JP2020073479A - アルポート症候群の処置方法 - Google Patents
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Abstract
Description
る。
鎖、α2コラーゲン(IV型)鎖、α3コラーゲン(IV型)鎖、α4コラーゲン(IV
型)鎖、α5コラーゲン(IV型)鎖およびα6コラーゲン(IV型)のファミリーであ
る。コラーゲンIVのα3鎖、α4鎖およびα6鎖は、腎臓による血液の濾過という重要
な機能を行う糸球体基底膜(GBM)のコラーゲンネットワークの基本成分である。
体硬化をきたし、最終的に腎機能の喪失に至る遺伝性の腎疾患である。本疾患はさらに、
難聴および眼球異常を特徴とする場合が多い。アルポート症候群は、それぞれIV型コラ
ーゲンのα3(IV)鎖、α4(IV)鎖およびα5(IV)鎖をコードするCol4a
3、Col4a4またはCol4a5の突然変異により引き起こされる。X染色体上のC
ol4a5遺伝子の突然変異はX連鎖型アルポート症候群を引き起こし、本疾患の全症例
の85%を占める。常染色体劣性型は、各々2番染色体上に位置するCol4a3あるい
はCol4a4の何れかのコピーの突然変異がそれぞれ遺伝することによる。稀な常染色
体優性型は、Col4a3あるいはCol4a4遺伝子の何れかのドミナントネガティブ
突然変異の遺伝による。X連鎖型は女性より男性の方が症状が重く、男性の大部分の症例
は末期腎臓病(ESRD)に進行する。常染色体性型は、男女の重症度が同程度である。
本疾患の大部分の症例は遺伝性突然変異によるが、一部の症例は、Col4aA遺伝子の
1つの新規突然変異によるものである。
ート症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体に、12〜25個連結したヌク
レオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを投与することを含み、修飾オリゴヌクレオチ
ドの核酸塩基配列がmiR−21と相補的である方法である。ある種の実施形態では、被
検体は修飾オリゴヌクレオチドを投与する前にアルポート症候群を有すると診断されてい
る。ある種の実施形態では、被検体は、修飾オリゴヌクレオチドの投与の前に、被検体の
腎臓組織においてmiR−21のレベルが増加していると判定された。ある種の実施形態
では、被検体は、修飾オリゴヌクレオチドの投与の前に、被検体の尿中または血液中のm
iR−21のレベルが増加していると判定された。
有する疑いがある被検体への、miR−21と相補的な修飾オリゴヌクレオチドの投与は
、腎機能を改善する;末期腎臓病の発症を遅延させる;透析までの時間を遅延させる;腎
移植までの時間を遅延させる;および/または被検体の平均余命を改善することができる
。
有する疑いがある被検体への、miR−21と相補的な修飾オリゴヌクレオチドの投与は
、血尿を減少させる;血尿の発症を遅延させる;タンパク尿を減少させる;タンパク尿の
発症を遅延させる;腎線維症を減少させる;線維症の更なる進行を遅延させる;および/
または線維症の更なる進行を阻止することができる。
コードする遺伝子の突然変異、IV型コラーゲンのα4鎖をコードする遺伝子の突然変異
、またはIV型コラーゲンのα5鎖をコードする遺伝子の突然変異から選択される突然変
異を有し得る。ある種の実施形態では、被検体は男性(雄)である。ある種の実施形態で
は、被検体は女性(雌)である。ある種の実施形態では、被検体は血尿および/またはタ
ンパク尿を有すると確認される。ある種の実施形態では、被検体は腎機能が低下している
。ある種の実施形態では、被検体は腎機能の改善を必要としている。
こと;被検体の血液中のクレアチニンを測定すること;被検体のクレアチニンクリアラン
スを測定すること;被検体のタンパク尿を測定すること;被検体のアルブミン:クレアチ
ニン比を測定すること;および/または被検体の糸球体濾過量を測定することを含んでも
よい。
ルコサミニダーゼ(NAG)タンパク質を測定すること;被検体の尿中の好中球ゼラチナ
ーゼ関連リポカリン(NGAL)タンパク質を測定すること;被検体の尿中の腎臓傷害分
子−1(kidney injury molecule:KIM−1)タンパク質を測
定すること;被検体の尿中のインターロイキン−18(IL−18)タンパク質を測定す
ること;被検体の尿中の単球走化性タンパク質(MCP1)レベルを測定すること;被検
体の尿中の結合組織増殖因子(CTGF)レベルを測定すること;被検体の尿中のコラー
ゲンIV(Col IV)フラグメントを測定すること;被検体の尿中のコラーゲンII
I(Col III)フラグメントを測定すること;および/または被検体の尿中の有足
細胞タンパク質(有足細胞タンパク質はネフリンおよびポドシンから選択される)レベル
を測定することを含んでもよい。本明細書に提供される実施形態の何れかは、被検体の血
液中のシスタチンCタンパク質を測定すること;被検体の血液中のβトレースタンパク質
(BTP)を測定すること;および被検体の血液中の2−ミクログロブリン(B2M)を
測定することを含んでもよい。
のクレアチニンの低下;被検体のクレアチニンクリアランスの改善;被検体のタンパク尿
の減少;被検体のアルブミン:クレアチニン比の低下;および/または被検体の糸球体濾
過量の改善から選択される被検体の腎機能の1つまたは複数のマーカーの改善を行うこと
ができる。本明細書で提供される方法の何れかは、被検体の尿中のNAGの低下;被検体
の尿中のNGALの低下;被検体の尿中のKIM−1の低下;被検体の尿中のIL−18
の低下;被検体の尿中のMCP1の低下;被検体の尿中のCTGFの低下;被検体の尿中
のコラーゲンIVフラグメントの低下;被検体の尿中のコラーゲンIIIフラグメントの
低下;および被検体の尿中の有足細胞タンパク質レベル(有足細胞タンパク質はネフリン
およびポドシンから選択される)の低下から選択される被検体の腎機能の1つまたは複数
のマーカーの改善を行うことができる。本明細書で提供される方法の何れかは、被検体の
血液中のシスタチンCタンパク質の低下、被検体の血液中のβトレースタンパク質(BT
P)の低下、および被検体の血液中の2−ミクログロブリン(B2M)の低下から選択さ
れる腎機能の1つまたは複数のマーカーの改善を行うことができる。
ブミン尿は正常高値アルブミン尿でも、微量アルブミン尿でも、あるいは顕性アルブミン
尿でもよい。
の実施形態では、アルポート症候群は常染色体性型のアルポート症候群である。
阻害剤、アンジオテンシンII受容体遮断薬(ARB)、降圧薬、ビタミンDアナログ、
経口リン吸着薬、透析および腎臓移植から選択される少なくとも1つの追加治療を行うこ
とを含んでもよい。これらの実施形態の何れかでは、アンジオテンシンII変換酵素(A
CE)阻害剤は、カプトプリル、エナラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリ
ル、ホシノプリルおよびラミプリルから選択される。これらの実施形態の何れかでは、ア
ンジオテンシンII受容体遮断薬(ARB)は、カンデサルタン、イルベサルタン、オル
メサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタンおよびエプロサルタンから選択
される。これらの実施形態の何れかでは、ACE阻害剤は、シラザプリル、ペリンドプリ
ルおよびトランドラプリルから選択される。
2/日、1〜2mg/m2/日、2〜4mg/m2/日、または4〜8mg/m2/日の
範囲にわたる用量で投与される。
量で投与される。これらの実施形態の何れかでは、ARBは、6.25mg/m2/日、
10mg/m2/日、12.5mg/m2/日、18.75mg/m2/日、37.5m
g/m2/日、50mg/m2/日、または150mg/m2/日の用量で投与される。
である。ある種の実施形態では、アルドステロンアンタゴニストはスピロノラクトンであ
る。ある種の実施形態では、スピロノラクトンは1日10〜35mgの範囲にわたる用量
で投与される。ある種の実施形態では、スピロノラクトンは1日25mgの用量で投与さ
れる。
は、miR−21の核酸塩基配列(配列番号1)と少なくとも90%相補的、少なくとも
95%相補的または100%相補的である。
、12〜25個または15〜25個連結したヌクレオシドからなる。本明細書に提供され
る実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、12個、13個、14個、15個
、16個、17個、18個、19個、20個、21個または22個連結したヌクレオシド
からなる。本明細書に提供される実施形態の何れかでは、修飾オリゴヌクレオチドは、1
5個、16個、17個、18個、19個、20個、21個または22個連結したヌクレオ
シドからなる。
個の修飾ヌクレオシドを含む。修飾ヌクレオシドは、S−cEtヌクレオシド、2’−O
−メトキシエチルヌクレオシド、およびLNAヌクレオシドから選択してもよい。修飾オ
リゴヌクレオチドは、少なくとも1つの修飾ヌクレオシド間結合を含んでもよい。修飾オ
リゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は各々、修飾ヌクレオシド間結合であってもよい
。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間
結合である。
ECSATCSAGTCSTGAUSAAGCSTAE−3’(配列番号3)を有しても
よく、後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−D−デオキシリボヌクレオシドを示し;
後に下付き文字「E」があるヌクレオシドは2’−MOEヌクレオシドを示し;後に下付
き文字「S」があるヌクレオシドはS−cEtヌクレオシドを示し、ヌクレオシド間結合
は各々、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
クレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩
基配列がmiR−21と相補的である修飾オリゴヌクレオチドの、アルポート症候群の処
置のための使用である。
る技術分野の当業者が一般に理解しているのと同じ意味を持つ。具体的な定義がなされて
いない場合、本明細書に記載の分析化学、有機合成化学並びに創薬化学及び薬化学に関連
して使用される用語と、本明細書に記載の分析化学、有機合成化学並びに創薬化学及び薬
化学の手順及び技法とは、当該技術分野において公知であり、一般に用いられるものであ
る。本明細書の用語に複数の定義が存在する場合、本セクションの定義が優先する。化学
合成、化学分析、医薬品の調製、製剤及び送達、並びに被検体の処置には、標準的な技法
を使用することができる。ある種のそうした技法及び手順は、例えば「Carbohyd
rate Modifications in Antisense Research
」Edited by Sangvi and Cook,American Chem
ical Society,Washington D.C.,1994;及び「Rem
ington’s Pharmaceutical Sciences,」Mack P
ublishing Co.,Easton,Pa.,18th edition,19
90で確認することができ、更に、これらをいかなる目的においても本明細書に援用する
。許容される場合、特許、特許出願、公開された出願及び公報、GENBANK配列、ウ
ェブサイト、及び本明細書の開示内容全体を通して参照した他の公開資料は、他に記載が
ない限り、その全体を援用する。URLまたは他のそうした識別子またはアドレスに言及
する場合、そうした識別子は変更されることがあり、インターネット上の特定の情報も変
更される場合があるが、インターネットの検索により、対応する情報を確認することがで
きることが理解されよう。それを参照することにより、そうした情報の利用可能性及び一
般への提供が明らかにされる。
の実施形態を説明するためのものにすぎず、限定的であることを意図するものではないこ
とを理解されたい。本明細書及び添付の特許請求の範囲に使用する場合、単数形表現「1
つの(a、an)」及び「前記(the)」は、文脈上明らかに他の意味に解すべき場合
を除き、複数の意味を含むことに留意しなければならない。
「アルポート症候群」は、異常なレベルの糸球体基底膜(GBM)が産生され、間質線
維症、糸球体硬化をきたし、最終的には腎機能の喪失に至る遺伝性の腎疾患を意味する。
本疾患はさらに難聴および眼球異常を特徴とする場合が多い。
れるものではないが、正常アルブミン尿、正常高値アルブミン尿、微量アルブミン尿及び
顕性アルブミン尿を含む。通常、糸球体濾過障壁は有足細胞、糸球体基底膜及び内皮細胞
からなり、血清タンパク質が尿に漏出するのを防止する。アルブミン尿は、糸球体濾過障
壁の損傷を反映すると考えられる。アルブミン尿は、24時間尿サンプル、夜間尿サンプ
ルまたはスポット尿サンプルから算出することができる。
5〜<30mg及び/または(ii)男性のアルブミン/クレアチニン比が1.25〜<
2.5mg/mmol(または10〜<20mg/g)または女性の場合1.75〜<3
.5mg/mmol(または15〜<30mg/g)であることを特徴とする高アルブミ
ン尿を意味する。
300mg及び/または(ii)男性のアルブミン/クレアチニン比が2.5〜<25m
g/mmol(または20〜<200mg/g)または女性の場合3.5〜<35mg/
mmol(または30〜<300mg/g)を特徴とする高アルブミン尿を意味する。
