JP6276433B2 - マイクロエマルション前濃縮物及びマイクロエマルション、並びにその調製工程 - Google Patents

Description

関連出願に対する相互参照
本出願は、２０１３年１２月２０日に出願された台湾出願第１０２１４７４８７号の優先権を主張する。

１．発明の技術分野
本発明は、本質的に特定の重量比にあるココナツ油及びポリソルベート８０から成る可マイクロエマルション系に関する。さらに本発明は、可マイクロエマルション系により製剤化された脂溶性機能性成分を含むマイクロエマルション前濃縮物及びマイクロエマルション、並びにマイクロエマルション前濃縮物及びマイクロエマルションを調製するための工程に関する。マイクロエマルションは、新規のヘルスケア飲料の開発及び製造において使用することができる。

２．関連技術の説明
補酵素Ｑ１０（ＣｏＱ１０）の経口での生物学的利用能を改善させるために、Ｐ.Ｔｈａｎａｔｕｋｓｏｒｎ等は、５つのタイプの脂肪、４つのタイプの乳化剤、及び２つのタイプの水相（８ｇ／１００ｇｗ/ｗの無脂肪乳を有する蒸留水、または有しない蒸留水）を研究し、ココナツ油、無脂肪乳水溶液、及びステアロイル−２−乳酸カルシウム（calcium stearoyl- 2-lactate（ＣＳＬ））を伴うエマルションの効力により最適な製剤が産生されたことを見出した。結果に基づき、Ｐ.Ｔｈａｎａｔｕｋｓｏｒｎ等は、ココナツ油、８ｇ/１００ｇｗ/ｗの無脂肪乳水溶液、及びＣＳＬにより乳化したモデルＣｏＱ１０産物を調製し、ここで１００ｇの乳化ＣｏＱ１０産物は、以下：０．２８ｇのＣｏＱ１０、０．８ｇのＣＳＬ、２．６ｇのココナツ油、１４ｇの糖、６．８ｇの無脂肪乳、及び７５．５２ｇの水から構成される。乳化後に速やかに形成される油滴の大きさは、２．３７±０．５９μｍであり、そして油滴は、４℃、１０日間の貯蔵下、部分的にクリーム様の相に変化した。モデルＣｏＱ１０産物の経口での生物学的利用能は、標準的な市販のＣｏＱ１０産物（ＨＪＢ ＣｏｅｎｚｙｍｅＱ１０ ＥＸ；Ｆｕｊｉｔｅｘ Ｃｏ., Ｌｔｄ.,日本）（Ｐ.Ｔｈａｎａｔｕｋｓｏｒｎ等（２００９）、ＬＷＴ - Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、４２：３８５〜３９０)よりもわずかに高かったことが確認されている。上記を考慮すると、Ｐ.Ｔｈａｎａｔｕｋｓｏｒ等により調製されたモデルＣｏＱ１０産物は、比較的大きな粒子径を有し、また４℃での貯蔵寿命は十分ではない。

Ｊｕｎｙａ Ｈａｔａｎａｋａ等は、食品成分として一般に用いられる可溶化剤を利用して、液体製剤及び水溶性粉末製剤を含める新規のＣｏＱ１０の製剤を調製した。液体製剤は、以下の成分：全１００％中、１０．５％のＣｏＱ１０、１２．０％の非イオン性界面活性剤、３％の大豆レシチン、５５％のグリセロール、１５．０％の脱イオン水、及び４．５％の中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）を含むナノエマルション（ＮＥ）であり、ここで、非イオン性界面活性剤及び大豆レシチンは、乳化剤としての機能を果たし、またＭＣＴは、油媒体としての機能を果たす（Ｊｕｎｙａ Ｈａｔａｎａｋａ等（２００８）、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、３６３：１１２〜１１７）。非イオン性界面活性剤及びＭＣＴ中の成分は、学術論文中には示されていない。前記ＮＥ、すなわちＣｏＱ１０-ＮＥの調製中に、乳化剤としての機能を果たすために、大量のグリセロール及び２つの異なる成分が必要とされ、また製剤の完全な乳化を達成するために、ホモミキサー及び高圧ホモジナイザーが必要とされた。それに応じて６０ｎｍの平均粒子径を伴う粒子を有するＣｏＱ１０−ＮＥの形成は促進された可能性はあるものの、ＣｏＱ１０−ＮＥの調製工程は複雑になる。

ＵＳ２００６００７３１７６ Ａ１（ＴＷＩ３２１９８９ Ｂに対応）は、（Ａ）５〜４０重量％のＣｏＱ１０、（Ｂ）５〜３０重量％の１０の平均重合度及び１８個の炭素原子を有する脂肪酸を伴うポリグリセロールのモノエステル、（Ｃ）１〜１８重量％の３〜６の平均重合度及び１８個の炭素原子を有する脂肪酸を伴うポリグリセロールのモノ−、ジ−、トリ−またはペンタ−エステル、並びに（Ｄ）水を含む、ＣｏＱ１０含有水溶性組成物を開示する。ＣｏＱ１０含有水溶性組成物は、１１０ｎｍ以下の平均粒子径を有することが強調されている。ＵＳ２００６００７３１７６ Ａ１において、ＣｏＱ１０含有水溶性組成物の生産の間に、高濃度のＣｏＱ１０を溶かす、または分散させるために油類等の溶媒が必要とされないことが述べられているにもかかわらず、ＵＳ２００６００７３１７６ Ａ１は、ＣｏＱ１０含有水溶性組成物を生産するために、２種類の界面活性剤が必要とされるだけでなく、いくつの実施例において、５番目の成分、すなわち（Ｅ）グルコース−フルクトース液糖、アラビアゴム、及び還元でんぷん糖を含める可溶化剤も必要とされることを教示する。さらにいくつかの他の実施例では、ヤシ油またはスクロース酢酸／イソ酪酸エステル（ＳＡＩＢ）は、ＣｏＱ１０を伴う油相を形成するための油成分としての役割を果たすためにもまさに必要とされる。ＣｏＱ１０含有水溶性組成物の生産中に、製剤の完全な乳化を達成するために、ホモミキサー及び高圧ホモジナイザーが必要とされ、かかる機器の使用のせいで、満足できない生産コストをもたらす。

ＵＳ２００７０２５９０３４ Ａ１は、ＣｏＱ１０、溶媒、及びキャリア油を含む結晶フリーのＣｏＱ１０組成物を開示する。ＵＳ２００７０２５９０３４ Ａ１によれば、溶媒は、共役リノール酸（ＣＬＡ）、亜麻油、エチルエステル海産脂質、かんきつ油、またはそれらの組合せであってもよい。さらにＵＳ２００７０２５９０３４ Ａ１によれば、キャリア油は、亜麻油、α−リノール酸（ＡＬＡ）を含める有機亜麻油、大豆脂質、ボリジ脂質、または海産脂質であってもよい。海産脂質は、エチルエステルＥＰＡ／ＤＨＡの濃縮物であり、且つ組合された５０％〜９０％のＥＰＡ／ＤＨＡであってもよい。またさらに、ＵＳ２００７０２５９０３４ Ａ１によれば、ＣｏＱ１０組成物は、カプリン及びカプリルグリセリド、植物性モノグリセリド、または植物性モノグリセリド及びジグリセリドの混合物をさらに含む。またさらにＵＳ２００７０２５９０３４ Ａ１によれば、ＣｏＱ１０組成物は、経口投与用のソフトゲルの中にカプセル封入されてもよい。上記を考慮すれば、ＵＳ２００７０２５９０３４ Ａ１において開示されるＣｏＱ１０組成物は、液体形態にあるヘルスケア製品、特にヘルスケア飲料の調製における使用には適さない。

