JP2016514954A - 神経再生ペプチドおよびその使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本明細書に開示されたペプチドは、神経再生ペプチド(NRP)と命名された、新規に発見されたペプチドファミリーに属する。それらは、神経再生にとって重要な一連の生物学的機能を発揮する小ペプチドであり、ニューロンの生存、増殖、移動および分化の促進に関与する(非特許文献1;非特許文献2)。
ヒトCAPS−2は、シナプス前終末の小胞内で発現される。CAPS−2が豊富に存在する小胞はまた、NT3およびBDNFを有し、それ故、CAPS−2が神経保護に関与しうるであろうと考えられる(非特許文献5)。胚性および出生後組織に対して実施さ
れた試験によると、NRP2945が、生存、増殖、移動、および分化に関与することが示されている。特に、このペプチドは、酸化的および興奮毒性ストレスの間に細胞生存を促進することに関与する化学誘引物質として作用すると考えられる(非特許文献1)。
CCケモカイン受容体(βケモカイン受容体とも称される)は、CCケモカインファミリーのサイトカインに特異的に結合しかつ応答する膜内在性タンパク質である。それらは、Gタンパク質共役受容体のより大きなファミリーに属する、ケモカイン受容体の1つのサブファミリーを示す。CCR3は、エオタキシン(CCL11)、エオタキシン−3(CCL26)、MCP−3(CCL7)、MCP−4(CCL13)、およびRANTES(CCL5)を含む、複数の炎症性/誘導性ケモカインに対する受容体である(非特許文献6;非特許文献7;非特許文献8;非特許文献9;非特許文献10;非特許文献11;非特許文献12)。
二次損傷において発現されるSDF−1は、CXCR4を発現する悪性細胞の移動を方向づける化学誘引物質として機能する。すべてのがんの約75%が、調節不全のCXCR4遺伝子およびタンパク質発現の兆候を示し、それによりCXCR4はがんにおける重要な治療標的として認定されている。
GRRAAPGR−Aib−GG(NRP2945;配列番号l)
GRRAAPGRAGG(NNZ−4921;配列番号2)
GRRA−Aib−PGRAGG(配列番号5)
GRRAAPGRANG(配列番号6)
GRDRAAPGRAGG(配列番号7)
REGRRDAPGRAGG(配列番号8)
GRRAAPGR−β−Ala−GG(NRP2983)(配列番号9)
前述のとおり、CXCR4受容体は、炎症中の白血球の輸送、酵素分泌およびT細胞活性化に関与するGPCR型のケモカイン受容体である。過去10年間に、CXCR4がCNSにおいて広く発現されることが見出されている。さらに、CXCR4が、新皮質における介在ニューロンの移動を促進するために極めて重要であることが見出されている(スタム(Stumm)ら、2007年)。上述のとおり、CXCR4はまた、がん、過形成、および転移に関与している。さらに、CXCR4は、HIV−1の標的宿主細胞への侵入における主要な共受容体として同定されている。
NRP2945およびNNZ−4921媒介性のリガンド結合に応答する。
一態様では、本発明は、細胞内でCXCR4発現を下方制御する方法であって、細胞を、外因性NRP2945(配列番号l)、NNZ−4921(配列番号2)、NRP2983(配列番号9)またはその機能的類似体と接触させ、それによりCXCR4発現を下方制御するステップを含む、方法を包含する。
別の態様では、本発明は、患者におけるがんを治療するかまたは寛解させる方法であって、NRP2945(配列番号l)、NNZ−4921(配列番号2)、NRP2983(配列番号9)またはその機能的類似体を患者に投与し、それによりがんを治療するかまたは寛解させるステップを含む、方法を包含する。
って、NRP2945(配列番号l)、NNZ−4921(配列番号2)、NRP2983(配列番号9)またはその機能的類似体を患者に投与し、それにより腫瘍転移を予防または阻害するステップを含む、方法を包含する。
別の態様では、本発明は、配列番号9の神経再生ペプチドを含む組成物をさらに提供する。
定義
本明細書中の各事例において、本発明の説明、実施形態、および実施例において、用語「含む(comprising)」、「含む(including)」などは、限定することなく、拡大解釈されるべきである。したがって、文脈的に明確に他を必要としない限り、本明細書および特許請求の範囲の全体を通して、用語「含む(comprise)」、「含む(comprising)」などは、排他的意味ではなく包含的意味で、すなわち、「含むが限定されない」の意味で解釈されるべきである。
NRPの類似体は、天然アミノ酸の配列および立体構造を有するように作製してもよい。あるいは、NRP類似体は、以下のタイプの修飾、すなわち(1)βターンの安定化、(2)グリシン残基の置換、(3)N末端グリシン残基の置換、および/または(4)環化、のうちの1つ以上を含んでもよい。
ペプチド合成のための出発物質および試薬は、アルドリッチケミカル社(Aldrich Chemica Company)(ミルウォーキー、ウィスコンシン州)、バケム(Bachem)(トランス、カリフォルニア州)、およびシグマ(Sigma)(セントルイス、ミズーリ州)などの供給業者から得てもよい。あるいは、試薬は、当業者に周知の方法により調製してもよい。
)、ニューヨーク、ニューヨーク州、1992年;およびラロック(Larock)著、「コンプリヘンシブ・オーガニック・トランスフォーメーションズ(Comprehensive Organic Transformations)」、ブイシーエイチ・パブリッシャーズ(VCH Publishers)、1989年、などの参考文献中に記載されている。
Organic Chemistry)」、プレナム出版社(Plenum Press)、ニューヨーク、1973年において同定されている。
ノ酸と樹脂の間の結合を破壊することなくなされる必要がある。次のアミノ、また必要に応じて側鎖の保護アミノ酸は、次いで樹脂上のアミノ酸の遊離アミノ基に共役される。この共役は、2番目のアミノ酸の遊離カルボキシル基と樹脂に付着された最初のアミノ酸のアミノ基の間でのアミド結合の形成によって生じる。
本明細書中に示されるように、NRP2945およびNNZ−4921は、CXCR4アゴニストとして作用する。NRP2945およびNNZ−4921は、CXCR4/CCR3のヘテロ二量体複合体を原形質膜に能動的に動員するものと考えられる。さらに、NRPの結合活性化により、CXCR4遺伝子発現の即時型下方制御がもたらされる。これに基づき、NRP2945、NNZ−4921、およびその機能的類似体などのNRPは、細胞内でのCXCR4の立体配置およびレベルの双方を調節するために使用してもよ
い。これは、治療的有用性、ならびに当業者によって利用可能な様々なアッセイにおける有用性を有する。
on);シュタウディンガー(Staudinger)ら著、ヘルベティカ・キミカ・アクタ(Helv Chim Acta.)、第2巻、p.635、1919年;ゴロロボフ(Gololobov)ら著、4面体(Tetrahedron)、第37巻、p.437、1981年)、が挙げられる。
CNS損傷および障害
本明細書に示される実験結果に基づき、NRP2945、NNZ−4921、およびそ
の機能的類似体などのNRPは、中枢神経系(CNS:central nervous
system)におけるアポトーシスを介した細胞死を予防するために使用してもよい。特に、NRPは、作製し、CNS損傷または疾患を発症した患者に投与してもよい。
、刺痛、およびチクチクする感覚、触覚または筋力低下に対する感受性から、灼熱痛、筋消耗、麻痺、器官または腺の機能障害などのより極端な症状まで様々でありうる。
増殖性状態
本明細書に示されるように、NRP2945は、様々な増殖性状態、特に過形成、がん、および転移に関与している、CXCR4の発現を下方制御する。NRP2945はまた、CXCR4/CCR3を発現するがん細胞に対して抗浸潤性および抗移動性効果を有することが本明細書中に示されている。したがって、NRPは、ある範囲の増殖性状態に対する予防薬および/または治療薬において使用してもよい。NRP、特にNRP2945、NNZ−4921、およびその機能的類似体は、がん細胞の移動、浸潤、および/または転移を阻害するために使用してもよい。
よい。したがって、NRPは、単一の調製形態で使用される場合、有益な治療活性を示しうるが、同活性は、1つ以上の併用薬と併用される場合、さらに増強されうる。同時投与においては、典型的な化学療法薬は、アルキル化薬、代謝拮抗薬、抗生物質および植物由来の抗がん薬を含む。
スリンまたはインスリンと実質的に同じ活性を有する材料(例えば、インスリン、IGF(インスリン様成長因子:insulin−like growth factor)−1、IGF−2など)、FGF(線維芽細胞成長因子:fibroblast growth factor)、FGFと実質的に同じ活性を有する材料(例えば、酸性FGF、塩基性FGF、KGF(ケラチノサイト成長因子:keratinocyte colony stimulating factor)、FGF−10など)、または他の細胞成長因子(例えば、G−CSF(顆粒球コロニー刺激因子:granulocyte cology stimulating factor)、EPO(エリスロポエチン:erythropoietin)、IL−2(インターロイキン2:interleukin−2)、NGF(神経成長因子:nerve growth factor)、PDGF(血小板由来成長因子:platelet−derived growth factor)、TGF−β(トランスフォーミング成長因子:transforming growth factor)、HGF(肝細胞成長因子:hepatocyte growth factor)、VEGF(血管内皮成長因子:vascular endothelial growth factor)など)、を含んでもよい。
CXCR4は、心不全を有する患者において過剰発現され、本明細書中に示されるように、NRP2945は、CXCR4の発現を下方制御する。したがって、NRP2945、NNZ−4921、およびその機能的類似体などのNRPは、心不全および他の心血管疾患のための予防薬および/または治療薬において使用してもよい。
culation)、第119巻(14)、p.1977〜2016、2009年を参照。
CXCR4シグナル伝達は、膵島細胞の発生にとって必要である。本明細書に示されるように、NRP2945およびNNZ−4921などのNRPは、CXCR4アゴニストであり、CXCR4/CCR3のヘテロ二量体に結合する。したがって、NRP2945、NNZ−4921、およびその機能的類似体などのNRPは、糖尿病、特に膵β細胞がCXCR4およびCCR3を同時発現させる1型糖尿病のための予防薬および/または治療薬において使用してもよい。
体重減少、糖尿病性ケトアシドーシスに関連しており、最終的に神経(糖尿病性神経障害)および眼の小血管(糖尿病性網膜症)、腎臓(糖尿病性腎症)、および心臓に損傷をもたらし、また心臓発作および脳卒中を誘発しうる大動脈のアテローム動脈硬化症に人を罹患させる可能性がある。NRPは、これらの糖尿病状態の発症を停止または遅延させるのに有用でありうる。
NRP2945、NNZ−4921、およびその機能的類似体などのNRPは、患者への直接投与を介して使用してもよい。特に、1つ以上のNRPは、治療薬として調製し、使用してもよい。ペプチドは、薬物または薬剤の一部として投与してもよい。これは、NRPに、任意の薬学的に適切な担体、アジュバント、または賦形剤を結合させることを含んでもよい。さらに、NRPは、他の非NRP神経保護剤または他の治療薬とともに使用してもよい。担体、アジュバント、または賦形剤の選択は、利用される投与経路に左右されうる。
組成物は、上記のCNS細胞保護のため、治療有効量(例えば予防をもたらす量)でのヒトまたは他の哺乳類への非経口投与を意図して製剤化してもよい。特定の投与経路は、皮下注射(例えば、0.9%塩化ナトリウム中に溶解)および経口投与(例えば、カプセル剤中)を含む。
ドニソン(methylprednisone)の併用療法)。この投与時間は限定されない。NRPおよび併用薬は、同時にまたは様々な時刻に被験体に投与してもよい。併用薬の用量は、臨床的に採用される通常用量に従ってもよく、また投与対象、投与経路、疾患状態、組み合わせなどに応じて適切に決定してもよい。
投与されるべきNRP、例えば、NRP2945、NNZ−4921、またはその機能的類似体の有効量の決定は、当業者の技能の範囲内であり、かつ当業者にとって一般的なものである。特定の実施形態では、使用されるべきNRPの量は、本明細書に記載のアッセイ系を用いたインビトロ試験によって評価してもよい。投与されるべきNRPの最終量は、投与経路、使用されるNRPや治療されるべき障害または状態の性質に左右されることになる。
technology)に基づいて使用してもよい。
混合することにより、製剤化してもよい。許容できる担体とはすなわち、用いられる用量および濃度でレシピエントに対して無毒でありかつ製剤(formulation)の他の成分と適合できるものである。例えば、製剤は、好ましくは、ペプチドに対して有害であることが知られている酸化剤および他の化合物を含まない。
ある。緩衝液、保存剤、抗酸化剤などは、承認された薬務に従って、組み込んでもよい。
本明細書に記載の実施例は、本発明の特定の実施形態を例示する目的のために提供され、決して本発明を限定することを意図していない。当業者は、本明細書中の開示および教示内容を利用し、過度の実験を行うことなく、他の実施形態および変形形態を作成することができる。すべてのかかる実施形態および変形形態は、本発明の一部であると考えられる。
ヒトES細胞(hESC:human embryonic stem cells)を用いる実験は、NHMRCの指針および規制に従い、またオースティン・ヘルス・ヒューマン・リサーチ・エシックス・コミッティ(Austin Health Human
Research Ethics Committee)(承認番号H2008/03194)、およびメルボルン大学ヒューマン・リサーチ・エシックス・コミッティ(University of Melbourne Human Research Ethics Committee)(承認番号0605017)の承認の下で行った。H9(WA−09、ワイセル(WiCell))細胞株は、前述のように成長させた(ドットリ(Dottori)およびペラ(Pera)、2007年)。
レプトマイシンおよび20%のノックアウト血清代替物(全部がインビトロジェン(Invitrogen)製)を添加した、DMEM/栄養素混合物F−12からなるKSR培地中のマイトマイシンCで処理されたヒト包皮線維芽細胞(HFF;アメリカ培養細胞系統保存機関、CRL−2097)において培養した。
ニューロン分化は、ヒトニューロスフェアについてドットリ(Dottori)によって適応された、マウスニューロスフェアについて記載されたノギン誘導方法を用いて行った(ドットリ(Dottori)およびペラ(Pera)、2007年)。コロニーは、500ng/mlのノギンを添加したhESC培地中、5%CO2下、37℃で14日間維持する一方、ノギンを一日おきに交換した。
実験の当日、培地を、通常の抗酸化剤が欠如したB27調製物(インビトロジェン(Invitrogen);10889−038)を含有するNBM+N2に変更し、その交絡効果を排除した(NBM−AO)。
等張圧条件を維持するため、25mMの2−デオキシ−D−グルコースを、上記のように、NBM−AO培地に添加し、最初の培地変更前に室温で30分間平衡化した。1fM〜100pMの範囲で増加する濃度のNRP2945を、損傷誘発時に細胞に添加した(グリコシン(GlycoSyn)、ローワーハット、ニュージーランド)。培養上清を、この4時間が経過後に除去し、乳酸脱水素酵素(LDH)活性について分析するまで、4℃で貯蔵した。
化ストレスを誘発するとともに、培養を4時間継続してLDHを測定し、H2O2を含まないNBM−AOを培養液に戻し、それを、LDHを再測定するまでさらに20時間維持した。濃度が1fM〜100pMの範囲のNRP2945を、酸化ストレス誘発時に細胞に添加した。
カバーガラスは、ニュージーランド・バイオラブ(New Zealand BioLabs)から入手した(サイズ18mm×18mm)。カバースリップは、150mmのペトリ皿内に1皿あたり8カバースリップで置いた。カバーガラスの両側は、無水エタノールに浸漬し、洗浄した。エタノールを廃棄し、オートクレーブしたミリQ(MilliQ)(登録商標)を添加し、カバーガラスの両側をリンスした。次いで、水を廃棄し、カバーガラスを層流下で風乾した。
子ラットとして、P3/4またはP7/8のいずれかをこの実験用に使用した(ウィスターラット)。
毒素の3−ニトロプロピオン酸およびグルタミン酸塩は、100倍の濃度で調製した。50mMの3−ニトロプロピオン酸(シグマ(Sigma))について、NaOHで7〜7.2のpH値に保存液を滴定した。50mMのL−グルタミン酸塩については、これを加熱(熱水)下で溶解した。
4%パラホルムアルデヒド(PFA:paraformaldehyde)溶液は、4gのPFA/100mlのPBSおよび100μlの1N NaOH(最終が1mM NaOH)を用いて調製した。
ヒト上皮DU−145細胞は、アメリカ培養細胞系統保存機関から得た(HTB−81)。DU−145細胞株は、脳内で形成された転移性の前立腺由来のがんから元は単離された。同細胞は、接着性があり、神経芽細胞およびニューロンに類似したCXCR4およびCCR3受容体を同時発現する。この実験においては、DU−145細胞を、5%CO
2中で10%FBSを有するアメリカ培養細胞系統保存機関で調合されたイーグル最小必須培地中、37℃で培養した。次いで、同細胞を、次のように継代培養した。
ボイデンチャンバーインサート(コーニング(Corning))は、100μg/mlのポリ−D−リジン(PDL;インビトロジェン(Invitrogen)製培養グレード)で、37℃で2時間コーティングした。インサートは、PBSで1回リンスした。底板は、0.001%BSA/PBS中、100pg/mlのNRP2945で一晩コーティングした。次いで、底板はPBSで1回リンスした。その後、コーティングしたボイデンチャンバーは、細胞播種のため、冷却し、貯蔵し、準備することができた。
細胞は、上記のようにトリプシン処理した。トリプシン処理は、余分な完全成長培地の添加によって停止させた。その後、細胞を遠心分離(4℃、1500rpmで5分間)により採取し、約500万個の細胞/mlの目標濃度にて新しい培地中で再構成した。典型的な実験では、12ウェルプレートあたり約0.3mlの細胞懸濁液が必要であった。
NRP2945がCXCR4受容体の活性化を通じて作用するか否かを評価するため、2つの追加的な実験を実施した。
行った。
フォワード:AGCTGTTGGCTGAAAAGGTGGTCTATG(27−mer)(配列番号15)(刊行物:ナガセ(Nagase)、ミヤマス(Miyamasu)ら著(2000年)− ジャーナル・オブ・イムノロジー(J Immunol)、第164巻、p.5935−5943による)
リバース:GCGCTTCTGGTGGCCCTTGGAGTGTG(26−mer)(配列番号16)
実施例13:統計学的分析
マルチウェルプレート内の周辺ウェルからの示差的蒸発(differential evaporation)のため導入される系統的バイアスの潜在的な影響を最小にするため、これらのウェルは、培養には使用しないが内部試験用ウェルと同じ容量の培地で満たした。時間および資源の制約のため、インキュベーターの使用を各々の温度条件ごとに無作為化することはできなかった。トンネル(Tunnel)陽性細胞の計測前、ウェルは画像化し、画像は定量前に別々に再符号化した。機械で読み込むLDHアッセイプロセスにおいて、追加的な結合は全く行わなかった。
ヒト染色体13ql3.2は、大発作てんかん、双極性障害および自閉症の形態における既知の感受性遺伝子座である。NRP領域内の唯一知られたESTは、ヒト子宮EST(ジェンバンク(GenBank):DB276481;イントロンを含む)である。米国特許第7767786号明細書は、特定のNRP13ql3.2スプライスバリアントについて報じている。USB2における先に公表されたスプライスバリアントと比較すると、エクソン1は、異なる同一性を有する。全コーディング配列は、3つのエクソンに短縮される。完全コーディング配列は、115のアミノ酸長のタンパク質をコードする345の核酸長を有する。完全長NRP配列は、非古典的な分泌経路を介して分泌されると考えられる。
mRNAを、標準的手順に従って抽出した(インビトロジェン(Invitrogen)製トリアゾール(TRIzole)(登録商標)またはキアゲン(Qiagen)製RNイージーミニ(RNeasy Mini))。DNアーゼI(DNAseI)インキュベーション混合物を用い、mRNA画分を、DNアーゼI(DNAseI)処理に供した。この処理においては、10μlのDNアーゼI(DNAseI)ストック+70μlの緩衝液をmRNA調製物に添加し、室温で5分間インキュベートした。次いで、cDNA合成を、標準的手順に従って行った(インビトロジェン(Invitrogen)製スーパースクリプト(SuperScript)(登録商標)III逆転写酵素(Reverse Transcriptase))。
フォワードプライマー:humChrl3NRP−F2Aフォワード(25−mer)
5’−GCCTACATCCCTGTCTAGCAGCATC−3’(配列番号10)
リバースプライマー:humChrl3NRP−R2リバース(22−mer)
5’−CATTCTAAAACAAGGATCCAAG−3’(配列番号11)
PCR反応は、25.00μlの全容量を得るように、10倍緩衝液(2.50μl)、50mMのMgCl2(0.75μl)、10mMのdNTPs(0.50μl)、プライマー1(0.50μl)、プライマー2(0.50μl)、タック・ポリメラーゼ(Taq Polymerase)(0.10μl)、cDNA(1.00μl)、H2O(19.15μl)を含んだ。タックDNAポリメラーゼ(Taq DNA Polymerase)は、インビトロジェン(Invitrogen)から供給された(プラチナム(Platinum)(登録商標)タック・ポリメラーゼ(Taq Polymerase))。
NTERA−2(アメリカ培養細胞系統保存機関番号CRL−1973)は、染色体1、10、11および13の唯一のコピーを有するヒトがん由来の多能性細胞株である。これは、NRP発現の検出を意図して36サイクルのPCRを用いるための起動力であった
。
実施例17:遺伝子発現アッセイにおけるmRNAの採取
処理条件は、以下のとおりであった。1)正常酸素圧条件下での未処理対照;2)酸化ストレス下の未処理対照(pH:6.8〜7.0に滴定された50mMのストック(シグマ(Sigma))から得た0.5mMの3−ニトロプロピオン酸(3−NP));3)正常酸素圧条件下での1pMのNRP2945;および4)酸化ストレス下での1pMのNRP2945(0.5mMの3−NP)。すべての条件は、15分間、30分間、および60分間適用した。
ニューロンの損傷および死滅
酸素グルコース欠乏および酸化ストレスの双方により、4時間後、約37%の細胞死がもたらされた(図1参照)。50μΜのH2O2により、損傷の4時間後、3.7倍の酸化ストレスの増大が誘発された(図1A参照)。H2O2の除去により、最初の4時間以内の9%/時から、その後の20時間の約0.61%/時間に、細胞死の速度が低下した(図1参照)。
2945が、用量依存的な神経保護を提供することが示される。細胞死の有意な低下が1fMの濃度で見られ、そこでは細胞死は23.2%低下した(p≦0.037 95%CI 1.04〜45.3)(図1A)。10fMの濃度では、細胞死は40%低下した(p≦0.0001 95%CI 17.9−62.2)(図1A)。100fMでは、細胞死は44%低下した(p≦0.0001 95%CI 21.5〜65.8)(図1A)。1pMでは、細胞死は35%低下した(p≦0.0004 95%CI 13.50〜057.7)(図1A)。ここでは、対照における基本的損傷(basal injury)に対する補正が考慮される。
95%CI 25.9〜61.3)(図2A)。
では17%の低下がもたらされ(p≦0.032 95%CI 1.13〜34.7)、1pMでは28%の低下がもたらされ(p≦0.00001 95%CI 11.5〜45.1)、10pMでは44%の低下がもたらされ(p≦0.0001 95%CI 27.8〜61.4)、また100pMでは52%の低下がもたらされた(p≦0.0001 95%CI 35.6〜69.2)(図2C)。
3.8〜49.6)の低下、また100fMのNRP2945を投与した場合で、41%(p≦0.0001 95%CI 15.1〜68.5)、39%(p≦0.001 95%CI 12.5〜66.0)および27%(p≦0.04 95%CI 0.82〜54.3)の低下であった(各々、H2O2誘発の0時間後、1時間後、および3時間後に添加)(図3B)。3時間後の100fMのNRP2945添加によるLDH放出における正味の低下は、統計学的に有意である。
95%CI 18.6〜63.6)および100pMでは47%低下(p≦0.0001 95%CI 25.2〜70.2))、また損傷誘発の1時間後に認められた(10pMでは31%低下(p≦0.003 95%CI 9.1〜54.1)および100pMでは34%低下(p≦0.001 95%CI 11.2〜56.2))(図4A)。
35%(p≦0.001 95%CI 12.4〜65.4)および22%(p≦0.04 95%CI 0.8〜53.7)の低下であった(各々、0時間後、1時間後、および3時間後の添加時)(図4B)。3時間後の10pMおよび100pMのNRP2945添加によるLDH放出における正味の低下は、統計学的に有意である。
NRP2945がヒト神経細胞調製物中でCXCR4受容体を介してその細胞保護的効果を発揮するか否かを評価するため、本発明者らは、細胞を、CXCR4受容体の既知の合成拮抗剤である300nMのAMD3100に暴露した。本発明者らは、2つの異なる濃度のNRP2945を使用した。本発明者らは、a)OGDの間に神経保護効果を示さなかった100fM、およびb)OGD損傷の間に神経保護を確かに示した100pMといった濃度を選択した。
次いで、小脳顆粒細胞の生存を、実施例7に記載のように評価した。小脳微小外植片の成分を表す小脳顆粒細胞を、グルタミン酸塩および3−NPの毒性によって同時負荷した一方、NNZ−4921、エオタキシン−3およびAMD3100を同時投与した。細胞生存分析は、48時間後に実施した。特に、エオタキシン−3は、単独では、正常酸素圧下の細胞または酸化/興奮毒性ストレス下で維持された細胞に対して全く毒性作用を有しなかった(図6)。
およびCCR3)によって構成されなければならず、それによりこのヘテロ二量体複合体のアゴニズムを促進するという結論が導かれる。
以下の実験セットは、NRP2945を使用することで、W9−hESCとの接触後、CXCR4遺伝子発現を調節可能か否かを評価するために実施した。成長因子がその各々の標的ケモカイン受容体の遺伝子発現状態を調節可能であることは既知である。SDF−1およびCXCR4の発現レベルを評価する、幹細胞および神経前駆体細胞に関するいくつかの試験が実施されている。さらに、G−CSFが、培養されたNPCsの細胞培地へ添加されると、インキュベーションの24時間以内にCXCR4の上方制御を誘発することが示されている(キム(Kim)ら、2006年)。にもかかわらず、短い時間枠、すなわち数分以内でのCXCR4遺伝子発現の調節を示すデータは存在しない。
追加的な試験では、DU−145細胞(ヒト前立腺がん細胞)の運動性を、実施例9〜11に記載のように評価した。本発明者らは、NRP2945が、化学反発性に、ヒト前立腺がん由来のDU−145細胞の運動性/浸潤性を低下させる能力を有することを見出した。0.1ng/mlのRP2945のボイデンチャンバー底板への付着およびその後のDU−145細胞の播種は、インキュベーションの24時間後、移動細胞の36%の低下をまねいた(図9)。CXCR4のみを発現するがん細胞は、NRPとの接触後、運動性に関して全く効果を示さない。
性における有意な低下をまねいた。これは、神経幹細胞または初代神経細胞を用いかつNRP2945と同じコーティング濃度を適用する、先行的な走触性移動アッセイと好対照をなす。これらの先行実験によると、ニューロン移動における有意な増加が示された。例えば、米国特許第7563862号明細書を参照。特に、神経細胞の化学誘引を誘発する同一濃度のNRP2945は、ヒトDU−145細胞において示されるように、CXCR4およびCCR3受容体を同時発現するがん細胞に対して抑制的な遊走活性をもたらす。
実験データから、本発明者らは、次のように結論づけた。NRP結合活性化(例えば、NRP2945またはNNZ−4921による)は、CXCR4/CCR3ヘテロ二量体の形成を誘発し、CXCR4遺伝子発現の即時型下方制御をもたらす。特に、最終の細胞分化が、NRPが分化前の(pre−differentiated)神経幹細胞と接触してから開始されることから、CXCR4下方制御は好ましい生物活性である。したがって、NRP2945およびNNZ−4921などのNRPは、ヘテロ二量体CXCR4/CCR3複合体を原形質膜に動員する能力があると考えられる受容体アゴニストとして作用している。それと同時に、NRP2945およびNNZ−4921を含むNRPは、CXCR4/CCR3を発現するがん細胞に対するそれらの抗浸潤および抗移動効果において有用である。
ゴルバ(Gorba),Tら著、2006年、「神経再生タンパク質は新規な化学誘引および生存促進ペプチドである(Neural Regeneration Proteins are novel chemoattractive and survival promoting peptides)」、エクスペリメンタル・セル・リサーチ(Exp Cell Research)、第312巻、p.3060〜3074
シエグ(Sieg),Fおよびアントニック(Anionic),A著、2007年、「神経再生および神経発生における別の戦略(Alternative Strategies in Neuroregeneration and Neurogenesis)」、リサーチ・サインポスト・エディション(Research signpost
edition)(章、p.27〜58)、バレリア・ソゴス(Valeria Sogos)およびアンドレア・ダイアナ(Andrea Diana)編
スパイデル(Speidel),Dら著、2003年、「分泌性のCa2+依存性活性化タンパク質のファミリー:構造、発現、局在化、および機能の比較分析(A family of Ca2+−dependent activator proteins for secretion:comparative analysis of structure,expression,localization,and function)」、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J Biol Chem)、第278巻(52)、p.52802〜52809
ネデレック(Nedellec),Rら著、2009年、「代替の共受容体CCR3およびFPRL1を介したウイルス侵入はヒト免疫不全ウイルス1型サブタイプが異なる(Virus entry via the alternative coreceptors CCR3 and FPRL1 differs by human immunodeficiency virus type 1 subtype)」、ジャーナル・オブ・バイロロジー(J.Virol)、第83巻(17)、p.8353〜8363
セーガル(Sehgal),Aら著、1998年、「CXCR−4の分子キャラクタリゼーション:脳腫瘍関連遺伝子候補(Molecular characterization of CXCR−4:a potential brain tumor−associated gene)」、ジャーナル・オブ・サージカル・オンコロジー(J Surg Oncol)、第69巻(4)、p.239〜248
オー(Oh),SBら著、2001年、「ケモカインおよび糖タンパク質120は一次侵害受容ニューロンを直接興奮させることによって痛覚過敏をもたらす(Chemokines and glycoprotein 120 produce pain hypersensitivity by directly exciting primary nociceptive neurons)」、ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス(J Neurosci)、第21巻(14)、p.5027〜5035
シン(Singh),ATら著、2010年、「新規な神経再生ペプチド(NRP)による栄養膜の移動および生存の調節(Regulation of trophoblast migration and survival by a novel neural regeneration peptide(NRP))」、生殖生体医学オンライン(Reprod Biomed Online)、第21巻(2)、p.237〜244
グプタ(Gupta),SKら著、1999年、「ヒト単球およびマクロファージの分化過程でのCXCR4発現およびSDF−1α機能活性の調節(Modulation of CXCR4 expression and SDF−1 alpha functional activity during differentiation of human monocytes and macrophages)」、ジャーナル・オブ・ロイコサイト・バイオロジー(J Leuco Biol)、第66巻(1)、p.135〜143
ヤング(Yang),Jら著、2012年、「ブタ神経前駆細胞における分化誘導過程での遺伝子転写における定量的変化(Quantitative changes in
gene transcription during induction of differentiation in porcine neural progenitor cells)」、モレキュラー・ビジョン(Mol Vis)、第18巻、p.1484〜1504
ヨシダ(Yoshida),Nら著、2011年、「活性化B細胞上でのCXCR4発現はCD63およびIL−21によって下方制御される(CXCR4 expression on activated B cells is downregulated
by CD63 and IL−21)」、ジャーナル・オブ・イムノロジー(J Immunol)、第186巻(5)、p.2800〜2808
ダラシュ−ヤハナ(Darash−Yahana),Mら著、2004年、「腫瘍成長、血管新生、および転移における高い発現レベルのCXCR4の役割(Role of high expression levels of CXCR4 in tumor
growth,vascularization,and metastasis)」、ファセブ・ジャーナル(FASEB J)、第18巻(11)、p.1240〜1242
ファン・デル・ミアー(Van der Meer),Pら著、2001年、「発生するヒト脳におけるCXCR3、CXCR4、およびCCR3ケモカイン受容体の発現パターン(Expression pattern of CXCR3,CXCR4,and
CCR3 chemokine receptors in the developing human brain)」、ジャーナル・オブ・ニューロパソロジー・アンド・エクスペリメンタル・ニューロロジー(J Neuropathol Exp Neurol)、第60巻(1)、p.25〜32
スタム(Stumm),RKら著、2002年、「成体脳におけるSDF−1/CXCR4ケモカイン受容体系における2つの役割:SDF−1発現のアイソフォームの選択的
調節は、局所虚血後のCXCR4依存性の神経可塑性および脳の白血球の動員を調節する(A dual role for the SDF−1/CXCR4 chemokine receptor system in adult brain:isoform−selective regulation of SDF−1 expression modulates CXCR4−dependent neuronal plasticity and cerebral leukocyte recruitment after focal ischemia)」、米国神経科学会雑誌(J Neurosci)、第22巻(14)、p.5865〜5878
マインズ(Mines),MAら著、2009年、「USP14によるCXCR4の脱ユビキチン化は、ERK活性化と異なり、CXCL12誘発性のCXCR4分解および化学走性の双方にとって重大である(Deubiquitination of CXCR4 by USP14 is critical for both CXCL12−induced CXCR4 degradation and chemotaxis but not ERK activation)」、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J Biol Chem)、第284巻(9)、p.5742〜5752
コンテント(Contento),RLら著、2008年、「CXCR4−CCR5:T細胞機能を調節する対(CXCR4−CCR5:a couple modulating T cell functions)」、プロナス(PNAS)、第105巻(29)、p.10101〜10106
ピアソン(Pearson)LLら著、2001年、「単核球細胞内でのCD40媒介性シグナル伝達:腫瘍壊死因子受容体関連因子mRNAの上方制御およびマイトジェン活性化プロテインキナーゼシグナル伝達経路の活性化(CD40−mediated signaling in monocytic cells:up−regulation
of tumor necrosis factor receptor−associated factor mRNAs and activation of mitogen−activated protein kinase signaling pathways)」、インターナショナル・イムノロジー(Int Immunol)、第13巻(3)、p.273〜283
ルオ(Luo),Yら著、2006年、「SDF1α/CXCR4シグナル伝達はラット神経前駆細胞内のβ−カテニン転写活性を刺激する(SDF1alpha/CXCR4
signalling stimulates beta−catenin transcriptional activity in rat neural progenitors)」、ニューロサイエンス・レターズ(Neurosci Lett)、第398巻(3)、p.291〜295
シュー(Xu),Hおよびヘイルショーン(Heilshorn),SC著、2012年、「CXCL12勾配におけるBDNFに増強される神経幹細胞の化学走性に関する微少流体研究(Microfluidic Investigation of BDNF−Enhanced Neural Stem Cell Chemotaxis in
CXCL12 Gradients)」、スモール(Small)、第9巻(4)、p.585〜595
ラタイチャク(Ratajczak),MZおよびキム(Kim),C著、2012年、「幹細胞動員におけるケモカイン受容体アゴニストの使用(The use of chemokine receptor agonists in stem cell mobilization)」、エキスパート・オピニオン・オン・バイオロジカル・セラピー(Expert Op Biol Ther)、第12巻(3)、p.287〜297
ドットリ(Dottori),Mおよびペラ(Pera),M著、2008年、「神経幹細胞、分子生物学における方法(Neural Stem Cells.Methods in Molecular Biology)」、シュプリンガーリンク(Spri
ngerLink)、第438巻、文献中の章:「ヒトES細胞の神経分化(Neural differentiation of human embryonic stem cells)」、p.19〜30、レスリー P.ワイナー(Leslie P.Weiner)編
ポナス(Ponath)ら著、「好酸球上に選択的に発現されるヒトエオタキシン受容体の分子クローニングおよび特徴づけ(Molecular cloning and characterization of a human eotaxin receptor expressed selectively on eosinophils)」、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディスン(J.Exp.Med.)、第183巻、p.2437〜48、1996年
アウクルスト(Aukrust)ら著、「うっ血性心不全を有する患者におけるC−Cケモカインの循環レベルの上昇(Elevated circulating levels of C−C chemokines in patients with congestive heart failure)」、サーキュレーション(Circulation)、1998年、第97巻(12)、p.1136〜43
ダマス(Damas)ら著、「ヒト末期心不全におけるCC−およびCXC−ケモカインおよびそれらの受容体の心筋での発現(Myocardial expression
of CC− and CXC−chemokines and their receptors in human end−stage heart failure)」、カルジオバスキュラー・リサーチ(Cardiovasc Res.)、2000年、第47巻(4)、p.778〜87
ダマス(Damas)ら著、「静脈内免疫グロブリンの慢性心不全に対する調節性効果における単核血球中でのケモカインおよびその対応する受容体の促進された遺伝子発現(Enhanced gene expression of chemokines and their corresponding receptors in mononuclear blood cells in chronic heart failure−modulatory effect of intravenous immunoglobulin)」、ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・カレッジ・オブ・カーディオロジー(J Am Coll Cardiol.)、2001年、第38巻(1)、p.187〜93
カヤリ(Kayali)ら著、2012年、「SDF−lα/CXCR4軸はヒト胎児膵臓内分泌前駆細胞の増殖および成熟に必要である(The SDF−lα/CXCR4
Axis is Required for Proliferation and Maturation of Human Fetal Pancreatic Endocrine Progenitor Cells)」、プロス・ワン(PLoS ONE)、第7巻(6)、e38721
ドーハーティ(Daugherty)ら著、「ヒト好酸球エオタキシン受容体のクローニング、発現、および特徴づけ(Cloning,expression,and characterization of the human eosinophil eotaxin receptor)」、ジャーナル・オブ・エクスペリメンタル・メディスン(J.Exp.Med.)、第183巻(5)、p.2349〜54、1996年
ヨウン(Youn)ら著、「ロイコタクチン−1の分子クローニング:新規なヒトβ−ケモカイン、好中球、単球、およびリンパ球における化学誘引物質、およびCCケモカイン受容体1および3における強力なアゴニスト(Molecular cloning of leukotactin−1:a novel human beta−chemokine,a chemoattractant for neutrophils,monocytes,and lymphocytes,and a potent agonist at CC chemokine receptors 1 and 3)」、ジャーナル・オブ・イムノロジー(J.Immun.)、第159巻、p.5201〜5205、1997年
キタウラ(Kitaura)ら著、「ヒトエオタキシン、好酸球選択的CCケモカインの分子クローニング、および特異的な好酸球エオタキシン受容体、CCケモカイン受容体3の同定(Molecular cloning of human eotaxin,an eosinophil−selective CC chemokine,and
identification of a specific eosinophil
eotaxin receptor,CC chemokine receptor 3)」、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J.Biol.Chem.)、第271巻、p.7725〜7730、1996年
キタウラ(Kitaura)ら著、「CCケモカイン受容体3の機能的リガンドである新規なヒトCCケモカイン(エオタキシン−3)の分子クローニング(Molecular cloning of a novel human CC chemokine(Eotaxin−3)that is a functional ligand of
CC chemokine receptor 3)」、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー(J.Biol.Chem.)、第274巻、p.27975〜27980、1999年
パン(Pan)ら著、「粘膜組織内の上皮細胞によって発現されるCCR10およびCCR3に対する新規なケモカインリガンド(A novel chemokine ligand for CCR10 and CCR3 expressed by epithelial cells in mucosal tissues)」、ジャーナル・オブ・イムノロジー(J.Immunol.)、第165巻、p.2943〜2949、2000年
ホワイト(White)ら著、「CCR3受容体に結合し、ヒト好酸球を活性化する新規なヒトCCケモカインのクローニングおよび機能的特徴づけ(Cloning and
functional characterization of a novel human CC chemokine that binds to the CCR3 receptor and activates human eosinophils)」、ジャーナル・オブ・ルーコサイト・バイオロジー(J.Leukoc.Biol.)、第62巻、p.667〜675、1997年
本明細書中に記載されたすべての公表された書籍、論文、特許、および特許出願を含む各刊行物は、明確かつ完全に参照により本明細書中に援用される。
Claims (34)
- 細胞内でCXCR4発現を下方制御する方法であって、
前記細胞を、外因性NRP2945(配列番号l)、NNZ−4921(配列番号2)、NRP2983(配列番号9)またはその機能的類似体と接触させ、それによりCXCR4発現を下方制御するステップを含む、方法。 - 前記細胞が、がん細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が、腺がん型のがん細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が、前立腺がん細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が、神経細胞、神経幹細胞または神経前駆体細胞である、請求項1に記載の方法。
- がん細胞の移動を阻害する方法であって、
前記がん細胞を、外因性NRP2945(配列番号l)、NNZ−4921(配列番号2)、NRP2983(配列番号9)またはその機能的類似体と接触させ、それにより前記移動を阻害するステップを含む、方法。 - 前記がん細胞が、腺がん細胞である、請求項6に記載の方法。
- 前記がん細胞が、前立腺がん細胞である、請求項6に記載の方法。
- がん細胞による組織の浸潤を阻害する方法であって、
前記がん細胞を、外因性NRP2945(配列番号l)、NNZ−4921(配列番号2)、NRP2983(配列番号9)またはその機能的類似体と接触させ、それにより前記浸潤を阻害するステップを含む、方法。 - 前記がん細胞が、腺がん細胞である、請求項9に記載の方法。
- 前記がん細胞が、前立腺がん細胞である、請求項9に記載の方法。
- 腫瘍転移を阻害する方法であって、前記腫瘍を、外因性NRP2945(配列番号l)、NNZ−4921(配列番号2)、NRP2983(配列番号9)またはその機能的類似体と接触させ、それにより腫瘍転移を阻害するステップを含む、方法。
- 前記腫瘍が、腺がん型腫瘍である、請求項12に記載の方法。
- 前記腫瘍が、前立腺腫瘍である、請求項12に記載の方法。
- 患者におけるがんを治療するかまたは寛解させる方法であって、
NRP2945(配列番号l)、NNZ−4921(配列番号2)、NRP2983(配列番号9)またはその機能的類似体を前記患者に投与し、それにより前記がんを治療するかまたは寛解させるステップを含む、方法。 - 前記がんが、腺がん型のがんである、請求項15に記載の方法。
