JP6321298B2 - α−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛の乾癬を治療するための使用 - Google Patents

Description

本発明は、α−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛の乾癬を治療するための使用に関し、乾癬細胞と、動物モデルと、各種類の乾癬患者の治療に適用する。

乾癬は、表皮が過度に増殖するのに伴って角化不全及び真皮リンパ細胞が浸潤することを特徴とする慢性炎症性皮膚疾患であり、主な症状としては紅斑、鱗屑であり、発症機序が複雑で、疾患の経過が長く、再発がしやすく、治癒が難しく、患者のクオリティ・オブ・ライフにひどく影響する。欧米の国と比べ、中国の乾癬の患病率は比較的に低いが、患者の絶対人数が比較的に多く、且つ、年々増加している。乾癬を治療することは、病状を制御し、全身への進行を遅らせ、紅斑、鱗屑、局所斑片増厚などの症状を軽減し、病状を安定させ、再発を避け、できる限りに副作用を避け、患者のクオリティ・オブ・ライフを向上することを目的とする。正規的な、且つ安全的な個体化の治療原則に従うべきである。今までの乾癬を治療する方法は、主に外用薬治療と物理療法がある。その中で、外用薬として、皮膚軟化剤、角質化促進剤、角質溶解薬、糖質コルチコイド、レチノイド系、ビタミンD3誘導体、アントラリン、タール系、細胞毒性薬などが含まれている。タザロテンと、中程度と強力な糖質コルチコイドと、カルシポトリオールとは、局所治療の第一選択薬である。物理療法として、長波長紫外線（ＵＶＡ）、ブロードバンドＵＶＢ、ナローバンドＵＶＢと光化学療法（ＰＵＶＡ）が含まれている。中度や重度乾癬、膿疱性乾癬などの難治性乾癬に対して、局所治療は、よい治療効果を果たすことが難しいが、光線療法、特にＰＵＶＡは、よい治療効果を有することが既に証明されている。ＰＵＶＡは、内服或いは外用にてソラレン（８−ＭＯＰ、５−ＭＯＰ）とＵＶＡ（少数には応用ＵＶＢも応用可能である）を結合する方法である。しかし、ＵＶＡでは、大量に照射すると、皮膚の紅斑、灼熱、水疱などを起こすことがある。ＰＵＶＡを長期的に使用すると、皮膚老化、色素沈着と皮膚癌を起こして、白内障を増加する危険性がある。ブロードバンドＵＶＢについても紅斑、日焼け、色素沈着を起こすことがあり、長期的に照射すると、発癌の可能性がある。ナローバンドＵＶＢでは、紅斑、色素沈着、ＤＮＡ損傷及び発癌などの副作用が小く、有効性はＰＵＶＡの早期段階と相同であるが、緩解期が長くない。

光線力学療法（Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ ｔｈｅｒａｐｙ、ＰＤＴ）は、二十世紀七十年代末に現れた新たな治療技術であり、光増感剤の参与の上で光の作用下で、有機体の細胞或いは生物分子の機能或いは形態を改変させ、その上、細胞の損傷と壊死を引き起こすように治療の効果を達成する方法である。ＰＤＴが現れた最初のところには、主に（血管）増殖性病変に対するものであり、その後には、世界抗癌科学における最も活動的な研究分野の一つとなった。近年、ＰＤＴを、非がん疾患、例えば、尖圭コンジローマ、乾癬、火炎状母斑、関節リウマチ、黄斑変性症、血管成型術後の再狭窄などの疾患の治療に応用する研究は、ますます重視されてきた。現在、ＰＤＴにより乾癬を治療することはまだ研究中であり、ある光増感剤介在のＰＤＴは、前臨床、臨床試験及び個別の症例の治療中に良好な治療効果及び比較的高い安全性が表示されるが、世界中に、多施設、大規模な臨床の拡張がまだ不足しており、乾癬を主な適応症とする光増感剤の薬物もまだ不足している。ＰＤＴにて乾癬を治療するメカニズムはまだ完全には明確ではなく、現在の研究により、以下のメカニズムに関連する可能性があると示されている。（１）ＰＤＴは炎症の発症機序におけるサイトカインの分泌を減少でき、乾癬患者の単核細胞がサイトカインを分泌する方式を変える；（２）ＰＤＴはケラチン生成細胞の増殖を抑制できる；（３）ＰＤＴは乾癬患者の病変部位にあるＴ細胞の死亡を促進でき、リンパ細胞、特にＴリンパ細胞の分類変化を修正でき、免疫機能に対して、一定の調節作用を有する。ＰＵＶＡと比べ、ＰＤＴが使用する照射光源はレーザーであり、長期的に応用しても毒性副作用が小さく、安全性が高い。光増感剤の発展に伴い、乾癬ＰＤＴ療法に用いられる光増感剤は、治療効果を高める上で、毒性もソラレンなどの早期光敏薬物により低い。

