JP6257782B2 - Ｆｌｔ３変異陽性癌を処置するための医薬組成物、変異型ｆｌｔ３阻害剤およびそれらの応用 - Google Patents

Ｆｌｔ３変異陽性癌を処置するための医薬組成物、変異型ｆｌｔ３阻害剤およびそれらの応用 Download PDF

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Description

含窒素複素環化合物またはその塩を有効成分とする、Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）変異陽性癌を処置するための医薬組成物および変異型ＦＬＴ３阻害剤、ならびに、それらの応用に関する。
Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３（ＦＬＴ３）は、受容体型チロシンキナーゼのクラスIIIに属するタンパク質であり、Ｎ末細胞外ドメインに５つのｉｍｍｎｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ‐ｌｉｋｅ ｍｏｔｉｆ、Ｃ末に２つのｋｉｎａｓｅ ｄｏｍａｉｎを有する。ＦＬＴ３は、正常なＣＤ３４陽性ヒト骨髄前駆細胞および樹状祖細胞上に発現が認められ、これらの細胞の増殖・分化などに重要な役割を果たす（非特許文献１）。また、ＦＬＴ３のリガンド（ＦＬ）は、骨髄間質細胞およびＴ細胞に発現し、多数の造血系統の細胞発生に影響を与えると共に、他の成長因子との相互作用により幹細胞、前駆細胞、樹状細胞およびナチュラルキラー細胞の増殖を刺激するサイトカインの一つである。
ＦＬＴ３は、ＦＬが結合すると二量体化し、自己リン酸化により活性化される。その結果、ＰＩ３およびＲＡＳシグナル伝達経路のＡＫＴおよびＥＲＫのリン酸化が惹起される。ＦＬＴ３は、造血細胞の増殖・分化に重要な役割を果たす。
正常な骨髄では、ＦＬＴ３の発現は早期前駆細胞に制限されるが、血液癌では、ＦＬＴ３が高濃度で発現するか或いはＦＬＴ３が遺伝子変異を起こすことにより、上記シグナル伝達経路の活性化を介して癌の増殖悪性化に寄与する。血液癌としては、例えば、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）、急性未分化白血病（ＡＵＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＭＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、成人Ｔ細胞ＡＬＬ、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）および骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）などが含まれる。
血液癌のうちＡＭＬについては、いくつかの既存療法により、ある程度の奏功がみられるものの再発・抵抗性を有することが多く、５年生存率が２４％程度（米国）と未だ難治性の癌である（非特許文献２）。その再発・抵抗性の原因の一つに、ＡＭＬ細胞の遺伝子変異があり、中でもＦＬＴ３遺伝子の変異は最も頻繁に確認されている。ＦＬＴ３遺伝子変異には、傍膜貫通領域の一部が重複して繰り返されるＩｎｔｅｒｎａｌ Ｔａｎｄｅｍ Ｄｕｐｌｉｃａｔｉｏｎ（ＩＴＤ）変異およびＴｙｒｏｓｉｎｅ Ｋｉｎａｓｅ Ｄｏｍａｉｎ（ＴＫＤ）に位置するアミノ酸残基が置換、欠失または付加により異なるアミノ酸残基に変わるＴＫＤ変異があり（非特許文献２）、リガンド非存在下でもＦＬＴ３が恒常的に活性化され、癌細胞の増殖を亢進させることが知られている。
ＩＴＤ変異は、ＡＭＬにおける予後不良因子として知られ、既存化学療法による予後の改善が試みられているものの困難な状況である。そのような状況から、ＮＣＣＮのＡＭＬ治療ガイドラインでは治療選択肢の一つとして、対象となりうる臨床試験への参加も考慮されるべきと明記されている。また、ＷＨＯ分類第４版においても、ＡＭＬの診断・治療上スクリーニングすべき遺伝子変異のひとつとして記載されている。
ＴＫＤ変異は、ＡＭＬにおいて特にＡｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｌｏｏｐに位置する８３５番のアスパラギン酸残基（Ｄ８３５）およびその周囲のアミノ酸残基が変異または欠失するものとして知られており、予後不良因子であるとの一部報告もある。さらに、ＴＫＤ変異には他のチロシンキナーゼにおいて薬剤耐性機構の一つとして知られるゲートキーパー領域に位置する６９１番のフェニルアラニン残基（Ｆ６９１）およびその周囲のアミノ酸残基が変異するものも認められている。ＦＬＴ３を標的とした薬剤によるＡＭＬの治療を目的とした臨床試験において、ＩＴＤ変異とＴＫＤ変異を併せ持つＡＭＬの薬剤耐性化がすでに知られている。
ＦＬＴ３の活性の抑制と併せて、変異型ＦＬＴ３の活性を抑制することがＡＭＬの治療および予後の改善に重要と考えられ、これらを抑制する薬剤の開発が行われている。例えば、ＡＣ２２０（Ａｍｂｉｔ社）は、III型チロシンキナーゼ（ＦＬＴ３、ｃ−ＫＩＴ、ＦＭＳおよびＰＤＧＦＲ）を選択的に阻害する化合物であり、ＡＭＬを対象にした開発が行われている（特許文献１）。しかしながら、変異型ＦＬＴ３の活性を十分に抑制する薬剤については報告されていない。
一方、ＦＬＴ３阻害剤としては、特許文献２に記載の含窒素複素環化合物またはその塩が知られている。
国際公開２００７／１０９１２０号 国際公開２０１３／１５７５４０号
Brown Pら、European Journal of Cancer、第40巻、707-721頁、2004年 American Cancer Society、Cancer Facts and Figures、9-24頁、2012年
本発明は、ＦＬＴ３変異陽性癌を処置するための医薬組成物、変異型ＦＬＴ３阻害剤、およびそれらの応用を提供することを課題とする。
特定の含窒素複素環化合物またはその塩であって、変異型ＦＬＴ３、特にＴＫＤ変異がみられる場合に有効な化合物は知られていない。本発明は、以下を提供する。
［１］一般式［１］で表される化合物またはその塩を含む、ＦＬＴ３変異陽性癌を処置するための、医薬組成物；
Figure 0006257782
式中、
Ｒ1は、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
Ｒ2は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示し、
Ｒ3は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示し、
ｍは、１〜３の整数を示し、
ｍ個のＲ4は、同一または異なって、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基を示し、ｍ個から選ばれる一つのＲ4は、Ｒ3と一緒になって、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基を形成してもよく、
ｍ個のＲ5は、同一または異なって、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示し、
Ｘ1は、酸素原子、Ｎ（Ｒ20）（式中、Ｒ20は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示す。）、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ20）（式中、Ｒ20は、前記と同様の意味を有する。）または結合手を示し、
Ｘ2は、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基、置換されてもよい２価の脂環式炭化水素基または置換されてもよい２価の芳香族炭化水素基を示し、
ｎは、０〜３の整数を示し、
ｎ個のＲ6は、同一または異なって、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
ｎ個のＲ7は、同一または異なって、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
Ｘ3は、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基、置換されてもよいＣ2-6アルケニレン基、置換されてもよいＣ2-6アルキニレン基またはＮ（Ｒ20）−Ｃ（＝Ｏ）（式中、Ｒ20は、前記と同様の意味を有する。）を示し、
Ｒ8は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示し、
Ｒ9は、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基、置換されてもよいＣ2-6アルキニル基または置換されてもよいＣ3-8シクロアルキル基を示し、
Ｒ8およびＲ9は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、置換されてもよい環状アミノ基を形成してもよく、
Ｒ10は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示し、
Ｒ11は、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基、置換されてもよいＣ2-6アルキニル基、置換されてもよいＣ3-8シクロアルキル基、置換されてもよいアリール基または置換されてもよい複素環式基を示す。
［２］Ｒ10が、水素原子である、［１］に記載の医薬組成物。
［３］Ｘ1が、Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ20）（式中、Ｒ20は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示す。）である、［１］または［２］に記載の医薬組成物。
［４］Ｘ3が、置換されてもよいＣ2-6アルキニレン基である、［１］〜［３］のいずれか一に記載の医薬組成物。
［５］ＦＬＴ３変異が、ＴＫＤ変異を含む、［１］〜［４］のいずれか一に記載の医薬組成物。
［６］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第８２３番〜第８６１番の領域における１または複数個のアミノ酸の変異である、［５］に記載の医薬組成物。
［７］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における、第８３５番、第８３６番および第８４２番からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸の変異である、［６］に記載の医薬組成物。
［８］ＴＫＤ変異が、下記からなる群より選択される少なくとも一つである、［７］に記載の医薬組成物：
ａ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８３５番のアスパラギン酸からのバリン、チロシン、ヒスチジン、グルタミン酸またはアスパラギンへの置換；
ｂ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８３６番のイソロイシンからのロイシン−アスパラギン酸への置換；
ｃ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８４２番のチロシンからのシステインまたはヒスチジンへの置換。
［９］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第６０４番〜第８２２番の領域における１または複数個のアミノ酸の変異である、［５］に記載の医薬組成物。
［１０］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第６２１番、第６２７番、第６７６番、第６９１番および第６９７番からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸の変異である、［９］に記載の医薬組成物。
［１１］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第６９１番のアミノ酸の変異である、［１０］に記載の医薬組成物。
［１２］配列番号：１のアミノ酸配列における第６９１番のアミノ酸の変異が、フェニルアラニンからロイシンへの置換である、［１１］に記載の医薬組成物。
［１３］ＦＬＴ３変異が、さらに、ＩＴＤ変異を含む、［５］〜［１２］のいずれか一に記載の医薬組成物。
［１４］［１］〜［４］のいずれか一に定義された化合物またはその塩を含む、変異型ＦＬＴ３阻害剤。
［１５］ＴＫＤ変異を含む変異型ＦＬＴ３を阻害する、［１４］に記載の剤。
［１６］さらに、ＩＴＤ変異を含む、変異型ＦＬＴ３を阻害する、［１５］に記載の剤。
［１７］さらに、野生型ＦＬＴ３を阻害する、［１４］〜［１６］のいずれか一に記載の剤。
［１８］抗癌剤である、［１４］〜［１７］のいずれか一に記載の剤。
［１９］ＦＬＴ３変異の有無を検出する工程を含む、対象における［１］〜［４］のいずれか一に定義された化合物またはその塩を含む医薬組成物の投与による処置効果を予測する方法。
［２０］ＦＬＴ３変異の有無を検出する工程を含む、［１］〜［４］のいずれか一に定義された化合物またはその塩を含む医薬組成物を適応する対象の選択方法。
［２１］ＦＬＴ３変異の有無を検出する工程を含む、［１］〜［４］のいずれか一に定義された化合物またはその塩を含む医薬組成物を対象に投与するか否かを決定する方法。
［２２］ＦＬＴ３変異が、ＴＫＤ変異を含む、［１９］〜［２１］のいずれか一に記載の方法。
［２３］ＦＬＴ３変異が、さらに、ＩＴＤ変異を含む、［１９］〜［２２］のいずれか一に記載の方法。
［１ａ］［１］〜［４］のいずれか一に定義された化合物またはその塩を対象に投与する工程を含む、対象におけるＦＬＴ３変異陽性癌を処置するための方法。
［２ａ］ＦＬＴ３変異が、ＴＫＤ変異を含む、［１ａ］に記載の方法。
［３ａ］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第８２３番〜第８６１番の領域における１または複数個のアミノ酸の変異である、［２ａ］に記載の方法。
［４ａ］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における、第８３５番、第８３６番および第８４２番からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸の変異である、［３ａ］に記載の方法。
［５ａ］ＴＫＤ変異が、下記からなる群より選択される少なくとも一つである、［４ａ］に記載の方法。
ａ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８３５番のアスパラギン酸からのバリン、チロシン、ヒスチジン、グルタミン酸またはアスパラギンへの置換；
ｂ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８３６番のイソロイシンからのロイシン−アスパラギン酸への置換；
ｃ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８４２番のチロシンからのシステインまたはヒスチジンへの置換。
