JP6377610B2 - 液体試料中のatpを検出するための器具及び方法 - Google Patents
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/008—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions for determining co-enzymes or co-factors, e.g. NAD, ATP
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Description
本出願は、2012年7月6日に出願された米国仮特許出願第61/668,526号の利益を主張し、参照によりその全体が本明細書に援用される。
実施形態Aは、
照度計に動作可能に結合されるように適合された開口部及びキュベット部を有する容器と、
ルシフェリンを含む液体試薬組成物であって、閉鎖区画内に配設され、そのpHが約6.8以下である、液体試薬組成物と、
試料採取部を有する試料採取装置であって、
試料採取部が、試料を捕捉し、それを解放可能に保持するように適合され、
試料採取部が、繊維性材料又は発泡材料を含み、
試料採取装置が、液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のpHを6.9以上に変える有効な量のpH調整試薬を含むコーティングを備える、試料採取装置と、を備える、キットである。
照度計に動作可能に結合されるように適合された開口部及びキュベット部を有する容器と、
ルシフェリンを含む液体試薬組成物であって、閉鎖区画内に配設され、そのpHが約6.8以下である、液体試薬組成物と、
試料採取部を有する試料採取装置であって、
試料採取部が、試料を捕捉し、それを解放可能に保持するように適合され、
試料採取部が、繊維性材料又は発泡材料を含み、
試料採取装置が、液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のpHを6.9以上に変える有効な量のpH調整試薬を含むコーティングを備える、試料採取装置と、を備える、器具である。
試料採取装置を使用して、所定の量の液体試料を取得する工程であって、
試料採取装置が、繊維性材料又は発泡材料を含む試料採取部を備え、
試料採取装置が、約6.8以下のpHを有する液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のpHを6.9以上に変える有効な量のpH調整試薬を含むコーティングを備え、
液体試薬組成物が、ルシフェリンを含む、所定の量の試料を取得する工程と、
所定の量の試料をpH調整試薬及び容器内の液体試薬組成物と接触させて、反応混合物を形成する工程と、
照度計を使用して、反応混合物から放出された光を検出する工程と、を含み、
容器が、照度計に動作可能に結合されるように適合されたキュベット部を備える、方法である。
試料採取装置を使用して、表面から残留物の試料を取得する工程であって、
試料採取装置が、繊維性材料又は発泡材料を含む試料採取部を備え、
試料採取装置が、約6.8以下のpHを有する液体試薬組成物と接触するとき、液体試薬組成物のpHを6.9以上に変える有効な量のpH調整試薬を含むコーティングを備え、
液体試薬組成物が、ルシフェリンを含む、表面から残留物の試料を取得する工程と、
残留物の試料を取得した後、試料及びpH調整試薬を容器内の液体試薬組成物と接触させて、反応混合物を形成する工程と、
照度計を使用して、反応混合物から放出された光を検出する工程と、を含み、
容器が、照度計に動作可能に結合されるように適合されたキュベット部を備える、方法である。
コーティング配合物1を表1に列挙される成分から溶液として調製し、実施例1〜5及び8〜12における試料採取装置の繊維性試料採取部をコーティングするために使用した。コーティング配合物1のpHは、約8.5であった。
本明細書に記載される液体試薬組成物は、ルシフェリン及びルシフェラーゼ酵素を含む。液体試薬組成物を表2に列挙される成分を用いて溶液として調製した。配合物のpHは、約6.4であった。本開示の各容器の密封されたキュベット部内に収容された液体試薬組成物の総量は、約425マイクロリットルであった。
コーティング配合物2を表3に列挙される成分から溶液として調製し、比較例1〜5及び8〜12における試料採取装置の繊維性試料採取部をコーティングするために使用した。コーティング配合物2のpHは、約7.2であった。
図4に記載される設計に類似する器具を使用した。2つの異なる市販の製品からの成分(試料採取装置成分及び容器成分)を組み合わせることによって器具を調製した。
試料採取装置をコーティングするために使用される手順を除いて、ATP検査器具2をATP検査器1と同じように調製した。ATP検査器2では、試料採取装置の操作部を保持し、かつ繊維性試料採取部全体がコーティング配合物中に15秒間浸漬される地点まで、装置の反対端をコーティング配合物1を収容する容器の中に浸すことによって、試料採取装置をコーティングした。試料採取装置をコーティング配合物から取り出した。試料採取装置のステム部を容器の側面で軽く叩くことによって、過剰なコーティング配合物を除去した。次に、試料採取装置を薄板フローキャビネット内に配置し、少なくとも3時間にわたり20℃で空気乾燥した。乾燥工程後、試料採取装置及び容器が互いに対して第1の動作可能位置で組み立てられる(図4)ように、コーティングされた試料採取装置を3M Clean−Trace(商標)Water Plus−Total ATP検査装置と組み合わせた。
