g/L):酵母エキスペースト12、糖蜜200、脱脂粉乳11、豆ケーキ粉末11、綿実ケーキ粉末11、K2HPO4 1、FeSO4・7H2O 0.1、ZnSO4 0.02、CaCO3 5、CuSO4 0.05、Na2MoO4 0.5であった。振盪フラスコの充填体積は250mLであり、三角フラスコは30mLであった。121℃で20分間滅菌した。得られた混合物を、振盪機内にて温度28±1℃、250rpmで14日間振盪培養した。発酵後、実施例5に示すように発酵液をHPLCで測定した。発酵液中のミルベマイシンA4の含量は3960mg/Lであり、ミルベマイシンA3の含量は929mg/Lであり、ミルベマイシンA4の含量が、A3およびA4の総含量の81%を占めた。
実施例8に沿って種培地を製造し、その後、種培地の2.5mLを発酵培地に接種した(g/L):ペプトン10、スクロース140、コーンパルプ10、大豆ケーキ粉末10、グルテン粉末15、K2HPO4 1、FeSO4・7H2O 0.1、ZnSO4 0.02、CaCO3 5、CuSO4 0.05、Na2MoO4 0.5であった。振盪フラスコの充填体積は250mLであり、三角フラスコは30mLであった。121℃で20分間滅菌した。得られた混合物を、振盪機内にて温度28±1℃、250rpmで14日間振盪培養した。発酵後、実施例5に示すように発酵液をHPLCで測定した。発酵液中のミルベマイシンA4の含量は4100mg/Lであり、ミルベマイシンA3の含量は900mg/Lであり、ミルベマイシンA4の含量が、A3およびA4の総含量の82%を占めた。
(1)斜面、種、発酵培地、および培養条件は実施例5のものと同じであった。原始菌CGMCC No.7677を用いて、5組の平行発酵を行った。発酵後、実施例5に示すように発酵液をHPLCで測定した。ミルベマイシンA4の平均含量は729mg/Lであり、ミルベマイシンA3の平均含量は297mg/Lであると測定され、ミルベマイシンA4の含量が、A3およびA4の総含量の71%を占めた。
Claims (11)
- CGMCC No.9671の受入番号で寄託され、ミルベマイシン(milbemycin)を産生する能力を有することを特徴とする、ストレプトマイセス ヒグロスコピクス(Streptomyces hygroscopicus)HS7522。
- ミルベマイシンの製造のための、請求項1に記載のストレプトマイセスHS7522の使用。
- 同化炭素源と同化窒素源とを含む栄養培地にてストレプトマイセスHS7522を好気性発酵させる工程を含むことを特徴とする、ミルベマイシンの発酵方法。
- 上記同化炭素源が、澱粉、デキストリン、グルコース、工業糖蜜、グリセロール、スクロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、キシラン、マンニトールおよびソルビトールのうちの1つ、またはこれらの物質の組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項3に記載の方法。
- 上記同化窒素源が、酵母エキス、パン種、牛肉エキス、トリプトン、ペプトン、大豆ケーキ粉末、綿実ケーキ粉末、ピーナッツケーキ粉末、グルテン粉末、コーンパルプ乾燥粉末、糠、尿素およびアンモニウム塩のうちの1つ、またはこれらの物質の組み合わせから選択されることを特徴とする、請求項3に記載の方法。
- 採用されるミルベマイシン産生菌種が、ストレプトマイセスHS7522(CGMCC No.9671)、または、ストレプトマイセスHS7522(CGMCC No.9671)の自然突然変異体または通常の突然変異誘発によって得られた突然変異体であることを特徴とする、請求項3ないし5のいずれか1項に記載の方法。
- 上記栄養培地が、2〜12g/Lの酵母エキス、酵母エキスペーストまたはペプトン、20〜200g/Lのスクロースまたは糖蜜、2〜11g/Lの脱脂粉乳またはコーンパルプ、5〜11g/Lの大豆ケーキ粉末、5〜15g/Lの綿実ケーキ粉末またはグルテン粉末、0.2〜1g/LのK2HPO4、0.05〜0.1g/LのFeSO4・7H2O、0.005〜0.02g/LのZnSO4、1〜5g/LのCaCO3、0.01〜0.05g/LのCuSO4および/または0.1〜0.5g/LのNa2MoO4を含むことを特徴とする、請求項3ないし5のいずれか1項に記載の方法。
- 上記発酵の温度が、20〜40℃であり、上記栄養培地のpHが、6.0〜8.0であり、上記発酵の時間が、300〜360時間であることを特徴とする、請求項3に記載の方法。
- 上記発酵の温度が25〜35℃であり、上記栄養培地のpHが7.0であることを特徴とする、請求項8に記載の方法。
- 上記発酵の時の溶存酸素が、35%以上であることを特徴とする、請求項3ないし5のいずれか1項に記載の方法。
- 上記発酵の時の通気量が、0.5〜1.0vvmであることを特徴とする、請求項3ないし5のいずれか1項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510137374.2A CN106148215B (zh) | 2015-03-27 | 2015-03-27 | 一种链霉菌及其生产米尔贝霉素a4的方法 |