［６ａ］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第６０４番〜第８２２番の領域における１または複数個のアミノ酸の変異である、［２ａ］に記載の方法。
［７ａ］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第６２１番、第６２７番、第６７６番、第６９１番および第６９７番からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸の変異である、［６ａ］に記載の方法。
［８ａ］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第６９１番のアミノ酸の変異である、［７ａ］に記載の方法。
［９ａ］配列番号：１のアミノ酸配列における第６９１番のアミノ酸の変異が、フェニルアラニンからロイシンへの置換である、［８ａ］に記載の方法。
［１０ａ］ＦＬＴ３変異が、さらに、ＩＴＤ変異を含む、［１ａ］〜［８ａ］のいずれか一に記載の方法。
［１ｂ］ＦＬＴ３変異陽性癌を処置するための方法において使用するための、［１］〜［４］のいずれか一に定義された化合物またはその塩。
［２ｂ］ＦＬＴ３変異が、ＴＫＤ変異を含む、［１ｂ］に記載の化合物またはその塩。
［３ｂ］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第８２３番〜第８６１番の領域における１または複数個のアミノ酸の変異である、［２ｂ］に記載の化合物またはその塩。
［４ｂ］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における、第８３５番、第８３６番および第８４２番からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸の変異である、［３ｂ］に記載の化合物またはその塩。
［５ｂ］ＴＫＤ変異が、下記からなる群より選択される少なくとも一つである、［４ｂ］に記載の化合物またはその塩：
ａ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８３５番のアスパラギン酸からのバリン、チロシン、ヒスチジン、グルタミン酸またはアスパラギンへの置換；
ｂ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８３６番のイソロイシンからのロイシン−アスパラギン酸への置換；
ｃ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８４２番のチロシンからのシステインまたはヒスチジンへの置換。
［６ｂ］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第６０４番〜第８２２番の領域における１または複数個のアミノ酸の変異である、［２ｂ］一に記載の化合物またはその塩。
［７ｂ］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第６２１番、第６２７番、第６７６番、第６９１番および第６９７番からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸の変異である、［６ｂ］に記載の化合物またはその塩。
［８ｂ］ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第６９１番のアミノ酸の変異である、［７ｂ］に記載の化合物またはその塩。
［９ｂ］配列番号：１のアミノ酸配列における第６９１番のアミノ酸の変異が、フェニルアラニンからロイシンへの置換である、［８ｂ］に記載の化合物またはその塩。
［１０ｂ］ＦＬＴ３変異が、さらに、ＩＴＤ変異を含む、［１ｂ］〜［８ｂ］のいずれか一に記載の化合物またはその塩。
一般式［１］で表される化合物またはその塩は、ＦＬＴ３変異陽性の細胞株およびＦＬＴ３変異を発現する細胞株の増殖およびリン酸化阻害活性を有する。したがって、ＦＬＴ３変異陽性癌を処置するための医薬組成物または変異型ＦＬＴ３阻害剤として用いることができる。
配列番号：１のアミノ酸配列
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において、特にことわらない限り、各用語は、次の意味を有する。
処置は、予防または治療などを意味する。
予防は、発症の阻害、発症リスクの低減または発症の遅延などを意味する。
治療は、対象となる疾患または状態の改善または進行の抑制（維持または遅延）などを意味する。
対象は、ヒトを含む哺乳類などを意味する。
範囲を「ａ〜ｂ」で表す場合、範囲には両端の値ａおよびｂが含まれる。
ハロゲン原子とは、フッ素原子、塩素原子、臭素原子またはヨウ素原子を意味する。
Ｃ1-6アルキル基とは、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチルおよびヘキシル基などの直鎖状または分枝鎖状のＣ1-6アルキル基を意味する。
Ｃ1-3アルキル基とは、メチル、エチル、プロピルまたはイソプロピル基を意味する。
Ｃ2-6アルケニル基とは、ビニル、アリル、プロペニル、イソプロペニル、ブテニル、イソブテニル、１，３−ブタジエニル、ペンテニルおよびヘキセニル基などの直鎖状または分枝鎖状のＣ2-6アルケニル基を意味する。
Ｃ2-6アルキニル基とは、エチニル、プロピニル、ブチニル、ペンチニルおよびヘキシニル基などの直鎖状または分枝鎖状のＣ2-6アルキニル基を意味する。
Ｃ3-8シクロアルキル基とは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシル基などのＣ3-8シクロアルキル基を意味する。
アリール基とは、フェニルまたはナフチル基を意味する。
アルＣ1-6アルキル基とは、ベンジル、ジフェニルメチル、トリチル、フェネチルおよびナフチルメチル基などのアルＣ1-6アルキル基を意味する。
Ｃ1-6アルコキシ基とは、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、シクロプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、シクロブトキシ、ペンチルオキシおよびヘキシルオキシ基などの直鎖状、環状または分枝鎖状のＣ1-6アルキルオキシ基を意味する。
Ｃ1-3アルコキシ基とは、メトキシ、エトキシ、プロポキシまたはイソプロポキシ基を意味する。
Ｃ1-6アルコキシＣ1-6アルキル基とは、メトキシメチルおよび１−エトキシエチル基などのＣ1-6アルキルオキシＣ1-6アルキル基を意味する。
アルＣ1-6アルコキシＣ1-6アルキル基とは、ベンジルオキシメチルおよびフェネチルオキシメチル基などのアルＣ1-6アルキルオキシＣ1-6アルキル基を意味する。
Ｃ2-6アルカノイル基とは、アセチル、プロピオニル、バレリル、イソバレリルおよびピバロイル基などの直鎖状または分枝鎖状のＣ2-6アルカノイル基を意味する。
アロイル基とは、ベンゾイルまたはナフトイル基を意味する。
複素環式カルボニル基とは、ニコチノイル、テノイル、ピロリジノカルボニルまたはフロイル基を意味する。
（α−置換）アミノアセチル基とは、アミノ酸（グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、システイン、メチオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、アルギニン、リジン、ヒスチジン、ヒドロキシリジン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、プロリンおよびヒドロキシプロリンなどのアミノ酸が挙げられる。）から誘導されるＮ末端が保護されてもよい（α−置換）アミノアセチル基を意味する。
アシル基とは、ホルミル基、スクシニル基、グルタリル基、マレオイル基、フタロイル基、Ｃ2-6アルカノイル基、アロイル基、複素環式カルボニル基または（α−置換）アミノアセチル基を意味する。
アシルＣ1-6アルキル基とは、アセチルメチル、ベンゾイルメチルおよび１−ベンゾイルエチル基などのアシルＣ1-6アルキル基を意味する。
アシルオキシＣ1-6アルキル基とは、アセトキシメチル、プロピオニルオキシメチル、ピバロイルオキシメチル、ベンゾイルオキシメチルおよび１−（ベンゾイルオキシ）エチル基などのアシルオキシＣ1-6アルキル基を意味する。
Ｃ1-6アルコキシカルボニル基とは、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルおよび１，１−ジメチルプロポキシカルボニル基などの直鎖状または分枝鎖状のＣ1-6アルキルオキシカルボニル基を意味する。
アルＣ1-6アルコキシカルボニル基とは、ベンジルオキシカルボニルおよびフェネチルオキシカルボニル基などのアルＣ1-6アルキルオキシカルボニル基を意味する。
アリールオキシカルボニル基とは、フェニルオキシカルボニルまたはナフチルオキシカルボニル基を意味する。
Ｃ1-6アルキルアミノ基とは、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、イソプロピルアミノ、ブチルアミノ、ｓｅｃ−ブチルアミノ、ｔｅｒｔ−ブチルアミノ、ペンチルアミノおよびヘキシルアミノ基などの直鎖状または分枝鎖状のＣ1-6アルキルアミノ基を意味する。
ジ（Ｃ1-6アルキル）アミノ基とは、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ジイソプロピルアミノ、ジブチルアミノ、ジ（ｔｅｒｔ−ブチル）アミノ、ジペンチルアミノ、ジヘキシルアミノ、（エチル）（メチル）アミノおよび（メチル）（プロピル）アミノ基などの直鎖状または分枝鎖状のジ（Ｃ1-6アルキル）アミノ基を意味する。
ジ（Ｃ1-3アルキル）アミノ基とは、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ、ジイソプロピルアミノ、（エチル）（メチル）アミノおよび（メチル）（プロピル）アミノ基などの直鎖状または分枝鎖状のジ（Ｃ1-3アルキル）アミノ基を意味する。
Ｃ1-6アルキルスルホニル基とは、メチルスルホニル、エチルスルホニルおよびプロピルスルホニル基などのＣ1-6アルキルスルホニル基を意味する。
アリールスルホニル基とは、ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルまたはナフタレンスルホニル基を意味する。
Ｃ1-6アルキルスルホニルオキシ基とは、メチルスルホニルオキシおよびエチルスルホニルオキシ基などのＣ1-6アルキルスルホニルオキシ基を意味する。
アリールスルホニルオキシ基とは、ベンゼンスルホニルオキシまたはｐ−トルエンスルホニルオキシ基を意味する。
環状アミノ基とは、アゼチジニル、ピロリジニル、ピロリニル、ピロリル、ピペリジニル、テトラヒドロピリジル、ホモピペリジニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリル、ピペラジニル、ホモピペラジニル、トリアゾリル、テトラゾリル、モルホリニル、チオモルホリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニルおよびキヌクリジニルなどの該環を形成する異項原子として一つ以上の窒素原子を含み、更に、一つ以上の酸素原子または硫黄原子を含んでもよい環状アミノ基を意味する。
単環の含窒素複素環式基とは、アゼチジニル、ピロリジニル、ピロリニル、ピロリル、ピペリジル、テトラヒドロピリジル、ピリジル、ホモピペリジニル、オクタヒドロアゾシニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾリル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピラゾリル、ピペラジニル、ピラジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ホモピペラジニル、トリアゾリルおよびテトラゾリル基などの該環を形成する異項原子として窒素原子のみを含む単環の含窒素複素環式基を意味する。
単環の含酸素複素環式基とは、テトラヒドロフラニル、フラニル、テトラヒドロピラニルまたはピラニル基を意味する。
単環の含硫黄複素環式基とは、チエニル基を意味する。
単環の含窒素・酸素複素環式基とは、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリルおよびモルホリニル基などの該環を形成する異項原子として窒素原子および酸素原子のみを含む単環の含窒素・酸素複素環式基を意味する。
単環の含窒素・硫黄複素環式基とは、チアゾリル、イソチアゾリル、チアジアゾリル、チオモルホリニル、１−オキシドチオモルホリニルおよび１，１−ジオキシドチオモルホリニル基などの該環を形成する異項原子として窒素原子および硫黄原子のみを含む単環の含窒素・硫黄複素環式基を意味する。
単環の複素環式基とは、単環の含窒素複素環式基、単環の含酸素複素環式基、単環の含硫黄複素環式基、単環の含窒素・酸素複素環式基または単環の含窒素・硫黄複素環式基を意味する。
二環式の含窒素複素環式基とは、インドリニル、インドリル、イソインドリニル、イソインドリル、ベンズイミダゾリル、インダゾリル、ベンゾトリアゾリル、ピラゾロピリジニル、キノリル、テトラヒドロキノリニル、キノリル、テトラヒドロイソキノリニル、イソキノリニル、キノリジニル、シンノリニル、フタラジニル、キナゾリニル、ジヒドロキノキサリニル、キノキサリニル、ナフチリジニル、プリニル、プテリジニルおよびキヌクリジニル基などの該環を形成する異項原子として窒素原子のみを含む二環式の含窒素複素環式基を意味する。
二環式の含酸素複素環式基とは、２，３−ジヒドロベンゾフラニル、ベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、クロマニル、クロメニル、イソクロマニル、１，３−ベンゾジオキソリル、１，３−ベンゾジオキサニルおよび１，４−ベンゾジオキサニル基などの該環を形成する異項原子として酸素原子のみを含む二環式の含酸素複素環式基を意味する。
二環式の含硫黄複素環式基とは、２，３−ジヒドロベンゾチエニルおよびベンゾチエニル基などの該環を形成する異項原子として硫黄原子のみを含む二環式の含硫黄複素環式基を意味する。
二環式の含窒素・酸素複素環式基とは、ベンゾオキサゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾオキサジアゾリル、ベンゾモルホリニル、ジヒドロピラノピリジル、ジヒドロジオキシノピリジルおよびジヒドロピリドオキサジニル基などの該環を形成する異項原子として窒素原子および酸素原子のみを含む二環式の含窒素・酸素複素環式基を意味する。
二環式の含窒素・硫黄複素環式基とは、ベンゾチアゾリル、ベンゾイソチアゾリルおよびベンゾチアジアゾリル基などの該環を形成する異項原子として窒素原子および硫黄原子を含む二環式の含窒素・硫黄複素環式基を意味する。
二環式の複素環式基とは、二環式の含窒素複素環式基、二環式の含酸素複素環式基、二環式の含硫黄複素環式基、二環式の含窒素・酸素複素環式基または二環式の含窒素・硫黄複素環式基を意味する。
複素環式基とは、単環の複素環式基または二環式の複素環式基を意味する。
Ｃ1-6アルキレン基とは、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレンおよびヘキシレン基などの直鎖状または分枝鎖状のＣ1-6アルキレン基を意味する。
