JP6640725B2 - ｓｐａｄｉｎのレトロ−インベルソ類似体は増大された抗うつ作用を示す - Google Patents
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Description
(発明の分野)
本発明は、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を含有する、組成物、医薬組成物及び生分解性医薬組成物に関する。spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を使用して、うつ病を治療するための方法、並びにTREK-1チャネル活性を阻止するための方法も開示する。
本発明は、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を含有する、組成物、医薬組成物及び生分解性医薬組成物に関する。spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を使用して、うつ病を治療するための方法、並びにTREK-1チャネル活性を阻止するための方法も開示する。
(本発明の背景)
うつ病は、荒廃的な精神神経障害であり、集団の約20%が罹患している。うつ病は、今後10年、世界的に、病的状態の主要な原因となることが予測され、重大な経済的負担を引き起こすこととなる(Greenberg,P.E.らの文献、「アメリカ合衆国におけるうつ病の経済的負担:これは1990年から2000年の間にどのように変化したか?(The economic burden of depression in the United States: how did it change between 1990 and 2000?)」J Clin Psychiatry 64,1465(2003);Moussavi,S.らの文献、「うつ病、慢性疾患、及び健康の減衰:世界保健調査(World Health Surveys)からの結果(Depression,chronic diseases,and decrements in health: results from the World Health Surveys)」Lancet 370,851(2007))。うつ病は、疲労、快感消失、悲観、易怒性、睡眠障害、食欲の増大又は低下、罪悪感(guiltiness)、及び自殺傾向のような多くの症状を特徴とする、多因子性及び多重遺伝子性疾患である。(Nestler,E.J.らの文献、「うつ病の神経生物学(Neurobiology of depression)」Neuron 34,13(2002))。60年前の抗うつ治療は、三環系抗うつ薬及びモノアミン酸化酵素阻害剤の発見によって革命がもたらされた。後に、選択的セロトニン再取り込み阻害剤又はノルエピネフリン選択的再取り込み薬を含む、第二世代の抗うつ薬が開発された。その有効性にもかかわらず、患者のおよそ3分の1は、これらの薬物には応答しないままであり、また、抗うつ薬は、いくらかの有害な副作用を示し、かつ作用の開始までが少なくとも2週間と長い(Sicouri,S.らの文献、「抗うつ薬及び抗精神病薬に伴って心臓性突然死が起こる(Sudden cardiac death secondary to antidepressant and antipsychotic drugs)」Expert Opin Drug Saf 7,181(2008))。さらに、うつ病を発見及び予防することは、費用がかかり、アメリカ合衆国だけで1年で約530億ドルと推定される。
うつ病は、荒廃的な精神神経障害であり、集団の約20%が罹患している。うつ病は、今後10年、世界的に、病的状態の主要な原因となることが予測され、重大な経済的負担を引き起こすこととなる(Greenberg,P.E.らの文献、「アメリカ合衆国におけるうつ病の経済的負担:これは1990年から2000年の間にどのように変化したか?(The economic burden of depression in the United States: how did it change between 1990 and 2000?)」J Clin Psychiatry 64,1465(2003);Moussavi,S.らの文献、「うつ病、慢性疾患、及び健康の減衰:世界保健調査(World Health Surveys)からの結果(Depression,chronic diseases,and decrements in health: results from the World Health Surveys)」Lancet 370,851(2007))。うつ病は、疲労、快感消失、悲観、易怒性、睡眠障害、食欲の増大又は低下、罪悪感(guiltiness)、及び自殺傾向のような多くの症状を特徴とする、多因子性及び多重遺伝子性疾患である。(Nestler,E.J.らの文献、「うつ病の神経生物学(Neurobiology of depression)」Neuron 34,13(2002))。60年前の抗うつ治療は、三環系抗うつ薬及びモノアミン酸化酵素阻害剤の発見によって革命がもたらされた。後に、選択的セロトニン再取り込み阻害剤又はノルエピネフリン選択的再取り込み薬を含む、第二世代の抗うつ薬が開発された。その有効性にもかかわらず、患者のおよそ3分の1は、これらの薬物には応答しないままであり、また、抗うつ薬は、いくらかの有害な副作用を示し、かつ作用の開始までが少なくとも2週間と長い(Sicouri,S.らの文献、「抗うつ薬及び抗精神病薬に伴って心臓性突然死が起こる(Sudden cardiac death secondary to antidepressant and antipsychotic drugs)」Expert Opin Drug Saf 7,181(2008))。さらに、うつ病を発見及び予防することは、費用がかかり、アメリカ合衆国だけで1年で約530億ドルと推定される。
ヒトにおけるうつ病以外に、例えば、イヌ、ネコ、ウマ、サル、ラット、鳥などを含めた動物も、抑うつ状態になる。動物におけるうつ病の徴候は、非活動性、食欲の変化、睡眠習慣の変化、引きこもりになること、又は非活動的になることによって明らかになる。Eli Lillyは、イヌのうつ病を調査し、アメリカ合衆国単独における1040万匹のイヌすなわち17%が、分離不安、すなわちイヌのあるタイプのうつ病を患っていることが判明した。薬物Reconcile(登録商標)(Prozac(登録商標))を、これらの動物に投与した場合、73%のイヌが、行動の改善によって示される通り、抑うつ性が低かった。
カリウムチャネルTREK-1の阻害が、抗うつ表現型をもたらすことが、以前に実証された(Heurteaux,C.らの文献、「背景カリウムチャネルTREK-1の欠損は、うつ病抵抗性の表現型をもたらす(Deletion of the background potassium channel TREK-1 results in a depression-resistant phenotype)」Nat Neurosci 9,1134(2006))。TREK-1チャネルは、各サブユニット中の二孔ドメインと4つの膜貫通部分を特徴とする独特の構造を有するカリウムチャネルのファミリーに属する(Ducroq,J.らの文献、「デクスラゾキサンは、急性のドキソルビシン誘発性QT延長から心臓を保護する:I(Ks)の主要な役割(Dexrazoxane protects the heart from acute doxorubicin-induced QT prolongation: a key role for I(Ks))」Br J Pharmacol 159,93(2010))。これらのイオンチャネルをコードする遺伝子は、KCNKと呼ばれている(Porsolt,R.D.らの文献、「うつ病:抗うつ治療に対して感受性がある新規動物モデル(Depression:a new animal model sensitive to antidepressant treatments)」Nature 266、730、(1977))。Kennardら(Santarelli,L.らの文献「抗うつ薬の行動上の効果のための海馬における神経発生の必要性(Requirement of hippocampal neurogenesis for the behavioral effects of antidepressants)」Science 301,805(2003))によって、フルオキセチン(Prozac(登録商標))及びその活性な代謝産物、ノルフルオキセチンが、ヒト二孔ドメインカリウムチャネルTREK-1を阻害することが実証された。