及び/または(ii)男性のアルブミン/クレアチニン比が>25mg/mmol(また
は>200mg/g)または女性の場合>35mg/mmol(または>300mg/g
)を特徴とする高アルブミン尿を意味する。
ブミン(mg/dL)の比を意味し、mg/gで表される。ある実施形態ではアルブミン
/クレアチニン比はスポット尿サンプルから算出することができ、24時間にわたるアル
ブミン排泄量の推定値として使用され得る。
度クレアチニンを濾過するかの測定値を意味し、血液が1分当たりどの程度糸球体を通過
するかの推定値として使用される。通常の結果は、90〜120mL/min/1.73
m2の範囲になり得る。3ヶ月以上60mL/min/1.73m2未満のレベルである
と、慢性腎疾患の指標となり得る。15mL/min/1.73m2未満のレベルは、腎
不全の指標となり得る。
尿は、24時間当たりのタンパク質の尿への排泄量が>250mg及び/または尿中タン
パク質とクレアチニンとの比が≧0.20mg/mgであることを特徴してもよい。タン
パク尿に関連して増加する血清タンパク質として、以下に限定されるものではないが、ア
ルブミンが挙げられる。
肝臓はタンパク質の消化の老廃物として尿素回路において尿素を生成し、尿素は、腎臓に
より血液から除去される。正常ヒト成人血液は、100ml(7〜21mg/dL)の血
液当たり7〜21mgの間の尿素窒素を含む。血中尿素窒素の測定は、腎臓の健康の指標
として使用される。腎臓が血液から尿素を正常に除去できない場合、被検体のBUNが上
昇する。
する。ある種の実施形態では、線維症は修復または反応のプロセスとして起こる。ある種
の実施形態では、線維症は損傷または傷害に反応して起こる。「線維症」という用語、器
官または組織において過剰な線維性結合組織が修復または反応のプロセスとして形成また
は発生するものであり、器官または組織の通常成分としての線維組織の形成と異なるもの
であると理解されたい。
とを意味する。
する。
能を維持することを意味する。
機能を維持することを意味する。
り被検体を延命させることを意味する。
を意味する。ある種の実施形態では、抗miRは修飾オリゴヌクレオチドである。
と相補的な核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを意味する。ある種の実施形態では
、抗miR−Xは、miR−Xと完全に(例:100%)相補的である。ある種の実施形
態では、抗miR−Xは、miR−Xと少なくとも80%、少なくとも85%、少なくと
も90%または少なくとも95%相補的である。ある種の実施形態では、抗miR−Xは
修飾オリゴヌクレオチドである。
配列番号1)を有する成熟型miRNAを意味する。
CAGACUGAUGUUGACUGUUGAAUCUCAUGGCAACACCAGU
CGAUGGGCUGUCUGACA(配列番号2)を有するステムループ配列を意味す
る。
する。
を意味する。
列を有することを意味する。
能、量または活性の増加を意味する。ある種の実施形態では、調節は機能、量または活性
の低下を意味する。
任意の機能及び段階を意味する。
く5’から3’方向に記載された、オリゴマー化合物または核酸において連続する核酸塩
基の順序を意味する。
できることを意味する。
ズできることを意味する。ある種の実施形態では、相補的とは、オリゴヌクレオチドが標
的核酸にハイブリダイズできることをいう。
核酸の核酸塩基と対を形成できることを意味する。ある種の実施形態では、オリゴヌクレ
オチドは、マイクロRNAと完全に相補的である、即ちオリゴヌクレオチドの各核酸塩基
が、対応する各々の位置でマイクロRNAの核酸塩基と相補的である。ある種の実施形態
では、各核酸塩基がマイクロRNAステムループ配列の領域内の核酸塩基と相補性を有す
るオリゴヌクレオチドは、マイクロRNAステムループ配列と完全に相補的である。
核酸塩基の割合を意味する。相補性パーセントは、オリゴヌクレオチドのうち、対応する
位置で標的核酸の核酸塩基と相補的な核酸塩基の数を、オリゴヌクレオチドの核酸塩基の
総数で割ることにより計算される。
同一である核酸塩基の数を、第1の核酸の核酸塩基の総数で割った商を意味する。ある種
の実施形態では、第1の核酸はマイクロRNAであり、第2の核酸はマイクロRNAであ
る。ある種の実施形態では、第1の核酸はオリゴヌクレオチドであり、第2の核酸はオリ
ゴヌクレオチドである。
ることを意味する。
Watson−Crick対を形成できないことを意味する。
係なく、かつ、存在する任意のピリミジンのメチル状態にも関係なく、同じ核酸塩基配列
を有することを意味する。
長さ18〜25核酸塩基の内在性非コードRNAを意味する。成熟型マイクロRNAの例
は、miRBaseと呼ばれるマイクロRNAデータベースで確認される(http:/
/microrna.sanger.ac.uk/)。ある種の実施形態では、マイクロ
RNAは、「マイクロRNA」または「miR」と略記される。
鎖RNA特異的リボヌクレアーゼによるpri−miRの切断産物であり、ヘアピン構造
を有する非コードRNAを意味する。
RNAを意味する。プレ−マイクロRNA配列及びステムループ配列は重複してもよい。
ステムループ配列の例は、miRBaseと呼ばれるマイクロRNAデータベースで確認
される(http://microrna.sanger.ac.uk/)。
レアーゼDroshaの基質であり、ヘアピン構造を有する非コードRNAを意味する。
ロRNA配列を含む非コードstructured RNAを含む転写物を意味する。例
えば、ある種の実施形態では、マイクロRNA前駆体はプレ−マイクロRNAである。あ
る種の実施形態では、マイクロRNA前駆体はプリ−マイクロRNAである。
。
した6〜8核酸塩基を含む核酸塩基配列を意味する。
基配列を意味する。
る。オリゴマー化合物はオリゴヌクレオチドを含んでいた。
各々は、互いに独立に修飾されていても、または非修飾であってもよい。
結合を意味する。
る。
を意味する。
ドを意味する。
、所定の数の連結したヌクレオシドを有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を意味
する。従って、化合物は、追加の置換基またはコンジュゲートを含んでもよい。他に記載
がない限り、化合物は、修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシド以外に任意の追加のヌク
レオシドを含まない。
間結合に関して1つまたは複数の修飾を有するオリゴヌクレオチドを意味する。修飾オリ
ゴヌクレオチドは、非修飾ヌクレオシドを含んでもよい。
ヌクレオチドを意味する。
ヌクレオシドは、修飾糖及び非修飾核酸塩基を有してもよい。修飾ヌクレオシドは、修飾
糖及び修飾核酸塩基を有してもよい。修飾ヌクレオシドは、天然糖及び修飾核酸塩基を有
してもよい。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは二環式ヌクレオシドである。あ
る種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは非二環式ヌクレオシドである。
する。
ヌクレオシド間の結合を意味する。
(A)及びグアニン(G)と、ピリミジン塩基チミン(T)、シトシン(C)(5−メチ
ルシトシンを含む)及びウラシル(U)とを意味する。
る糖を意味する。
エチル修飾を有する糖を意味する。
る。
構造を生じさせる架橋を含む、4〜7員環(以下に限定されるものではないが、フラノシ
ル)を含む修飾糖部分を意味する。ある種の実施形態では、4〜7員環は糖環である。あ
る種の実施形態では4〜7員環はフラノシルである。そうしたある種の実施形態では、架
橋はフラノシルの2’−炭素及び4’−炭素を連結する。非限定的な例示的二環式糖部分
として、LNA、ENA、cEt、S−cEt及びR−cEtが挙げられる。
に(CH2)−O架橋を含む置換糖部分を意味する。
O架橋を含む置換糖部分を意味する。
の間にCH(CH3)−O架橋を含む置換糖部分を意味する。ある種の実施形態では、C
H(CH3)−O架橋は、S方向に規制される。ある種の実施形態では、(CH2)2−
OはR方向に規制される。
H(CH3)−O架橋を含む置換糖部分を意味する。
H(CH3)−O架橋を含む置換糖部分を意味する。
レオシドを意味する。
する2’−修飾ヌクレオシドを意味する。2’−O−メトキシエチルヌクレオシドは、修
飾核酸塩基を含んでも、または非修飾核酸塩基を含んでもよい。
オシドを意味する。2’−フルオロヌクレオシドは、修飾核酸塩基を含んでも、または非
修飾核酸塩基を含んでもよい。
。二環式ヌクレオシドは、修飾核酸塩基を有しても、または非修飾核酸塩基を有してもよ
い。
レオシドは、修飾核酸塩基を含んでも、または非修飾核酸塩基を含んでもよい。
味する。
意味する。
されるものではないが、医療専門家による投与及び自己投与を含む。
されるものではないが、皮下投与、静脈内投与および筋肉内投与を含む。
薬が併用投与されることをいう。併用投与は、2種の薬を単一の医薬組成物で投与したり
、同じ剤形で投与したり、または同じ投与経路で投与したりする必要はない。2種の薬の
作用自体は、同時に現れる必要はない。効果は一定期間重複するだけでよく、同じ長さを
持つ必要はない。
は、処置の持続期間は、医薬品または医薬組成物の用量が投与される期間である。
されるものではないが、化学療法、放射線治療、または医薬品の投与を含む。
適用することを意味する。ある種の実施形態では、特定の手順は、1つまたは複数の医薬
品の投与である。
する。ある種の実施形態では、軽減は、状態または疾患の1つまたは複数の指標の進行を
遅延させるまたは遅らせることを含む。指標の重症度は、当業者に公知の主観的基準また
は客観的基準により判定することができる。
あることを意味する。ある種の実施形態では、状態または疾患を発症するリスクがある被
検体は、その状態または疾患の1つまたは複数の症状を示すものの、その状態または疾患
と診断されるのに十分な数の症状を示さない。ある種の実施形態では、状態または疾患を
発症するリスクがある被検体は、状態または疾患の1つまたは複数の症状を示すものの、
状態または疾患と診断するのに必要とされるより少ない程度で示す。
は疾患の発生を予防することを意味する。ある種の実施形態では、疾患または状態を発症
するリスクがある被検体は、疾患または状態を既に有する被検体が受けた処置と同様の処
置を受ける。
たは疾患の発生を遅延させることを意味する。ある種の実施形態では、疾患または状態を
発症するリスクがある被検体は、疾患または状態を既に有する被検体が受けた処置と同様
の処置を受ける。
は、用量を2以上のボーラス、錠剤または注射で投与してもよい。例えば、皮下投与が所
望であるある種の実施形態では、所望の用量は、1回の注射で容易に与えられない量を必
要とする。そうした実施形態では、所望の用量を達成するため2回以上の注射を使用して
もよい。ある種の実施形態では、用量は、2回以上の注射で投与して個体の注射部位反応
を最小限に抑えてもよい。ある種の実施形態では、用量を緩速注入として投与する。
位は、凍結乾燥オリゴヌクレオチドを含むバイアルである。ある種の実施形態では、投薬
単位は、再溶解したオリゴヌクレオチドを含むバイアルである。
、医薬組成物は無菌水溶液を含んでもよい。
態では、臓器機能は、被検体の血液または尿中に見られる分子の測定により評価される。
たとえば、ある種の実施形態では、腎機能の改善は、血中尿素窒素の低下、タンパク尿の
減少、アルブミン尿の減少等により評価される。
ーンを意味する。
態では、副作用は、以下に限定されるものではないが、注射部位反応、肝機能検査異常、
腎臓機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常及びミオパチーを含む。こうした副作用
は直接的に検出しても、または間接的に検出してもよい。例えば、血清中のアミノトラン
スフェラーゼレベルの上昇から、肝毒性または肝機能異常が示唆されることがある。例え
ば、ビリルビンの増加から、肝毒性または肝機能異常が示唆されることがある。
守を意味する。
れた処置剤を意味する。
および血漿を包含する。
アルポート症候群は、異常なレベルの糸球体基底膜(GBM)が産生され、間質線維症
、糸球体硬化をきたし、典型的には末期腎臓病に至る遺伝性の腎疾患である。アルポート
症候群の管理において、処置の主要な目的は、腎機能を維持し、末期腎臓病の発症(ES
RD)を予防し、次いでアルポート症候群の被検体の平均余命を改善することである。
BMの構造および機能における改善が望ましい。miR−21を標的とする修飾オリゴヌ
クレオチドは、アルポート症候群の実験モデルにおいて腎機能を改善することが本明細書
で立証される。加えて、抗miR−21処置後に糸球体硬化および線維症も減少する。さ
らに抗miR−21がアルポート症候群の実験モデルの生存率を改善させることも本明細
書で立証される。したがって、miR−21を標的とするこうした修飾オリゴヌクレオチ
ドは、アルポート症候群の処置に有用である。
本明細書で提供されるのは、アルポート症候群の処置のための方法であって、アルポー
ト症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体にmiR−21と相補的な修飾オ
リゴヌクレオチドを投与することを含む方法である。
群を有すると診断されたことがある。アルポート症候群の診断は、以下に限定されるもの
ではないが、被検体の家族歴、臨床的特徴(以下に限定されるものではないが、タンパク
尿、アルブミン尿、血尿、GFRの異常、難聴及び/または眼球の変化)及び組織生検の