ＵＳ２００８０１４５４１１ Ａ１は、酸化ＣｏＱ１０、リゾレシチン、並びに油及び脂肪を含む経口投与用の組成物を開示する。酸化ＣｏＱ１０に対するリゾレシチンの重量比は、０．７以上である。リゾレシチンは、高価な化学物質であり、また生産コストは、リゾレシチンが使用される場合に上昇するだろう。さらにＵＳ２００８０１４５４１１ Ａ１において与えられた実施例に基づけば、概して経口投与用の組成物は、液体形態にあるヘルスケア製品、特にヘルスケア飲料の調製における使用には適さないことが明らかにされている。

ＵＳ２００８０２４８０１３ Ａ１（ＴＷＩ３５１９２５ Ｂに対応）は、グリセリン及び水溶性物質を含む水性液体中で、ＣｏＱ１０を分散及び乳化させることにより得られたＣｏＱ１０含有液体組成物を開示する。具体的には水溶性物質は、オクテニルコハク酸デンプン及びデキストリンから成る。液体組成物は、ＣｏＱ１０含有固体組成物を形成するために乾燥されてもよい。液体組成物の調製中、製剤の完全な乳化を達成するために、高圧ホモジナイザーが必要とされ、かかる機器の使用のために、満足のいかない生産コストがもたらされる。さらにＵＳ２００８０２４８０１３ Ａ１の実施例において調製されるような液体組成物は、少なくとも０．３μｍの粒子径を有するので、飲料生産のための外観の要求に見合うことができない。

ＵＳ２００４０１５２６１２ Ａ１は、ＣｏＱ１０含有マイクロエマルション前濃縮物及びマイクロエマルションを開示する。マイクロエマルション前濃縮物は、以下：（ａ）中鎖トリグリセリド、並びにオメガ−９脂肪酸及び／またはオメガ−６脂肪酸から成る混合物、（ｂ）ポリオキシエチレン型の界面活性剤を含んで成る界面活性成分、及び（ｃ）ユビキノン類、特にＣｏＱ１０から由来する治療活性成分から成る混合物を含む。ＵＳ２００４０１５２６１２ Ａ１の実施例１では、３つのマイクロエマルション前濃縮物が調製され、そしてそれらのそれぞれは、以下の成分：（ａ）Ｍｉｇｌｙｏｌ（登録商標）８１２（ａ１）及びオレイン酸（ａ２）（乳化剤または可溶化剤としての役割を果たす）、（ｂ） Ｔｗｅｅｎ８０（ｂ）、並びに（ｃ）ＣｏＱ１０（ｃ１）から構成される。さらに前記の３つのマイクロエマルション前濃縮物は、ビタミンＥ（ｃ２）またはＣｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（ｂ２）（可溶化剤としての機能を果たす）のいずれかを含み、また成分（ｂ）対成分（ａ）の重量比は、約１：１または９：７である。

ＵＳ２００４０１２６３６７ Ａ１（ＴＷＩ３３４８６２ Ｂに対応）は、還元ＣｏＱ１０含有溶液を開示し、ここで、還元ＣｏＱ１０は、リポソームでコーティングされ、或いは界面活性剤で可溶化または乳化され、酸化に対して還元ＣｏＱ１０を安定的に維持する。リポソームを調製するために使用される物質は、リン脂質または糖脂質であってもよい。界面活性剤は、好適には非イオン性界面活性剤であり、より好適にはＴｗｅｅｎ８０等のポリソルベート界面活性剤、またはＨＣＯ−６０等のポリオキシエチレン硬化ヒマシ油である。ＵＳ２００４０１２６３６７ Ａ１の実施例１では、還元ＣｏＱ１０の酸化安定性へのリポソームの影響が、３つのタイプのレシチンで評価された。ＵＳ２００４０１２６３６７ Ａ１の実施例２では、還元ＣｏＱ１０の酸化安定性への界面活性剤の影響が、Ｔｗｅｅｎ８０及びＨＣＯ−６０（１重量％または０．１重量％の界面活性剤を含む水溶液）で評価された。ＵＳ２００４０１２６３６７ Ａ１の調製例２は、以下の成分：１．０重量％のＴｗｅｅｎ８０、１２．５重量％のグリセロール、１．２重量％のホスファチジルコリン、０．１重量％の還元ＣｏＱ１０、及び全ての成分の総重量パーセントが１００重量％になるのに十分な量で存在する精製水を含むローションである。

ＵＳ２０１００２８４９８３ Ａ１（ＴＷ２００７１５９９５ Ａに対応）は、ＣｏＱ１０、親水性ポリグリセロール脂肪酸エステル、脂溶性スクロース脂肪酸エステル、及び水相成分を含む、ＣｏＱ１０含有水溶性組成物を開示する。親水性ポリグリセロール脂肪酸エステルは、１２個以上の炭素原子を含む脂肪酸残基から構成されるデカグリセロールモノ飽和脂肪酸エステルである。より好適には、飽和脂肪酸エステルは、ラウリン酸エステル、ミリスチン酸エステル及びパルミチン酸エステルから成る群から選択される少なくとも１種の物質である。脂溶性スクロース脂肪酸エステルは、好適には高級脂肪酸及び酢酸から構成されるエステルであり、またより好適にはパルミチン酸スクロース、ステアリン酸スクロース、及びそのアセチル化生成物である。脂溶性スクロース脂肪酸エステルの添加量は、好適には１００重量部のＣｏＱ１０に対し１〜２００重量部であり、より好適には５〜１５０重量部、さらにより好適には１０〜１００重量部であり、そして特に好適には３０〜１００重量部である。水相成分は、多価アルコール及び／または水を含む。多価アルコールは、好適にはグリセロールまたはソルビトールである。ＣｏＱ１０含有水溶性組成物の生産中、使用される成分を溶かすために、特定の温度（５０〜７０℃）で成分を温めなければならず、また乳化工程を行うために、高圧ホモジナイザーが必要とされる。

ＵＳ２００６００５１４６２ Ａ１は、脂溶性ＣｏＱ１０及び他の食物成分を送達するための自己乳化組成物を開示する。３つ以上の異なる油成分及び／または３つ以上の異なる乳化剤が、ＵＳ２００６００５１４６２ Ａ１の実施例において与えられる例示的な溶液製剤において使用されるので、かかる物質の使用は、確実に高い生産コストを引き起こすだろう。さらにＵＳ２００６００５１４６２ Ａ１において開示される前記溶液製剤の性質は、特定されていない。

多くの例示的な液体ナノエマルション濃縮物は、ＵＳ２００９０３１７５３２ Ａ１の実施例中に与えられている。少なくとも１つの油成分、少なくとも１つの乳化安定剤、少なくとも１つの界面活性剤、及び共界面活性剤でさえもこれらの濃縮物を製剤化するために必要とされ、これは確実に高い生産コストをもたらす。さらに油相及び水相を作り出す間の加熱は、使用される成分を混和できるように、６０℃で行わなければならない。最後に乳化工程を行うために、高圧ホモジナイザーが必要とされる。

ＣｏＱ１０等の脂溶性機能性成分を含む安定なマイクロエマルションを開発する際に、出願人は研究により以下のことを見出した：共界面活性剤（例えば当業界において一般に使用される短鎖の酸、アルコール、または脂肪酸）が省略される場合、また乳化工程を行うために高圧ホモジナイザーが使用されない場合であっても、ＣｏＱ１０等の脂溶性機能性成分は、室温で、均一に水性媒体中に分散され、安定なマイクロエマルションを形成することができる。

したがって、第一の観点では、本発明は、脂溶性機能性成分を含むマイクロエマルション前濃縮物を提供する。マイクロエマルション前濃縮物が、水性媒体で希釈される場合、水中油型（ｏ／ｗ）マイクロエマルションが形成される。マイクロエマルション前濃縮物は、本質的に：
ココナツ油及びポリソルベート８０から成る可マイクロエマルション系であって、ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比が１：４〜１：９の範囲にある、可マイクロエマルション系；及び
可マイクロエマルション系中に溶解された脂溶性機能性成分であって、前記可マイクロエマルション系に対する重量比が１０以下である、脂溶性機能性成分、
から成る。

第二の観点では、本発明は、上記のようなマイクロエマルション前濃縮物、及びマイクロエマルション前濃縮物を希釈するための水性媒体を含む、経口投与用のｏ／ｗマイクロエマルションを提供する。

第三の観点では、本発明は、上記のようなｏ／ｗマイクロエマルションを含む、ヘルスケア飲料（健康管理飲料）を提供する。

第四の観点では、本発明は上記のようなマイクロエマルション前濃縮物を調製するための方法を提供し、該方法は以下：脂溶性機能性成分を、ココナツ油と均一に混合し、その後にポリソルベート８０と均一に混合することを含み、ここで、ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比は、１：４〜１：９の範囲にあり、且つココナツ油及びポリソルベート８０の合計に対する脂溶性機能性成分重量比は、１０以下である。

第五の観点では、本発明は：
上記のようなｏ／ｗマイクロエマルションを調製するための方法を提供し、該方法は、マイクロエマルション前濃縮物が形成されるように、脂溶性機能性成分をココナツ油と均一に混合し、その後にポリソルベート８０と均一に混合し；そして
マイクロエマルション前濃縮物を水性媒体で希釈することを含み、
ここで、ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比は、１：４〜１：９の範囲にあり、且つココナツ油及びポリソルベート８０の合計に対する脂溶性機能性成分の重量比は、１０以下である。

本発明の上記及び他の目的、特徴及び利点は、添付の図面と併せて、以下の詳細な説明及び好適な態様を参照して明白になるだろう。

図１は、界面活性剤としてＴｗｅｅｎ８０、油相としてココナツ油、及び水相として脱イオン水を用い、脱イオン水を、５ｇの総重量になるまで、９／１または８／２の界面活性剤／油の比率にある０．５ｇ、１．０ｇ、または１．５ｇの界面活性剤／油混合物に添加し、そして得られた試験サンプルを均一に混合することにより形成された、透明で透き通ったｏ／ｗマイクロエマルションを示す（それにより形成されたマイクロエマルションは、適用された界面活性剤／油の比率、及び添加された脱イオン水の量を標識され；Ｔ９１は、９／１の界面活性剤／油の比率を示し、またＴ８２は、８／２界面活性剤／油の比率を示す）。

図２は、本発明に従い構成される可マイクロエマルション系の三相の略図であり、ここでの可マイクロエマルション系を構成するために使用される油相、界面活性剤、及び水相は、それぞれココナツ油、Ｔｗｅｅｎ８０、及び脱イオン水であり、また図中の斜線域は、マイクロエマルション領域である。

図３は、水相のｐＨ値の変化が、本発明に従い構成される可マイクロエマルション系に有意に影響を及ぼさないことを示し、ここでの可マイクロエマルション系を構成するために使用される油相及び界面活性剤は、それぞれココナツ油及びＴｗｅｅｎ８０であり、可マイクロエマルション系を構成するために使用される水相は、ｐＨ２．０のリン酸緩衝液、ｐＨ３、ｐＨ４、ｐＨ５、もしくはｐＨ６の０．１Ｍのクエン酸−クエン酸ナトリウム緩衝液、またはｐＨ８．０のリン酸緩衝液であり、また図中の斜線域は、マイクロエマルション領域である。

図４は、多様な温度（室温、３７℃、及び５５℃）での、本発明にかかる可マイクロエマルション系の貯蔵安定性を示し、ここで、可マイクロエマルション系を構成するために使用される油相、界面活性剤、及び水相は、それぞれココナツ油、Ｔｗｅｅｎ８０、及び脱イオン水であり、Ｔ９１−１０Ｘは、９／１の界面活性剤／油の比率、及び１０の希釈係数を示し、Ｔ９１−５０Ｘは、９／１の界面活性剤／油の比率、及び５０の希釈係数を示し、Ｔ９１−１００Ｘは、９／１の界面活性剤／油の比率、及び１００の希釈係数を示し、Ｔ８２−１０Ｘは、８／２の界面活性剤／油の比率、及び１０の希釈係数を示し、Ｔ８２−５０Ｘは、８／２の界面活性剤／油の比率、及び５０の希釈係数を示し、並びにＴ８２−１００Ｘは、８／２の界面活性剤／油の比率、及び１００の希釈係数を示す。

図５は、本発明にかかる可マイクロエマルション系を用いて形成されるコエンザイムＱ１０を含有する水中油型マイクロエマルションを示し、ここで、右のサンプル瓶中の液体は、実施例２において調製された生成物であり、また左のサンプル瓶中の液体は、右のサンプル瓶中の産物を、１０倍に希釈にすることにより調製される。

図６は、実施例３において、超高温殺菌の前及び後に調製された２つのマイクロエマルションサンプルの外観を示し、ここでの左側の写真中のマイクロエマルションサンプルを形成するために使用される水相は、脱イオン水であり、また右側の写真中のマイクロエマルションサンプルを形成するために使用される水相は、商業的に入手可能な緑茶である。

図７は、本発明のコエンザイムＱ１０含有製剤、またはコエンザイムＱ１０含有比較製剤を与えられたラットの多様な時点で測定された血漿中のコエンザイムＱ１０濃度（ｐｐｍ）を示す。

図８は、本発明の可マイクロエマルション系を用いて形成されたクルクミンを含有する水中油型マイクロエマルションを示す。

図９は、本発明の可マイクロエマルション系を用いて形成されたβ−カロテンを含有する水中油型マイクロエマルションを示す。

発明の詳細な説明
本明細書において任意の従来技術刊行物が参照される場合、かかる参照は、許可を構成せず、その刊行物が、台湾または任意の他の国における当業界において普及している一般的な知識の一部を形成するということが理解される。

他に定義されていない限り、本明細書において使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する技術分野における当業者に一般的に理解されている意味を有する。当業者は、本明細書において発表されるものと類似する、または同等である、本発明の実行において使用され得る多くの方法及び材料を認識するだろう。実際に本発明は、発表される方法及び材料に限定されることは全くない。

本明細書において使用される移行句「含む（comprising）」、「本質的に〜から成る（consisting essentially of 〜）」、及び「から成る（consisting of）」は、列挙されていない追加の構成要素がある場合、それらが特許請求の範囲から除外されることに関して、添付の特許請求の範囲を定める。用語「含む（comprising）」は、包括的であり、または制約のない、且つ追加の列挙されていない要素または方法ステップを排除しないことが意図される。語句「から成る（consisting of）」は、特許請求の範囲において特定されていない任意の要素、ステップ、または成分を排除する。語句「本質的に〜から成る（consisting essentially of〜）」は、特定された材料またはステップ、並びに特許請求された発明の基本的な特徴及び新規の特徴に物質的に影響を及ぼさないものに特許請求の範囲を限定する。本明細書において特定される全ての組成物または製剤は、代替の態様において、任意の移行句「含む（comprising）」、「本質的に〜から成る（consisting essentially of〜）」、及び「から成る（consisting of）」により詳細に定義されることができる。

ヘルスケア飲料に適するマイクロエマルション組成物を提供するために、出願人は研究を行い、そして、ココナツ油及びポリソルベート８０が特定の重量比で混合される場合、得られる界面活性剤／油混合物が、水性媒体により安定な水中油型（ｏ／ｗ）マイクロエマルションを形成できることを見出した。出願人は、さらにココナツ油及びポリソルベート８０から構成される可マイクロエマルション系により製剤化された脂溶性機能性成分を含むｏ／ｗマイクロエマルションが、大きくても１００ｎｍまでの大きさの粒子径を有し、また透明で透き通った外観を示すことを見出した。さらにｏ／ｗマイクロエマルションを製剤化する工程の間の乳化は、室温及び大気圧で行ってよく、また高圧ホモジナイザーは必要とされない。出願人により設計された本発明のマイクロエマルション化技術は、操作のし易さ、及びコスト効率の良さ等の利点を有するので、脂溶性機能性成分を含むヘルスケア飲料の開発及び生産における使用に非常に適している。

従って本発明は、脂溶性機能性成分を含むマイクロエマルション前濃縮物を提供する。水性媒体を使用してマイクロエマルション前濃縮物が希釈される場合、ｏ／ｗマイクロエマルションが形成される。マイクロエマルション前濃縮物は、本質的に：
ココナツ油及びポリソルベート８０から成る可マイクロエマルション系であって、ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比が１：４〜１：９の範囲にある可マイクロエマルション系；及び
可マイクロエマルション系に溶解される脂溶性機能性成分であって、可マイクロエマルション系に対する脂溶性機能性成分の重量比が１０以下である、
から成る。

さらに本発明は：
上記のマイクロエマルション前濃縮物を調製するための方法であって、該方法は脂溶性機能性成分をココナツ油と均一に混合し、次いでポリソルベート８０と均一に混合することを含み、ここで、ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比が、１：４〜１：９の範囲にあり、且つココナツ油及びポリソルベート８０の合計に対する脂溶性機能性成分の重量比が、１０以下である、方法を提供する。

ココナツ油は、ココヤシ（Ｃｏｃｏｓ ｎｕｃｉｆｅｒａ Ｌ.）から収穫された熟したココナツの果肉または仁から抽出された食用油である。ココナツ油は、主に：４４．６％のラウリン酸、１６．８％のミリスチン酸、８．２％のパルミチン酸、８％のカプリル酸、及び６％のオレイン酸から構成される。

ポリソルベート８０は、ポリエトキシ化ソルビタン及びオレイン酸から由来する非イオン性界面活性剤及び乳化剤である。ポリソルベート８０のブランド名は、Ｔｗｅｅｎ、Ａｌｋｅｓｔ、Ｃａｎａｒｃｅｌ等を含める。

本明細書において使用される用語「脂溶性物質」及び「脂溶性化合物」並びにその類似物は、水性溶液中に容易には溶けないが、脂質と混和性である物質をいう。本発明にかかる用語「脂溶性」及び「油溶性」は、区別せずに使用され得る。

本明細書において使用される用語「機能性成分」は、疾患または疾病の処置、予防、診断、治療または緩和における使用を意図される生理学的に、または薬理学的に活性な物質、或いは消費される動物にある程度の栄養的、または治療的利益を提供する物質を含める。

本発明によれば、脂溶性機能性成分は、これらに限定されないが、コエンザイム（補酵素）Ｑ１０（ＣｏＱ１０）（例えば酸化ＣｏＱ１０、還元ＣｏＱ１０等）、クルクミン、カロテノイド（β-カロテン及びキサントフィル等）、アスタキサンチン、リコピン、レスベラトロル、及びＤＨＡ、またはその組合せを含める。

本発明の好適な態様では、脂溶性機能性成分は、ＣｏＱ１０である。本発明の他の好適な態様では、脂溶性機能性成分は、クルクミンである。本発明のさらに他の好適な態様では、脂溶性機能性成分は、β-カロテンである。

本明細書において使用される用語「水性媒体」とは、その単位体積に関して実質的な水の量を含む液体媒体について言及する。本発明に適する水性媒体は、これらに限定されないが、商業的に入手可能な飲料またはヘルスケア飲料の生産に適する水性媒体、例えば純水、脱イオン水、ミネラル水、フルーツジュース、野菜ジュース、ソフトドリンク（気泡水、コーラ、ルートビア等）、牛乳、ヨーグルト飲料、豆乳、茶飲料、スポーツ飲料等を含める。

本発明の好適な態様では、水性媒体は、脱イオン水である。本発明の他の好適な態様では、水性媒体は、緑茶飲料である。

本発明の好適な態様では、ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比は、１：４である。本発明の他の好適な態様では、ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比は、１：９である。

本発明によれば、脂溶性機能性成分対可マイクロエマルション系の重量比は、好適には１：１００００〜１：１０、より好適には１：１０００〜１：１０、さらにより好適には１：２５０〜１：１０、そして最適には１：１５０〜１：１０の範囲内にある。本発明の好適な態様では、脂溶性機能性成分対可マイクロエマルション系の重量比は、１：３０である。本発明の他の好適な態様では、脂溶性機能性成分対可マイクロエマルション系の重量比は、１：６０である。本発明のさらに他の好適な態様では、脂溶性機能性成分対可マイクロエマルション系の重量比は、１：２５０である。

本発明の好適な態様では、脂溶性機能性成分はＣｏＱ１０であり、且つＣｏＱ１０対可マイクロエマルション系の重量比は、１：３０である。

本発明の他の好適な態様では、脂溶性機能性成分はクルクミンであり、且つクルクミン対可マイクロエマルション系の重量比は、１：６０である。

さらに本発明の他の好適な態様では、脂溶性機能性成分はβ-カロテンであり、且つβ-カロテン対可マイクロエマルション系の重量比は、１：２５０である。

さらに本発明は、上記のようなマイクロエマルション前濃縮物、及びマイクロエマルション前濃縮物を希釈するための水性媒体を含む、経口投与用のｏ／ｗマイクロエマルションを提供する。

さらに本発明は：
上記のようなｏ／ｗマイクロエマルションを調製するための方法であって、マイクロエマルション前濃縮物を形成するために、脂溶性機能性成分をココナツ油と均一に混合し、その後にポリソルベート８０と均一に混合し；そして
マイクロエマルション前濃縮物を水性媒体で希釈することを含み、
ここで、ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比は、１：４〜１：９であり、またココナツ油及びポリソルベート８０の合計に対する脂溶性機能性成分の重量比は１０以下である、方法を提供する。

本発明の調製方法に適する水性媒体は、これらに限定されないが、前述したものを含める。

本発明によれば、マイクロエマルション前濃縮物は、最小量の水性媒体を使用して希釈されることができ、また得られたｏ／ｗマイクロエマルションは、より多くの量の水性媒体を用いてさらに希釈されることができるが、マイクロエマルション中に存在するナノ粒子の粒子径は影響されない。本発明にかかる最小量の水性媒体は、マイクロエマルション前濃縮物の約２倍の重量である。

本発明によれば、水性媒体は、２〜８のｐＨ値、好適には５〜８のｐＨ値を有する。本発明の好適な態様では、水性媒体のｐＨ値は、ｐＨ７等の飲料に適するｐＨ値である。

本発明の調製方法が、商業的に入手可能な飲料またはヘルスケア飲料の生産に適する水性媒体を用いるならば、得られるｏ／ｗマイクロエマルションは、ヘルスケア飲料を生産するために使用され得る。

本発明の調製方法は、室温で、且つ大気圧下で行うことができ、また全ての成分の均一な混合が達成され得るので、高圧ホモジナイザーを必要としない。

本発明は、以下の実施例の手段により、さらに説明されるだろう。しかしながら以下の実施例は、単に説明の目的を意図するものであると理解されるべきであり、また実施において本発明を限定すると解釈されるべきではない。

実施例の原材料：
他に断りのない限り、以下の実施例において使用する水は、脱イオン水である。

以下の原材料： ココナツ油、クエン酸三ナトリウム無水物（sodium citrate tribasic dehydrate）、β-カロテン、及びカルボキシメチルセルロース・ナトリウム（ＣＭＣ）は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ．、米国から購入した。

以下の実施例において使用した１％（ｗ／ｖ）のＣＭＣ溶液は、脱イオン水により調製した。

以下の原材料：Ｔｗｅｅｎ６０、Ｔｗｅｅｎ８０、メタノール、エタノール、ヘキサン、イソプロピルエーテル、リン酸、リン酸一ナトリウム、及びリン酸二ナトリウムは、Ｍｅｒｃｋ Ｌｔｄ.台湾（６Ｆ、Ｎｏ.８９、Ｓｅｃ.２、Ｔｉ−Ｄｉｎｇ Ｂｌｖｄ., Ｎｅｉｈｕ Ｄｉｓｔ., Ｔａｉｐｅｉ Ｃｉｔｙ、台湾)より購入した。

クエン酸は、Ｇｅｍｆｏｎｔ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｇｅｍｆｏｎｔ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ、Ｎｏ.１１６、Ｓｅｃ.１、 Ｈｓｉｎ Ｓｅｎ Ｓ. Ｒｄ.、Ｔａｉｐｅｉ Ｃｉｔｙ、台湾）から購入した。

他に断りのない限り、以下の実施例で使用した３．０〜６．０のｐＨを有するそれぞれの０．１Ｍのクエン酸−クエン酸ナトリウム緩衝液は、クエン酸及びクエン酸ナトリウム（所望されるｐＨ値に応じて特定の比率にある）を脱イオン水に添加し、そして３つの成分を均一に混合し、そして確認のためにｐＨ計を使用して調製した。

ｐＨ２のリン酸緩衝液は、リン酸及びリン酸一ナトリウム（所望されるｐＨ値に応じて特定の比率にある）を脱イオン水に添加し、そして３つの成分を均一に混合し、そして確認のためにｐＨ計を使用して調製した。

ｐＨ８のリン酸緩衝液は、リン酸一ナトリウム及びリン酸二ナトリウム（所望されるｐＨ値に応じて特定の比率にある）を脱イオン水に添加し、そして３つの成分を均一に混合し、そして確認のためにｐＨ計を使用して調製した。

油溶性ＣｏＱ１０（ブランド名：ＰｈａｒｍａＱ１０（商標））は、ＰｈａｒｍａＥｓｓｅｎｔｉａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（１３Ｆ、Ｎｏ．３、ＹｕａｎＱｕ Ｓｔｒｅｅｔ、ＮａｎＫａｎｇ Ｄｉｓｔｒｉｃｔ、Ｔａｉｐｅｉ Ｃｉｔｙ １１５、台湾） から購入した。

クルクミンは、Ｍａｓｔｅｒａｓｉａ Ｍａｒｋｅｔｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ（９Ｆ．、Ｎｏ．１８９、Ｇａｎｇｑｉａｎ Ｒｄ.、Ｎｅｉｈｕ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｐａｒｋ、Ｔａｉｐｅｉ Ｃｉｔｙ、台湾）から購入した。

実施例１．油相としてココナツ油を使用する本発明の可マイクロエマルション系の生成
本発明の可マイクロエマルション系を生成させるために、本実施例において油相としてココナツ油を使用した。さらにマイクロエマルションの形成への、界面活性剤のタイプ及び水性層のｐＨ値の影響を調査し、本発明に従い生成した可マイクロエマルション系の貯蔵安定性への、温度の影響を観察し、そして本発明に従い生成した可マイクロエマルション系の粘性及び粒子径を分析した。

Ａ．本発明の可マイクロエマルション系への界面活性剤の影響
本実験では、マイクロエマルションを形成するのに適する成分及びその比率を決定するために、油相としてココナツ油を使用し、界面活性剤としてＴｗｅｅｎ６０またはＴｗｅｅｎ８０を使用し、そして水相として脱イオン水を使用した。

実験手順：
所定の界面活性剤／油の比率（９／１、８／２、７／３、６／４、５／５、４／６、３／７、２／８、または１／９；ｗ／ｗ；総重量は５０ｇである）にあるココナツ油及び界面活性剤を容器中に入れ、次いで界面活性剤／油混合物を、容器中で磁気撹拌機（Ｃｏｒｎｉｎｇ ＰＣ−４２０Ｄ）により、約８００ｒｐｍの撹拌速度で均一に撹拌した。

均一に撹拌した所定量（０．５ｇ、１．０ｇ、１．５ｇ、２．０ｇ、２．５ｇ、３．０ｇ、３．５ｇ、４．０ｇ、または４．５ｇ）のそれぞれの界面活性剤／油混合物を得て、そして空のサンプル瓶の中に入れ、次いでサンプル瓶中の試験サンプルの総重量が５ｇに達するまで、脱イオン水を添加した。上記と同一の磁気撹拌工程を使用して、それぞれのサンプル瓶中の試験サンプルを撹拌し、そしてマイクロエマルションが形成されたかどうかを確認するために、試験サンプルの外観の変化を観察した。界面活性剤及びココナツ油についての界面活性剤／油の比率、界面活性剤／油混合物を水相で希釈した希釈率、並びに試験サンプルがマイクロエマルションを形成したかどうかに基づく、３相の略図を作図した。

結果：
出願人は、油相としてココナツ油を使用し、且つ界面活性剤としてＴｗｅｅｎ６０を使用した場合、それぞれの界面活性剤／油の比率において形成された界面活性剤／油混合物は、透明で透き通ったマイクロエマルションを形成するために、多様な希釈率にある水相と、均一に混合されることができなかったことを見出した。一方、油相としてココナツ油を使用し、且つ界面活性剤としてＴｗｅｅｎ８０を使用した場合、界面活性剤／油の比率が９／１または８／２において形成された界面活性剤／油混合物は、図１において示すように、透明で透き通ったマイクロエマルションを形成するために、水相と均一に混合されることが可能となった。

それぞれの界面活性剤／油の比率におけるＴｗｅｅｎ８０及びココナツ油が、異なる希釈率にある水相とマイクロエマルションを形成するか否かに基づき、出願人は、図２のように標識した３相の略図を作図した。ここで、図中のマイクロエマルションの形成を示す領域（すなわちマイクロエマルション領域）は、界面活性剤／油の比率が８／２及び９／１の開始を表す２本の希釈線の間の斜線域である。

出願人はさらに：界面活性剤／油の比率が８／２である場合、マイクロエマルションを形成するために必要とされる試験サンプルの水含有量は、約７０％（ｗ／ｗ）以上であり；また界面活性剤／油の比率が９／１に増加した場合、マイクロエマルションを形成するために必要な試験サンプルの水含有量はたった６０％（ｗ／ｗ）以上にすぎないことを見出した。上記の２つの界面活性剤／油の比率の効力により形成された界面活性剤／油混合物を使用して調製した試験サンプルは、その水含有量が必要最小量に達すればマイクロエマルションを形成でき、そして得られたマイクロエマルションは、そこに存在するナノ粒子に負の影響を与えずに大量の水で希釈されることが可能となった。

Ｂ．本発明の可マイクロエマルション系への水相のｐＨ値の影響
ココナツ油及びＴｗｅｅｎ８０がマイクロエマルション形成を可能とするための最も広範な水相のｐＨ範囲を決定するために、本実験において、水相として以下の種々のｐＨ値の緩衝液を使用した：
（１）ｐＨ２．０のリン酸緩衝液；
（２）それぞれ３、４、５、及び６のｐＨ値を有する０．１Ｍのクエン酸−クエン酸ナトリウム緩衝液；並びに
（３）ｐＨ８.０のリン酸緩衝液。

実験手順：
前段落Ａにおいて発表したように、ココナツ油及びＴｗｅｅｎ８０を使用し、種々の界面活性剤／油の比率（９／１、８／２、７／３、６／４、５／５、４／６、３／７、２／８、または１／９；ｗ/ｗ）を有する界面活性剤／油混合物を調製した。均一に撹拌した所定量（０．５ｇ、１．０ｇ、１．５ｇ、２．０ｇ、２．５ｇ、３．０ｇ、３．５ｇ、４．０ｇ、または４．５ｇ）のそれぞれの界面活性剤／油混合物を得て、そして空のサンプル瓶の中に入れ、その後にサンプル瓶中の試験サンプルの総重量が５ｇに達するまで、選定した緩衝液を添加した。それぞれのサンプル瓶中の試験サンプルを、前段落Ａに記載したものと同一の磁気撹拌工程を用いて撹拌し、次いでマイクロエマルションが形成されたか否かを確認するために試験サンプルの外観の変化を観察した。Ｔｗｅｅｎ８０及びココナツ油に関する界面活性剤／油の比率、界面活性剤／油混合物を水相により希釈した希釈率、並びに試験サンプルがマイクロエマルションを形成するか否かに基づき、三相の略図を作図した。

結果：
それぞれの界面活性剤／油の比率にあるＴｗｅｅｎ８０及びココナツ油が、種々の希釈率において選択された緩衝液とマイクロエマルションを形成するか否かに基づき、出願人は、図３のように分類した三相の略図を作図した。図３において示すように、水相のｐＨが４を下回るまで減少した場合に、マイクロエマルション領域は、わずかに減少した。しかしながら概して水相のｐＨ値の変化は、本発明の可マイクロエマルション系の確立に有意な影響を及ぼさない。

Ｃ．本発明の可マイクロエマルション系の貯蔵安定性への温度の影響
本実験では、いかなる温度変化が本発明の可マイクロエマルション系の貯蔵安定性に影響を与えるかを観察した。

実験手順：
前段落Ａにおいて述べたように、Ｔｗｅｅｎ８０及びココナツ油を、９／１または８／２（ｗ／ｗ）の界面活性剤／油の比率で均一に混合し、界面活性剤／油混合物を得た。適量の界面活性剤／油混合物を、空のサンプル瓶の中に入れ、そして脱イオン水で１０倍、５０倍、または１００倍に希釈し、その後にサンプル瓶中で、マイクロエマルションが形成するまで、前段落Ａにおいて発表したものと同一の磁気撹拌工程を介して、得られた試験サンプルを撹拌した。その後にサンプル瓶を室温、３７℃、または５５℃で貯蔵した。種々の時点（０、１、５、７、１２、１６、２１、及び２８日目）で、サンプル瓶から適量のマイクロエマルションを取り出し、そして分光光度計（Ｍｅｒｃｋ Ｓｐｅｃｔｒｏｑｕａｎｔ Ｐｈａｒｏ ３００）を用いて、６００ｎｍでの光透過率分析にかけた。そのようにして得られた結果を、図４に示す。

結果：
図４を参照すると、９／１または８／２（ｗ／ｗ）の界面活性剤／油の比率においてＴｗｅｅｎ８０及びココナツ油を均一に混合することにより形成され、そして得られた界面活性剤／油混合物を、脱イオン水で１０倍、５０倍、または１００倍に希釈したマイクロエマルションを、室温または３７℃で、２８日間貯蔵した場合に、９／１または８／２の界面活性剤／油の比率を有する試験群の光透過率は、有意に変化しなかった。しかしながら貯蔵温度が５５℃まで上昇した場合、８／２の界面活性剤／油の比率を有する試験群は、貯蔵時間と共に白色の濁りを示し、また比較的に低い希釈係数を有する試験群は、比較的に高い程度の濁りを示した。前記の結果は、本発明の可マイクロエマルション系が、室温または３７℃で優れた貯蔵安定性を有し、またＴｗｅｅｎ８０及びココナツ油に関する界面活性剤／油の比率、並びに界面活性剤／油混合物及び水相に関する希釈率による影響を受けないことを明らかにする。

Ｄ. 本発明の可マイクロエマルション系の粘性及び粒子径分析
実験手順：
前段落Ａにおいて述べたしたように、Ｔｗｅｅｎ８０及びココナツ油を、９／１または８／２（ｗ／ｗ）の界面活性剤／油の比率で均一に混合し、界面活性剤／油混合物を得た。適量の界面活性剤／油混合物を、空のサンプル瓶の中に入れ、そして脱イオン水で１０倍に希釈し、その後にサンプル瓶中で、マイクロエマルションが形成されるまで、前段落Ａにおいて発表したものと同一の磁気撹拌工程を介して、得られた試験サンプルを撹拌した。その後にそれぞれのサンプル瓶中のマイクロエマルションサンプルを、粘度計（Ｎａｍｅｔｅｒ ｖｉｓｃｏｍｅｔｅｒ １８１０ ＳＦ）及び粒子径分析器（Ｂｅｃｋｍａｎ ４４０ＳＸ Ｄｅｌｓａ Ｌａｓｅｒ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｍｅａｓｕｒｉｎｇ Ｄｅｖｉｃｅ）を用いて分析した。

結果：
本実験において調製したそれぞれ２つのマイクロエマルションサンプルの水含有量は、共に９０重量％であった。表１を参照すると、これらの２つのマイクロエマルションサンプルが、約３．５〜４ｃＰの粘性を有することを決定した。純水の粘性（１ｃＰ）と比較して、これらの２つのマイクロエマルションサンプルの粘性は、有意に高くない。粒子径を考慮すれば、９／１の界面活性剤／油の比率を伴うマイクロエマルションサンプルは、約１．９ｎｍの平均粒子径を有するのに対して、８／２の界面活性剤／油の比率を伴うマイクロエマルションサンプルは、約３．７３ｎｍの平均粒子径を有する。前記を考慮すれば、より多くの界面活性剤が、より小さな粒子径の分散相に添加される（すなわちナノ粒子は、マイクロエマルション中に分散される）。

実施例２．ＣｏＱ１０含有ｏ／ｗマイクロエマルションの調製
本実施例では、前記の実施例１にかかる可マイクロエマルション系を使用して、ＣｏＱ１０含有ｏ／ｗマイクロエマルションを調製した。可マイクロエマルション系では、ココナツ油は、油相としての機能を果たし、Ｔｗｅｅｎ８０は、界面活性剤としての機能を果たし、また脱イオン水は、水相としての役割を果たし；そしてＴｗｅｅｎ８０及びココナツについての界面活性剤／油の比率は、８／２である。

実験手順：
超音波振動クリーナー（Ｄｅｌｔａ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ Ｃｌｅａｎｅｒ ＤＣ４００）を伴う超音波振動工程の効力により、１０００ｍｇの油溶性ＣｏＱ１０を、６ｇのココナツ油中に均一に溶かした。もう一つの方法として、ＣｏＱ１０は、油相（例えばココナツ油）中に、迅速に均等に分散されてよく、それは一般的な磁気撹拌器を用いても達成されることが可能である。

その後、得られたＣｏＱ１０/ココナツ油混合物中に、磁気撹拌工程の効力により２４ｇのＴｗｅｅｎ８０を添加した。前記の成分を完全に均一に混合した後に、６９ｇの脱イオン水を添加した。このようにして得られた混合物を、ゲル状の物質がそこに存在しなくなるまで、継続して磁気撹拌にかけた。粒子径分析器を用いて、得られた最終産物を分析した。１０ｇの最終産物を得て、そして脱イオン水を用いて１０倍に希釈し、その後に外観の変化を観察した。