Ｃ1-3アルキレン基とは、メチレン、エチレンまたはプロピレン基を意味する。
Ｃ2-6アルケニレン基とは、ビニレン、プロペニレン、ブテニレンおよびペンテニレン基などの直鎖状または分枝鎖状のＣ2-6アルケニレン基を意味する。
Ｃ2-6アルキニレン基とは、エチニレン、プロピニレン、ブチニレンおよびペンチニレン基などの直鎖状または分枝鎖状のＣ2-6アルキニレン基を意味する。
２価の脂環式炭化水素基とは、１，２−シクロブチレン、１，３−シクロブチレン、１，２−シクロペンチレン、１，３−シクロペンチレン、１，２−シクロヘキシレン、１，３−シクロヘキシレン、１，４−シクロヘキシレン、ビシクロ（３．２．１）オクチレン、ビシクロ（２．２．０）ヘキシレンおよびビシクロ（５．２．０）ノニレン基などの脂環式炭化水素環から２個の水素原子を除去して形成される基を意味する。
２価の芳香族炭化水素基とは、フェニレン、インデニレン、ナフチレン、フルオレニレン、フェナントレニレン、アントリレンおよびピレニレン基などの芳香族炭化水素環から２個の水素原子を除去して形成される基を意味する。
シリル基とは、トリメチルシリル、トリエチルシリルまたはトリブチルシリル基を意味する。
アミノ保護基としては、通常のアミノ基の保護基として使用し得るすべての基を含み、例えば、Ｔ．Ｗ．グリーン（T.W.Greene）ら、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（Protective Groups in Organic Synthesis）第4版、第696〜926頁、2007年、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社（John Wiley & Sons,INC.）に記載されている基が挙げられる。具体的には、アルＣ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシＣ1-6アルキル基、アシル基、Ｃ1-6アルコキシカルボニル基、アルＣ1-6アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、Ｃ1-6アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基またはシリル基が挙げられる。
イミノ保護基としては、通常のイミノ基の保護基として使用し得るすべての基を含み、例えば、Ｔ．Ｗ．グリーン（T.W.Greene）ら、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（Protective Groups in Organic Synthesis）第4版、第696〜868頁、2007年、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社（John Wiley & Sons,INC.）に記載されている基が挙げられる。具体的には、アルＣ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシＣ1-6アルキル基、アシル基、Ｃ1-6アルコキシカルボニル基、アルＣ1-6アルコキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、Ｃ1-6アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基またはシリル基が挙げられる。
ヒドロキシル保護基としては、通常のヒドロキシル基の保護基として使用し得るすべての基を含み、例えば、Ｔ．Ｗ．グリーン（T.W.Greene）ら、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（Protective Groups in Organic Synthesis）第4版、第16〜299頁、2007年、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社（JohnWiley & Sons,INC.）に記載されている基が挙げられる。具体的には、例えば、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ2-6アルケニル基、アルＣ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシＣ1-6アルキル基、アルＣ1-6アルコキシＣ1-6アルキル基、アシル基、Ｃ1-6アルコキシカルボニル基、アルＣ1-6アルコキシカルボニル基、Ｃ1-6アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基、シリル基、テトラヒドロフラニル基またはテトラヒドロピラニル基が挙げられる。
カルボキシル保護基としては、通常のカルボキシル基の保護基として使用し得るすべての基を含み、例えば、Ｔ．Ｗ．グリーン（T.W.Greene）ら、プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス（Protective Groups in Organic Synthesis）第4版、第533〜643頁、2007年、ジョン・ワイリー・アンド・サンズ社（John Wiley & Sons,INC.）に記載されている基が挙げられる。具体的には、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ2-6アルケニル基、アリール基、アルＣ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシＣ1-6アルキル基、アルＣ1-6アルコキシＣ1-6アルキル基、アシルＣ1-6アルキル基、アシルオキシＣ1-6アルキル基またはシリル基が挙げられる。
〔一般式［１］の化合物およびその塩〕
本発明における含窒素複素環化合物は、一般式［１］
Figure 0006257782
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、Ｒ11、Ｘ1、Ｘ2、Ｘ3、ｍおよびｎは、上記と同様の意味を有する。）で表される化合物である。
Ｒ1は、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基であり、好ましくは、水素原子である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｒ1のＣ1-6アルキル基は、ハロゲン原子、シアノ基、保護されていてもよいアミノ基および保護されてもよいヒドロキシル基から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい。
Ｒ1の、置換されてもよいＣ1-6アルキル基のＣ1-6アルキル基は、好ましくは、Ｃ1-3アルキル基である。
Ｒ2は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基であり、好ましくは、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基であり、より好ましくは、置換されてもよいＣ1-6アルキル基である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｒ2のＣ1-6アルキル基、Ｃ2-6アルケニル基またはＣ2-6アルキニル基は、置換基群Ａから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいＣ1-6アルキルアミノ基、置換基群Ａから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいジ（Ｃ1-6アルキル）アミノ基および置換基群Ａから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい複素環式基から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい。
置換基群Ａ：ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基、保護されてもよいヒドロキシル基、置換基群Ｂから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換基群Ｂから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいＣ3-8シクロアルキル基、置換基群Ｂから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいアリール基、置換基群Ｂから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいＣ1-6アルコキシ基、置換基群Ｂから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいＣ1-6アルキルアミノ基、置換基群Ｂから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいジ（Ｃ1-6アルキル）アミノ基、置換基群Ｂから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい複素環式基、オキソ基。
置換基群Ｂ：ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基、保護されてもよいヒドロキシル基、ハロゲン原子またはヒドロキシル基で置換されてもよいＣ1-6アルキル基、ハロゲン原子またはヒドロキシル基で置換されてもよいＣ1-6アルコキシ基、アリール基、複素環式基、オキソ基。
Ｒ2の、置換されてもよいＣ1-6アルキル基は、好ましくは、ジ（Ｃ1-6アルキル）アミノ基で置換されているＣ1-6アルキル基であり、より好ましくは、ジ（Ｃ1-3アルキル）アミノ基で置換されているＣ1-3アルキル基であり、さらに好ましくは、ジメチルアミノメチル基である。
Ｒ2の、置換されてもよいＣ1-6アルキル基のＣ1-6アルキル基は、好ましくは、Ｃ1-3アルキル基であり、より好ましくは、メチル基である。
Ｒ2の、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基のそれぞれの置換基は、好ましくは、置換基群Ａ−１から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいジ（Ｃ1-6アルキル）アミノ基または置換基群Ａ−１から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい複素環式基であり、より好ましくは、置換基群Ａ−１から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいジ（Ｃ1-6アルキル）アミノ基である。
ここで、置換基群Ａ−１から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいジ（Ｃ1-6アルキル）アミノ基のジ（Ｃ1-6アルキル）アミノ基は、好ましくは、ジ（Ｃ1-3アルキル）アミノ基であり、より好ましくは、ジメチルアミノ基である。
置換基群Ａ−１から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい複素環式基の複素環式基は、好ましくは、アゼチジニル基、ピペラジニル基またはモルホリニル基である。
置換基群Ａ−１：ハロゲン原子、保護されてもよいヒドロキシル基、ヒドロキシル基で置換されてもよいＣ1-6アルキル基。
Ｒ3は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基であり、好ましくは、水素原子またはＣ1-6アルキル基であり、より好ましくは、Ｃ1-6アルキル基である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｒ3のＣ1-6アルキル基、Ｃ2-6アルケニル基またはＣ2-6アルキニル基は、ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基、保護されてもよいヒドロキシル基、置換基群Ａから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいアリール基および置換基群Ａから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい複素環式基から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい。
Ｒ3の、置換されてもよいＣ1-6アルキル基のＣ1-6アルキル基は、好ましくは、Ｃ1-3アルキル基であり、より好ましくは、メチル基である。
ｍは、１〜３の整数であり、好ましくは、１または２の整数であり、より好ましくは、１の整数である。
ｍ個のＲ4は、同一または異なって、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基であり、好ましくは、水素原子である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｒ4のＣ1-6アルキル基は、ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基および保護されてもよいヒドロキシル基から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい。
ｍ個から選ばれる一つのＲ4は、Ｒ3と一緒になって、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基を形成してもよく、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基のＣ1-6アルキレン基は、好ましくは、Ｃ1-3アルキレンであり、より好ましくは、プロピレン基である。置換されてもよいＣ1-6アルキレン基の置換基は、好ましくは、ハロゲン原子、ヒドロキシル基またはＣ1-3アルコキシ基であり、より好ましくは、フッ素原子、ヒドロキシル基またはメトキシ基であり、さらに好ましくは、フッ素原子またはメトキシ基である。
ｍ個のＲ5は、同一または異なって、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基であり、好ましくは、置換されてもよいＣ1-6アルキル基である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｒ5のＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基は、ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基および保護されてもよいヒドロキシル基から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい。
Ｒ5の、置換されてもよいＣ1-6アルキル基のＣ1-6アルキル基は、好ましくは、Ｃ1-3アルキル基であり、より好ましくは、メチル基である。
ｎは、０〜３の整数であり、好ましくは、０または１の整数であり、より好ましくは、０の整数である。
ｎ個のＲ6は、同一または異なって、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基であり、好ましくは、水素原子またはＣ1-6アルキル基であり、より好ましくは、水素原子である。