結果などのパラメーターの評価により達成することができる。腎生検は、IV型コラーゲ
ンα−3鎖、α−4鎖及びα−5鎖の有無について検査してもよい。加えて、糸球体の構
造的変化は、腎生検材料の電子顕微鏡観察により検出してもよい。皮膚生検においてIV
型コラーゲンα−5鎖の存在を検査してもよく、α−5鎖は通常皮膚に存在するが、X連
鎖型アルポート症候群の男性被検体にほぼ常に存在しない。アルポート症候群の診断は、
Col4a3遺伝子、Col4a4遺伝子またはCol4a5遺伝子の1つまたは複数の
突然変異についてスクリーニングすることを更に含んでもよい。
のレベルが増加している。ある種の実施形態では、投与前に、被検体は、腎臓におけるm
iR−21のレベルが増加していると判定される。miR−21レベルは、腎生検材料か
ら測定することができる。ある種の実施形態では、投与前に、被検体は被検体の尿中また
は血液中のmiR−21のレベルが増加していると判定される。
、1つまたは複数の臨床上有利な成績が得られる。ある種の実施形態では、本投与は腎機
能を改善する。ある種の実施形態では、本投与は末期腎臓病の発症を遅延させる。ある種
の実施形態では、本投与は透析までの時間を遅延させる。ある種の実施形態では、本投与
は腎移植までの時間を遅延させる。ある種の実施形態では、本投与は被検体の平均余命を
改善する。
は腎線維症の更なる進行を遅延させる。ある種の実施形態では、本投与は腎線維症の更な
る進行を阻止する。ある種の実施形態では、本投与は血尿を減少させる。ある種の実施形
態では、本投与は血尿の発症を遅延させる。ある種の実施形態では、本投与はタンパク尿
を減少させる。ある種の実施形態では、本投与はタンパク尿の発症を遅延させる。
のα3鎖をコードする遺伝子(Col4a3)の突然変異を有しても、IV型コラーゲン
のα4鎖をコードする遺伝子(Col4a4)の突然変異を有しても、あるいはIV型コ
ラーゲンのα5鎖をコードする遺伝子(Col4a5)の突然変異を有してもよい。ある
種の実施形態では、被検体は男性(雄)である。ある種の実施形態では、被検体は女性(
雌)である。
体は腎機能の改善を必要とする。ある種の実施形態では、被検体は腎機能の障害を有する
と確認される。ある種の実施形態では、被検体は血尿を有すると確認される。ある種の実
施形態では、被検体はタンパク尿を有すると確認される。
を受けてもよい。そうした試験には、以下に限定されるものではないが、被検体の血中尿
素窒素の測定;被検体の血液中のクレアチニンの測定;被検体の血液中のクレアチニンク
リアランスの測定;被検体のタンパク尿の測定;被検体のアルブミン:クレアチニン比の
測定;被検体の糸球体濾過量の測定;および被検体の尿量の測定がある。
を使用して腎機能を測定してもよい。こうした腎機能の試験には、被検体の尿中のN−ア
セチル−β−D−グルコサミニダーゼ(NAG)タンパク質の測定;被検体の尿中の好中
球ゼラチナーゼ関連リポカリン(NGAL)タンパク質の測定;被検体の尿中の腎臓傷害
分子−1(KIM−1)タンパク質の測定;被検体の尿中のインターロイキン−18(I
L−18)タンパク質の測定;被検体の尿中の結合組織増殖因子(CTGF)レベルの測
定;被検体の尿中の単球走化性タンパク質1(MCP1)レベルの測定;被検体の尿中の
コラーゲンIV(Col IV)フラグメントの測定;被検体の尿中のコラーゲンIII
(Col III)フラグメントレベルの測定;被検体の血液中のシスタチンCタンパク
質の測定;被検体の血液中のβトレースタンパク質(BTP)の測定;および被検体の血
液中の2−ミクログロブリン(B2M)の測定があるが、これに限定されるものではない
。本明細書に提供される実施形態の何れかでは、尿中の有足細胞傷害のマーカーを測定し
てもよい。こうしたタンパク質として、ネフリンおよびポドシンが挙げられる。こうした
タンパク質は、たとえば、市販されているキットを用いて酵素免疫測定法(ELISA)
またはラジオイムノアッセイ(RIA)により定量することができる。
クレオチドは、被検体の腎機能の1つまたは複数のマーカーを改善する。腎機能のマーカ
ーの改善としては、以下に限定されるものではないが、被検体の血中尿素窒素の低下;被
検体の血液中のクレアチニンの低下;被検体のクレアチニンクリアランスの改善;被検体
のタンパク尿の減少;被検体のアルブミン:クレアチニン比の低下;被検体の糸球体濾過
量の改善;および/または被検体の尿量の増加が挙げられる。
アルポート症候群または本明細書に列挙された状態の何れかの処置は、2つ以上の治療
を含んでもよい。したがって、ある種の実施形態では、本明細書で記載されるのは、アル
ポート症候群を有するまたはそれを有する疑いがある被検体を処置するための方法であっ
て、miR−21と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドの投与に加え
て、少なくとも1つ治療を投与することを含む方法である。
。ある種の実施形態では、アンジオテンシンII受容体遮断薬はカンデサルタン、イルベ
サルタン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタンまたはエプロサ
ルタンである。
む。ある種の実施形態では、ACE阻害剤はカプトプリル、エナラプリル、リシノプリル
、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリルまたはラミプリルである。
れる。
被検体の副甲状腺ホルモンの産生を制限するのに使用することができる。
薬はコルチコステロイド、シクロホスファミドまたはミコフェノール酸モフェチルである
。
ソペプチダーゼ阻害剤またはTGF−βアンタゴニストである。
治療は正常なCol4a3遺伝子を与える。ある種の実施形態では、遺伝子治療は正常な
Col4a4遺伝子を与える。ある種の実施形態では、遺伝子治療は正常なCol4a5
遺伝子を与える。
移植である。
ステロイド系抗炎症薬である。ある種の実施形態では、ステロイド抗炎症薬はコルチコス
テロイドである。ある種の実施形態では、コルチコステロイドはプレドニゾンである。あ
る種の実施形態では、抗炎症薬は非ステロイド系抗炎症剤である。ある種の実施形態では
、非ステロイド系抗炎症薬はイブプロフェン、COX−I阻害剤またはCOX−2阻害剤
である。
ックする医薬品である。
グルコシダーゼ阻害剤、インスリン、スルホニル尿素およびチアゾリデンジオンがあるが
、これに限定されるものではない。
本明細書に記載の修飾オリゴヌクレオチドは、miR−21(配列番号1)またはその
前駆体(配列番号2)と相補的な核酸塩基配列を有する。ある種の実施形態では、修飾オ
リゴヌクレオチドの各核酸塩基はそれぞれ対応する位置で、miR−21またはその前駆
体の核酸塩基配列の核酸塩基と塩基対の形成を行うことができる。ある種の実施形態では
、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、miR−21配列または前駆体配列の核酸
塩基配列に対して1つまたは複数のミスマッチ塩基対を有していてもよく、依然としてそ
の標的配列にハイブリダイズすることができる。
な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドは、miR−21前駆体の領域とも相補
的である。
つかの連結したヌクレオシドからなる。
R−21の長さより短い。いくつかの連結したヌクレオシドを有する、miR−21の長
さより短い修飾オリゴヌクレオチドであって、その各核酸塩基が対応する位置でmiR−
21の各核酸塩基と相補的な修飾オリゴヌクレオチドは、miR−21配列の領域と完全
に相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドと見なされる。例えば、19個
連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、各核酸塩基が長さ22
核酸塩基のmiR−21の対応する位置と相補的な修飾オリゴヌクレオチドは、miR−
21の19個の核酸塩基領域と完全に相補的である。こうした修飾オリゴヌクレオチドは
、miR−21の19個の核酸塩基部分に対して100%の相補性を有し、miR−21
に対して100%相補性を有すると考えられる。
を含む、即ち修飾オリゴヌクレオチドはシード−マッチ配列を含む。ある種の実施形態で
は、シード配列は6量体シード配列である。そうしたある種の実施形態では、シード配列
はmiR−21の核酸塩基1〜6である。そうしたある種の実施形態では、シード配列は
miR−21の核酸塩基2〜7である。そうしたある種の実施形態では、シード配列はm
iR−21の核酸塩基3〜8である。ある種の実施形態では、シード配列は7量体シード
配列である。そうしたある種の実施形態では、7量体シード配列はmiR−21の核酸塩
基1〜7である。そうしたある種の実施形態では、7量体シード配列はmiR−21の核
酸塩基2〜8である。ある種の実施形態では、シード配列は8量体シード配列である。そ
うしたある種の実施形態では、8量体シード配列はmiR−21の核酸塩基1〜8である
。ある種の実施形態では、8量体シード配列はmiR−21の核酸塩基2〜9である。
核酸塩基配列に対して1つのミスマッチがある核酸塩基配列を有する。ある種の実施形態
では、修飾オリゴヌクレオチドは、miR−21またはその前駆体の核酸塩基配列に対し
て2つのミスマッチがある核酸塩基配列を有する。そうしたある種の実施形態では、修飾
オリゴヌクレオチドは、miR−21またはその前駆体の核酸塩基配列に対して2つ以下
のミスマッチがある核酸塩基配列を有する。そうしたある種の実施形態では、ミスマッチ
核酸塩基は隣接している。そうしたある種の実施形態では、ミスマッチ核酸塩基は隣接し
ていない。
R−21の長さを超える。そうしたある種の実施形態では、追加のヌクレオシドの核酸塩
基は、miR−21のステムループ配列の核酸塩基と相補的である。ある種の実施形態で
は、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレオシドの数は、miR−21の長さより1
個多い。そうしたある種の実施形態では、追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの5
’末端にある。そうしたある種の実施形態では、追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチ
ドの3’末端にある。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの連結したヌクレ
オシドの数は、miR−21の長さより2個多い。そうしたある種の実施形態では、2個
の追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの5’末端にある。そうしたある種の実施形
態では、2個の追加のヌクレオシドはオリゴヌクレオチドの3’末端にある。そうしたあ
る種の実施形態では、1個の追加のヌクレオシドが5’末端に位置し、1個の追加のヌク
レオシドがオリゴヌクレオチドの3’末端に位置する。ある種の実施形態では、オリゴヌ
クレオチドの領域はmiR−21の核酸塩基配列と完全に相補的である場合があるが、修
飾オリゴヌクレオチド全体がmiR−21と完全に相補的であるとは限らない。例えば、
24個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、ヌクレオシド1
〜22の各核酸塩基が、長さ22核酸塩基のmiR−21の対応する位置と相補的な修飾
オリゴヌクレオチドは、miR−21の核酸塩基配列と完全に相補的である22個のヌク
レオシド部分を有し、miR−21の核酸塩基配列に対して全体として約92%相補性を
有する。
ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは構造5’−AECSATCSAGT
CSTGAUSAAGCSTAE−3’(配列番号3)を有し、ここで後に下付き文字が
ないヌクレオシドはβ−D−デオキシリボヌクレオシドを示し;後に下付き文字「E」が
あるヌクレオシドは2’−MOEヌクレオシドを示し;後に下付き文字「S」があるヌク
レオシドはS−cEtヌクレオシドを示し;ヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエ
ートヌクレオシド間結合である。
TCSUSGAUSASAGCSUsAE−3’(配列番号3)を有し、ここで後に下付
き文字がないヌクレオシドはβ−D−デオキシリボヌクレオシドを示し;後に下付き文字
「E」があるヌクレオシドは2’−MOEヌクレオシドを示し;後に下付き文字「S」が
あるヌクレオシドはS−cEtヌクレオシドを示し;ヌクレオシド間結合は各々、ホスホ
ロチオエートヌクレオシド間結合である。
SUSAEAEUSASAEGECSTEAS−3’(配列番号4)を有し、ここで後に
下付き文字がないヌクレオシドはβ−D−デオキシリボヌクレオシドを示し;後に下付き
文字「E」があるヌクレオシドは2’−MOEヌクレオシドを示し;後に下付き文字「S
」があるヌクレオシドはS−cEtヌクレオシドを示し;上付き文字「Me」はヌクレオ
シドの塩基の5−メチル基を示し;ヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエートヌク
レオシド間結合である。
EGETECSTGAUSAAGCSUSAS−3’(配列番号3)を有し、ここで後に
下付き文字がないヌクレオシドはβ−D−デオキシリボヌクレオシドを示し;後に下付き
