JP6363125B2

JP6363125B2 - 巨大分子共役体からの徐放

Info

Publication number: JP6363125B2
Application number: JP2016046733A
Authority: JP
Inventors: ギャリーアシュレー; ダニエルブイ．サンティ
Original assignee: プロリンクスリミテッドライアビリティカンパニー
Priority date: 2010-05-05
Filing date: 2016-03-10
Publication date: 2018-07-25
Anticipated expiration: 2031-05-05
Also published as: EP2566335B1; US20130116407A1; WO2011140393A1; EP2566335A4; JP2016145234A; JP2013528593A; EP2566335A1; DK2566335T3; JP5977229B2; CN103025165B; ES2584381T3; CN103025165A; US8754190B2

Description

関連出願の相互参照
本出願は、本明細書において参照によりその全体が援用される、２０１０年５月５日に出願された米国仮特許出願第６１／３３１，７３８号明細書による利益を主張する。

技術分野
本発明は、制御されたβ−脱離反応を介して薬物を放出するリンカーを含む、薬物と巨大分子キャリアとの巨大分子共役体に関する。

背景
半減期、安定性、溶解度、忍容性および安全性などの薬学的特性を高めるために、薬物分子が巨大分子キャリアに共有結合されている。一方法においては、薬物分子は薬物部分持続性のリンカーを介して巨大分子にカップリングされているが、このアプローチは以下の少なくとも２つの要因によって限定されている。すなわち、１）リンカーは、生物活性を妨げない部位で薬物部分に結合していなければならない、および、２）持続性の共役体は、一般に、細胞膜を越えることができず、従って、このアプローチは細胞外の薬物標的に対してのみ好適であり得る。

第２のアプローチにおいては、共有結合した薬物−巨大分子共役体において、製剤において有用な薬物または増殖因子の徐放が採用される。例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に共有結合的にカップリングされた薬物を徐放するための組成物および方法が記載されている。このアプローチは細胞外薬物標的を必要とせず、リンケージ部位は、薬物の活性を妨げて、キャリアから放出されるまで薬物を幾分かマスクするものが好ましい。典型的には、アルコール含有薬物またはフェノール含有薬物に関して、これらの薬物は、通常は血清エステラーゼにより加水分解され得るエステルまたはカーボネートリンケージによってキャリアに結合している。例は、ＰＥＧ−カンプトテシン、ＰＥＧ−ＳＮ３８、ＰＥＧ−イリノテカンおよびＰＥＧ−ドセタキセルである。アミン含有薬物を内包させて、切断可能なエステルによってＰＥＧ部分が自壊性カルバメートに結合しているよう適応させた。この技術が、ペプチドおよびタンパク質、ならびに、ダウノルビシン、アンホテリシン、Ａｒａ−Ｃおよび他の小分子に適用されている。しかしながら、エステラーゼ活性は種および個体間で変化し、一定の区画（例えば、局部的領域、眼内領域、間質領域）においてはエステラーゼが不在であるために、これらの事例における薬物の放出速度は予測不可能であって、調節が困難である。

本明細書においては、速度が制御されたβ−脱離メカニズムを介した薬物の放出を達成する薬物共役体系が記載されている。

ＷｅｉｚｍａｎｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅが、タンパク質またはポリマーキャリアが、フルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）またはその２−スルホ誘導体（Ｆｍｓ）などのリンカーに結合している系を開発している。これらは米国特許第７，５８５，８３７号明細書（特許文献１）に記載されている。これらのリンカーは非酵素的なβ−脱離メカニズムを介して薬物を放出させるが、しかしながら、この系では放出速度の調節可能な制御が問題として残っている。

国際公開第２００９／１５８６６８号パンフレット（特許文献２）には、巨大分子に対する放出性薬物共役体が記載されており、ここでは、β−脱離の速度が巨大分子自体とは関係のないトリガによって制御されている。そして、従来技術における問題が未解決のまま残されている。国際公開第２００９／１５８６６８号パン（特許文献２）フレットでは、カルバメートまたはチオカルバメートリンケージを介して薬物に結合しているために、塩基性アミン含有薬物に最も直接的に適用可能であるリンカーが提供されている。それ故、アルコール−、フェノール−、チオール−、チオフェノール−、および、一定の窒素−含有薬物の巨大分子キャリアに対する共役を可能にすると共に、その後、生理学的条件下で、これらの薬物の制御された速度での放出を可能にする新規の切断可能なリンカーに対して、未対処の要求が存在している。特に、１２００未満の分子量を有するＦＤＡ−認可薬物の５０％超が、第１級または第２級脂肪族ヒドロキシル、フェノールまたはチオール基を有しており、およそ８％がスルホンアミド、ピロールまたはインドール窒素を含有している（ＤｒｕｇＢａｎｋを参照のこと）。本発明は、制御された速度でβ−脱離によって切断されて薬物を遊離させることが可能である、Ｎ−オキシメチル、Ｎ−（複素環式アミノ）メチルおよびＮ−チオメチルカルバメートを介して結合された薬物−巨大分子共役体を提供することにより、この要求を満たす。しかも、本明細書に記載のリンカーは、生理学的酵素の活性または存在に依存することなく遊離された薬物分子を放出させる。

単純なＮ−アルコキシメチル、Ｎ−アシルオキシメチルおよびＮ−チオメチルカルバメートが、プロドラッグ［例えば、Ｍａｊｕｍｄａｒ＆Ｓｌｏａｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．（２００７）１７：１４４７−１４５０（非特許文献１）に記載のＮ−アシルオキシメチルカルバメート類を参照のこと］として、または、織物用の変性剤［例えば、米国特許第４，５３９，００８号明細書（特許文献３）；同４，２００，５６４号明細書（特許文献４）；および、同３，７５８，５５４号明細書（特許文献５）を参照のこと］としてすでに報告されているが、このような化合物は、速度が制御されたβ−脱離により遊離薬物分子を放出させる機能を有していない。

米国特許第７，５８５，８３７号明細書国際公開第２００９／１５８６６８号パンフレット米国特許第４，５３９，００８号明細書米国特許第４，２００，５６４号明細書米国特許第３，７５８，５５４号明細書

Ｍａｊｕｍｄａｒ＆Ｓｌｏａｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．（２００７）１７：１４４７−１４５０

本発明は、後に生理学的条件下で薬物を制御された速度で放出させる切断可能なリンカーを含む、巨大分子キャリアと薬物との共役体、ならびに、切断可能なリンカー、切断可能なリンカーを含むリンカー−薬物分子、切断可能なリンカーを含む巨大分子キャリア、ならびに、これらの調製方法および使用方法を提供する。

一般に、本発明は、式

（式中、ｍは０または１であり；
Ｒ^１およびＲ^２の少なくとも一方もしくは両方は、独立して、ＣＮ；ＮＯ_２；
置換されていてもよいアリール；
置換されていてもよいヘテロアリール；
置換されていてもよいアルケニル；
置換されていてもよいアルキニル；
ＣＯＲ^３またはＳＯＲ^３またはＳＯ_２Ｒ^３（式中、
Ｒ^３は、Ｈもしくは置換されていてもよいアルキル；
各々が置換されていてもよいアリールもしくはアリールアルキル；
各々が置換されていてもよいヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；または
ＯＲ^９もしくはＮ（Ｒ^９）_２（式中、各Ｒ^９は、独立して、Ｈもしくは置換されていてもよいアルキルであるか、または、両方のＲ^９基はこれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成している）である）；
ＳＲ^４（式中、
Ｒ^４は、置換されていてもよいアルキル；
各々が置換されていてもよいアリールもしくはアリールアルキル；または
各々が置換されていてもよいヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルである）；
であり、
式中、Ｒ^１およびＲ^２は、結合されて３〜８員環を形成していてもよく；および
式中、Ｒ^１およびＲ^２の一方ならびにいずれか一方のみは、Ｈ、または、各々が置換されていてもよい、アルキル、アリールアルキルあるいはヘテロアリールアルキルであってもよく；
各Ｒ^５は、独立して、Ｈ、または、各々が置換されていてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールあるいはヘテロアリールアルキルであり；
Ｚは、Ｏ、Ｓあるいは非塩基性Ｎを介してカップリングされた薬物またはプロドラッグの残基であるか、または、このようなカップリングを可能にする脱離基であり；ならびに
Ｂは、各々が置換されていてもよい、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり；ならびに
式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５あるいはＢの１つは巨大分子にカップリングされているか、または、巨大分子への結合を可能にする官能基を含んでいる）
の化合物に関する。

それ故、一態様において、本発明は、式（Ｉ）

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、ｍおよびＢは上記に定義されているとおりであり、ならびに、式中、Ｄは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介してカップリングされた薬物またはプロドラッグであり、ならびに、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５またはＢの１つは、巨大分子にカップリングされている）
を有する切断可能なリンカーを含む、薬物と巨大分子キャリアとの共役体に関する。

第２の態様において、本発明は、式（ＩＩ）

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、ｍおよびＢは上記に定義されているとおりであり；ならびに、Ｌは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介した薬物またはプロドラッグへの結合を可能にする脱離基である）を有する式（Ｉ）の化合物に対する前駆体である切断可能なリンカー試薬化合物を提供する。式（ＩＩ）においては、巨大分子にカップリングされる代わりに、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、およびＢ基の少なくとも１つは、巨大分子への結合を可能にする官能基を含む。

第３の態様において、本発明は、式（ＩＩＩ）

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、ｍおよびＢ基は上記に定義されているとおりであり；Ｄは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介して結合された薬物またはプロドラッグの残基であり；ならびに、式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５またはＢ基の少なくとも１つは、上記のとおり巨大分子への結合を可能にする官能基を含む）
を有するリンカー−薬物化合物を提供する。

第４の態様において、本発明は、式（ＩＶ）

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、ｍおよびＢ基は上記に定義されているとおりであり；Ｌは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介して薬物またはプロドラッグに対する結合を可能にする脱離基であり；ならびに、式中、式（Ｉ）と同様に、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５またはＢの少なくとも１つは巨大分子にさらに結合されている）
を有する切断可能なリンカーを含む巨大分子キャリアを提供する。

第５の態様において、本発明は、薬物がリンカーを介して巨大分子に結合されており、薬物分子がＯ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介してリンカーに結合されており、および、薬物が生理学的条件下でβ−脱離反応を介して共役体から放出される、薬物−巨大分子共役体を提供する。

他の態様において、本発明は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）および（ＩＶ）の化合物を調製する方法、ならびに、これらの使用方法を提供する。
[本発明1001]
以下の式の化合物：
[化1]

式中、ｍは0または1であり；
Ｒ¹およびＲ²の少なくとも一方もしくは両方は、独立して、ＣＮ；ＮＯ₂；
置換されていてもよいアリール；
置換されていてもよいヘテロアリール；
置換されていてもよいアルケニル；
置換されていてもよいアルキニル；
ＣＯＲ³またはＳＯＲ³またはＳＯ₂Ｒ³（式中、
Ｒ³は、Ｈもしくは置換されていてもよいアルキル；
各々が置換されていてもよいアリールもしくはアリールアルキル；
各々が置換されていてもよいヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；または
ＯＲ⁹もしくはＮＲ⁹ ₂（式中、各Ｒは、独立して、Ｈもしくは置換されていてもよいアルキルであるか、または、両方のＲ⁹基はこれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成している）である）；
ＳＲ⁴（式中、
Ｒ⁴は、置換されていてもよいアルキル；
各々が置換されていてもよいアリールもしくはアリールアルキル；または
各々が置換されていてもよいヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルである
であり、
ここで、Ｒ¹およびＲ²は、結合されて3〜8員環を形成していてもよく；および
ここで、Ｒ¹およびＲ²の一方ならびにいずれか一方のみは、Ｈ、または、各々が置換されていてもよい、アルキル、アリールアルキルもしくはヘテロアリールアルキルであってもよく；
各Ｒ⁵は、独立して、Ｈ、または、各々が置換されていてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；
Ｚは、Ｏ、Ｓもしくは非塩基性Ｎを介してカップリングされた薬物またはプロドラッグの残基であるか、または、前記カップリングを媒介する脱離基であり；
Ｂは、各々が置換されていてもよい、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり；かつ
ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵またはＢの1つは巨大分子にカップリングされているか、または、前記カップリングを媒介するための官能基を含んでいる。
[本発明1002]
Ｒ¹およびＲ²の一方がＣＮである、本発明1001の化合物。
[本発明1003]
Ｒ¹およびＲ²の少なくとも一方が、フェニルまたはフェニレンを含む、本発明1001の化合物。
[本発明1004]
Ｒ¹およびＲ²の一方がＳＯ₂Ｒ³であり、かつ他方がＨ、アルキルまたはフェニルである、本発明1001の化合物。
[本発明1005]
ｍが0である、本発明1001の化合物。
[本発明1006]
以下の式の薬物共役体である、本発明1001の化合物：
[化2]

式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは本発明1001において定義されているとおりであり、
Ｄは、Ｏ、ＳまたはＮを介してカップリングされた薬物またはプロドラッグの前記残基であり；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵またはＢの1つは、巨大分子にカップリングされている。
[本発明1007]
前記巨大分子がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、本発明1006の薬物共役体。
[本発明1008]
前記薬物が、ペプチド、核酸または小分子である、本発明1006の薬物共役体。
[本発明1009]
以下の式である、本発明1001の化合物：
[化3]

式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは本発明1001に定義されているとおりであり；
Ｌは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介してカップリングされた薬物またはプロドラッグの前記カップリングを媒介する脱離基であり；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵またはＢの少なくとも1つは、巨大分子に対するカップリングを媒介するための官能基を含む。
[本発明1010]
以下の式である、本発明1001の化合物：
[化4]

式中、ｍ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは本発明1001に定義されているとおりであり；
Ｄは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介してカップリングされた薬物またはプロドラッグの前記残基であり；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵またはＢの少なくとも1つは、巨大分子に対するカップリングを媒介するための官能基を含む。
[本発明1011]
以下の式である、本発明1001の化合物：
[化5]

式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは本発明1001に定義されているとおりであり；
Ｌは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介した薬物またはプロドラッグの前記カップリングを媒介する脱離基であり；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵またはＢの少なくとも1つは、巨大分子に対するカップリングを媒介するための官能基を含む。
[本発明1012]
以下の式：
[化6]

（式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは本発明1001に定義されているとおりであり；
Ｌは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介した薬物またはプロドラッグの前記カップリングを媒介する脱離基であり；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵およびＢの1つは、巨大分子にカップリングされている）
の化合物と薬物またはプロドラッグとを、前記プロドラッグが式（ＩＶ）の前記化合物にカップリングされる条件下で反応させる工程を含む、本発明1006の式（Ｉ）の化合物を調製する方法。
[本発明1013]
以下の式：
[化7]

（式中、ｍ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは本発明1001に定義されているとおりであり；
Ｌは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介した薬物またはプロドラッグの前記カップリングを媒介する脱離基であり；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵またはＢの少なくとも1つは、巨大分子に対するカップリングを媒介するための官能基を含む）
の化合物と薬物またはプロドラッグとを、前記薬物またはプロドラッグが式（ＩＩ）の前記化合物にカップリングされる条件下で反応させる工程を含む、本発明1010の式（ＩＩＩ）の化合物を調製する方法。
[本発明1014]
以下の式：
[化8]

（式中、ｍ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは本発明1001に定義されているとおりであり；かつ
Ｄは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介してカップリングされた薬物またはプロドラッグの前記残基であり；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵およびＢの少なくとも1つは、式（ＩＩＩ）を巨大分子にカップリングする官能基を含む）
の化合物と巨大分子とを、前記巨大分子が式（ＩＩＩ）の前記化合物にカップリングされる条件下で反応させる工程を含む、本発明1006の式（Ｉ）の化合物を調製する方法。
[本発明1015]
以下の式：
[化9]

（式中、ｍ、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは本発明1001に定義されているとおりであり；
Ｌは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介した薬物またはプロドラッグの前記カップリングを媒介する脱離基であり；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵およびＢの1つは、式（ＩＩ）を巨大分子にカップリングする官能基を含む）
の化合物と巨大分子とを、前記巨大分子が式（ＩＩ）の前記化合物にカップリングされる条件下で反応させる工程を含む、本発明1011の式（ＩＶ）の化合物を調製する方法。
[本発明1016]
ＺがＳＮ−38分子の残基である、本発明1001の化合物。
[本発明1017]
以下の式（ＸＸ）の化合物：
[化10]

式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは本発明1001において定義されているとおりである。
[本発明1018]
ｍが0である、本発明1017の化合物。
[本発明1019]
ｍが0であり；Ｒ¹が、フェニルスルホニル、置換フェニルスルホニル、メタンスルホニル、（Ｒ⁹）₂Ｎ−ＳＯ₂またはＣＮであり；Ｒ²がＨであり；一方のＲ⁵がＮ₃（ＣＨ₂）₅でありかつ他方のＲ⁵がＨであり；かつ、Ｂがフェニルまたは置換フェニルである、本発明1017の化合物。
[本発明1020]
ｍが0であり；Ｒ¹が、フェニルスルホニル、置換フェニルスルホニル、メタンスルホニル、Ｒ₂Ｎ−ＳＯ₂またはＣＮであり；Ｒ²がＨであり；一方のＲ⁵が置換されていてもよいアルキルでありかつ他方のＲ⁵がＨであり；かつ、Ｂがフェニルまたは置換フェニルであり、かつここで、Ｒ¹、Ｒ⁵およびＢの1つが巨大分子に対する結合をさらに含む、本発明1017の化合物。
[本発明1021]
薬物がリンカーを介して巨大分子に結合しており；薬物分子がＯ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介して前記リンカーに結合しており；かつ、前記薬物が生理学的条件下でβ−脱離反応を介して前記共役体から放出される、薬物−巨大分子共役体。