ＰＤＴの作用は、主に光増感剤の性質によるものであり、ＰＤＴの提出、発展及び応用はすべて光増感剤の発展に伴い、だんだん完備されてきた。１９００年に、ドイツに初めに、光と光増感剤を結合させることにより、細胞毒性効果が生じられることを発見したところから、１９９３年４月に、カナダ衛生部が、世界で初めにポルフィマナトリウムを臨床に応用することを正式に批准したところまで、ＰＤＴについての基礎研究と臨床応用が広く注目された。光増感剤或いはその代謝産物は、ターゲットポイントに選択的に濃集できる化学物質である。理想的な光増感剤は以下の特点を有するべきである。（１）成分が単一であり、構造が明確であり、性質が安定である；（２）ターゲット細胞に対して、比較的に強い光毒性を有し、治療効果が強いが、暗所毒性が比較的低く、副作用が小さい；（３）ターゲット組織中において比較的長い存留時間を有するが、体内に長時間に滞留或いは蓄積しない；（４）比較的高い一重項酸素産量及び比較的長い寿命を有する；（５）光療法波長範囲（６００〜９００ｎｍ）において、強い吸収を有し、治療する時に人体組織に対しての透過が比較的深い光源を採用することに有利である；（６）生理的ｐＨ下で溶解できる。光増感剤は、その化学構造と組成に応じて、ポルフィリン系、クロロフィル系、染料系、漢方薬などに分類できる；発展の時間及び性質に応じて、第一、二、三世代光増感剤に分類できる。第一世代光増感剤は、２０世紀７０年代と８０年代初に現れ、ヘマトポリフィリン誘導体（ＨｐＤ）を主として、複雑なポルフィリン混合物が多く、組成が一定ではなく、構造に異議があり、赤色光に対する吸収が比較的に悪く、且つ組織を透過する能力が悪く、投薬から光照までの時間間隔が長く、排泄が遅く、服薬後に避光時間が長い。以上の第一世代光増感剤の欠点のため、２０世紀８０年代末から、第二世代光増感剤の研究が始まった。最も早く行う研究は、ベンゾポルフィリン誘導体（ＢＰＤ）、ヘマトポルフィリンモノメチルエーテル（ＨＭＭＥ）などのようなポルフィリン誘導体に対しての構造の改善及び単体成分の分離などである。その他の研究は、主に一水素ポルフィン系、フタロシアニン系、クロロフィルａ分解物誘導体などの研究である。その中で、フタロシアニン系はポルフィリン系の錯体であり、それが四つのピロール単位を四つの窒素原子により連接してなり、大きな共役系を形成する。フタロシアニン大環は金属元素と錯体を形成でき、各種類の置換基に置換されることもできる。フタロシアニン系光増感剤の吸収波長は６００〜８００ｎｍにあり、純度が比較的に高く、光熱安定性と生理活性が比較的によく、赤色光領域における吸収が比較的に強く、両親媒性（疎水性と親水性）が比較的によく、暗所毒性が低く、癌に対しての選択性がよく、モル吸光係数が比較的に高いなどの優点がある。第一世代光増感剤と比べ、第二世代光増感剤の成分が単一であり、分子構造が明確であり、より高い一重項酸素量子の収率を有し、副作用が比較的小く、体内の排泄が速い。近年に発展されてきた第三世代光増感剤の研究では、治療効果を更に向上し、副作用を更に減少することに努力する以外に、光増感剤の診断、薬用量モニタリング、治療効果の評価などの点への応用にも着目されている。治療効果を向上し、副作用を減少する点において、主要策略としては、第二世代光増感剤に基づき、ある特殊な化学物質を架橋させ、ターゲット組織の選択性を向上すること或いは光増感剤に新たな効能効果を与えることにより、協同に治療する作用を実現する。