上述されるATP検査器具1を使用した。試料採取装置をATP検査器具から除去し、10マイクロリットルの1×10−7Mの水溶液のアデノシン三リン酸(ATP)をマイクロピペットを用いて繊維性試料採取部の中央部に添加した。試料採取装置を容器に再挿入した。試料採取装置を第1の動作可能位置から第2の動作可能位置まで移動させるために、試料採取装置のハンドルを押した。試料採取装置が容器中で移動することによって、脆弱なシールが破壊され、繊維性試料採取部は液体試薬組成物と直接接触した状態で位置付けられた。容器を垂直位置に保持し、激しく左右に(振り子運動)約5秒間振とうした。容器を振とうさせた後、器具のキュベット部を3M Clean−Trace(商標)NG照度計(3M Company,St.Paul,MNから市販される)に直ちに挿入し、測定値を相対発光量(RLU)で記録した。RLU測定値を70秒間およそ10秒毎に得た。前回の読み取り後、直ちにその照度計に対して新たな読み取りを開始することによってこれを達成した。計器が新しい読み取りをそれぞれ取得し、提示するのにおよそ10秒を要するので、約10秒毎にRLU測定値を得ることになった。全ての検査を10℃の環境チャンバ内で行った。全ての材料及び設備を検査前にチャンバ内で平衡化した。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表4に示す。
試料採取装置がコーティング配合物1の代わりにコーティング配合物2でコーティングされたことを除いて、実施例1と同じ手順を用いた。RLU測定値を70秒間10秒毎に得た。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表5に示す。
検査が15℃で行われたことを除いて、実施例1に記載したのと同じ手順に従った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表6に示す。
試料採取装置がコーティング配合物1の代わりにコーティング配合物2でコーティングされたことを除いて、実施例2と同じ手順を用いた。RLU測定値を70秒間にわたって10秒ごとに取った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表7に示す。
検査が20℃で行われたことを除いて、実施例1に記載したのと同じ手順に従った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表8に示す。
試料採取装置がコーティング配合物1の代わりにコーティング配合物2でコーティングされたことを除いて、実施例3と同じ手順を用いた。RLU測定値を70秒間にわたって10秒ごとに取った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表9に示す。
検査が25℃で行われたことを除いて、実施例1に記載したのと同じ手順に従った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表10に示す。
試料採取装置がコーティング配合物1の代わりにコーティング配合物2でコーティングされたことを除いて、実施例4と同じ手順を用いた。RLU測定値を70秒間にわたって10秒ごとに取った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表11に示す。
検査が30℃で行われたことを除いて、実施例1に記載したのと同じ手順に従った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表12に示す。
試料採取装置がコーティング配合物1の代わりにコーティング配合物2でコーティングされたことを除いて、実施例5と同じ手順を用いた。RLU測定値を70秒間にわたって10秒ごとに取った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表13に示す。
実施例1〜5及び対応する比較例1〜5の検査試料に対して、第1の時点(10秒)から第2の時点(20秒)のRLU測定値の増加率を以下の等式を用いて計算した。
RLUの増加%={[(20秒におけるRLU)−(10秒におけるRLU)]/(10秒におけるRLU)}×100
実施例1〜5及び対応する比較例1〜5の検査試料に対して、最大RLU測定値に達するまでの平均時間(n=5)を決定した。その結果を表15に報告する。
ATP検査器具2がATP検査器具1の代わりに使用されたことを除いて、実施例1に記載したのと同じ手順に従った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表16に示す。