本発明の分子間の関係を示す。式（ＩＩ）の切断可能なリンカー試薬分子と薬物とのＯ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介した反応で、式（ＩＩＩ）のリンカー−薬物化合物が得られる。同様に、式（ＩＶ）の巨大分子−リンカー試薬共役体と薬物とのＯ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介した反応で、式（Ｉ）の巨大分子−リンカー−薬物共役体が得られる。式（ＩＩ）のリンカー試薬分子と巨大分子との共役は、式（ＩＶ）の巨大分子−リンカー試薬共役体をもたらす。同様に、式（ＩＩＩ）のリンカー−薬物化合物と巨大分子との共役は、式（Ｉ）の巨大分子−リンカー−薬物共役体をもたらす。パネルＡは、本発明の化合物からの薬物のβ−脱離がトリガとなる放出の一般的なスキームを示す。β−脱離による切断は不安定なカルバミン酸をもたらし、これは、ＣＯ_２を失うことによって分解して不安定なヘミアミナールをもたらし、これが、さらに分解してＢ−ＮＨ_２、Ｈ_２ＣＯおよび遊離薬物ＺＨをもたらす。遊離ＺＨの放出速度はβ−脱離の速度に依存し、そして、β−脱離は主に活性化基Ｒ^１およびＲ^２に依存している。パネルＢは、Ｅ１−脱離を介した本発明の化合物の分解を示す。カルバメート窒素の孤立電子対を用いるＣ−Ｚ結合の切断は遊離ＺＨおよび不安定なイミニウムイオンをもたらし、これは加水分解されてカルバメートおよびホルムアルデヒドをもたらす。遊離ＺＨの放出速度はカルバメートＮ孤立電子対の活性に依存し、そして、これは、Ｂ基に依存している。一般に、電子求引性および共役Ｂ基は、Ｅ１−脱離よりもβ−脱離を優先させるであろう。０．１Ｍヘペス緩衝液、１５ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．４０、３７℃における、Ｓ−（Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｎ−フェニル）アミノエチル）Ｎ−（２，４−ジニトロフェニル）−システイン（実施例１１Ｃ）（菱形；Ｔ_１／２＝１００時間）およびＳ−（Ｎ−（エトキシカルボニル−Ｎ−フェニル）アミノエチル）Ｎ−（２，４−ジニトロフェニル）−システイン（四角；Ｔ_１／２＝８５０時間）からのＮ−（２，４−ジニトロフェニル）−システインの放出の動態学を示す。０．１Ｍヘペス緩衝液、１５ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．４０、３７℃における、Ｏ−（Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｎ−フェニル）アミノエチル）−セリン（実施例１１Ｂ）（菱形；Ｔ_１／２＝４００時間）およびＯ−（Ｎ−エトキシカルボニル−Ｎ−フェニル）アミノエチル）−セリン（四角；Ｔ_１／２＝８，０００時間）からのＮ−（６−（２，４−ジニトロフェニル）アミノヘキサノイル）−セリンの放出の動態学を示す。本明細書に記載の、アルコールを中間体および式（ＩＩ）の化合物に転換するための一般的な方法を示す。Ｒ^１がアリールスルホニルであり、Ｒ^２がＨであり、Ｒ^５がＨおよび３−（５−ヘキシノイルアミド）フェニルであり、Ｂがフェニルであり、ならびに、ＬがＣｌである式（ＩＩ）の化合物を調製するための１つの方法を示す。ＤがＮを介して結合している（ＤＨは５−フルオロウラシルである）式（ＩＩＩ）の化合物を調製するための１つの方法を示す。この図はまた、ＬがＩである式（ＩＩ）の化合物を調製するための方法を示す。マウス血清における、時間に応じた４−ａｒｍＰＥＧ−ＳＮ−３８共役体（Ｒ'＝４−Ｎ，Ｎ−ジエチルカルボキサミドおよびＲ＝フェニルスルホニルまたはメタンスルホニルである実施例４２）の濃度に対する実施例４４の結果を示す。凡例：中実線、Ｒ＝フェニルスルホニル；点線、Ｒ＝モルホリノスルホニル；破線、Ｒ＝メタンスルホニル。実施例５０に記載の４−ａｒｍＰＥＧ−ＳＮ３８共役体薬物動態学実験の結果を示す。パネルＡは、ラットへの静脈内投与後の種々の４−ａｒｍＰＥＧ−ＳＮ３８共役体の濃度を示す。Ｒ^１およびＲ^２の一方がＨであると共に、他方がフェニルスルホニル（四角）、メタンスルホニル（菱形）あるいはモルホリノスルホニル（三角）である共役体、または、対照としてＲ^１およびＲ^２が共にＨである共役体（丸）をラットに静脈内投与し、実証例に記載のとおり、血漿サンプルを残りの共役体について分析した。パネルＢは、共役体からのインビボでのＳＮ３８切断速度を判定するためのデータの再プロットを示す。種々の時間での放出性共役体（すなわち、Ｒ^１およびＲ^２の一方がＨであると共に、他方が、フェニルスルホニル（四角）、メタンスルホニル（菱形）、または、モルホリノスルホニル（三角）である）対非放出性の「安定」な共役体（丸；すなわち、対照として、Ｒ^１およびＲ^２が共にＨである）の比のログプロットにより、その傾きが共役体からのＳＮ３８放出速度に等しい線が得られる。インビボでのＳＮ３８放出速度はインビトロで共役体について測定したものと同一であり、以下の半減期（修飾因子、インビトロＴ_１／２、インビボＴ_１／２）：フェニルスルホニル、９．３時間、１０．４時間；メタンスルホニル、４４時間、５４時間；モルホリノスルホニル、１２３時間、１３７時間であったことが観察された。トリガに関連するハメット定数に応じた薬物のインビボ放出速度とインビトロ放出速度との比較を示す。

本発明の説明
本発明は、標準的な共役体の活用の向上を提示し、上記で参照した国際公開第２００９／１５８６６８号パンフレットに記載のものなどのＰＥＧ化放出性薬物組成物に勝るさらなる利点を有している。利点は、巨大分子キャリアから放出されるまでの不活性形態での薬物またはプロドラッグの保持、薬物投与量を増加し得、それ故、作用力の弱い薬物の送達を可能にする薬物に対する複数の結合部位、および、酵素の分解または他の不活性化条件に対する保護の提供を含む。

本発明の組成物の他の利点は、リンパ系への薬物の効果的な送達をもたらすことである。本発明の化合物は、薬物の分子量よりも顕著に高い分子量を有しているため、化合物を皮下投与した際にもリンパ系中に薬物を保持させることが可能である。４０，０００以上の分子量を有する化合物が、リンパ系中に効果的に保持される。さらに、リンパは、エステル化リンケージから薬物を放出させ得るエステラーゼを血漿中に有していないため、好ましいリンパのｐＨ（血漿のｐＨと等しい）が共役体からの有効薬物の放出を可能とする。それ故、本発明の化合物は、例えばリンパ腫に関連する事例などのとおり、リンパへの送達が所望される場合には、リンパに薬物を効果的に放出させる。

本発明は、後に生理学的条件下で薬物を制御された速度で放出させる切断可能なリンカーを含む巨大分子キャリアと薬物との共役体、ならびに、切断可能なリンカー試薬、切断可能なリンカーを含むリンカー−薬物化合物、切断可能なリンカー試薬を含む巨大分子キャリア、ならびに、これらの調製方法および使用方法を提供する。

本発明の化合物は、薬物共役体およびその前駆体を含んでいる式（Ｖ）を有しており、さらに、本発明の説明に用いられ得る。

式（Ｖ）：

において、Ｒ^１および／またはＲ^２基は、隣接するＣ−Ｈを生理学的条件下でのβ−脱離のために活性化する。本明細書において用いられる「生理学的条件下でのβ−脱離」という用語は、例示のスキーム

に従って本発明の分子がアルケン部分およびカルバミン酸に形質転換される化学的形質転換を指し、これは、例えば６〜８のｐＨおよび２５〜４０℃の温度などの生物学系の典型的な条件下で、反応の半減期が１〜１０，０００時間または１〜５，０００時間または１〜１，０００時間または１〜１００時間または１〜１０時間となるような速度で実施される。生成物カルバミン酸は典型的にはきわめて不安定であり、さらに分解してＣＯ_２、Ｂ−ＮＨ_２、Ｈ_２Ｃ＝ＯおよびＺ−Ｈを放出する。この分解のためにとり得る経路が図２Ａにおいて示されており、以下のとおりさらに詳細に示されている：
（１）ＨＯ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ（Ｂ）−ＣＨ_２−Ｚ−＞ＣＯ_２＋Ｂ−ＮＨ−ＣＨ_２−Ｚ（不安定なホルムアルデヒドアミナール）
（２）Ｂ−ＮＨ−ＣＨ_２−Ｚ−＞Ｂ−Ｎ＝ＣＨ＋ＺＨ（イミン形成）
（３）Ｂ−Ｎ＝ＣＨ＋Ｈ_２Ｏ−＞Ｂ−ＮＨ−ＣＨ_２−ＯＨ（ヘミアミナールを形成するためのイミンへの水の付加）
（４）Ｂ−ＮＨ_２＋Ｏ＝ＣＨ_２（ヘミアミナールのホルムアルデヒド＋アミンへの分解）。
当業者は、上記のβ−脱離およびその後の分解反応（１）〜（４）の種々の中間体は過渡的であってもよく、従って、生理学的または他の化学的反応条件下において検出可能ではない場合があることを認識するであろう。

活性化Ｒ^１および／またはＲ^２基の性質は上記に記載されており、脱離反応を実質的に律速する。それ故、Ｒ^１および／またはＲ^２基は、隣接するＣ−Ｈの酸性度を判定することにより１つ以上のトリガ基として作用する。一連の好適なＲ^１および／またはＲ^２トリガ基は、本発明の化合物からの薬物放出速度を制御する手段を提供する。Ｒ^１および／またはＲ^２基が隣接するＣ−Ｈ結合を活性化させる程度はＣ−Ｈ結合の最終的な酸性度により表されてもよく；この酸性度は、次いで、Ｃ−Ｈ結合のｐＫ_ａとして表されてもよく、ここで、低いｐＫ_ａはより酸性であることを示し、Ｃ−Ｈ結合がより容易にイオン化されることを示す。種々の基に対するおおよそのｐＫ_ａ値の列挙は、例えば、Ｂｏｒｄｗｅｌｌ，Ｆ．Ｇ．，"Ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍａｃｉｄｉｔｉｅｓｉｎｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅｓｏｌｕｔｉｏｎ，"ＡｃｃｏｕｎｔｓｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈ２１（１２）：４５６−４６３（２００２）（本明細書において参照により援用されている）のように当該技術分野において一般的である。好適な活性化基の例には、これらに限定されないが、置換されていてもよいアリール、置換されていてもよいヘテロアリール、置換されていてもよいアルケン、置換されていてもよいアルキン、スルホン、スルホキシド、ニトリル、ケトン、エステル、アミドおよびニトロ基が含まれる。Ｒ^１および／またはＲ^２基が結合して３〜８員環を形成している場合、この環は、例えば

およびその置換形態などの、置換されていてもよいより大きい環構造の一部を形成していてもよい。

Ｒ^１および／またはＲ^２基上の置換基が、任意に追加されて、隣接するＣ−Ｈの酸性度、従って、β−脱離反応の速度のさらなる制御がもたらされてもよい。一般的に、電子求引性置換基はβ−脱離反応の速度を高め、一方で、電子供与性置換基はβ−脱離反応の速度を低下させるであろう。種々の置換基の電子効果は当該技術分野において周知であり、例えば直線自由エネルギー（ハメット）関係として表され得る。例えば置換アリール、ヘテロアリール、アリールケトン、ヘテロアリールケトン、アリールスルホン、ヘテロアリールスルホン、アリールスルホキシド、およびヘテロアリールスルホキシド基などの芳香族系に関して、置換基の電子効果がハメットσパラメータによって説明されており、正のσ値は電子求引性効果を示し（隣接するＣ−Ｈと比して加速的）、および、負のσ値は電子供与性効果を示す（Ｃ−Ｈと比して減速的）。表１に種々の置換基に対するハメットσ定数が列挙されている。

一例として、アリール環Ｒ^１が「電子供与性基」置換基で置換されている場合、隣接するベンジルタイプＣ−Ｈ結合の酸性度が低減されることとなる。好適な電子供与性置換基の例には、これらに限定されないが、アルキル、アルコキシ、アルキルチオ、シリルアミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノが含まれる。１個以上の「電子求引性基」でのアリール環の置換により、隣接するベンジルタイプのＣ−Ｈ結合の酸性度が高められる。好適な電子求引性置換基の例には、これらに限定されないが、ハロゲン、ジフルオロメチル、トリフルオロメチル、ニトロ、フェニル、アルケニル、シアノ、Ｃ（＝Ｏ）−Ｒ（式中、Ｒは、Ｈ、アルキル、アルコキシまたはアミノである）、または、ＳＯＲもしくはＳＯ_２Ｒ（式中、Ｒは、アルキル、アリールまたはヘテロアリールである）が含まれる。非水素電子供与性置換基または電子求引性置換基は、これらが結合している環の複数の位置に存在していてもよい。簡便性のために、ほとんどの例においては、単環上に単一の非水素置換基が存在している場合のみが示されているが、複数の置換基もまた存在し得ると共に、これらもまた本発明の範囲内である。置換基は同一であっても異なっていてもよい。

いくつかの場合において、置換基が電子求引性であるか電子供与性であるかは、芳香族環中の位置に応じるために、前述の記載はいくらか過度に簡略化されている。これは、以下の直線自由エネルギー（ハメット）関係の表に反映されており、ここで、正のσ値は電子求引効果を示しており、負のσ値は電子供与効果を示している。表に示されているとおり、例えば、ＯＭｅは、フェニル環のメタ位に存在している場合には電子求引性であるが、パラ（またはオルト）位では電子供与性である。
芳香族置換基に対する選択されたハメットσ定数

残りの置換基Ｒ^５およびＢが有するβ−脱離の速度への影響は小さいが、Ｂの性質は、競合するＥ１脱離反応の速度に特に影響を及ぼす。Ｂ基の性質は、図２Ｂに示されているＥ１−タイプ脱離反応を介した分解に向けてＮ−メチレン−カルバメートの安定性に影響を及ぼす。例えば拡張された共役および／または電子求引能を介してカルバメートＮ孤立電子対の反応性を低減させるＢ基は、Ｅ１−脱離経路による競合する分解の速度を低減させる。

巨大分子は、追加の「コネクタ」を介して式（Ｖ）にカップリングされ得る。追加のコネクタは二官能性有機化合物である。多くのこのようなコネクタが、例えばＰｉｅｒｃｅＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬから市販されている。種々の二官能性コネクタが当該技術分野において周知であり、ジカルボン酸もしくは無水物、ジアミン、または、ヘテロ二官能性コネクタが含まれる。ヘテロ二官能性コネクタの例には、例えば、スクシンイミジルエステル（「ＮＨＳ」）およびアルキンもしくはシクロアルキン（例えば、ＤＢＣＯ−ＮＨＳ）、マレイミドおよびＮＨＳ、または、同様の分子を有するものが含まれる。当然ながら、選択されるコネクタは、巨大分子、薬物、および、式（Ｉ）〜（Ｖ）に対応する中間体の置換基の官能基の性質に依存するであろう。

「アルキル」という用語は、１〜８個の炭素、または、いくつかの実施形態においては、１〜６個または１〜４個の炭素原子の直鎖、分岐または環式飽和炭化水素基を含む。

「アルコキシ」という用語は、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ、シクロプロポキシ、シクロブトキシ等を含む酸素に結合したアルキル基を含む。

「アルケニル」という用語は、炭素−炭素二重結合を有する非芳香族不飽和炭化水素を含む。「アルケニル（Ｃ_２）」という用語は、任意の幾何学的構成の、一置換、二置換、三置換または四置換炭素−炭素二重結合を意味する。

「アルキニル」という用語は、炭素−炭素三重結合を有する非芳香族不飽和炭化水素を含む。「アルキニル（Ｃ_２）」という用語は、一置換または二置換炭素−炭素三重結合を意味する。

「アリール」という用語は、フェニル、ナフチルおよびアントラセニルなどの基を含む６〜１８個の炭素、好ましくは６〜１０個の炭素の芳香族炭化水素基を含む。「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１個のＮ、ＯまたはＳ原子を含めて３〜１５個の炭素、好ましくは、少なくとも１個のＮ、ＯまたはＳ原子を含めて３〜７個の炭素を含む芳香族環を含み、ピロリル、ピリジル、ピリミジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、キノリル、インドリル、インデニルなどの基を含む。

いくつかの事例においては、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール部分は、アルキルリンケージを介して分子の残りにカップリングされ得る。これらの状況下では、置換基は、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、アリールアルキルまたはヘテロアリールアルキルと称されることとなり、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリール部分と、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリールがカップリングされた分子との間にアルキレン部分があることが示されている。

「ハロゲン」という用語は、ブロモ、フルオロ、クロロおよびヨードを含む。

「複素環」という用語は、３〜７個の炭素原子および少なくとも１個のＮ、ＯまたはＳ原子を含む４〜８員芳香族または非芳香族環を指す。例には、ピペリジニル、ピペラジニル、テトラヒドロピラニル、ピロリジンおよびテトラヒドロフラニル、ならびに、上記の用語「ヘテロアリール」について例示されている基が含まれる。

「マレイミド」とは、式

を指す。

「非塩基性Ｎ」という用語は、遊離薬物分子ＤＨにおけるＮＨ基の一部である窒素を指し、ここで、ＮＨは、およそ２０以下のｐＫａを有することにより特徴付けられる。本発明の特定の実施形態において、非塩基性Ｎは、ピロール、インドール、ピリミジンあるいはプリンなどのヘテロアリール環系、第１級もしくは第２級スルホンアミド（Ｒ−ＳＯ_２ＮＨＲ'）、第１級もしくは第２級アミド（Ｒ−ＣＯＮＨＲ'）、または、イミド（Ｒ−ＣＯ−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ'）の構成要素である。

「脱離基」は、結合されていた電子対を伴う解離基である。例示的な脱離基は、ハロゲン、ＯＨ、アルコキシ、アリールスルホネート、アルキルスルホネート、または、Ｒ_２Ｓ^＋（式中、Ｒの各々は、独立して、アルキル、アリールまたはヘテロアリールである）である。

「巨大分子」という用語は、５，０００〜１，０００，０００ダルトン、好ましくは１０，０００〜５００，０００ダルトン、および、より好ましくは１０，０００〜２５０，０００ダルトンの分子量を有する分子または分子の残基を意味する。巨大分子の例には、これらに限定されないが、抗体、抗体フラグメントおよび酵素を含むタンパク質；ポリ（リシン）およびポリ（バリン）などのポリ（アミノ酸）ならびに混合配列ポリペプチドを含むポリペプチド；ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリ（エチレンオキシド）（ＰＥＯ）、ポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ）およびこれらのコポリマーを含む合成ポリマー；ならびに、デキストランなどの多糖類が含まれる。巨大分子は、上記のとおり、アミン、カルボン酸、アルコール、チオール、アルキン、アジドまたはマレイミド基などの、自然に、または、化学的形質転換後に、共役に好適な少なくとも１つの官能基を含むこととなる。本発明の特定の実施形態において、巨大分子はポリエチレングリコールである。ポリエチレングリコールは、直鎖であっても分岐鎖であってもよく、その一端が共役に好適な官能基で末端封止されていると共に他端が末端封止基（例えばメチル）によって末端封止されていればよく、または、その各々が共役に好適な官能基で末端封止されている複数の枝を含んでいてもよい。本発明の好ましい実施形態において、ポリエチレングリコールは、２０，０００〜２００，０００ダルトン、好ましくは２０，０００〜１００，０００ダルトン、および、最も好ましくはおよそ４０，０００ダルトンの平均分子量を有する直鎖、分岐または多枝ポリマーである。このようなポリエチレングリコールの例は当該技術分野において公知であると共に、例えば日油株式会社（日本、東京）から市販されている。

「タンパク質」および「ペプチド」という用語は鎖長に関わらず同義的に用いられ、これらの用語は、ＣＨ_２ＮＨ_２リンケージなどのアミドリンケージ以外のリンケージを含む疑似ペプチドならびにペプチド模倣薬をさらに含む。

「核酸」および「オリゴヌクレオチド」という用語もまた鎖長に関わらず同義的に用いられる。核酸またはオリゴヌクレオチドは、単鎖もしくは二重鎖であり得、または、ＤＮＡ、ＲＮＡ、あるいは、ホスホジエステル、ホスホロアミデートなどのリンケージが変更されたその修飾形態であり得る。本発明において薬物として有用なタンパク質および核酸の両方に関して、これらの用語はまた、タンパク質ならびに疑似ペプチド結合の場合において自然には見出されない側鎖を有するもの、および、核酸ならびにペプチド核酸などの主鎖変化形の場合において自然には見出されない塩基をも含む。

「小分子」という用語は、薬物の文脈において、当該技術分野において十分に理解された用語であり、合成されるか、または、自然から単離され、一般的にタンパク質または核酸に類似していない、タンパク質および核酸以外の化合物を含むことを意味する。典型的には、これらは、認識されている特定のカットオフが存在しているわけではないが、１，０００未満の分子量を有する。それにもかかわらず、この用語は、薬理学および製剤分野において十分に理解されている。