文字「E」があるヌクレオシドは2’−MOEヌクレオシドを示し;後に下付き文字「S
」があるヌクレオシドはS−cEtヌクレオシドを示し;ヌクレオシド間結合は各々、ホ
スホロチオエートヌクレオシド間結合である。
ンを含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドのシトシンは各々5−メチル
シトシンを含む。
らなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは、12〜25個連結したヌク
レオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは15〜30個連結
したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは15〜2
5個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは
15〜19個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレ
オチドは15〜16個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリ
ゴヌクレオチドは19〜24個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、
修飾オリゴヌクレオチドは21〜24個連結したヌクレオシドからなる。
。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは9個連結したヌクレオシドからなる
。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは10個連結したヌクレオシドからな
る。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは11個連結したヌクレオシドから
なる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは12個連結したヌクレオシドか
らなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは13個連結したヌクレオシド
からなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは14個連結したヌクレオシ
ドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは15個連結したヌクレオ
シドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは16個連結したヌクレ
オシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは17個連結したヌク
レオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは18個連結したヌ
クレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは19個連結した
ヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは20個連結し
たヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは21個連結
したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは22個連
結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは23個
連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは24
個連結したヌクレオシドからなる。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドは2
5個連結したヌクレオシドからなる。
ある種の実施形態では、本明細書に提供されるオリゴヌクレオチドは、核酸塩基、糖及
び/またはヌクレオシド間結合に対して1つまたは複数の修飾を含んでもよく、従って修
飾オリゴヌクレオチドである。修飾された核酸塩基、糖及び/またはヌクレオシド間結合
は、望ましい特性、例えば、細胞取り込みの増大、他のオリゴヌクレオチドまたは核酸標
的に対する親和性の強化、及びヌクレアーゼの存在下での安定性の増強を理由に非修飾形
態と比較して選択すればよい。
を含む。そうしたある種の実施形態では、修飾ヌクレオシドは安定化ヌクレオシドである
。安定化ヌクレオシドの例として糖修飾ヌクレオシドがある。
種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、天然若しくは修飾複素環塩基部分及び/また
は天然若しくは修飾ヌクレオシド間結合を更に含んでもよく、糖修飾とは無関係な修飾を
更に含んでもよい。ある種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは、天然リボースまたは
2’−デオキシ−リボースの2’炭素で糖環が修飾されている2’−修飾ヌクレオシドで
ある。
る種の実施形態では、二環式糖部分はα配置のD糖である。そうしたある種の実施形態で
は、二環式糖部分はβ配置のD糖である。そうしたある種の実施形態では、二環式糖部分
はα配置のL糖である。そうしたある種の実施形態では、二環式糖部分はβ配置のL糖で
ある。
。ある種の実施形態では、二環式ヌクレオシドとして、下記に図示するように、(A)α
−L−メチレンオキシ(4’−CH2−O−2’)BNA;(B)β−D−メチレンオキ
シ(4’−CH2−O−2’)BNA;(C)エチレンオキシ(4’−(CH2)2−O
−2’)BNA;(D)アミノオキシ(4’−CH2−O−N(R)−2’)BNA;(
E)オキシアミノ(4’−CH2−N(R)−O−2’)BNA;(F)メチル(メチレ
ンオキシ)(4’−CH(CH3)−O−2’)BNA(規制されたエチルまたはcEt
とも呼ばれる);(G)メチレン−チオ(4’−CH2−S−2’)BNA;(H)メチ
レン−アミノ(4’−CH2−N(R)−2’)BNA;(I)メチル炭素環式(4’−
CH2−CH(CH3)−2’)BNA;(J)c−MOE(4’−CH2−OMe−2
’)BNA、及び(K)プロピレン炭素環式(4’−(CH2)3−2’)BNAがある
が、これに限定されるものではない。
ある。
H2CH2OCH3、2’−O(CH2)2SCH3、O−(CH2)2−O−N(CH
3)2、−O(CH2)2O(CH2)2N(CH3)2、及びO−CH2−C(=O)
−N(H)CH3から選択される2’−置換基を含む。
H2OCH3から選択される2’−置換基を含む。
る種の実施形態では、糖修飾ヌクレオシドは4’−チオ−2’−修飾ヌクレオシドである
。4’−チオ修飾ヌクレオシドは、4’−Oが4’−Sで置換されたβ−D−リボヌクレ
オシドを有する。4’−チオ−2’−修飾ヌクレオシドは、2’−OHが2’−置換基で
置換された4’−チオ修飾ヌクレオシドである。好適な2’−置換基は、2’−OCH3
、2’−O−(CH2)2−OCH3、及び2’−Fを含む。
飾を含む。そうしたある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間
結合は修飾ヌクレオシド間結合である。ある種の実施形態では、修飾ヌクレオシド間結合
はリン原子を含む。
ートヌクレオシド間結合を含む。ある種の実施形態では、修飾オリゴヌクレオチドの各ヌ
クレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
む。ある種の実施形態では、修飾核酸塩基は、7−デアザ−アデニン、7−デアザグアノ
シン、2−アミノピリジン及び2−ピリドンから選択される。ある種の実施形態では、修
飾核酸塩基は、5−置換ピリミジン、6−アザピリミジン、並びにN−2、N−6及びO
−6置換プリン、例えば2アミノプロピルアデニン、5−プロピニルウラシル及び5−プ
ロピニルシトシンから選択される。
修飾核酸塩基は三環式複素環を含む。ある種の実施形態では、修飾核酸塩基はフェノキサ
ジン誘導体を含む。ある種の実施形態では、フェノキサジンは更に修飾されて、当該技術
分野においてGクランプ(G−clamp)として知られる核酸塩基を形成していてもよ
い。
ゲートされ、1つまたは複数の部分は、その結果得られるアンチセンスオリゴヌクレオチ
ドの活性、細胞分布または細胞取り込みを促進するものである。そうしたある種の実施形
態では、その部分はコレステロール部分である。ある種の実施形態では、その部分は脂質
部分である。コンジュゲーションのための別の部分には、糖質、リン脂質、ビオチン、フ
ェナジン、フォレート、フェナントリジン、アントラキノン、アクリジン、フルオレセイ
ン、ローダミン、クマリンおよび色素がある。ある種の実施形態では、糖質部分はN−ア
セチル−D−ガラクトサミン(GalNac)である。ある種の実施形態では、コンジュ
ゲート基はオリゴヌクレオチドに直接結合される。ある種の実施形態では、コンジュゲー
ト基はアミノ、ヒドロキシル、カルボン酸、チオール、不飽和基(たとえば、二重結合ま
たは三重結合)、8−アミノ−3,6−ジオキサオクタン酸(ADO)、スクシニミジル
4−(N−マレイミドメチル)シクロヘキサン−1−カルボキシレート(SMCC)、6
−アミノヘキサン酸(AHEXまたはAHA)、置換C1〜C10アルキル、置換または
非置換C2〜C10アルケニル、および置換または非置換のC2〜C10アルキニルから
選択される結合部分により修飾オリゴヌクレオチドに結合される。そうしたある種の実施
形態では、置換基は、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェ
ニル、ニトロ、チオール、チオアルコキシ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル
およびアルキニルから選択される。
性を強化するため、修飾オリゴヌクレオチドの一方または両方の末端に結合した1つまた
は複数の安定化基を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む。安定化基にはキャップ構造が
含まれる。これらの末端修飾は、エキソヌクレアーゼによる分解から修飾オリゴヌクレオ
チドを保護し、細胞内の送達および/または局在化に役立ち得る。キャップは5’−末端
(5’−キャップ)に存在しても、3’−末端(3’−キャップ)に存在してもよいし、
あるいは両末端に存在してもよい。キャップ構造は、たとえば、逆位のデオキシ脱塩基キ
ャップを含む。
本明細書で提供されるのは、オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物である。ある種の実
施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、15〜25個連結したヌクレオシドか
らなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、かつmiR−21と相補的な核酸塩基配列を有す
る化合物を含む。ある種の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、8〜30
個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、かつmiR−21と相
補的な核酸塩基配列を有する化合物を含む。ある種の実施形態では、本明細書で提供され
る医薬組成物は、12〜25個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを
含み、かつmiR−21と相補的な核酸塩基配列を有する化合物を含む。
内、心臓内、脳室内、腹腔内、経鼻、眼内、腫瘍内および非経口(たとえば、静脈内、筋
肉内、骨髄内および皮下)があるが、これに限定されるものではない。ある種の実施形態
では、全身曝露ではなく局所曝露を達成するため薬剤の髄腔内投与を行う。たとえば、医
薬組成物は効果の望まれる領域に(たとえば、腎臓に)直接注射してもよい。
ボーラス等)で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、25mg〜800
mg、25mg〜700mg、25mg〜600mg、25mg〜500mg、25mg
〜400mg、25mg〜300mg、25mg〜200mg、25mg〜100mg、
100mg〜800mg、200mg〜800mg、300mg〜800mg、400m
g〜800mg、500mg〜800mg、600mg〜800mg、100mg〜70
0mg、150mg〜650mg、200mg〜600mg、250mg〜550mg、
300mg〜500mg、300mg〜400mg及び400mg〜600mgから選択
される範囲内の用量で修飾オリゴヌクレオチドを含む。ある種の実施形態では、こうした
医薬組成物は、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55m
g、60mg、65mg、70mg、75mg、80mg、85mg、90mg、95m
g、100mg、105mg、110mg、115mg、120mg、125mg、13
0mg、135mg、140mg、145mg、150mg、155mg、160mg、
165mg、170mg、175mg、180mg、185mg、190mg、195m