ｎ個のＲ7は、同一または異なって、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基であり、好ましくは、水素原子またはＣ1-6アルキル基であり、より好ましくは、水素原子である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｒ6およびＲ7のＣ1-6アルキル基は、ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基または保護されてもよいヒドロキシル基で置換されてもよい。
Ｒ8は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基であり、好ましくは、水素原子である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｒ6のＣ1-6アルキル基、Ｃ2-6アルケニル基またはＣ2-6アルキニル基は、ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基および保護されてもよいヒドロキシル基から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい。
Ｒ9は、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基または置換されてもよいＣ3-8シクロアルキル基であり、好ましくは、置換されてもよいＣ1-6アルキル基または置換されてもよいＣ3-8シクロアルキル基であり、より好ましくは、置換されてもよいＣ1-6アルキル基である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｒ9のＣ1-6アルキル基、Ｃ2-6アルケニル基、Ｃ2-6アルキニル基またはＣ3-8シクロアルキル基は、ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基、保護されてもよいヒドロキシル基および置換基群Ａから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいＣ1-6アルコキシ基から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい。
Ｒ9の、置換されてもよいＣ1-6アルキル基は、好ましくは、置換基を有しないＣ1-6アルキル基である。
Ｒ9の、置換されてもよいＣ1-6アルキル基のＣ1-6アルキル基は、好ましくは、Ｃ1-3アルキル基である。
Ｒ9の、置換されてもよいＣ1-6アルキル基の置換基は、好ましくは、ハロゲン原子またはＣ1-3アルコキシ基であり、より好ましくは、メトキシ基である。
Ｒ8およびＲ9は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、置換されてもよい環状アミノ基を形成してもよく、置換されてもよい環状アミノ基の環状アミノ基は、好ましくは、モルホリニル基である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｒ8およびＲ9が、それらが結合する窒素原子と一緒になって形成する環状アミノ基は、ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基、保護されてもよいヒドロキシル基およびオキソ基から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい。
Ｒ10は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基であり、好ましくは、水素原子である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｒ10のＣ1-6アルキル基、Ｃ2-6アルケニル基またはＣ2-6アルキニル基は、ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基、保護されてもよいヒドロキシル基および置換基群Ａから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいＣ1-6アルコキシ基から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい。
Ｒ11は、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基、置換されてもよいＣ2-6アルキニル基、置換されてもよいＣ3-8シクロアルキル基、置換されてもよいアリール基または置換されてもよい複素環式基であり、好ましくは、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいアリール基または置換されてもよい複素環式基であり、より好ましくは、置換されてもよいアリール基または置換されてもよい複素環式基である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｒ11のＣ1-6アルキル基、Ｃ2-6アルケニル基、Ｃ2-6アルキニル基、Ｃ3-8シクロアルキル基、アリール基または複素環式基は、ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基、保護されてもよいヒドロキシル基および置換基群Ａから選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいＣ1-6アルコキシ基から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい。
Ｒ11の、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ3-8シクロアルキル基、置換されてもよいアリール基または置換されてもよい複素環式基のそれぞれの置換基は、好ましくは、置換基群Ａ−２から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよいＣ1-6アルコキシ基である。
置換基群Ａ−２：ハロゲン原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ3-8シクロアルキル基、Ｃ1-6アルコキシ基、複素環式基。
Ｒ11の、置換されてもよいＣ1-6アルキル基は、好ましくは、置換されているＣ1-6アルキル基であり、より好ましくは、置換されているＣ1-3アルキル基、更に好ましくは、置換されているエチル基である。
Ｒ11が、置換されているＣ1-6アルキル基である場合、Ｃ1-6アルキル基の置換基は、好ましくは、複素環式基であり、より好ましくは、ピリジル基、ピロリジニル基またはモルホリニル基である。
Ｒ11の、置換されてもよいアリール基は、好ましくは、置換されているアリール基であり、より好ましくは、置換されているフェニル基である。
Ｒ11が、置換されているフェニル基である場合、フェニル基の置換基は、好ましくは、ハロゲン原子、シアノ基またはカルバモイル基であり、より好ましくは、フッ素原子、シアノ基またはカルバモイル基である。
Ｒ11が、置換されているフェニル基である場合、フェニル基は、ｏ−位に置換基を有さず、ｍ−位またはｐ−位に置換基を有することが好ましく、ｐ−位のみに置換基を有することがより好ましい。
ｍ−位またはｐ−位の好ましい置換基は、上記の通りである。
Ｒ11の、置換されてもよい複素環式基は、好ましくは、置換されてもよいピリジル基、置換されてもよいインダゾリル基、置換されてもよいピラゾロピリジニル基または置換されてもよいイソキノリル基である。
Ｒ11が、置換されてもよいピリジル基である場合、好ましくは、下記式[Ｉ]
Figure 0006257782
 （式中、Ｒ12およびＲ13は、同一または異なって、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ基、Ｃ1-6アルキルアミノ基または複素環式基を示し、＊は結合位置を示す。）で表されるピリジル基である。
Ｒ12は、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ基、Ｃ1-6アルキルアミノ基または複素環式基であり、好ましくは、水素原子である。
Ｒ13は、水素原子、ハロゲン原子、Ｃ1-6アルキル基、Ｃ1-6アルコキシ基、Ｃ1-6アルキルアミノ基または複素環式基であり、好ましくは、ハロゲン原子またはＣ1-6アルコキシ基であり、より好ましくは、フッ素原子またはメトキシ基である。
Ｒ11が、置換されてもよいインダゾリル基である場合、好ましくは、下記式[ＩＩ]−（１）または[ＩＩ]−（２）
Figure 0006257782
 （式中、Ｒ14およびＲ16は、同一または異なって、水素原子またはＣ1-6アルキル基を示し、Ｒ15およびＲ17は、同一または異なって、水素原子またはＣ1-6アルコキシ基を示し、＊は結合位置を示す。）で表されるインダゾリル基である。
Ｒ14およびＲ16は、同一または異なって、水素原子またはＣ1-6アルキル基であり、好ましくは、水素原子である。
Ｒ14およびＲ16のＣ1-6アルキル基は、好ましくは、Ｃ1-3アルキル基であり、より好ましくは、メチル基である。
Ｒ15およびＲ17は、同一または異なって、水素原子またはＣ1-6アルコキシ基であり、好ましくは、水素原子またはメトキシ基である。
Ｒ15およびＲ17のＣ1-6アルコキシ基は、好ましくは、メトキシ基、エトキシ基またはプロポキシ基であり、より好ましくは、メトキシ基である。
Ｒ11が、置換されてもよいピラゾロピリジニル基である場合、好ましくは、下記式[ＩＩＩ]
Figure 0006257782
 （式中、Ｒ18は、水素原子またはＣ1-6アルコキシ基で置換されてもよいＣ1-6アルキル基を示し、Ｒ19は、水素原子、Ｃ1-6アルコキシ基で置換されてもよいＣ1-6アルキル基またはＣ1-6アルコキシ基を示し、＊は結合位置を示す。）で表されるピラゾロピリジニル基である。
Ｒ18は、水素原子またはＣ1-6アルコキシ基で置換されてもよいＣ1-6アルキル基であり、好ましくは、水素原子またはＣ1-3アルコキシ基で置換されてもよいＣ1-3アルキル基であり、より好ましくは、水素原子、メチル基、メトキシ基で置換されたエチル基であり、更に好ましくは、水素原子またはメチル基である。
Ｒ19は、水素原子、Ｃ1-6アルコキシ基で置換されてもよいＣ1-6アルキル基またはＣ1-6アルコキシ基であり、好ましくは、水素原子、Ｃ1-3アルキル基またはＣ1-3アルコキシ基であり、より好ましくは、水素原子、メチル基またはメトキシ基である。
Ｒ18およびＲ19の、Ｃ1-6アルコキシ基で置換されてもよいＣ1-6アルキル基のＣ1-6アルコキシ基は、好ましくは、メトキシ基である。
Ｒ18およびＲ19の、Ｃ1-6アルコキシ基で置換されてもよいＣ1-6アルキル基のＣ1-6アルキル基は、好ましくは、Ｃ1-3アルキル基であり、より好ましくは、メチル基である。
Ｒ11が、置換されてもよいイソキノリル基である場合、好ましくは、下記式[ＩＶ]
Figure 0006257782
 （式中、＊は結合位置を示す。）で表されるイソキノリル基である。
Ｘ1は、酸素原子、Ｎ（Ｒ20）（式中、Ｒ20は、前記と同様な意味を有する。）、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ20）（式中、Ｒ20は、前記と同様の意味を有する。）または結合手であり、好ましくは、Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ20）（式中、Ｒ20は、前記と同様の意味を有する。）である。
Ｒ20は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基であり、好ましくは、水素原子である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｒ20のＣ1-6アルキル基、Ｃ2-6アルケニル基またはＣ2-6アルキニル基は、ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基および保護されてもよいヒドロキシル基から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい。
Ｘ2は、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基、置換されてもよい２価の脂環式炭化水素基または置換されてもよい２価の芳香族炭化水素基であり、好ましくは、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基または置換されてもよい２価の脂環式炭化水素基である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｘ2のＣ1-6アルキレン基、２価の脂環式炭化水素基または２価の芳香族炭化水素基は、ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基および保護されてもよいヒドロキシル基から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい。
Ｘ2の、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基は、好ましくは、置換されていないＣ1-6アルキレン基である。
Ｘ2の、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基のＣ1-6アルキレン基は、好ましくは、メチレン基、エチレン基またはトリメチレン基であり、より好ましくは、トリメチレン基である。
Ｘ2の、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基の置換基は、好ましくは、Ｃ1-6アルキル基であり、より好ましくは、Ｃ1-3アルキル基であり、更に好ましくは、エチル基である。
Ｘ2の、置換されてもよい２価の脂環式炭化水素基は、好ましくは、置換されていない２価の脂環式炭化水素基である。
Ｘ2の、置換されてもよい２価の脂環式炭化水素基の２価の脂環式炭化水素基は、好ましくは、シクロブチレン基またはシクロヘキシレン基であり、より好ましくは、シクロブチレン基である。
Ｘ2が、シクロブチレン基である場合、好ましくは、下記式［２］
Figure 0006257782
 （式中、＊は結合位置を示す。）で表されるシクロブチレン基であり、より好ましくは、下記式［３］
Figure 0006257782
 （式中、＊は結合位置を示す。）で表されるシクロブチレン基である。
Ｘ2が、シクロヘキシレン基である場合、好ましくは、下記式［４］
Figure 0006257782
 （式中、＊は結合位置を示す。）で表されるシクロヘキシレン基である。
Ｘ2の、置換されてもよい２価の芳香族炭化水素基の２価の芳香族炭化水素基は、好ましくは、フェニレン基である。
Ｘ2が、フェニレン基である場合、好ましくは、下記式［５］
Figure 0006257782
 （式中、＊は結合位置である。）で表されるフェニレン基である。
Ｘ2の、置換されてもよい２価の芳香族炭化水素基の置換基は、好ましくは、ハロゲン原子またはＣ1-6アルキル基である。
置換基が、ハロゲン原子である場合、好ましくは、塩素原子である。