広く多様な薬物がＤの実施形態として含まれていてもよい。これらの薬物の各々は、非塩基性窒素、酸素または硫黄を介して本発明の化合物のメチルカルバメート部分にカップリングされることとなる。それ故、好適な薬物は、リンカーへのカップリングが可能であるようヒドロキシ、チオールまたは非塩基性アミンを有しているものであろう。好適な薬物の例には、特にこれらに限定されないが、抗糖尿病剤；成長促進物質；アミノグリコシド、ペニシリン、セファロスポリン、マクロライドおよびペプチド、トリメトプリム、ピロミド酸ならびにスルファメタジンを含む抗菌剤；鎮痛薬および抗炎症薬、抗アレルギーおよび抗喘息薬、抗高コレステロール血症薬、β−アドレナリン遮断薬および降圧薬、抗悪性腫瘍薬および抗ウイルス性薬物を含むヒトまたは獣医学的用途のためのものが含まれる。

このような薬物のさらなる例には、パクリタキセルおよび類似体、エポチロンおよび類似体、カンプトテシンおよびイリノテカンなどの類似体などのアルコール、ならびに、５−フルオロウラシルおよびカペシタビンなどのヌクレオシドが含まれる。他の実施形態において、薬物は、セリン残基を含むペプチドである。他の実施形態において、薬物はアリールオール基を含む小分子であり；このような薬物の例には、ＳＮ−３８、エチレフリン、プレナルテロールおよびエストラジオールが含まれる。他の実施形態において、薬物はチロシン残基を含むペプチドである。カップリングがＳを介している場合、薬物はチオール基を含む小分子であり得る。このような薬物の例には、ペニシラミン、カプトプリルおよびエナラプリルが含まれる。薬物は、チオアリールまたはチオヘテロアリール基を含む小分子であってもよく；このような薬物の例には、６−メルカプトプリンが含まれる。カップリングが非塩基性Ｎを介している場合、薬物は、第１級もしくは第２級アミド（ピログルタミン酸残基もしくは他のアミドなど）またはスルホンアミド、または、インドール（例えば、トリプトファン）またはプリンなどのヘテロアリール基を含む小分子またはペプチドであり得る。例には、甲状腺刺激ホルモン−放出ホルモン、ボンベシン、黄体ホルモン−放出ホルモン、小胞−刺激放出ホルモン、オクトレオチド、５−フルオロウラシルおよびアロプリノールが含まれる。

核酸−ベースの薬物の例には、動物、特に哺乳動物由来の任意の遺伝子のセンス鎖およびアンチセンス鎖が含まれる。このような遺伝子は、例えばタンパク質キナーゼＣ−α、ＢＣＬ−２、ＩＣＡＭ−１、腫瘍壊死因子α等の遺伝子などの、既に種々の疾病を治療する目的でもたらされたアンチセンスＤＮＡもしくはＲＮＡ、または、低分子干渉ＲＮＡの対象であるものであることが可能である。追加の例には、核酸に対するウイルス送達剤が含まれる。

特定の実施形態において、薬物は、ＳＮ−３８（７−エチル−１０−ヒドロキシカンプトテシン）である。

「前駆体」という用語は、式（Ｉ）と同様の化合物であるが、巨大分子ではなく、関連する置換基Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５またはＢがカップリングをもたらすことが可能である官能基またはリンカーを備えており、および／または、Ｄが脱離基で置き換えられている化合物を指す。それ故、このカテゴリーの化合物は、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）および（ＩＶ）を有する。

典型的には、薬物の活性形態が本発明の共役体から直接的に放出されるが、いくつかの場合においては、有効薬物をそのプロドラッグの形態で放出することが可能である。

誤解を回避するため、本明細書に記載の「薬物共役体」は、薬物およびプロドラッグの両方の共役体を含む。

上記のとおり、式（Ｖ）において、Ｚは、Ｏ、ＳあるいはＮを介してカップリングされた薬物もしくはプロドラッグの残基であるか、または、Ｏ、Ｓあるいは非塩基性Ｎを介した薬物への結合を可能にする脱離基を含む。ＺがＯ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介した薬物への結合を可能にする脱離基である場合、Ｚは、ハロゲン、ＯＨ、アルコキシ、アリールスルホネート、アルキルスルホネートまたはＲ_２Ｓ^＋であってもよく、式中、各Ｒは、独立して、アルキル、アリールまたはヘテロアリールである。特定の一実施形態において、ＺはハロゲンまたはＲ_２Ｓ^＋である。他の実施形態において、Ｚはクロロまたはメトキシである。同様に、式（ＩＩ）および式（ＩＶ）中のＬは、ハロゲン、ＯＨ、アルコキシ、アリールスルホネート、アルキルスルホネートまたはＲ_２Ｓ^＋であってもよく、式中、各Ｒは、独立して、アルキル、アリールまたはヘテロアリールであり、および、特定の実施形態において、Ｌはクロロまたはメトキシである。

例示的な置換基
基Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５およびＢは、これらの基を定義する本発明の化合物のすべてに共通であるため、以下に記載された代替形態において提示されているこれらの基の種々の実施形態はこれらのすべてについて共通である。任意の基自体が置換されていてもよい場合、任意の環系での置換は、各々が置換されていてもよい、アルキル、アルキエニル（ａｌｋｙｅｎｙｌ）、アルキニルまたは追加の環であり得る。上記を含むいずれかの基の任意の置換基としては、ハロ、ニトロ、シアノ、ＯＲ、ＳＲ、ＮＲ_２、ＯＣＯＲ、ＮＲＣＯＲ、ＣＯＯＲ、ＣＯＮＲ_２、ＳＯＲ、ＳＯ_２Ｒ、ＳＯＮＲ_２、ＳＯ_２ＮＲ_２が含まれ、式中、各Ｒは、独立して、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリールあるいはヘテロアリールであるか、または、２個のＲ基は、これらが結合している原子と一緒になって環を形成する。

本発明の化合物は、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５およびＢの１つを介した巨大分子へのリンケージを含有しているか（式（Ｖ）、（Ｉ）および（ＩＶ））、または、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５およびＢの１つは、巨大分子への結合を可能にする官能基を含む（式（Ｖ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ））。巨大分子への結合を可能にする好適な官能基としては、アミノ、アジド、ヒドロキシ、カルボン酸、アルキニル、チオール、マレイミド、フラン、シクロペンタジエン、１，３−ジエンあるいは１，３−ジカルボニル基、または、これらの保護変種が含まれる。反応性官能基を含む置換基としては、反応性の化学部分で置換された、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリール、ヘテロアルキルまたはヘテロアリールアルキル基が含まれる。それ故、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５およびＢ基の少なくとも１つが巨大分子を含むか、または、アミノ、アジド、ヒドロキシ、カルボン酸、アルキニル、チオール、マレイミド、フラン、シクロペンタジエン、１，３−ジエンあるいは１，３−ジカルボニル基の１つ以上、または、その保護変種を含む。いくつかの実施形態において、Ｒ^１は、巨大分子にカップリングされているか、または、巨大分子への結合を可能にする官能基を含む。いくつかの実施形態において、Ｒ^５は、巨大分子にカップリングされているか、または、巨大分子への結合を可能にする官能基を含む。

上記のとおり、本発明の化合物において、Ｒ^１およびＲ^２が一緒になって薬物の放出速度に対して最大の制御を及ぼすが、Ｒ^５およびｍもいくらかの影響を有する。いくつかの事例においては、Ｒ^１およびＲ^２の一方が水素であるか、または、アルキル、アリールアルキルあるいはヘテロアリールアルキルであると共に、他方が、本明細書中に上述されている残りの実施形態の１つを有する。他の事例においては、Ｒ^１およびＲ^２のいずれも水素、または、アルキル、アリールアルキルあるいはヘテロアリールアルキルではない。

例えば、Ｒ^１はＨであってもよく、Ｒ^２は置換されていてもよいフェニルであってもよく、Ｒ^１およびＲ^２の両方が置換されていてもよいフェニルであってもよい。フェニル環での置換は１〜５位であり得るが、３以下であることが好ましい。Ｒ^１およびＲ^２の両方が置換されていてもよいフェニルである場合、これらが等しく置換されている必要はなく、または、等しく置換されていてもよい。好適な置換基としては、例えば上記表１に与えられている、アルコキシ、ハロ、ニトロ、シアノ等が含まれる。

他の実施形態においては、Ｒ^１およびＲ^２の一方または両方が、Ｒ^６Ｓ−、Ｒ^６Ｓ（Ｏ）−またはＲ^６Ｓ（Ｏ）_２−であり、式中、Ｒ^６は、アルキル、置換アルキル、ジアルキルアミノ、アルキルアリールアミノ、ジアリールアミノ、Ｎ−結合複素環、アリール、置換アリール、ヘテロアリールまたは置換ヘテロアリールである。次いで、Ｒ^１およびＲ^２の残りの構成要素は例えばＨであっても、上記の代替的実施形態のいずれかであってもよい。特定の実施形態においては、Ｒ^１およびＲ^２の一方がＲ^６Ｓ（Ｏ）_２−であり、式中、Ｒ^６は、メチル、モルホリノ、未置換フェニル、または、ハロ、メチル、メトキシあるいはトリフルオロメチル基の１個以上で置換されているフェニルであり、ならびに、Ｒ^１およびＲ^２の他方がＨである。さらなる実施形態においては、Ｒ^１およびＲ^２の一方は、フェニルスルホニル、４−（トリフルオロメチル）フェニルスルホニル、４−クロロフェニルスルホニル、４−メチルフェニルスルホニル、４−メトキシフェニルスルホニル、２，４，６−トリメチルフェニルスルホニル、モルホリノスルホニルまたはメタンスルホニルであり、ならびに、Ｒ^１およびＲ^２の他方はＨである。

他の事例において、Ｒ^１およびＲ^２の一方または両方は、シアノであってもよく、ならびに、Ｈ、および、特に、例えばハロ、ＣＮ、ＮＯ_２、メトキシ等で１つ以上の位置で置換されていてよく、ならびに、任意に巨大分子への結合を可能にする官能基をさらに含むフェニルなどの上記の許容可能な置換基から任意に選択される他のものであり得る。さらなる実施形態においては、Ｒ^１およびＲ^２の一方がシアノであると共に他方がＨである。

他の組の事例において、Ｒ^１およびＲ^２の一方または両方は、置換されていてもよいベンゾイルであると共に、他方は、水素、または、置換されていてもよいフェニルなどの他の好適選択肢のいずれかである。さらなる実施形態において、Ｒ^１およびＲ^２の一方は、Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノカルボニルなどのアミノカルボニルまたはモルホリノカルボニルであると共に他方はＨである。

追加の実施形態において、Ｒ^１およびＲ^２の一方は、上記の特定の実施形態のいずれか１つであって、巨大分子または巨大分子への結合を可能にする官能基をさらに含み、ならびに、Ｒ^１およびＲ^２の他方はＨである。

Ｒ^１およびＲ^２が結合して環構造を形成している場合、これは、Ｒ^１−ＣＨ−Ｒ^２部分が、例えば、

などの部分構造を形成し、および、その形態は、上記のとおり電子求引性基および／または電子供与性基で置換されていてもよい基を含む（式中、Ｇは、結合（例えば、９−フルオレニル）、Ｃ＝Ｏ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＣＡ_２またはＣＡ_２ＣＡ_２であり、Ａの各々は、独立して、ＨまたはＣｌである）。

さらなる実施形態において、Ｒ^１およびＲ^２は、これらが結合しているＣＨと一緒になって、巨大分子または巨大分子への結合を可能にする官能基をさらに含む、未置換のフルオレニルまたはフルオレニルを形成する。特定の実施形態において、Ｒ^１およびＲ^２は、これらが結合しているＣＨと一緒になって、フルオレニル、または、アルキルアジド、特に（アジド−Ｎ−メチル（ＣＨ_２）_３−６アルキル−アミド）メチルで置換されているフルオレニルを形成する。

各Ｒ^５は、独立してＨであるか、または、各々が置換されていてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールあるいはヘテロアリールアルキルである。特定の実施形態において、各Ｒ^５はＨである。他の実施形態においては、Ｒ^５の一方がＨであると共に他方が置換アルキルまたは置換フェニルである。さらに他の実施形態においては、Ｒ^５の一方がＨであると共に、他方がアジドアルキル基を含む。さらに他の実施形態においては、Ｒ^５の一方がＨであると共に、他方がアジド−（ＣＨ_２）_３−６アルキル、モノアルキルアミノ−（ＣＨ_２）_３−６アルキル、Ｎ_３（ＣＨ_２）_３−６Ｎ（Ｍｅ）ＣＯ（ＣＨ_２）_３−６−または−（ＣＨ_２）_３−６−ＣＯ_２Ｈ、または、その保護変種である。追加の実施形態においては、Ｒ^５の一方が巨大分子または巨大分子への結合を可能にする官能基をさらに含む上記の特定の実施形態のいずれか１つであると共に、Ｒ^５の他方がＨである。

Ｂ基は、各々が置換されていてもよい、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり得る。本発明の好ましい実施形態において、Ｂは、置換されていてもよいアリール、または、置換されていてもよいヘテロアリールである。本発明の特定の実施形態において、Ｂは、各々が正のハメットσ定数を有する少なくとも１つの基で置換されているアリールまたはヘテロアリールである（表１）。本発明の特定の一実施形態において、Ｂは、フェニルであるか、または、アルコキシカルボニル、カルボキサミド、スルホンアミド、ＣＮ、ＮＯ_２あるいはＢｒで置換されているフェニルである。さらなる実施形態において、Ｂは未置換フェニルである。さらなる実施形態において、Ｂは、未置換フェニルであるか、または、ジエチルミノカルボニル、モルホリノカルボニルあるいはモルホリノスルホニルで置換されているフェニルである。さらなる実施形態において、Ｂは、フェニル、プロパルギル、４−ブロモフェニル、４−エトキシカルボニルフェニル、プロピル、４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルカルボキサミド）フェニル、４−モルホリノカルボニルフェニルまたは４−モルホリノスルホニルフェニルである。さらなる実施形態において、Ｂは、フェニル、４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルカルボキサミド）フェニル、４−モルホリノカルボニルフェニルまたは４−モルホリノスルホニルフェニルである。追加の実施形態において、Ｂは上記の特定の実施形態のいずれか１つであり、さらに、巨大分子または巨大分子への結合を可能にする官能基を含む。

特定の実施形態において、ｍは０である。

他の実施形態において、本発明は、式（Ｘ）の化合物：

（式中、
ｘは、０、１、２または３であり；
各Ｒ^１０は、独立して、メチル、トリフルオロメチル、メトキシまたはハロであり；
Ｂ'は、アルコキシカルボニル、カルボキサミド、スルホンアミド、ＣＮ、ＮＯ_２またはハロで置換されていてもよいフェニルであり；
Ｚ'は、Ｏ、Ｓあるいは非塩基性Ｎを介してカップリングされている薬物もしくはプロドラッグの残基であるか、または、このようなカップリングを可能にする脱離基であり；
スペーサは、各々が置換されていてもよい、アルキル、ヘテロアルキル、アリールまたはアラルキル基を含むリンカーであり；および
ＭＭは巨大分子であるか、または、巨大分子への結合を可能にする官能基である）
を想定している。

他の実施形態において、本発明は、式（ＸＸ）：

（式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５、ｍおよびＢは、式（Ｖ）について上記に定義されているとおりである）の化合物を想定している。式（ＸＸ）のさらなる実施形態において、ｍは０である。式（ＸＸ）のさらなる実施形態において、ｍは０であり；Ｒ^１は、フェニルスルホニル、置換フェニルスルホニル、メタンスルホニル、（Ｒ^９）_２Ｎ−ＳＯ_２（式中、Ｒ^９は式（Ｖ）について定義されているとおりである）またはＣＮであり；Ｒ^２はＨであり；Ｒ^５の一方はＮ_３（ＣＨ_２）_５であると共にＲ^５の他方はＨであり；ならびに、Ｂはフェニルまたは置換フェニルである。他の実施形態において、ｍは０であり；Ｒ^１は、フェニルスルホニル、置換フェニルスルホニル、メタンスルホニル、（Ｒ^９）_２Ｎ−ＳＯ_２またはＣＮであり；Ｒ^２はＨであり；一方のＲ^５は置換されていてもよいアルキルであると共に他方のＲ^５はＨであり；ならびに、Ｂはフェニルまたは置換フェニルであって、ここで、Ｒ^１、Ｒ^５およびＢの１つは、巨大分子への結合をさらに含む。式（ＸＸ）のさらなる実施形態において、巨大分子は、直鎖、分岐または多枝ポリエチレングリコールである。式（ＸＸ）のさらなる実施形態において、ｍは０であり；Ｒ^１は、フェニルスルホニル、置換フェニルスルホニル、メタンスルホニル、（Ｒ^９）_２Ｎ−ＳＯ_２またはＣＮであり；Ｒ^２はＨであり；Ｒ^５の一方はポリエチレングリコールにさらに結合されている置換アルキルであると共にＲ^５の他方はＨであり；ならびに、Ｂは置換フェニルである。

調製
他の態様において、本発明は、式（Ｖ）の化合物を調製する方法を提供する。当業者は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）および（Ｘ）の化合物は、式（Ｖ）の化合物のサブセットであることを認識するであろう。

式（ＩＩ）の化合物の調製
式（ＩＩ）のリンカー化合物を調製する方法は、当該技術分野において公知である、Ｎ−ヒドロキシメチル−、Ｎ−アルコキシメチル−およびＮ−ハロメチル−アミドの調製方法、または、単純なＮ−ハロメチル−、Ｎ−アルコキシメチルまたはＮ−チオメチル−カルバメートの調製方法（Ｍａｊｕｍｄａｒ＆Ｓｌｏａｎ，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙＬｅｔｔｅｒｓ（２００７）１７：１４４７−１４５０、本明細書において参照により援用されている）と同様であり、図５に示されている。

式（ＩＩ）の化合物は、アルコールＲ^１Ｒ^２Ｃ−（Ｃ＝Ｃ）_ｍＣ（Ｒ^５）_２ＯＨ（図５および以下の式（Ａ））およびｍ＝１である類似体から調製される。このようなアルコールの合成は、例えば、国際公開第２００９／１５８６６８Ａ１号パンフレットとして公開されているＰＣＴ国際特許出願公開米国特許第２００９／０４８９４３号明細書（本明細書において参照により援用されている）において記載されている。例が、図６および以下の実証例において記載されている。

ｍが０であるアルコールＲ^１Ｒ^２Ｃ−（Ｃ＝Ｃ）_ｍＣ（Ｒ^５）_２ＯＨ（式（Ａ））は、Ｒ^１Ｒ^２ＣＨ_２と例えばブチルリチウム、ＮａＨ、リチウムジイソプロピルアミド、リチウムビス（トリメチルシリルアミド）などの強塩基とを反応させることにより形成されるカルバニオンＲ^１Ｒ^２ＣＨ⁻の式（Ａ）の化合物を生成するための分子との付加により調製され得る。

あるいは、ｍが０であると共に一方のＲ^５がＨである式（Ａ）の化合物は、２ステッププロセスにより調製され得る。第１のステップにおいて、Ｒ^１Ｒ^２ＣＨ_２と強塩基とを反応させることにより形成されるカルバニオンＲ^１Ｒ^２ＣＨ⁻のエステルＲ^５−Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ^＊（式中、Ｒ^＊は低級アルキルである）との付加により、中間体ケトンＲ^１Ｒ^２ＣＨ−ＣＲ^５＝Ｏが生成され、これが、第２のステップにおいて、例えばＮａＢＨ_４またはＮａＢＨ_３ＣＮなどの好適な還元剤と反応して、一方のＲ^５がＨである式（Ａ）の化合物がもたらされ得る。