g、200mg、205mg、210mg、215mg、220mg、225mg、23
0mg、235mg、240mg、245mg、250mg、255mg、260mg、
265mg、270mg、270mg、280mg、285mg、290mg、295m
g、300mg、305mg、310mg、315mg、320mg、325mg、33
0mg、335mg、340mg、345mg、350mg、355mg、360mg、
365mg、370mg、375mg、380mg、385mg、390mg、395m
g、400mg、405mg、410mg、415mg、420mg、425mg、43
0mg、435mg、440mg、445mg、450mg、455mg、460mg、
465mg、470mg、475mg、480mg、485mg、490mg、495m
g、500mg、505mg、510mg、515mg、520mg、525mg、53
0mg、535mg、540mg、545mg、550mg、555mg、560mg、
565mg、570mg、575mg、580mg、585mg、590mg、595m
g、600mg、605mg、610mg、615mg、620mg、625mg、63
0mg、635mg、640mg、645mg、650mg、655mg、660mg、
665mg、670mg、675mg、680mg、685mg、690mg、695m
g、700mg、705mg、710mg、715mg、720mg、725mg、73
0mg、735mg、740mg、745mg、750mg、755mg、760mg、
765mg、770mg、775mg、780mg、785mg、790mg、795m
g及び800mgから選択される用量で修飾オリゴヌクレオチドを含む。そうしたある種
の実施形態では、医薬組成物は、25mg、50mg、75mg、100mg、150m
g、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、500mg、60
0mg、700mg及び800mgから選択される用量の修飾オリゴヌクレオチドを含む
。
射用生理食塩水で再溶解される無菌凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドである。再溶解され
る製品は、食塩水に希釈してから皮下注射または点滴静注として投与される。凍結乾燥製
剤は、注射用水または注射用食塩水で調製され、調製中に酸または塩基でpH7.0〜9
.0に調整し、その後凍結乾燥された修飾オリゴヌクレオチドからなる。凍結乾燥修飾オ
リゴヌクレオチドは、25〜800mgのオリゴヌクレオチドであってもよい。これは、
25mg、50mg、75mg、100mg、125mg、150mg、175mg、2
00mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg
、375mg、425mg、450mg、475mg、500mg、525mg、550
mg、575mg、600mg、625mg、650mg、675mg、700mg、7
25mg、750mg、775mg及び800mgの凍結乾燥修飾オリゴヌクレオチドを
包含することが理解されよう。更に、いくつかの実施形態では、凍結乾燥修飾オリゴヌク
レオチドは、25mg〜800mg、25mg〜700mg、25mg〜600mg、2
5mg〜500mg、25mg〜400mg、25mg〜300mg、25mg〜200
mg、25mg〜100mg、100mg〜800mg、200mg〜800mg、30
0mg〜800mg、400mg〜800mg、500mg〜800mg、600mg〜
800mg、100mg〜700mg、150mg〜650mg、200mg〜600m
g、250mg〜550mg、300mg〜500mg、300mg〜400mg及び4
00mg〜600mgから選択される範囲内の量のオリゴヌクレオチドである。凍結乾燥
製剤は、2mLのType I透明ガラスバイアル(硫酸アンモニウム処理)に入れ、ブ
ロモブチルゴム栓で栓をしてアルミニウム製FLIP−OFF(登録商標)オーバーシー
ルで密封してもよい。
る他の補助成分を当該技術分野で確立された使用レベルで更に含んでもよい。このため、
例えば、組成物は、適合性がある追加の医薬活性物質、例えば、鎮痒薬、収斂薬、局所麻
酔薬または抗炎症薬を含んでもよいし、また、様々な剤形の本発明の組成物を物理的に配
合するのに有用な追加物質、例えば色素、着香剤、防腐剤、酸化防止剤、乳白剤、粘度付
与剤及び安定剤を含んでもよい。しかしながら、こうした物質は、加える際に、本発明の
組成物の成分の生物活性を必要以上に阻害するものであってはならない。こうした製剤は
滅菌し、必要に応じて、助剤、例えば、製剤のオリゴヌクレオチド(単数または複数)と
有害な相互作用を起こさない滑沢剤、防腐剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、浸透圧を調節す
るための塩、緩衝液、着色料、矯味矯臭剤及び/または芳香物質及び同種のものを含んで
もよい。
脂質と中性脂質との混合物で作られた、予め形成されたリポソームまたはリポプレックス
に核酸を導入する。別の方法では、中性脂質の存在なしにDNAとモノ−またはポリ−カ
チオン性脂質との複合体を形成する。ある種の実施形態では、脂質部分は、特定の細胞ま
たは組織への医薬品の分布が増加するように選択する。ある種の実施形態では、脂質部分
は、脂肪組織への医薬品の分布が増加するように選択する。ある種の実施形態では、脂質
部分は、筋肉組織への医薬品の分布が増加するように選択する。
成物を調製する。イントラリピッドは、静脈内投与用に調製された脂肪乳剤である。イン
トラリピッドは、10%大豆油、1.2%卵黄リン脂質、2.25%グリセリン及び注射
用水からなる。更に、pHを調整するため水酸化ナトリウムが加えられているため、最終
製品のpH範囲は6〜8.9になっている。
脂質部分と核酸との複合体を含む。ある種の実施形態では、こうした調製物は、各々独立
に式(Z)により定義される構造を有する1つまたは複数の化合物またはその薬学的に許
容される塩を含み、
、3、4または5であり;Rは各々独立にHであり、調製物中の式(Z)の化合物の分子
の少なくとも80%のR部分の少なくともn+2はHではなく;mは1、2、3または4
であり;YはO、NR2またはSであり;R1はアルキル、アルケニル、またはアルキニ
ルであり;その各々は任意選択的に1つまたは複数の置換基で置換されており;R2はH
、アルキル、アルケニルまたはアルキニルであり;その各々は任意選択的に置換され、そ
の各々は任意選択的に1つまたは複数の置換基で置換されており;ただし、n=0である
場合、R部分の少なくともn+3はHではない。こうした調製物は、脂質調製物の開示に
ついてその全体を本明細書に援用する国際公開第2008/042973号明細書に記載
されている。いくつかの別の調製物については、脂質調製物の開示についてその全体を本
明細書に援用するAkinc et al.,Nature Biotechnolog
y 26,561−569(01 May 2008)に記載されている。
リゴヌクレオチド、及び1種または複数種の賦形剤を含む。そうしたある種の実施形態で
は、賦形剤は、水、塩溶液、アルコール、ポリエチレングリコール、ゼラチン、ラクトー
ス、アミラーゼ、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ケイ酸、粘性パラフィン、ヒドロ
キシメチルセルロース及びポリビニルピロリドンから選択される。
はないが、混合工程、溶解工程、造粒工程、糖衣錠製造工程、水簸工程、乳化工程、カプ
セル充填工程、封入工程または錠剤化工程を含む既知の技術を用いて調製される。
リキシル剤及び/または溶液剤)である。こうした実施形態の一部では、液体医薬組成物
は、当該技術分野において公知の成分、以下に限定されるものではないが、水、グリコー
ル、油、アルコール、着香剤、防腐剤及び着色剤を用いて調製される。
及び/またはカプセル剤)である。こうした実施形態の一部では、1つまたは複数のオリ
ゴヌクレオチドを含む固体医薬組成物は、当該技術分野において公知の成分、以下に限定
されるものではないが、デンプン、糖、希釈液、造粒剤、滑沢剤、バインダー及び崩壊剤
を用いて調製される。
れる。ある種のこうしたデポ調製物は典型的には非デポ調製物より長く作用する。ある種
の実施形態では、こうした調製物は、埋入(例えば皮下または筋肉内)または筋肉内注射
により投与される。ある種の実施形態では、デポ調製物は、好適なポリマー材料若しくは
疎水性材料(例えば許容可能な油に溶かしたエマルジョン)またはイオン交換樹脂を用い
て、或いは、やや溶けにくい誘導体、例えば、やや溶けにくい塩として調製される。
例には、リポソーム及びエマルジョンがあるが、これに限定されるものではない。ある種
の送達系は、疎水性化合物を含む医薬組成物などある種の医薬組成物の調製に有用である
。ある種の実施形態では、ある種の有機溶媒、例えばジメチルスルホキシドが使用される
。
の医薬品を特異的な組織または細胞型に送達するように設計された1つまたは複数の組織
特異的送達分子を含む。例えば、ある種の実施形態では、医薬組成物は、組織特異的抗体
でコーティングされたリポソームを含む。
うした徐放システムの非限定的な例として、固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが
ある。ある種の実施形態では、徐放システムは、その化学的性質に応じて数時間、数日、
数週または数ヶ月の期間にわたり医薬品を放出することができる。
内等)用に調製される。こうした実施形態の一部では、医薬組成物は、キャリアを含み、
水溶液、例えば水または生理学的に適合性の緩衝液、例えばハンクス液、リンゲル液また
は生理食塩水緩衝液中で製剤化される。ある種の実施形態では、他の成分(例えば、溶解
を助けるまたは防腐剤として働く成分)も含まれる。ある種の実施形態では、適切な液体
キャリア、懸濁化剤及び同種のものを用いて注射用懸濁液を調製する。ある種の注射用医
薬組成物は、単位剤形、例えば、アンプルまたは複数用量容器で提供される。ある種の注
射用医薬組成物は、油性若しくは水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンであ
り、製剤添加剤、例えば懸濁剤、安定化剤及び/または分散剤を含んでもよい。注射用医
薬組成物に使用するのに好適なある種の溶媒には、親油性溶媒及び脂肪油、例えばゴマ油
、合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルまたはトリグリセリド、並びにリポソー
ムがあるが、これに限定されるものではない。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を高める
物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストラン
を含んでもよい。任意に、こうした懸濁液は、好適な安定剤、または医薬品の溶解性を高
めて高濃縮溶液の調製を可能にする作用物質を更に含んでもよい。
ヌクレオチドを含む。ある種の実施形態では、治療有効量は、疾患の症状を予防、緩和ま
たは軽減させる、或いは、処置された被検体の生存を延長させるのに十分な量である。治
療有効量の判定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
ドはプロドラッグとして製剤化される。ある種の実施形態では、プロドラッグは、インビ
ボ投与すると、生物学的に、薬学的にまたは治療的により活性な形態のオリゴヌクレオチ
ドに化学的に変換される。ある種の実施形態では、プロドラッグは、その活性形態より投
与しやすいため、有用である。例えば、場合によっては、プロドラッグは、その活性形態
より(例えば、経口投与により)体内吸収される可能性がある。場合によっては、プロド
ラッグは、その活性形態と比較して溶解性を改善できたかもしれない。ある種の実施形態
では、プロドラッグは、その活性形態より水溶性に乏しい。場合によっては、こうしたプ
ロドラッグは、細胞膜(通り抜けるには水溶性が妨げになる)を通過する優れた送達性を
有する。ある種の実施形態では、プロドラッグはエステルである。そうしたある種の実施
形態では、エステルは、投与すると代謝によりカルボン酸に加水分解される。場合によっ
ては、カルボン酸を含む化合物はその活性形態である。ある種の実施形態では、プロドラ
ッグは、酸性基に結合した短いペプチド(ポリアミノ酸)を含む。こうした実施形態の一
部では、ペプチドは、投与されると切断されてその活性形態となる。
るように医薬活性化合物を修飾することにより製造する。プロドラッグは、薬剤の代謝安
定性または輸送性を変化させる、副作用または毒性をマスクする、薬剤の風味を改善する
、或いは、薬剤の他の特徴または特性を変化させるように設計してもよい。当業者は、医
薬活性化合物が分かれば、インビボでの薬力学的プロセス及び薬物代謝の知識に基づき、
その化合物のプロドラッグを設計することができる(例えば、Nogrady(1985
) Medicinal Chemistry A Biochemical Appr
oach,Oxford University Press,New York,pa
ges 388−392を参照されたい)。
miR−21に関連する疾患の処置は、2つ以上の治療を含んでもよい。したがって、
ある種の実施形態では、本明細書で記載されるのは、miR−21に関連する疾患を有す
るまたはそれを有する疑いがある被検体を処置するための方法であって、マイクロRNA