α−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛は、金属フタロシアニン系錯体の一種であり、フタロシアニンとキノリンとの二種類の構造を融合させて金属フタロシアニンとキノリンの構造特性を同時に持たすものである。当該錯体は、構造が確定しており、分離しやすいなどの特点がある。その吸収波長は６７０ｎｍ程度であり、蛍光量子の収率が比較的に高く、酸化安定性が高く、安定な水溶液に作製して使用できる。前期における薬力学の研究により、比較的に強い抗癌活性を有すると証明されている。

本発明は、α−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛の乾癬を治療するための使用を提供し、前記使用は乾癬細胞と、動物モデルと、各種類の乾癬患者の治療に適用する。ＨａＣａＴ細胞の増殖を比較的によく抑制でき、スチルベストロールに誘導されたマウスの腟上皮細胞の過度な増殖を抑制し、プロプラノロールによるモルモット乾癬様病変に対して、比較的によい治療効果がある。

マウスの腟上皮基底細胞及び有糸分裂細胞を示す図である。 α−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛がスチルベストロールに誘導されたマウスの腟上皮細胞の増殖に対する影響、ＨＥ染色を示す図である。その中で、Ａ：ブランク対照群（２００×）、Ｂ：モデル対照群（２００×）、Ｃ：照光あり投薬なし群（２００×）、Ｄ：ＰＤＴ１群（２００×）、Ｅ：ＰＤＴ ２群（２００×）、Ｆ：ＰＤＴ ３群（２００×） プロプラノロールに誘導されたモルモットの耳の乾癬様病変を示す図である。Ａ：正常なモルモットの耳、Ｂ：鱗屑、血管が太くなり、皮膚が厚くなるなどの変化が見られるモデルモルモットの耳、Ｃ：有棘層が厚くなるモデルモルモットの耳（ＨＥ染色、４０×）、Ｄ：過角化に伴う角化不全のモデルモルモットの耳（ＨＥ染色、２００×） α−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛がプロプラノロールによるモルモット乾癬様病変の治療に対する作用（ＨＥ染色、４０×）を示す図である。

（１）α−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛によるＨａＣａＴ細胞の生存率に対する影響

ＨａＣａＴ細胞株は、正常に突然変異するヒト表皮角化細胞株であり、現在において、乾癬の研究に最も広く応用される細胞モデルの一つである。原代に培養されるケラチン生成細胞と比べ、ＨａＣａＴ細胞の生物学的特性が類似するが、操作的にはより簡単である。

ＨａＣａＴ細胞は、１０％ウシ胎児血清を含むＲＰＭＩ−１６４０培養液として、３７℃、ＣＯ_２ ５％のインキュベーター中で常法に従い培養する。対数増殖期の細胞を取り、０．２５％トリプシン（ＥＤＴＡを含む）を用いて消化させた後、細胞密度を２×１０５個／ｍＬに調整し、ウェルごとに１００μＬになるように９６ウェルプレート中に接種する。２４ｈ培養した後、濃度ごとに三つの重複ウェルを設けるようにして０．００１、０．０１、０．１、１、１０μｇ／ｍＬのα−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛を添加する。それ以外にブランク対照群と溶剤対照群を設ける。投薬後に４ｈインキュベートし続け、６７０ｎｍ光線力学治療器を用いて細胞に照光を行う。照光条件：出力電力１５００ｍＷ、光斑直径８ｃｍ、照射時間１８０ｓ。照光の終了後に９６ウェルプレートを改めてＣＯ_２インキュベーターに戻し、４８ｈ培養し続ける。培養液を捨て、ウェルごとに２００μＬのＭＴＴ溶液（０．５ｍｇ／ｍＬ）を加え、４ｈ培養し続けた後に２００μＬのジメチルスルホキシドを加え、マイクロプレートリーダー５４５ｎｍのところに各ウェルの吸光度（参照波長４５０ｎｍ）を測量する。同じ条件下で３回測定し、平均値を取る。増殖抑制率を計算し、Ｂlｉｓｓ法によりＩＣ５０を計算する。