置換基が、Ｃ1-6アルキル基である場合、好ましくは、Ｃ1-3アルキル基であり、より好ましくは、メチル基である。
Ｘ3は、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基、置換されてもよいＣ2-6アルケニレン基、置換されてもよいＣ2-6アルキニレン基またはＮ（Ｒ20）−Ｃ（＝Ｏ）（式中、Ｒ20は、前記と同様の意味を有する。）であり、好ましくは、置換されてもよいＣ2-6アルキニレン基またはＮ（Ｒ20）−Ｃ（＝Ｏ）（式中、Ｒ20は、前記と同様の意味を有する。）であり、より好ましくは、置換されてもよいＣ2-6アルキニレン基である。
他の置換基がいずれの場合においても、Ｘ3のＣ1-6アルキレン基、Ｃ2-6アルケニレン基またはＣ2-6アルキニレン基は、ハロゲン原子、シアノ基、保護されてもよいアミノ基および保護されてもよいヒドロキシル基から選ばれる一つ以上の基で置換されてもよい。
Ｘ3の、置換されてもよいＣ2-6アルキニレン基のＣ2-6アルキニレン基は、好ましくは、エチニレン基である。
一般式［１］の化合物の塩としては、通常知られているアミノ基などの塩基性基、ヒドロキシル基およびカルボキシル基などの酸性基における塩を挙げることができる。
塩基性基における塩としては、例えば、塩酸、臭化水素酸、硝酸および硫酸などの鉱酸との塩；ギ酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、リンゴ酸、酒石酸、アスパラギン酸、トリクロロ酢酸およびトリフルオロ酢酸などの有機カルボン酸との塩；ならびにメタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸、メシチレンスルホン酸およびナフタレンスルホン酸などのスルホン酸との塩などが挙げられる。
酸性基における塩としては、例えば、ナトリウムおよびカリウムなどのアルカリ金属との塩；カルシウムおよびマグネシウムなどのアルカリ土類金属との塩；アンモニウム塩；ならびにトリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジエチルアミン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ−ベンジル−β−フェネチルアミン、１−エフェナミンおよびＮ，Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミンなどの含窒素有機塩基との塩などが挙げられる。
上記した塩の中で、好ましい塩としては、薬理学的に許容される塩が挙げられる。
塩は、無水物、水和物または溶媒和物であってもよい。
一般式［１］で表される化合物またはその塩は、公知の方法、例えば、前掲特許文献２に記載の方法に従って合成できる。
〔一般式［１］の化合物およびその塩の、新規医薬用途〕
一般式［１］の化合物およびその塩は、ＦＬＴ３変異陽性癌の処置のために有用である。
＜ＦＬＴ３＞
ＦＬＴ３は、配列番号：１のアミノ酸配列（UniProt accession number: P36888）からなるポリペプチド、または配列番号：１のアミノ酸配列からなるポリペプチドと実質的に同一のポリペプチドである。また、ＦＬＴ３は、受容体型チロシンキナーゼのクラスＩＩＩに属するタンパク質であり、ＰＩ３Ｋ−ＡＫＴシグナル経路およびＥＲＫ−ＭＡＰＫシグナル経路を活性化し、細胞増殖、生存および分化に影響を及ぼす。ＦＬＴ３は、Ｎ末端側細胞外領域の５つのｉｍｍｎｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ様領域、膜貫通領域、傍膜貫通領域、チロシンキナーゼ領域（ＴＫＤ）およびＣ末端領域からなる。
本発明者らの知見によれば、一般式［１］で表される化合物は、配列番号：１のアミノ酸配列の第６９５番目のシステインとの特異的共有結合を介して、ＦＬＴ３と結合する。
ＴＫＤは、配列番号：１のアミノ酸配列の第６０４番〜第９５８番のアミノ酸配列からなるポリペプチド、または配列番号：１のアミノ酸配列の第６０４番〜第９５８番のアミノ酸配列からなるポリペプチドと実質的に同一のポリペプチドである。
ＴＫＤのゲートキーパー領域は、配列番号：１のアミノ酸配列の第６０４番〜第８２２番のアミノ酸配列からなるポリペプチド、または配列番号：１のアミノ酸配列の第６０４番〜第８２２番のアミノ酸配列からなるポリペプチドと実質的に同一のポリペプチドである。
ＴＫＤのゲートキーパー領域の変異は、キナーゼ阻害剤に対する耐性化機構の原因の一つとして知られている。ＦＬＴ３阻害剤の中にはゲートキーパー領域の変異により、ＡＴＰ結合部位の構造変化が生じ、結合部位が狭くなるといった立体障害または変異部位のアミノ酸との分子間相互作用の消失などが起こり、ＦＬＴ３活性阻害作用が大きく減弱されるものがある。
ＴＫＤのＡｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｌｏｏｐは、配列番号：１のアミノ酸配列の第８２３番〜第８６１番のアミノ酸配列からなるポリペプチド、または配列番号：１のアミノ酸配列の第８２３番〜第８６１番のアミノ酸配列からなるポリペプチドと実質的に同一のポリペプチドである。
ＴＫＤのＡｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｌｏｏｐは、通常はＴＫＤのＮ末端側Ｎ ｌｏｂｅとＣ末端側Ｃ ｌｏｂｅの間に折りたたまれた構造を取り、基質結合部位やＡＴＰ結合部位への基質やＡＴＰのアクセスを妨げる役割をしている（ＦＬＴ３不活性体）。一方、Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｌｏｏｐに位置するアミノ酸、特にＤ８３５またはＹ８４２に変異が起きると、Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｌｏｏｐに大きな構造変化が起こり、ＡＴＰ結合部位が開かれた構造となる（ＦＬＴ３活性体）。ＦＬＴ３不活性体のＡＴＰ結合部位に、静電相互作用または水素結合などの分子間相互作用で結合するＦＬＴ３阻害剤の中には、Ｄ８３５またはＹ８４２の変異によるＦＬＴ３活性体に対して分子間相互作用を保つことができなくなり、結合力が低下して、ＦＬＴ３活性阻害作用が減弱するものもある。
ＦＬＴ３の傍膜貫通領域は、配列番号：１のアミノ酸配列の第５７２番〜第６０３番のアミノ酸配列からなるポリペプチド、または配列番号：１のアミノ酸配列の第５７２番〜第６０３番のアミノ酸配列からなるポリペプチドと実質的に同一のポリペプチドである。
傍膜貫通領域においては、その領域内の様々な場所で、様々な長さのアミノ酸配列が繰り返されるアミノ酸の変異が生じうることが知られている。
なお、ポリペプチドについて実質的に同一とは、１または複数個のアミノ酸が欠失、置換または付加されたアミノ酸配列を有するか、またはアミノ酸配列の同一性が高く（例えば、８０％以上、好ましくは９０％、より好ましくは９５％以上、さらに好ましくは９８％以上の配列同一性を有し）、かつ同じ機能を有することをいう。
アミノ酸配列に関し、同一性とは、特に記載した場合を除き、２つの配列を最適の態様で整列させた場合に、２つの配列間で共有する一致したアミノ酸の個数を考慮した百分率を意味する。アミノ酸配列の同一性に関する検索・解析は、当業者には周知のアルゴリズムまたはプログラム（例えば、ＢＬＡＳＴＰまたはＣｌｕｓｔａｌＷ）により行うことができる。プログラムを用いる場合のパラメーターは、当業者であれば適切に設定することができ、また各プログラムのデフォルトパラメーターを用いてもよい。これらの解析方法の具体的な手法もまた、当業者には周知である。
＜ＦＬＴ３変異＞
ＦＬＴ３変異とは、ＦＬＴ３のアミノ酸配列においてアミノ酸の変異があることを意味する。変異により、ＰＩ３Ｋ−ＡＫＴシグナル経路およびＥＲＫ−ＭＡＰＫシグナル経路に加え、ＳＴＡＴ５シグナル経路またはその他の経路が活性化されうる。
アミノ酸の変異とは、アミノ酸配列中の１または複数個のアミノ酸の欠失、置換または付加を意味する。アミノ酸の変異は、欠失、置換または付加のいずれか一（例えば、置換）が１または複数個生じている場合と、欠失、置換および付加から選択される二以上が、それぞれ独立して１または複数個、組み合わされて生じている場合（例えば、１個の置換と３個の付加）とを含む。
なお「１または複数個のアミノ酸が欠失、置換または付加」というときの欠失、置換または付加されるアミノ酸の数および位置は、いずれの場合であっても、生じる変異体が意図した機能を有する限り、特に制限されない。欠失、置換または付加されるアミノ酸の数は、いずれの場合であっても、例えば、１〜３０個である。
アミノ酸の欠失とは、アミノ酸配列中のアミノ酸残基の１つ以上が欠失した変異を意味し、欠失には、アミノ酸配列の端からアミノ酸残基が欠失したものおよびアミノ酸配列の途中のアミノ酸残基が欠失したものが含まれる。
アミノ酸の置換とは、アミノ酸配列中のアミノ酸残基の１つ以上が、異なる種類のアミノ酸残基の１つ以上に変えられた変異を意味する。
アミノ酸の付加とは、アミノ酸配列中にアミノ酸残基の１つ以上が付加された変異を意味し、付加には、アミノ酸配列の端にアミノ酸残基が付加されたものおよびアミノ酸配列の途中にアミノ酸残基を付加されたものが含まれる。
ＦＬＴ３変異は、好ましくはＴＫＤ変異を含む。ＴＫＤ変異には、ＴＫＤのゲートキーパー領域における変異と、ＴＫＤのＡｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｌｏｏｐにおける変異が含まれる。ＦＬＴ３変異は、ＴＫＤ変異以外にさらに、ＩＴＤ変異を含んでもよい。
ＴＫＤ変異とは、ＴＫＤのアミノ酸配列において変異があることを意味する。
ＴＫＤのゲートキーパー領域における変異は、例えば、配列番号：１のアミノ酸配列の第６０４番〜第８２２番の領域における１または複数個のアミノ酸の変異であり、好ましくは、配列番号：１における、第６２１番、第６２７番、第６７６番、第６９１番および第６９７番からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸の変異である。ＴＫＤのゲートキーパー領域における変異は、より好ましくは、配列番号：１のアミノ酸配列における第６９１番のアミノ酸の変異であり、さらに好ましくは、配列番号：１の第６９１番のアミノ酸の、フェニルアラニンからロイシンへの置換である。いずれの場合も、生じるＦＬＴ３の変異体は、ＦＬＴ３活性、好ましくは変異型ＦＬＴ３活性を有する。
ＴＫＤのゲートキーパー領域における変異はまた、下記のいずれかのアミノ酸配列からなるものであってもよい。いずれの場合も、生じるＦＬＴ３の変異体は、ＦＬＴ３活性を有する：
ａ．配列番号：１のアミノ酸配列において、第６９１番のフェニルアラニンが欠失、置換または付加（好ましくは置換、より好ましくはロイシンへ置換）されたアミノ酸配列；
ｂ．上記ａのアミノ酸配列において、第６９１番のアミノ酸以外の１または複数個のアミノ酸が欠失、置換または付加したアミノ酸配列；
ｃ．上記ａのアミノ酸配列と８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列（ただし第６９１番のフェニルアラニンは、欠失、置換または付加（好ましくは置換、より好ましくはロイシンへ置換）されている）。
ＴＫＤのＡｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｌｏｏｐにおける変異は、例えば、配列番号：１のアミノ酸配列の第８２３番〜第８６１番の領域における１または複数個のアミノ酸の変異である。好ましくは、配列番号：１のアミノ酸配列における、第８３５番、第８３６番および第８４２番からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸の変異である。より好ましくは、下記からなる群より選択される少なくとも一つの変異である：
ａ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８３５番のアスパラギン酸からのバリン、チロシン、ヒスチジン、グルタミン酸またはアスパラギンへの置換；
ｂ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８３６番のイソロイシンからのロイシン−アスパラギン酸への置換；
ｃ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８４２番のチロシンからのシステインまたはヒスチジンへの置換。
いずれの場合も、生じるＦＬＴ３の変異体は、ＦＬＴ３活性、好ましくは変異型ＦＬＴ３活性を有する。
ＴＫＤのＡｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｌｏｏｐにおける変異はまた、下記のいずれかのアミノ酸配列からなるものであってもよい。いずれの場合も、生じるＦＬＴ３の変異体がＦＬＴ３活性を有する：
ａ．配列番号：１のアミノ酸配列において、第８３５番のアスパラギン酸が欠失、置換または付加（好ましくは置換、より好ましくはバリン、チロシン、ヒスチジン、グルタミン酸またはアスパラギンへ置換）されたアミノ酸配列；
ｂ．上記ａのアミノ酸配列において、第８３５番のアミノ酸以外の１または複数個のアミノ酸が欠失、置換または付加したアミノ酸配列；
ｃ．上記ａのアミノ酸配列と８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列（ただし第８３５番のアスパラギン酸が欠失、置換または付加（好ましくは置換、より好ましくはバリン、チロシン、ヒスチジン、グルタミン酸またはアスパラギンへ置換）されている）；
ｄ．配列番号：１のアミノ酸配列において、第８３６番のイソロイシンが欠失、置換または付加（好ましくは置換または欠失、より好ましくはロイシン−アスパラギン酸へ置換）されたアミノ酸配列；
ｅ．上記ｄのアミノ酸配列において、第８３６番のアミノ酸以外の１または複数個のアミノ酸が欠失、置換または付加したアミノ酸配列；
ｆ．上記ｄのアミノ酸配列と８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列（ただし第８３６番のイソロイシンが欠失、置換または付加（好ましくは置換または欠失、より好ましくはロイシン−アスパラギン酸へ置換）されている）。
ｇ．配列番号：１のアミノ酸配列において、第８４２番目のチロシンが欠失、置換または付加（好ましくは置換、より好ましくはシステインまたはヒスチジンへ置換）されたアミノ酸配列；
ｈ．上記ｇのアミノ酸配列において、第８４２番のアミノ酸以外の１または複数個のアミノ酸が欠失、置換または付加したアミノ酸配列；
ｉ．上記ｇのアミノ酸配列と８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列（ただし第８４２番のチロシンが欠失、置換または付加（好ましくは置換、より好ましくはシステインまたはヒスチジンへ置換）されている）。