と相補的な核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドに加えて少なくとも1つの治療
を行うことを含む方法である。
ステロイド系抗炎症薬である。ある種の実施形態では、ステロイド抗炎症薬はコルチコス
テロイドである。ある種の実施形態では、コルチコステロイドはプレドニゾンである。あ
る種の実施形態では、抗炎症薬は非ステロイド系抗炎症剤である。ある種の実施形態では
、非ステロイド系抗炎症薬はイブプロフェン、COX−I阻害剤またはCOX−2阻害剤
である。
グルコシダーゼ阻害剤、インスリン、スルホニル尿素およびチアゾリデンジオンがあるが
、これに限定されるものではない。
ン、フロセミド)、変力作用薬(たとえばドブタミン、ミルリノン)、ジゴキシン、血管
拡張薬、アンジオテンシンII変換酵素(ACE)阻害剤(たとえばカプトプリル、エナ
ラプリル、リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリルおよびラミプリル)
、アンジオテンシンII受容体遮断薬(ARB)(たとえばカンデサルタン、イルベサル
タン、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタン、エプロサルタン)
、カルシウムチャネル遮断薬、二硝酸イソソルビド、ヒドララジン、ニトレート(たとえ
ば一硝酸イソソルビド、二硝酸イソソルビド)、ヒドララジン、β遮断薬(たとえばカル
ベジロール、メトプロロール)およびナトリウム利尿ペプチド(たとえばネシリチド)が
あるが、これに限定されるものではない。ある種の実施形態では、ACE阻害剤はシラザ
プリル、ペリンドプリルおよびトランドラプリルから選択される。
投与される。ある種の実施形態では、ACE阻害剤は、0.125〜1.0mg/kg体
重の用量で投与される。ある種の実施形態では、ACE阻害剤は、1〜6mg/m2/日
の範囲にわたる用量で投与される。ある種の実施形態では、ACE阻害剤は、1〜2mg
/m2/日の範囲にわたる用量で投与される。ある種の実施形態では、ACE阻害剤は、
2〜4mg/m2/日の範囲にわたる用量で投与される。ある種の実施形態では、ACE
阻害剤は、0.5〜1mg/m2/日の範囲にわたる用量で投与される。
れる。ある種の実施形態では、ラミプリルは、1〜2mg/m2/日の範囲にわたる用量
で投与される。ある実施形態では、エナラプリルは、2〜4mg/m2/日の範囲にわた
る用量で投与される。ある実施形態では、リシノプリルは、4〜8mg/m2/日の範囲
にわたる用量で投与される。ある実施形態では、ベナゼプリルは、4〜8mg/m2/日
の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、ホシノプリルは、4〜8mg/m
2/日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、キナプリルは、4〜8mg
/m2/日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、シラザプリルは、1〜
2mg/m2/日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、ペリンプリルは
、1〜2mg/m2/日の範囲にわたる用量で投与される。ある実施形態では、トランド
ラプリルは、0.5〜1mg/m2/日の範囲にわたる用量で投与される。
量で投与される。ある種の実施形態では、ARBは、6.25mg/m2/日の用量で投
与される。ある種の実施形態では、ARBは、10mg/m2/日の用量で投与される。
ある種の実施形態では、ARBは、12.5mg/m2/日の用量で投与される。ある種
の実施形態では、ARBは、18.75mg/m2/日の用量で投与される。ある種の実
施形態では、ARBは、37.5mg/m2/日の用量で投与される。ある種の実施形態
では、ARBは、50mg/m2/日の用量で投与される。ある種の実施形態では、AR
Bは、150mg/m2/日の用量で投与される。
ある種の実施形態では、ロサルタンは、12.5mg/m2/日の用量で投与される。あ
る種の実施形態では、カンデサルタンは、6.25mg/m2/日の用量で投与される。
ある種の実施形態では、イルベスタルタンは、37.5mg/m2/日の用量で投与され
る。ある種の実施形態では、テルミサルタンは、10mg/m2/日の用量で投与される
。ある種の実施形態では、バルサルタンは、18.75mg/m2/日の用量で投与され
る。ある種の実施形態では、エスプレサルタンは、150mg/m2/日の用量で投与さ
れる。
施形態では、アルドステロンアンタゴニストはスピロノラクトンである。ある種の実施形
態では、スピロノラクトンは1日10〜35mgの範囲にわたる用量で投与される。ある
種の実施形態では、スピロノラクトンは1日25mgの用量で投与される。
ノイドはペントサンポリ硫酸である。
ロックする医薬品である。
では、抗CTGF治療剤はCTGFに対するモノクローナル抗体である。
低用量シクロフォスファミド、チモスチムリン、ビタミンおよび栄養補助剤(たとえば、
酸化防止剤、たとえばビタミンA、ビタミンC、ビタミンE、βカロテン、亜鉛、セレン
、グルタチオン、コエンザイムQ−10およびエキネシア)、ならびにワクチン、たとえ
ば、多量体抗原の提示とアジュバントとを組み合わせたワクチン製剤を構成する免疫刺激
複合体(ISCOM)が挙げられる。
を処置または軽減するように選択される。こうした副作用として、以下に限定されるもの
ではないが、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系
異常およびミオパチーが挙げられる。たとえば、血清中のアミノトランスフェラーゼレベ
ルの上昇は、肝毒性または肝機能異常を示す場合がある。たとえば、ビリルビンの増加も
、肝毒性または肝機能異常を示す場合がある。
免疫グロブリン(IVIg);鎮痛薬(たとえば、アセトアミノフェン);サリチレート
;抗生物質;抗ウイルス薬;抗真菌薬;アドレナリン作用修飾薬;ホルモン(たとえば、
アナボリックステロイド、アンドロゲン、エストロゲン、カルシトニン、プロゲスチン、
ソマトスタンおよび甲状腺ホルモン);免疫調節剤;筋弛緩薬;抗ヒスタミン剤;骨粗鬆
症薬(たとえば、ビホスホネート、カルシトニンおよびエストロゲン);プロスタグラン
ジン、抗腫瘍薬;精神治療薬;鎮静剤;毒オークまたは毒ウルシの生成物;抗体;および
ワクチンがあるが、これに限定されるものではない。
本発明はまたキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、核酸塩基配列が
miR−21の核酸塩基配列と相補的な修飾オリゴヌクレオチドを含む、本発明の1種ま
たは複数種の化合物を含む。miR−21と相補的な化合物は、本明細書に記載のヌクレ
オシドパターンのいずれを有してもよい。いくつかの実施形態では、miR−21と相補
的な化合物はバイアル内に存在してもよい。例えば、調剤容器には、10個などの複数の
バイアルが存在してもよい。いくつかの実施形態では、バイアルは、シリンジが利用しや
すいように製造する。キットは、miR−21と相補的な化合物の使用説明書を更に含ん
でもよい。
投与することができる。こうした例では、キットは、miR−21と相補的な化合物に加
えて、以下の1つまたは複数を更に含んでもよい:シリンジ、アルコール綿棒、コットン
ボール及び/またはガーゼ。いくつかの実施形態では、miR−21と相補的な化合物は
、バイアル中でなくプレフィルドシリンジ(例えば27ゲージ、1/2インチ針の針ガー
ド付き単回投与シリンジ)中に存在してもよい。10本など複数のプレフィルドシリンジ
が、例えば、調剤容器中に存在してもよい。キットは、miR−21と相補的な化合物の
投与説明書を更に含んでもよい。
ある種の実施形態では、本発明は、実験モデルを用いて本発明の修飾オリゴヌクレオチ
ドを使用及び/または試験する方法を提供する。当業者であれば、そうした実験モデルの
プロトコルを選択及び変更して本発明の医薬品を評価することができる。
ンビボでの修飾オリゴヌクレオチドの送達が望ましい細胞型に関連する細胞型がある。例
えば、本明細書に記載の方法の研究に好適な細胞型には、初代細胞または培養細胞がある
。
活性を阻害する程度を評価する。ある種の実施形態では、マイクロRNA活性の阻害は、
マイクロRNAのレベルを測定することにより評価することができる。或いは、予想され
るまたは検証されたマイクロRNA制御転写物のレベルを測定してもよい。マイクロRN
A活性が阻害されると、miR−21制御転写物、及び/またはmiR−21制御転写物
によりコードされたタンパク質が増加する場合がある。更に、ある種の実施形態では、あ
る種の表現型の結果を測定してもよい。
に入手可能である。たとえば、アルポート症候群の実験モデル、たとえばCol4a3ノ
ックアウトマウス(Col4a3−/−マウス)を用いてmiR−21の阻害剤を研究す
ることができる。マウスモデルの疾患の重症度は、Col4a3突然変異を有するマウス
の遺伝的背景に依存する。たとえば、C57BL/6J背景と比較して129X1/Sv
J背景では、疾患の発症および進行が一般に速い。したがって、Col4a3−/−マウ
スの遺伝的背景は、疾患の発症および進行が異なるように選択することができる。別のモ
デルとして、X連鎖、常染色体劣性または常染色体優性のアルポート症候群のイヌモデル
が挙げられる。たとえば、Kashtan,Nephrol.Dial.Transpl
ant,2002,17:1359−1361を参照されたい。
修飾オリゴヌクレオチドの投与後のmiR−21のアンチセンス阻害の作用は、当該技
術分野において公知の種々の方法により評価することができる。ある種の実施形態では、
これらの方法を用いて、細胞または組織のマイクロRNAレベルをインビトロまたはイン
ビボで定量する。ある種の実施形態では、マイクロアレイ解析によりマイクロRNAレベ
ルの変化を測定する。ある種の実施形態では、市販されているいくつかのPCRアッセイ
の1つ、例えばTaqMan(登録商標)MicroRNA Assay(Applie
d Biosystems)によりマイクロRNAレベルの変化を測定する。ある種の実
施形態では、miR−21の標的のmRNA及び/またはタンパク質レベルを測定するこ
とにより、miR−21のアンチセンス阻害を評価する。miR−21のアンチセンス阻
害を行うと、一般にマイクロRNAの標的のmRNA及び/またはタンパク質のレベルが
上昇する。
抗miRまたはマイクロRNA模倣物によるマイクロRNA活性の調節は、標的結合を
測定することにより評価することができる。ある種の実施形態では、標的結合は、mRN
Aのマイクロアレイプロファイリングにより測定する。抗miRまたはマイクロRNA模
倣物により調節される(増加或いは減少する)mRNAの配列についてマイクロRNAシ
ード配列を検索し、マイクロRNAの標的であるmRNAの調節を、マイクロRNAの標
的でないmRNAの調節と比較する。この方法では、抗miRとmiR−21と、または
miR−21模倣物とその標的との相互作用を評価することができる。抗miRの場合に
は、発現レベルが上昇するmRNAについて、抗miRと相補的なマイクロRNAのシー
ドマッチを含むmRNA配列をスクリーニングする。
実施例は、本発明の広範な範囲を限定するものとして解釈してはならない。当業者であれ
ば、本発見の根底にある原理を採用し、本発明の精神を逸脱しない範囲で様々な化合物を
容易に設計するであろう。
129svの遺伝的背景のCol4a3−/−マウスは、ヒトアルポート症候群に類似
した重度腎疾患を自然に発症する。したがって、アルポート症候群の実験モデルとしてC
ol4a3−/−マウスを使用する。
オリゴヌクレオチド(抗miR−21化合物)を試験した。野生型マウスを対照マウスと
した使用した。
CSTAE−3’(配列番号3)であり、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ
−D−デオキシリボヌクレオシドを示し;後に下付き文字「E」があるヌクレオシドは2
’−MOEヌクレオシドを示し;後に下付き文字「S」があるヌクレオシドはS−cEt
ヌクレオシドを示す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合
である。
9週齢で性別が一致したマウスの同腹仔を抗miR−21またはPBSで処置した。抗m
iR−21は、25mg/kgの用量で週2回皮下投与した。処置群は:(1)野生型マ
ウス、PBS投与、n=8;(2)Col4a3−/−マウス、PBS投与、n=12;
(3)Col4a3−/−マウス、抗miR−21投与、n=12であった。Col4a
3−/−マウスの野生型同腹仔を野生型対照マウスとして使用した。夜間尿サンプル(約
16時間)を週1回採取した。血漿および腎臓は、9週目の終了時に採取した。体液サン
プルおよび組織サンプルを解析して腎機能、腎臓損傷ならびに糸球体硬化および間質線維
症の変化を判定した。
レアチニン比、糸球体濾過量の測定とした。組織学的解析には、糸球体硬化、間質線維症
、尿細管の傷害、マクロファージ浸潤および筋線維芽細胞の存在の評価を含めた。
検定により計算した。図1Aに示すように試験終了時点で、抗miR−21で処置した動
物では、PBS処置対照動物と比較してBUNの統計学的に有意な低下が観察された。B
UNの低下は、全体(図1A)だけでなく、雄マウスのみ(対照雄マウスの約25mg/
dLと比較して約90mg/dL)および雌マウスのみ(対照雌マウスの約25mg/d