- 前記がんが、前立腺がんである、請求項15に記載の方法。
- 患者における腫瘍転移を予防または阻害する方法であって、
NRP2945(配列番号l)、NNZ−4921(配列番号2)、NRP2983(配列番号9)またはその機能的類似体を前記患者に投与し、それにより腫瘍転移を予防または阻害するステップを含む、方法。 - 前記腫瘍が、腺がん型腫瘍である、請求項18に記載の方法。
- 前記腫瘍が、前立腺腫瘍である、請求項18に記載の方法。
- 損傷によるニューロンにおけるアポトーシスを阻害する方法であって、
前記ニューロンを、外因性NRP2945(配列番号l)、NNZ−4921(配列番号2)、NRP2983(配列番号9)またはその機能的類似体と接触させ、それによりアポトーシスを阻害するステップを含む、方法。 - 前記損傷が、機械的損傷、酸化的損傷、酸素およびグルコース欠乏による損傷、または毒素による損傷である、請求項21に記載の方法。
- 患者におけるCNS損傷によるニューロンのアポトーシスを予防または阻害する方法であって、
NRP2945(配列番号l)、NNZ−4921(配列番号2)、NRP2983(配列番号9)またはその機能的類似体を前記患者に投与し、それによりアポトーシスを阻害するステップを含む、方法。 - 前記CNS損傷が、虚血傷害、外傷による損傷、または神経性疾患による損傷である、請求項23に記載の方法。
- CXCR4/CCR3ヘテロ二量体形成を促進する方法であって、
前記細胞を、外因性NRP2945(配列番号l)、NNZ−4921(配列番号2)、NRP2983(配列番号9)またはその機能的類似体と接触させ、それによりCXCR4/CCR3ヘテロ二量体形成を促進するステップを含む、方法。 - 前記細胞が、がん細胞である、請求項25に記載の方法。
- 前記細胞が、腺がん型のがん細胞である、請求項25に記載の方法。
- 細胞内のCXCR4受容体を活性化させる方法であって、
前記細胞を、外因性NRP2945(配列番号l)、NNZ−4921(配列番号2)、NRP2983(配列番号9)またはその機能的類似体と接触させ、それにより前記CXCR4受容体を活性化させるステップを含む、方法。 - 前記細胞が、CNS細胞である、請求項28に記載の方法。
- 前記細胞が、ニューロンである、請求項28に記載の方法。
- 配列番号9の神経再生ペプチド。
- 配列番号9の神経再生ペプチドを含む組成物。
- 動物における神経細胞の欠損によって特徴づけられる神経障害を治療する方法であって
、
前記動物に、ある量の配列番号9または請求項32に記載の組成物を投与するステップを含む、方法。 - 前記神経障害が、筋萎縮性側索硬化症、神経毒性損傷、酸化的損傷、多発性硬化症、末梢神経障害、低酸素/虚血、外傷性脳損傷、視神経障害または糖尿病性末梢神経障害である、請求項33に記載の方法。
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Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007511210A (ja) * | 2003-10-31 | 2007-05-10 | ニューレン ファーマシューティカルズ リミテッド | 神経再生ペプチド及び脳損傷治療におけるそれらの使用方法 |
JP2009505944A (ja) * | 2005-05-06 | 2009-02-12 | ニューレン ファーマシューティカルズ リミテッド | 神経再生ペプチド及びそれらの使用方法 |
JP2011512322A (ja) * | 2007-10-17 | 2011-04-21 | ニューレン ファーマシューティカルズ リミテッド | 神経再生ペプチドの合成類似体 |
WO2012102625A2 (en) * | 2011-01-28 | 2012-08-02 | Curonz Holdings Company Limited | Therapeutic composition |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7700715B2 (en) * | 2000-11-27 | 2010-04-20 | Minerva Biotechnologies Corporation | Diagnostic tumor markers, drug screening for tumorigenesis inhibition, and compositions and methods for treatment of cancer |
US7563862B2 (en) * | 2001-08-24 | 2009-07-21 | Neuren Pharmaceuticals Limited | Neural regeneration peptides and methods for their use in treatment of brain damage |
WO2007011595A2 (en) * | 2005-07-15 | 2007-01-25 | Neuren Pharmaceuticals Limited | Neural regeneration peptides and antioxidants protect neurons from degeneration |
IL184627A0 (en) * | 2007-07-15 | 2008-12-29 | Technion Res & Dev Foundation | Agents for diagnosing and modulating metastasis and fibrosis as well as inflammation in a mammalian tissue |
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2014
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007511210A (ja) * | 2003-10-31 | 2007-05-10 | ニューレン ファーマシューティカルズ リミテッド | 神経再生ペプチド及び脳損傷治療におけるそれらの使用方法 |
JP2009505944A (ja) * | 2005-05-06 | 2009-02-12 | ニューレン ファーマシューティカルズ リミテッド | 神経再生ペプチド及びそれらの使用方法 |
JP2011512322A (ja) * | 2007-10-17 | 2011-04-21 | ニューレン ファーマシューティカルズ リミテッド | 神経再生ペプチドの合成類似体 |
WO2012102625A2 (en) * | 2011-01-28 | 2012-08-02 | Curonz Holdings Company Limited | Therapeutic composition |
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