生じるＦＬＴ３の変異体が、ＦＬＴ３活性を有するか否か、または変異型ＦＬＴ３活性を有するか否かは、当業者であれば、公知の方法にしたがい、測定し、判断することができる。より具体的な測定方法および判断基準は、前掲特許文献２の実施例の項、および本明細書の実施例の項の記載を参考にすることができる。変異型ＦＬＴ３活性を有するか否かはまた、ＦＬＴ３活性を有するが、従来技術のＦＬＴ３阻害剤、好ましくはＱｕｉｚａｒｔｉｎｉｂ（Ａｍｂｉｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社）およびＳｏｒａｆｅｎｉｂ（Ｂａｙｅｒ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ,Ｉｎｃ.社）からなる群より選択される少なくとも一つのＦＬＴ３阻害剤では阻害されないことを基準に、判断することができる。阻害されないとは、例えば、本明細書の実施例の項に記載された測定方法を用いて、酵素阻害試験ではＩＣ50値が、１０ｎｍｏｌ／Ｌまたは１００ｎｍｏｌ／Ｌ以上であること、細胞増殖試験ではＧＩ50値が、１０ｎｍｏｌ／Ｌまたは１００ｎｍｏｌ／Ｌ以上であること、細胞内リン酸化阻害試験ではＩＣ50値が、９０ｎｍｏｌ／Ｌ以上であることを、判断基準とすることができる。
ＩＴＤ変異とは、ＦＬＴ３の傍膜貫通領域においてその領域内のアミノ酸配列が領域内の様々な場所で繰り返される変異を意味する。ＩＴＤ変異におけるアミノ酸配列の繰り返しの長さは２から４２アミノ酸まで様々であると報告されている。特に、ＩＴＤ変異を持つ多くの症例において、配列番号：１の第５９１番〜第５９９番のアミノ酸配列にその変異が高頻度に認められている。ＩＴＤ変異およびＩＴＤ変異を有するＦＬＴ３については、国際公開２０００／０１１４７０号（特許第４５４２２６８号公報）を参考にすることができる。
＜ＦＬＴ３変異陽性＞
ある癌がＦＬＴ３変異陽性であるとは、その癌細胞のＦＬＴ３のアミノ酸配列において変異があることを意味する。また、ＦＬＴ３変異陽性とは、そのような変異のあるアミノ酸配列をコードするように、ＦＬＴ３遺伝子に変異があることも意味する。ＦＬＴ３のアミノ酸配列に変異がある場合、ＦＬＴ３遺伝子に変異があることは明らかである。
ＦＬＴ３変異陽性であるか否か、すなわちＦＬＴ３の変異は、ＦＬＴ３の遺伝子配列またはＦＬＴ３の転写産物であるｍＲＮＡの配列を解析することにより調べることができる。配列の解析方法は、例えば、ジデオキシヌクレオチドチェーンターミネーション法（Ｓａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７４：５４６３）などを挙げることができる。適当なＤＮＡシークエンサーを利用して配列を解析することも可能である。
また、ＦＬＴ３の変異は、例えば、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、サザンブロット解析、ノーザンブロット解析、ＤＮＡマイクロアレイ、ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ）、Ｆｒａｇｍｅｎｔ解析、ＰＣＲ−ＳＳＣＰ（ＰＣＲ−Ｓｉｎｇｌｅ−Ｓｔｒａｎｄ Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ−ＰＣＲ）、ＰＣＲ−ＲＦＬＰ（ＰＣＲ−Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）、ＡＲＭＳ（ａｍｐｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）、ＰＮＡ（ｐｅｐｔｉｄｅ ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ）−ＬＮＡ ＰＣＲ ｃｌａｍｐ、ＰＣＲ−Ｉｎｖａｄｅｒ、Ｓｃｏｒｐｉｏｎ ＡＲＭＳ、Ｃｙｌｅａｖｅ、ｉＰＬＥＸおよびＳＭＡＰ（ＳＭａｒｔ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｐｒｏｃｅｓｓ）などの方法により解析することもできる。これらの方法は、常法に従い用いることができる。
ＦＬＴ３の変異の検出のための検体としては、血液、骨髄、手術検体および生検検体などが挙げられる。
一般式［１］の化合物およびその塩は、各種の癌に用いることができる。ＦＬＴ３の発現は早期前駆細胞に制限されるが、血液癌では、ＦＬＴ３が高濃度で発現するか、またはＦＬＴ３が遺伝子変異を起こすことにより、上記シグナル伝達経路の活性化を介して癌の増殖悪性化に寄与する。一般式［１］の化合物およびその塩が有効である血液癌には、例えば、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病（ＡＰＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性好中球性白血病（ＣＮＬ）、急性未分化白血病（ＡＵＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、前リンパ球性白血病（ＰＭＬ）、若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）、成人Ｔ細胞ＡＬＬ、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）および骨髄増殖性疾患（ＭＰＤ）などが含まれる。
一般式［１］の化合物およびその塩は、ＦＬＴ３変異陽性であるこれらの癌に対して用いることができる。
〔剤型、その他〕
一般式［１］の化合物またはその塩は、変異型ＦＬＴ３阻害剤の有効成分として用いることができる。好ましくは、ＴＫＤ変異を含む変異型ＦＬＴ３を阻害する剤として用いることができる。このような剤はまた、野生型ＦＬＴ３を阻害するものであってもよい。一般式［１］の化合物またはその塩を有効成分とする変異型ＦＬＴ３阻害剤は特に、抗癌剤として有用である。
医薬組成物または剤では、一般式［１］の化合物およびその種々の塩のうち、一種のみを用いてもよく、または二種以上を含有してもよい。本発明の医薬組成物は、当該技術分野において従来から用いられている公知の抗腫瘍剤を含む他の治療薬と組み合わせて使用してもよい。
医薬組成物または剤は、通常、製剤化に使用される賦形剤、結合剤、滑沢剤、崩壊剤、着色剤、矯味矯臭剤、乳化剤、界面活性剤、溶解補助剤、懸濁化剤、等張化剤、緩衝剤、防腐剤、抗酸化剤、安定化剤および吸収促進剤などの添加剤を添加することができる。
医薬組成物または剤の投与経路としては、例えば、静脈内、動脈内、直腸内、腹腔内、筋肉内、腫瘍内または膀胱内注射する方法、経口投与、経皮投与および坐剤などの方法が挙げられる。投与量および投与回数は、例えば、成人に対しては、経口または非経口（例えば、注射、点滴および直腸部位への投与など）投与により、１日あたり例えば、0.01〜1000mg／kgを１回から数回に分割して投与することができる。剤形の例としては、錠剤、カプセル剤、散剤、シロップ剤、顆粒剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、液剤、粉体製剤、坐剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、貼付剤、軟膏剤および注射剤が挙げられる。
これまで述べてきたように、一般式［１］の化合物またはその塩は、ＦＬＴ３変異陽性癌に特に有効であると考えられる。したがって、ＦＬＴ３変異の有無を調べるＦＬＴ３遺伝子検査を、一般式［１］の化合物もしくはその塩を含む医薬組成物または剤による処置の効果を予測するために；医薬組成物を適用する対象を選択するために；また、医薬組成物または剤による処置の適用を決定するために、行ってもよい。本願はこれらの実施態様も提供する。
従来技術のＦＬＴ３阻害剤においては、ＦＬＴ３に対する活性は高いが、特定の変異型ＦＬＴ３に対しては有効性が著しく劣ることがあった。しかしながら、本発明者らの検討によると、一般式［１］の化合物またはその塩は、種々の変異型ＦＬＴ３に対して有効でありうる。特にＡｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｌｏｏｐにおける変異、より特定すると配列番号：１のアミノ酸配列の第８３５番、第８３６番または第８４２番のアミノ酸における変異に関しては、種々の変異型ＦＬＴ３に対して有効でありうる。
次に本発明を実施例を挙げて説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
〔製造例〕
表１−１〜表１〜４に記載の化合物を前掲特許文献２に記載の方法に従って合成した。
Figure 0006257782
Figure 0006257782
Figure 0006257782
Figure 0006257782
〔実施例１ 変異型ＦＬＴ３（ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｙ）酵素阻害試験〕
比較化合物１としてＱｕｉｚａｒｔｉｎｉｂ（Ａｍｂｉｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社）を用いた。
変異型ＦＬＴ３タンパク質（ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｙ、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）６μＬ（０．７５ｎｇ）および所定の濃度の試験化合物を含む溶液（１００ｍｍｏｌ／Ｌ ＨＥＰＥＳ、１０ｍｍｏｌ／Ｌ ＭｇＣｌ2、２５ｍｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ、０．０１％ ＢＳＡ、１ｍｍｏｌ／Ｌ ＤＴＴ、ｐＨ７．５）３μＬを混合し、１５分間、２５℃で静置した。その後、基質ペプチドＢｉｏｔｉｎ‐ＡＡＡ‐ＡＥＥＥＥＹＦＥＬＶＡＫＫＫ（東レ社）（配列番号：２）３μＬ（終濃度０．２５μｍｏｌ／Ｌ）およびＡＴＰ（Ｓｉｇｍａ‐Ａｌｄｒｉｃｈ社）３μＬ（終濃度１５μｍｏｌ／Ｌ)をそれぞれ添加し、２分間振盪後、さらに４０分間、２５℃で静置して酵素反応を行った。なおＦＬＴ Ｄ８３５Ｙは、第８３５番のアスパラギン酸をチロシンに置換したＦＬＴ３タンパク質を意味する。
その後、Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ‐Ｘｌｅｎｔ（Ｃｉｓｂｉｏ社）およびＭａｂ ＰＴ６６‐Ｋ（Ｃｉｓｂｉｏ社）を含む酵素反応停止液（５μｇ／ｍＬ Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ、０．１９μｇ／ｍＬ ＰＴ６６‐Ｋ、３０μｍｏｌ／Ｌ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）、１５０ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＦ、７５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１５％ ＢＳＡ、０．０７５％ Ｔｗｅｅｎ２０）３０μＬを添加し、酵素反応を停止させると同時に、室温で１時間静置することにより抗原抗体反応を行った。その後、Ｅｎｖｉｓｉｏｎ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）を用いて６１５ｎｍおよび６６５ｎｍの時間分解蛍光を測定し、基質ペプチドのリン酸化を測定した。６６５ｎｍでの蛍光値を６１５ｎｍでの蛍光値で除した値を測定値とし、化合物無添加（ＤＭＳＯ処置のみ）かつＡＴＰ添加のｗｅｌｌの測定値を０％阻害、化合物無添加（ＤＭＳＯ処置のみ）かつＡＴＰ無添加のｗｅｌｌの測定値を１００％阻害として、試験化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ50値）をＸＬｆｉｔ Ｖｅｒ.５.３.１（ＩＤ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ社）のＦｉｔ Ｍｏｄｅｌ ２０５により算出した。結果を表２に示す。
Figure 0006257782
表中、変異型ＦＬＴ３タンパク質の酵素活性に対するＩＣ50値の評価基準は以下の通りである。
＋＋＋：１ｎｍｏｌ／Ｌ未満
＋＋：１ｎｍｏｌ／Ｌ以上１０ｎｍｏｌ／Ｌ未満
＋：１０ｎｍｏｌ／Ｌ以上１００ｎｍｏｌ／Ｌ未満
−：１００ｎｍｏｌ／Ｌ以上
〔実施例２ 変異型ＦＬＴ３発現３２Ｄ細胞株の樹立とそれら細胞株を用いた細胞増殖試験〕
２−１．材料
野生型ＦＬＴ３／ＦＬＴ３リガンド共発現３２Ｄ細胞株（３２Ｄ ＦＬＴ３／ＦＬ）は非特許文献３に記載された公知の細胞を用いた。ＲＰＭＩ１６４０およびＤＭＥＭはＬｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社またはＳＩＧＭＡ社より購入した。３２Ｄ細胞はＲＩＫＥＮバイオリソースセンターより入手し、１ｎｇ／ｍＬ マウスＩＬ‐３、１０％ ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１００Ｕ／ｍＬ ペニシリンおよび１００ｎｇ／ｍＬ ストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地を用いて３７℃、５％ ＣＯ2存在下で培養した。ＰＬＡＴ‐Ｅ細胞は東京大学 北村俊雄博士より供与され、１μｇ／ｍＬ ピューロマイシン、１０μｇ／ｍＬ ブラストサイジンＳ、１０％ ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬ ペニシリンおよび１００ｎｇ／ｍＬ ストレプトマイシンを含有するＤＭＥＭ培地で培養した。ｐＭＸｓ‐ＩＰレトロウイルスベクターは東京大学 北村俊雄博士より供与された（非特許文献４）。ｐＧＥＭ‐Ｔベクター、ＦｕＧＥＮＥ６およびＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ａｓｓａｙはプロメガ社より購入した。
２−２．細胞株の樹立
３２Ｄ ＦＬＴ３／ＦＬ以外の細胞株は非特許文献５および非特許文献６に記載の公知の手順に準じて、以下のように作製した。
（１）ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｙ、ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｖ、ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｈ、ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｅ、ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｎ、ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｉｎｓ、ＦＬＴ３ Ｙ８４２ＣおよびＦＬＴ３ Ｙ８４２Ｈ
Ｄ８３５Ｙ変異、Ｄ８３５Ｖ変異、Ｄ８３５Ｈ変異、Ｄ８３５Ｅ変異、Ｄ８３５Ｎ変異およびＤ８３５Ｉｎｓ変異（Ｉ８３６Ｌ・Ｄ変異）ＦＬＴ３発現ベクターは、非特許文献７に記載されたｐＭＫＩＴ‐Ｎｅｏベクターに挿入されたＤ８３５変異ＦＬＴ３遺伝子配列全長をｐＭＸｓ‐ＩＰレトロウイルスベクターに挿入することにより作製した。
Ｙ８４２Ｃ変異またはＹ８４２Ｈ変異ＦＬＴ３発現ベクターは、ｐＧＥＭ‐Ｔベクターに挿入されたＣ末端ＦＬＡＧ配列付加ＦＬＴ３遺伝子をテンプレートに、以下に示したプライマーを用いてＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ Ｓｉｔｅ‐Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（ストラタジーン社）のプロトコールに従いＹ８４２ＣおよびＹ８４２Ｈ変異を導入した後、Ｙ８４２変異ＦＬＴ３遺伝子配列全長をｐＭＸｓ‐ＩＰレトロウイルスベクターに挿入することで作製した。導入された変異はシークエンス解析により確認した。