例えば、Ｒ^１Ｒ^２ＣＨ_２がフルオレンである場合、これは例えば強塩基と反応してフルオレニルカルバニオンを形成し、次いで、Ｒ^５ _２−ＣＯと反応する。反応は以下のとおりである。

ｍが１であると共に両方のＲ^５がＨであるアルコールＲ^１Ｒ^２Ｃ−（Ｃ＝Ｃ）_ｍＣ（Ｒ^５）_２ＯＨは、例えばＮａＨ、ブチルリチウム、リチウムビス（トリメチル−シリルアミド）などの強塩基を用いるＲ^１Ｒ^２ＣＨ_２のリチウム化により誘導されるカルバニオンをメチル３−（ジメチルアミノ）−アクリレートなどの不飽和化合物に付加して中間体エステルを生成する（これは、１つのステップまたは複数のステップを介して対応する不飽和アルコールに還元され得る）ことにより調製され得る。

例えばＯｒｇ．Ｌｅｔｔ．（２００５）７：４１５３−５に記載されている、上記に示されている不飽和アルデヒドと置換または非置換のアリールボロン酸、アリール−Ｂ（ＯＨ）_２との、パラジウム触媒の存在下での反応は、ｍが１であり、一方のＲ^５が置換アリールであると共に一方のＲ^５がＨである化合物をもたらす。

あるいは、上記に示されている不飽和アルデヒドとＳｏｄｅｒｑｕｉｓｔ法によるアルキルボランとの反応は、一方のＲ^５がＨであると共に他方が−ＣＨ_２ＣＨ＝ＣＨ_２または−ＣＨ_２ＣＣＨである化合物をもたらす。Ｂｕｒｇｏｓ，Ｃ．Ｈ．，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（２００５）１２７：８０４４を参照のこと。

次いで、アルコールＲ^１Ｒ^２Ｃ−（Ｃ＝Ｃ）_ｍＣ（Ｒ^５）_２ＯＨは、例えば、：１）アルコールのクロロホルメートへの活性化（ホスゲン、もしくは、トリホスゲンおよびピリジンなどのホスゲン均等物で）、および、クロロホルメートとＢ−ＮＨ_２とのピリジンもしくはＮａＨＣＯ_３などの温和な塩基の存在下での反応；または、２）アルコールとイソシアネートとの反応（図５）による当該技術分野において公知である方法によって、カルバメートＲ^１Ｒ^２Ｃ−（Ｃ＝Ｃ）_ｍＣ（Ｒ^５）_２ＯＣ（Ｏ）ＮＨＢに転換される。次いで、カルバメートＲ^１Ｒ^２Ｃ−（Ｃ＝Ｃ）_ｍＣ（Ｒ^５）_２ＯＣ（Ｏ）ＮＨＢが脱離基ドナーＬ^＊の存在下にパラホルムアルデヒドと反応して式（ＩＩ）の化合物がもたらされる。特定の実施形態において、Ｌ^＊は、ＬがＣｌである式（ＩＩ）の化合物をもたらすＭｅ_３ＳｉＣｌまたはＨＣｌなどの塩化物ドナーである。

他の実施形態において、ＬがＣｌである式（ＩＩ）のリンカー化合物は、クロロホルメートのヘキサヒドロトリアジン誘導体（Ｂ−Ｎ−ＣＨ_２）_３との反応により調製される（図５）。反応は、何も添加せずに、または、テトラヒドロフラン、ジクロロメタン、酢酸エチルまたはジオキサンなどの不活性溶剤の存在下で、０℃〜１００℃の温度で、典型的には溶剤の沸点または沸点に近い温度で行われ得る。

巨大分子の式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の化合物へのカップリング
式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）中のＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^５またはＢ基は、巨大分子に結合する手段を提供する。巨大分子に共役させる方法が一般に、当該技術分野において公知である。

巨大分子への結合を可能にするＲ^１、Ｒ^２、Ｒ^５またはＢ基上の官能基が保護形態で存在している場合、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のリンカー−薬物化合物が、先ず、保護基が取り外される条件下に供される。それ故、^ｔブチルエステルエーテルもしくはチオエーテル、または、^ｔＢＯＣカルバメートなどに係る保護基が酸−切断可能である場合、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のリンカー−薬物は先ず、保護基を取り外すために、十分な時間をかけてトリフルオロ酢酸で処理される。アリルエーテルもしくはエステル、または、Ａｌｌｏｃカルバメートなど、保護基が還元により取り外し可能である場合、式（ＩＩ）または（ＩＩＩ）のリンカー−薬物は先ず、例えばテラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（ｔｅｒａｋｉｓ（ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｐｈｏｓｐｈｉｎｅ）ｐａｌｌａｄｉｕｍ）などのパラジウム（０）触媒の存在下でフェニルシランなどの温和な還元剤で処理される。保護基がシリル保護基である場合、遊離ヒドロキシ基を露出させるための取り外しは、温和な酸またはフッ化物イオンでの処理により達成され得る。次いで、共役が当該技術分野において公知である方法を用いて実施される。

１つの例示的な方法において、アミドリンケージは、アミノ基とカルボン酸基との間に形成され；それ故、アミノ基を含むリンカーをカルボン酸基を含む巨大分子と共役化させることも、カルボン酸基を含むリンカーをアミノ基を含む巨大分子と共役化させることも可能である。共役は、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）もしくは１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣＩ）などのカルボジイミド、Ｏ−ベンゾトリアゾール−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルウロニウム−ヘキサフルオロリン酸（ＨＢＴＵ）などのウロニウム試薬、または、ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロリン酸塩（ＢＯＰ）などのホスホニウム試薬などの縮合剤の存在下で、リンカーおよび巨大分子を反応させることにより実施され得る。代わりに、例えば、塩化チオニルもしくは塩化オキサリルを用いる酸塩化物への転換、または、カルボジイミドおよびペンタフルオロフェノールを用いるペンタフルオロフェニルエステル、もしくは、カルボジイミドおよびＮ−ヒドロキシスクシンイミドを用いるＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルなどの活性エステルへの転換により、カルボン酸基を先行するステップにおいて共役のために活性化させてもよく、次いで、第２のステップにおいて、得られる活性化カルボキシレートをアミンと反応させてもよい。アミンおよびカルボン酸基は、初期において、追加の化学的形質転換に係る安定性および／または親和性のために必要に応じて保護形態で存在していてもよく、共役ステップに先だって脱保護される。アミン基は、中性〜酸性条件下で除去され得る、カルバメート、好ましくはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（^ｔＢＯＣ）、アリルオキシカルボニル（Ａｌｌｏｃ）または他のカルバメート基として保護され得る。カルボン酸は、中性〜酸性条件下で除去され得る、ｔｅｒｔ−ブチル（^ｔＢｕ）、トリチル（Ｐｈ_３Ｃ）、アリル（Ａｌｌ）またはメトキシメチル（ＭＯＭ）などのエステルとして保護され得る。

第２の例示的な方法において、チオエーテル結合はチオール基とマレイミド基との間に形成され；それ故、チオール基を含むリンカーはマレイミド基を含む巨大分子に共役化されることも、マレイミド基を含むリンカーはチオール基を含む巨大分子に共役化されることも可能である。チオール基は、初期において、追加の化学的形質転換に係る安定性および／または親和性のために必要に応じて保護形態で存在していてもよく、共役ステップに先だって脱保護される。好適な保護基としては、例えばｔｅｒｔ−ブチルチオエーテル（^ｔＢｕ）またはトリチルチオエーテルなどの、中性〜酸性条件下で除去され得るものが含まれる。

第３の例示的な方法において、１，２，３−トリアゾールリンケージはアルキンとアジド基との間に形成され；それ故、アルキン基を含むリンカーはアジド基を含む巨大分子に共役化されることも、アジド基を含むリンカーは、アルキン基を含む巨大分子に共役化されることも可能である。共役反応は、典型的には銅もしくはルテニウムを用いる金属触媒下で実施されても、シクロオクチンなどの活性化アルキンを用いて触媒の不在下で実施されてもよい。１，３−ジエン（例えば、シクロペンタジエン）とジエノフィル（例えばマレイミド）との間の例えばディールスアルダー反応などの他の環付加反応もまた用いられ得る。

第４の例示的な方法において、エナミノ−ケトンリンケージはアミノ基と１，３−ジカルボニル基との間に形成され；それ故、アミノ基を含むリンカーは、１，３−ジカルボニル基を含む巨大分子に共役化されることも、１，３−ジカルボニル基を含むリンカーは、アミン基を含む巨大分子に共役化されることも可能である。一実施形態においては、１，３−ジカルボニル基を含むリンカーは、好適には反応性のリシンε−アミノ基を含むｍ３８Ｃ２などの抗体と反応する（Ｄｏｐｐａｌａｐｕｄｉ，ｅｔａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙＬｅｔｔｅｒｓ（２００７）１７：５０１−５０６、本明細書において参照により援用されている）。

それ故、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^５またはＢ基は、独立して、巨大分子との共役を可能にするために、保護されていてもよいアミン、保護されていてもよいカルボン酸、保護されていてもよいチオール、マレイミド、アルキンまたはアジド基を含んでいてもよい。一旦共役化されると、これらの基は、独立して、カルボン酸アミド、チオエーテルまたは１，２，３−トリアゾール基を介して結合された巨大分子により任意に置換され得る。

式（ＩＩ）または式（ＩＶ）の化合物の薬物／プロドラッグへのリンケージ
式（ＩＩＩ）または（Ｉ）の化合物は、それぞれ、Ｌが、トシレート、アルキルスルホネート、ハロゲンまたはＲ^６Ｒ^７Ｓ^＋などの好適な解離基である、式（ＩＩ）または（ＩＶ）の化合物と、ＯＨ、ＳＨまたは非塩基性ＮＨ基を含む薬物ＤＨとの、温和な塩基の存在下の無水条件下での反応により調製される。

好適な塩基としては、トリエチルアミンおよびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンなどの第三級アミン、ピリジンまたは４−（ジメチルアミノ）ピリジンが含まれる。反応混合物は、反応を加速させるために、任意に、ＮａＩまたはヨウ化テトラアルキルアンモニウムを含んでいてもよい。好適な溶剤としては、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、酢酸エチル、ジクロロメタン、アセトンおよびクロロホルムを含むいずれかの不活性無水溶剤が含まれる。いくつかの事例においては、例えば、薬物がフェノールまたは非塩基性ＮＨを含んでいる場合、例えばＮａＨ、リチウムビス（トリメチルシリルアミド）、リチウムジイソプロピルアミドなどの強塩基との反応により薬物の塩を予め形成しておくことが有利であり得る。

薬物がペプチドである本発明の一実施形態において、ペプチドの末端アミノ酸は、本発明のリンカーに結合したピログルタミル残基であり得る。このようなペプチドは、最終カップリングステップがリンカー−ピログルタミン酸残基を用いる、ペプチドの化学合成により調製され得る。このようなリンカー−ピログルタミン酸残基は、例えばピログルタミン酸アリルなどの好適なピログルタミン酸エステルの塩の、本発明の化合物（ＩＩ）または（ＩＶ）でのアルキル化によって調製され得る。

例えば、シランなどの還元剤の存在下でパラジウム触媒を用いてエステル保護基を取り外した後、リンカー−ピログルタミン酸残基を、標準的な方法を用いるペプチド合成において用いることが可能である。

投与および使用
薬物を制御可能な速度で放出するよう設計されている本発明の共役体は、一般的な医薬製剤と同様に対象に投与される。対象は、マウス、ラットあるいはウサギなどのモデル系であっても、ヒト患者であっても、伴侶動物、家畜および鳥類対象などの獣医学的対象であってもよい。本発明の共役体は、典型的には、普通静脈注入などの注入により投与されるが、経口投与、座薬による投与、経皮または経粘膜投与などの他の投与メカニズムもまた本発明の範囲に包含される。投与レベルは、薬物の性質、処置されるべき容体、対象の性質、および、担当する専門家の見解に依存することとなる。特定の薬物またはプロトコルに対する適切な放出速度の選択もまたこれらの要因に依存する。それ故、本発明の化合物の使用および投与は施術者の技量の範囲内である。さらに、上記のとおり、本発明の共役体は、皮下注入が好ましいリンパ系疾病の処置に特に有用であると共に有利である。

他に明記されていない限りにおいて、本明細書において引用されているすべての文献は、参照によりそれらの全体が援用される。以下の実施例は、例示が意図されており、本発明を限定することは意図されていない。

実施例１
β−脱離による切断が可能な基
放出速度の評価のために、潜在的なｐＫ_ａ修飾因子（置換芳香族化合物、ケトン、ニトリル、スルホン）として一連の官能基を有する一連のリンカー骨格を設計し、調製し、および、カルバメート結合を介してＮ_ｅ−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リシン（Ｎ_ｅ−ＤＮＰ−Ｌｙｓ）に結合した。水溶性であると共にＨＰＬＣ−ＵＶ分析が可能である強発色団であるために、ＤＮＰ−Ｌｙｓを放出される部分として選択した。この実験は、カルバメートの切断速度は、トリガ基の特定の置換基を選択することで制御可能であることを実証する。

モデルＤＮＰ−リシン誘導体を、整理番号６７０５７−２０００３．００として出願した同時継続中の出願に記載のとおり調製した。

これらの化合物からのＮ_ε−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リシンの放出速度を、ｐＨ７．４またはｐＨ８．３、３７℃で、ＨＰＬＣ分析により測定した。放出反応の動態学的分析を、３５０ｎｍでＵＶ／ｖｉｓモニタを用いてＨＰＬＣ（Ｃ１８；線形メタノール／水＋０．５％ＨＯＡｃ勾配）により実施した。Ｌｙｓ（ＤＮＰ）（「Ｐ」）および出発材料（「Ｓ」）ピーク下面積を積分してＲ＝Ｐ／（Ｓ＋Ｐ）として反応（「Ｒ」）の程度を判定した。反応速度は、ｌｎ（１−Ｒ）対時間のプロットの線形回帰分析により得た線の傾きから算出した。ｐＨ７．４および／または８．３でのＤＮＰ−Ｌｙｓカルバメートのβ−脱離切断のｔ_１／２値が表２に示されている。

（表２）37℃でのN _e -2,4-ジニトロフェニル-L-リシンの放出に係る動態データ

表２に示されているとおり、カルバメートの脱離およびＮ_ε−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リシンの放出に係る半減期は、ｐＨ７．４では２時間から１６５０時間超の間変化した。切断がβ−脱離反応により形成されたことは異なる半減期により明らかにされ、観察では、Ｏ−ベンジル−Ｎ−（Ｎ_ε−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リシン）−カルバメート（Ｏ−アルキル分断されることができない）は、３７℃およびｐＨ７．４で５日間後に、Ｎ_ε−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リシン（０．２５％切断の推定検出限界未満）の観察可能な放出を示さなかった（ｔ_１／２＞３年）。

Ｏ−ベンジル−Ｎ−（Ｎ_ｅ−２，４−ＤＮＰ−Ｌｙｓ）カルバメートは、３７℃で１週間後に、５０％ヒト血清中において検出可能な加水分解を示さなかった。これは、カルバメートの血清ヒドロラーゼに対する安定性を実証していた。一般に、Ｃ−Ｈと比して、ａ）β位の電子吸引基は速度を高め；ｂ）α位のアルキル基は速度を高め；および、ｃ）α位のアリール部分は速度を低下させる。

良好な直線自由エネルギー関係が置換（フェニルスルホニル）エチルリンカーについて観察され、ハメットσパラメータを用いた、ＳＡＲに基づくこの系列における他の置換リンカーに係る放出速度の推定が可能であった。それ故、置換基を選択して、遅い放出速度（例えば、４−ＯＭｅ、σ_ｐ＝−０．２７；４−ＯＨ、σ_ｐ＝−０．３７；４−Ｍｅ_２Ｎ、σ_ｐ＝−０．８３）または中間の放出速度（例えば、４−Ｆ、σ_ｐ＝＋０．０６；４−Ｃｌ、σ_ｐ＝＋０．２３；３−Ｂｒ、σ_ｍ＝＋０．３９；４−ＣＦ_３、σ_ｐ＝＋０．５４）を提供することが可能である。

実施例２
クロロホルメートおよびＮ−ヒドロキシスクシンイミドカーボネートの一般的調製
ピリジン（０．３３当量）を、アルコールＲ^１Ｒ^２Ｃ−（Ｃ＝Ｃ）_ｍＣ（Ｒ^５）_２ＯＨ（１当量）およびトリホスゲン（０．３３当量）の氷で冷却した無水テトラヒドロフラン（２ｍＬ／ｍｍｏｌ）中の激しく撹拌した溶液に滴下する。１時間後、混合物を周囲温度にし、一晩保持する。次いで、混合物をろ過し、ロータリーエバポレータで減圧下で濃縮する。得られる粗クロロホルメートＲ^１Ｒ^２Ｃ−（Ｃ＝Ｃ）_ｍＣ（Ｒ^５）_２ＯＣ（Ｏ）Ｃｌをさらに精製せずに用いる。

Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドカーボネートを調製するために、粗クロロホルメートを無水テトラヒドロフラン（２ｍＬ／ｍｍｏｌ）中に溶解させ、ピリジン（２当量）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（４当量）で、周囲温度で３０分間処理する。混合物を酢酸エチルで希釈し、０．１ＮＨＣｌ、水および塩水で順次洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させる。粗カーボネートＲ^１Ｒ^２Ｃ−（Ｃ＝Ｃ）_ｍＣ（Ｒ^５）_２ＯＣ（Ｏ）Ｓｕをシリカゲルクロマトグラフィ（酢酸エチル／ヘキサン）により精製する。

実施例３
カルバメートの一般的調製
実施例２のクロロホルメート（１当量）のアセトン（２ｍＬ／ｍｍｏｌ）中の溶液を、激しく撹拌したアミンＢＮＨ_２（１当量）とＮａＨＣＯ_３（２当量）との水（２ｍＬ／ｍｍｏｌ）中の混合物に滴下する。３０分後、固形分として析出したカルバメートを減圧ろ過により回収し、水で洗浄し、乾燥させ；油として分離するカルバメートを酢酸エチルで抽出する。抽出物をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて粗カルバメートを得る。いずれの場合も、粗カルバメートＲ^１Ｒ^２Ｃ−（Ｃ＝Ｃ）_ｍＣ（Ｒ^５）_２ＯＣ（Ｏ）ＮＨＢをカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ_２）により、または、結晶化によりさらに精製する。

あるいは、トリエチルアミン（１当量）を、アミンＢＮＨ_２（１当量）とクロロホルメート（１当量）との例えばジクロロメタン、テトラヒドロフランまたは酢酸エチルなどの不活性の無水溶剤中の混合物に添加する。周囲温度で１時間攪拌した後、混合物を乾燥するまで蒸発させ、残渣を酢酸エチル中に溶解させ、１ＮＨＣｌ、水、飽和水性ＮａＨＣＯ_３および塩水で順次洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて粗カルバメートを得、これを上記のとおり精製する。