試料採取装置がコーティング配合物1の代わりにコーティング配合物2でコーティングされたことを除いて、実施例8と同じ手順を用いた。RLU測定値を70秒間にわたって10秒ごとに取った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表17に示す。
検査が15℃で行われたことを除いて、実施例8に記載したのと同じ手順に従った。合計5つの反復試験試料を検査し、結果を表18に提示する。
試料採取装置がコーティング配合物1の代わりにコーティング配合物2でコーティングされたことを除いて、実施例9と同じ手順を用いた。RLU測定値を70秒間10秒毎に得た。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表19に示す。
検査が20℃で行われたことを除いて、実施例8に記載したのと同じ手順に従った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表20に示す。
試料採取装置がコーティング配合物1の代わりにコーティング配合物2でコーティングされたことを除いて、実施例10と同じ手順を用いた。RLU測定値を70秒間にわたって10秒ごとに取った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表21に示す。
検査が25℃で行われたことを除いて、実施例8に記載したのと同じ手順に従った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表22に示す。
試料採取装置がコーティング配合物1の代わりにコーティング配合物2でコーティングされたことを除いて、実施例11と同じ手順を用いた。RLU測定値を70秒間にわたって10秒ごとに取った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表23に示す。
検査が30℃で行われたことを除いて、実施例8に記載したのと同じ手順に従った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表24に示す。
試料採取装置がコーティング配合物1の代わりにコーティング配合物2でコーティングされたことを除いて、実施例12と同じ手順を用いた。RLU測定値を70秒間にわたって10秒ごとに取った。合計5つの複製試料の試験を行い、結果を表25に示す。
実施例8〜12及び対応する比較例8〜12の検査試料に対して、第1の時点(10秒)から第2の時点(20秒)のRLU測定値の増加率を以下の等式を用いて計算した。
RLUの増加%={[(20秒におけるRLU)−(10秒におけるRLU)]/(10秒におけるRLU)}×100
実施例8〜12及び対応する比較例8〜12の検査試料に対して、最大RLU測定値に達するまでの平均時間(n=5)を決定した。結果を表27に報告する。
Claims (3)
- 繊維性材料又は発泡材料を含む試料採取部と、
6.8以下のpHを有し、ルシフェリン及びルシフェラーゼを含む液体試薬組成物と接触した際に、その液体試薬組成物のpHを6.9以上に変えるのに有効な量の、水溶性緩衝成分と塩基を含むpH調整試薬を含む、前記繊維性材料又は発泡材料に備えられたコーティングと
を備える試薬採取装置を使用して所定の量の試料を取得する工程と、
前記所定の量の試料を、前記pH調整試薬及び試料採取装置の容器内の閉鎖区画内に配設された前記6.8以下のpHを有する液体試薬組成物と接触させて、反応混合物を形成する工程と、
照度計を使用して、前記反応混合物から放出された光を検出する工程と、
を含み、
前記容器が、前記照度計に動作可能に結合されるように適合されたキュベット部を備える、液体試料中のATPを検出するための方法。 - 照度計に動作可能に結合されるように適合された開口部及びキュベット部を有する容器と、
ルシフェリン及びルシフェラーゼを含み、閉鎖区画内に配設され、そのpHが6.8以下である、液体試薬組成物と、
試料採取部を有する試料採取装置であって、
前記試料採取部が、試料を捕捉し、それを解放可能に保持するように適合され、
前記試料採取部が、繊維性材料又は発泡材料を含み、
前記繊維性材料又は発泡材料が、前記液体試薬組成物と接触した際に、前記液体試薬組成物のpHを6.9以上に変える有効な量の、水溶性の緩衝成分と塩基を含むpH調整試薬を含むコーティングを備える、試料採取装置と、を備える、液体試料中のATPを検出するための器具。 - 照度計に動作可能に結合されるように適合された開口部及びキュベット部を有する容器と、
ルシフェリン及びルシフェラーゼを含み、閉鎖区画内に配設され、そのpHが6.8以下である、液体試薬組成物と、
試料採取部を有する試料採取装置であって、
前記試料採取部が、試料を捕捉し、それを解放可能に保持するように適合され、
前記試料採取部が、繊維性材料又は発泡材料を含み、
前記繊維性材料又は発泡材料が、前記液体試薬組成物と接触した際に、前記液体試薬組成物のpHを6.9以上に変える有効な量の、水溶性の緩衝成分と塩基を含むpH調整試薬を含むコーティングを備える、試料採取装置と、を備える、液体試料中のATPを検出するためのキット。
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