（２）ＦＬＴ３ ＩＴＤ、ＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｄ８３５Ｙ、ＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｙ８４２ＣおよびＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｙ８４２Ｈ
ＩＴＤ変異ＦＬＴ３発現ベクターは、非特許文献８に記載されたＩＴＤ変異ＦＬＴ３遺伝子（クローンＭｔ２）をＣ末端にＦＬＡＧ配列が付加された配列としてｐＭＸｓ−ＩＰレトロウイルスベクターに組み込むことにより作製した。
ＩＴＤ・Ｄ８３５Ｙ同時変異ＦＬＴ３発現ベクターは、ｐＧＥＭ−Ｔベクターに挿入されたＣ末端ＦＬＡＧ配列付加ＩＴＤ変異ＦＬＴ３遺伝子のうち、ＳｐｈＩで切り出される第８３５番目のアスパラギン酸を含む配列をｐＧＥＭ−Ｔベクターに挿入されたＣ末端ＦＬＡＧ配列付加Ｄ８３５Ｙ変異ＦＬＴ３遺伝子の対応する配列で置換した後、Ｃ末端ＦＬＡＧ配列付加ＩＴＤ・Ｄ８３５Ｙ同時変異ＦＬＴ３配列全長をｐＭＸｓ−ＩＰレトロウイルスベクターに挿入することにより作製した。
ＩＴＤ・Ｙ８４２Ｃ同時変異またはＩＴＤ・Ｙ８４２Ｈ同時変異ＦＬＴ３発現ベクターは、ｐＧＥＭ−Ｔベクターに挿入されたＣ末端ＦＬＡＧ配列付加ＩＴＤ変異ＦＬＴ３遺伝子をテンプレートに、以下に示したプライマーを用いてＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ Ｓｉｔｅ‐Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（ストラタジーン社）のプロトコールに従いＹ８４２ＣおよびＹ８４２Ｈ変異を導入した後、ＩＴＤ・Ｙ８４２同時変異ＦＬＴ３遺伝子全長をｐＭＸｓ‐ＩＰレトロウイルスベクターに挿入することで作製した。導入された変異はシークエンス解析により確認した。
上記の手順により作製した変異型ＦＬＴ３ ｐＭＸｓ‐ＩＰレトロウイルスベクターをＦｕＧＥＮＥ６を用いることでＰＬＡＴ‐Ｅ細胞に導入し、２日間の培養を行った後に、ウイルスを含む培養上清を回収した。このウイルス含有培養上清を１０μｇ／ｍＬポリブレン存在下でマウス造血前駆細胞株３２Ｄ細胞に加えたのち、０．５ｎｇ／ｍＬ マウスＩＬ‐３存在下で培養を行った。ウイルス感染操作の２日後に４μｇ／ｍＬ ピューロマイシンによって細胞を選択することにより、それぞれの変異型ＦＬＴ３発現３２Ｄ細胞株（３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｙ、３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｖ、３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｈ、３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｅ、３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｎ、３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｉｎｓ、３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｙ８４２Ｃ、３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｙ８４２Ｈ、ＦＬＴ３ ＩＴＤ、ＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｄ８３５Ｙ、ＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｙ８４２ＣおよびＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｙ８４２Ｈ）を作製した。ＦＬＴ３の発現はウエスタンブロットにより確認した。作製した全ての変異型ＦＬＴ３発現３２Ｄ細胞株およびＦＬＴ３／ＦＬＴ３リガンド共発現３２Ｄ細胞株はＩＬ‐３非存在下で増殖が可能であり、１０％ ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍＬ ペニシリンおよび１００ｎｇ／ｍＬ ストレプトマイシンを含有するＲＰＭＩ１６４０培地で培養を行った。
ＦＬＴ３遺伝子へのＹ８４２Ｃ変異またはＹ８４２Ｈ変異導入に用いたプライマー配列
Ｙ８４２Ｃ変異導入に使用したプライマー
５‘−ＣＡＴＧＡＧＴＧＡＴＴＣＣＡＡＣＴＧＴＧＴＴＧＴＣＡ―３’ （配列番号：３）
５‘−ＴＧＡＣＡＡＣＡＣＡＧＴＴＧＧＡＡＴＣＡＣＴＣＡＴＧ−３’ （配列番号：４）
Ｙ８４２Ｈ変異導入に使用したプライマー
５‘−ＣＡＴＧＡＧＴＧＡＴＴＣＣＡＡＣＣＡＴＧＴＴＧＴＣＡ−３’ （配列番号：５）
５‘−ＴＧＡＣＡＡＣＡＴＧＧＴＴＧＧＡＡＴＣＡＣＴＣＡＴＧ−３’ （配列番号：６）
変異導入部位は下線で示した。
本実施例で引用した文献
［非特許文献３］Ｓｈｉｏｔｓｕ Ｙら、Ｂｌｏｏｄ、第１１４巻、１６０７‐１６１７頁、２００９年
［非特許文献４］Ｋｉｔａｍｕｒａ Ｔら、Ｅｘｐ Ｈａｍｔｏｌ、３１巻、１００７‐１０１４頁、２００３年
［非特許文献５］Ｔｓｕｊｉｍｕｒａ Ａら、Ｉｎｔ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ、９２巻、６２４‐６３３頁、２０１０年
［非特許文献６］Ｌｕ Ｙら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、２１巻、２２４６‐２２５７頁 ２００７年
［非特許文献７］Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｙら、Ｂｌｏｏｄ、９７巻、２４３４‐２４３９頁、２００１年
［非特許文献８］Ｋｉｙｏｉ Ｈら、 Ｌｅｕｋｅｍｉａ、１２巻、１３３３−１３３７、１９９８年
２−３．細胞増殖試験
（１）
比較化合物１としてＱｕｉｚａｒｔｉｎｉｂ（Ａｍｂｉｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社）、比較化合物２としてＳｏｒａｆｅｎｉｂ（Ｂａｙｅｒ ＨｅａｌｔｈＣａｒｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ,Ｉｎｃ.社）を用いた。
ＦＬＴ３／ＦＬＴ３リガンド共発現３２Ｄ細胞株および変異型ＦＬＴ３発現３２Ｄ細胞株（３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｙ、３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｖ、３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｈ、３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｅ、３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｎ、３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｉｎｓ、３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｙ８４２Ｃおよび３２Ｄ ＦＬＴ３ Ｙ８４２Ｈ）に対する化合物の細胞生存性試験を以下の手順に従って行った。
９６ｗｅｌｌプレート（Ｂｅｃｔｏｎ、Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）にそれぞれの細胞を１０００‐１００００細胞／ｗｅｌｌになるように播種し、５％ ＣＯ2存在下３７℃で培養を開始した。次の日に３倍公比で希釈した化合物をそれぞれのｗｅｌｌに加えさらに２日間培養した後、細胞の生存性を評価するためにプロメガ社のプロトコールに従いＣｅｌｌＴｉｔｅｒ ９６ ＡＱｕｅｏｕｓ Ｏｎｅ ＳｏｌｕｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔを各ｗｅｌｌに加え、１時間培養を行った。その後、ＭＰＲ‐Ａ４ｉ ＩＩ ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ（ＴＯＳＯＨ社）を用いて吸光度（ＯＤ＝４９２ｎｍ）を測定した。吸光度が不十分な場合は追加で１‐２時間の培養を行った後に吸光度を測定した。化合物無添加のｗｅｌｌを０％増殖阻害、細胞を播種していないｗｅｌｌを１００％増殖阻害として、試験化合物の５０％阻害濃度（ＧＩ50値）をＸＬｆｉｔ ５．３.１ ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｆｉｔ Ｍｏｄｅｌ ２０５）（ＩＤ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ社）により算出した。
結果を表３に示す。
Figure 0006257782
表中、各種ＦＬＴ３タンパク質発現３２Ｄ細胞の増殖に対するＧＩ50値の評価基準は以下の通りである。
＋＋＋：１ｎｍｏｌ／Ｌ未満
＋＋：１ｎｍｏｌ／Ｌ以上１０ｎｍｏｌ／Ｌ未満
＋：１０ｎｍｏｌ／Ｌ以上１００ｎｍｏｌ／Ｌ未満
−：１００ｎｍｏｌ／Ｌ以上
また、表中、各用語は、以下を意味する。
ＦＬＴ３/ＦＬ：ＦＬＴ３タンパク質およびＦＬ（ＦＬＴ３リガンド）タンパク質共発現株
ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｙ：第８３５番のアスパラギン酸をチロシンに置換したＦＬＴ３タンパク質発現株
ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｖ：第８３５番のアスパラギン酸をバリンに置換したＦＬＴ３タンパク質発現株
ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｈ：第８３５番のアスパラギン酸をヒスチジンに置換したＦＬＴ３タンパク質発現株
ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｅ：第８３５番のアスパラギン酸をグルタミン酸に置換したＦＬＴ３タンパク質発現株
ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｎ：第８３５番のアスパラギン酸をアスパラギンに置換したＦＬＴ３タンパク質発現株
ＦＬＴ３ Ｄ８３５Ｉｎｓ：第８３６番のイソロイシンをロイシンおよびアスパラギン酸に置換したＦＬＴ３タンパク質発現株
ＦＬＴ３ Ｙ８４２Ｃ：第８４２番のチロシンをシステインに置換したＦＬＴ３タンパク質発現株
ＦＬＴ３ Ｙ８４２Ｈ：第８４２番のチロシンをヒスチジンに置換したＦＬＴ３タンパク質発現株
本発明化合物は、いずれの変異型ＦＬＴ３を発現する細胞に対しても強い細胞増殖阻害効果を示し、さらにその阻害効果の強さは、ＦＬＴ３／ＦＬＴ３リガンド共発現細胞に対する阻害効果と比べて、同等以上であった。
（２）
変異型ＦＬＴ３発現３２Ｄ細胞株（ＦＬＴ３ ＩＴＤ、ＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｄ８３５Ｙ、ＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｙ８４２ＣおよびＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｙ８４２Ｈ）に対する化合物の細胞生存性試験を２−３．（１）に記載の手順に従って行った。
結果を表４に示す。
Figure 0006257782
表中、各種ＦＬＴ３タンパク質発現３２Ｄ細胞の増殖に対するＧＩ50値の評価基準は表２と同様である。
また、表中、各用語は、以下を意味する。
ＦＬＴ３ ＩＴＤ：ＩＴＤ変異を有するＦＬＴ３タンパク質発現株
ＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｄ８３５Ｙ：ＩＴＤ変異を有し、かつ、野生型ＦＬＴ３における第８３５番目に相当するアスパラギン酸をチロシンに置換したＦＬＴ３タンパク質発現株
ＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｙ８４２Ｃ：ＩＴＤ変異を有し、かつ、野生型ＦＬＴ３における第８４２番目に相当するチロシンをシステインに置換したＦＬＴ３タンパク質発現株
ＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｙ８４２Ｈ：ＩＴＤ変異を有し、かつ、野生型ＦＬＴ３における第８４２番目に相当するチロシンをヒスチジンに置換したＦＬＴ３タンパク質発現株
本発明化合物は、ＩＴＤ変異を有し、かつ、Ｄ８３５Ｙ、Ｙ８４２ＣまたはＹ８４２Ｈを有する変異型ＦＬＴ３発現細胞に対して、強い細胞増殖阻害効果を示し、さらにその阻害効果の強さは、ＩＴＤ変異のみを有する変異型ＦＬＴ３発現細胞に対する阻害効果と比べて、同等以上であった。
〔実施例３ 変異型ＦＬＴ３一過性発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を用いたＦＬＴ３リン酸化阻害試験〕
３‐１．材料
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞株は、ＤＳファーマ社から購入した。ＤＭＥＭは、ＬｉｆｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社より購入した。本細胞培養については、１０％ ウシ胎児血清（ＦＢＳ）を含有するＤＭＥＭ培地を用いて３７℃、５％ ＣＯ2存在下で行った。ｐｃＤＮＡ３．１（＋）ベクターおよび遺伝子導入試薬Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００は、Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社より購入した。細胞内リン酸化ＦＬＴ３の定量は、ＰａｔｈＳｃａｎ Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＦＬＴ３（Ｔｙｒ５９１）Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｓａｎｄｗｉｃｈ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔ ＃７０２１（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社）を用いて行った。
３‐２．変異型ＦＬＴ３発現ベクターの作製
ＩＴＤ変異ＦＬＴ３発現ベクターはＩＴＤ変異ＦＬＴ３遺伝子をＣ末端にＦＬＡＧ配列が付加された配列としてｐｃＤＮＡ３．１（＋）ベクターに組み込むことにより作製した。
ＩＴＤ・Ｆ６９１Ｌ同時変異ＦＬＴ３発現ベクターは、ＩＴＤ変異ＦＬＴ３発現ベクターをテンプレートに以下に示したプライマーを用いてＱｕｉｋＣｈａｎｇｅ Ｓｉｔｅ‐Ｄｉｒｅｃｔｅｄ Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ Ｋｉｔ（ストラタジーン社）のプロトコールに従いＦ６９１Ｌ変異を導入した後、ＩＴＤ・Ｆ６９１Ｌ同時変異ＦＬＴ３遺伝子全長をｐｃＤＮＡ３．１（＋）ベクターに再び挿入することで作製した。導入された変異はシークエンス解析により確認した。