CN201510137374.2 | 2015-03-27 | ||
PCT/CN2016/077355 WO2016155567A1 (zh) | 2015-03-27 | 2016-03-25 | 一种链霉菌及其生产米尔贝霉素a4的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2018509166A JP2018509166A (ja) | 2018-04-05 |
JP6467521B2 true JP6467521B2 (ja) | 2019-02-13 |
Family
ID=57003865
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017549454A Active JP6467521B2 (ja) | 2015-03-27 | 2016-03-25 | ストレプトマイセスおよびそれを用いてミルベマイシンa4を製造する方法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US10526668B2 (ja) |
EP (1) | EP3275995B1 (ja) |
JP (1) | JP6467521B2 (ja) |
CN (1) | CN106148215B (ja) |
WO (1) | WO2016155567A1 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106148216B (zh) | 2015-03-27 | 2019-06-04 | 浙江海正药业股份有限公司 | 一种链霉菌及其生产米尔贝霉素a3的方法 |
CN109022516A (zh) * | 2018-05-31 | 2018-12-18 | 四川大学 | 一种提高米尔贝链霉菌抗生素产量的方法 |
CN109810925B (zh) * | 2019-03-18 | 2023-04-18 | 陕西麦可罗生物科技有限公司 | 一种改进的多抗霉素发酵培养基及发酵工艺 |
CN109971692A (zh) * | 2019-05-16 | 2019-07-05 | 华东理工大学 | 林可链霉菌(Streptomyces lincolnensis)及培养方法和应用 |
CN111607547B (zh) * | 2020-05-06 | 2021-10-22 | 中国农业科学院植物保护研究所 | 一种碳源吸收表达系统、重组菌及应用 |
CN113588840A (zh) * | 2021-08-17 | 2021-11-02 | 丽珠集团福州福兴医药有限公司 | 一种检测米尔贝霉素含量的方法 |
CN114195840B (zh) * | 2021-12-20 | 2024-02-27 | 台州科技职业学院 | 一种大环内酯类化合物结构鉴定的方法 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3950360A (en) | 1972-06-08 | 1976-04-13 | Sankyo Company Limited | Antibiotic substances |
AR243528A1 (es) | 1986-12-11 | 1993-08-31 | Sankyo Co | Procedimiento para preparar compuestos de macrolida y un procedimiento para producir con los mismos una composicion parasiticida. |
JPH0889272A (ja) * | 1994-09-29 | 1996-04-09 | Mitsubishi Chem Corp | ミルベマイシン系化合物及びその製造法 |
CN101100651B (zh) * | 2007-05-28 | 2010-05-26 | 东北农业大学 | 链霉菌属菌株及其应用方法 |
CN103468625B (zh) * | 2013-09-10 | 2015-05-13 | 东北农业大学 | 一种冰城链霉菌的基因阻断突变菌及其制备方法和应用 |
CN103789339B (zh) * | 2013-11-04 | 2017-08-04 | 浙江海正药业股份有限公司 | 一种产5‑酮基米尔贝霉素的链霉菌及生产5‑酮基米尔贝霉素的方法 |
-
2015
- 2015-03-27 CN CN201510137374.2A patent/CN106148215B/zh active Active
-
2016
- 2016-03-25 WO PCT/CN2016/077355 patent/WO2016155567A1/zh active Application Filing
- 2016-03-25 EP EP16771322.1A patent/EP3275995B1/en active Active
- 2016-03-25 US US15/562,187 patent/US10526668B2/en active Active
- 2016-03-25 JP JP2017549454A patent/JP6467521B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN106148215A (zh) | 2016-11-23 |