結果としては、α−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛は濃度依存性的にＨａＣａＴ細胞の増殖を抑制でき、採用された照光条件下で、そのＩＣ５０値は０．１９７±０．０２２μｇ／ｍＬであることがわかる。

（２）α−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛による、スチルベストロールによるマウス腟上皮細胞の増殖に対する影響

エストロゲン（例えば、スチルベストロール）はマウスの腟上皮の増殖が活動的となるように誘導でき、上皮細胞の変換が速くなる。コルヒチンは細胞周期を有糸分裂中期に停滞させ、試験対象の有糸分裂及び細胞の過度な増殖に対する抑制作用を観察する。当該モデルは、乾癬患者の表皮細胞の増殖が速すぎる特点を模擬でき、簡単に得られ、薬により乾癬を治療する薬効評価における最も使われる動物モデルの一つである。

ＩＣＲマウスを６０匹取り、体重によりランダムに６群に分け、即ち、ブランク対照群、モデル対照群、照光あり投薬なし群、及びＰＤＴ１、２、３群に分ける。ブランク対照群以外に、他の各群において、すべて腹腔にスチルベストロールを０．２ｍｇ／匹注射し、毎日１回投薬し、３日間投薬し続ける。４日目に、ＰＤＴ１、２、３において、腹腔に１．２、０．６、０．３ｍｇ／ｋｇのα−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛溶液を注射する。他の３群に投薬しない。ＰＤＴ１、２、３群と照光あり投薬なし群を６ｈで避光させた後、半導体光線力学治療器を用いてレーザー照射を行う。照光条件はそれぞれに１００ｍＷ×５４０ｓ、３００ｍＷ×６０ｓ、１００ｍＷ×６０ｓ、３００ｍＷ×５４０ｓ、光斑直径３ｃｍ、マウスの腹部を照射することである。ブランク対照群とモデル対照群において照光しない。照光が終了した１週間後、各群のマウスの腹腔にコルヒチンを２ｍｇ／ｋｇ注射して細胞の有糸分裂を有糸分裂中期に停滞させる。コルヒチンを注射した４ｈ後、動物を麻痺して死亡させる。マウスの膣を取り、１０％フォルムアルデヒド溶液中に固定させ、常法に従い、脱水、パラフィン包埋、切片、ＨＥ染色を行う。顕微鏡下で３００個の基底細胞を計数し、その中の有糸分裂の細胞数を計算し、有糸分裂指数（１００個の基底細胞あたりの有糸分裂の細胞数）を計算する。

結果として、スチルベストロールはＩＣＲマウスの腟上皮細胞の過度な増殖を誘導でき、ブランク対照群と比べ、モデル対照群の有糸分裂指数が明らかに高くなった；α−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛−ＰＤＴは、マウスの腟上皮細胞の過度な増殖を抑制でき、モデル対照群と比べ、ＰＤＴ１、２、３群の有糸分裂指数が顕著に低下したことがわかる。詳しくは表１、図１、２を参照のこと。

（３）α−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛による、プロプラノロールによるモルモット乾癬様病変に対する治療作用

プロプラノロールはβ−アドレナリン受容体遮断薬であり、モルモットの皮膚に塗ると、ケラチノサイトのβ−アドレナリン受容体を阻むことにより、細胞内のｃＡＭＰレベルが下げられ、動物表皮の過角化、角化不全と有棘層の肥厚などの乾癬と類似する組織病理変化を引き起こし、分子レベルでは、ヒトの乾癬病変と一致する。プロプラノロールをモルモットの耳部分の皮膚に塗って乾癬様皮膚モデルを複製することは、薬の乾癬に対する治療作用を観察することによく使われる。