あるいは、アルコールＲ^１Ｒ^２Ｃ−（Ｃ＝Ｃ）_ｍＣ（Ｒ^５）_２ＯＨを、中間体クロロホルメートを単離することなくカルバメートに転換する。ピリジン（０．３３当量）を、アルコール（１当量）およびトリホスゲン（０．３３当量）の氷で冷却した無水テトラヒドロフラン（２ｍＬ／ｍｍｏｌ）中の激しく撹拌した溶液に滴下する。１時間後、混合物を周囲温度にし、一晩保持する。混合物を氷で冷却し、アミンＢＮＨ_２（２当量）を添加する。混合物を周囲温度にし、一晩保持する。次いで、混合物を乾燥するまで蒸発させ、残渣を酢酸エチル中に溶解させ、１ＮＨＣｌ、水、飽和水性ＮａＨＣＯ_３および塩水で順次洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて粗カルバメートを得、これを上記のとおり精製する。

実施例４
カルバメートのＮ−クロロメチル化
密閉したネジ蓋付きのバイアル中の、実施例３（１当量）のカルバメートと、パラホルムアルデヒド（３当量のホルムアルデヒド）との、１：１テトラヒドロフラン／クロロトリメチルシラン（１ｍＬ／ｍｍｏｌ）中の混合物を清透な溶液が得られるまで５５℃で加熱する。混合物をロータリーエバポレータで減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチル中に溶解させ、ろ過し、再度濃縮して粗Ｎ−クロロメチルカルバメートＲ^１Ｒ^２Ｃ−（Ｃ＝Ｃ）_ｍＣ（Ｒ^５）_２ＯＣ（Ｏ）ＮＢＣＨ_２Ｃｌを得る。

実施例５
Ｎ−メトキシメチルカルバメート
実施例４のＮ−クロロメチルカルバメートのメタノール中の溶液を周囲温度で１時間静置し、次いで、乾燥するまで濃縮してＮ−メトキシメチルカルバメートＲ^１Ｒ^２Ｃ−（Ｃ＝Ｃ）_ｍＣ（Ｒ^５）_２ＯＣ（Ｏ）ＮＢＣＨ_２ＯＭｅを得る。

実施例６
Ｎ−アルコキシメチルカルバメート、Ｎ−フェノキシメチルカルバメート、Ｎ−チオメチルカルバメートおよびＮ−チオフェニルメチルカルバメート
薬物ＤＨ（１当量）由来のアルコール、フェノール、チオールまたはチオフェノールおよび実施例４のＮ−クロロメチルカルバメート（１当量）の、例えばテトラヒドロフラン、ジクロロメタンまたは酢酸エチルなどの不活性無水溶剤中の溶液を、トリエチルアミン（１当量）で滴下処理した。１時間後、混合物を乾燥するまで蒸発させる。粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィにより精製する。

実施例７
Ｏ−（９−フルオレニルメチル）−Ｎ−プロパルギルカルバメート
塩化９−フルオレニルメトキシカルボニル（２．６ｇ）の２０ｍＬのアセトン中の溶液を、プロパルギルアミン塩酸塩（０．９１ｇ）とＮａＨＣＯ_３（２．５ｇ）との２０ｍＬの水中の撹拌混合物にゆっくりと添加した。１時間後、固体析出物を減圧ろ過により回収し、水で洗浄し、空気乾燥させた。酢酸エチル／ヘキサンからの結晶化で生成物を得た。

実施例８
Ｏ−（９−フルオレニルメチル）Ｎ−（４−ブロモフェニル）カルバメート
トリエチルアミン（０．７ｍＬ）を、４−ブロモアニリン（０．８５ｇ）と塩化９−フルオレニルメトキシカルボニル（１．３ｇ）との２５ｍＬのジクロロメタン中の撹拌混合物に添加した。混合物を周囲温度で１時間撹拌し、次いで、１ＮＨＣｌ、水、飽和水性ＮａＨＣＯ_３および塩水で洗浄した。有機溶液をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。

実施例９
Ｏ−（９−フルオレニルメチル）Ｎ−（４−（エトキシカルボニル）フェニル）カルバメート
トリエチルアミン（０．７ｍＬ）を、エチル４−アミノ安息香酸塩（０．８５ｇ）と塩化９−フルオレニルメトキシカルボニル（１．３ｇ）との２５ｍＬのジクロロメタン中の撹拌混合物に添加した。混合物を周囲温度で１時間撹拌し、次いで、１ＮＨＣｌ、水、飽和水性ＮａＨＣＯ_３および塩水で洗浄した。有機溶液をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。

実施例１０
Ｏ−（９−フルオレニルメチル）Ｎ−フェニルＮ−メトキシメチルカルバメート

Ｏ−（９−フルオレニルメチル）Ｎ−フェニルＮ−クロロメチルカルバメート（実施例１４）をメタノールに溶解させることにより調製した。１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）δ７．８６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．４２−７．２２（ｍ，９Ｈ），７．１４（ｍ，２Ｈ），４．８３（２Ｈ，ｂｒｓ），４．４７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ），４．１８（１Ｈ，ｍ），３．１１（３Ｈ，ｂｒｓ）。

実施例１１
ヒドロキシおよびチオール含有部分のリンカーへの共役
この実施例は、ヒドロキシ含有分子がリンカー部分に容易に共役化されることを実証する。

Ａ．Ｎ−（６−（２，４−ジニトロフェニルアミノ）ヘキサノイル−Ｌ−セリンアリルエステル

ステップ１．Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−セリンアリルエステル：アリルブロミド（２．３ｍＬ、２６．６ｍｍｏｌ）およびトリカプリルメチル塩化アンモニウム（４．００ｇ、９．９０ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（３５ｍＬ）中の撹拌溶液に、Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−セリン（１．０３ｇ、５．０２ｍｍｏｌ）およびＮａＨＣＯ_３（０．４３ｇ、５．１２ｍｍｏｌ）の水（１６ｍＬ）中の溶液を添加した。二相性反応混合物を、室温で４８時間激しく撹拌した。これを水（５０ｍＬ）で希釈し、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３×５０ｍＬ）で抽出した。組み合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して無色の油を得た（５．９５ｇ）。６０％ヘキサン／４０％酢酸エチルでの溶離が伴うＴｈｏｍｓｏｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＳｉｎｇｌｅＳｔｅｐ８０ｇシリカゲルカートリッジを用いる精製で、ＬＲ２−１（１．０１ｇ、８２％）を無色の油として得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．３７（９Ｈ，ｓ），３．６３（２Ｈ，ｍ），４．００（２Ｈ，ｍ），４．５３（２Ｈ，ｍ），４．８９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ），５．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．４Ｈｚ，Ｊ＝１０．６Ｈｚ），５．３０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，Ｊ＝１７．１Ｈｚ），５．８４（１Ｈ，ｍ），６．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）。

ステップ２．Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−セリンアリルエステル（０．１７５ｇ、０．７３１ｍｍｏｌ）の４Ｍ塩化水素／ジオキサン（２ｍＬ）中の溶液を周囲温度で４０分間撹拌した。反応混合物をロータリーエバポレータで濃縮し、粗ＨＣｌ塩を無水テトラヒドロフラン（３ｍＬ）中に採った。この溶液に、Ｎ−スクシンイミジル６−（２，４−ジニトロアニリノ）ヘキサノエート（０．２８８ｇ、０．７９１ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１０２ｍＬ、０．７３１ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で３０分間撹拌し、溶剤を蒸発させた。残渣を酢酸エチルと水との間に分割し、相を分離した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３および飽和ＮａＣｌで洗浄した。これをＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して粗生成物（０．２９３ｇ）を黄色の油として得た。５０％ヘキサン／５０％酢酸エチル、続いて、酢酸エチルでの溶離が伴うＴｈｏｍｓｏｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＳｉｎｇｌｅＳｔｅｐ１２ｇシリカゲルカートリッジを用いる精製で、生成物（０．２２２ｇ、７２％）を黄色の油として得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．３２（２Ｈ，ｍ），１．５２−１．６４（４Ｈ，ｍ），２．１５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．４４（２Ｈ，ｍ），３．５９（１Ｈ，ｍ），３．６６（１Ｈ，ｍ），４．３３（１Ｈ，ｍ），４．５５（２Ｈ，ｍ），５．０２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ），５．１７（１Ｈ，ｍ），５．２８（１Ｈ，ｍ），５．８３（１Ｈ，ｍ），７．２１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），８．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），８．２３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ，Ｊ＝９．４Ｈｚ），８．８５（２Ｈ，ｍ）。

Ｂ．Ｏ−（Ｎ−（（９−フルオレニルメトキシ）カルボニル）−Ｎ−フェニル）アミノエチル）Ｎ−（６−（２，４−ジニトロフェニルアミノ）ヘキサノイル）−セリン

ステップ１．Ｎ−（６−（２，４−ジニトロフェニルアミノ）ヘキサノイル−Ｌ−セリンアリルエステル（０．０５０ｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）、Ｏ−（９−フルオレニルメチル）Ｎ−フェニルＮ−クロロメチルカルバメート（０．０４３ｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１６．１ｍＬ、０．１１６ｍｍｏｌ）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２（２ｍＬ）中の溶液を還流で１時間加熱した。さらなるアリコートのＯ−（９−フルオレニルメチル）Ｎ−フェニルＮ−クロロメチルカルバメート（０．０４３ｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１６．１ｍＬ、０．１１６ｍｍｏｌ）を添加し、還流を１時間維持した。溶液を室温に冷却し、ＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗材料（０．１４５ｇ）を、５０％ヘキサン／５０％酢酸エチル、続いて、３０％ヘキサン／７０％酢酸エチルでの溶離が伴うＴｈｏｍｓｏｎＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓＳｉｎｇｌｅＳｔｅｐ１２ｇシリカゲルカートリッジを用いて精製して、中間体アリルエステル（０．０３０ｇ、３３％）を黄色の油として得た。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．３１（２Ｈ，ｍ），１．５２−１．６３（４Ｈ，ｍ），２．１５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），３．４１（２Ｈ，ｍ），３．４３−３．７０（２Ｈ，ｂｒ．ｍ），４．１５（１Ｈ，ｂｒ，ｍ），４．４３−４．５４（５Ｈ，ｂｒ．ｍ），４．８７（２Ｈ，ｂｒ．ｍ），５．１４（１Ｈ，ｍ），５．２５（１Ｈ，ｍ），５．７９（１Ｈ，ｍ），７．１２−７．３８（１２，ｍ），７．８２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），８．２１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．５Ｈｚ），Ｊ＝９．５Ｈｚ），８．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．８４（２Ｈ，ｍ）。

ステップ２．テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．００２ｇ、１．７μｍｏｌ）を、ステップ１からのアリルエステル（０．０３０ｇ、４０μｍｏｌ）およびフェニルシラン（９．８ｍＬ、８０μｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（０．５ｍＬ）中の撹拌溶液に添加した。反応混合物を周囲温度で３０分間撹拌し、次いで、濃縮した。シリカゲルおよびＣＨ_２Ｃｌ_２を添加し、混合物を再度濃縮し、短いシリカゲルカラムに充填した。カラムを３０％ヘキサン／７０％酢酸エチル、続いて、酢酸エチル、および、最後に０．５％酢酸を含有する酢酸エチルで溶離して、カルボン酸（０．０２４ｇ、８６％）を黄色の油として生成した。^１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ１．３１（２Ｈ，ｍ），１．５１−１．６２（４Ｈ，ｍ），２．１４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），３．４０（２Ｈ，ｍ），３．４５−３．８０（２Ｈ，ｂｒ．ｍ），４．１４（１Ｈ，ｂｒ．ｍ），４．４１（３Ｈ，ｂｒ．ｍ），４．８７（２Ｈ，ｂｒ．ｍ），７．１６−７．３０（１２Ｈ，ｍ），７．８２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），８．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），８．２０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ，Ｊ＝９．６Ｈｚ），８．８３（２Ｈ，ｍ）。０．１Ｍヘペス緩衝液中における、１５ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．４０、３７℃でのＮ−（６−（２，４−ジニトロフェニル）アミノヘキサノイル）−セリンのＯ−（Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｎ−フェニル）アミノエチル）−セリンからの放出に係る動態学が図４に示されている。

Ｃ．Ｓ−（Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｎ−フェニルアミノ）メチル）Ｎ−（２，４−ジニトロフェニル）−システイン

Ｎ−（ＤＮＰ）−システインアリルエステル（８２ｍｇ）およびＯ−（９−フルオレニルメチル）Ｎ−フェニルＮ−クロロメチルカルバメート（９１ｍｇ）のジクロロメタン（１ｍＬ）中の溶液をトリエチルアミン（３５μＬ）で１時間処理し、次いで、１：１酢酸エチル／ヘキサンを用いてシリカゲルを通してろ過し、乾燥するまで濃縮した。生成物をシリカゲルクロマトグラフィにより精製した。

アリルエステル、フェニルシラン（７５μＬ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１５ｍｇ）のＴＨＦ（２．５ｍＬ）中の溶液を周囲温度で１０分間撹拌し、次いで、乾燥するまで蒸発させた。残渣をジクロロメタン中に溶解し、シリカゲルの５ｍＬカラムに充填し、これを１：４酢酸エチル／ヘキサン、酢酸エチルおよび０．５％酢酸／酢酸エチルで順次に溶離した。生成物を含有する画分を組み合わせ、蒸発させた。^１Ｈ−ＮＭＲ（ｄ６−ＤＭＳＯ）：ｄ１３．７（１Ｈ，ｂｒｓ），９．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），８．８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ），８．２５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３，９Ｈｚ），７．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７），７．４０−７．２５（ｍ，７Ｈ），７．２５−７．１５（ｍ，３Ｈ），７．１１（ｍ，２Ｈ），４．９６（ｍ，１Ｈ），４．８１（ｓ，２Ｈ），４．３０（ｍ，２Ｈ），４．０８（ｍ，１Ｈ），３．１８（ｍ，２Ｈ）。Ｓ−（Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル−Ｎ−フェニル）アミノエチル）Ｎ−（２，４−ジニトロフェニル）−システインからの、０．１Ｍヘペス緩衝液、１５ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．４０、３７℃におけるＮ−（２，４−ジニトロフェニル）−システインの放出の動態学が図３に示されている。

実施例１２
Ｏ−（（９−（２−（Ｎ−（６−アジドヘキサノイル）Ｎ−メチル）アミノエチル）フルオレニル）メチル）Ｎ−フェニルＮ−クロロメチルカルバメート

フルオレン−２−塩化カルボニル（フルオレン−２−カルボン酸および塩化オキサリルから調製）のＴＨＦ中の溶液を水性メチルアミン（２モル当量）に添加してＮ−メチルフルオレン−２−カルボキサミドを調製する。エーテル中のＬｉＡｌＨ_４を用いるアミドの還元で２−（（メチルアミノ）メチル）フルオレンを得る。アミンをジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボネートとの反応により保護して２−（（Ｎ−^ｔＢＯＣ−Ｎ−メチルアミノ）メチル）フルオレンを得る。

２−（（Ｎ−^ｔＢＯＣ−Ｎ−メチルアミノ）メチル）フルオレンの無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の溶液を−７８℃に冷却し、次いで、リチウムビス（トリメチルシリル）アミドのＴＨＦ中の溶液（１．２モル当量）で処理する。１時間後、ギ酸エチルを添加し、混合物を周囲温度にする。混合物を酢酸エチルで希釈し、０．１ＮＨＣｌ、水、飽和水性ＮａＨＣＯ_３および塩水で順次洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて、２−（（Ｎ−^ｔＢＯＣ−Ｎ−メチルアミノ）メチル）−フルオレン−９−カルボキシアルデヒドを得る。この化合物をメタノール中に溶解し、ＮａＢＨ_４で処理して９−（２−（（Ｎ−^ｔＢＯＣ−Ｎ−メチルアミノ）メチル）フルオレニルメタノールを得る。

９−（２−（（Ｎ−^ｔＢＯＣ−Ｎ−メチルアミノ）メチル）フルオレニルメタノールをＴＨＦ中に溶解し、実施例２の基本手順に従ってトリホスゲンおよびピリジンで処理してクロロホルメートを得る。クロロホルメートを実施例３の方法に従ってアニリンと反応させてＯ−（９−（２−（（Ｎ−^ｔＢＯＣ−Ｎ−メチルアミノ）メチル）フルオレニルメチル）Ｎ−フェニルカルバメートを得る。

カルバメートをトリフルオロ酢酸中に溶解して^ｔＢＯＣ保護基を取り外す。乾燥するまで蒸発させた後、得られるアミンをＴＨＦ中に溶解し、Ｎ−（６−アジドヘキサノイル）スクシンイミドおよびトリエチルアミン（２当量）で処理してＯ−（９−（２−（（Ｎ−（６−アジドヘキサノイル）−Ｎ−メチルアミノ）メチル）フルオレニルメチル）Ｎ−フェニルカルバメートを得る。

Ｏ−（９−（２−（（Ｎ−（６−アジドヘキサノイル）−Ｎ−メチルアミノ）メチル）フルオレニルメチル）Ｎ−フェニルカルバメートと１：１ＴＨＦ／クロロトリメチルシラン中のパラホルムアルデヒドとの反応で生成物Ｎ−クロロメチルカルバメートを得る。

実施例１３
ＳＮ−３８とのリンカー−薬物化合物

この実施例は、特に薬物分子中のフェノール基を介した薬物分子の本発明の化合物とのリンケージを実証する。

実施例１２のＮ−クロロメチルカルバメート（１当量）、ＳＮ−３８（１当量）およびヨウ化ナトリウム（１０当量）の無水アセトン中の溶液をトリエチルアミン（１当量）で処理する。生成物をシリカゲルクロマトグラフィにより精製する。

実施例１４
ＰＥＧへの共役
４０−ｋＤａＰＥＧ−アルキン（２．５μｍｏｌ；４０−ｋＤａＰＥＧ−アミンと５−ヘキシン酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルとの反応により調製）とアジド−リンカー（５０μｍｏｌ；例えば、実施例１２の分子）とのＴＨＦ（３ｍＬ）および水（１．６ｍＬ）中の混合物を、０．１ＭＣｕＳＯ_４（５０μＬ）、ＤＭＳＯ（５０μＬ）中の５０ｍＭトリス［（１−ベンジル−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−イル）メチル］アミン（ＴＢＴＡ）と、０．１Ｍアスコルビン酸ナトリウム（２００μＬ）との新たに調製した混合物で処理する。周囲温度で１２時間後、混合物をロータリーエバポレータで濃縮してＴＨＦを除去し、水で２ｍＬに希釈し、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２５カラムでゲル−ろ過する。次いで、巨大分子を含有する流出物を凍結乾燥し、残渣を２ｍＬのＴＨＦ中に溶解し、５ｍＬのメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルを添加することにより生成物を析出させる。必要な場合には、ゲル−ろ過およびその後のステップを繰り返す。

実施例１５
Ｒ^５アジドアルキル−リンカーの調製の一般的スキーム

例えばＮａＨ、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬｉＨＭＤＳ）またはリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）などの強塩基の存在下での、Ｒ−ＣＨ_２−トリガのアジドアルカノエートエステルＮ_３（ＣＨ_２）_ｎＣＯ_２Ｒ'（ｎ＝３〜６）とのクライゼン縮合ではケトンが得られ、これが、例えば水素化ホウ素ナトリウムなどの温和な還元剤とのメタノール中での反応によりアルコールに還元される。次いで、得られるアルコールをクロロホルメートを介してカルバメートに、次いで、上記のとおりＮ−クロロメチルカルバメート転換する。