これは、TREK-1チャネルの特異的阻害剤に対する調査をもたらす(Mazella,J.らの文献「spadin、ソーティリンから得られるペプチド、げっ歯類TREK-1チャネルを標的にする:抗うつ薬設計における新構想(spadin,A sortilin-derived peptide,targeting rodent TREK-1 channels: a new concept in the antidepressant drug design)」PLoS Biol 8,e1000355(2010))。これは、心機能とTREK-1制御機能の両方に対する副作用なしに、抗うつ薬として利用できる(Moha Ou Maati,H.らの文献「新規抗うつ薬としてのspadin:TREK-1関連副作用の非存在(Spadin as a new antidepressant: absence of TREK-1-related side effects)Neuropharmacology 62,278(2012))。ソーティリン受容体の改変に由来する、spadinという名のペプチドが発見された(Mazella,J.らの文献「100-kDaニューロテンシン受容体は、gp95/ソーティリン、すなわち非G-タンパク質結合受容体である(The 100-kDa neurotensin receptor is gp95/sortilin,a non-G-protein-coupled receptor)」J Biol Chem 273、26273、(1998))。spadinは、ソーティリン受容体の翻訳後成熟中にゴルジ体中のフューリンによって放出される44アミノ酸のペプチド(PE、spadinのプロペプチドと呼ばれる)から設計された、17アミノ酸のペプチドである(Munck Petersen,C.らの文献「リガンド結合のためのプロペプチド切断条件ソーティリン/ニューロテンシン受容体-3(Propeptide cleavage conditions sortilin/neurotensin receptor-3 for ligand binding)」Embo J 18,595(1999))。spadinは、TREK-1カリウムチャネル電流を阻止することが可能であり、様々な行動試験において抗うつ作用を示す(Mazella,J.らの文献「spadin、ソーティリンから得られるペプチド、げっ歯類TREK-1チャネルを標的にする:抗うつ薬設計における新構想(Spadin,a sortilin-derived peptide,targeting rodent TREK-1 channels: a new concept in the antidepressant drug design)」PLoS Biol 8,e1000355(2010))。spadinは、DRN-5-HTニューロンの発火活性の増大によって証明される通り、5-HT神経伝達の有効性のインビボでの増大をもたらす。
さらに、他の抗うつ薬のように、spadinも、神経発生及びセロトニン作動性伝達を増大させる能力がある。有効になるまで21日を必要とする、使用される大抵の抗うつ薬とは異なり、spadinは、治療のわずか4日後にはこうした改善をもたらすことが可能であるので、作用がより迅速に開始する(Mazella,J.らの文献「spadin、ソーティリンから得られるペプチド、げっ歯類TREK-1チャネルを標的にする:抗うつ薬設計における新構想(Spadin,a sortilin-derived peptide,targeting rodent TREK-1 channels: a new concept in the antidepressant drug design)」PLoS Biol 8,e1000355(2010))。spadinは、K2Pカリウムチャネルファミリーでは、TREK-1チャネルに対して特異的である(Moha Ou Maati,H.らの文献「新規抗うつ薬としてのspadin:TREK-1関連副作用の非存在(Spadin as a new antidepressant: absence of TREK-1-related side effects)Neuropharmacology 62,278(2012))。さらに、TREK-1チャネルの活性化は、全身麻酔、多価不飽和脂肪酸を介する神経保護、疼痛、虚血、てんかんなどの様々な機能において有益であると実証された(Alloui,A.らの文献「TREK-1、多様な痛覚に関与するK+チャネル(TREK-1,a K+ channel involved in polymodal pain perception)」Embo J 25,2368(2006);Heurteaux,C.らの文献「α-リノレン酸及びリルゾール治療は、脳保護をもたらし、局所脳虚血後の生存を改善する(Alpha-linolenic acid and riluzole treatment confer cerebral protection and improve survival after focal brain ischemia)」Neuroscience 137,241(2006);Lauritzen,I.らの文献「多価不飽和脂肪酸は強力な神経保護因子である(Polyunsaturated fatty acids are potent neuroprotectors)」Embo J 19,1784(2000);Noel,J.らの文献「機械活性化K+チャネルTRAAK及びTREK-1は、温感及び冷感の両方を制御する(The mechano-activated K+ channels TRAAK and TREK-1 control both warm and cold perception)」Embo J 28,1308(2009))。それにもかかわらず、spadinによるTREK-1チャネルの遮断は、これらの機能を妨げなかった。言い換えれば、spadinには、TREK-1機能に関連する副作用がない(Moha Ou Maati,H.らの文献「新規抗うつ薬としてのspadin:TREK-1関連副作用の非存在(Spadin as a new antidepressant: absence of TREK-1-related side effects)Neuropharmacology 62,278(2012))。重要なことには、spadinは、心機能不全を引き起こさず、収縮期圧及び脈拍は、3週のspadin治療によって影響を受けず、また、spadinは、心臓における2つの最も重要な再分極電流(IKR IKS)を遮断することができなかった(Moha Ou Maati,H.らの文献「新規抗うつ薬としてのspadin:TREK-1関連副作用の非存在(Spadin as a new antidepressant: absence of TREK-1-related side effects)Neuropharmacology 62,278(2012))。まとめると、これらの特性は、spadinを新規抗うつ薬とみなすための証拠である。
しかし、抗うつ薬を摂取することは、長期の治療を伴うので、spadinを製剤化することが検討されるべきである。1日用量の製剤は、多くの患者が、彼らの薬を毎日摂取することを遵守しないという事実により、通常、有効ではない。さらに、spadinの生体利用効率を向上させて、そのペプチドを、プロテアーゼ加水分解に対してより抵抗性にすることもできるだろう。
したがって、本発明の一目的は、TREK-1阻害に基づく、うつ病のための新規標的を発見すること、及び、抗うつ活性を有する新規分子を開発することである。
別の目的は、向上された生体利用効率及び非常にわずかな副作用を有する、うつ病を治療するための組成物を発見することである。
さらに別の目的は、長い期間のために製剤化された医薬組成物を提供することである。
これらの目的及び他の目的は、発明の概要、好ましい実施態様の説明、及び特許請求の範囲によって証明される通り、本発明によって実現される。
(発明の概要)
本発明は、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物と、許容し得るビヒクルとを含む組成物を提供する。spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、レトロ-インベルソペプチド又はエンドキャップ処理ペプチドであり得る。spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体が、エンドキャップ処理される場合、これは、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される。
本発明は、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物と、許容し得るビヒクルとを含む組成物を提供する。spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、レトロ-インベルソペプチド又はエンドキャップ処理ペプチドであり得る。spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体が、エンドキャップ処理される場合、これは、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される。
別の態様では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、以下の群:
及びそれらの混合物から選択される、組成物が提供される。
本発明の別の態様では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、
と
である、組成物が提供される。
この組成物は、本明細書に記載する通り、蒸留水、緩衝液、グリセロール、ポリプロピレングリコール、生理食塩水(NaCl 0.9%)、リン酸緩衝生理食塩水・デキストロース、エタノール、及びそれらの混合物などの、許容し得るビヒクルを含有する。
さらに別の態様では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物と、医薬として許容し得るビヒクルとを含む医薬組成物が提供される。該spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体は、レトロ-インベルソペプチド又はエンドキャップ処理ペプチドであり得る。spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体が、エンドキャップ処理される場合、これは、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される。
別の態様では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、以下の群:
及びそれらの混合物から選択される、医薬組成物が提供される。
本発明のさらに別の態様では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、
と
である、医薬組成物が提供される。