Lと比較して約70mg/dL)図示せず)でも観察された。Col4a3+/+マウス
のBUNは、約12.5mg/kL(正常範囲内;図示せず)であった。BUNは、腎機
能の血液マーカーである。BUNが高くなると腎機能が低下する関係にある。BUNの低
下は、腎臓の傷害および損傷の減少と機能の改善との指標である。
をELISAにより測定し、尿中クレアチニン排泄量に対して標準化して評価した。解析
はすべて試験終了時に同時に行った。図1Bに示すように、Col4a3−/−マウスは
重度のアルブミン尿が出現する。一方、抗miR−21で処置したマウスは、尿中アルブ
ミン/クレアチニン比の低下により認められるように、出現したアルブミン尿がはるかに
少なかった。アルブミン尿の減少は7週目には観察され、9週目まで続いた。Col4a
3−/−マウスの野生型同腹仔は、予想通りアルブミン尿を示さなかった。アルブミン尿
は、糸球体および尿細管の損傷の高感度の指標である。アルブミン/クレアチニン比の低
下は、糸球体および/または尿細管疾患の減少を示す。
じる著しい腎間質線維症の進行性の発症を特徴とする。したがって、糸球体硬化症は、盲
検による糸球体の硬化病変スコア(毛細血管ループの消失+線維症または硝子化)により
評価した。盲検下の観察者が、各マウス由来の30の糸球体を連続的にスコア化した。ス
コアは0〜4とし、0=正常;1=硬化症に冒された糸球体が<25%;2=25〜50
%の糸球体が硬化症に冒されている;3=50〜75%の糸球体が硬化症に冒されている
;4=75〜100%の糸球体が硬化症に冒されている。疾患のない糸球体の比率は抗m
iR−21で処置したマウスの方でかなり高く、中等度または重度に冒された糸球体(ス
コア2〜4)の糸球体比率は、PBSで処置したマウスの方で著しく高かった(図2)。
Col43a−/−マウスの野生型同腹仔(WT)の糸球体もスコア化した。間質線維症
は、PBS処置および抗miR−21 Col4a3−/−動物由来の、ピクロシリウス
レッドで染色した矢状切片全体を対象に形態計測学的に測定した。図3Aに示すように、
抗miR−21処置Col4a3−/−マウスの間質線維症の統計学的に有意な減少が観
察された。さらに、主要な病的基質タンパク質コラーゲンIα(1)(Col1a1)の
転写物の定量PCRから、抗miR−21処置Col4a3−/−マウス由来の腎臓組織
では、この病的コラーゲンの産生が非常に少ないことも示された(図3B)。
ド(4%)固定パラフィン包埋組織切片を用いて評価した。最初に腎臓切片について、尿
細管および糸球体の傷害および炎症に基づき傷害全体の順位付けを行った。損傷は、尿細
管の拡張、刷子縁の消失、細胞浸潤、糸球体の炎症、間質の浮腫および細胞壊死などの種
々の因子に基づき評価した。腎臓切片については、盲検的に傷害全体の順位付けを行い、
腎臓傷害順位スコアを付与した。Col4a3−/−マウス由来の腎臓切片は、著しく低
い腎臓傷害順位スコアを示したことから、腎臓傷害が少ないことが示唆される(図4A)
。これをより詳細に解析するため、糸球体について、盲検下の観察者により糸球体半月体
を有する比率を評価した。半月体はボーマン嚢内の細胞の増殖であり、ボーマン腔内細胞
が≧2層であることで半月体と定義される。半月体は、糸球体傷害の十分に確立されたマ
ーカーである。抗miR−21を投与したCol4a3−/−マウスでは、半月体を有す
る糸球体の比率は約44%であったのに対し、PBS対照処置を受けたマウスでは、半月
体を有する糸球体の比率は約19%であった(図4B)。Col4a3+/+同腹仔では
、半月体を有する糸球体の比率は5%未満であった(図示せず)。腎臓のネフロンの尿細
管も損傷される部位である。尿細管損傷は、各腎臓の矢状切片全体をカバーする時系列画
像の格子を重ねることにより評価した。尿細管の損傷は、格子の升目ごとに盲検的に評価
した。尿細管の損傷は、尿細管の拡張/扁平化、刷子縁の消失、細胞浸潤および細胞壊死
の存在に基づき評価した。これらの特徴が存在した場合、格子の升目のスコアが正になる
。尿細管の損傷を有する升目の%である総合スコアを各画像に適用する。その腎臓由来の
全画像について総合スコアを平均する。次いで腎臓ごとの平均スコアを統計解析に供する
。図示されるように、尿細管の傷害スコアは、PBSを投与したCol4a3−/−(図
4C)と比較して抗miR−21で処置したCol4a3−/−マウスの方が有意に低か
った。Col4a3+/+同腹仔の尿細管の傷害スコアは、10%未満であった(図示せ
ず)。
び筋線維芽細胞の付着を評価した。F4/80染色で判断したところ、PBS処置Col
4a3−/−対照マウスと比較して抗miR−21処置Col4a3−/−マウスでは、
マクロファージ浸潤が減少していた(図5A)。CD31の免疫細胞化学的染色から、P
BS処置Col4a3−/−対照マウスと比較して抗miR−21処置Col4a3−/
−マウスでは、内皮細胞の安定性の改善が立証された(図示せず)。α−SMAの検出に
より、PBS処置Col4a3−/−対照マウスと比較して抗miR−21処置Col4
a3−/−マウスの筋線維芽細胞の付着の減少が明らかになった(図5B)。Col4a
3+/+マウスでは、α−SMA染色は約5%であった(図示せず)。
剰なROSは、細胞膜およびオルガネラ膜の脂質過酸化を引き起こし、その結果構造の完
全性と細胞輸送能およびエネルギー産生能とを破壊し得る。腎臓では、細胞ストレスにお
いて産生されたROSは腎傷害を引き起こすことがある。Col4a3−/−マウスにお
いてmiR−21の阻害後にROSの産生が減少したかどうかを評価するため、抗miR
−21処置マウスおよびPBS処置マウスを用いて尿中の過酸化水素レベルを測定した。
尿中の過酸化水素レベルは、抗miR−21を投与したマウスで有意に低下した(図6A
)。Col4a3+/+マウスでは、尿中の過酸化水素レベルは5μM未満であった(図
示せず)。さらに、ROSの指標であるジヒドロエチジウム(DHE)による腎臓組織の
免疫細胞化学的染色から、PBS処置対照マウスと比較して抗miR−21処置Col4
a3−/−マウスの腎臓組織においてROSの減少が立証された(図6B)。Col4a
3+/+マウスでは、DHE染色が観察されたのは10%未満であった(図示せず)。こ
れらのデータから、抗miR−21で処置したCol4a3−/−マウスの尿および腎臓
組織の両方におけるROSの減少が立証される。したがって、抗miR−21が腎臓傷害
を減少させ得る1つのメカニズムとして、反応性酸素種の産生を減少させることが挙げら
れる。
から、腎臓内のMPV17Lタンパク質の量がCol4a3−/−マウスと比較して増加
することが明らかになった。MPV17Lは、反応性酸素種の代謝に関係し、酸化ストレ
スを防止するミトコンドリア内膜タンパク質である。したがって、抗miR−21処置後
のROS産生の減少は、MPV17Lレベルの増加により、少なくともある程度起こり得
る。抗miR−21の作用機序をさらに探るため、PBSで処置または抗miR−21処
置のCol4a3−/−マウスの腎臓の免疫ブロットにより、PPAR−αタンパク質を
測定した。抗miR−21処置はPPAR−αタンパク質を増加させたことから、代謝経
路の刺激が示唆された。
細胞が減少するとタンパク尿が出て、一部の病状では糸球体硬化に至ることがある。Co
l4a3−/−マウスを用いて有足細胞数がmiR−21の阻害の影響を受けるかどうか
を評価するため、抗miR−21処置マウスおよびPBS処置マウスの有足細胞数を測定
した。有足細胞数は、PBS処置マウスと比較して抗miR−21を投与したCol4a
3−/−マウスで有意に増加し、Col4a3−/−マウスの野生型同腹仔で観察された
有足細胞数と同程度であった(図7)。したがって、アルポート症候群のモデルにおいて
抗miR−21が腎臓傷害を減少させ得る1つのメカニズムは、有足細胞の減少を防止ま
たは抑制することによる。
抗miR−21化合物#1(上記):5’−AECSATCSAGTCSTGAUSAA
GCSTAE−3’(配列番号3)
抗miR−21化合物#2:5’−AECSATCSASGTCSUSGAUSASAG
CSUsAE−3’(配列番号3);
抗miR−21化合物#3:5’−MeCEASASTECSUSAEAEUSASAE
GECSTEAS−3’(配列番号4);および
抗miR−21化合物#4:5’−AECSAETECSAEGETECSTGAUSA
AGCSUSAS−3’(配列番号3);
を用いて同様の研究を行った。(ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−D−デ
オキシリボヌクレオシドを示し;後に下付き文字「E」があるヌクレオシドは2’−MO
Eヌクレオシドを示し;後に下付き文字「S」があるヌクレオシドはS−cEtヌクレオ
シドを示し;および上付き文字「Me」はヌクレオシドの塩基の5−メチル基を示す)。
ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
間投与した。対照群は、PBSで処置したCol4a3−/−マウス、およびCol4a
3−/−マウスの野生型同腹仔とした。各処置群は、10〜12匹のマウスを含んでいた
。化合物#1、2および4では、各評価項目は上記のように評価し、BUN、尿中アルブ
ミン/クレアチニン比、腎臓傷害(PAS染色)、糸球体硬化症および半月体を有する糸
球体の比率とした。化合物#3の評価項目は、BUN、尿中アルブミン/クレアチニン比
およびコラーゲン遺伝子発現(線維症の指標として)とし、上記のように評価した。
た。両方の抗miR−21化合物#2の有効性も化合物#1のそれと同様であり、BUN
、尿中アルブミン/クレアチニン比、腎臓傷害、糸球体硬化症の程度および半月体を有す
る糸球体の割合において改善が観察された。化合物#3の有効性も化合物#1のそれと同
様であり、BUN、尿中アルブミン/クレアチニン比およびCol1a1発現において改
善が観察された。抗miR−21化合物#4は、化合物試験した他の化合物より有効性が
低いものの、それでもBUN、腎臓傷害、糸球体硬化症の程度および半月体を有する糸球
体の割合が改善した。
21処置が腎機能の低下およびアルブミン尿の発症を減弱させたことが証明される。糸球
体硬化症および間質線維症は著明に減弱し、近位尿細管は維持された。抗miR−21は
Col4a3−/−マウスの腎機能が徐々に低下するのを防止し、糸球体疾患および尿細
管間質疾患の両方を減弱させるので、抗miR−21はヒトアルポート症候群の治療薬で
ある。
アルポート症候群の実験モデルにおけるmiR−21の調節不全を評価するため、マウ
スから採取した腎臓組織のmiR−21レベルを測定した。腎全体からRNAを単離し、
定量PCRによりmiR−21を測定した。Col4a3−/−マウスでは、miR−2
1レベルが野生型マウスのmiR−21レベルと比較して約3倍高かった。
尿または血液におけるmiR−21が高いと確認され得る。
野生型マウスは一般に、2〜3年(730〜1095日)生存する。129X1/Sv
J背景のCol4a3−/−マウスの場合、末期腎不全が早ければ生後2ヶ月で起こるこ
とがある。C57BL/6J背景のCol4a3−/−の場合、末期腎不全が早ければ生
後6ヶ月で起こることがある。背景に関係なく、Col4a3−/−マウスの寿命は野生
型マウスのそれより著しく短い。このため、Col4a3−/−マウスは、どのような遺
伝的背景でも、アルポート症候群における末期腎不全のモデルとすることができ、平均余
命に対する候補治療薬の作用を評価するのに使用することができる。
10〜25mg/kgの範囲にわたる用量で週1回または週2回、最大1年間皮下投与す
る。PBSは、対照処置として投与することができる。本試験を通じて週1回または月1
回のスケジュールで夜間尿サンプル(約16時間)を採取する。各マウスの死亡時の年齢
を記録する。死亡時または試験終了時に血漿および腎臓を採取する。体液サンプルおよび
組織サンプルを解析して腎機能、糸球体硬化および線維症の変化を判定する。
び間質線維症の変化を判定する。血液または尿の評価項目には、血中尿素窒素(BUN)
、アルブミン尿、アルブミン/クレアチニン比、糸球体濾過量の測定を含める。組織学的
解析には、糸球体硬化、間質線維症、尿細管の傷害、マクロファージ浸潤および筋線維芽
細胞の存在の評価を含める。
の遅延および平均余命の延長が観察されることから、抗miR−21がアルポート症候群
の被検体の平均余命を延長させることができる治療薬であることが示唆される。
アルポート症候群の実験モデルの生存期間に対する抗miR−21の作用を評価するた
め、抗miR−21化合物をCol4a3−/−マウスに投与した。
CSTAE−3’(配列番号3)であり、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ
−D−デオキシリボヌクレオシドを示し;後に下付き文字「E」があるヌクレオシドは2
’−MOEヌクレオシドを示し;後に下付き文字「S」があるヌクレオシドはS−cEt
ヌクレオシドを示す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合
である。
Col4a3−/−マウスを作成した。生後3週で、マウスの遺伝子型を調べてCol4
a3−/−マウスを特定した。処置群は、(1)Col4a3+/+マウス(野生型同腹
仔)、PBS投与、週2回、n=12;(2)Col4a3−/−マウス、PBS投与、
週2回、n=12;(3)Col4a3−/−マウス、25mg/kgの抗miR−21
皮下投与、週2回、n=12であった。処置剤は3週目から16週目まで週2回投与した
。動物の体重を週1回測定し、寿命を記録した。