実施例１６
Ｒ^５ＢＯＣ−保護アミンリンカーの調製の一般的スキーム

例えばＮａＨ、リチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬｉＨＭＤＳ）またはリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）などの強塩基の存在下での、Ｒ−ＣＨ_２−トリガの（（Ｎ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルＮ−アルキル）アミノ）アルカノエートエステル（ｎ＝３〜６）とのクライゼン縮合ではケトンが得られ、これを、例えば水素化ホウ素ナトリウムなどの温和な還元剤とのメタノール中での反応によりアルコールに還元する。次いで、得られるアルコールを、実施例３に記載のとおりアミンＢ−ＮＨ_２を用いてカルバメートに転換する。カルバメートを、実施例４に記載のとおりＮ−クロロメチルカルバメートに転換する。

アルコール、チオール、フェノールまたはチオフェノール基中の薬物分子とのカップリングの後、ＢＯＣ基をトリフルオロ酢酸での処理によりカルバメートから取り外す。得られるアミンをＥＤＣＩなどの例えばカルボジイミドなどの縮合剤を用いてカルボン酸を含む巨大分子とカップリングする。

実施例１７
Ｒ^５アミド−アジドアルキル−リンカーの調製の代替スキーム

トリフルオロ酢酸での処理により実施例１９の中間体ＢＯＣ−保護カルバメートからＢＯＣ基を除去し、得られるアミンとアジドアルカノエートＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ｎ＝３〜６）との反応でアジドアミドを得る。これを、実施例４に記載されているとおりＮ−クロロメチルカルバメートに転換する。

実施例１８
スルホニル−トリガＲ^５アミンリンカーの調製

エチル（２−フェニルスルホニル）アセテートを過剰量のＮａＨを用いてＴＨＦ中で脱プロトン化し、Ｎ−（６−ブロモヘキシル）エチルカルバメートでアルキル化する。生成物を水素化アルミニウムリチウムを用いてエーテル中で還元してメチルアミノアルコールを得、これをＢＯＣカルバメートとしてＮ−保護する。アルコールをクロロホルメートに転換し、ここから、既述の手法に従ってカルバメート、および、Ｎ−クロロメチルカルバメートに転換する。

実施例１９
スルホニル−トリガＲ^５アミド−アジドリンカーの調製

トリフルオロ酢酸での処理により実施例１８の中間体ＢＯＣ−保護カルバメートからＢＯＣ基を除去し、得られるアミンとアジドアルカノエートＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ｎ＝３〜６）との反応でアジドアミドを得る。これを、実施例４に記載されているとおりＮ−クロロメチルカルバメートに転換する。

実施例２０
スルホニル−活性化Ｒ^５酸リンカーの合成

フェニルメチルスルホンをＮａＨでテトラヒドロフラン中で脱プロトン化し、その際グルタル酸無水物でアシル化してケト酸を得る。得られる酸をｔｅｒｔ−ブチルエステルとして保護し、ケトンをＮａＢＨ_４を用いて還元する。得られるアルコールをクロロホルメートを介してカルバメートに転換し、ここから、上記のとおりＮ−クロロメチルカルバメートに転換する。

実施例２１
スルホニル−活性化酸リンカーを有するリンカー−薬物化合物の調製およびＰＥＧへの共役

実施例２０のリンカーを、１当量のトリエチルアミンの存在下に薬物ＤＨと反応させる。得られる保護されたリンカー−薬物化合物をトリフルオロ酢酸で処理し、得られる遊離カルボン酸を、ＥＤＣＩを用いてアミノ−ポリエチレングリコールに共役化する。メチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）の添加によりアセトニトリルから共役体を析出させ、次いで、サイズ排除クロマトグラフィにより精製する。

実施例２２
結合ペプチドの合成
この実施例は、ペプチド合成は本発明の化合物を用いて容易に達成されることを実証する。ペプチド合成を、これらの残基の側鎖が他の残基の脱保護を伴わずに選択的に脱ブロック化され得るよう好適な保護形態で、セリン、チロシンまたはシステインを用いる固体相ペプチド合成のための標準的な方法を用いて実施する。部分的に脱保護されたペプチドを過剰量の式（ＩＩ）の化合物と温和な塩基の存在下で反応させる。樹脂を洗浄した後、生成物ペプチドを脱ブロック化し、樹脂から切断して、Ｄがペプチドである式（ＩＩＩ）の化合物を得る。

一例として、ＣＣＫ８（Ａｓｐ−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−ＮＨ_２）を、例えば、米国特許第４，７６９，４４５号明細書（本明細書において参照により援用されている）に記載されている当該技術分野において公知である方法を用いて、Ｒｉｎｋ樹脂を用いて固体担体上に合成する。市販されているＦｍｏｃ−Ｐｈｅ−Ｒｉｎｋアミド−ＭＢＨＡ樹脂を予めＤＭＦ中に３０分間膨潤させ、次いで、ピペリジン／ＤＭＦ（体積基準で１：４、５０ｍｌ）中に室温で３０分間懸濁および振盪させて、Ｆｍｏｃ基を除去する。生成物をろ過により単離し、ＤＣＭ、ＤＣＭ中の５％Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）、および、ＤＣＭで洗浄（各々３×５０ｍｌ）して、Ｐｈｅ−Ｒｉｎｋアミド−ＭＢＨＡ−樹脂の遊離塩基を得る。Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^ｔＢｕ）−ＯＨ（１．２３ｇ、３ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（０．６２ｇ、３ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（０．６９ｇ、４．５ｍｍｏｌ）を、０°で１時間攪拌しながら５０ｍｌの体積基準で４：１のＤＣＭ／ＤＭＦ中に溶解する。Ｐｈｅ−Ｒｉｎｋアミド−ＭＢＨＡ樹脂（１ｍｅｑ）をろ過した反応混合物（析出したＤＣＵは除去する）中に懸濁させ、室温で２〜１５時間振盪する。Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ−（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｒｉｎｋアミド−ＭＢＨＡ樹脂生成物をろ過により回収し、ＤＣＭで洗浄する。Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ−（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｒｉｎｋアミド−ＭＢＨＡ樹脂を、ピペリジン／ＤＭＦ（体積基準で１：４、５０ｍｌ）中に室温で３分間懸濁および振盪させ、次いで、２回目として７分間振盪させてＦｍｏｃ基を除去する。生成物をろ過により単離し、ＤＭＦおよびＤＣＭで洗浄（各々３×５０ｍｌ）してＡｓｐ−（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｒｉｎｋアミド−ＭＢＨＡ樹脂の遊離塩基を得る。Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ（１．１２ｇ、３ｍｍｏｌ）、ＤＣＣ（０．６２ｇ、３ｍｍｏｌ）およびＨＯＢｔ（０．６９ｇ、４．５ｍｍｏｌ）を、０°で１時間攪拌しながら５０ｍｌの体積基準で４：１のＤＣＭ／ＤＭＦ中に溶解する。Ａｓｐ−（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｒｉｎｋアミド−ＭＢＨＡ樹脂（１ｍｅｑ）をろ過した反応混合物（析出したＤＣＵは除去する）中に懸濁させ、室温で２〜１５時間振盪する。Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｒｉｎｋアミド−ＭＢＨＡ樹脂生成物をろ過により回収し、ＤＣＭおよびＤＭＦで洗浄する。Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｒｉｎｋアミド−ＭＢＨＡ樹脂を脱保護し、Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＨ（１．２８ｇ、３ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＨ（０．８９ｇ、３ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｔ−ＯＨ（１．１２ｇ、３ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ−ＯＨ（１．３７ｇ、３ｍｍｏｌ）およびＢｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^ｔＢｕ）−ＯＨ（１．２３ｇ、３ｍｍｏｌ）で順次にカップリングさせて、Ｂｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｒｉｎｋアミド−ＭＢＨＡ樹脂を得る。Ｂｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｔｙｒ−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｒｉｎｋアミド−ＭＢＨＡ樹脂をＤＣＭで洗浄（３×５０ｍｌ）し、Ｏ−（９−フルオレニルメチル）Ｎ−フェニルＮ−クロロメチルカルバメート（１０当量）とトリエチルアミン（１当量）とのＤＣＭ中の混合物中に懸濁および振盪させる。樹脂をろ過により単離し、ＤＣＭで洗浄する（各々３×５０ｍｌ）。得られるＢｏｃ−Ａｓｐ（Ｏ^ｔＢｕ）−Ｔｙｒ（ＯＸ）−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｒｉｎｋアミド−ＭＢＨＡ樹脂を樹脂から切断し、８％フェノール、５％チオアニソール、５％水および３％３，６−ジオキサ−１，８−オクタンジチオールの混合物と一緒にトリフルオロ酢酸（１０ｍＬ／ｇ樹脂）中で４時間振盪することにより脱ブロック化する。樹脂をろ過により除去し、ペプチドを１０体積のエーテルを添加することにより析出させる。粗ペプチドを逆相ＨＰＬＣにより精製する。

他の例において、システイン含有ペプチドを、Ｓ−（アリルオキシカルボニルアミノメチル）−システイン［Ｃｙｓ（ａｌｌｏｃａｍ）］またはＳ−（Ｎ−［２，３，５，６−テトラフルオロ−４−（Ｎ'−ピペリジノ）フェニル］−Ｎ−アリルオキシカルボニル−アミノ）システイン［Ｃｙｓ（ｆｎａｍ）］残基を組み込む上記の方法を用いる固体相合成によって調製する。樹脂からの切断に先行して、システイン残基を、（Ｐｈ_３Ｐ）_４Ｐｄおよびフェニルシランを用いてＤＣＭ中で選択的に脱ブロック化し、次いで、上記のとおり式（ＩＩ）の化合物を反応させる。ペプチドを最終的に脱ブロック化し、樹脂から取り出し、上記のとおり精製する。

実施例２３
５−フルオロウラシルのリンカー−薬物化合物
Ｄが複素環式Ｎを介してカップリングさせた薬物の残基である本発明の化合物の一調製例として、式（ＩＩＩ）のリンカー−薬物化合物を、５−フルオロウラシルおよび式（ＩＩ）の化合物から、ＴａｙｌｏｒａｎｄＳｌｏａｎｅ，「１−ＡｌｋｙｌｃａｒｂｏｎｙｌｏｘｙｍｅｔｈｙｌＰｒｏｄｒｕｇｓｏｆ５−Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ（５−ＦＵ）：Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ＰｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ａｎｄＴｏｐｉｃａｌＤｅｌｉｖｅｒｙｏｆ５−ＦＵ」，Ｊ．ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉ．（１９９８）８７：１５−２０、および、ＲｏｂｅｒｔｓａｎｄＳｌｏａｎｅ、「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆ３−Ａｌｋｙｌｃａｒｂｏｎｙｌ−ｏｘｙｍｅｔｈｙｌＤｅｒｉｖａｔｉｖｅｓｏｆ５−Ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ」，Ｊ．ＨｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃＣｈｅｍ．３９：９０５−９１０（各本明細書において参照により援用されている）により用いられたものと同様の手法で調製し得る。それ故、ＬがＣｌである式（ＩＩ）の化合物（１ｍｍｏｌ）とＮａＩ（１．３ｍｍｏｌ）との乾燥アセトニトリル（１ｍＬ）中の懸濁液を暗中で２４時間撹拌し、次いで、ろ過してＬがＩである式（ＩＩ）の化合物の溶液を得る。濾液を、１−（アリルオキシカルボニル−オキシメチル）−５−フルオロウラシル［Ｌｉｕ，Ｆｕｌｌｗｏｏｄ，ａｎｄＲｉｍｍｅｒ，「ＳｙｎｔｈｅｓｉｓｏｆＡｌｌｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌｍｅｔｈｙｌ−５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌａｎｄｃｏｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎｓｗｉｔｈＮ−ｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｉｎｏｎｅ」，Ｊ．ＭａｔｅｒｉａｌｓＣｈｅｍ．（２０００）１０：１７７１−１７７７］（０．８ｍｍｏｌ）と１，８−ビス（ジメチルアミノ）ナフタレンとの混合物と周囲温度で反応させる。６時間後、混合物をエーテルで希釈し、１時間撹拌し、ろ過する。濾液を濃縮して粗保護生成物を得、これを、テトラキス（トリフェニルホスフィン）−パラジウム（０）とフェニルシランとの混合物で無水ＴＨＦ中で１時間処理してアリルオキシカルボニルメチル保護基を取り外す。混合物を蒸発させ、残渣をシリカゲルクロマトグラフィにより精製して、式（ＩＩＩ）のリンカー−薬物化合物を得る。

実施例２４
６−アジドヘキサナルの調製

（１）６−アジド−１−ヘキサノール：６−クロロ−１−ヘキサノール（２５ｇ、１８３ｍｍｏｌ）とアジ化ナトリウム（３２．５ｇ、５００ｍｍｏｌ）との２００ｍＬの水中の混合物を還流で２０時間加熱し、次いで、周囲温度に冷却し、酢酸エチルで３回抽出した。組み合わせた抽出物を塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、濃縮して生成物を薄い黄色の油として得た（２８．３ｇ）。

（２）６−アジドヘキサナル：固体トリクロロイソシアヌル酸（ＴＣＣＡ；４．３ｇ）を、６−アジド−１−ヘキサノール（７．１５ｇ）と重炭酸ナトリウム（５．０ｇ）とのジクロロメタン（１００ｍＬ）および水（１０ｍＬ）中の激しく撹拌した混合物に、少分量で添加した。添加の後、混合物をさらに３０分間撹拌し、次いで、珪藻土のパッドを通してろ過した。有機相を分離し、飽和水性ＮａＨＣＯ_３および塩水で順次洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、濃縮して生成物（５．８ｇ）を得、これをさらに精製せずに用いた。

実施例２５
アジドアルコールの調製

ｎ−ブチルリチウム（３．１ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ）のヘキサン中の１．６Ｍ溶液を、−７８℃に冷却したＲ−ＣＨ_３（５．０ｍｍｏｌ）の無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（１５ｍＬ）中の撹拌溶液に滴下した。添加の後、冷却浴を外し、混合物をゆっくりとおよそ３０分間かけて０℃にした。次いで、混合物を−７８℃に冷却し戻し、６−アジドヘキサナル（５．５ｍｍｏｌ）を添加した。１５分間攪拌した後、冷却浴を外し、混合物の温度が上昇するのを許した。混合物が清透になった時点で、５ｍＬの飽和水性ＮＨ_４Ｃｌを添加し、混合物の温度が引き続き周囲温度まで上昇するのを許した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水および塩水で順次洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて粗生成物を油として得た。ヘキサン中の酢酸エチル勾配を用いるシリカゲルでのクロマトグラフィで精製した生成物を得た。

この方法に従って調製した化合物は以下を含む：
１−（４−（トリフルオロメチル）フェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプタノール（Ｒ−ＣＨ_３＝４−（トリフルオロメチル）フェニルメチルスルホン）；
１−（４−クロロフェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプタノール（Ｒ−ＣＨ_３＝４−クロロフェニルメチルスルホン）；
１−（フェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプタノール（Ｒ−ＣＨ_３＝フェニルメチルスルホン）；
１−（４−メチルフェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプタノール（Ｒ−ＣＨ_３＝４−メチルフェニルメチルスルホン）；
１−（４−メトキシフェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプタノール（Ｒ−ＣＨ_３＝４−メトキシフェニルメチルスルホン）；
１−（２，４，６−トリメチルフェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプタノール（Ｒ−ＣＨ_３＝２，４，６−トリメチルフェニルメチルスルホン）；
１−（モルホリノスルホニル）−７−アジド−２−ヘプタノール（Ｒ−ＣＨ_３＝４−（メチルスルホニル）−モルホリン；
１−（メタンスルホニル）−７−アジド−２−ヘプタノール（Ｒ−ＣＨ_３＝ジメチルスルホン）；
１−シアノ−７−アジド−２−ヘプタノール（Ｒ−ＣＨ_３＝アセトニトリル）；
１−（モルホリノカルボニル）−７−アジド−２−ヘプタノール（Ｒ−ＣＨ_３＝４−アセチルモホリン）；および
１−（９−フルオレニル）−７−アジド−２−ヘプタノール（"Ｒ−ＣＨ_３"＝フルオレン）。

実施例２６
アジド−リンカークロロホルメートの調製

ピリジン（１６０μＬ）を、実施例２５のアジドアルコール（１．０ｍｍｏｌ）とトリホスゲン（５００ｍｇ）との１５ｍＬの無水ＴＨＦ中の撹拌溶液に滴下した。得られた懸濁液を１０分間撹拌し、次いで、ろ過し、濃縮して粗クロロホルメートを油として得た。

この方法に従って調製した化合物は以下を含む：
１−（４−（トリフルオロメチル）フェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチルクロロホルメート；
１−（４−クロロフェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチルクロロホルメート；
１−（フェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチルクロロホルメート；
１−（４−メチルフェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチルクロロホルメート；
１−（４−メトキシフェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチルクロロホルメート；
１−（２，４，６−トリメチルフェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチルクロロホルメート；
１−（モルホリノスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチルクロロホルメート；
１−（メタンスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチルクロロホルメート；
１−シアノ−７−アジド−２−ヘプチルクロロホルメート；
１−（モルホリノカルボニル）−７−アジド−２−ヘプチルクロロホルメート；および
１−（９−フルオレニル）−７−アジド−２−ヘプチルクロロホルメート。

トリガ官能基を有さないモデル系への経路の途中で、６−アジドヘキシルクロロホルメートを、６−アジドヘキサノールから開始して上記のとおり調製した。

実施例２７
アジド−リンカー−ＨＳＥカーボネートの調製

実施例２６のクロロホルメートの１５ｍＬの乾燥ＴＨＦ中の溶液を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（３５０ｍｇ）およびピリジン（２５０μＬ）で１０分間かけて順次に処理した。次いで、混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチル中に再度溶解させた。０．１ＮＨＣｌ、水、飽和ＮａＨＣＯ_３、水および塩水で洗浄した後、溶液をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。いくつかの場合において、ＨＳＥカーボネートは自然と結晶化し、これを酢酸エチル／ヘキサンから再結晶化させた。他の場合においては、粗ＨＳＥカーボネートを先ずヘキサン中の酢酸エチルの勾配を用いるシリカゲルでのクロマトグラフィにかけ、続いて、結晶化した。すべての化合物は、１−（メタンスルホニル）−７−アジド−２−ヘプタノールから得たものを除き結晶性であった。

この方法に従って調製した化合物は以下を含む：
Ｏ−［１−（４−（トリフルオロメチル）フェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｏ'−スクシンイミジルカーボネート；
Ｏ−［１−（４−クロロフェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｏ'−スクシンイミジルカーボネート；
Ｏ−［１−（フェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｏ'−スクシンイミジルカーボネート；
Ｏ−［１−（４−メチルフェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｏ'−スクシンイミジルカーボネート；
Ｏ−［１−（４−メトキシフェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｏ'−スクシンイミジルカーボネート；
Ｏ−［１−（２，４，６−トリメチルフェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｏ'−スクシンイミジルカーボネート；
Ｏ−［１−（モルホリノスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｏ'−スクシンイミジルカーボネート；
Ｏ−［１−（メタンスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｏ'−スクシンイミジルカーボネート；
Ｏ−［１−シアノ−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｏ'−スクシンイミジルカーボネート；
Ｏ−［１−（モルホリノカルボニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｏ'−スクシンイミジルカーボネート；
Ｏ−［１−（９−フルオレニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｏ'−スクシンイミジルカーボネート。