この医薬組成物は、本明細書に記載する通り、蒸留水、緩衝液、グリセロール、ポリプロピレングリコール、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水・デキストロース、エタノール、及びそれらの混合物などの、許容し得るビヒクルを含有する。
さらに別の態様では、
(a)次式を有する生分解性トリブロック共重合体:
PLAv-PEGw-PLAx
(式中、v、w、及びxは、4から1090又は6から1090の範囲である反復単位の数であり、かつ、v=x又はv≠xである);
(b)次式を有する生分解性ジブロック共重合体:
mPEGy-PLAz
(式中、y及びzは、3から237又は7から371の範囲である反復単位の数であり、
ここでは、前記生分解性医薬組成物中の、(a)の生分解性トリブロック共重合体と(b)の生分解性ジブロック共重合体の比は、1:3から1:8又は1: 1から1:19又は3:2から1:19である)
を含む生分解性徐放性ビヒクル中に、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を含む、生分解性医薬組成物が提供される。
(a)次式を有する生分解性トリブロック共重合体:
PLAv-PEGw-PLAx
(式中、v、w、及びxは、4から1090又は6から1090の範囲である反復単位の数であり、かつ、v=x又はv≠xである);
(b)次式を有する生分解性ジブロック共重合体:
mPEGy-PLAz
(式中、y及びzは、3から237又は7から371の範囲である反復単位の数であり、
ここでは、前記生分解性医薬組成物中の、(a)の生分解性トリブロック共重合体と(b)の生分解性ジブロック共重合体の比は、1:3から1:8又は1: 1から1:19又は3:2から1:19である)
を含む生分解性徐放性ビヒクル中に、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を含む、生分解性医薬組成物が提供される。
前記生分解性医薬組成物中の、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、レトロ-インベルソペプチド又はエンドキャップ処理ペプチドであり得る。spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、エンドキャップ処理される場合、これは、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される。
別の態様では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、以下の群:
及びそれらの混合物から選択される、生分解性医薬組成物が提供される。
さらに別の態様では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、
である、生分解性医薬組成物。
本明細書に記載する通りの生分解性医薬組成物は、室温で注射可能な液体であり得、かつ体内に注射された場合に埋め込み体を形成する、又は固体小粒子又はロッド型埋め込み体又は空間的(spatial)製剤である。
本明細書に記載する通りの生分解性医薬組成物においては、ポリエチレングリコール鎖のサイズは、200Daから12kDa又は194Daから12kDaの範囲であり、エンドキャップ処理されたポリエチレングリコール鎖のサイズは、100Daから2kDa又は164から2kDAの範囲である。
さらに、本明細書に記載する通りの生分解性医薬組成物においては、前記類似体は、組成物全体の1%から20%(w%/w%)の量で存在し、前記ポリマーは、組成物全体の20%から50%(w%/w%)の量で存在し、前記トリブロック共重合体は、組成物全体の3.0%から45%(w%/w%)の量で存在し、前記ジブロック共重合体は、組成物全体の8.0%から50%(w%/w%)の量で存在する。
本明細書に記載する通りの生分解性医薬組成物においては、該組成物中の、エチレンオキシドに対するポリエステル反復単位のモル比は、トリブロック共重合体では0.5から3.5又は0.5から22.3、ジブロック共重合体では2から6又は0.8から13である。
本発明のさらに別の態様では、
(a)次式を有する生分解性トリブロック共重合体:
PLAv-PEGw-PLAx
(式中、v、w、及びxは、4から1090又は6から1090の範囲である反復単位の数であり、かつ、v=x又はv≠xである);
(b)次式を有する生分解性ジブロック共重合体:
mPEGy-PLAz
(式中、y及びzは、3から237又は7から371の範囲である反復単位の数であり、
ここでは、前記生分解性医薬組成物中の、(a)の生分解性トリブロック共重合体と(b)の生分解性ジブロック共重合体の比は、1:3から1:8又は1: 1から1:19又は3:2から1:19である)
を含む生分解性徐放性ビヒクル中に、
を含む、生分解性医薬組成物。
(a)次式を有する生分解性トリブロック共重合体:
PLAv-PEGw-PLAx
(式中、v、w、及びxは、4から1090又は6から1090の範囲である反復単位の数であり、かつ、v=x又はv≠xである);
(b)次式を有する生分解性ジブロック共重合体:
mPEGy-PLAz
(式中、y及びzは、3から237又は7から371の範囲である反復単位の数であり、
ここでは、前記生分解性医薬組成物中の、(a)の生分解性トリブロック共重合体と(b)の生分解性ジブロック共重合体の比は、1:3から1:8又は1: 1から1:19又は3:2から1:19である)
を含む生分解性徐放性ビヒクル中に、
本明細書に記載する通りの生分解性医薬組成物は、室温で注射可能な液体であり得、かつ体内に注射された場合に埋め込み体を形成する、又は固体小粒子又はロッド型埋め込み体又は空間的製剤である。
本明細書に記載する通りの生分解性医薬組成物においては、ポリエチレングリコール鎖のサイズは、200Daから12kDa又は194Daから12kDaの範囲であり、エンドキャップ処理されたポリエチレングリコール鎖のサイズは、100Daから2kDa又は164から2kDAの範囲である。
さらに、本明細書に記載する通りの生分解性医薬組成物においては、前記類似体は、組成物全体の1%から20%(w%/w%)の量で存在し、前記ポリマーは、組成物全体の20%から50%(w%/w%)の量で存在し、前記トリブロック共重合体は、組成物全体の3.0%から45%(w%/w%)の量で存在し、前記ジブロック共重合体は、組成物全体の8.0%から50%(w%/w%)の量で存在する。
本明細書に記載する通りの生分解性医薬組成物においては、該組成物中の、エチレンオキシドに対するポリエステル反復単位のモル比は、トリブロック共重合体では0.5から3.5又は0.5から22.3、ジブロック共重合体では2から6又は0.8から13である。
動物におけるうつ病を治療するための方法であって、こうした治療を必要とする動物に、医薬として許容し得る量の、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物と、医薬として許容し得るビヒクルとを投与することを含む前記方法が、本発明の別の態様である。
該生分解性医薬組成物においては、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、レトロ-インベルソペプチド又はエンドキャップ処理ペプチドであり得る。spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体が、エンドキャップ処理される場合、これは、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される。
動物におけるうつ病を治療するための方法における別の態様では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、以下の群から選択される:
及びそれらの混合物。
動物におけるうつ病を治療するための方法では、本明細書に記載する通り、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体は、
であり得る。
動物におけるうつ病を治療するための方法では、医薬として許容し得るビヒクルは、本明細書に記載する通りの、蒸留水、緩衝液、グリセロール、ポリプロピレングリコール、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水・デキストロース、エタノール、有機溶媒、及びそれらの混合物の群から選択することができる。
哺乳類におけるうつ病を治療するための方法であって、前記治療を必要とする前記動物に、本明細書に記載する通りの医薬として有効な量の生分解性医薬組成物を投与することを含む前記方法も、提供される。
さらに別の態様では、うつ病を治療するための医薬品の製造のための、本明細書に記載する通りの医薬組成物又は生分解性医薬組成物が提供される。
TREK-1チャネル活性を阻止するための方法であって、動物に、本明細書に記載する通りの、有効量の組成物、医薬組成物、及び/又は生分解性組成物を投与することを含む前記方法が提供される。
(好ましい実施態様の説明)
本明細書で使用する場合、用語「類似体」又は「ペプチド類似体」は、別の化合物と類似であるが同一ではない化合物を意味する。これに関して、本明細書に記載する通りの「ペプチド類似体」は、配列
を有する、spadinから改変されているペプチド、又は、配列
を有する完全なspadinプロペプチドを意味する。
本明細書で使用する場合、用語「類似体」又は「ペプチド類似体」は、別の化合物と類似であるが同一ではない化合物を意味する。これに関して、本明細書に記載する通りの「ペプチド類似体」は、配列
本発明の類似体を製造するための好ましい方法は、好ましい固相における化学合成を介する。任意の合成技術を使用することができ、これらの技術は、当業者に公知である。例として、ペプチドは、Kriegerらの文献、「合成ペプチドのアフィニティ精製(Affinity purification of synthetic peptides)」PNAS 73:3160-3164(1976)に記載されている手順を使用して配列決定することができる。