Ｆ６９１Ｌ変異導入に用いたプライマー配列
５‘−ＣＣＡＡＴＴＴＡＣＴＴＧＡＴＴＴＴＧＧＡＡＴＡＣＴＧＴＴＧＣ−３’（配列番号：７）
５‘−ＧＣＡＡＣＡＧＴＡＴＴＣＣＡＡＡＡＴＣＡＡＧＴＡＡＡＴＴＧＧ−３’（配列番号：８）
変異導入部位は下線で示した。
３‐３．変異型ＦＬＴ３（ＦＬＴ３ ＩＴＤまたはＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｆ６９１Ｌ）一過性発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞内リン酸化阻害試験
比較化合物１としてＱｕｉｚａｒｔｉｎｉｂ（Ａｍｂｉｔ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社）を用いた。変異型ＦＬＴ３であるＦＬＴ３ ＩＴＤまたはＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｆ６９１Ｌについて、それぞれの遺伝子を組み込んだ発現ベクターにより、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞へ個別に遺伝子導入し、それら変異型ＦＬＴ３を一過性に発現させた本細胞内のＦＬＴ３リン酸化に対する化合物の阻害作用試験を以下の手順に従って行った。
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞をＴ７５フラスコへ播種し（８×１０6 ｃｅｌｌｓ／フラスコ）、５％ＣＯ2存在下３７℃で２４時間培養した後、培地（１５ｍＬ）交換した。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００溶液（Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬 １６０μＬとＯＰＴＩＭＥＭ ４．０ｍＬの混合液）とベクター溶液（Ｐｌａｓｍｉｄ ＤＮＡ ６４μｇとＯＰＴＩＭＥＭ ４．０ｍＬの混合液）を１：１にて混和し、室温で２０分間静置後、そのうちの３ｍＬを培地交換したＨＥＫ２９３Ｔ細胞へ添加し、５％ＣＯ2存在下３７℃でさらに２４時間培養した。ＦＬＴ３ ＩＴＤまたはＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｆ６９１Ｌ遺伝子が導入されたＨＥＫ２９３Ｔ細胞を９６ｗｅｌｌプレート（＃３３００、Ｃｏｒｎｉｎｇ社）にそれぞれ５００００細胞／ｗｅｌｌとなるように播種し、５％ ＣＯ2存在下３７℃で２４時間前培養した。前培養後、連続希釈系列の化合物溶液を各ｗｅｌｌに添加し、５％ＣＯ2存在下３７℃で６０分間培養した。培養後のＨＥＫ２９３Ｔ細胞内のリン酸化ＦＬＴ３を定量するために、ＰａｔｈＳｃａｎ Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＦＬＴ３（Ｔｙｒ５９１）Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｓａｎｄｗｉｃｈ ＥＬＩＳＡ Ｋｉｔを用い、付属プロトコールに従ってサンプルを処置した。要約すると、各ｗｅｌｌをＰＢＳ１００μＬにて洗浄後、Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ ５０μＬを添加し、Ｌｙｓａｔｅを分取した。Ｌｙｓａｔｅを適宜希釈した後、ＦＬＴ３ Ｍｏｕｓｅ ｍＡｂが固相化されたＥＬＩＳＡプレートの各ｗｅｌｌに５０μＬずつ添加し、４℃で２４時間反応させた。反応後、各ｗｅｌｌの上清を捨て、Ｗａｓｈ Ｂｕｆｆｅｒによる洗浄後、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＦＬＴ３（Ｔｙｒ５９１）Ｒａｂｂｉｔ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙを添加し、室温で１時間反応させ、各ｗｅｌｌ洗浄後、ＨＲＰ−ｌｉｎｋｅｄ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ａｎｔｉｂｏｄｙを添加し、さらに室温で３０分間反応させた。反応後、洗浄し、検出液（Ｌｕｍｉｎｏｌ/Ｅｎｈａｎｃｅｒ溶液とＳｔａｂｌｅ Ｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｂｕｆｆｅｒの１：１混合液）を各ｗｅｌｌに添加し、プレートリーダーＥｎＶｉｓｉｏｎにて４２５ｎｍでの発光量を測定した。化合物無添加のｗｅｌｌを０％リン酸化阻害、細胞を播種していないｗｅｌｌを１００％リン酸化阻害として試験化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ50値）をＸＬｆｉｔ ５．３．１ ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｆｉｔ Ｍｏｄｅｌ ２０５）（ＩＤ Ｂｕｓｉｎｅｓｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ Ｌｉｍｉｔｅｄ社）により算出した。
結果を表５に示す。
Figure 0006257782
表中、変異型ＦＬＴ３一過性発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞内のＦＬＴ３リン酸化に対するＩＣ50値の評価基準は以下の通りである。
＋＋＋：１０ｎｍｏｌ／Ｌ未満
＋＋：１０ｎｍｏｌ／Ｌ以上３０ｎｍｏｌ／Ｌ未満
＋：３０ｎｍｏｌ／Ｌ以上９０ｎｍｏｌ／Ｌ未満
−：９０ｎｍｏｌ／Ｌ以上
また、表中、各用語は、以下を意味する。
ＦＬＴ３ ＩＴＤ：ＩＴＤ変異を有するＦＬＴ３タンパク質一過性発現株
ＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｆ６９１Ｌ：ＩＴＤ変異を有し、かつ、野生型ＦＬＴ３における第６９１番目に相当するフェニルアラニンをロイシンに置換したＦＬＴ３タンパク質一過性発現株
本発明化合物は、比較化合物１に比べ、ＦＬＴ３ ＩＴＤ変異発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞内のＦＬＴ３リン酸化を同等以上に強く阻害した。さらに、比較化合物１のＦＬＴ３リン酸化阻害作用が顕著に減弱するＦＬＴ３ ＩＴＤ・Ｆ６９１Ｌ変異発現ＨＥＫ２９３Ｔ細胞に対しても、本発明化合物は強いＦＬＴ３リン酸化阻害作用を示した。
含窒素複素環化合物またはその塩は、ＦＬＴ３変異陽性癌を処置するための医薬組成物および変異型ＦＬＴ３阻害剤として有用である。
SEQ ID NO.:1 FLT3
SEQ ID NO.:2 FLT3 substrate peptide
SEQ ID NO.:3 Primer for Y842C mutation
SEQ ID NO.:4 Primer for Y842C mutation
SEQ ID NO.:5 Primer for Y842H mutation
SEQ ID NO.:6 Primer for Y842H mutation
SEQ ID NO.:7 Primer for F691L mutation
SEQ ID NO.:8 Primer for F691L mutation

Claims (21)

  1. 一般式［１］で表される化合物またはその塩を含む、ＴＫＤ変異を含むＦＬＴ３変異陽性癌を処置するための、医薬組成物；
    Figure 0006257782
     式中、
    Ｒ1は、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
    Ｒ2は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示し、
    Ｒ3は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示し、
    ｍは、１〜３の整数を示し、
    ｍ個のＲ4は、同一または異なって、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基を示し、ｍ個から選ばれる一つのＲ4は、Ｒ3と一緒になって、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基を形成してもよく、
    ｍ個のＲ5は、同一または異なって、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示し、
    Ｘ1は、酸素原子、Ｎ（Ｒ20）（式中、Ｒ20は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示す。）、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ20）（式中、Ｒ20は、前記と同様の意味を有する。）または結合手を示し、
    Ｘ2は、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基、置換されてもよい２価の脂環式炭化水素基または置換されてもよい２価の芳香族炭化水素基を示し、
    ｎは、０〜３の整数を示し、
    ｎ個のＲ6は、同一または異なって、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
    ｎ個のＲ7は、同一または異なって、水素原子または置換されてもよいＣ1-6アルキル基を示し、
    Ｘ3は、置換されてもよいＣ1-6アルキレン基、置換されてもよいＣ2-6アルケニレン基、置換されてもよいＣ2-6アルキニレン基またはＮ（Ｒ20）−Ｃ（＝Ｏ）（式中、Ｒ20は、前記と同様の意味を有する。）を示し、
    Ｒ8は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示し、
    Ｒ9は、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基、置換されてもよいＣ2-6アルキニル基または置換されてもよいＣ3-8シクロアルキル基を示し、
    Ｒ8およびＲ9は、それらが結合する窒素原子と一緒になって、置換されてもよい環状アミノ基を形成してもよく、
    Ｒ10は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示し、
    Ｒ11は、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基、置換されてもよいＣ2-6アルキニル基、置換されてもよいＣ3-8シクロアルキル基、置換されてもよいアリール基または置換されてもよい複素環式基を示す。
  2. Ｒ10が、水素原子である、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. Ｘ1が、Ｃ（＝Ｏ）−Ｎ（Ｒ20）（式中、Ｒ20は、水素原子、置換されてもよいＣ1-6アルキル基、置換されてもよいＣ2-6アルケニル基または置換されてもよいＣ2-6アルキニル基を示す。）である、請求項１または２に記載の医薬組成物。
  4. Ｘ3が、置換されてもよいＣ2-6アルキニレン基である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  5. ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第８２３番〜第８６１番の領域における１または複数個のアミノ酸の変異である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  6. ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における、第８３５番、第８３６番および第８４２番からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸の変異である、請求項５に記載の医薬組成物。
  7. ＴＫＤ変異が、下記からなる群より選択される少なくとも一つである、請求項６に記載の医薬組成物：
    ａ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８３５番のアスパラギン酸からのバリン、チロシン、ヒスチジン、グルタミン酸またはアスパラギンへの置換；
    ｂ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８３６番のイソロイシンからのロイシン−アスパラギン酸への置換；
    ｃ．配列番号：１のアミノ酸配列における第８４２番のチロシンからのシステインまたはヒスチジンへの置換。
  8. ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第６０４番〜第８２２番の領域における１または複数個のアミノ酸の変異である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  9. ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第６２１番、第６２７番、第６７６番、第６９１番および第６９７番からなる群より選択される少なくとも一つのアミノ酸の変異である、請求項８に記載の医薬組成物。
  10. ＴＫＤ変異が、配列番号：１のアミノ酸配列における第６９１番のアミノ酸の変異である、請求項９に記載の医薬組成物。
  11. 配列番号：１のアミノ酸配列における第６９１番のアミノ酸の変異が、フェニルアラニンからロイシンへの置換である、請求項１０に記載の医薬組成物。
  12. ＦＬＴ３変異が、さらに、ＩＴＤ変異を含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  13. 請求項１〜４のいずれか一項に定義された化合物またはその塩を含む、ＴＫＤ変異を含む変異型ＦＬＴ３阻害剤。
  14. さらに、ＩＴＤ変異を含む、変異型ＦＬＴ３を阻害する、請求項１３に記載の剤。
  15. さらに、野生型ＦＬＴ３を阻害する、請求項１３または１４に記載の剤。
  16. 抗癌剤である、請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の剤。
  17. ＴＫＤ変異を含むＦＬＴ３変異の有無を検出する工程を含む、対象における請求項１〜４のいずれか一項に定義された化合物またはその塩を含む医薬組成物の投与による処置効果を予測する方法。
  18. ＴＫＤ変異を含むＦＬＴ３変異の有無を検出する試薬を含む、請求項１〜４のいずれか一項に定義された化合物またはその塩を含む医薬組成物を適用する対象の選択のためのキット。
  19. ＴＫＤ変異を含むＦＬＴ３変異の有無を検出する試薬を含む、請求項１〜４のいずれか一項に定義された化合物またはその塩を含む医薬組成物を対象に投与するか否かを決定するためのキット。
  20. ＦＬＴ３変異が、さらに、ＩＴＤ変異を含む、請求項１７に記載の方法。
  21. ＦＬＴ３変異が、さらに、ＩＴＤ変異を含む、請求項１８または１９に記載のキット。
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