この方法に従って、６−アジドヘキシルクロロホルメートから開始して、Ｏ−［６−アジドヘキシル］−Ｏ'−スクシンイミジルカーボネートもまた調製した。

実施例２８
４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルカルボキサミド）アニリンの調製

（１）Ｎ，Ｎ−ジエチル４−ニトロベンズアミド：ジエチルアミン（５．６ｍＬ）を、４−ニトロベンゾイルクロリド（５．０ｇ）の１００ｍＬのＤＣＭ中の氷冷溶液に添加した。１時間後、混合物を水、飽和水性ＮａＨＣＯ_３および塩水で順次に洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて、静置させると結晶化する無色の液体を得た。酢酸エチル／ヘキサンからの再結晶で生成物を薄い黄色の結晶として得た（４．６ｇ）。

（２）４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルカルボキサミド）アニリン：Ｎ，Ｎ−ジエチル４−ニトロベンズアミド（４．４４ｇ）と１０％パラジウム炭素（０．２ｇ）との１００ｍＬのメタノール中の混合物を、ギ酸アンモニウム（４．０ｇ）で周囲温度で２時間処理した。混合物を珪藻土を通してろ過し、濃縮した。残渣をＤＣＭ中に再度溶解し、０．５ＭＮａ_２ＣＯ_３、水および塩水で順次洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて結晶性材料を得た。酢酸エチル／ヘキサンからの再結晶で生成物アニリンを得た。

同一の手法に従って、ジエチルアミンをモルホリンで置換することにより、４−（モルホリノカルボニル）アニリンも調製した。

実施例２９
アジドカルバメートの調製

実施例２６の手法に従って２．５ｍｍｏｌのアジドアルコールから調製した粗クロロホルメートを２０ｍＬのＴＨＦ中に溶解させ、アニリン（２．５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（０．７ｍＬ、５．０ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後、混合物を酢酸エチルで希釈し、１ＮＨＣｌ、水、飽和ＮａＨＣＯ_３および塩水で順次洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。残渣を、酢酸エチル／ヘキサンを用いるシリカゲルでのクロマトグラフィにかけて生成物カルバメートを得た。

この方法に従って調製した化合物は以下を含む：
Ｏ−［１−（フェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｎ−［４−（ジエチルカルボキサミド）フェニルカルバメート；
Ｏ−［１−（モルホリノスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｎ−［４−（ジエチルカルボキサミド）フェニルカルバメート；
Ｏ−［１−（メタンスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｎ−［４−（ジエチルカルボキサミド）フェニルカルバメート；
Ｏ−［１−（フェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｎ−［４−（モルホリノカルボキサミド）フェニルカルバメート；および
Ｏ−［１−（フェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｎ−［４−（モルホリノスルホニル）フェニルカルバメート。

実施例３０
Ｎ−クロロメチルカルバメートの調製

実施例２９のアジドカルバメート（１．０ｍｍｏｌ）、パラホルムアルデヒド（４５ｍｇ）、クロロトリメチルシラン（１ｍＬ）およびＴＨＦ（１ｍＬ）の密閉した２０ｍＬバイアル中の混合物を５５℃の浴中で１７時間かけて加熱した。周囲温度に冷却した後、バイアルを開封し、混合物をロータリーエバポレータで粘性の油に濃縮し、これを酢酸エチル中に採り、再度濃縮した。残渣を２：１酢酸エチル／ヘキサン中に溶解し、ろ過し、濃縮してＮ−クロロメチルカルバメートを得、これをさらに精製せずに用いた。

この方法に従って調製した化合物は以下：
Ｏ−［１−（フェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｎ−［４−（ジエチルカルボキサミド）フェニル］−Ｎ−クロロメチルカルバメート；
Ｏ−［１−（モルホリノスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｎ−［４−（ジエチルカルボキサミド）フェニル］−Ｎ−クロロメチルカルバメート；
Ｏ−［１−（メタンスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｎ−［４−（ジエチルカルボキサミド）フェニル］−Ｎ−クロロメチルカルバメート；および
Ｏ−［１−（モルホリノカルボニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｎ−［４−（ジエチルカルボキサミド）フェニル］−Ｎ−クロロメチルカルバメートを含み、
Ｏ−［６−アジドヘキシル］−Ｎ−［４−（ジエチルカルボキサミド）フェニル］−Ｎ−クロロメチルカルバメートもまた、トリガ基を有さない対照化合物への経路の途中で調製した。

実施例３１
Ｎ−アルコキシメチルカルバメートの調製

実施例３０のＮ−クロロメチルカルバメート（０．４ｍｍｏｌ）を５ｍＬの乾燥アルコール中に溶解する。１時間後、混合物を乾燥するまで蒸発させ、残渣をシリカゲル（酢酸エチル／ヘキサン）でクロマトグラフィにかけて生成物を得る。

この方法に従って調製した化合物は以下を含む：
Ｏ−［１−（フェニルスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｎ−［４−（ジエチルカルボキサミド）フェニル］−Ｎ−メトキシメチルカルバメート；
Ｏ−［１−（モルホリノスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｎ−［４−（ジエチルカルボキサミド）フェニル］−Ｎ−メトキシメチルカルバメート；および
Ｏ−［１−（メタンスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｎ−［４−（ジエチルカルボキサミド）フェニル］−Ｎ−メトキシメチルカルバメート。
Ｏ−［６−アジドヘキシル］−Ｎ−［４−（ジエチルカルボキサミド）フェニル］−Ｎ−メトキシメチルカルバメートもまた、トリガ基を有さない対照化合物への経路の途中で調製した。

実施例３２
アジド−リンカー−ＳＮ３８の調製

手法１（塩基＝ＤＢＵ）。ＳＮ−３８（７−エチル−１０−ヒドロキシ−カンプトテシン）（４０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の５ｍＬのＴＨＦ中の懸濁液を、１６．５μＬの１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）で処理した。清透な金色の溶液が３０分後に形成された。実施例３０のＮ−クロロメチルカルバメート（０．１１ｍｍｏｌ）の１ｍＬのＴＨＦ中の溶液を添加したところ、粘性の析出物の形成が見られた。３０分後、ＨＰＬＣ分析は、ＳＮ−３８のアジド−リンカー−ＳＮ３８付加物への約４０％の転換を示した。追加のＤＢＵ（２０μＬ）およびＮ−クロロメチルカルバメート（０．０４ｍｍｏｌ）を添加した。１５分後、混合物を１０％水性クエン酸の添加により失活させ、ジクロロメタン（ＤＣＭ）で抽出した。抽出物を、１０％クエン酸、水および塩水で順次に洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させた。残渣をＤＣＭ中に溶解し、ろ過し、蒸発させて生成物を得た。

手法２（塩基＝ＬｉＨＭＤＳ）。５ｍＬの４：１ＴＨＦ／ＤＭＦ中のＳＮ−３８（４２ｍｇ）の懸濁液を−７８℃浴中で冷却し、リチウムビス（トリメチルシリルアミド）のＴＨＦ（１５０μＬ）中の１．０Ｍ溶液で滴下処理した。混合物は塩基の添加で濃い緑色に変色し、続いて濃い金色が形成された。添加が完了した後、混合物を周囲温度にし、実施例３０のＮ−クロロメチルカルバメート（０．２μｍｏｌ）の１ｍＬのＴＨＦ中の溶液を添加した。１０分後、反応を１０％水性クエン酸の添加により失活させ、ジクロロメタン（ＤＣＭ）で抽出した。抽出物を１０％クエン酸、水および塩水で順次に洗浄し、次いで、ＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、蒸発させて黄色の油状の材料を得た。水で倍散して過剰量のＤＭＦを除去して、粗生成物を黄色の固体として得た。残渣をＤＣＭ中に溶解し、ヘキサン中のアセトンの勾配を用いるシリカゲルでクロマトグラフィにかけて精製された生成物を得た。

この手法に従って調製した生成物は以下を含む：
Ｒ＝フェニルスルホニル、Ｒ'＝４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルカルボキサミド）；
Ｒ＝モルホリノスルホニル、Ｒ'＝４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルカルボキサミド）；および
Ｒ＝メタンスルホニル、Ｒ'＝４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルカルボキサミド）。

実施例３３
４−ａｒｍＰＥＧ−［ＤＢＣＯ］_４の調製

ペンタエリスリトール核を有するアミノプロピル末端基を有する４０−ｋＤａ４−ａｒｍポリエチレングリコール（ＮＯＦＡｍｅｒｉｃａ，ＰＴＥ４００ＰＡ）（５００ｍｇ、１２．５μｍｏｌ）、トリエチルアミン（２０μＬ）および６−アザ−５，９−ジオキソ−９−（１，２−ジデヒドロジベンゾ［ｂ，ｆ］アゾシン−５（６Ｈ）−イル）ノナン酸スクシンイミジルエステル（「ＤＢＣＯ−ＮＨＳ」、ＣｌｉｃｋＣｈｅｍｉｓｔｒｙＴｏｏｌｓ，Ｍａｃｏｎ，ＧＡ）（３６ｍｇ、７５μｍｏｌ）の５ｍＬのＴＨＦ中の溶液を周囲温度で２４時間撹拌した。生成物を反応混合物の５０ｍＬのメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）への添加により析出させた。析出物を減圧ろ過により回収し、減圧下で乾燥させて５１０ｍｇの生成物を得た。

実施例３４
放出性４−ａｒｍＰＥＧ−ＳＮ３８共役体の調製

４−ａｒｍＰＥＧ−［ＤＢＣＯ］_４（１００ｍｇ、２．０μｍｏｌＤＢＣＯ）および実施例３２のアジド−リンカー−ＳＮ３８（１０μｍｏｌ）の１．５ｍＬのＴＨＦ中の溶液を周囲温度で２１時間維持した。混合物を濃縮し、次いで、メタノール中に再度溶解し、メタノールに対して透析（１０ｋＤａカットオフメンブラン）して遊離アジドを除去した。ロータリーエバポレータでの濃縮の後、生成物を２ｍＬのＴＨＦ中で溶解し、１０ｍＬのＭＴＢＥの添加により析出させた。析出物を減圧ろ過により回収し、減圧下で乾燥させて生成物共役体を得た。水中の２０〜１００％アセトニトリル勾配＋０．１％ＴＦＡを用いるＨＰＬＣ分析（３００ＡＣ４Ｊｕｐｉｔｅｒカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）、４０℃で調温した）は、非共役化ＳＮ−３８または遊離アジドは存在していなかったことを実証した。次いで、ＳＮ−３８含有量を、３６１ｎｍでε＝２２，５００Ｍ^−１ｃｍ^−１を用いて水溶液のＵＶ吸光度を計測することにより測定した。

この方法に従って調製した放出性共役体は：各々Ｒ'＝４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルカルボキサミド）を有する、Ｒ＝フェニルスルホニル；Ｒ＝メタンスルホニル；および、Ｒ＝モルホリノスルホニルを含む。対照として、トリガ基を有さない共役体を同一の手法に従って調製した。

実施例３５
ＳＮ−３８のＰＥＧ−ＳＮ３８共役体からの放出
Ｒ'＝４−Ｎ，Ｎ−ジエチルカルボキサミドおよびＲ＝フェニルスルホニルまたはメタンスルホニルである実施例３４の４−ａｒｍＳＮ−３８共役体のサンプルを緩衝液中に溶解し、３７℃で維持した。２０μＬのアリコートを定期的にＨＰＬＣ（３００ＡＣ４Ｊｕｐｉｔｅｒカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ）、４０℃で調温した）に注入し、水中の２０〜１００％アセトニトリル勾配＋０．１％ＴＦＡを用い、蛍光検出（励起３８０ｎｍ；放射５１５ｎｍ）を用いて分析した。これらの条件下では、遊離ＳＮ−３８は５分間で溶離され、共役体は７分間で溶離された。ピーク面積を計測し、これを用いて指数関数的適合により反応速度を算出した。

Ｒ'＝４−Ｎ，Ｎ−ジエチルカルボキサミドおよびＲ＝フェニルスルホニルである０．１Ｍビシン中の共役体は、ｐＨ８．５、３７℃で、ＳＮ−３８をＴ_１／２＝１．６時間で放出し、Ｒ'＝４−Ｎ，Ｎ−ジエチルカルボキサミドおよびＲ＝メタンスルホニルである共役体は、ＳＮ−３８を同一条件下で、Ｔ_１／２＝９時間で放出した。

実施例３６
マウスにおける４−ａｒｍＰＥＧ−ＳＮ３８共役体の薬物動態学
３６１ｎｍ（ε＝２２，５００Ｍ^−１ｃｍ^−１）でのＵＶ吸光度による測定で１ｍＭの最終ＳＮ−３８濃度をもたらすよう、実施例３４の４−ａｒｍＰＥＧ−ＳＮ３８共役体を１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０に溶解させることにより投薬溶液を調製した。投薬溶液を０．２μｍシリンジフィルタを用いて無菌ろ過し、凍結させた。

サンプルを、２μＬ／ｇ体重で化合物当たり４匹のＣＤ−１マウスに静脈内注入した。血液サンプルを以下の計画を用いて眼窩静脈叢から採集した：マウス１：１、１６および７２時間；マウス２：２および２４時間；マウス３：４および３２時間；マウス４：８および４８時間。サンプルを直ぐに、分析まで、−８０℃で凍結させた。Ｎ_ε−（２，４−ジニトロフェニル）−Ｌ−リシンの０．２５ｍｇ／ｍＬ溶液の体積の三分の一を、０．０６２５ｍｇ／ｍＬの最終濃度に対する内標準として血清サンプルの各々に加えた。ｐＨ１０．７５の２００ｍＭトリエチルアミン・ＨＣｌ緩衝液の体積の半分を血清サンプルの各々に加え、３７℃で１６時間置いた。加水分解に続いて、血清タンパク質を三回分のメタノールで析出した。検量線を、マウス血清中で希釈し、同一の手法を用いて加水分解したＲ＝ＣＨ_３ＳＯ_２およびＲ'＝４−（Ｎ，Ｎ−ジエチルカルボキサミド）の共役体のストック溶液から準備した。サンプルおよび標準を、Ｈ_２Ｏ中のアセトニトリルの２０〜１００％勾配と０．１％トリフルオロ酢酸とを用いるＳｈｉｍａｄｚｕＨＰＬＣＪｕｐｉｔｅｒＣ４３００Å ５μカラムで総遊離ＳＮ３８について分析した。ＳＮ３８を、３８０ｎｍ／５１５ｎｍの励起／放射で設定した蛍光検出器で検出した。蛍光ピーク面積を用いて検量線からＳＮ３８濃度を算出した。ＰＫＳｏｌｕｔｉｏｎｓ薬物動態学ソフトウェアを用いてデータからの薬物動態学的パラメータを算出した。結果が図８に示されている。

実施例３７
Ｎ−クロロメチルカルバメートでのペプチドチオールへの結合

実施例３０のＮ−クロロメチルカルバメート（０．１μｍｏｌ）をチオール含有ペプチド（０．１μｍｏｌ）の１．０ｍＬのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）中の溶液に添加する。２時間後、５ｍＬのエチルエーテルの添加により生成物を析出させ、遠心分離により回収する。析出物をエーテルで３回洗浄し、乾燥させる。これをアセテート緩衝液、ｐＨ５に溶解し、１−ｇＢｏｎｄＥｌｕｔＣ１８カートリッジに充填する。カートリッジを０．１％ＴＦＡを含有する水中のメタノールの段階的な勾配で洗浄して精製した生成物を溶離させる。

実施例３８
Ｎ−アルコキシメチルカルバメートでのペプチドチオールへの結合

実施例３１のＮ−アルコキシメチルカルバメート（０．１μｍｏｌ）をチオール含有ペプチド（０．１μｍｏｌ）の１．０ｍＬのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）中の溶液に添加する。２時間後、５ｍＬのエチルエーテルの添加により生成物を析出させ、遠心分離により回収する。析出物をエーテルで３回洗浄し、乾燥させる。これをアセテート緩衝液、ｐＨ５に溶解し、１−ｇＢｏｎｄＥｌｕｔＣ１８カートリッジに充填する。カートリッジを０．１％ＴＦＡを含有する水中のメタノールの段階的な勾配で洗浄して精製した生成物を溶離させる。

実施例３９
アジド−リンカーグルタチオンの調製

Ｏ−［１−（メタンスルホニル）−７−アジド−２−ヘプチル］−Ｎ−［４−（ジエチルカルボキサミド）フェニル］−Ｎ−メトキシメチルカルバメート（５０ｍｇ）を、還元グルタチオン（５０ｍｇ）の１．０ｍＬのトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）中の溶液に添加した。２時間後、生成物を５ｍＬのエチルエーテルの添加により析出させ、回収し、乾燥させた。析出物を５ｍＬの１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５に溶解し、１−ｇＢｏｎｄＥｌｕｔＣ１８カートリッジに充填した。カートリッジを１０ｍＬの水／０．１％ＴＦＡで洗浄して過剰量のグルタチオンを除去し、続いて、１０ｍＬの１：１メタノール／水／０．１％ＴＦＡで洗浄して生成物を溶離した。生成物含有溶出液をロータリーエバポレータで乾燥するまで蒸発させた。

実施例４０
チオール−結合ペプチドの共役

実施例３７または３８のチオール−結合ペプチドアジド（１．５当量）およびＤＢＣＯ−活性化ポリエチレングリコール（ＰＥＧ−ＤＢＣＯ）（１当量）の水性緩衝液中の溶液をＵＶ分光法により監視する。トリアゾールの形成に際して、３０１ｎｍでのＤＢＣＯの特徴的な吸光度が失われる。次いで、反応混合物を１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０に対して透析（１０ｋＤａカットオフメンブラン）して過剰量のアジドを除去する。

実施例４１
ＰＥＧ−共役化グルタチオン

４０−ｋＤａ直鎖ｍＰＥＧ−ＤＢＣＯ（１００ｍｇ、２．５μｍｏｌ）の２．５ｍＬの１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５．０中の溶液をＳ−［Ｎ−（４−ジエチル−カルボキサミド）フェニルＮ−（６−アジド−１−（フェニルスルホニル）メチル）ヘキシルオキシ−カルボニル）アミノエチル］グルタチオン（メタノール中に６５ｍｇ／ｍＬ；６０μＬ）の溶液と混合し、これを周囲温度で１６時間保持し、次いで、水中で平衡化させたＰＤ−１０カラム（ＧＥＨｅａｌｔｈＳｃｉｅｎｃｅｓ）を通した。巨大分子を含有するカラムからの流出物を回収し、蒸発させた。

実施例４２
ラットにおける４−ａｒｍＰＥＧ−ＳＮ３８共役体の薬物動態学（実験２）
３６１ｎｍ（ε＝２２，５００Ｍ^−１ｃｍ^−１）でのＵＶ吸光度による測定で１ｍＭの最終ＳＮ−３８濃度をもたらすよう、実施例４２の４−ａｒｍＰＥＧ−ＳＮ３８共役体を１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０に溶解させることにより投薬溶液を調製した。投薬溶液を０．２μｍシリンジフィルタを用いて無菌ろ過し、凍結させた。