「改変される」は、一般に、D-アミノ酸、非天然アミノ酸、ペプチド主鎖修飾、環化、二次構造導入テンプレート、及びエンドキャップ処理ペプチドの使用などのペプチド模倣化学による、形態又は特徴の変化を意味する。用語「改変される」には、ペプチドレトロ-インベルソ異性化が含まれる。
「レトロ-インベルソペプチド」は、本明細書で使用する場合、逆転した配列のD-アミノ酸で構成され、かつ、伸長される場合には親ペプチドと類似の側鎖形態をとるが、反転されたアミド・ペプチド結合を有するペプチドを意味する。これに関して、本明細書に記載する通りのL-アミノ酸は、大文字であるのに対し、本明細書に記載する通りのD-アミノ酸は、小文字である。
レトロ-インベルソspadin類似体を製造するプロセスは、例えば、Bonelliらの文献、「レトロ-インベルソペプチド類似体の固相合成(Solid Phase synthesis of retro-inverso peptide analogs)」Int.J.Peptide-Protein Res.24、553-556(1984);Verdini及びVisomiの文献、「potent hypotensive レトロ-インベルソブラジキニン増強ペプチド5a(BPP5a)類似体の合成、分割、及び立体配置の割り当て(Synthesis,resolution and assignment of configuration of potent hypotensive retro-inverso bradykinin potentiating peptide 5a(BPP5a) analogs)」J.Chem.Soc.Perkin Trans I 607-701(1985)の手順を介する。
体循環に到達し、かつ薬物の原則薬物動態特性の一つである、変化しない薬物の投与される用量の割合が、本明細書で使用する場合の「生体利用効率」の定義である。
語句「エンドキャップ処理」とは、本明細書で使用する場合、N-末端及び/又はC-末端で修飾されているペプチドをいう。エンドキャップ処理とは、キャップを形成するような、ある化学部分の末端への付着をいう。エンドキャップ修飾は、一般的に、ペプチド末端の電荷を遮蔽すること、及び/又は疎水性、親水性、反応性、溶解度などの、その化学的特徴を変えることをもたらす。エンドキャップ処理はまた、エキソペプチダーゼ活性を制限する。ペプチドエンドキャップ修飾に適した部分の例は、例えば、Greenらの文献、「有機化学における保護基(Protective Groups in Organic Chemistry)」(Wiley、第2版1991)、及びHarrisonらの文献、「有機合成方法の概要(Compendium of Synthetic Organic Methods)」第1〜8巻(John Wiley and Sons、1971-1996)で見ることができる。一態様では、ペプチドは、N-末端でのアセチル化若しくはC-末端でのアミド化、又はN-末端でのアセチル化とC-末端でのアミド化の両方によってエンドキャップ処理することができる。
「spadin類似体活性」とは、そのspadin又はspadinプロペプチド同等物と比較した、TREK-1チャネルに対する親和性の増大、及び生体利用効率の増大を示す、spadin類似体とspadinプロペプチド類似体の両方、又はそれらの混合物をいう。
用語「動物」は、動物界のすべてのメンバーを包含する。
本明細書に記載する場合、「うつ病」は、動物の身体、気分、及び考えに関わる、また、動物が食べる、眠る、感じる、及び物事について考える方式に影響を与える、病気を意味する。例えば、ヒトでは、うつ病の徴候としては、かつて興味があった若しくは楽しめた活動への関心の喪失、食欲喪失、体重減少、若しくは体重増加を引き起こす過食、感情表現の喪失、持続的な悲しみ、不安又は不機嫌、絶望感、悲観、罪悪感、無価値若しくは無力感、社会的引きこもり、異常な疲労、低いエネルギーレベル、鈍化している気分、睡眠障害及び不眠;集中、記憶、若しくは決断困難、異常な焦燥感若しくは易怒性、頭痛、消化系障害、若しくは慢性痛などの持続性の身体的問題が挙げられる。
うつ病は、ヒトに限定されないが、イヌ、ネコ、ウマ、サル、ラット、鳥などの他の動物にも存在し得る。イヌにおけるうつ病の一般的な徴候としては、例えば、引きこもりになること、非活動的になること、食欲の変化、及び睡眠習慣の変化が挙げられる。
用語「うつ病」は、軽躁病、気分循環症、大うつ病、単極性障害、気分変調性障害、神経衰弱、双極性障害、急速交代型双極性障害、双極II型障害、青年期の双極性障害、双極性感情障害、小児双極性障害、躁うつ病(Manic Depressive Disorder)、産後うつ病、抑うつ、激越性うつ病、躁うつ病(Manic Depressive Psychosis)、うつ病性障害NOS、不快躁病、神経症性うつ病、仮面うつ病、内因性うつ病、産褥精神病、産後精神病、冬期うつ病-季節性感情障害(SAD)、外傷後ストレス障害、月経前不快気分障害(PMDD)、非定型うつ病、及びアルコール性うつ病を含めた、様々な型のすべてのうつ病を包含する。
「医薬として許容し得る量」は、その医薬的目的を満たす;すなわち、うつ病を治療するのに十分である、動物に投与される量を意味する。この量は、動物の大きさ及び重量によって異なり得る。
用語「治療する」は、本明細書で使用する場合、(1)うつ病の発症を遅延若しくは予防すること、又は(2)うつ病の進行、増悪、若しくは悪化を遅くする又は止めること、又は(3)うつ病の症状を引き起こす又は寛解させることを包含する。
「有効量」は、その所期の目的を満たす;すなわち、TREK-1チャネル活性を阻止するのに十分である、類似体spadin若しくはspadinのプロペプチドの類似体又はそれらの混合物の任意の量を意味する。
「少なくとも1種の」は、spadinの類似体若しくはspadinのプロペプチドの類似体又はそれらの混合物をいう場合、spadinの1種の類似体からspadinの最大16種の類似体を、製剤中で使用できることを意味する。同じことは、spadinのプロペプチドの類似体、並びにspadin類似体とspadinのプロペプチド類似体との混合物にも当てはまる。したがって、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、及び16種の、spadinの類似体又はspadinのプロペプチドの類似体又はそれらの混合物を、本明細書に記載する通りの組成物、本明細書に記載する通りの医薬組成物、及び本明細書に記載する通りの生分解性医薬組成物に製剤化する、並びに、本明細書に記載する通りの方法において使用することができる。
「本質的に〜からなる」は、本明細書で使用する場合、追加のアミノ酸を、spadin類似体若しくはspadinプロペプチド類似体又はそれらの混合物からの別のアミノ酸に付加する又は欠落させる又は修飾することができるが、類似体活性は変化させないことを意味する。例えば、ペプチドの一次配列を変えるが、その機能を通常は変えない、保存的なアミノ酸修飾を行うことができる。保存的なアミノ酸置換には、一般的に、次の群:グリシン、アラニン;バリン、イソロイシン、ロイシン;アスパラギン酸、グルタミン酸;アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、リジン、アルギニン;フェニルアラニン、及びチロシン内の置換が含まれる。
spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物と、許容し得るビヒクルとを含む組成物は、本発明の一態様である。この態様では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、レトロ-インベルソペプチドである、又は、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、エンドキャップ処理される。spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、エンドキャップ処理される場合、これは、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理することができる。
一態様では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、以下の群から選択される:
及びそれらの混合物。
さらに別の態様では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体は、
である。
本明細書に記載する通りの組成物は、許容し得るビヒクル中にある。spadin類似体又はプレプロspadinの類似体又はそれらの混合物の生理的特性を破壊しない、任意の許容し得るビヒクルを使用することができる。例としては、蒸留水、緩衝液、グリセロール、ポリプロピレングリコール、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水・デキストロース、エタノール、アジュバント、有機溶媒、例えば、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、ジエチレングリコールジメチルエーテル(ジグリム)、ジエチレングリコールモノエチルエーテル(DEGMEE)、ジメチルイソソルビド(DMI)、ジメチルスルホキシド(DMSO)、酢酸エチル、安息香酸エチル、乳酸エチル、酢酸エチレングリコールモノエチルエーテル、グリセロールホルマール、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、N-エチル-2-ピロリドン、N-メチル-2-ピロリジノン(NMP)、ピロリドン-2、テトラグリコール、トリアセチン、トリブチリン、トリプロピオニン(tripro)、若しくはトリエチレングリコールジメチルエーテル(トリグリム)、及びそれらの混合物、並びに許容し得るビヒクルの混合物が挙げられる。