５％プロプラノロールを調製する：プロプラノロール粉末を５ｇ、ポリオキシエチレンピロリドンを３０５ｇとし、５０％エタノールを加えて溶解させ、アズワン−プロピレングリコール（１：１）５ｍＬを加え、最後に１００ｍＬとなるように５０％エタノールを加え、現場で調製する。４２匹のモルモットを、体重によりランダムにブランク対照群とモデル群に分け、ブランク対照群を６匹、モデル群を３６匹とする。モデル群のモルモットの両耳の裏に５％プロプラノロールを約０．１ｍＬ／耳で均一に塗る。毎日午前と午後にそれぞれ１回薬を塗り、薬を４週間塗り続ける。モデルの作成が終了した後、モデル群のモルモットを、体重によりまたランダムに６群に分け、群ごとに６匹、即ち、モデル対照群、照光あり投薬なし群、投薬あり照光なし群、注射投薬群、局所投薬１群、局所投薬２群に分ける。投薬あり照光なし群と注射投薬群にα−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛溶液０．４５ｍｇ／ｋｇを静脈に注射し、局所投薬１群、局所投薬２群にそれぞれに５％と１％α−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛塗布薬を０．１ｍＬ／耳で塗る。残る３群に投薬しない。照光あり投薬なし群、注射投薬群、局所投薬１群、局所投薬２群を２４ｈ避光させた後、半導体光線力学治療器を用いてレーザー照射を行う。照光条件：出力電力１０００ｍＷ、光斑直径６ｃｍ、照射時間３９９ｓ、光剤の量が１４Ｊ／ｃｍ２である。照光後に４８ｈ避光させ、その後、３日間で回復する。以上の手順（投薬、照光、避光、回復）を１回として、光線力学治療を２回繰り返して行う。治療が終了後、麻痺を終わらせ、各群の動物を死亡させ、両耳の皮膚を取り、１０％フォルムアルデヒド溶液中に固定し、常法に従い、脱水、パラフィン包埋、切片、ＨＥ染色を行い、顕微鏡下で観察する。

結果として、図３のように、モルモットの耳裏皮膚に５％プロプラノロールを４週間塗ることにより明らかな乾癬様病変が生じ、肉眼により耳部皮膚が明らかに厚くなったこと、血管が太くなったこと、鱗屑様病変などが見られた。顕微鏡下で、有棘層が厚くなったっこと、角化が過度であること、角化不全であることなどが見られた。図４のように、照光あり投薬なし群と投薬あり照光なし群は、当該種類の病変に対して一定の改善作用があるが、著しくない。注射投薬群と、局所投薬１群、局所投薬２群は、いずれもプロプラノロールによるモルモットの耳の乾癬様病変を著しく改善でき、光線力学治療を２回繰り返した後、有棘層が明らかに薄くなり、過度な角化と角化不全が減軽され、部分的なモルモットの耳はほぼ正常状態に回復し、ブランク対照群と比べ、明らかな差異がないとわかる。

上記の内容は、本発明の好ましい実施例であり、本発明出願の範囲による均等的変化と修飾は、すべて本発明の範囲に属するべきである。

Claims (8)

1. 下記の構造式を有するα−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛を有効成分とすることを特徴とする乾癬治療用の光増感剤。
   
2. 前述乾癬が尋常性乾癬、膿疱性乾癬、乾癬性紅皮症、又は関節症性乾癬の種類を含み、中医学分類として血熱型、血燥型、又はお血型の種類を含む、請求項１に記載の乾癬治療用の光増感剤。
3. 光線力学治療法のためのものである、請求項1又は２記載の乾癬治療用の光増感剤。
4. 前記光線力学治療法の光源が半導体レーザーである、請求項１〜３のいずれか１つに記載の乾癬治療用の光増感剤。
5. 請求項１〜４のいずれかに記載の乾癬治療用の光増感剤と、溶液、クリーム、ナノミセル、微粒子、及び傷当てからなる群から選ばれた１種又は２種以上とを組み合わせてなる乾癬治療用組成物。
6. 全身投薬或いは局所投薬のためのものである、請求項５記載の乾癬治療用組成物。
7. 乾癬治療用の光増感剤の製造のための下記の構造式を有するα−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛の使用。
   
8. 乾癬治療用組成物の製造のための下記の構造式を有するα−（８−キノリニルオキシ）モノ置換フタロシアニン亜鉛の使用。