EP3275995A1 (en) | 2018-01-31 |
EP3275995A4 (en) | 2018-09-19 |
WO2016155567A1 (zh) | 2016-10-06 |
JP2018509166A (ja) | 2018-04-05 |
CN106148215B (zh) | 2019-06-14 |
US10526668B2 (en) | 2020-01-07 |
EP3275995B1 (en) | 2020-03-04 |
US20190048427A1 (en) | 2019-02-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6467521B2 (ja) | ストレプトマイセスおよびそれを用いてミルベマイシンa4を製造する方法 | |
JP6550144B2 (ja) | ストレプトマイセスおよびそれを用いてミルベマイシンa3を製造する方法 | |
CN102250808B (zh) | 一株产acc脱氨酶的小麦内生固氮菌及其用途 | |
JP6367957B2 (ja) | アクチノプラーネス菌株及びその使用 | |
CN102286400B (zh) | 一株提高作物抗病、抗逆的水稻内生固氮菌及其用途 | |
CN102807961B (zh) | 一种猪链球菌7型高密度发酵培养基及专用菌株 | |
WO2022262874A1 (zh) | 一种伯克霍尔德菌及其发酵产fr901464的方法 | |
CN103343097B (zh) | 一株固氮微球菌及其用途 | |
CN105132320B (zh) | 高密度固态发酵培养乳杆菌的培养基及方法 | |
CN103710269A (zh) | 一种防治菌核病的噬菌核霉菌株jn-cm | |
CN103333837B (zh) | 一株固氮节杆菌及其用途 | |
CN108410759B (zh) | 一株高效降解氯氟氰菊酯的玫瑰色红球菌及其应用 | |
JP2010119321A (ja) | 糖アルコールの製造方法 | |
CN106190854A (zh) | 一种荒漠拟孢囊菌和奥利万星中间体的制备方法 | |
CN103343098B (zh) | 一株固氮芽孢乳杆菌及其用途 | |
CN114657097B (zh) | 一株高效拮抗青枯病菌的贝莱斯芽孢杆菌lgt-1及其应用 | |
CN105602854A (zh) | 一株淡紫拟青霉菌及其在普洱茶生产中的应用 | |
CN106282042B (zh) | 一种波赛链霉菌及其生产表柔红霉素的方法 | |
CN117511824A (zh) | 一种短小芽孢杆菌及其培养基、高密度培养方法、应用 | |
CN103343096B (zh) | 一株固氮叶杆菌及其用途 | |
CN117721038A (zh) | 生防菌株e16及其在防治黄曲霉菌中的应用 | |
CN113980866A (zh) | 一株酸橙内生细菌及其应用 | |
Zhu et al. | Isolation and identification of the antagonistic strain DM-54 of Bacillus amyloliquefacien against Verticillium dahliae, and optimization of antifungal protein producing conditions | |
CN109666598A (zh) | 一种茶杆菌及其应用 | |
Li et al. | Isolation, Identification and Degradation Characterization of p-Chlorotoluene Degrading Strain |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170928 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20170921 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20171109 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180904 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20180831 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181203 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20181218 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20190111 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6467521 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |