JP6272880B2 - アルポート症候群の処置方法 - Google Patents

Description

本明細書で提供されるのは、アルポート症候群を処置するための方法および組成物である。

基底膜の主要成分であるＩＶ型コラーゲンは、６種のα鎖：α１コラーゲン（ＩＶ型）鎖、α２コラーゲン（ＩＶ型）鎖、α３コラーゲン（ＩＶ型）鎖、α４コラーゲン（ＩＶ型）鎖、α５コラーゲン（ＩＶ型）鎖およびα６コラーゲン（ＩＶ型）のファミリーである。コラーゲンＩＶのα３鎖、α４鎖およびα６鎖は、腎臓による血液の濾過という重要な機能を行う糸球体基底膜（ＧＢＭ）のコラーゲンネットワークの基本成分である。

アルポート症候群は、異常型の糸球体基底膜（ＧＢＭ）が出現して、間質線維症、糸球体硬化をきたし、最終的に腎機能の喪失に至る遺伝性の腎疾患である。本疾患はさらに、難聴および眼球異常を特徴とする場合が多い。アルポート症候群は、それぞれＩＶ型コラーゲンのα３（ＩＶ）鎖、α４（ＩＶ）鎖およびα５（ＩＶ）鎖をコードするＣｏｌ４ａ３、Ｃｏｌ４ａ４またはＣｏｌ４ａ５の突然変異により引き起こされる。Ｘ染色体上のＣｏｌ４ａ５遺伝子の突然変異はＸ連鎖型アルポート症候群を引き起こし、本疾患の全症例の８５％を占める。常染色体劣性型は、各々２番染色体上に位置するＣｏｌ４ａ３あるいはＣｏｌ４ａ４の何れかのコピーの突然変異がそれぞれ遺伝することによる。稀な常染色体優性型は、Ｃｏｌ４ａ３あるいはＣｏｌ４ａ４遺伝子の何れかのドミナントネガティブ突然変異の遺伝による。Ｘ連鎖型は女性より男性の方が症状が重く、男性の大部分の症例は末期腎臓病（ＥＳＲＤ）に進行する。常染色体性型は、男女の重症度が同程度である。本疾患の大部分の症例は遺伝性突然変異によるが、一部の症例は、Ｃｏｌ４ａＡ遺伝子の１つの新規突然変異によるものである。

本明細書で提供されるのは、アルポート症候群を処置するための方法であって、アルポート症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体に、１２〜２５個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを投与することを含み、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１と相補的である方法である。ある種の実施形態では、被検体は修飾オリゴヌクレオチドを投与する前にアルポート症候群を有すると診断されている。ある種の実施形態では、被検体は、修飾オリゴヌクレオチドの投与の前に、被検体の腎臓組織においてｍｉＲ−２１のレベルが増加していると判定された。ある種の実施形態では、被検体は、修飾オリゴヌクレオチドの投与の前に、被検体の尿中または血液中のｍｉＲ−２１のレベルが増加していると判定された。

本明細書に提供される実施形態の何れかでは、アルポート症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体への、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドの投与は、腎機能を改善する；末期腎臓病の発症を遅延させる；透析までの時間を遅延させる；腎移植までの時間を遅延させる；および／または被検体の平均余命を改善することができる。

本明細書に提供される実施形態の何れかでは、アルポート症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体への、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドの投与は、血尿を減少させる；血尿の発症を遅延させる；タンパク尿を減少させる；タンパク尿の発症を遅延させる；腎線維症を減少させる；線維症の更なる進行を遅延させる；および／または線維症の更なる進行を阻止することができる。

本明細書に提供される実施形態の何れかでは、被検体は、ＩＶ型コラーゲンのα３鎖をコードする遺伝子の突然変異、ＩＶ型コラーゲンのα４鎖をコードする遺伝子の突然変異、またはＩＶ型コラーゲンのα５鎖をコードする遺伝子の突然変異から選択される突然変異を有し得る。ある種の実施形態では、被検体は男性（雄）である。ある種の実施形態では、被検体は女性（雌）である。ある種の実施形態では、被検体は血尿および／またはタンパク尿を有すると確認される。ある種の実施形態では、被検体は腎機能が低下している。ある種の実施形態では、被検体は腎機能の改善を必要としている。

本明細書に提供される実施形態の何れかは、被検体の血液中の血中尿素窒素を測定すること；被検体の血液中のクレアチニンを測定すること；被検体のクレアチニンクリアランスを測定すること；被検体のタンパク尿を測定すること；被検体のアルブミン：クレアチニン比を測定すること；および／または被検体の糸球体濾過量を測定することを含んでもよい。

本明細書に提供される実施形態の何れかは、被検体の尿中のＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ（ＮＡＧ）タンパク質を測定すること；被検体の尿中の好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）タンパク質を測定すること；被検体の尿中の腎臓傷害分子−１（ｋｉｄｎｅｙ ｉｎｊｕｒｙ ｍｏｌｅｃｕｌｅ：ＫＩＭ−１）タンパク質を測定すること；被検体の尿中のインターロイキン−１８（ＩＬ−１８）タンパク質を測定すること；被検体の尿中の単球走化性タンパク質（ＭＣＰ１）レベルを測定すること；被検体の尿中の結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）レベルを測定すること；被検体の尿中のコラーゲンＩＶ（Ｃｏｌ ＩＶ）フラグメントを測定すること；被検体の尿中のコラーゲンＩＩＩ（Ｃｏｌ ＩＩＩ）フラグメントを測定すること；および／または被検体の尿中の有足細胞タンパク質（有足細胞タンパク質はネフリンおよびポドシンから選択される）レベルを測定することを含んでもよい。本明細書に提供される実施形態の何れかは、被検体の血液中のシスタチンＣタンパク質を測定すること；被検体の血液中のβトレースタンパク質（ＢＴＰ）を測定すること；および被検体の血液中の２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）を測定することを含んでもよい。

本明細書で提供される方法の何れかは、被検体の血中尿素窒素の低下；被検体の血液中のクレアチニンの低下；被検体のクレアチニンクリアランスの改善；被検体のタンパク尿の減少；被検体のアルブミン：クレアチニン比の低下；および／または被検体の糸球体濾過量の改善から選択される被検体の腎機能の１つまたは複数のマーカーの改善を行うことができる。本明細書で提供される方法の何れかは、被検体の尿中のＮＡＧの低下；被検体の尿中のＮＧＡＬの低下；被検体の尿中のＫＩＭ−１の低下；被検体の尿中のＩＬ−１８の低下；被検体の尿中のＭＣＰ１の低下；被検体の尿中のＣＴＧＦの低下；被検体の尿中のコラーゲンＩＶフラグメントの低下；被検体の尿中のコラーゲンＩＩＩフラグメントの低下；および被検体の尿中の有足細胞タンパク質レベル（有足細胞タンパク質はネフリンおよびポドシンから選択される）の低下から選択される被検体の腎機能の１つまたは複数のマーカーの改善を行うことができる。本明細書で提供される方法の何れかは、被検体の血液中のシスタチンＣタンパク質の低下、被検体の血液中のβトレースタンパク質（ＢＴＰ）の低下、および被検体の血液中の２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の低下から選択される腎機能の１つまたは複数のマーカーの改善を行うことができる。

本明細書に提供される実施形態の何れかでは、タンパク尿はアルブミン尿である。アルブミン尿は正常高値アルブミン尿でも、微量アルブミン尿でも、あるいは顕性アルブミン尿でもよい。

ある種の実施形態では、アルポート症候群はＸ連鎖型アルポート症候群である。ある種の実施形態では、アルポート症候群は常染色体性型のアルポート症候群である。

本明細書に提供される実施形態の何れかは、アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、降圧薬、ビタミンＤアナログ、経口リン吸着薬、透析および腎臓移植から選択される少なくとも１つの追加治療を行うことを含んでもよい。これらの実施形態の何れかでは、アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤は、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリルおよびラミプリルから選択される。これらの実施形態の何れかでは、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）は、カンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタンおよびエプロサルタンから選択される。これらの実施形態の何れかでは、ＡＣＥ阻害剤は、シラザプリル、ペリンドプリルおよびトランドラプリルから選択される。

ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、０．５〜１ｍｇ／ｍ^２／日、１〜６ｍｇ／ｍ^２／日、１〜２ｍｇ／ｍ^２／日、２〜４ｍｇ／ｍ^２／日、または４〜８ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。

ある種の実施形態では、ＡＲＢは、６．２５〜１５０ｍｇ／ｍ２／日の範囲にわたる用量で投与される。これらの実施形態の何れかでは、ＡＲＢは、６．２５ｍｇ／ｍ^２／日、１０ｍｇ／ｍ^２／日、１２．５ｍｇ／ｍ^２／日、１８．７５ｍｇ／ｍ^２／日、３７．５ｍｇ／ｍ^２／日、５０ｍｇ／ｍ^２／日、または１５０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。

ある種の実施形態では、少なくとも１つの追加治療はアルドステロンアンタゴンシストである。ある種の実施形態では、アルドステロンアンタゴニストはスピロノラクトンである。ある種の実施形態では、スピロノラクトンは１日１０〜３５ｍｇの範囲にわたる用量で投与される。ある種の実施形態では、スピロノラクトンは１日２５ｍｇの用量で投与される。

本明細書に提供される実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−２１の核酸塩基配列（配列番号１）と少なくとも９０％相補的、少なくとも９５％相補的または１００％相補的である。

本明細書に提供される実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、８〜３０個、１２〜２５個または１５〜２５個連結したヌクレオシドからなる。本明細書に提供される実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個または２２個連結したヌクレオシドからなる。本明細書に提供される実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個または２２個連結したヌクレオシドからなる。

本明細書に提供される実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドは少なくとも１個の修飾ヌクレオシドを含む。修飾ヌクレオシドは、Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド、およびＬＮＡヌクレオシドから選択してもよい。修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含んでもよい。修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は各々、修飾ヌクレオシド間結合であってもよい。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

本明細書に提供される実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドは構造５’−Ａ_ＥＣ_ＳＡＴＣ_ＳＡＧＴＣ_ＳＴＧＡＵ_ＳＡＡＧＣ_ＳＴＡ_Ｅ−３’（配列番号３）を有してもよく、後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し、ヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

本明細書で提供されるのは、８〜３０個、１２〜２５個または１５〜２５個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列がｍｉＲ−２１と相補的である修飾オリゴヌクレオチドの、アルポート症候群の処置のための使用である。

抗ｍｉＲ−２１は、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの腎機能を改善させる。図１Ａは９週目の血中尿素窒素（ＢＵＮ）を示す。図１Ｂは３週目、５週目、７週目および９週目の尿中アルブミン／クレアチニン比を示す。＊は統計学的有意性を示す。 抗ｍｉＲ−２１は、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの糸球体硬化症を予防する。糸球体硬化症は、０（硬化症なし）〜４（完全な硬化症）の範囲にわたる半定量的硬化スコアを用いて評価した（ｎ＝１０）。 抗ｍｉＲ−２１は、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの線維症を減少させる。図３Ａは、腎臓におけるピクロシリウス（シリウス）レッド染色線維症の定量を示す（ｎ＝６）。図３Ｂは、ＧＡＰＤＨに対して標準化したＣｏｌ１ａ１転写物の定量ＰＣＲを示す（ｎ＝６）。＊は統計学的有意性を示す。 抗ｍｉＲ−２１はＣｏｌ４ａ３−／−マウスの腎臓傷害の順位を低下させる。図４Ａは９週齢のマウスの腎切片の腎臓傷害順位スコアを示す。図４Ｂは糸球体半月体の比率を示す（ｎ＝５）。図４Ｃは尿細管傷害の定量を示す（ｎ＝５）。＊は統計学的有意性を示す。 図５Ａでは、抗ｍｉＲ−２１はＣｏｌ４ａ３−／−マウスのマクロファージ浸潤を減少させる。９週齢のマウスの腎切片のＦ４／８０染色の定量を示す（ｎ＝５）。図５Ｂでは、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの筋線維芽細胞を減少させる。９週齢のマウスの腎切片のαＳＭＡ染色の定量を示す（ｎ＝５）。＊は統計学的有意性を示す。 抗ｍｉＲ−２１はＣｏｌ４ａ３−／−マウスの反応性酸素種を減少させる。図６Ａは抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの尿中の過酸化水素の定量を示す（ｎ＝８；＊は統計学的有意性を示す）。図６Ｂは、抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウス、および野生型マウスの腎臓組織のＤＥＳの定量を示す（各群ｎ＝３；＊統計学的有意性を示す）。 抗ｍｉＲ−２１は、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの有足細胞数を改善する。抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの糸球体におけるＷＴ１陽性細胞数の定量を示す（ｎ＝３；ｐ＝０．００５）。 抗ｍｉＲ−２１はＣｏｌ４ａ３−／−マウスの寿命を延長する。図８Ａは、抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの体重を示す（ｐ＜０．０１）。図８Ｂは、抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの寿命を示す（ｐ＜０．００１）。 抗ｍｉＲ−２１は用量反応性に、腎機能を改善し、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの寿命を延長する（各処置群ｎ＝１０〜１３）。図９Ａは、週１回（ＱＷ）もしくは週２回（ＢＩＷ）の反復投与にて抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの７週目の血中尿素窒素を示す。図９Ｂは、週１回（ＱＷ）もしくは週２回（ＢＩＷ）の反復投与にて抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳ対照で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの寿命を示す。

他に記載がない限り、本明細書で使用する技術用語及び科学用語は全て、本発明が属する技術分野の当業者が一般に理解しているのと同じ意味を持つ。具体的な定義がなされていない場合、本明細書に記載の分析化学、有機合成化学並びに創薬化学及び薬化学に関連して使用される用語と、本明細書に記載の分析化学、有機合成化学並びに創薬化学及び薬化学の手順及び技法とは、当該技術分野において公知であり、一般に用いられるものである。本明細書の用語に複数の定義が存在する場合、本セクションの定義が優先する。化学合成、化学分析、医薬品の調製、製剤及び送達、並びに被検体の処置には、標準的な技法を使用することができる。ある種のそうした技法及び手順は、例えば「Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ」Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｓａｎｇｖｉ ａｎｄ Ｃｏｏｋ，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，１９９４；及び「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，」Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９０で確認することができ、更に、これらをいかなる目的においても本明細書に援用する。許容される場合、特許、特許出願、公開された出願及び公報、ＧＥＮＢＡＮＫ配列、ウェブサイト、及び本明細書の開示内容全体を通して参照した他の公開資料は、他に記載がない限り、その全体を援用する。ＵＲＬまたは他のそうした識別子またはアドレスに言及する場合、そうした識別子は変更されることがあり、インターネット上の特定の情報も変更される場合があるが、インターネットの検索により、対応する情報を確認することができることが理解されよう。それを参照することにより、そうした情報の利用可能性及び一般への提供が明らかにされる。

本組成物及び方法を開示し、説明するのに先立ち、本明細書に使用される用語は、特定の実施形態を説明するためのものにすぎず、限定的であることを意図するものではないことを理解されたい。本明細書及び添付の特許請求の範囲に使用する場合、単数形表現「１つの（ａ、ａｎ）」及び「前記（ｔｈｅ）」は、文脈上明らかに他の意味に解すべき場合を除き、複数の意味を含むことに留意しなければならない。

定義
「アルポート症候群」は、異常なレベルの糸球体基底膜（ＧＢＭ）が産生され、間質線維症、糸球体硬化をきたし、最終的には腎機能の喪失に至る遺伝性の腎疾患を意味する。本疾患はさらに難聴および眼球異常を特徴とする場合が多い。

「血尿」は尿中に赤血球が存在することを意味する。

「アルブミン尿」は、尿中に過剰なアルブミンが存在することを意味し、以下に限定されるものではないが、正常アルブミン尿、正常高値アルブミン尿、微量アルブミン尿及び顕性アルブミン尿を含む。通常、糸球体濾過障壁は有足細胞、糸球体基底膜及び内皮細胞からなり、血清タンパク質が尿に漏出するのを防止する。アルブミン尿は、糸球体濾過障壁の損傷を反映すると考えられる。アルブミン尿は、２４時間尿サンプル、夜間尿サンプルまたはスポット尿サンプルから算出することができる。

「正常高値アルブミン尿」は、（ｉ）２４時間当たりのアルブミンの尿への排泄量が１５〜＜３０ｍｇ及び／または（ｉｉ）男性のアルブミン／クレアチニン比が１．２５〜＜２．５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または１０〜＜２０ｍｇ／ｇ）または女性の場合１．７５〜＜３．５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または１５〜＜３０ｍｇ／ｇ）であることを特徴とする高アルブミン尿を意味する。

「微量アルブミン尿」は、（ｉ）２４時間当たりのアルブミンの尿への排泄量が３０〜３００ｍｇ及び／または（ｉｉ）男性のアルブミン／クレアチニン比が２．５〜＜２５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または２０〜＜２００ｍｇ／ｇ）または女性の場合３．５〜＜３５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または３０〜＜３００ｍｇ／ｇ）を特徴とする高アルブミン尿を意味する。

「顕性アルブミン尿」は、２４時間当たりのアルブミンの尿への排泄量が３００ｍｇ超及び／または（ｉｉ）男性のアルブミン／クレアチニン比が＞２５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または＞２００ｍｇ／ｇ）または女性の場合＞３５ｍｇ／ｍｍｏｌ（または＞３００ｍｇ／ｇ）を特徴とする高アルブミン尿を意味する。

「アルブミン／クレアチニン比」は、尿中クレアチニン（ｇ／ｄＬ）当たりの尿中アルブミン（ｍｇ／ｄＬ）の比を意味し、ｍｇ／ｇで表される。ある実施形態ではアルブミン／クレアチニン比はスポット尿サンプルから算出することができ、２４時間にわたるアルブミン排泄量の推定値として使用され得る。

「推算糸球体濾過量（ｅＧＦＲ）または「糸球体濾過量（ＧＦＲ）」は、腎臓がどの程度クレアチニンを濾過するかの測定値を意味し、血液が１分当たりどの程度糸球体を通過するかの推定値として使用される。通常の結果は、９０〜１２０ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ２の範囲になり得る。３ヶ月以上６０ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ^２未満のレベルであると、慢性腎疾患の指標となり得る。１５ｍＬ／ｍｉｎ／１．７３ｍ^２未満のレベルは、腎不全の指標となり得る。

「タンパク尿」は、過剰の血清タンパク質が尿内に存在することを意味する。タンパク尿は、２４時間当たりのタンパク質の尿への排泄量が＞２５０ｍｇ及び／または尿中タンパク質とクレアチニンとの比が≧０．２０ｍｇ／ｍｇであることを特徴してもよい。タンパク尿に関連して増加する血清タンパク質として、以下に限定されるものではないが、アルブミンが挙げられる。

「血中尿素窒素」または「ＢＵＮ」は、尿素形態の血液中の窒素量の尺度を意味する。肝臓はタンパク質の消化の老廃物として尿素回路において尿素を生成し、尿素は、腎臓により血液から除去される。正常ヒト成人血液は、１００ｍｌ（７〜２１ｍｇ／ｄＬ）の血液当たり７〜２１ｍｇの間の尿素窒素を含む。血中尿素窒素の測定は、腎臓の健康の指標として使用される。腎臓が血液から尿素を正常に除去できない場合、被検体のＢＵＮが上昇する。

「末期腎臓病（ＥＳＲＤ）」は、腎機能の完全またはほぼ完全な喪失を意味する。

「腎機能の障害」は、正常な腎機能と比較して腎機能が低下していることを意味する。

「線維症」は、器官または組織における過剰な線維性結合組織の形成または発生を意味する。ある種の実施形態では、線維症は修復または反応のプロセスとして起こる。ある種の実施形態では、線維症は損傷または傷害に反応して起こる。「線維症」という用語、器官または組織において過剰な線維性結合組織が修復または反応のプロセスとして形成または発生するものであり、器官または組織の通常成分としての線維組織の形成と異なるものであると理解されたい。

「更なる進行を遅延させる」は、ある医学的状態が進行状態に進む速度を低下させることを意味する。

「更なる進行を阻止する」は、ある医学的状態の進行状態への進行を止めることを意味する。

「透析までの時間を遅延させる」は、透析処置の必要性を遅延させるように十分な腎機能を維持することを意味する。

「腎移植までの時間を遅延させる」は、腎臓移植の必要性を遅延させるように十分な腎機能を維持することを意味する。

「平均余命を改善する」は、被検体の疾患の１つまたは複数の症状を処理することにより被検体を延命させることを意味する。

「抗ｍｉＲ」は、マイクロＲＮＡと相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。ある種の実施形態では、抗ｍｉＲは修飾オリゴヌクレオチドである。

「抗ｍｉＲ−Ｘ」は、「ｍｉＲ−Ｘ」が特定のマイクロＲＮＡを示す場合、ｍｉＲ−Ｘと相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。ある種の実施形態では、抗ｍｉＲ−Ｘは、ｍｉＲ−Ｘと完全に（例：１００％）相補的である。ある種の実施形態では、抗ｍｉＲ−Ｘは、ｍｉＲ−Ｘと少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％相補的である。ある種の実施形態では、抗ｍｉＲ−Ｘは修飾オリゴヌクレオチドである。

「ｍｉＲ−２１」は、核酸塩基配列ＵＡＧＣＵＵＡＵＣＡＧＡＣＵＧＡＵＧＵＵＧＡ（配列番号１）を有する成熟型ｍｉＲＮＡを意味する。

「ｍｉＲ−２１ステムループ配列」は、核酸塩基配列ＵＧＵＣＧＧＧＵＡＧＣＵＵＡＵＣＡＧＡＣＵＧＡＵＧＵＵＧＡＣＵＧＵＵＧＡＡＵＣＵＣＡＵＧＧＣＡＡＣＡＣＣＡＧＵＣＧＡＵＧＧＧＣＵＧＵＣＵＧＡＣＡ（配列番号２）を有するステムループ配列を意味する。

「標的核酸」は、オリゴマー化合物がハイブリダイズするように設計される核酸を意味する。

「標的化」は、標的核酸にハイブリダイズする核酸塩基配列の設計及び選択のプロセスを意味する。

「〜を標的とする」は、標的核酸へのハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有することを意味する。

「調節」は、機能、量または活性の変質を意味する。ある種の実施形態では、調節は機能、量または活性の増加を意味する。ある種の実施形態では、調節は機能、量または活性の低下を意味する。

「発現」は、遺伝子のコードされた情報が、細胞内に存在して働く構造体に変換される任意の機能及び段階を意味する。

「核酸塩基配列」は、典型的には任意の糖、結合及び／または核酸塩基の修飾と関係なく５’から３’方向に記載された、オリゴマー化合物または核酸において連続する核酸塩基の順序を意味する。

「連続する核酸塩基」は、核酸において互いに直接隣接する核酸塩基を意味する。

「核酸塩基相補性」は、２つの核酸塩基が水素結合を介して非共有結合により対を形成できることを意味する。

「相補的」は、１つの核酸がもう１つの核酸またはオリゴヌクレオチドにハイブリダイズできることを意味する。ある種の実施形態では、相補的とは、オリゴヌクレオチドが標的核酸にハイブリダイズできることをいう。

「完全に相補的」は、オリゴヌクレオチドの各核酸塩基が、対応する各々の位置で標的核酸の核酸塩基と対を形成できることを意味する。ある種の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡと完全に相補的である、即ちオリゴヌクレオチドの各核酸塩基が、対応する各々の位置でマイクロＲＮＡの核酸塩基と相補的である。ある種の実施形態では、各核酸塩基がマイクロＲＮＡステムループ配列の領域内の核酸塩基と相補性を有するオリゴヌクレオチドは、マイクロＲＮＡステムループ配列と完全に相補的である。

「相補性パーセント」は、同じ長さの標的核酸の部分と相補的なオリゴヌクレオチドの核酸塩基の割合を意味する。相補性パーセントは、オリゴヌクレオチドのうち、対応する位置で標的核酸の核酸塩基と相補的な核酸塩基の数を、オリゴヌクレオチドの核酸塩基の総数で割ることにより計算される。

「同一性パーセント」は、第１の核酸のうち、対応する位置で第２の核酸の核酸塩基と同一である核酸塩基の数を、第１の核酸の核酸塩基の総数で割った商を意味する。ある種の実施形態では、第１の核酸はマイクロＲＮＡであり、第２の核酸はマイクロＲＮＡである。ある種の実施形態では、第１の核酸はオリゴヌクレオチドであり、第２の核酸はオリゴヌクレオチドである。

「ハイブリダイズする」は、核酸塩基の相補性により相補的核酸のアニーリングが起こることを意味する。

「ミスマッチ」は、第１の核酸の核酸塩基が、対応する位置で第２の核酸の核酸塩基とＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ対を形成できないことを意味する。

核酸塩基配列の文脈において「同一の」は、糖、結合及び／または核酸塩基の修飾に関係なく、かつ、存在する任意のピリミジンのメチル状態にも関係なく、同じ核酸塩基配列を有することを意味する。

「マイクロＲＮＡ」は、酵素ダイサーによるプレ−マイクロＲＮＡの切断産物であり、長さ１８〜２５核酸塩基の内在性非コードＲＮＡを意味する。成熟型マイクロＲＮＡの例は、ｍｉＲＢａｓｅと呼ばれるマイクロＲＮＡデータベースで確認される（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）。ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡは、「マイクロＲＮＡ」または「ｍｉＲ」と略記される。

「プレ−マイクロＲＮＡ」または「ｐｒｅ−ｍｉＲ」は、Ｄｒｏｓｈａと呼ばれる二本鎖ＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼによるｐｒｉ−ｍｉＲの切断産物であり、ヘアピン構造を有する非コードＲＮＡを意味する。

「ステムループ配列」は、ヘアピン構造を有し、かつ成熟型マイクロＲＮＡ配列を含むＲＮＡを意味する。プレ−マイクロＲＮＡ配列及びステムループ配列は重複してもよい。ステムループ配列の例は、ｍｉＲＢａｓｅと呼ばれるマイクロＲＮＡデータベースで確認される（ｈｔｔｐ：／／ｍｉｃｒｏｒｎａ．ｓａｎｇｅｒ．ａｃ．ｕｋ／）。

「プリ−マイクロＲＮＡ」または「ｐｒｉ−ｍｉＲ」は、二本鎖ＲＮＡ特異的リボヌクレアーゼＤｒｏｓｈａの基質であり、ヘアピン構造を有する非コードＲＮＡを意味する。

「マイクロＲＮＡ前駆体」は、ゲノムＤＮＡに由来し、かつ、１つまたは複数のマイクロＲＮＡ配列を含む非コードｓｔｒｕｃｔｕｒｅｄ ＲＮＡを含む転写物を意味する。例えば、ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ前駆体はプレ−マイクロＲＮＡである。ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ前駆体はプリ−マイクロＲＮＡである。

「マイクロＲＮＡ制御転写物」は、マイクロＲＮＡにより制御される転写物を意味する。

「シード配列」は、成熟型マイクロＲＮＡ配列の５’末端の核酸塩基１〜９のうち連続した６〜８核酸塩基を含む核酸塩基配列を意味する。

「シードマッチ配列」は、シード配列と相補的であり、シード配列と同じ長さの核酸塩基配列を意味する。

「オリゴマー化合物」は、複数の連結したモノマーサブユニットを含む化合物を意味する。オリゴマー化合物はオリゴヌクレオチドを含んでいた。

「オリゴヌクレオチド」は、複数の連結したヌクレオシドを含む化合物を意味し、その各々は、互いに独立に修飾されていても、または非修飾であってもよい。

「天然のヌクレオシド間結合」は、ヌクレオシド間の３’から５’のホスホジエステル結合を意味する。

「天然糖」は、ＤＮＡ（２’−Ｈ）またはＲＮＡ（２’−ＯＨ）に見られる糖を意味する。

「ヌクレオシド間結合」は、隣接するヌクレオシド間の共有結合を意味する。

「連結したヌクレオシド」は、共有結合により連結されたヌクレオシドを意味する。

「核酸塩基」は、別の核酸塩基と非共有結合的に対を形成することができる複素環部分を意味する。

「ヌクレオシド」は、核酸塩基が糖部分に結合したものを意味する。

「ヌクレオチド」は、ヌクレオシドの糖部に共有結合したリン酸基を有するヌクレオシドを意味する。

いくつかの連結したヌクレオシド「からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物」は、所定の数の連結したヌクレオシドを有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を意味する。従って、化合物は、追加の置換基またはコンジュゲートを含んでもよい。他に記載がない限り、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシド以外に任意の追加のヌクレオシドを含まない。

「修飾オリゴヌクレオチド」は、天然の末端、糖、核酸塩基及び／またはヌクレオシド間結合に関して１つまたは複数の修飾を有するオリゴヌクレオチドを意味する。修飾オリゴヌクレオチドは、非修飾ヌクレオシドを含んでもよい。

「一本鎖修飾オリゴヌクレオチド」は、相補鎖にハイブリダイズしていない修飾オリゴヌクレオチドを意味する。

「修飾ヌクレオシド」は、天然のヌクレオシドと異なるヌクレオシドを意味する。修飾ヌクレオシドは、修飾糖及び非修飾核酸塩基を有してもよい。修飾ヌクレオシドは、修飾糖及び修飾核酸塩基を有してもよい。修飾ヌクレオシドは、天然糖及び修飾核酸塩基を有してもよい。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは二環式ヌクレオシドである。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは非二環式ヌクレオシドである。

「修飾ヌクレオシド間結合」は、天然のヌクレオシド間結合と何らか異なることを意味する。

「ホスホロチオエートヌクレオシド間結合」は、非架橋原子の１つが硫黄原子である、ヌクレオシド間の結合を意味する。

「修飾糖部分」は、天然糖の置換及び／または何らかの変化を意味する。

「非修飾核酸塩基」は、ＲＮＡまたはＤＮＡの天然の複素環塩基：プリン塩基アデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）と、ピリミジン塩基チミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）（５−メチルシトシンを含む）及びウラシル（Ｕ）とを意味する。

「５−メチルシトシン」は、５位に結合したメチル基を含むシトシンを意味する。

「非メチル化シトシン」は、５位に結合したメチル基を有さないシトシンを意味する。

「修飾核酸塩基」は、非修飾核酸塩基でない任意の核酸塩基を意味する。

「糖部分」は、天然に存在するフラノシルまたは修飾された糖部分を意味する。

「修飾された糖部分」は、置換された糖部分または代用糖を意味する。

「２’−Ｏ−メチル糖」または「２’−ＯＭｅ糖」は、２’位にＯ−メチル修飾を有する糖を意味する。

「２’−Ｏ−メトキシエチル糖」または「２’−ＭＯＥ糖」は、２’位にＯ−メトキシエチル修飾を有する糖を意味する。

「２’−フルオロ」または「２’−Ｆ」は、２’位にフルオロ修飾を有する糖を意味する。

「二環式糖部分」は、４〜７員環の２個の原子を連結して第２の環を形成して、二環式構造を生じさせる架橋を含む、４〜７員環（以下に限定されるものではないが、フラノシル）を含む修飾糖部分を意味する。ある種の実施形態では、４〜７員環は糖環である。ある種の実施形態では４〜７員環はフラノシルである。そうしたある種の実施形態では、架橋はフラノシルの２’−炭素及び４’−炭素を連結する。非限定的な例示的二環式糖部分として、ＬＮＡ、ＥＮＡ、ｃＥｔ、Ｓ−ｃＥｔ及びＲ−ｃＥｔが挙げられる。

「ロックド核酸（ＬＮＡ）糖部分」は、フラノース環の２’の原子と４’の原子との間に（ＣＨ_２）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。

「ＥＮＡ糖部分」は、フラノース環の２’の原子と４’の原子との間に（ＣＨ_２）_２−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。

「規制されたエチル（ｃＥｔ）糖部分」は、フラノース環の４’の原子と２’の原子との間にＣＨ（ＣＨ_３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。ある種の実施形態では、ＣＨ（ＣＨ_３）−Ｏ架橋は、Ｓ方向に規制される。ある種の実施形態では、（ＣＨ_２）_２−ＯはＲ方向に規制される。

「Ｓ−ｃＥｔ糖部分」は、フラノース環の４’の原子と２’の原子との間にＳ−規制ＣＨ（ＣＨ_３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。

「Ｒ−ｃＥｔ糖部分」は、フラノース環の４’の原子と２’の原子との間にＲ−規制ＣＨ（ＣＨ_３）−Ｏ架橋を含む置換糖部分を意味する。

「２’−Ｏ−メチル」ヌクレオシドは、２’−Ｏ−メチル糖修飾を含む２’−修飾ヌクレオシドを意味する。

「２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシド」は、２’−Ｏ−メトキシエチル糖修飾を有する２’−修飾ヌクレオシドを意味する。２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含んでも、または非修飾核酸塩基を含んでもよい。

「２’−フルオロヌクレオシド」は、２’−フルオロ糖修飾を有する２’−修飾ヌクレオシドを意味する。２’−フルオロヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含んでも、または非修飾核酸塩基を含んでもよい。

「二環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分を有する２’−修飾ヌクレオシドを意味する。二環式ヌクレオシドは、修飾核酸塩基を有しても、または非修飾核酸塩基を有してもよい。

「ｃＥｔヌクレオシド」は、ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。ｃＥｔヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含んでも、または非修飾核酸塩基を含んでもよい。

「Ｓ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｓ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。

「Ｒ−ｃＥｔヌクレオシド」は、Ｒ−ｃＥｔ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。

「β−Ｄ−デオキシリボヌクレオシド」は天然のＤＮＡヌクレオシドを意味する。

「β−Ｄ−リボヌクレオシド」は天然のＲＮＡヌクレオシドを意味する。

「ＬＮＡヌクレオシド」は、ＬＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。

「ＥＮＡヌクレオシド」は、ＥＮＡ糖部分を含むヌクレオシドを意味する。

「被検体」は、処置または治療のために選択されたヒトまたは非ヒト動物を意味する。

「それを必要とする被検体」は、治療または処置を必要とすると判定される被検体を意味する。

「〜を有する疑いがある被検体」は、疾患の１つまたは複数の臨床徴候を示す被検体を意味する。

「投与すること」は、被検体に医薬品または組成物を与えることを意味し、以下に限定されるものではないが、医療専門家による投与及び自己投与を含む。

「非経口投与」は、注射または注入による投与を意味する。非経口投与は、以下に限定されるものではないが、皮下投与、静脈内投与および筋肉内投与を含む。

「皮下投与」は、皮膚直下の投与を意味する。

「静脈内投与」は、静脈への投与を意味する。

「併用投与される」は、２つの薬理効果が患者に同時に現れる任意の方法で２種以上の薬が併用投与されることをいう。併用投与は、２種の薬を単一の医薬組成物で投与したり、同じ剤形で投与したり、または同じ投与経路で投与したりする必要はない。２種の薬の作用自体は、同時に現れる必要はない。効果は一定期間重複するだけでよく、同じ長さを持つ必要はない。

「持続期間」は、活性またはイベントが継続する期間を意味する。ある種の実施形態では、処置の持続期間は、医薬品または医薬組成物の用量が投与される期間である。

「治療」は、疾患の処置方法を意味する。ある種の実施形態では、治療は、以下に限定されるものではないが、化学療法、放射線治療、または医薬品の投与を含む。

「処置」は、疾患の治癒または軽減のために使用される１つまたは複数の特定の手順を適用することを意味する。ある種の実施形態では、特定の手順は、１つまたは複数の医薬品の投与である。

「回復」は、状態または疾患の少なくとも１つの指標の重症度を低下させることを意味する。ある種の実施形態では、軽減は、状態または疾患の１つまたは複数の指標の進行を遅延させるまたは遅らせることを含む。指標の重症度は、当業者に公知の主観的基準または客観的基準により判定することができる。

「〜を発症するリスクがある」は、被検体がある状態または疾患を発症しやすい状態にあることを意味する。ある種の実施形態では、状態または疾患を発症するリスクがある被検体は、その状態または疾患の１つまたは複数の症状を示すものの、その状態または疾患と診断されるのに十分な数の症状を示さない。ある種の実施形態では、状態または疾患を発症するリスクがある被検体は、状態または疾患の１つまたは複数の症状を示すものの、状態または疾患と診断するのに必要とされるより少ない程度で示す。

「〜の発症を予防する」は、疾患または状態を発症するリスクがある被検体の状態または疾患の発生を予防することを意味する。ある種の実施形態では、疾患または状態を発症するリスクがある被検体は、疾患または状態を既に有する被検体が受けた処置と同様の処置を受ける。

「〜の発症の遅延させる」は、疾患または状態を発症するリスクがある被検体の状態または疾患の発生を遅延させることを意味する。ある種の実施形態では、疾患または状態を発症するリスクがある被検体は、疾患または状態を既に有する被検体が受けた処置と同様の処置を受ける。

「治療薬」は、疾患の治癒、軽減または予防に使用される医薬品を意味する。

「用量」は、１回の投与で与えられる医薬品の所定量を意味する。ある種の実施形態では、用量を２以上のボーラス、錠剤または注射で投与してもよい。例えば、皮下投与が所望であるある種の実施形態では、所望の用量は、１回の注射で容易に与えられない量を必要とする。そうした実施形態では、所望の用量を達成するため２回以上の注射を使用してもよい。ある種の実施形態では、用量は、２回以上の注射で投与して個体の注射部位反応を最小限に抑えてもよい。ある種の実施形態では、用量を緩速注入として投与する。

「投薬単位」は、医薬品が与えられる形態を意味する。ある種の実施形態では、投薬単位は、凍結乾燥オリゴヌクレオチドを含むバイアルである。ある種の実施形態では、投薬単位は、再溶解したオリゴヌクレオチドを含むバイアルである。

「治療有効量」は、動物に治療上の利益を与える医薬品の量をいう。

「医薬組成物」は、医薬品など個体への投与に好適な物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は無菌水溶液を含んでもよい。

「医薬品」は、被検体に投与すると治療効果を与える物質を意味する。

「医薬活性成分」は、所望の作用を与える医薬組成物中の物質を意味する。

「臓器機能の改善」は、正常範囲に向けた臓器機能の変化を意味する。ある種の実施形態では、臓器機能は、被検体の血液または尿中に見られる分子の測定により評価される。たとえば、ある種の実施形態では、腎機能の改善は、血中尿素窒素の低下、タンパク尿の減少、アルブミン尿の減少等により評価される。

「許容可能な安全性プロファイル」は、臨床的に許容できる範囲内にある副作用のパターンを意味する。

「副作用」は、処置に起因する所望の作用以外の生理反応を意味する。ある種の実施形態では、副作用は、以下に限定されるものではないが、注射部位反応、肝機能検査異常、腎臓機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常及びミオパチーを含む。こうした副作用は直接的に検出しても、または間接的に検出してもよい。例えば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの上昇から、肝毒性または肝機能異常が示唆されることがある。例えば、ビリルビンの増加から、肝毒性または肝機能異常が示唆されることがある。

「被検体のコンプライアンス」は、推奨または処方された治療剤の被検体による服薬遵守を意味する。

「遵守する」は、推奨された治療剤の被検体による服薬遵守を意味する。

「推奨された治療剤」は、疾患の処置、軽減または予防のため医療専門家により推奨された処置剤を意味する。

「血液」という用語は、本明細書で使用する場合、全血および血液分画、たとえば血清および血漿を包含する。

概要
アルポート症候群は、異常なレベルの糸球体基底膜（ＧＢＭ）が産生され、間質線維症、糸球体硬化をきたし、典型的には末期腎臓病に至る遺伝性の腎疾患である。アルポート症候群の管理において、処置の主要な目的は、腎機能を維持し、末期腎臓病の発症（ＥＳＲＤ）を予防し、次いでアルポート症候群の被検体の平均余命を改善することである。

アルポート症候群は、ＧＢＭ組成の障害による進行性線維症を特徴とし、したがってＧＢＭの構造および機能における改善が望ましい。ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは、アルポート症候群の実験モデルにおいて腎機能を改善することが本明細書で立証される。加えて、抗ｍｉＲ−２１処置後に糸球体硬化および線維症も減少する。さらに抗ｍｉＲ−２１がアルポート症候群の実験モデルの生存率を改善させることも本明細書で立証される。したがって、ｍｉＲ−２１を標的とするこうした修飾オリゴヌクレオチドは、アルポート症候群の処置に有用である。

本発明の特定の使用
本明細書で提供されるのは、アルポート症候群の処置のための方法であって、アルポート症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体にｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを投与することを含む方法である。

ある種の実施形態では、被検体は、修飾オリゴヌクレオチドの投与前にアルポート症候群を有すると診断されたことがある。アルポート症候群の診断は、以下に限定されるものではないが、被検体の家族歴、臨床的特徴（以下に限定されるものではないが、タンパク尿、アルブミン尿、血尿、ＧＦＲの異常、難聴及び／または眼球の変化）及び組織生検の結果などのパラメーターの評価により達成することができる。腎生検は、ＩＶ型コラーゲンα−３鎖、α−４鎖及びα−５鎖の有無について検査してもよい。加えて、糸球体の構造的変化は、腎生検材料の電子顕微鏡観察により検出してもよい。皮膚生検においてＩＶ型コラーゲンα−５鎖の存在を検査してもよく、α−５鎖は通常皮膚に存在するが、Ｘ連鎖型アルポート症候群の男性被検体にほぼ常に存在しない。アルポート症候群の診断は、Ｃｏｌ４ａ３遺伝子、Ｃｏｌ４ａ４遺伝子またはＣｏｌ４ａ５遺伝子の１つまたは複数の突然変異についてスクリーニングすることを更に含んでもよい。

ある種の実施形態では、アルポート症候群を有する被検体の腎臓においてｍｉＲ−２１のレベルが増加している。ある種の実施形態では、投与前に、被検体は、腎臓におけるｍｉＲ−２１のレベルが増加していると判定される。ｍｉＲ−２１レベルは、腎生検材料から測定することができる。ある種の実施形態では、投与前に、被検体は被検体の尿中または血液中のｍｉＲ−２１のレベルが増加していると判定される。

ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチドの投与の結果、１つまたは複数の臨床上有利な成績が得られる。ある種の実施形態では、本投与は腎機能を改善する。ある種の実施形態では、本投与は末期腎臓病の発症を遅延させる。ある種の実施形態では、本投与は透析までの時間を遅延させる。ある種の実施形態では、本投与は腎移植までの時間を遅延させる。ある種の実施形態では、本投与は被検体の平均余命を改善する。

ある種の実施形態では、本投与は腎線維症を抑制する。ある種の実施形態では、本投与は腎線維症の更なる進行を遅延させる。ある種の実施形態では、本投与は腎線維症の更なる進行を阻止する。ある種の実施形態では、本投与は血尿を減少させる。ある種の実施形態では、本投与は血尿の発症を遅延させる。ある種の実施形態では、本投与はタンパク尿を減少させる。ある種の実施形態では、本投与はタンパク尿の発症を遅延させる。

アルポート症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体は、ＩＶ型コラーゲンのα３鎖をコードする遺伝子（Ｃｏｌ４ａ３）の突然変異を有しても、ＩＶ型コラーゲンのα４鎖をコードする遺伝子（Ｃｏｌ４ａ４）の突然変異を有しても、あるいはＩＶ型コラーゲンのα５鎖をコードする遺伝子（Ｃｏｌ４ａ５）の突然変異を有してもよい。ある種の実施形態では、被検体は男性（雄）である。ある種の実施形態では、被検体は女性（雌）である。

ある種の実施形態では、被検体は腎機能の障害を有する。ある種の実施形態では、被検体は腎機能の改善を必要とする。ある種の実施形態では、被検体は腎機能の障害を有すると確認される。ある種の実施形態では、被検体は血尿を有すると確認される。ある種の実施形態では、被検体はタンパク尿を有すると確認される。

本明細書に提供される実施形態の何れかでは、被検体は腎機能を評価する何らかの試験を受けてもよい。そうした試験には、以下に限定されるものではないが、被検体の血中尿素窒素の測定；被検体の血液中のクレアチニンの測定；被検体の血液中のクレアチニンクリアランスの測定；被検体のタンパク尿の測定；被検体のアルブミン：クレアチニン比の測定；被検体の糸球体濾過量の測定；および被検体の尿量の測定がある。

本明細書に提供される実施形態の何れかでは、尿中または血液中に存在するタンパク質を使用して腎機能を測定してもよい。こうした腎機能の試験には、被検体の尿中のＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ（ＮＡＧ）タンパク質の測定；被検体の尿中の好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）タンパク質の測定；被検体の尿中の腎臓傷害分子−１（ＫＩＭ−１）タンパク質の測定；被検体の尿中のインターロイキン−１８（ＩＬ−１８）タンパク質の測定；被検体の尿中の結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）レベルの測定；被検体の尿中の単球走化性タンパク質１（ＭＣＰ１）レベルの測定；被検体の尿中のコラーゲンＩＶ（Ｃｏｌ ＩＶ）フラグメントの測定；被検体の尿中のコラーゲンＩＩＩ（Ｃｏｌ ＩＩＩ）フラグメントレベルの測定；被検体の血液中のシスタチンＣタンパク質の測定；被検体の血液中のβトレースタンパク質（ＢＴＰ）の測定；および被検体の血液中の２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の測定があるが、これに限定されるものではない。本明細書に提供される実施形態の何れかでは、尿中の有足細胞傷害のマーカーを測定してもよい。こうしたタンパク質として、ネフリンおよびポドシンが挙げられる。こうしたタンパク質は、たとえば、市販されているキットを用いて酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により定量することができる。

本明細書に提供される実施形態の何れかでは、ｍｉＲ−２１を標的とする修飾オリゴヌクレオチドは、被検体の腎機能の１つまたは複数のマーカーを改善する。腎機能のマーカーの改善としては、以下に限定されるものではないが、被検体の血中尿素窒素の低下；被検体の血液中のクレアチニンの低下；被検体のクレアチニンクリアランスの改善；被検体のタンパク尿の減少；被検体のアルブミン：クレアチニン比の低下；被検体の糸球体濾過量の改善；および／または被検体の尿量の増加が挙げられる。

特定の追加治療
アルポート症候群または本明細書に列挙された状態の何れかの処置は、２つ以上の治療を含んでもよい。したがって、ある種の実施形態では、本明細書で記載されるのは、アルポート症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体を処置するための方法であって、ｍｉＲ−２１と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドの投与に加えて、少なくとも１つ治療を投与することを含む方法である。

ある種の実施形態では、少なくとも１つ追加治療は医薬品を含む。

ある種の実施形態では、医薬品はアンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）を含む。ある種の実施形態では、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬はカンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタンまたはエプロサルタンである。

ある種の実施形態では、医薬品はアンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤を含む。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤はカプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリルまたはラミプリルである。

ある種の実施形態では、医薬品は降圧薬である。降圧薬は被検体の血圧の制御に使用される。

ある種の実施形態では、医薬品はビタミンＤアナログである。ビタミンＤアナログは、被検体の副甲状腺ホルモンの産生を制限するのに使用することができる。

ある種の実施形態では、医薬品は、食事性リン吸収を抑制する経口リン吸着薬である。

ある種の実施形態では、医薬品は免疫抑制薬を含む。ある種の実施形態では、免疫抑制薬はコルチコステロイド、シクロホスファミドまたはミコフェノール酸モフェチルである。

ある種の実施形態では、医薬品はシクロスポリン、ＨＭＧ−コエンザイムＡ阻害剤、バソペプチダーゼ阻害剤またはＴＧＦ−βアンタゴニストである。

ある種の実施形態では、追加治療は遺伝子治療である。ある種の実施形態では、遺伝子治療は正常なＣｏｌ４ａ３遺伝子を与える。ある種の実施形態では、遺伝子治療は正常なＣｏｌ４ａ４遺伝子を与える。ある種の実施形態では、遺伝子治療は正常なＣｏｌ４ａ５遺伝子を与える。

ある種の実施形態では、追加治療は透析である。ある種の実施形態では、追加治療は腎移植である。

ある種の実施形態では、医薬品は抗炎症薬を含む。ある種の実施形態では、抗炎症薬はステロイド系抗炎症薬である。ある種の実施形態では、ステロイド抗炎症薬はコルチコステロイドである。ある種の実施形態では、コルチコステロイドはプレドニゾンである。ある種の実施形態では、抗炎症薬は非ステロイド系抗炎症剤である。ある種の実施形態では、非ステロイド系抗炎症薬はイブプロフェン、ＣＯＸ−Ｉ阻害剤またはＣＯＸ−２阻害剤である。

ある種の実施形態では、医薬品は線維化シグナルに対する１つまたは複数の反応をブロックする医薬品である。

ある種の実施形態では、医薬品は抗糖尿病薬を含む。抗糖尿病薬には、ビグアナイド、グルコシダーゼ阻害剤、インスリン、スルホニル尿素およびチアゾリデンジオンがあるが、これに限定されるものではない。

ある種のマイクロＲＮＡの核酸塩基配列
本明細書に記載の修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１（配列番号１）またはその前駆体（配列番号２）と相補的な核酸塩基配列を有する。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各核酸塩基はそれぞれ対応する位置で、ｍｉＲ−２１またはその前駆体の核酸塩基配列の核酸塩基と塩基対の形成を行うことができる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、ｍｉＲ−２１配列または前駆体配列の核酸塩基配列に対して１つまたは複数のミスマッチ塩基対を有していてもよく、依然としてその標的配列にハイブリダイズすることができる。

ｍｉＲ−２１配列はｍｉＲ−２１前駆体配列内に含まれており、ｍｉＲ−２１と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１前駆体の領域とも相補的である。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１の長さと等しいいくつかの連結したヌクレオシドからなる。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−２１の長さより短い。いくつかの連結したヌクレオシドを有する、ｍｉＲ−２１の長さより短い修飾オリゴヌクレオチドであって、その各核酸塩基が対応する位置でｍｉＲ−２１の各核酸塩基と相補的な修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１配列の領域と完全に相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドと見なされる。例えば、１９個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、各核酸塩基が長さ２２核酸塩基のｍｉＲ−２１の対応する位置と相補的な修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１の１９個の核酸塩基領域と完全に相補的である。こうした修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１の１９個の核酸塩基部分に対して１００％の相補性を有し、ｍｉＲ−２１に対して１００％相補性を有すると考えられる。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドはシード配列と相補的な核酸塩基配列を含む、即ち修飾オリゴヌクレオチドはシード−マッチ配列を含む。ある種の実施形態では、シード配列は６量体シード配列である。そうしたある種の実施形態では、シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基１〜６である。そうしたある種の実施形態では、シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基２〜７である。そうしたある種の実施形態では、シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基３〜８である。ある種の実施形態では、シード配列は７量体シード配列である。そうしたある種の実施形態では、７量体シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基１〜７である。そうしたある種の実施形態では、７量体シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基２〜８である。ある種の実施形態では、シード配列は８量体シード配列である。そうしたある種の実施形態では、８量体シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基１〜８である。ある種の実施形態では、８量体シード配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基２〜９である。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１またはその前駆体の核酸塩基配列に対して１つのミスマッチがある核酸塩基配列を有する。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１またはその前駆体の核酸塩基配列に対して２つのミスマッチがある核酸塩基配列を有する。そうしたある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１またはその前駆体の核酸塩基配列に対して２つ以下のミスマッチがある核酸塩基配列を有する。そうしたある種の実施形態では、ミスマッチ核酸塩基は隣接している。そうしたある種の実施形態では、ミスマッチ核酸塩基は隣接していない。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−２１の長さを超える。そうしたある種の実施形態では、追加のヌクレオシドの核酸塩基は、ｍｉＲ−２１のステムループ配列の核酸塩基と相補的である。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−２１の長さより１個多い。そうしたある種の実施形態では、追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの５’末端にある。そうしたある種の実施形態では、追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの３’末端にある。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレオシドの数は、ｍｉＲ−２１の長さより２個多い。そうしたある種の実施形態では、２個の追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの５’末端にある。そうしたある種の実施形態では、２個の追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの３’末端にある。そうしたある種の実施形態では、１個の追加のヌクレオシドが５’末端に位置し、１個の追加のヌクレオシドがオリゴヌクレオチドの３’末端に位置する。ある種の実施形態では、オリゴヌクレオチドの領域はｍｉＲ−２１の核酸塩基配列と完全に相補的である場合があるが、修飾オリゴヌクレオチド全体がｍｉＲ−２１と完全に相補的であるとは限らない。例えば、２４個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、ヌクレオシド１〜２２の各核酸塩基が、長さ２２核酸塩基のｍｉＲ−２１の対応する位置と相補的な修飾オリゴヌクレオチドは、ｍｉＲ−２１の核酸塩基配列と完全に相補的である２２個のヌクレオシド部分を有し、ｍｉＲ−２１の核酸塩基配列に対して全体として約９２％相補性を有する。

特定の修飾オリゴヌクレオチド
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは構造５’−Ａ_ＥＣ_ＳＡＴＣ_ＳＡＧＴＣ_ＳＴＧＡＵ_ＳＡＡＧＣ_ＳＴＡ_Ｅ−３’（配列番号３）を有し、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し；ヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは構造５’−Ａ_ＥＣ_ＳＡＴＣ_ＳＡ_ＳＧＴＣ_ＳＵ_ＳＧＡＵ_ＳＡ_ＳＡＧＣ_ＳＵｓＡ_Ｅ−３’（配列番号３）を有し、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し；ヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは構造５’−^ＭｅＣ_ＥＡ_ＳＡ_ＳＴ_ＥＣ_ＳＵ_ＳＡ_ＥＡ_ＥＵ_ＳＡ_ＳＡ_ＥＧ_ＥＣ_ＳＴ_ＥＡ_Ｓ−３’（配列番号４）を有し、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し；上付き文字「Ｍｅ」はヌクレオシドの塩基の５−メチル基を示し；ヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは構造５’−Ａ_ＥＣ_ＳＡ_ＥＴ_ＥＣ_ＳＡ_ＥＧ_ＥＴ_ＥＣ_ＳＴＧＡＵ_ＳＡＡＧＣ_ＳＵ_ＳＡ_Ｓ−３’（配列番号３）を有し、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し；ヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の５−メチルシトシンを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドのシトシンは各々５−メチルシトシンを含む。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは８〜３０個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１２〜２５個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１５〜３０個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１５〜２５個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１５〜１９個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１５〜１６個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１９〜２４個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２１〜２４個連結したヌクレオシドからなる。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは８個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは９個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１０個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１１個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１２個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１３個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１４個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１５個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１６個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１７個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１８個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１９個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２０個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２１個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２２個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２３個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２４個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは２５個連結したヌクレオシドからなる。

ある種の修飾
ある種の実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、核酸塩基、糖及び／またはヌクレオシド間結合に対して１つまたは複数の修飾を含んでもよく、従って修飾オリゴヌクレオチドである。修飾された核酸塩基、糖及び／またはヌクレオシド間結合は、望ましい特性、例えば、細胞取り込みの増大、他のオリゴヌクレオチドまたは核酸標的に対する親和性の強化、及びヌクレアーゼの存在下での安定性の増強を理由に非修飾形態と比較して選択すればよい。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の修飾ヌクレオシドを含む。そうしたある種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは安定化ヌクレオシドである。安定化ヌクレオシドの例として糖修飾ヌクレオシドがある。

ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは糖修飾ヌクレオシドである。そうしたある種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、天然若しくは修飾複素環塩基部分及び／または天然若しくは修飾ヌクレオシド間結合を更に含んでもよく、糖修飾とは無関係な修飾を更に含んでもよい。ある種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、天然リボースまたは２’−デオキシ−リボースの２’炭素で糖環が修飾されている２’−修飾ヌクレオシドである。

ある種の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは二環式糖部分を有する。そうしたある種の実施形態では、二環式糖部分はα配置のＤ糖である。そうしたある種の実施形態では、二環式糖部分はβ配置のＤ糖である。そうしたある種の実施形態では、二環式糖部分はα配置のＬ糖である。そうしたある種の実施形態では、二環式糖部分はβ配置のＬ糖である。

こうした二環式糖部分を含むヌクレオシドは、二環式ヌクレオシドまたはＢＮＡという。ある種の実施形態では、二環式ヌクレオシドとして、下記に図示するように、（Ａ）α−Ｌ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｂ）β−Ｄ−メチレンオキシ（４’−ＣＨ_２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｃ）エチレンオキシ（４’−（ＣＨ_２）_２−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｄ）アミノオキシ（４’−ＣＨ_２−Ｏ−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ；（Ｅ）オキシアミノ（４’−ＣＨ_２−Ｎ（Ｒ）−Ｏ−２’）ＢＮＡ；（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’−ＣＨ（ＣＨ_３）−Ｏ−２’）ＢＮＡ（規制されたエチルまたはｃＥｔとも呼ばれる）；（Ｇ）メチレン−チオ（４’−ＣＨ_２−Ｓ−２’）ＢＮＡ；（Ｈ）メチレン−アミノ（４’−ＣＨ２−Ｎ（Ｒ）−２’）ＢＮＡ；（Ｉ）メチル炭素環式（４’−ＣＨ_２−ＣＨ（ＣＨ_３）−２’）ＢＮＡ；（Ｊ）ｃ−ＭＯＥ（４’−ＣＨ_２−ＯＭｅ−２’）ＢＮＡ、及び（Ｋ）プロピレン炭素環式（４’−（ＣＨ_２）_３−２’）ＢＮＡがあるが、これに限定されるものではない。

式中、Ｂｘは核酸塩基部分であり、Ｒは独立にＨ、保護基またはＣ_１〜Ｃ_１２アルキルである。

ある種の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、ＯＣＦ_３、Ｏ−ＣＨ_３、ＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３、２’−Ｏ（ＣＨ_２）_２ＳＣＨ_３、Ｏ−（ＣＨ_２）_２−Ｏ−Ｎ（ＣＨ_３）_２、−Ｏ（ＣＨ_２）_２Ｏ（ＣＨ_２）_２Ｎ（ＣＨ_３）_２、及びＯ−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｈ）ＣＨ_３から選択される２’−置換基を含む。

ある種の実施形態では、２’−修飾ヌクレオシドは、Ｆ、Ｏ−ＣＨ_３、及びＯＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３から選択される２’−置換基を含む。

ある種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは４’−チオ修飾ヌクレオシドである。ある種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドである。４’−チオ修飾ヌクレオシドは、４’−Ｏが４’−Ｓで置換されたβ−Ｄ−リボヌクレオシドを有する。４’−チオ−２’−修飾ヌクレオシドは、２’−ＯＨが２’−置換基で置換された４’−チオ修飾ヌクレオシドである。好適な２’−置換基は、２’−ＯＣＨ_３、２’−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−ＯＣＨ_３、及び２’−Ｆを含む。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数のヌクレオシド間修飾を含む。そうしたある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は修飾ヌクレオシド間結合である。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合はリン原子を含む。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは１つまたは複数の修飾核酸塩基を含む。ある種の実施形態では、修飾核酸塩基は、７−デアザ−アデニン、７−デアザグアノシン、２−アミノピリジン及び２−ピリドンから選択される。ある種の実施形態では、修飾核酸塩基は、５−置換ピリミジン、６−アザピリミジン、並びにＮ−２、Ｎ−６及びＯ−６置換プリン、例えば２アミノプロピルアデニン、５−プロピニルウラシル及び５−プロピニルシトシンから選択される。

ある種の実施形態では、修飾核酸塩基は多環式複素環を含む。ある種の実施形態では、修飾核酸塩基は三環式複素環を含む。ある種の実施形態では、修飾核酸塩基はフェノキサジン誘導体を含む。ある種の実施形態では、フェノキサジンは更に修飾されて、当該技術分野においてＧクランプ（Ｇ−ｃｌａｍｐ）として知られる核酸塩基を形成していてもよい。

ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の部分にコンジュゲートされ、１つまたは複数の部分は、その結果得られるアンチセンスオリゴヌクレオチドの活性、細胞分布または細胞取り込みを促進するものである。そうしたある種の実施形態では、その部分はコレステロール部分である。ある種の実施形態では、その部分は脂質部分である。コンジュゲーションのための別の部分には、糖質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、フォレート、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリンおよび色素がある。ある種の実施形態では、糖質部分はＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミン（ＧａｌＮａｃ）である。ある種の実施形態では、コンジュゲート基はオリゴヌクレオチドに直接結合される。ある種の実施形態では、コンジュゲート基はアミノ、ヒドロキシル、カルボン酸、チオール、不飽和基（たとえば、二重結合または三重結合）、８−アミノ−３，６−ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、スクシニミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、６−アミノヘキサン酸（ＡＨＥＸまたはＡＨＡ）、置換Ｃ１〜Ｃ１０アルキル、置換または非置換Ｃ２〜Ｃ１０アルケニル、および置換または非置換のＣ２〜Ｃ１０アルキニルから選択される結合部分により修飾オリゴヌクレオチドに結合される。そうしたある種の実施形態では、置換基は、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ、チオール、チオアルコキシ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニルおよびアルキニルから選択される。

そうしたある種の実施形態では、本化合物は、たとえば、ヌクレアーゼ安定性などの特性を強化するため、修飾オリゴヌクレオチドの一方または両方の末端に結合した１つまたは複数の安定化基を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。安定化基にはキャップ構造が含まれる。これらの末端修飾は、エキソヌクレアーゼによる分解から修飾オリゴヌクレオチドを保護し、細胞内の送達および／または局在化に役立ち得る。キャップは５’−末端（５’−キャップ）に存在しても、３’−末端（３’−キャップ）に存在してもよいし、あるいは両末端に存在してもよい。キャップ構造は、たとえば、逆位のデオキシ脱塩基キャップを含む。

特定の医薬組成物
本明細書で提供されるのは、オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物である。ある種の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、１５〜２５個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、かつｍｉＲ−２１と相補的な核酸塩基配列を有する化合物を含む。ある種の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、８〜３０個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、かつｍｉＲ−２１と相補的な核酸塩基配列を有する化合物を含む。ある種の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、１２〜２５個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、かつｍｉＲ−２１と相補的な核酸塩基配列を有する化合物を含む。

好適な投与経路には、経口、直腸、経粘膜、腸、経腸、局所、坐剤、吸入による、髄腔内、心臓内、脳室内、腹腔内、経鼻、眼内、腫瘍内および非経口（たとえば、静脈内、筋肉内、骨髄内および皮下）があるが、これに限定されるものではない。ある種の実施形態では、全身曝露ではなく局所曝露を達成するため薬剤の髄腔内投与を行う。たとえば、医薬組成物は効果の望まれる領域に（たとえば、腎臓に）直接注射してもよい。

ある種の実施形態では、医薬組成物は、投薬単位の形態（例えば、錠剤、カプセル剤、ボーラス等）で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、２５ｍｇ〜８００ｍｇ、２５ｍｇ〜７００ｍｇ、２５ｍｇ〜６００ｍｇ、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、２５ｍｇ〜４００ｍｇ、２５ｍｇ〜３００ｍｇ、２５ｍｇ〜２００ｍｇ、２５ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ、３００ｍｇ〜８００ｍｇ、４００ｍｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜７００ｍｇ、１５０ｍｇ〜６５０ｍｇ、２００ｍｇ〜６００ｍｇ、２５０ｍｇ〜５５０ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ及び４００ｍｇ〜６００ｍｇから選択される範囲内の用量で修飾オリゴヌクレオチドを含む。ある種の実施形態では、こうした医薬組成物は、２５ｍｇ、３０ｍｇ、３５ｍｇ、４０ｍｇ、４５ｍｇ、５０ｍｇ、５５ｍｇ、６０ｍｇ、６５ｍｇ、７０ｍｇ、７５ｍｇ、８０ｍｇ、８５ｍｇ、９０ｍｇ、９５ｍｇ、１００ｍｇ、１０５ｍｇ、１１０ｍｇ、１１５ｍｇ、１２０ｍｇ、１２５ｍｇ、１３０ｍｇ、１３５ｍｇ、１４０ｍｇ、１４５ｍｇ、１５０ｍｇ、１５５ｍｇ、１６０ｍｇ、１６５ｍｇ、１７０ｍｇ、１７５ｍｇ、１８０ｍｇ、１８５ｍｇ、１９０ｍｇ、１９５ｍｇ、２００ｍｇ、２０５ｍｇ、２１０ｍｇ、２１５ｍｇ、２２０ｍｇ、２２５ｍｇ、２３０ｍｇ、２３５ｍｇ、２４０ｍｇ、２４５ｍｇ、２５０ｍｇ、２５５ｍｇ、２６０ｍｇ、２６５ｍｇ、２７０ｍｇ、２７０ｍｇ、２８０ｍｇ、２８５ｍｇ、２９０ｍｇ、２９５ｍｇ、３００ｍｇ、３０５ｍｇ、３１０ｍｇ、３１５ｍｇ、３２０ｍｇ、３２５ｍｇ、３３０ｍｇ、３３５ｍｇ、３４０ｍｇ、３４５ｍｇ、３５０ｍｇ、３５５ｍｇ、３６０ｍｇ、３６５ｍｇ、３７０ｍｇ、３７５ｍｇ、３８０ｍｇ、３８５ｍｇ、３９０ｍｇ、３９５ｍｇ、４００ｍｇ、４０５ｍｇ、４１０ｍｇ、４１５ｍｇ、４２０ｍｇ、４２５ｍｇ、４３０ｍｇ、４３５ｍｇ、４４０ｍｇ、４４５ｍｇ、４５０ｍｇ、４５５ｍｇ、４６０ｍｇ、４６５ｍｇ、４７０ｍｇ、４７５ｍｇ、４８０ｍｇ、４８５ｍｇ、４９０ｍｇ、４９５ｍｇ、５００ｍｇ、５０５ｍｇ、５１０ｍｇ、５１５ｍｇ、５２０ｍｇ、５２５ｍｇ、５３０ｍｇ、５３５ｍｇ、５４０ｍｇ、５４５ｍｇ、５５０ｍｇ、５５５ｍｇ、５６０ｍｇ、５６５ｍｇ、５７０ｍｇ、５７５ｍｇ、５８０ｍｇ、５８５ｍｇ、５９０ｍｇ、５９５ｍｇ、６００ｍｇ、６０５ｍｇ、６１０ｍｇ、６１５ｍｇ、６２０ｍｇ、６２５ｍｇ、６３０ｍｇ、６３５ｍｇ、６４０ｍｇ、６４５ｍｇ、６５０ｍｇ、６５５ｍｇ、６６０ｍｇ、６６５ｍｇ、６７０ｍｇ、６７５ｍｇ、６８０ｍｇ、６８５ｍｇ、６９０ｍｇ、６９５ｍｇ、７００ｍｇ、７０５ｍｇ、７１０ｍｇ、７１５ｍｇ、７２０ｍｇ、７２５ｍｇ、７３０ｍｇ、７３５ｍｇ、７４０ｍｇ、７４５ｍｇ、７５０ｍｇ、７５５ｍｇ、７６０ｍｇ、７６５ｍｇ、７７０ｍｇ、７７５ｍｇ、７８０ｍｇ、７８５ｍｇ、７９０ｍｇ、７９５ｍｇ及び８００ｍｇから選択される用量で修飾オリゴヌクレオチドを含む。そうしたある種の実施形態では、医薬組成物は、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ及び８００ｍｇから選択される用量の修飾オリゴヌクレオチドを含む。

ある種の実施形態では、医薬品は、好適な希釈液、例えば、無菌注射用水または無菌注射用生理食塩水で再溶解される無菌凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドである。再溶解される製品は、食塩水に希釈してから皮下注射または点滴静注として投与される。凍結乾燥製剤は、注射用水または注射用食塩水で調製され、調製中に酸または塩基でｐＨ７．０〜９．０に調整し、その後凍結乾燥された修飾オリゴヌクレオチドからなる。凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドは、２５〜８００ｍｇのオリゴヌクレオチドであってもよい。これは、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１２５ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、２７５ｍｇ、３００ｍｇ、３２５ｍｇ、３５０ｍｇ、３７５ｍｇ、４２５ｍｇ、４５０ｍｇ、４７５ｍｇ、５００ｍｇ、５２５ｍｇ、５５０ｍｇ、５７５ｍｇ、６００ｍｇ、６２５ｍｇ、６５０ｍｇ、６７５ｍｇ、７００ｍｇ、７２５ｍｇ、７５０ｍｇ、７７５ｍｇ及び８００ｍｇの凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドを包含することが理解されよう。更に、いくつかの実施形態では、凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドは、２５ｍｇ〜８００ｍｇ、２５ｍｇ〜７００ｍｇ、２５ｍｇ〜６００ｍｇ、２５ｍｇ〜５００ｍｇ、２５ｍｇ〜４００ｍｇ、２５ｍｇ〜３００ｍｇ、２５ｍｇ〜２００ｍｇ、２５ｍｇ〜１００ｍｇ、１００ｍｇ〜８００ｍｇ、２００ｍｇ〜８００ｍｇ、３００ｍｇ〜８００ｍｇ、４００ｍｇ〜８００ｍｇ、５００ｍｇ〜８００ｍｇ、６００ｍｇ〜８００ｍｇ、１００ｍｇ〜７００ｍｇ、１５０ｍｇ〜６５０ｍｇ、２００ｍｇ〜６００ｍｇ、２５０ｍｇ〜５５０ｍｇ、３００ｍｇ〜５００ｍｇ、３００ｍｇ〜４００ｍｇ及び４００ｍｇ〜６００ｍｇから選択される範囲内の量のオリゴヌクレオチドである。凍結乾燥製剤は、２ｍＬのＴｙｐｅ Ｉ透明ガラスバイアル（硫酸アンモニウム処理）に入れ、ブロモブチルゴム栓で栓をしてアルミニウム製ＦＬＩＰ−ＯＦＦ（登録商標）オーバーシールで密封してもよい。

ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、医薬組成物に通常見られる他の補助成分を当該技術分野で確立された使用レベルで更に含んでもよい。このため、例えば、組成物は、適合性がある追加の医薬活性物質、例えば、鎮痒薬、収斂薬、局所麻酔薬または抗炎症薬を含んでもよいし、また、様々な剤形の本発明の組成物を物理的に配合するのに有用な追加物質、例えば色素、着香剤、防腐剤、酸化防止剤、乳白剤、粘度付与剤及び安定剤を含んでもよい。しかしながら、こうした物質は、加える際に、本発明の組成物の成分の生物活性を必要以上に阻害するものであってはならない。こうした製剤は滅菌し、必要に応じて、助剤、例えば、製剤のオリゴヌクレオチド（単数または複数）と有害な相互作用を起こさない滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧を調節するための塩、緩衝液、着色料、矯味矯臭剤及び／または芳香物質及び同種のものを含んでもよい。

核酸治療剤には脂質部分が種々の方法で使用されてきた。１つの方法では、カチオン性脂質と中性脂質との混合物で作られた、予め形成されたリポソームまたはリポプレックスに核酸を導入する。別の方法では、中性脂質の存在なしにＤＮＡとモノ−またはポリ−カチオン性脂質との複合体を形成する。ある種の実施形態では、脂質部分は、特定の細胞または組織への医薬品の分布が増加するように選択する。ある種の実施形態では、脂質部分は、脂肪組織への医薬品の分布が増加するように選択する。ある種の実施形態では、脂質部分は、筋肉組織への医薬品の分布が増加するように選択する。

ある種の実施形態では、イントラリピッドを使用してオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物を調製する。イントラリピッドは、静脈内投与用に調製された脂肪乳剤である。イントラリピッドは、１０％大豆油、１．２％卵黄リン脂質、２．２５％グリセリン及び注射用水からなる。更に、ｐＨを調整するため水酸化ナトリウムが加えられているため、最終製品のｐＨ範囲は６〜８．９になっている。

ある種の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、ポリアミン化合物または脂質部分と核酸との複合体を含む。ある種の実施形態では、こうした調製物は、各々独立に式（Ｚ）により定義される構造を有する１つまたは複数の化合物またはその薬学的に許容される塩を含み、

式中、Ｘ^ａおよびＸ^ｂは各々独立にそれぞれＣ_１〜６アルキレンであり；ｎは０、１、２、３、４または５であり；Ｒは各々独立にＨであり、調製物中の式（Ｚ）の化合物の分子の少なくとも８０％のＲ部分の少なくともｎ＋２はＨではなく；ｍは１、２、３または４であり；ＹはＯ、ＮＲ^２またはＳであり；Ｒ^１はアルキル、アルケニル、またはアルキニルであり；その各々は任意選択的に１つまたは複数の置換基で置換されており；Ｒ^２はＨ、アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり；その各々は任意選択的に置換され、その各々は任意選択的に１つまたは複数の置換基で置換されており；ただし、ｎ＝０である場合、Ｒ部分の少なくともｎ＋３はＨではない。こうした調製物は、脂質調製物の開示についてその全体を本明細書に援用する国際公開第２００８／０４２９７３号明細書に記載されている。いくつかの別の調製物については、脂質調製物の開示についてその全体を本明細書に援用するＡｋｉｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２６，５６１−５６９（０１ Ｍａｙ ２００８）に記載されている。

ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、１つまたは複数の修飾オリゴヌクレオチド、及び１種または複数種の賦形剤を含む。そうしたある種の実施形態では、賦形剤は、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトース、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロキシメチルセルロース及びポリビニルピロリドンから選択される。

ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、以下に限定されるものではないが、混合工程、溶解工程、造粒工程、糖衣錠製造工程、水簸工程、乳化工程、カプセル充填工程、封入工程または錠剤化工程を含む既知の技術を用いて調製される。

ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は液体（例えば、懸濁剤、エリキシル剤及び／または溶液剤）である。こうした実施形態の一部では、液体医薬組成物は、当該技術分野において公知の成分、以下に限定されるものではないが、水、グリコール、油、アルコール、着香剤、防腐剤及び着色剤を用いて調製される。

ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は固体（例えば、散剤、錠剤及び／またはカプセル剤）である。こうした実施形態の一部では、１つまたは複数のオリゴヌクレオチドを含む固体医薬組成物は、当該技術分野において公知の成分、以下に限定されるものではないが、デンプン、糖、希釈液、造粒剤、滑沢剤、バインダー及び崩壊剤を用いて調製される。

ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物はデポ調製物として製剤化される。ある種のこうしたデポ調製物は典型的には非デポ調製物より長く作用する。ある種の実施形態では、こうした調製物は、埋入（例えば皮下または筋肉内）または筋肉内注射により投与される。ある種の実施形態では、デポ調製物は、好適なポリマー材料若しくは疎水性材料（例えば許容可能な油に溶かしたエマルジョン）またはイオン交換樹脂を用いて、或いは、やや溶けにくい誘導体、例えば、やや溶けにくい塩として調製される。

ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、送達系を含む。送達系の例には、リポソーム及びエマルジョンがあるが、これに限定されるものではない。ある種の送達系は、疎水性化合物を含む医薬組成物などある種の医薬組成物の調製に有用である。ある種の実施形態では、ある種の有機溶媒、例えばジメチルスルホキシドが使用される。

ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、本発明の１つまたは複数の医薬品を特異的な組織または細胞型に送達するように設計された１つまたは複数の組織特異的送達分子を含む。例えば、ある種の実施形態では、医薬組成物は、組織特異的抗体でコーティングされたリポソームを含む。

ある種の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、徐放システムを含む。そうした徐放システムの非限定的な例として、固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスがある。ある種の実施形態では、徐放システムは、その化学的性質に応じて数時間、数日、数週または数ヶ月の期間にわたり医薬品を放出することができる。

ある種の実施形態では、医薬組成物は、注射による投与（例えば、静脈内、皮下、筋肉内等）用に調製される。こうした実施形態の一部では、医薬組成物は、キャリアを含み、水溶液、例えば水または生理学的に適合性の緩衝液、例えばハンクス液、リンゲル液または生理食塩水緩衝液中で製剤化される。ある種の実施形態では、他の成分（例えば、溶解を助けるまたは防腐剤として働く成分）も含まれる。ある種の実施形態では、適切な液体キャリア、懸濁化剤及び同種のものを用いて注射用懸濁液を調製する。ある種の注射用医薬組成物は、単位剤形、例えば、アンプルまたは複数用量容器で提供される。ある種の注射用医薬組成物は、油性若しくは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンであり、製剤添加剤、例えば懸濁剤、安定化剤及び／または分散剤を含んでもよい。注射用医薬組成物に使用するのに好適なある種の溶媒には、親油性溶媒及び脂肪油、例えばゴマ油、合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルまたはトリグリセリド、並びにリポソームがあるが、これに限定されるものではない。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を高める物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランを含んでもよい。任意に、こうした懸濁液は、好適な安定剤、または医薬品の溶解性を高めて高濃縮溶液の調製を可能にする作用物質を更に含んでもよい。

ある種の実施形態では、本明細書に提供される医薬組成物は、治療有効量で修飾オリゴヌクレオチドを含む。ある種の実施形態では、治療有効量は、疾患の症状を予防、緩和または軽減させる、或いは、処置された被検体の生存を延長させるのに十分な量である。治療有効量の判定は、十分に当業者の能力の範囲内である。

ある種の実施形態では、本明細書に提供される１つまたは複数の修飾オリゴヌクレオチドはプロドラッグとして製剤化される。ある種の実施形態では、プロドラッグは、インビボ投与すると、生物学的に、薬学的にまたは治療的により活性な形態のオリゴヌクレオチドに化学的に変換される。ある種の実施形態では、プロドラッグは、その活性形態より投与しやすいため、有用である。例えば、場合によっては、プロドラッグは、その活性形態より（例えば、経口投与により）体内吸収される可能性がある。場合によっては、プロドラッグは、その活性形態と比較して溶解性を改善できたかもしれない。ある種の実施形態では、プロドラッグは、その活性形態より水溶性に乏しい。場合によっては、こうしたプロドラッグは、細胞膜（通り抜けるには水溶性が妨げになる）を通過する優れた送達性を有する。ある種の実施形態では、プロドラッグはエステルである。そうしたある種の実施形態では、エステルは、投与すると代謝によりカルボン酸に加水分解される。場合によっては、カルボン酸を含む化合物はその活性形態である。ある種の実施形態では、プロドラッグは、酸性基に結合した短いペプチド（ポリアミノ酸）を含む。こうした実施形態の一部では、ペプチドは、投与されると切断されてその活性形態となる。

ある種の実施形態では、プロドラッグは、インビボ投与すると医薬活性化合物が再生するように医薬活性化合物を修飾することにより製造する。プロドラッグは、薬剤の代謝安定性または輸送性を変化させる、副作用または毒性をマスクする、薬剤の風味を改善する、或いは、薬剤の他の特徴または特性を変化させるように設計してもよい。当業者は、医薬活性化合物が分かれば、インビボでの薬力学的プロセス及び薬物代謝の知識に基づき、その化合物のプロドラッグを設計することができる（例えば、Ｎｏｇｒａｄｙ（１９８５） Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ａ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐａｇｅｓ ３８８−３９２を参照されたい）。

特定の追加治療
ｍｉＲ−２１に関連する疾患の処置は、２つ以上の治療を含んでもよい。したがって、ある種の実施形態では、本明細書で記載されるのは、ｍｉＲ−２１に関連する疾患を有するまたはそれを有する疑いがある被検体を処置するための方法であって、マイクロＲＮＡと相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドに加えて少なくとも１つの治療を行うことを含む方法である。

ある種の実施形態では、少なくとも１つの追加治療は医薬品を含む。

ある種の実施形態では、医薬品は抗炎症薬を含む。ある種の実施形態では、抗炎症薬はステロイド系抗炎症薬である。ある種の実施形態では、ステロイド抗炎症薬はコルチコステロイドである。ある種の実施形態では、コルチコステロイドはプレドニゾンである。ある種の実施形態では、抗炎症薬は非ステロイド系抗炎症剤である。ある種の実施形態では、非ステロイド系抗炎症薬はイブプロフェン、ＣＯＸ−Ｉ阻害剤またはＣＯＸ−２阻害剤である。

ある種の実施形態では、医薬品は抗糖尿病薬を含む。抗糖尿病薬には、ビグアナイド、グルコシダーゼ阻害剤、インスリン、スルホニル尿素およびチアゾリデンジオンがあるが、これに限定されるものではない。

ある種の実施形態では、医薬品には利尿薬（たとえばスプリオノラクトン、エプレレノン、フロセミド）、変力作用薬（たとえばドブタミン、ミルリノン）、ジゴキシン、血管拡張薬、アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤（たとえばカプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリルおよびラミプリル）、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）（たとえばカンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、エプロサルタン）、カルシウムチャネル遮断薬、二硝酸イソソルビド、ヒドララジン、ニトレート（たとえば一硝酸イソソルビド、二硝酸イソソルビド）、ヒドララジン、β遮断薬（たとえばカルベジロール、メトプロロール）およびナトリウム利尿ペプチド（たとえばネシリチド）があるが、これに限定されるものではない。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤はシラザプリル、ペリンドプリルおよびトランドラプリルから選択される。

ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、０．０２５〜０．１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、０．１２５〜１．０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、１〜６ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、１〜２ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、２〜４ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＣＥ阻害剤は、０．５〜１ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。

ある実施形態では、ラミプリルは、１〜６ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある種の実施形態では、ラミプリルは、１〜２ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、エナラプリルは、２〜４ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、リシノプリルは、４〜８ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、ベナゼプリルは、４〜８ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、ホシノプリルは、４〜８ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、キナプリルは、４〜８ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、シラザプリルは、１〜２ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、ペリンプリルは、１〜２ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、トランドラプリルは、０．５〜１ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。

ある種の実施形態では、ＡＲＢは、６．２５〜１５０ｍｇ／ｍ^２／日の範囲にわたる用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＲＢは、６．２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＲＢは、１０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＲＢは、１２．５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＲＢは、１８．７５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＲＢは、３７．５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＲＢは、５０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。ある種の実施形態では、ＡＲＢは、１５０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。

ある種の実施形態では、ロサルタンは、１２．５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。ある種の実施形態では、ロサルタンは、１２．５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。ある種の実施形態では、カンデサルタンは、６．２５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。ある種の実施形態では、イルベスタルタンは、３７．５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。ある種の実施形態では、テルミサルタンは、１０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。ある種の実施形態では、バルサルタンは、１８．７５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。ある種の実施形態では、エスプレサルタンは、１５０ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。

ある種の実施形態では、医薬品はアルドステロンアンタゴンシストである。ある種の実施形態では、アルドステロンアンタゴニストはスピロノラクトンである。ある種の実施形態では、スピロノラクトンは１日１０〜３５ｍｇの範囲にわたる用量で投与される。ある種の実施形態では、スピロノラクトンは１日２５ｍｇの用量で投与される。

ある種の実施形態では、医薬品はヘパリノイドを含む。ある種の実施形態では、ヘパリノイドはペントサンポリ硫酸である。

ある種の実施形態では、医薬品は、線維化シグナルに対する１つまたは複数の反応をブロックする医薬品である。

ある種の実施形態では、医薬品は抗結合組織増殖因子治療剤である。ある種の実施形態では、抗ＣＴＧＦ治療剤はＣＴＧＦに対するモノクローナル抗体である。

ある種の実施形態では、追加治療は、身体の免疫系を強化する医薬品であってもよく、低用量シクロフォスファミド、チモスチムリン、ビタミンおよび栄養補助剤（たとえば、酸化防止剤、たとえばビタミンＡ、ビタミンＣ、ビタミンＥ、βカロテン、亜鉛、セレン、グルタチオン、コエンザイムＱ−１０およびエキネシア）、ならびにワクチン、たとえば、多量体抗原の提示とアジュバントとを組み合わせたワクチン製剤を構成する免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）が挙げられる。

ある種の実施形態では、追加治療は、本発明の１種または複数種の医薬組成物の副作用を処置または軽減するように選択される。こうした副作用として、以下に限定されるものではないが、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常およびミオパチーが挙げられる。たとえば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベルの上昇は、肝毒性または肝機能異常を示す場合がある。たとえば、ビリルビンの増加も、肝毒性または肝機能異常を示す場合がある。

追加医薬品の別の例には、免疫グロブリン、以下に限定されるものではないが、静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩｇ）；鎮痛薬（たとえば、アセトアミノフェン）；サリチレート；抗生物質；抗ウイルス薬；抗真菌薬；アドレナリン作用修飾薬；ホルモン（たとえば、アナボリックステロイド、アンドロゲン、エストロゲン、カルシトニン、プロゲスチン、ソマトスタンおよび甲状腺ホルモン）；免疫調節剤；筋弛緩薬；抗ヒスタミン剤；骨粗鬆症薬（たとえば、ビホスホネート、カルシトニンおよびエストロゲン）；プロスタグランジン、抗腫瘍薬；精神治療薬；鎮静剤；毒オークまたは毒ウルシの生成物；抗体；およびワクチンがあるが、これに限定されるものではない。

ある種のキット
本発明はまたキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、核酸塩基配列がｍｉＲ−２１の核酸塩基配列と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む、本発明の１種または複数種の化合物を含む。ｍｉＲ−２１と相補的な化合物は、本明細書に記載のヌクレオシドパターンのいずれを有してもよい。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物はバイアル内に存在してもよい。例えば、調剤容器には、１０個などの複数のバイアルが存在してもよい。いくつかの実施形態では、バイアルは、シリンジが利用しやすいように製造する。キットは、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物の使用説明書を更に含んでもよい。

いくつかの実施形態では、キットを使用してｍｉＲ−２１と相補的な化合物を被検体に投与することができる。こうした例では、キットは、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物に加えて、以下の１つまたは複数を更に含んでもよい：シリンジ、アルコール綿棒、コットンボール及び／またはガーゼ。いくつかの実施形態では、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物は、バイアル中でなくプレフィルドシリンジ（例えば２７ゲージ、１／２インチ針の針ガード付き単回投与シリンジ）中に存在してもよい。１０本など複数のプレフィルドシリンジが、例えば、調剤容器中に存在してもよい。キットは、ｍｉＲ−２１と相補的な化合物の投与説明書を更に含んでもよい。

ある種の実験モデル
ある種の実施形態では、本発明は、実験モデルを用いて本発明の修飾オリゴヌクレオチドを使用及び／または試験する方法を提供する。当業者であれば、そうした実験モデルのプロトコルを選択及び変更して本発明の医薬品を評価することができる。

一般に、修飾オリゴヌクレオチドは最初に培養細胞で試験する。好適な細胞型には、インビボでの修飾オリゴヌクレオチドの送達が望ましい細胞型に関連する細胞型がある。例えば、本明細書に記載の方法の研究に好適な細胞型には、初代細胞または培養細胞がある。

ある種の実施形態では、培養細胞を用いて、修飾オリゴヌクレオチドがｍｉＲ−２１の活性を阻害する程度を評価する。ある種の実施形態では、マイクロＲＮＡ活性の阻害は、マイクロＲＮＡのレベルを測定することにより評価することができる。或いは、予想されるまたは検証されたマイクロＲＮＡ制御転写物のレベルを測定してもよい。マイクロＲＮＡ活性が阻害されると、ｍｉＲ−２１制御転写物、及び／またはｍｉＲ−２１制御転写物によりコードされたタンパク質が増加する場合がある。更に、ある種の実施形態では、ある種の表現型の結果を測定してもよい。

ヒト疾患モデルを対象としたｍｉＲ−２１の研究用にいくつかの動物モデルが、当業者に入手可能である。たとえば、アルポート症候群の実験モデル、たとえばＣｏｌ４ａ３ノックアウトマウス（Ｃｏｌ４ａ３^−／−マウス）を用いてｍｉＲ−２１の阻害剤を研究することができる。マウスモデルの疾患の重症度は、Ｃｏｌ４ａ３突然変異を有するマウスの遺伝的背景に依存する。たとえば、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ背景と比較して１２９Ｘ１／ＳｖＪ背景では、疾患の発症および進行が一般に速い。したがって、Ｃｏｌ４ａ３^−／−マウスの遺伝的背景は、疾患の発症および進行が異なるように選択することができる。別のモデルとして、Ｘ連鎖、常染色体劣性または常染色体優性のアルポート症候群のイヌモデルが挙げられる。たとえば、Ｋａｓｈｔａｎ，Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，２００２，１７：１３５９−１３６１を参照されたい。

ある種の定量化アッセイ
修飾オリゴヌクレオチドの投与後のｍｉＲ−２１のアンチセンス阻害の作用は、当該技術分野において公知の種々の方法により評価することができる。ある種の実施形態では、これらの方法を用いて、細胞または組織のマイクロＲＮＡレベルをインビトロまたはインビボで定量する。ある種の実施形態では、マイクロアレイ解析によりマイクロＲＮＡレベルの変化を測定する。ある種の実施形態では、市販されているいくつかのＰＣＲアッセイの１つ、例えばＴａｑＭａｎ（登録商標）ＭｉｃｒｏＲＮＡ Ａｓｓａｙ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によりマイクロＲＮＡレベルの変化を測定する。ある種の実施形態では、ｍｉＲ−２１の標的のｍＲＮＡ及び／またはタンパク質レベルを測定することにより、ｍｉＲ−２１のアンチセンス阻害を評価する。ｍｉＲ−２１のアンチセンス阻害を行うと、一般にマイクロＲＮＡの標的のｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルが上昇する。

標的結合アッセイ
抗ｍｉＲまたはマイクロＲＮＡ模倣物によるマイクロＲＮＡ活性の調節は、標的結合を測定することにより評価することができる。ある種の実施形態では、標的結合は、ｍＲＮＡのマイクロアレイプロファイリングにより測定する。抗ｍｉＲまたはマイクロＲＮＡ模倣物により調節される（増加或いは減少する）ｍＲＮＡの配列についてマイクロＲＮＡシード配列を検索し、マイクロＲＮＡの標的であるｍＲＮＡの調節を、マイクロＲＮＡの標的でないｍＲＮＡの調節と比較する。この方法では、抗ｍｉＲとｍｉＲ−２１と、またはｍｉＲ−２１模倣物とその標的との相互作用を評価することができる。抗ｍｉＲの場合には、発現レベルが上昇するｍＲＮＡについて、抗ｍｉＲと相補的なマイクロＲＮＡのシードマッチを含むｍＲＮＡ配列をスクリーニングする。

本発明のいくつかの実施形態をより詳細に説明するため、以下に実施例を示す。但し、実施例は、本発明の広範な範囲を限定するものとして解釈してはならない。当業者であれば、本発見の根底にある原理を採用し、本発明の精神を逸脱しない範囲で様々な化合物を容易に設計するであろう。

実施例１：アルポート症候群のモデルにおける抗ｍｉＲ−２１
１２９ｓｖの遺伝的背景のＣｏｌ４ａ３^−／−マウスは、ヒトアルポート症候群に類似した重度腎疾患を自然に発症する。したがって、アルポート症候群の実験モデルとしてＣｏｌ４ａ３^−／−マウスを使用する。

アルポート症候群のＣｏｌ４ａ３^−／−モデルを用いて、ｍｉＲ−２１と相補的な修飾オリゴヌクレオチド（抗ｍｉＲ−２１化合物）を試験した。野生型マウスを対照マウスとした使用した。

抗ｍｉＲ−２１化合物の構造は、５’−Ａ_ＥＣ_ＳＡＴＣ_ＳＡＧＴＣ_ＳＴＧＡＵ_ＳＡＡＧＣ_ＳＴＡ_Ｅ−３’（配列番号３）であり、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

３週齢でマウスの遺伝子型を調べてＣｏｌ４ａ３−／−マウスを特定した。３週齢から９週齢で性別が一致したマウスの同腹仔を抗ｍｉＲ−２１またはＰＢＳで処置した。抗ｍｉＲ−２１は、２５ｍｇ／ｋｇの用量で週２回皮下投与した。処置群は：（１）野生型マウス、ＰＢＳ投与、ｎ＝８；（２）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、ＰＢＳ投与、ｎ＝１２；（３）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、抗ｍｉＲ−２１投与、ｎ＝１２であった。Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの野生型同腹仔を野生型対照マウスとして使用した。夜間尿サンプル（約１６時間）を週１回採取した。血漿および腎臓は、９週目の終了時に採取した。体液サンプルおよび組織サンプルを解析して腎機能、腎臓損傷ならびに糸球体硬化および間質線維症の変化を判定した。

血液または尿の評価項目は、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、アルブミン尿、アルブミン／クレアチニン比、糸球体濾過量の測定とした。組織学的解析には、糸球体硬化、間質線維症、尿細管の傷害、マクロファージ浸潤および筋線維芽細胞の存在の評価を含めた。

血中尿素窒素（ＢＵＮ）は９週目に測定した。統計学的有意性は、マン・ホイットニー検定により計算した。図１Ａに示すように試験終了時点で、抗ｍｉＲ−２１で処置した動物では、ＰＢＳ処置対照動物と比較してＢＵＮの統計学的に有意な低下が観察された。ＢＵＮの低下は、全体（図１Ａ）だけでなく、雄マウスのみ（対照雄マウスの約２５ｍｇ／ｄＬと比較して約９０ｍｇ／ｄＬ）および雌マウスのみ（対照雌マウスの約２５ｍｇ／ｄＬと比較して約７０ｍｇ／ｄＬ）図示せず）でも観察された。Ｃｏｌ４ａ３＋／＋マウスのＢＵＮは、約１２．５ｍｇ／ｋＬ（正常範囲内；図示せず）であった。ＢＵＮは、腎機能の血液マーカーである。ＢＵＮが高くなると腎機能が低下する関係にある。ＢＵＮの低下は、腎臓の傷害および損傷の減少と機能の改善との指標である。

アルブミン尿は、週１回の頻度で１６時間にわたり採取した尿サンプル中のアルブミンをＥＬＩＳＡにより測定し、尿中クレアチニン排泄量に対して標準化して評価した。解析はすべて試験終了時に同時に行った。図１Ｂに示すように、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスは重度のアルブミン尿が出現する。一方、抗ｍｉＲ−２１で処置したマウスは、尿中アルブミン／クレアチニン比の低下により認められるように、出現したアルブミン尿がはるかに少なかった。アルブミン尿の減少は７週目には観察され、９週目まで続いた。Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの野生型同腹仔は、予想通りアルブミン尿を示さなかった。アルブミン尿は、糸球体および尿細管の損傷の高感度の指標である。アルブミン／クレアチニン比の低下は、糸球体および／または尿細管疾患の減少を示す。

アルポートシドロムはさらに、糸球体硬化症、および不適切な糸球体漏出が起こると生じる著しい腎間質線維症の進行性の発症を特徴とする。したがって、糸球体硬化症は、盲検による糸球体の硬化病変スコア（毛細血管ループの消失＋線維症または硝子化）により評価した。盲検下の観察者が、各マウス由来の３０の糸球体を連続的にスコア化した。スコアは０〜４とし、０＝正常；１＝硬化症に冒された糸球体が＜２５％；２＝２５〜５０％の糸球体が硬化症に冒されている；３＝５０〜７５％の糸球体が硬化症に冒されている；４＝７５〜１００％の糸球体が硬化症に冒されている。疾患のない糸球体の比率は抗ｍｉＲ−２１で処置したマウスの方でかなり高く、中等度または重度に冒された糸球体（スコア２〜４）の糸球体比率は、ＰＢＳで処置したマウスの方で著しく高かった（図２）。Ｃｏｌ４３ａ−／−マウスの野生型同腹仔（ＷＴ）の糸球体もスコア化した。間質線維症は、ＰＢＳ処置および抗ｍｉＲ−２１ Ｃｏｌ４ａ３−／−動物由来の、ピクロシリウスレッドで染色した矢状切片全体を対象に形態計測学的に測定した。図３Ａに示すように、抗ｍｉＲ−２１処置Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの間質線維症の統計学的に有意な減少が観察された。さらに、主要な病的基質タンパク質コラーゲンＩα（１）（Ｃｏｌ１ａ１）の転写物の定量ＰＣＲから、抗ｍｉＲ−２１処置Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス由来の腎臓組織では、この病的コラーゲンの産生が非常に少ないことも示された（図３Ｂ）。

腎組織傷害は、過ヨウ素酸シッフ（ＰＡＳ）反応により染色した、パラホルムアルデヒド（４％）固定パラフィン包埋組織切片を用いて評価した。最初に腎臓切片について、尿細管および糸球体の傷害および炎症に基づき傷害全体の順位付けを行った。損傷は、尿細管の拡張、刷子縁の消失、細胞浸潤、糸球体の炎症、間質の浮腫および細胞壊死などの種々の因子に基づき評価した。腎臓切片については、盲検的に傷害全体の順位付けを行い、腎臓傷害順位スコアを付与した。Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス由来の腎臓切片は、著しく低い腎臓傷害順位スコアを示したことから、腎臓傷害が少ないことが示唆される（図４Ａ）。これをより詳細に解析するため、糸球体について、盲検下の観察者により糸球体半月体を有する比率を評価した。半月体はボーマン嚢内の細胞の増殖であり、ボーマン腔内細胞が≧２層であることで半月体と定義される。半月体は、糸球体傷害の十分に確立されたマーカーである。抗ｍｉＲ−２１を投与したＣｏｌ４ａ３−／−マウスでは、半月体を有する糸球体の比率は約４４％であったのに対し、ＰＢＳ対照処置を受けたマウスでは、半月体を有する糸球体の比率は約１９％であった（図４Ｂ）。Ｃｏｌ４ａ３＋／＋同腹仔では、半月体を有する糸球体の比率は５％未満であった（図示せず）。腎臓のネフロンの尿細管も損傷される部位である。尿細管損傷は、各腎臓の矢状切片全体をカバーする時系列画像の格子を重ねることにより評価した。尿細管の損傷は、格子の升目ごとに盲検的に評価した。尿細管の損傷は、尿細管の拡張／扁平化、刷子縁の消失、細胞浸潤および細胞壊死の存在に基づき評価した。これらの特徴が存在した場合、格子の升目のスコアが正になる。尿細管の損傷を有する升目の％である総合スコアを各画像に適用する。その腎臓由来の全画像について総合スコアを平均する。次いで腎臓ごとの平均スコアを統計解析に供する。図示されるように、尿細管の傷害スコアは、ＰＢＳを投与したＣｏｌ４ａ３−／−（図４Ｃ）と比較して抗ｍｉＲ−２１で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの方が有意に低かった。Ｃｏｌ４ａ３＋／＋同腹仔の尿細管の傷害スコアは、１０％未満であった（図示せず）。

腎臓サンプルの別の組織学的解析を行い、マクロファージ浸潤、内皮細胞の安定性および筋線維芽細胞の付着を評価した。Ｆ４／８０染色で判断したところ、ＰＢＳ処置Ｃｏｌ４ａ３−／−対照マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１処置Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスでは、マクロファージ浸潤が減少していた（図５Ａ）。ＣＤ３１の免疫細胞化学的染色から、ＰＢＳ処置Ｃｏｌ４ａ３−／−対照マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１処置Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスでは、内皮細胞の安定性の改善が立証された（図示せず）。α−ＳＭＡの検出により、ＰＢＳ処置Ｃｏｌ４ａ３−／−対照マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１処置Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの筋線維芽細胞の付着の減少が明らかになった（図５Ｂ）。Ｃｏｌ４ａ３＋／＋マウスでは、α−ＳＭＡ染色は約５％であった（図示せず）。

反応性酸素種（ＲＯＳ）は正常な細胞代謝の副産物である。細胞ストレスにおいて、過剰なＲＯＳは、細胞膜およびオルガネラ膜の脂質過酸化を引き起こし、その結果構造の完全性と細胞輸送能およびエネルギー産生能とを破壊し得る。腎臓では、細胞ストレスにおいて産生されたＲＯＳは腎傷害を引き起こすことがある。Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスにおいてｍｉＲ−２１の阻害後にＲＯＳの産生が減少したかどうかを評価するため、抗ｍｉＲ−２１処置マウスおよびＰＢＳ処置マウスを用いて尿中の過酸化水素レベルを測定した。尿中の過酸化水素レベルは、抗ｍｉＲ−２１を投与したマウスで有意に低下した（図６Ａ）。Ｃｏｌ４ａ３＋／＋マウスでは、尿中の過酸化水素レベルは５μＭ未満であった（図示せず）。さらに、ＲＯＳの指標であるジヒドロエチジウム（ＤＨＥ）による腎臓組織の免疫細胞化学的染色から、ＰＢＳ処置対照マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１処置Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの腎臓組織においてＲＯＳの減少が立証された（図６Ｂ）。Ｃｏｌ４ａ３＋／＋マウスでは、ＤＨＥ染色が観察されたのは１０％未満であった（図示せず）。これらのデータから、抗ｍｉＲ−２１で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの尿および腎臓組織の両方におけるＲＯＳの減少が立証される。したがって、抗ｍｉＲ−２１が腎臓傷害を減少させ得る１つのメカニズムとして、反応性酸素種の産生を減少させることが挙げられる。

抗ｍｉＲ−２１で処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの腎臓タンパク質の免疫ブロットから、腎臓内のＭＰＶ１７Ｌタンパク質の量がＣｏｌ４ａ３−／−マウスと比較して増加することが明らかになった。ＭＰＶ１７Ｌは、反応性酸素種の代謝に関係し、酸化ストレスを防止するミトコンドリア内膜タンパク質である。したがって、抗ｍｉＲ−２１処置後のＲＯＳ産生の減少は、ＭＰＶ１７Ｌレベルの増加により、少なくともある程度起こり得る。抗ｍｉＲ−２１の作用機序をさらに探るため、ＰＢＳで処置または抗ｍｉＲ−２１処置のＣｏｌ４ａ３−／−マウスの腎臓の免疫ブロットにより、ＰＰＡＲ−αタンパク質を測定した。抗ｍｉＲ−２１処置はＰＰＡＲ−αタンパク質を増加させたことから、代謝経路の刺激が示唆された。

有足細胞は、糸球体濾過障壁に不可欠な要素である非常に特殊な上皮細胞である。有足細胞が減少するとタンパク尿が出て、一部の病状では糸球体硬化に至ることがある。Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスを用いて有足細胞数がｍｉＲ−２１の阻害の影響を受けるかどうかを評価するため、抗ｍｉＲ−２１処置マウスおよびＰＢＳ処置マウスの有足細胞数を測定した。有足細胞数は、ＰＢＳ処置マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１を投与したＣｏｌ４ａ３−／−マウスで有意に増加し、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの野生型同腹仔で観察された有足細胞数と同程度であった（図７）。したがって、アルポート症候群のモデルにおいて抗ｍｉＲ−２１が腎臓傷害を減少させ得る１つのメカニズムは、有足細胞の減少を防止または抑制することによる。

以下の抗ｍｉＲ−２１化合物：
抗ｍｉＲ−２１化合物＃１（上記）：５’−Ａ_ＥＣ_ＳＡＴＣ_ＳＡＧＴＣ_ＳＴＧＡＵ_ＳＡＡＧＣ_ＳＴＡ_Ｅ−３’（配列番号３）
抗ｍｉＲ−２１化合物＃２：５’−Ａ_ＥＣ_ＳＡＴＣ_ＳＡ_ＳＧＴＣ_ＳＵ_ＳＧＡＵ_ＳＡ_ＳＡＧＣ_ＳＵｓＡ_Ｅ−３’（配列番号３）；
抗ｍｉＲ−２１化合物＃３：５’−^ＭｅＣ_ＥＡ_ＳＡ_ＳＴ_ＥＣ_ＳＵ_ＳＡ_ＥＡ_ＥＵ_ＳＡ_ＳＡ_ＥＧ_ＥＣ_ＳＴ_ＥＡ_Ｓ−３’（配列番号４）；および
抗ｍｉＲ−２１化合物＃４：５’−Ａ_ＥＣ_ＳＡ_ＥＴ_ＥＣ_ＳＡ_ＥＧ_ＥＴ_ＥＣ_ＳＴＧＡＵ_ＳＡＡＧＣ_ＳＵ_ＳＡ_Ｓ−３’（配列番号３）；
を用いて同様の研究を行った。（ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し；および上付き文字「Ｍｅ」はヌクレオシドの塩基の５−メチル基を示す）。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

各化合物は、３週齢のＣｏｌ４ａ３−／−マウスに２５ｍｇ／ｋｇの用量で週２回９週間投与した。対照群は、ＰＢＳで処置したＣｏｌ４ａ３−／−マウス、およびＣｏｌ４ａ３−／−マウスの野生型同腹仔とした。各処置群は、１０〜１２匹のマウスを含んでいた。化合物＃１、２および４では、各評価項目は上記のように評価し、ＢＵＮ、尿中アルブミン／クレアチニン比、腎臓傷害（ＰＡＳ染色）、糸球体硬化症および半月体を有する糸球体の比率とした。化合物＃３の評価項目は、ＢＵＮ、尿中アルブミン／クレアチニン比およびコラーゲン遺伝子発現（線維症の指標として）とし、上記のように評価した。

上述の結果と一致して、抗ｍｉＲ−２１化合物＃１では評価対象の全評価項目が改善した。両方の抗ｍｉＲ−２１化合物＃２の有効性も化合物＃１のそれと同様であり、ＢＵＮ、尿中アルブミン／クレアチニン比、腎臓傷害、糸球体硬化症の程度および半月体を有する糸球体の割合において改善が観察された。化合物＃３の有効性も化合物＃１のそれと同様であり、ＢＵＮ、尿中アルブミン／クレアチニン比およびＣｏｌ１ａ１発現において改善が観察された。抗ｍｉＲ−２１化合物＃４は、化合物試験した他の化合物より有効性が低いものの、それでもＢＵＮ、腎臓傷害、糸球体硬化症の程度および半月体を有する糸球体の割合が改善した。

総合的に見ると、これらのデータから、アルポートシドロムのモデルでは、抗ｍｉＲ−２１処置が腎機能の低下およびアルブミン尿の発症を減弱させたことが証明される。糸球体硬化症および間質線維症は著明に減弱し、近位尿細管は維持された。抗ｍｉＲ−２１はＣｏｌ４ａ３−／−マウスの腎機能が徐々に低下するのを防止し、糸球体疾患および尿細管間質疾患の両方を減弱させるので、抗ｍｉＲ−２１はヒトアルポート症候群の治療薬である。

実施例２：アルポート症候群のモデルにおけるｍｉＲ−２１の増加
アルポート症候群の実験モデルにおけるｍｉＲ−２１の調節不全を評価するため、マウスから採取した腎臓組織のｍｉＲ−２１レベルを測定した。腎全体からＲＮＡを単離し、定量ＰＣＲによりｍｉＲ−２１を測定した。Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスでは、ｍｉＲ−２１レベルが野生型マウスのｍｉＲ−２１レベルと比較して約３倍高かった。

したがって、アルポート症候群の処置を受ける被検体は、処置を行う前の腎生検材料、尿または血液におけるｍｉＲ−２１が高いと確認され得る。

実施例３：アルポート症候群のモデルの生存試験
野生型マウスは一般に、２〜３年（７３０〜１０９５日）生存する。１２９Ｘ１／ＳｖＪ背景のＣｏｌ４ａ３−／−マウスの場合、末期腎不全が早ければ生後２ヶ月で起こることがある。Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ背景のＣｏｌ４ａ３−／−の場合、末期腎不全が早ければ生後６ヶ月で起こることがある。背景に関係なく、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの寿命は野生型マウスのそれより著しく短い。このため、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスは、どのような遺伝的背景でも、アルポート症候群における末期腎不全のモデルとすることができ、平均余命に対する候補治療薬の作用を評価するのに使用することができる。

マウスの遺伝子型を調べてＣｏｌ４ａ３−／−マウスを特定する。抗ｍｉＲ−２１は、１０〜２５ｍｇ／ｋｇの範囲にわたる用量で週１回または週２回、最大１年間皮下投与する。ＰＢＳは、対照処置として投与することができる。本試験を通じて週１回または月１回のスケジュールで夜間尿サンプル（約１６時間）を採取する。各マウスの死亡時の年齢を記録する。死亡時または試験終了時に血漿および腎臓を採取する。体液サンプルおよび組織サンプルを解析して腎機能、糸球体硬化および線維症の変化を判定する。

体液サンプルおよび組織サンプルを解析して腎機能、腎臓損傷ならびに糸球体硬化および間質線維症の変化を判定する。血液または尿の評価項目には、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、アルブミン尿、アルブミン／クレアチニン比、糸球体濾過量の測定を含める。組織学的解析には、糸球体硬化、間質線維症、尿細管の傷害、マクロファージ浸潤および筋線維芽細胞の存在の評価を含める。

ＰＢＳ処置対照マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１処置マウスにおける末期腎不全の発症の遅延および平均余命の延長が観察されることから、抗ｍｉＲ−２１がアルポート症候群の被検体の平均余命を延長させることができる治療薬であることが示唆される。

抗ｍｉＲ−２１は、アルポート症候群のモデルの生存期間を延長させる−単回投与試験
アルポート症候群の実験モデルの生存期間に対する抗ｍｉＲ−２１の作用を評価するため、抗ｍｉＲ−２１化合物をＣｏｌ４ａ３−／−マウスに投与した。

抗ｍｉＲ−２１化合物の構造は、５’−Ａ_ＥＣ_ＳＡＴＣ_ＳＡＧＴＣ_ＳＴＧＡＵ_ＳＡＡＧＣ_ＳＴＡ_Ｅ−３’（配列番号３）であり、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

１２９Ｘ１／ＳｖＪ背景のＣｏｌ４ａ３＋／１マウス（ヘテロ接合体）を掛け合わせてＣｏｌ４ａ３−／−マウスを作成した。生後３週で、マウスの遺伝子型を調べてＣｏｌ４ａ３−／−マウスを特定した。処置群は、（１）Ｃｏｌ４ａ３＋／＋マウス（野生型同腹仔）、ＰＢＳ投与、週２回、ｎ＝１２；（２）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、ＰＢＳ投与、週２回、ｎ＝１２；（３）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、２５ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１皮下投与、週２回、ｎ＝１２であった。処置剤は３週目から１６週目まで週２回投与した。動物の体重を週１回測定し、寿命を記録した。

予想通り、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスは生後約９週から体重減少が見られ、生後９〜１１週で死亡した。図８Ａに示すように、抗ｍｉＲ−２１は最大体重を増加させ、体重減少を有意に遅延させた（ｐ＜０．０１）。図８Ｂに示すように、抗ｍｉＲ−２１は寿命を有意に延長させた（ｐ＜０．００１）。したがって、抗ｍｉＲ−２１による処置は、体重減少を遅延させただけでなく、重要な点としてＣｏｌ４ａ３−／−マウスの生存期間も改善させた。

抗ｍｉＲ−２１はアルポート症候群のモデルの生存期間を延長させた−用量反応試験
アルポート症候群の実験モデルの生存期間に対する抗ｍｉＲ−２１の用量反応性を評価するため、いくつかの用量の抗ｍｉＲ−２１化合物をＣｏｌ４ａ３−／−マウスに投与した。

抗ｍｉＲ−２１化合物の構造は、５’−Ａ_ＥＣ_ＳＡＴＣ_ＳＡＧＴＣ_ＳＴＧＡＵ_ＳＡＡＧＣ_ＳＴＡ_Ｅ−３’（配列番号３）であり、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。