許容し得るビヒクルは、0.5mlから3mlの量で存在する。別の態様では、許容し得るビヒクルは、0.01mlから2mlの量で存在する。さらに別の態様では、許容し得るビヒクルは、.005mlから2.5mlの量で存在する。
本発明の組成物は、様々な目的のために、例えば、本明細書に記載する通りのspadinの類似体、又は本明細書に記載する通りのspadinのプロペプチドの類似体、又は本明細書に記載する通りのspadinの前記類似体及びspadinのプロペプチドのその混合物に対するポリクローナル及びモノクローナル抗体を作製するために、使用することができる。これらのポリクローナル又はモノクローナル抗体は、本明細書に記載する通りのspadin類似体、又は本明細書に記載する通りのspadinのプロペプチド類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を同定又は数量化するための研究において使用することができる。これらは、動物由来の生体試料中の、本明細書に記載する通りのspadinの類似体、又は本明細書に記載する通りのプロペプチドspadinの類似体、又は本明細書に記載する通りのこれらの類似体の混合物の存在及びレベルを試験するための診断法において使用することもできる。
本明細書に記載する組成物を、標識して、研究における又は診断法における使用のために、本明細書に記載する通りのspadinの類似体、又は本明細書に記載する通りのspadinのプロペプチドの類似体、又は本明細書に記載する通りの類似体のその混合物の量について試験するためのプローブとして使用することができる。本明細書に記載する通りの組成物は、蛍光標識、化学発光剤、リガンド、放射性核種、リン光基、色素、放射能、例えば32P、3H、18F、35S、135I、125I、123I、64Cu、187Re、111IN、90Y、99mTc、177Lu、及び14C、ビオチン/ストレプトアビジン、酵素などで標識することができる。これらのプローブを、RIA、ELISA、EIAなどのイムノアッセイにおいて使用することができる。これらは、動物における又は研究目的のための生体試料を試験するために使用される。
本明細書に記載する通りの本発明の診断的態様では、生体試料は、動物に由来する任意の生体試料である。これらの生体試料としては、血液、血漿、組織、尿、脳脊髄液、毛髪、爪などが挙げられる。
本発明はまた、キットを含む。キットは、本発明の組成物と許容し得るビヒクルとを含有することができる。キットは、例えば、合わせた組成物と許容し得るビヒクルとを伴うたった一つのバイアルを含有することができる。或いは、あるバイアル中の組成物と、別のバイアル中の許容し得るビヒクルを含有する、2つの別のバイアルが存在することができる。
キット中には、該組成物に加えて、免疫反応を実施するのに不可欠な試薬と共に、モノクローナル及び/又はポリクローナル抗体が存在することができる。或いは、プローブも、不可欠な試薬と共に、キット中に存在することができる。
spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物と、医薬として許容し得るビヒクルとを含む医薬組成物は、本発明のさらに別の態様である。この態様では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、レトロ-インベルソペプチドである、又は、エンドキャップ処理することができる。
医薬組成物は、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端でエンドキャップ処理される。
前記医薬組成物は、以下の群から選択される、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を含む:
及びそれらの混合物。
別の態様では、前記医薬組成物は、spadinの少なくとも1種の類似体若しくspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体
を含む。
医薬組成物中の、医薬として許容し得るビヒクルは、蒸留水、緩衝液、グリセロール、ポリプロピレングリコール、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水・デキストロース、エタノール、アジュバント有機溶媒、例えば、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、ジエチレングリコールジメチルエーテル(ジグリム)、ジエチレングリコールモノエチルエーテル(DEGMEE)、ジメチルイソソルビド(DMI)、ジメチルスルホキシド(DMSO)、酢酸エチル、安息香酸エチル、乳酸エチル、酢酸エチレングリコールモノエチルエーテル、グリセロールホルマール、メチルエチルケトン、メチルイソブチルケトン、N-エチル-2-ピロリドン、N-メチル-2-ピロリジノン(NMP)、ピロリドン-2、テトラグリコール、トリアセチン、トリブチリン、トリプロピオニン(tripro)、若しくはトリエチレングリコールジメチルエーテル(トリグリム)、及びそれらの混合物、並びに医薬として許容し得るビヒクルの混合物の群から選択される。
本発明による医薬組成物は、望ましい結果を得るのに有効な量の、本発明による、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプレペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を含み、単位剤形として(例えば、固体、半固体、又は液体剤形で)投与することができる。本明細書に記載する通りの少なくとも1種の類似体は、筋肉内、静脈内、経口、舌下、吸入、及び直腸内投与に適した担体又は賦形剤との混合物であり得る。spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、液剤、錠剤、ペレット、カプセル、糖衣錠、座剤、乳剤、懸濁剤、軟膏、ゲル、及び任意の他の剤形を調製するのに適した、通常使用される非毒性の医薬として許容し得る担体と合わせることができる。
賦形剤としては、糖類、例えば、グルコース、ラクトース若しくはスクロース、マンニトール若しくはソルビトール、セルロース誘導体、及び/又はリン酸カルシウム、例えば、リン酸三カルシウム若しくは酸性リン酸カルシウムなどの、様々な物質を使用することができ;結合剤としては、デンプンのり、例えば、トウモロコシ、コムギ、コメ、バレイショデンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び/又はポリビニルピロリドンなどの物質を使用することができる。必要に応じて、先述のデンプン及びカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、寒天若しくはアルギン酸又はその塩(アルギン酸ナトリウムなど)などの崩壊剤を使用することができる。
該製剤中には、流動性を調節する薬剤及び滑沢剤、例えば二酸化ケイ素、タルク、ステアリン酸及びその塩(ステアリン酸マグネシウム若しくはステアリン酸カルシウム)、及び/又はプロピレングリコールなどの、任意の添加剤を使用することができる。
糖衣錠の核は、通常、胃液の作用に対して抵抗性のある層によってコーティングされる。この目的のために、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、及び/又は二酸化チタン、及び適切な有機溶媒、又はそれらの混合物を任意に含むことができる、糖類の濃縮溶液を使用することができる。
添加剤としては、安定剤、増粘剤、色素、及び香料も使用することができる。
軟膏基剤としては、白色及び黄色ワセリン(Vaselinum album、Vaselinum flavum)、ワセリン軟膏(Oleum Vaselini)、白色及び黄色軟膏(Unguentum album、Unguentum flavum)などの、炭水化物軟膏基剤、より緊密な堅さを与えるための添加剤としては、固形パラフィン及び蝋などの添加剤を使用することができ;親水性ワセリン(Vaselinum hydrophylicum)、ラノリン(Lanolinum)、コールドクリーム(Unguentum leniens)などの吸収性軟膏基剤を使用することができ;親水性軟膏(Unguentum hydrophylicum)などの、水によって洗浄可能な軟膏基剤を使用することができ;ポリエチレングリコール軟膏(Unguentum Glycolis Polyethyleni)などの水溶性軟膏基剤、ベントナイト基剤などを使用することができる。
ゲルのための基剤としては、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム塩、オキシプロピルセルロース、ポリエチレングリコール又はポリエチレンオキシド、カーボポールを使用することができる。
座剤のための基剤としては、カカオ脂などの、ゼラチン-グリセロール又はポリエチレンオキシドなどの、水に不溶性の基剤;水に可溶性又は水と混合可能な基剤;複合基剤、例えば、石鹸-グリセリン基剤を使用することができる。
単位剤形を製造する際には、本明細書に記載する通りの類似体及び類似体の混合物を、治療されるレシピエント、医薬品を投与する特定の様式に応じて変動し得る担体と組み合わせて使用することができる。
したがって、例えば、注射のための溶液の形態の本発明の類似体を使用する際には、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物の含有量は、0.005から20%である。希釈剤としては、0.9%塩化ナトリウム溶液、蒸留水、注射用ノボカイン溶液、リンゲル液、グルコース溶液、溶解用の特定の添加剤を使用することができる。本発明の化合物を、錠剤及び座剤の形態で体内に投与する際には、その量は、単位剤形あたり5.0〜500mgである。
本発明の剤形は、例えば、混合、造粒、糖衣錠の形成、溶解、及び凍結乾燥のプロセスなどの標準の技術に従って製造される。
本発明のさらに別の態様では、
(a)次式を有する生分解性トリブロック共重合体:
PLAv-PEGw-PLAx
(式中、v、w、及びxは、4から1090又は6から1090の範囲である反復単位の数であり、かつ、v=x又はv≠xである);
(b)次式を有する生分解性ジブロック共重合体:
mPEGy-PLAz
(式中、y及びzは、3から237又は7から371の範囲である反復単位の数であり、
ここでは、前記生分解性医薬組成物中の、(a)の生分解性トリブロック共重合体と(b)の生分解性ジブロック共重合体の比は、1:3から1:8又は1: 1から1:19又は3:2から1:19である)
を含む生分解性徐放性ビヒクル中に、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を含む、生分解性医薬組成物が提供される。
(a)次式を有する生分解性トリブロック共重合体:
PLAv-PEGw-PLAx
(式中、v、w、及びxは、4から1090又は6から1090の範囲である反復単位の数であり、かつ、v=x又はv≠xである);
(b)次式を有する生分解性ジブロック共重合体:
mPEGy-PLAz
(式中、y及びzは、3から237又は7から371の範囲である反復単位の数であり、
ここでは、前記生分解性医薬組成物中の、(a)の生分解性トリブロック共重合体と(b)の生分解性ジブロック共重合体の比は、1:3から1:8又は1: 1から1:19又は3:2から1:19である)
を含む生分解性徐放性ビヒクル中に、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を含む、生分解性医薬組成物が提供される。
これらの生分解性医薬組成物は、参照により本明細書に組み込まれるWO20012/090070に記載されている。
前記生分解性医薬組成物は、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物(これはレトロ-インベルソペプチドである、又はこれらの類似体はエンドキャップ処理ペプチドであり得る)を含む。spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される。
spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、以下の群:
及びそれらの混合物から選択される、生分解性組成物が提供される。
別の実施態様では、生分解性医薬組成物は、
を含む。
本明細書に記載する通りの生分解性医薬組成物は、室温で注射可能な液体であり得、かつ体内に注射された場合に埋め込み体を形成する、又は固体小粒子又はロッド型埋め込み体又は空間的(spatial)製剤である。
本明細書に記載する通りの生分解性医薬組成物に関しては、ポリエチレングリコール鎖のサイズは、200Daから12kDa又は194Daから12kDaの範囲であり、エンドキャップ処理されたポリエチレングリコール鎖のサイズは、100Daから2kDa又は164から2kDAの範囲であり、ポリマーは、組成物全体の20%から50%(w%/w%)の量で存在する。
前記生分解性医薬組成物においては、トリブロック共重合体は、組成物全体の3.0%から45%(w%/w%)の量で存在し、ジブロック共重合体は、組成物全体の8.0%から50%(w%/w%)の量で存在する。
さらに、本明細書に記載する通りの生分解性医薬組成物においては、該生分解性徐放性ビヒクル中の、エチレンオキシドに対するポリエステル反復単位のモル比は、トリブロック共重合体では0.5から3.5又は0.5から22.3、ジブロック共重合体では2から6又は0.8から13である。
spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、生分解性医薬組成物全体の0.005から20%(w%/w%)の量で存在する。
spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、必要とされる治療及び使用される生分解性医薬組成物の種類に応じて、7日から1年、又はそれより長い期間、放出させることができる。一態様では、生分解性医薬組成物は、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を、少なくとも7日間、送達することができる。別の態様では、生分解性医薬組成物は、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を、少なくとも30日間、送達することができる。一態様では、生分解性医薬組成物は、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を、少なくとも90日間、送達することができる。さらに別の態様では、生分解性医薬組成物は、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を、3から6か月、又はそれより長い間、送達することができる。
別の態様では、動物におけるうつ病を治療するための方法であって、こうした治療を必要とする動物に、医薬として許容し得る量の、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物と、医薬として許容し得るビヒクルとを投与することを含む前記方法が提供される。この方法では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又はそれらの混合物は、レトロ-インベルソペプチドである、又はエンドキャップ処理ペプチドであり得る。本明細書に記載する類似体が、エンドキャップ処理される場合、これは、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理することができる。
治療するためのこの方法では、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物は、以下の群から選択される:
及びそれらの混合物。
さらに別の態様では、うつ病を治療するための方法においては、spadinの類似体又はプロペプチドspadinの類似体は、
である。
うつ病を治療するための方法においては、医薬として許容し得るビヒクルは、蒸留水、緩衝液、グリセロール、ポリプロピレングリコール、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水・デキストロース、エタノール、アジュバント、及びそれらの混合物の群から選択される。アジュバントは、例えば、ミョウバン、リン酸アルミニウム、リン酸カルシウム、MPL(商標)、CpGモチーフ、改変毒素、サポニン、サイトカインなどの内因性抑制性アジュバント、フロイントの完全及び不完全アジュバント、ISCOM型アジュバント、ムラミルペプチドなどである。
本明細書に記載する通りの類似体は、0.05から10mg/kg又は0.011から3mg/kg又は0.015から5mg/kgの量で、本明細書に記載する通りの医薬組成物中に存在する。
さらに別の実施態様では、本発明は、動物におけるうつ病を治療するための方法であって、本明細書に記載する通りの医薬として有効な量の生分解性医薬組成物を、前記治療を必要とする前記動物に投与することを含む前記方法を提供する。
本発明はまた、うつ病を治療するための、又は、うつ病を治療するための医薬品の製造のための、本明細書に記載する通りの医薬組成物、又は本明細書に記載する通りの生分解性医薬組成物を提供する。この医薬組成物は、うつ病を治療するための医薬として有効な量である。
TREK-1チャネル活性を阻止するための方法であって、本明細書に記載する通りの有効量の組成物、又は本明細書に記載する通りの医薬組成物を動物に投与することを含む前記方法は、本発明の別の態様である。
TREK-1チャネル活性を阻止するための方法であって、本明細書に記載する通りの有効量の生分解性医薬組成物を動物に投与することを含む前記方法は、本発明の別の実施態様である。
本発明をこれから、当然全く限定的ではない以下の実施例の記載によって説明することとする。当然例示の目的で提供され、かつ本発明の範囲を決して限定しない以下の知見から、本発明のさらなる特徴が明らかになるであろう。
(実施例1-材料及び方法)
(spadin類似体)
spadinは、Gencust社(France)によって合成された。他のすべてのペプチド(図1参照)は、American Peptide社(Sunnyvale,CA,USA)によって合成された。ペプチドは、供給者によって精製され、純度は＞80%であった。純度は、分析用HPLC及び質量スペクトル分析によって確認した。
(spadin類似体)
spadinは、Gencust社(France)によって合成された。他のすべてのペプチド(図1参照)は、American Peptide社(Sunnyvale,CA,USA)によって合成された。ペプチドは、供給者によって精製され、純度は＞80%であった。純度は、分析用HPLC及び質量スペクトル分析によって確認した。
spadinの安定性及び/又は作用の期間及び生体利用効率を向上させる目的で、spadinの様々な類似体を合成した。spadinとPE配列との両方から、ペプチド類似体を設計した。この目標を達成するために、より長い又は短いspadinペプチドを合成し、また、レトロ-インベルソ(ri)アミノ酸手法を用いてペプチドを合成した。この手法は、すべてのL-アミノ酸をD-アミノ酸に置き換えることによってアミノ酸のキラリティが反転されているだけでなく、アミノ酸配列が逆転されているペプチドを合成することにある(Bonny,C.らの文献「JNKの細胞透過性ペプチド阻害剤:β細胞死の新規のブロッカー(Cell-permeable peptide inhibitors of JNK: novel blockers of beta-cell death)」Diabetes 50,77(2001);Chorev,M.らの文献「レトロペプチド及びタンパク質における近年の進歩--進行中のトポケミカル探索(Recent developments in retro peptides and proteins--an ongoing topochemical exploration)」Trends Biotechnol 13,438(1995))。このような方式で、アミノ酸の側鎖は、天然のペプチドの側鎖と非常に類似した位置にある(Bonny,C.らの文献「JNKの細胞透過性ペプチド阻害剤:β細胞死の新規のブロッカー(Cell-permeable peptide inhibitors of JNK: novel blockers of beta-cell death)」Diabetes 50,77(2001);Chorev,M.らの文献「ペプチド及びタンパク質における近年の進歩--進行中のトポケミカル探索(Recent developments in retro peptides and proteins--an ongoing topochemical exploration)」Trends Biotechnol 13,438(1995));Van Regenmortel,M.H.らの文献「免疫原及び診断試薬としてのD-ペプチド(D-peptides as immunogens and diagnostic reagents)」Curr Opin Biotechnol 9,377(1998))。レトロ-インベルソペプチドは、多くの場合、親のL-ペプチドよりも、プロテアーゼ加水分解に対して抵抗性があり、生理的活性は狭く、かつ時として高い(Taylor,M.らの文献「アルツハイマー病のための新規治療可能性としての、βアミロイドオリゴマー形成の、タンパク質分解的に安定なレトロ-インベルソペプチド阻害剤の開発(Development of a proteolytically stable retro-inverso peptide inhibitor of beta-amyloid oligomerization as a potential novel treatment for Alzheimer's disease)」Biochemistry 49,3261(2010);Weeden,T.らの文献「MC1R-結合選択性をもつレトロ-インベルソα-メラニン細胞刺激ホルモン類似体(A retro-inverso alpha-melanocyte stimulating hormone analog with MC1R-binding selectivity)」J Pept Sci 17,47(2011))。
16種のspadin類似体を、TREK-1チャネル活性を阻止するその能力についてスクリーニングした(以下参照)。2つの最も効率的なものを、行動試験、及び神経発生に対するその効果を使用するさらなる研究のために保持した。TREK-1チャネルの活性化が、てんかん又は疼痛などの様々な病態において有益であると示されたので、これらの病態に対する類似体治療の効果を研究した。
(h-TREK-1/細胞株の細胞培養)
ヒト-TREK-1/HEK293細胞株(h-TREK-1/HEK)(Moha ou Maati,H.らの文献(2011) PloS one,6(10),e25602)及びHEK-IKS細胞株(Ducroq,J.らの文献(2010) Br J Pharmacol,159(1):93-101)を、95%空気/5% CO2の雰囲気中で、1%(v/v)ペニシリン/ストレプトマイシンを含有する10%(v/v)熱失活ウシ胎児血清を添加したダルベッコ改変イーグル培地中の0.5mg/mL G418の存在下で成長させた。
ヒト-TREK-1/HEK293細胞株(h-TREK-1/HEK)(Moha ou Maati,H.らの文献(2011) PloS one,6(10),e25602)及びHEK-IKS細胞株(Ducroq,J.らの文献(2010) Br J Pharmacol,159(1):93-101)を、95%空気/5% CO2の雰囲気中で、1%(v/v)ペニシリン/ストレプトマイシンを含有する10%(v/v)熱失活ウシ胎児血清を添加したダルベッコ改変イーグル培地中の0.5mg/mL G418の存在下で成長させた。
HEK-293天然細胞を、1%(v/v)ペニシリン/ストレプトマイシン及びGlutamax X1を含有する10%(v/v)熱失活ウシ胎児血清を添加したダルベッコ改変イーグル培地中で、95%空気/5% CO2の雰囲気中で、血清中で成長させた。細胞を、20000細胞/35mmディッシュの密度で蒔き、24時間後、25ng/35mmディッシュのp-IRES-HERGチャネルベクターを用いて、JetPEI(登録商標)方法(Polyplus,France)を使用して細胞をトランスフェクションした。トランスフェクションの48時間後に、パッチクランプ実験を実施した。
(動物)
すべての実験において、生後7から9週の未処置のオスC57Bl/6Jマウスを使用した(Janvier研究室)。マウスは、22±1℃の温度の換気された室内に、ケージあたり10動物で収容し、12時間の明/12時間の暗周期(午前8:00に点灯)下に置いた。動物は、水及び食料を自由に利用させた(A03;SAFE,Augy,France)。すべての実験は、北米神経科学学会(Society for Neuroscience)の実験動物のケア及び使用に関する方針に従って、また、動物使用に関する国内法を尊重して行った。地元の倫理委員会(Ethics Committee)(CIEPAL)が、これらの実験を承認した。
すべての実験において、生後7から9週の未処置のオスC57Bl/6Jマウスを使用した(Janvier研究室)。マウスは、22±1℃の温度の換気された室内に、ケージあたり10動物で収容し、12時間の明/12時間の暗周期(午前8:00に点灯)下に置いた。動物は、水及び食料を自由に利用させた(A03;SAFE,Augy,France)。すべての実験は、北米神経科学学会(Society for Neuroscience)の実験動物のケア及び使用に関する方針に従って、また、動物使用に関する国内法を尊重して行った。地元の倫理委員会(Ethics Committee)(CIEPAL)が、これらの実験を承認した。
(治療)
2mg/mL(10-3M)(蒸留水中)のストック溶液を調製し、注射前にspadin溶液をNaCl 0.9%に希釈して、治療のために使用される様々な濃度を得た。コルチコステロン(Sigma-Aldrich社、France)を、4.5g/Lのβ-シクロデキストリンの存在中、3.5mg/Lの濃度で飲料水に溶解した。この混合物を、不透明なビンに満たして光から保護し、マウスをこの溶液を自由に利用させた。フルオキセチン(Sigma-Aldrich社、France)を、80mg/Lの用量で、飲料水に溶解し、21日間投与した。i.p.投与については、フルオキセチン(TEVA Sante社、France)を、0.75mg/mLの濃度でNaCl 0.9%に溶解した。注射する量は、3mg/kgであった。spadin及び類似体を、i.v.注射によって投与した。急性治療については、行動試験の開始の30分前に、単回の100μLボーラスで薬物を投与した。亜慢性治療については、連続4日間、薬物を注射し、追加の注射を行わずに第5日に行動試験を実施した。
2mg/mL(10-3M)(蒸留水中)のストック溶液を調製し、注射前にspadin溶液をNaCl 0.9%に希釈して、治療のために使用される様々な濃度を得た。コルチコステロン(Sigma-Aldrich社、France)を、4.5g/Lのβ-シクロデキストリンの存在中、3.5mg/Lの濃度で飲料水に溶解した。この混合物を、不透明なビンに満たして光から保護し、マウスをこの溶液を自由に利用させた。フルオキセチン(Sigma-Aldrich社、France)を、80mg/Lの用量で、飲料水に溶解し、21日間投与した。i.p.投与については、フルオキセチン(TEVA Sante社、France)を、0.75mg/mLの濃度でNaCl 0.9%に溶解した。注射する量は、3mg/kgであった。spadin及び類似体を、i.v.注射によって投与した。急性治療については、行動試験の開始の30分前に、単回の100μLボーラスで薬物を投与した。亜慢性治療については、連続4日間、薬物を注射し、追加の注射を行わずに第5日に行動試験を実施した。
(統計)
データは、平均±S.E.M.として表した。マン-ホイットニーを使用することによって、群間の差の統計的分析を実施した。すべての分析において、有意水準は、p＜0.05(*)、p＜0.01(**)、及びp＜0.001(***)に設定した。
データは、平均±S.E.M.として表した。マン-ホイットニーを使用することによって、群間の差の統計的分析を実施した。すべての分析において、有意水準は、p＜0.05(*)、p＜0.01(**)、及びp＜0.001(***)に設定した。
学習性無力試験では、30試行のそれぞれについて、逃避までの潜時を記録した。5試行のそれぞれに対して平均値を算出し、したがって、全平均逃避潜時に加えて、6ブロックの値が得られた。全潜時と試行のブロックの両方に対して、マン-ホイットニー試験を実施した。
(実施例2-電気生理)