サンプルを、カニューレ処置したオスのスプラーグドーリーラットに１００μＬ／１００ｇ体重で静脈注射により投与した。化合物当たり１匹のラットを全時間経過について用いた。血液サンプルを０、１、２、４、８、１２、２４、４８、７２および１２０時間で回収した。血清を分離し、凍結させた。ラット血清サンプルを氷上で解凍した。Ｎ_ε−（２，４−ジニトロフェニル）−Ｌ−リシンの０．２５ｍｇ／ｍＬ溶液の６０μＬアリコートを１８０μＬの解凍した血清サンプルの各々に添加した。２．５μＬの２Ｍ酢酸をこれらのサンプルの１００μＬアリコートに添加し、続いて、３００μＬのメタノールを析出した血清タンパク質に添加した。サンプルを氷上に１時間放置し、１４，０００ｒｐｍで遠心分離した。各サンプルの別個の１００μＬアリコートに、５０μＬの２００ｍＭＥｔ_３Ｎを添加し、アリコートを３７℃のインキュベータに一晩（約１６時間）入れて、ＰＥＧからＳＮ３８を加水分解した。検量線を、４０μＭにラット血清（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）中に希釈し、上記と同一の手法に従って処置したＲ＝フェニルスルホニルである共役体のストック溶液から準備した。サンプルおよび標準を、Ｈ_２Ｏ中にアセトニトリルの０〜１００％勾配と０．１％ＴＦＡとを用いるＪｕｐｉｔｅｒＣ４４００Ａ５ｕカラムでのＳｈｉｍａｄｚｕＨＰＬＣで、１０分間にわたって、ＳＮ３８共役体および総遊離ＳＮ３８について分析した。ＳＮ３８を、３８０ｎｍ／５１５ｎｍの励起／放射で設定した蛍光検出器で検出した。サンプル濃度を、Ｅｘｃｅｌ（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）を用いる検量線への適合によって判定した。ＰＫパラメータをＰＫｓｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェア（ＳｕｍｍｉｔＰＫ）を用いて算出した。実験の結果が図９に示されている。

実施例４３
放出の動態学
本発明の共役体からの薬物の放出速度は、ＨＰＬＣなどのクロマトグラフィ法を含む当該技術分野において公知である方法によって容易に判定することが可能である。例えば、蛍光マーカーが薬物に対するモデル系として用いられる場合、遊離された蛍光化合物に起因する蛍光は、共役体により放射される蛍光と比して容易に判定される。

本発明の共役体からの薬物のインビボ放出は、共役体の薬物動態学を同一サイズの非放出性共役体の薬物動態学と比して判定することにより計測され得る。小分子薬物に関して、放出される薬物は、すべてのモデル系の血漿から事実上直ぐにクリアランスされ、従って、血漿中の遊離薬物濃度の計測は基本的に無視可能であり、系の無処置の共役体のクリアランスを比較する場合に、共役体自体の濃度を計測して放出速度を算出する必要性があるのみである。このようなデータは、本発明の高分子量共役体に対してより好ましいクリアランス速度を示すために、マウスと比してラットにおいて入手することが好ましい。

より詳細には、共役体を、ラットなどのモデル対象に例えば静脈内投与によって投与し、血液サンプルを定期的に採取し、血漿を単離する。次いで、時間に応じた血漿中の共役体レベルを判定する。これは、クロマトグラフィによる分離（例えば、ＵＶ、蛍光または質量分析検出と組み合わせた除タンパク後のＨＰＬＣ分析）によって行っても、適切な場合には、ＥＬＩＳＡ、生理活性または蛍光などの直接アッセイによって行ってもよい。上記のとおり、巨大分子共役体は単一コンパートメントモデルに準拠しており、本発明の共役体は以下の２つのメカニズム、すなわち、共役体からの薬物の放出、および、無処置の共役体のクリアランス（例えば、腎臓ろ過）の一方により血漿から消失する可能性がある。血漿からの放出性共役体の損失速度は、それ故、薬物の放出による損失の速度と共役体のクリアランスによる損失の速度との和である。対照的に、非放出性共役体の損失速度は、薬物は放出されないため、単に血漿からの共役体のクリアランス速度である。それ故、本発明の共役体からの薬物の放出速度は、放出性共役体の損失速度と対応する非放出性共役体の損失速度とにおける差として算出することが可能である。これは、速度における差を直接的に得ることにより行うことも、図９ａおよび９ｂに示されているとおり、ｌｎ（Ｒ／Ｎ）（式中、Ｒは放出性共役体の濃度であり、Ｎは非放出性共役体の濃度である）対時間のプロットの傾きから算出することも可能である。パネルａに示されているとおり、生データは単に、種々の共役体の濃度の対数（ｌｎ）、および、時間に応じた安定な共役体の対数（ｌｎ）を示す。パネルｂは、上記の計算により得られる種々の放出性共役体の放出速度における差を示す。当然ながら、安定な共役体はゼロ放出速度を示すが、一方で、サンプル共役体における放出のためのトリガの種々の実施形態の薬物の放出速度が示されている。

図１０は、トリガのインビトロおよびインビボ性質に応じた速度定数の変動が同一のパターンに従うことを示す。

Claims

以下の式の化合物：

式中、ｍは0または1であり；
Ｒ¹およびＲ²の少なくとも一方もしくは両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ₂；
置換されていてもよいアリール；
置換されていてもよいヘテロアリール；
置換されていてもよいアルケニル；
置換されていてもよいアルキニル；
ＣＯＲ³またはＳＯＲ³またはＳＯ₂Ｒ³（式中、
Ｒ³は、Ｈもしくは置換されていてもよいアルキル；
各々が置換されていてもよいアリールもしくはアリールアルキル；
各々が置換されていてもよいヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；または
ＯＲ⁹もしくはＮＲ⁹ ₂（式中、各Ｒは、独立して、Ｈもしくは置換されていてもよいアルキルであるか、または、両方のＲ⁹基はこれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成している）である）；または
ＳＲ⁴（式中、
Ｒ⁴は、置換されていてもよいアルキル；
各々が置換されていてもよいアリールもしくはアリールアルキル；または
各々が置換されていてもよいヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルである）
であり、
ここで、Ｒ¹およびＲ²は、結合されて3〜8員環を形成していてもよく；および
ここで、Ｒ¹およびＲ²の一方が、
ＣＮ；
ＮＯ₂；
置換されていてもよいアリール；
置換されていてもよいヘテロアリール；
置換されていてもよいアルケニル；
置換されていてもよいアルキニル；
ＣＯＲ³またはＳＯＲ³またはＳＯ₂Ｒ³；または
ＳＲ⁴
である場合、
Ｒ¹およびＲ²の他方は、Ｈ、または、各々が置換されていてもよい、アルキル、アリールアルキルもしくはヘテロアリールアルキルであり；
各Ｒ⁵は、独立して、Ｈ、または、各々が置換されていてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；
Ｚは、Ｏ、Ｓもしくは非塩基性Ｎを介してカップリングされた薬物またはプロドラッグの残基であるか、または、前記カップリングを媒介する脱離基であり、該脱離基は、ハロゲン、ＯＨ、アルコキシ、アリールスルホネート、アルキルスルホネートおよびＲ_２Ｓ^＋（式中、Ｒの各々は、独立して、アルキル、アリールまたはヘテロアリールである）から成る群より選択され；
Ｂは、各々が置換されていてもよい、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり；かつ
ここで、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵またはＢの1つは巨大分子にカップリングされているか、または、前記カップリングを媒介するための官能基を含んでおり、
Ｒ ¹ 、Ｒ ² 、またはＲ ⁵ が該官能基を含む場合、該官能基は、アミノ、アジド、ヒドロキシ、カルボン酸、アルキニル、チオール、マレイミド、フラン、シクロペンタジエン、１，３−ジエンおよび１，３−ジカルボニル基から成る群より選択され、
Ｂが該官能基を含む場合、該官能基は、アミノ、アジド、アルキニル、チオール、マレイミド、フラン、シクロペンタジエン、１，３−ジエンおよび１，３−ジカルボニル基から成る群より選択される。
Ｒ¹およびＲ²の一方がＣＮである、請求項１に記載の化合物。
Ｒ¹およびＲ²の少なくとも一方が、フェニルまたはフェニレンを含む、請求項１に記載の化合物。
Ｒ¹およびＲ²の一方がＳＯ₂Ｒ³であり、かつ他方がＨ、アルキルまたはフェニルである、請求項１に記載の化合物。
ｍが0である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
以下の式の薬物共役体である、化合物：

式中、ｍは0または1であり；
Ｒ ¹ およびＲ ² の少なくとも一方もしくは両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ ₂ ；
置換されていてもよいアリール；
置換されていてもよいヘテロアリール；
置換されていてもよいアルケニル；
置換されていてもよいアルキニル；
ＣＯＲ ³ またはＳＯＲ ³ またはＳＯ ₂ Ｒ ³ （式中、
Ｒ ³ は、Ｈもしくは置換されていてもよいアルキル；
各々が置換されていてもよいアリールもしくはアリールアルキル；
各々が置換されていてもよいヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；または
ＯＲ ⁹ もしくはＮＲ ⁹ ₂ （式中、各Ｒは、独立して、Ｈもしくは置換されていてもよいアルキルであるか、または、両方のＲ ⁹ 基はこれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成している）である）；または
ＳＲ ⁴ （式中、
Ｒ ⁴ は、置換されていてもよいアルキル；
各々が置換されていてもよいアリールもしくはアリールアルキル；または
各々が置換されていてもよいヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルである）
であり、
ここで、Ｒ ¹ およびＲ ² は、結合されて3〜8員環を形成していてもよく；および
ここで、Ｒ ¹ およびＲ ² の一方が、
ＣＮ；
ＮＯ ₂ ；
置換されていてもよいアリール；
置換されていてもよいヘテロアリール；
置換されていてもよいアルケニル；
置換されていてもよいアルキニル；
ＣＯＲ ³ またはＳＯＲ ³ またはＳＯ ₂ Ｒ ³ ；または
ＳＲ ⁴
である場合、
Ｒ ¹ およびＲ ² の他方は、Ｈ、または、各々が置換されていてもよい、アルキル、アリールアルキルもしくはヘテロアリールアルキルであり；
各Ｒ ⁵ は、独立して、Ｈ、または、各々が置換されていてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；
Ｂは、各々が置換されていてもよい、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルでありＤは、Ｏ、ＳまたはＮを介してカップリングされた薬物またはプロドラッグの前記残基であり；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵またはＢの1つは、巨大分子にカップリングされている。
前記巨大分子がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項６に記載の薬物共役体。
前記薬物が、ペプチド、核酸または小分子である、請求項６に記載の薬物共役体。
以下の式である、請求項１に記載の化合物：

式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは請求項１に定義されているとおりであり；
Ｌは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介してカップリングされた薬物またはプロドラッグの前記カップリングを媒介する脱離基であり、該脱離基は、ハロゲン、ＯＨ、アルコキシ、アリールスルホネート、アルキルスルホネートおよびＲ_２Ｓ^＋（式中、Ｒの各々は、独立して、アルキル、アリールまたはヘテロアリールである）から成る群より選択され；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵またはＢの少なくとも1つは、巨大分子に対するカップリングを媒介するための官能基を含んでおり、
Ｒ ¹ 、Ｒ ² 、またはＲ ⁵ が該官能基を含む場合、該官能基は、アミノ、アジド、ヒドロキシ、カルボン酸、アルキニル、チオール、マレイミド、フラン、シクロペンタジエン、１，３−ジエンおよび１，３−ジカルボニル基から成る群より選択され、
Ｂが該官能基を含む場合、該官能基は、アミノ、アジド、アルキニル、チオール、マレイミド、フラン、シクロペンタジエン、１，３−ジエンおよび１，３−ジカルボニル基から成る群より選択される。
以下の式の化合物：

式中、ｍは0または1であり；
Ｒ ¹ およびＲ ² の少なくとも一方もしくは両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ ₂ ；
置換されていてもよいアリール；
置換されていてもよいヘテロアリール；
置換されていてもよいアルケニル；
置換されていてもよいアルキニル；
ＣＯＲ ³ またはＳＯＲ ³ またはＳＯ ₂ Ｒ ³ （式中、
Ｒ ³ は、Ｈもしくは置換されていてもよいアルキル；
各々が置換されていてもよいアリールもしくはアリールアルキル；
各々が置換されていてもよいヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；または
ＯＲ ⁹ もしくはＮＲ ⁹ ₂ （式中、各Ｒは、独立して、Ｈもしくは置換されていてもよいアルキルであるか、または、両方のＲ ⁹ 基はこれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成している）である）；または
ＳＲ ⁴ （式中、
Ｒ ⁴ は、置換されていてもよいアルキル；
各々が置換されていてもよいアリールもしくはアリールアルキル；または
各々が置換されていてもよいヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルである）
であり、
ここで、Ｒ ¹ およびＲ ² は、結合されて3〜8員環を形成していてもよく；および
ここで、Ｒ ¹ およびＲ ² の一方が、
ＣＮ；
ＮＯ ₂ ；
置換されていてもよいアリール；
置換されていてもよいヘテロアリール；
置換されていてもよいアルケニル；
置換されていてもよいアルキニル；
ＣＯＲ ³ またはＳＯＲ ³ またはＳＯ ₂ Ｒ ³ ；または
ＳＲ ⁴
である場合、
Ｒ ¹ およびＲ ² の他方は、Ｈ、または、各々が置換されていてもよい、アルキル、アリールアルキルもしくはヘテロアリールアルキルであり；
各Ｒ ⁵ は、独立して、Ｈ、または、各々が置換されていてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；
Ｂは、各々が置換されていてもよい、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり；
Ｄは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介してカップリングされた薬物またはプロドラッグの前記残基であり；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵またはＢの少なくとも1つは、巨大分子に対するカップリングを媒介するための官能基を含んでおり、該官能基は、アミノ、アジド、ヒドロキシ、カルボン酸、アルキニル、チオール、マレイミド、フラン、シクロペンタジエン、１，３−ジエンおよび１，３−ジカルボニル基から成る群より選択される。
以下の式の化合物：

式中、ｍは0または1であり；
Ｒ ¹ およびＲ ² の少なくとも一方もしくは両方は、独立して、
ＣＮ；
ＮＯ ₂ ；
置換されていてもよいアリール；
置換されていてもよいヘテロアリール；
置換されていてもよいアルケニル；
置換されていてもよいアルキニル；
ＣＯＲ ³ またはＳＯＲ ³ またはＳＯ ₂ Ｒ ³ （式中、
Ｒ ³ は、Ｈもしくは置換されていてもよいアルキル；
各々が置換されていてもよいアリールもしくはアリールアルキル；
各々が置換されていてもよいヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキル；または
ＯＲ ⁹ もしくはＮＲ ⁹ ₂ （式中、各Ｒは、独立して、Ｈもしくは置換されていてもよいアルキルであるか、または、両方のＲ ⁹ 基はこれらが結合している窒素と一緒になって複素環を形成している）である）；または
ＳＲ ⁴ （式中、
Ｒ ⁴ は、置換されていてもよいアルキル；
各々が置換されていてもよいアリールもしくはアリールアルキル；または
各々が置換されていてもよいヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルである）
であり、
ここで、Ｒ ¹ およびＲ ² は、結合されて3〜8員環を形成していてもよく；および
ここで、Ｒ ¹ およびＲ ² の一方が、
ＣＮ；
ＮＯ ₂ ；
置換されていてもよいアリール；
置換されていてもよいヘテロアリール；
置換されていてもよいアルケニル；
置換されていてもよいアルキニル；
ＣＯＲ ³ またはＳＯＲ ³ またはＳＯ ₂ Ｒ ³ ；または
ＳＲ ⁴
である場合、
Ｒ ¹ およびＲ ² の他方は、Ｈ、または、各々が置換されていてもよい、アルキル、アリールアルキルもしくはヘテロアリールアルキルであり；
各Ｒ ⁵ は、独立して、Ｈ、または、各々が置換されていてもよい、アルキル、アルケニルアルキル、アルキニルアルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールもしくはヘテロアリールアルキルであり；
Ｂは、各々が置換されていてもよい、アルキル、アリール、アリールアルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアリールアルキルであり；
Ｌは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介した薬物またはプロドラッグの前記カップリングを媒介する脱離基であり、該脱離基は、ハロゲン、ＯＨ、アルコキシ、アリールスルホネート、アルキルスルホネートおよびＲ_２Ｓ^＋（式中、Ｒの各々は、独立して、アルキル、アリールまたはヘテロアリールである）から成る群より選択され；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵またはＢの少なくとも1つは、巨大分子にカップリングされている。
以下の式：

（式中、Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは請求項６に定義されているとおりであり；
Ｌは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介した薬物またはプロドラッグの前記カップリングを媒介する脱離基であり、該脱離基は、ハロゲン、ＯＨ、アルコキシ、アリールスルホネート、アルキルスルホネートおよびＲ_２Ｓ^＋（式中、Ｒの各々は、独立して、アルキル、アリールまたはヘテロアリールである）から成る群より選択され；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵およびＢの1つは、巨大分子にカップリングされている）
の化合物と薬物またはプロドラッグとを、前記プロドラッグが式（ＩＶ）の前記化合物にカップリングされる条件下で反応させる工程を含む、請求項６に記載の式（Ｉ）の化合物を調製する方法。
以下の式：

（式中、Ｒ ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは請求項１０に定義されているとおりであり；
Ｌは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介した薬物またはプロドラッグの前記カップリングを媒介する脱離基であり、該脱離基は、ハロゲン、ＯＨ、アルコキシ、アリールスルホネート、アルキルスルホネートおよびＲ_２Ｓ^＋（式中、Ｒの各々は、独立して、アルキル、アリールまたはヘテロアリールである）から成る群より選択され；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵またはＢの少なくとも1つは、巨大分子に対するカップリングを媒介するための官能基を含んでおり、該官能基は、アミノ、アジド、ヒドロキシ、カルボン酸、アルキニル、チオール、マレイミド、フラン、シクロペンタジエン、１，３−ジエンおよび１，３−ジカルボニル基から成る群より選択される）
の化合物と薬物またはプロドラッグとを、前記薬物またはプロドラッグが式（ＩＩ）の前記化合物にカップリングされる条件下で反応させる工程を含む、請求項１０に記載の式（ＩＩＩ）の化合物を調製する方法。
以下の式：

（式中、Ｒ ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは請求項６に定義されているとおりであり；かつ
Ｄは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介してカップリングされた薬物またはプロドラッグの前記残基であり；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵およびＢの少なくとも1つは、式（ＩＩＩ）を巨大分子にカップリングする官能基を含んでおり、該官能基は、アミノ、アジド、ヒドロキシ、カルボン酸、アルキニル、チオール、マレイミド、フラン、シクロペンタジエン、１，３−ジエンおよび１，３−ジカルボニル基から成る群より選択される）
の化合物と巨大分子とを、前記巨大分子が式（ＩＩＩ）の前記化合物にカップリングされる条件下で反応させる工程を含む、請求項６に記載の式（Ｉ）の化合物を調製する方法。
以下の式：

（式中、Ｒ ¹、Ｒ²、Ｒ⁵、ｍおよびＢは請求項１１に定義されているとおりであり；
Ｌは、Ｏ、Ｓまたは非塩基性Ｎを介した薬物またはプロドラッグの前記カップリングを媒介する脱離基であり、該脱離基は、ハロゲン、ＯＨ、アルコキシ、アリールスルホネート、アルキルスルホネートおよびＲ_２Ｓ^＋（式中、Ｒの各々は、独立して、アルキル、アリールまたはヘテロアリールである）から成る群より選択され；かつ
Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ⁵およびＢの1つは、式（ＩＩ）を巨大分子にカップリングする官能基を含んでおり、該官能基は、アミノ、アジド、ヒドロキシ、カルボン酸、アルキニル、チオール、マレイミド、フラン、シクロペンタジエン、１，３−ジエンおよび１，３−ジカルボニル基から成る群より選択される）
の化合物と巨大分子とを、前記巨大分子が式（ＩＩ）の前記化合物にカップリングされる条件下で反応させる工程を含む、請求項１１に記載の式（ＩＶ）の化合物を調製する方法。
ＺがＳＮ−38分子の残基である、請求項１に記載の化合物。