1週で死亡した。図8Aに示すように、抗miR−21は最大体重を増加させ、体重減少
を有意に遅延させた(p<0.01)。図8Bに示すように、抗miR−21は寿命を有
意に延長させた(p<0.001)。したがって、抗miR−21による処置は、体重減
少を遅延させただけでなく、重要な点としてCol4a3−/−マウスの生存期間も改善
させた。
アルポート症候群の実験モデルの生存期間に対する抗miR−21の用量反応性を評価
するため、いくつかの用量の抗miR−21化合物をCol4a3−/−マウスに投与し
た。
CSTAE−3’(配列番号3)であり、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ
−D−デオキシリボヌクレオシドを示し;後に下付き文字「E」があるヌクレオシドは2
’−MOEヌクレオシドを示し;後に下付き文字「S」があるヌクレオシドはS−cEt
ヌクレオシドを示す。ヌクレオシド間結合は各々ホスホロチオエートヌクレオシド間結合
である。
は、
(1)Col4a3−/−マウス、PBS投与、週1回、n=13;
(2)Col4a3−/−マウス、12.5mg/kgの抗miR−21投与、週1回
、n=12;
(3)Col4a3−/−マウス、25mg/kgの抗miR−21投与、週1回、n
=13;
(4)Col4a3−/−マウス、50mg/kgの抗miR−21投与、週1回、n
=12;
(5)Col4a3−/−マウス、25mg/kgの抗miR−21投与、週2回、n
=12;
であった。
目で、血液を採取してBUNを測定した。
は、BUNの低下が観察された。BUNの低下は観察されたが、強い用量反応性がなかっ
た。おそらく本実験に使用したCol4a3−/−マウスの疾患がより重度であったため
と考えられる(マウスは、前述の例に記載したCol4a3−/−マウスと異なる業者か
ら入手した)。観察されたBUNの低下は、腎臓の傷害および損傷の減少と機能の改善の
指標である。
用量反応性に延長させた。寿命の延長は、週2回処置および週1回処置の両方で観察され
た。生存期間の中央値は以下の通りであった:PBS、62日;12.5mg/kgの抗
miR−21 週1回(QW)、72.5日;25mg/kgの抗miR−21 週1回
(QW)、77日;50mg/kgの抗miR−21 週1回(QW)、89日;25m
g/kgの抗miR−21 週2回(BIW)、82.5日。
遅延および平均余命の延長が観察されたことから、抗miR−21がアルポート症候群の
被検体の平均余命を延長し得る治療薬であることが示唆された。
抗miR化合物を含むオリゴヌクレオチドは、腎臓内のいくつかの細胞型に分布するこ
とが知られている。Chau et al.,Sci Transl Med.,201
2,121ra18により報告されているように、正常なマウスあるいは腎臓傷害を生じ
させたマウス(一側尿管閉塞、間質線維症モデル)にCy3標識抗miRの投与後、腎臓
内の最大蛍光強度は近位尿細管上皮であった。内皮、周皮細胞、筋線維芽細胞およびマク
ロファージにもすべて、検出可能な量のCy3標識抗miRが含まれていた。しかしなが
ら、糸球体、特に有足細胞は、相当量の抗miRを取り込んでいないようであり、化学修
飾オリゴヌクレオチドの既知の分布と一致した(Masarjian et al.,O
ligonucleotides,2004,14,299−310)。
miR化合物を、Col4a3−/−マウスの2つの異なる群、生後6週の群(n=3)
および生後8週の群(n=4)と、生後8週の野生型マウスの1群(n=3)に投与した
。抗miR化合物の投与から2日後、動物を屠殺し、腎臓を採取し、組織学的解析用に処
理した。
細胞型における抗miRの取り込みを確認した。染色は、α−SMA(筋線維芽細胞マー
カー)、PDGFR−β(周皮細胞/筋線維芽細胞マーカー)、CD31(内皮細胞マー
カー)、F4/80(マクロファージマーカー)およびGP38(有足細胞マーカー)に
対して行った。予想通り、抗miR化合物は、近位尿細管上皮、周皮細胞、筋線維芽細胞
およびマクロファージに取り込まれた。正常なマウスおよび間質線維症のマウスにおける
以前の観察結果とは異なり、Col4a3−/−マウスでは、抗miRは有足細胞を含め
糸球体に取り込まれた。
与後に観察された有効性は、尿細管周囲の間質線維症だけでなく、糸球体の線維症(糸球
体硬化症という)の改善を伴う。これらデータから、こうした改善は、尿細管の構造およ
び機能の改善からのフィードバックに加えてあるいはその代わりに、糸球体における抗m
iR−21の作用に直接関係している可能性があることが示唆される。
Claims (30)
- アルポート症候群を処置する方法であって、アルポート症候群を有するまたはそれを有
する疑いがある被検体に、12〜25個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレ
オチドを投与することを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はmiR−2
1と相補的である方法。 - 前記被検体は前記修飾オリゴヌクレオチドを投与する前にアルポート症候群を有すると
診断されている、請求項1に記載の方法。 - 前記被検体は、前記修飾オリゴヌクレオチドの投与の前に、前記被検体の腎臓中、尿中
または血液中のmiR−21のレベルが増加していると判定された、請求項1に記載の方
法。 - 前記投与は、
a. 腎機能を改善する;
b. 末期腎臓病の発症を遅延させる;
c. 透析までの時間を遅延させる;
d. 腎移植までの時間を遅延させる;および/または
e. 平均余命を改善する
請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。 - 前記投与は、
a. 血尿を減少させる;
b. 血尿の発症を遅延させる;
c. タンパク尿を減少させる;
d. タンパク尿の発症を遅延させる;
e. 腎線維症を抑制する;
f. 線維症の更なる進行を遅延させる;および/または
g. 線維症の更なる進行を阻止する
請求項1〜4の何れか一項に記載の方法。 - 前記被検体は、IV型コラーゲンのα3鎖をコードする遺伝子の突然変異、IV型コラ
ーゲンのα4鎖をコードする遺伝子の突然変異、またはIV型コラーゲンのα5鎖をコー
ドする遺伝子の突然変異から選択される突然変異を有する、請求項1〜5の何れか一項に
記載の方法。 - 前記被検体は男性(雄)である、請求項1〜6の何れか一項に記載の方法。
- 前記被検体は女性(雌)である、請求項1〜7の何れか一項に記載の方法。
- 前記被検体は血尿および/またはタンパク尿を有すると確認される、請求項1〜8の何
れか一項に記載の方法。 - 前記被検体は腎機能が低下している、請求項1〜9の何れか一項に記載の方法。
- 前記被検体は腎機能の改善を必要としている、請求項1〜10の何れか一項に記載の方
法。 - a. 前記被検体の血液中の血中尿素窒素を測定すること;
b. 前記被検体の血液中のクレアチニンを測定すること;
c. 前記被検体のクレアチニンクリアランスを測定すること;
d. 前記被検体のタンパク尿を測定すること;
e. 前記被検体のアルブミン:クレアチニン比を測定すること;
f. 前記被検体の糸球体濾過量を測定すること;
g. 前記被検体のシスタチンCを測定すること;
h. 前記被検体の血液中のβトレースタンパク質(BTP)を測定すること;
i. 前記被検体の血液中の2−ミクログロブリンを測定すること;
j. 前記被検体の尿中のN−アセチル−β−D−グルコサミニダーゼ(NAG)タン
パク質を測定すること;
k. 前記被検体の尿中の好中球ゼラチナーゼ関連リポカリン(NGAL)タンパク質
を測定すること;
l. 前記被検体の尿中の腎臓傷害分子−1(KIM−1)タンパク質を測定すること
;
m. 前記被検体の尿中のインターロイキン−18(IL−18)タンパク質を測定す
ること;
n. 前記被検体の尿中の単球走化性タンパク質(MCP1)レベルを測定すること;
o. 前記被検体の尿中の結合組織増殖因子(CTGF)レベルを測定すること;
p. 前記被検体の尿中のコラーゲンIVフラグメントを測定すること;
q. 前記被検体の尿中のコラーゲンIIIフラグメントを測定すること;および/ま
たは
r. 前記被検体の尿中の有足細胞タンパク質レベルを測定することであって、前記有
足細胞タンパク質はネフリンおよびポドシンから選択される測定すること、
を含む、請求項1〜11の何れか一項に記載の方法。 - 前記投与は、
a. 前記被検体の血中尿素窒素の低下;
b. 前記被検体の血液中のクレアチニンの低下;
c. 前記被検体のクレアチニンクリアランスの改善;
d. 前記被検体のタンパク尿の減少;
e. 前記被検体のアルブミン:クレアチニン比の低下;
f. 前記被検体の糸球体濾過量の改善;
g. 前記被検体の血液中のシスタチンCの低下;
h. 前記被検体の血液中のβトレースタンパク質(BTP)の低下;
i. 被検体の血液中の2−ミクログロブリン(B2M)の低下;
j. 前記被検体の尿中のNAGタンパク質の低下;
k. 前記被検体の尿中のNGALタンパク質の低下;
l. 前記被検体の尿中のKIM−1タンパク質の低下;
m. 前記被検体の尿中のIL−18タンパク質の低下;
n. 前記被検体の尿中の単球走化性タンパク質(MCP1)レベルの低下;
o. 前記被検体の尿中の結合組織増殖因子(CTGF)レベルの低下;
p. 前記被検体の尿中のコラーゲンIVフラグメントの低下;
q. 前記被検体の尿中のコラーゲンIIIフラグメントの低下;および/または
r. 前記被検体の尿中の有足細胞タンパク質レベルの低下であって、前記有足細胞タ
ンパク質はネフリンおよびポドシンから選択される低下
から選択される前記被検体の腎機能の1つまたは複数のマーカーの改善を行う、請求項1
〜12の何れか一項に記載の方法。 - 前記タンパク尿はアルブミン尿である、請求項5、12または13の何れか一項に記載
の方法。 - 前記アルブミン尿は正常高値アルブミン尿、微量アルブミン尿または顕性アルブミン尿
である、請求項14に記載の方法。 - 前記アルポート症候群はX連鎖型アルポート症候群である、請求項1〜15の何れか一
項に記載の方法。 - 前記アルポート症候群は常染色体性型のアルポート症候群である、請求項1〜16の何
れか一項に記載の方法。 - アンジオテンシンII変換酵素(ACE)阻害剤、アンジオテンシンII受容体遮断薬
(ARB)、降圧薬、ビタミンDアナログ、経口リン吸着薬、透析および腎臓移植から選
択される少なくとも1つの追加治療を行うことを含む、請求項1〜17の何れか一項に記
載の方法。 - 前記アンジオテンシンII変換酵素(ACE)阻害剤はカプトプリル、エナラプリル、
リシノプリル、ベナゼプリル、キナプリル、ホシノプリルおよびラミプリルから選択され
る、請求項17に記載の方法。 - 前記アンジオテンシンII受容体遮断薬(ARB)はカンデサルタン、イルベサルタン
、オルメサルタン、ロサルタン、バルサルタン、テルミサルタンおよびエプロサルタンか
ら選択される、請求項17に記載の方法。 - 前記修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はmiR−21の核酸塩基配列(配列番号
1)と少なくとも90%相補的、少なくとも95%相補的または100%相補的である、
請求項1〜20の何れか一項に記載の方法。 - 前記修飾オリゴヌクレオチドは15〜25個連結したヌクレオシドからなる、請求項1
〜21の何れか一項に記載の方法。 - 前記修飾オリゴヌクレオチドは15個、16個、17個、18個、19個、20個、2
1個または22個連結したヌクレオシドからなる、請求項1〜22の何れか一項に記載の
方法。 - 前記修飾オリゴヌクレオチドは少なくとも1個の修飾ヌクレオシドを含む、請求項1〜
23の何れか一項に記載の方法。 - 前記修飾ヌクレオシドはS−cEtヌクレオシド、2’−O−メトキシエチルヌクレオ
シドおよびLNAヌクレオシドから選択される、請求項21に記載の方法。 - 前記修飾オリゴヌクレオチドは少なくとも1つの修飾ヌクレオシド間結合を含む、請求
項1〜25の何れか一項に記載の方法。 - 前記修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合は各々、修飾ヌクレオシド間結合で
ある、請求項1〜26の何れか一項に記載の方法。 - 前記修飾ヌクレオシド間結合はホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項
23または24に記載の方法。 - 前記修飾オリゴヌクレオチドは構造5’−AECSATCSAGTCSTGAUSAA
GCSTAE−3’を有し、ここで後に下付き文字がないヌクレオシドはβ−D−デオキ
シリボヌクレオシドを示し;後に下付き文字「E」があるヌクレオシドは2’−MOEヌ
クレオシドを示し;後に下付き文字「S」があるヌクレオシドはS−cEtヌクレオシド
を示し、ヌクレオシド間結合は各々、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請
求項1〜28の何れか一項に記載の方法。 - 12〜25個連結したヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドであって、前記修
飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列はmiR−21と相補的である修飾オリゴヌクレオ
チドの、アルポート症候群の処置のための使用。
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