生後３週で、マウスの遺伝子型を調べてＣｏｌ４ａ３−／−マウスを特定した。処置群は、
（１）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、ＰＢＳ投与、週１回、ｎ＝１３；
（２）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、１２．５ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１投与、週１回、ｎ＝１２；
（３）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、２５ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１投与、週１回、ｎ＝１３；
（４）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、５０ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１投与、週１回、ｎ＝１２；
（５）Ｃｏｌ４ａ３−／−マウス、２５ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１投与、週２回、ｎ＝１２；
であった。

処理剤は、２４日目から投与した。動物の体重を週１回測定し、寿命を記録した。７週目で、血液を採取してＢＵＮを測定した。

図９Ａに示すように、ＰＢＳ処置対照動物と比較して抗ｍｉＲ−２１で処置した動物では、ＢＵＮの低下が観察された。ＢＵＮの低下は観察されたが、強い用量反応性がなかった。おそらく本実験に使用したＣｏｌ４ａ３−／−マウスの疾患がより重度であったためと考えられる（マウスは、前述の例に記載したＣｏｌ４ａ３−／−マウスと異なる業者から入手した）。観察されたＢＵＮの低下は、腎臓の傷害および損傷の減少と機能の改善の指標である。

図９Ｂに示すように、抗ｍｉＲ−２１による処置はＣｏｌ４ａ３−／−マウスの寿命を用量反応性に延長させた。寿命の延長は、週２回処置および週１回処置の両方で観察された。生存期間の中央値は以下の通りであった：ＰＢＳ、６２日；１２．５ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１ 週１回（ＱＷ）、７２．５日；２５ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１ 週１回（ＱＷ）、７７日；５０ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１ 週１回（ＱＷ）、８９日；２５ｍｇ／ｋｇの抗ｍｉＲ−２１ 週２回（ＢＩＷ）、８２．５日。

ＰＢＳ処置対照マウスと比較して抗ｍｉＲ−２１処置マウスにおける腎機能障害発症の遅延および平均余命の延長が観察されたことから、抗ｍｉＲ−２１がアルポート症候群の被検体の平均余命を延長し得る治療薬であることが示唆された。

実施例４：Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの腎臓における抗ｍｉＲの分布
抗ｍｉＲ化合物を含むオリゴヌクレオチドは、腎臓内のいくつかの細胞型に分布することが知られている。Ｃｈａｕ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ．，２０１２，１２１ｒａ１８により報告されているように、正常なマウスあるいは腎臓傷害を生じさせたマウス（一側尿管閉塞、間質線維症モデル）にＣｙ３標識抗ｍｉＲの投与後、腎臓内の最大蛍光強度は近位尿細管上皮であった。内皮、周皮細胞、筋線維芽細胞およびマクロファージにもすべて、検出可能な量のＣｙ３標識抗ｍｉＲが含まれていた。しかしながら、糸球体、特に有足細胞は、相当量の抗ｍｉＲを取り込んでいないようであり、化学修飾オリゴヌクレオチドの既知の分布と一致した（Ｍａｓａｒｊｉａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，２００４，１４，２９９−３１０）。

アルポート症候群のマウスモデルにおける抗ｍｉＲの分布を調べるため、Ｃｙ３標識抗ｍｉＲ化合物を、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスの２つの異なる群、生後６週の群（ｎ＝３）および生後８週の群（ｎ＝４）と、生後８週の野生型マウスの１群（ｎ＝３）に投与した。抗ｍｉＲ化合物の投与から２日後、動物を屠殺し、腎臓を採取し、組織学的解析用に処理した。

いくつかの異なる細胞マーカーに特異的な抗体で腎臓組織の切片を共標識して、特定の細胞型における抗ｍｉＲの取り込みを確認した。染色は、α−ＳＭＡ（筋線維芽細胞マーカー）、ＰＤＧＦＲ−β（周皮細胞／筋線維芽細胞マーカー）、ＣＤ３１（内皮細胞マーカー）、Ｆ４／８０（マクロファージマーカー）およびＧＰ３８（有足細胞マーカー）に対して行った。予想通り、抗ｍｉＲ化合物は、近位尿細管上皮、周皮細胞、筋線維芽細胞およびマクロファージに取り込まれた。正常なマウスおよび間質線維症のマウスにおける以前の観察結果とは異なり、Ｃｏｌ４ａ３−／−マウスでは、抗ｍｉＲは有足細胞を含め糸球体に取り込まれた。

本明細書に記載するように、アルポート症候群の実験モデルにおいて抗ｍｉＲ−２１投与後に観察された有効性は、尿細管周囲の間質線維症だけでなく、糸球体の線維症（糸球体硬化症という）の改善を伴う。これらデータから、こうした改善は、尿細管の構造および機能の改善からのフィードバックに加えてあるいはその代わりに、糸球体における抗ｍｉＲ−２１の作用に直接関係している可能性があることが示唆される。

Claims (38)

1. 修飾オリゴヌクレオチドを含むアルポート症候群を処置するための医薬組成物であり、該医薬組成物はアルポート症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体に投与され、該修飾オリゴヌクレオチドは１２〜２５個の連結したヌクレオシドからなり、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はｍｉＲ−２１と相補的である、医薬組成物。
2. 前記被検体は前記修飾オリゴヌクレオチドを投与する前にアルポート症候群を有すると診断されている、請求項１に記載の医薬組成物。
3. 前記被検体は、前記修飾オリゴヌクレオチドの投与の前に、前記被検体の腎臓中、尿中または血液中のｍｉＲ−２１のレベルが増加していると判定されている、請求項１に記載の医薬組成物。
4. ａ． 腎機能を改善する；
   ｂ． 末期腎臓病の発症を遅延させる；
   ｃ． 透析までの時間を遅延させる；
   ｄ． 腎移植までの時間を遅延させる；および／または
   ｅ． 平均余命を改善する
   請求項１〜３の何れか一項に記載の医薬組成物。
5. ａ． 血尿を減少させる；
   ｂ． 血尿の発症を遅延させる；
   ｃ． タンパク尿を減少させる；
   ｄ． タンパク尿の発症を遅延させる；
   ｅ． 腎線維症を軽減する；
   ｆ． 線維症の更なる進行を遅延させる；および／または
   ｇ． 線維症の更なる進行を阻止する
   請求項１〜４の何れか一項に記載の医薬組成物。
6. 前記被検体は、ＩＶ型コラーゲンのα３鎖をコードする遺伝子の突然変異、ＩＶ型コラーゲンのα４鎖をコードする遺伝子の突然変異、またはＩＶ型コラーゲンのα５鎖をコードする遺伝子の突然変異から選択される突然変異を有する、請求項１〜５の何れか一項に記載の医薬組成物。
7. 前記被検体は男性（雄）である、請求項１〜６の何れか一項に記載の医薬組成物。
8. 前記被検体は女性（雌）である、請求項１〜６の何れか一項に記載の医薬組成物。
9. 前記被検体は血尿および／またはタンパク尿を有すると確認される、請求項１〜８の何れか一項に記載の医薬組成物。
10. 前記被検体は腎機能が低下している、請求項１〜９の何れか一項に記載の医薬組成物。
11. 前記被検体は腎機能の改善を必要としている、請求項１〜１０の何れか一項に記載の医薬組成物。
12. 下記ａ．〜ｒ．の少なくとも１つが行われている、請求項１〜１１の何れか一項に記載の医薬組成物：
    ａ． 前記被検体の血液中の血中尿素窒素を測定すること；
    ｂ． 前記被検体の血液中のクレアチニンを測定すること；
    ｃ． 前記被検体のクレアチニンクリアランスを測定すること；
    ｄ． 前記被検体のタンパク尿を測定すること；
    ｅ． 前記被検体のアルブミン：クレアチニン比を測定すること；
    ｆ． 前記被検体の糸球体濾過量を測定すること；
    ｇ． 前記被検体のシスタチンＣを測定すること；
    ｈ． 前記被検体の血液中のβトレースタンパク質（ＢＴＰ）を測定すること；
    ｉ． 前記被検体の血液中の２−ミクログロブリンを測定すること；
    ｊ． 前記被検体の尿中のＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ（ＮＡＧ）タンパク質を測定すること；
    ｋ． 前記被検体の尿中の好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン（ＮＧＡＬ）タンパク質を測定すること；
    ｌ． 前記被検体の尿中の腎臓傷害分子−１（ＫＩＭ−１）タンパク質を測定すること；
    ｍ． 前記被検体の尿中のインターロイキン−１８（ＩＬ−１８）タンパク質を測定すること；
    ｎ． 前記被検体の尿中の単球走化性タンパク質（ＭＣＰ１）レベルを測定すること； ｏ． 前記被検体の尿中の結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）レベルを測定すること；
    ｐ． 前記被検体の尿中のコラーゲンＩＶフラグメントを測定すること；
    ｑ． 前記被検体の尿中のコラーゲンＩＩＩフラグメントを測定すること；および／または
    ｒ． 前記被検体の尿中の有足細胞タンパク質レベルを測定することであって、前記有足細胞タンパク質はネフリンおよびポドシンから選択される。
13. ａ． 前記被検体の血中尿素窒素の低下；
    ｂ． 前記被検体の血液中のクレアチニンの低下；
    ｃ． 前記被検体のクレアチニンクリアランスの改善；
    ｄ． 前記被検体のタンパク尿の減少；
    ｅ． 前記被検体のアルブミン：クレアチニン比の低下；
    ｆ． 前記被検体の糸球体濾過量の改善；
    ｇ． 前記被検体の血液中のシスタチンＣの低下；
    ｈ． 前記被検体の血液中のβトレースタンパク質（ＢＴＰ）の低下；
    ｉ． 被検体の血液中の２−ミクログロブリン（Ｂ２Ｍ）の低下；
    ｊ． 前記被検体の尿中のＮＡＧタンパク質の低下；
    ｋ． 前記被検体の尿中のＮＧＡＬタンパク質の低下；
    ｌ． 前記被検体の尿中のＫＩＭ−１タンパク質の低下；
    ｍ． 前記被検体の尿中のＩＬ−１８タンパク質の低下；
    ｎ． 前記被検体の尿中の単球走化性タンパク質（ＭＣＰ１）レベルの低下；
    ｏ． 前記被検体の尿中の結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）レベルの低下；
    ｐ． 前記被検体の尿中のコラーゲンＩＶフラグメントの低下；
    ｑ． 前記被検体の尿中のコラーゲンＩＩＩフラグメントの低下；および／または
    ｒ． 前記被検体の尿中の有足細胞タンパク質レベルの低下であって、前記有足細胞タンパク質はネフリンおよびポドシンから選択される、
    から選択される前記被検体の腎機能の１つまたは複数のマーカーを改善する、請求項１〜１２の何れか一項に記載の医薬組成物。
14. 前記タンパク尿はアルブミン尿である、請求項５、９、１２または１３に記載の医薬組成物。
15. 前記アルブミン尿は正常高値アルブミン尿、微量アルブミン尿または顕性アルブミン尿である、請求項１４に記載の医薬組成物。
16. 前記アルポート症候群はＸ連鎖型アルポート症候群である、請求項１〜１５の何れか一項に記載の医薬組成物。
17. 前記アルポート症候群は常染色体性型のアルポート症候群である、請求項１〜１６の何れか一項に記載の医薬組成物。
18. アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）、降圧薬、ビタミンＤアナログ、経口リン吸着薬、透析および腎臓移植から選択される少なくとも１つの追加治療が該被験者に行われる、請求項１〜１７の何れか一項に記載の医薬組成物。
19. 前記アンジオテンシンＩＩ変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤はカプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリルおよびラミプリルから選択される、請求項１８に記載の医薬組成物。
20. 前記アンジオテンシンＩＩ受容体遮断薬（ＡＲＢ）はカンデサルタン、イルベサルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタンおよびエプロサルタンから選択される、請求項１８に記載の医薬組成物。
21. 前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はｍｉＲ−２１の核酸塩基配列（配列番号１）と少なくとも９０％相補的、少なくとも９５％相補的または１００％相補的である、請求項１〜２０の何れか一項に記載の医薬組成物。
22. 前記修飾オリゴヌクレオチドは１５〜２５個の連結したヌクレオシドからなる、請求項１〜２１の何れか一項に記載の医薬組成物。
23. 前記修飾オリゴヌクレオチドは１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個または２２個の連結したヌクレオシドからなる、請求項１〜２２の何れか一項に記載の医薬組成物。
24. 前記修飾オリゴヌクレオチドは少なくとも１個の修飾ヌクレオシドを含む、請求項１〜２３の何れか一項に記載の医薬組成物。
25. 前記修飾ヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシド、２’−Ｏ−メトキシエチルヌクレオシドおよびＬＮＡヌクレオシドから選択される、請求項２１に記載の医薬組成物。
26. 前記修飾オリゴヌクレオチドは少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含む、請求項１〜２５の何れか一項に記載の医薬組成物。
27. 前記修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は各々、修飾ヌクレオシド間結合である、請求項１〜２６の何れか一項に記載の医薬組成物。
28. 前記修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項２６または２７に記載の医薬組成物。
29. 前記修飾オリゴヌクレオチドは構造５’−Ａ_ＥＣ_ＳＡＴＣ_ＳＡＧＴＣ_ＳＴＧＡＵ_ＳＡＡＧＣ_ＳＴＡ_Ｅ−３’を有し、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し、ヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１〜２８の何れか一項に記載の医薬組成物。
30. 構造５’−Ａ_ＥＣ_ＳＡＴＣ_ＳＡＧＴＣ_ＳＴＧＡＵ_ＳＡＡＧＣ_ＳＴＡ_Ｅ−３’を有する修飾オリゴヌクレオチドを含むアルポート症候群の処置のための医薬組成物であって、該医薬組成物はアルポート症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体に投与され、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−Ｄ−デオキシリボヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｅ」があるヌクレオシドは２’−ＭＯＥヌクレオシドを示し；後に下付き文字「Ｓ」があるヌクレオシドはＳ−ｃＥｔヌクレオシドを示し、ヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、医薬組成物。
31. 前記被検体が男性（雄）であり、且つ前記アルポート症候群がＸ連鎖型アルポート症候群である、請求項１〜７、９〜１６及び１８〜３０の何れか一項に記載の医薬組成物。
32. 前記被検体が男性（雄）であり、且つ前記アルポート症候群が常染色体劣性型のアルポート症候群である、請求項１〜７、９〜１５及び１７〜３０の何れか一項に記載の医薬組成物。
33. 前記被検体が女性（雌）であり、且つ前記アルポート症候群が常染色体劣性型のアルポート症候群である、請求項１〜６、８〜１５及び１７〜３０の何れか一項に記載の医薬組成物。
34. 前記被検体が女性（雌）であり、前記アルポート症候群がＸ連鎖型アルポート症候群であり、且つ前記被検体がＩＶ型コラーゲンのα５鎖をコードする遺伝子の突然変異を有する、請求項１〜６、８〜１６及び１８〜３０の何れか一項に記載の医薬組成物。
35. 前記被検体が女性（雌）であり、前記アルポート症候群が常染色体優性型のアルポート症候群であり、且つ前記被検体がＩＶ型コラーゲンのα３鎖をコードする遺伝子の突然変異を有する、請求項１〜６、８〜１５及び１７〜３０の何れか一項に記載の医薬組成物。
36. 前記被検体が女性（雌）であり、前記アルポート症候群が常染色体優性型のアルポート症候群であり、且つ前記被検体がＩＶ型コラーゲンのα４鎖をコードする遺伝子の突然変異を有する、請求項１〜６、８〜１５及び１７〜３０の何れか一項に記載の医薬組成物。
37. 前記被検体が男性（雄）であり、前記アルポート症候群が常染色体優性型のアルポート症候群であり、且つ前記被検体がＩＶ型コラーゲンのα３鎖をコードする遺伝子の突然変異を有する、請求項１〜７、９〜１５及び１７〜３０の何れか一項に記載の医薬組成物。
38. 前記被検体が男性（雄）であり、前記アルポート症候群が常染色体優性型のアルポート症候群であり、且つ前記被検体がＩＶ型コラーゲンのα４鎖をコードする遺伝子の突然変異を有する、請求項１〜７、９〜１５及び１７〜３０の何れか一項に記載の医薬組成物。

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