結果：
図５の右のサンプル瓶を参照すると、本実施例において得られた最終生成物は、１０ｍｇ／ｇのＣｏＱ１０を含むオレンジ色のｏ／ｗマイクロエマルションであり、それは、約６０．２ｎｍの平均粒子径を有すると決定された。出願人は、マイクロエマルションを水性媒体により希釈し、所望されるレベルにその濃度を調節することができ、その間にマイクロエマルションの平均粒子径は、希釈工程による影響を受けないことを見出した。例えば図５において示す左のサンプル瓶中の黄色の液体は、本実施例において得られた最終生成物を、脱イオン水で１０倍に希釈することにより形成され、且つ希釈前と同じ平均粒子径を有する、１ｍｇ／ｇのＣｏＱ１０を含むｏ／ｗマイクロエマルションである。

実施例３．本発明の可マイクロエマルション系への高温殺菌の影響
本実施例の目的は、高温殺菌が、本発明の可マイクロエマルション系を用いて形成されたＣｏＱ１０含有ｏ／ｗマイクロエマルションに影響を与えるかどうかを調査することである。

実験手順：
実施例２と類似する方法において、超音波振動クリーナー（Ｄｅｌｔａ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ Ｃｌｅａｎｅｒ ＤＣ４００）を伴う超音波振動工程の効力により、２５０ｍｇの油溶性ＣｏＱ１０を、５ｇのココナツ油に均一に溶かした。その後に２０ｇのＴｗｅｅｎ８０を、磁気撹拌工程の効力により、得られたＣｏＱ１０／ココナツ油混合物に添加した。前記成分を完全に均一に混合した後に、５０００ｍＬの脱イオン水、または４０００ｍＬの商業的に入手可能な緑茶を添加した。このようにして得られた混合物を、ゲル状の物質がそこに存在しなくなるまで、継続して磁気撹拌にかけた。得られた最終産物のアリコート（１０ｍＬ／瓶）を得て、そして１３５℃、及び３〜５秒の殺菌条件下で、ＵＨＴ／ＨＴＳＴ（高温短時間）滅菌器（出願人は、ＴＷ実用新案第１００９６０号の技術的な開示に従い、滅菌器を構築した）を用いて、超高温（ＵＨＴ）殺菌にかけた。

結果：
飲料の生産に関して、ＵＨＴ殺菌またはＨＴＳＴ殺菌は、一般的な殺菌方法である。殺菌は、通常、１３０℃〜１４５℃の温度で、２〜５秒間行う。図６は、本実施例において調製した、ＵＨＴ殺菌前及び後の２つのマイクロエマルションサンプルの外観を示す。左側の写真のマイクロエマルションサンプルを形成するために使用した水相は、脱イオン水であり、また右側の写真のマイクロエマルションサンプルを形成するために使用した水相は、商業的に入手可能な緑茶である。図６に示すように、本実施例において調製した２つのマイクロエマルションサンプルが、ＵＨＴ殺菌後にその外観に有意な変化を示さなかったことから、ＵＨＴ殺菌は、本発明の可マイクロエマルション系を用いて形成されるｏ／ｗマイクロエマルションに適していることを示す。

実施例４．ラット給餌試験
本実施例の目的は、本発明の可マイクロエマルション系を用いて形成されたＣｏＱ１０含有ｏ／ｗマイクロエマルション製剤に関し、経口吸収率を研究することである。

実験材料：
Ａ．給餌サンプル：
本発明の製剤のサンプルは、実施例２に従い調製したものであり、１０ｍｇ／ｇの脂溶性ＣｏＱ１０、８重量％のＴｗｅｅｎ８０、２重量％のココナツ油、及び残りの重量の割合を占める量の脱イオン水を含む、油溶性ＣｏＱ１０含有ｏ／ｗマイクロエマルションである。

比較製剤のサンプルは、１０ｍｇ／ｍＬの油溶性ＣｏＱ１０を含む１％のＣＭＣ溶液である。

Ｂ．試験動物：
１週間順応させた７週齢の雄性ＳＬＣ：ＳＤラット（Ｊａｐａｎ ＳＬＣ, Ｉｎｃ.,Ｈａｍａｍａｔｓｕ、日本）を、本動物試験において使用する。順応過程の間、２０℃〜２６℃の温度、４０〜７０％の湿度、及び１２時間明／１２時間暗サイクルの条件下で、ラットを動物室で育て；そして固形の餌（ＣＥ−２、ＣＬＥＡ Ｊａｐａｎ, Ｉｎｃ., Ｔｏｋｙｏ、日本）、及び水道水に自由に近づけるようにした。

実験手順：
給餌量：６０ｍｇのＣｏＱ１０／ｋｇ体重の単回用量を、それぞれのラットに投与し、３匹のラットを用いて、それぞれの製剤のサンプルを試験した。

サンプリング時間：給餌前、及び給餌０．５、１、２、４、８、１２、２４時間後に尾動脈から、０．５ｍＬの血液を採取し、遠心分離にかけた。その後に得られた血漿サンプルを、−２０℃で貯蔵した。

抽出工程：解凍した血漿サンプル（２００μＬ)を、（Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｖｏｒｔｅｘ−Ｇｅｎｉｅ２を用いて）２００μＬのエタノールと均一に混合し、その後に２００μＬのヘキサンと均一に混合した。（Ｄｅｌｔａ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ Ｃｌｅａｎｅｒ ＤＣ４００を用いる）５分の超音波振動後に、そのようにして得られた混合物を、（Ｈｅｒａｅａｓ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｂｉｏｆｕｇｅ ｆｒｅｓｃｏを用いて；１２，０００ｒｐｍで；１０分間)遠心分離にかけた。その後、そのようにして形成された有機層を得て、そして（ＢＵＣＨＩ Ｒ−２１５を用いて）減圧乾燥にかけた。得られた乾燥産物を、３００μＬのエタノールに再度溶かし、その後にＨＰＬＣシステム（Ａｇｉｌｅｎｔ, Ｓｅｒｉｅｓ １２００）を介して、高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析を行った。

ＨＰＬＣ操作条件：
１．カラム：Ｍｅｒｃｋ Ｃ−１８カラム（２５０×４ｍｍ、５μｍ）
２．移動相：メタノール／イソプロピルエーテル（８５：１５）；定組成溶離(isocratic elution)
３．検出波長：２７５ｎｍ
４．流量：１ｍＬ／分
５．サンプル注入容積：５０μＬ
６．カラム温度：３５℃

結果：
図７を参照すると、本発明の製剤は、比較製剤と対比して、ラットの血漿中のＣｏＱ１０濃度を迅速に高めることができる。表２は、６０ｍｇ／ｋｇの投与量でＣｏＱ１０を給餌したラットに関する血漿薬物動態係数を示す。本発明の製剤を給餌したラットに関するＣｏＱ１０のピーク血漿濃度（Ｃ_max）及び曲線下面積（ＡＵＣ）は、共に比較製剤を給餌したラットに関するものよりも有意に高かったと決定された。これらの結果は、本発明の可マイクロエマルション系を用いて調製されるＣｏＱ１０製剤が、ＣｏＱ１０の経口吸収率を確実に高めることができることを明らかにする。前記を考慮すれば、本発明の可マイクロエマルション系は、ヘルスケア飲料に適する油溶性の生物活性物質を含む、ｏ／ｗマイクロエマルション製剤を調製するために使用されることができると考えられる。

実施例５．クルクミン含有ｏ／ｗマイクロエマルションの調製
本実施例の目的は、実施例２にかかるクルクミン含有ｏ／ｗマイクロエマルションを調製することである。

実験手順：
５００ｍｇのクルクミンを、超音波振動クリーナー（Ｄｅｌｔａ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ Ｃｌｅａｎｅｒ ＤＣ４００）を伴う超音波振動工程の効力により、６ｇのココナツ油に均一に溶かした。その後、２４ｇのＴｗｅｅｎ８０を、磁気撹拌工程の効力により、得られたクルクミン／ココナツ油混合物中に添加した。前記成分を完全に均一に混合した後に、総重量が１００ｇに達するまで脱イオン水を添加した。このようにして得られた混合物を、ゲル状の物質がそこに存在しなくなるまで、継続して磁気撹拌にかけた。得られた最終生成物物を、粒子径分析器を用いて分析した。

結果：
図８を参照すると、本実施例において得られた最終生成物は、５ｍｇ／ｇのクルクミンを含むオレンジ色のｏ／ｗマイクロエマルションであり、それは約４５．７ｎｍの平均粒子径を有すると決定された。同様に本実施例において得られたクルクミン含有マイクロエマルションは、所望されるレベルにその濃度を調節するために、水性媒体により希釈されることができる。

実施例６．β-カロテン含有ｏ／ｗマイクロエマルションの調製
本実施例の目的は、実施例２にかかるβ-カロテン含有ｏ／ｗマイクロエマルションを調製することである。

実験手順：
１２０ｍｇのβ-カロテンを、超音波振動クリーナー（Ｄｅｌｔａ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ Ｃｌｅａｎｅｒ ＤＣ４００）を伴う超音波振動工程の効力により、６ｇのココナツ油に均一に溶かした。その後、２４ｇのＴｗｅｅｎ８０を、磁気撹拌工程の効力により、得られたβ-カロテン／ココナツ油混合物中に添加した。前記成分を完全に均一に混合した後に、総重量が１００ｇに達するまで脱イオン水を添加した。このようにして得られた混合物を、ゲル状の物質がそこに存在しなくなるまで、継続して磁気撹拌にかけた。得られた最終生成物を、粒子径分析器を用いて分析した。

結果：
図９を参照すると、本実施例において得られた最終生成物は、１．２ｍｇ／ｇのβ-カロテンを含むオレンジ色のｏ／ｗマイクロエマルションであり、それは約４７．１ｎｍの平均粒子径を有すると決定された。同様に本実施例において得られたβ-カロテン含有マイクロエマルションは、所望されるレベルにその濃度を調節するために、水性媒体により希釈されることができる。

本明細書において引用される全ての特許及び文献参照、並びにそれらに発表される参照は、それらの全体において参照により本明細書中に組み込まれる。コンフリクトの場合は、請求の範囲を含む本願明細書の記載が優勢となるだろう。

本発明は、その特定の態様に関連して発表されるが、それは、さらなる変更が可能であることが理解され、並びに本願は、一般に本発明の原理に従い、且つ当業界における慣行または慣例の範囲内にあり、また上記に発表した本質的な特徴に適合でき、また添付の特許請求の範囲に従うような、本開示からの逸脱等を含める本発明の任意の変化、用途、または適応に及ぶことが意図される。

Claims (19)

1. ココナツ油及びポリソルベート８０から成る可マイクロエマルション系であって、前記ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比が１：４〜１：９の範囲にある、可マイクロエマルション系；及び
   前記可マイクロエマルション系中に溶解される脂溶性機能性成分であって、前記可マイクロエマルション系に対する重量比が１０以下である、脂溶性機能性成分
   を含む、マイクロエマルション前濃縮物であって、前記ココナツ油は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、カプリル酸及びオレイン酸を含む、マイクロエマルション前濃縮物。
2. 前記脂溶性機能性成分対前記可マイクロエマルション系の重量比が、１：１００００〜１：１０の範囲にある、請求項１に記載のマイクロエマルション前濃縮物。
3. 前記脂溶性機能性成分が、コエンザイムＱ１０（ＣｏＱ１０）、クルクミン、カロテノイド、アスタキサンチン、リコピン、レスベラトロル、ＤＨＡ、及びその組合せから選択される、請求項１に記載のマイクロエマルション前濃縮物。
4. 前記ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比が１：４である、請求項１に記載のマイクロエマルション前濃縮物。
5. 前記ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比が１：９である、請求項１に記載のマイクロエマルション前濃縮物。
6. 請求項１に記載のマイクロエマルション前濃縮物、及び前記マイクロエマルション前濃縮物を希釈するための水性媒体を含む、経口投与のための水中油型（ｏ／ｗ）マイクロエマルション。
7. 前記水性媒体が、純水、脱イオン水、ミネラル水、フルーツジュース、野菜ジュース、気泡水、コーラ、ルートビア（root beer）、牛乳、ヨーグルト飲料、豆乳、茶飲料、及びスポーツ飲料から選択される、請求項６に記載のｏ／ｗマイクロエマルション。
8. 請求項６に記載のｏ/ｗマイクロエマルションを含む、ヘルスケア飲料。
9. マイクロエマルション前濃縮物を調製するための方法であって、
   該方法は、脂溶性機能性成分をココナツ油と均一に混合し、その後にポリソルベート８０と均一に混合することを含み、
   ここで、前記ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比が、１：４〜１：９の範囲にあり、且つ前記ココナツ油及びポリソルベート８０の合計に対する前記脂溶性機能性成分の重量比が１０以下であり、そして
   前記ココナツ油は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、カプリル酸及びオレイン酸を含む、方法。
10. 前記脂溶性機能性成分対前記ココナツ油及びポリソルベート８０の合計の重量比が、１：１００００〜１：１０の範囲にある、請求項９に記載の方法。
11. 前記脂溶性機能性成分が、ＣｏＱ１０、クルクミン、カロテノイド、アスタキサンチン、リコピン、レスベラトロル、ＤＨＡ、及びそれらの組合せから選択される、請求項９に記載の方法。
12. 前記ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比が１：４である、請求項９に記載の方法。
13. 前記ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比が１：９である、請求項９に記載の方法。
14. 経口投与のためのｏ/ｗマイクロエマルションを調製するための方法であって、
    該方法は、マイクロエマルション前濃縮物を形成するために、脂溶性機能性成分をココナツ油と均一に混合し、その後、ポリソルベート８０と均一に混合し；そして
    前記マイクロエマルション前濃縮物を水性媒体で希釈することを含み、
    ここで、前記ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比が、１：４〜１：９の範囲にあり、且つ前記ココナツ油及びポリソルベート８０の合計に対する前記脂溶性機能性成分の重量比が１０以下であり、そして
    前記ココナツ油は、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、カプリル酸及びオレイン酸を含む、方法。
15. 前記脂溶性機能性成分対前記ココナツ油及びポリソルベート８０の合計の重量比が、１：１００００〜１：１０の範囲にある、請求項１４に記載の方法。
16. 前記脂溶性機能性成分が、ＣｏＱ１０、クルクミン、カロテノイド、アスタキサンチン、リコピン、レスベラトロル、ＤＨＡ、及びそれらの組合せから選択される、請求項１４に記載の方法。
17. 前記水性媒体が、純水、脱イオン水、ミネラル水、フルーツジュース、野菜ジュース、気泡水、コーラ、ルートビア（root beer）、牛乳、ヨーグルト飲料、豆乳、茶飲料、及びスポーツ飲料から選択される、請求項１４に記載の方法。
18. 前記ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比が１：４である、請求項１４に記載の方法。
19. 前記ココナツ油対ポリソルベート８０の重量比が１：９である、請求項１４に記載の方法。