培養の2〜6日後に20000細胞/35mmディッシュの密度で播種したh-TREK-1/HEK細胞に対して、すべての電気生理的実験を実施した。パッチクランプ技術の全細胞設定において、すべての電気生理的記録を実施した。RK 400パッチクランプ増幅器(Axon Instrument社、USA)を使用することによって、各電流を評価し、3kHzでローパスフィルター処理し、12ビットアナログ-デジタルコンバータdigidata(1322シリーズ、Axon Instrument社、USA)を使用して10kHzでデジタル化した。すべての電流振幅は、電流密度で表す。結果を、平均±平均値の標準誤差(SEM)として表した。垂直プラー(PC-10、Narishige社)を使用して、パッチクランプピペットを、ホウケイ酸ガラスキャピラリーから引き出し、3〜5MΩの抵抗を与えた。槽溶液は、150mM NaCl、5mM KCl、3mM MgCl2、1mM CaCl2、及び10mM HEPES(NaOHでpH 7.4に調整)を含有していた。ピペット溶液は、155mM KCl、3mM MgCl2、5mM EGTA、及び10mM HEPES(KOHでpH 7.2に調整)を含有していた。TREK-1電流を、カリウムチャネル阻害剤のカクテル(K+ブロッカー:3mM 4-アミノピリジン(4-AP)、10mMテトラエチルアンモニウム(TEA)、10μMグリベンクラミド、100nMアパミン、及び50nMカリブドトキシン)の存在下で評価した。すべての実験は、室温(21〜22℃)で実施した。市販のソフトウェア及びハードウェア(pClamp 8.2)を備えたマイクロコンピュータ(Dell Pentium社)を使用して、刺激プロトコル及びデータ収集を実施した。電流は、-80mVの保持電位から適用される20mVステップにおける-100から+60mVの膜電位の電位固定ステップによって記録した。脱分極パルスの期間は、0.825ミリ秒であり、パルス循環速度は、5秒であった。刺激パルスの最後に、TREK-1電流振幅を評価した。細胞は、微小灌流システムを用いて、絶えず灌流させた。spadin及び類似体の阻害効果を、アラキドン酸であらかじめ活性化したTREK-1電流に対して実施した。spadin及び類似体は、100nMという独特の用量で試験した。類似体3(配列番号:4)と類似体8(配列番号:9)の両方については、1nMから1μMの範囲の濃度を適用することによって、濃度依存的阻害を実施した。-80mVの保持電位から適用される20mVステップにおける-100から+100mVの膜電位の電位固定ステップによって、IKS電流を活性化した。末尾電流は、-40mVへの再分極によって発生した。脱分極と再分極パルスの期間はどちらも2.4秒であり、パルス循環速度は、10秒であった。+80mVの保持電位から適用される10mVステップにおける-100から+100mVの膜電位の電位固定ステップによって、IKR電流を活性化し、末尾電流は、+40mVへの再分極によって発生した。脱分極と再分極パルスの期間はどちらも1秒であり、パルス循環速度は、5秒であった。第1パルスの最後とテールパルスのピークの両方で、IKS及びIKR電流の振幅を算出した。
培養の2〜6日後に20000細胞/35mmディッシュの密度で播種したh-TREK-1/HEK細胞に対して、すべての電気生理的実験を実施した。パッチクランプ技術の全細胞設定において、すべての電気生理的記録を実施した。RK 400パッチクランプ増幅器(Axon Instrument社、USA)を使用することによって、各電流を評価し、3kHzでローパスフィルター処理し、12ビットアナログ-デジタルコンバータdigidata(1322シリーズ、Axon Instrument社、USA)を使用して10kHzでデジタル化した。すべての電流振幅は、電流密度で表す。結果を、平均±平均値の標準誤差(SEM)として表した。垂直プラー(PC-10、Narishige社)を使用して、パッチクランプピペットを、ホウケイ酸ガラスキャピラリーから引き出し、3〜5MΩの抵抗を与えた。槽溶液は、150mM NaCl、5mM KCl、3mM MgCl2、1mM CaCl2、及び10mM HEPES(NaOHでpH 7.4に調整)を含有していた。ピペット溶液は、155mM KCl、3mM MgCl2、5mM EGTA、及び10mM HEPES(KOHでpH 7.2に調整)を含有していた。TREK-1電流を、カリウムチャネル阻害剤のカクテル(K+ブロッカー:3mM 4-アミノピリジン(4-AP)、10mMテトラエチルアンモニウム(TEA)、10μMグリベンクラミド、100nMアパミン、及び50nMカリブドトキシン)の存在下で評価した。すべての実験は、室温(21〜22℃)で実施した。市販のソフトウェア及びハードウェア(pClamp 8.2)を備えたマイクロコンピュータ(Dell Pentium社)を使用して、刺激プロトコル及びデータ収集を実施した。電流は、-80mVの保持電位から適用される20mVステップにおける-100から+60mVの膜電位の電位固定ステップによって記録した。脱分極パルスの期間は、0.825ミリ秒であり、パルス循環速度は、5秒であった。刺激パルスの最後に、TREK-1電流振幅を評価した。細胞は、微小灌流システムを用いて、絶えず灌流させた。spadin及び類似体の阻害効果を、アラキドン酸であらかじめ活性化したTREK-1電流に対して実施した。spadin及び類似体は、100nMという独特の用量で試験した。類似体3(配列番号:4)と類似体8(配列番号:9)の両方については、1nMから1μMの範囲の濃度を適用することによって、濃度依存的阻害を実施した。-80mVの保持電位から適用される20mVステップにおける-100から+100mVの膜電位の電位固定ステップによって、IKS電流を活性化した。末尾電流は、-40mVへの再分極によって発生した。脱分極と再分極パルスの期間はどちらも2.4秒であり、パルス循環速度は、10秒であった。+80mVの保持電位から適用される10mVステップにおける-100から+100mVの膜電位の電位固定ステップによって、IKR電流を活性化し、末尾電流は、+40mVへの再分極によって発生した。脱分極と再分極パルスの期間はどちらも1秒であり、パルス循環速度は、5秒であった。第1パルスの最後とテールパルスのピークの両方で、IKS及びIKR電流の振幅を算出した。
TREK-1チャネルに対する、spadinよりも優れた親和性を有する類似体を特定するために、h-TREK-1/HEK細胞株(Moha ou Maati,H.らの文献「ヒトTREK-1/HEK細胞株:神経疾患における薬物開発のための非常に効率的なスクリーニング手段(A human TREK-1/HEK cell line: a highly efficient screening tool for drug development in neurological diseases)」PLoS One 6,e25602(2011))において発現されるTREK-1チャネルの活性の阻止効果を最初に研究した。この細胞株において発現されたTREK-1チャネルは、そのすべての調節特性を保持している(Moha ou Maati,H.らの文献「ヒトTREK-1/HEK細胞株:神経疾患における薬物開発のための非常に効率的なスクリーニング手段(A human TREK-1/HEK cell line: a highly efficient screening tool for drug development in neurological diseases)」PLoS One 6,e25602(2011))。パッチクランプ技術の全細胞設定を使用することによって、15種の類似体、すなわち類似体2(配列番号:3)から類似体16(配列番号:21)(図1及び図8を、100nM(n=10から12)という独特の濃度で試験し、spadin(Mazella,J.らの文献「spadin、ソーティリンから得られるペプチド、げっ歯類TREK-1チャネルを標的にする:抗うつ薬設計における新構想(spadin,A sortilin-derived peptide,targeting rodent TREK-1 channels: a new concept in the antidepressant drug design)」PLoS Biol 8,e1000355(2010));Moha ou Maati,H.らの文献「ヒトTREK-1/HEK細胞株:神経疾患における薬物開発のための非常に効率的なスクリーニング手段(A human TREK-1/HEK cell line: a highly efficient screening tool for drug development in neurological diseases)」PLoS One 6,e25602(2011);Moha Ou Maati,H.らの文献「新規抗うつ薬としてのspadin:TREK-1関連副作用の非存在(Spadin as a new antidepressant: absence of TREK-1-related side effects)Neuropharmacology 62,278(2012))に相当する配列番号:1を、参照基準として使用した。これらの類似体は、次の配列番号に相当する:類似体2(配列番号:3)、類似体3(配列番号:4)、類似体4(配列番号:5)、類似体5(配列番号:6)、類似体6(配列番号:7)、類似体7(配列番号:8)、類似体8(配列番号:9)、類似体9(配列番号:10)、類似体10(配列番号:11)、類似体11(配列番号:12)、類似体12(配列番号:13)、類似体13(配列番号:14)、類似体14(配列番号:15)、類似体15(配列番号:20)、及び類似体16(配列番号:21)。
このデータは、6種の類似体、すなわち類似体3(配列番号:4)及び類似体8(配列番号:9)(図2)及び類似体13(配列番号:14)、類似体14(配列番号:15)、類似体15(配列番号:20)、及び類似体16(配列番号:21)(図8)のみが、阻止効果の増大を示すことを示した。類似体2(配列番号:3)は、spadinのN-末端アセチル化及びC-末端アミド化形に相当する。類似体2(配列番号:3)は、spadinの効果と非常に類似した効果を示した。用量反応曲線から算出されたIC50値は、類似体3(配列番号:4)及び類似体8(配列番号:9)について、それぞれ11.5±0.59及び9.95±0.85であり(図2C)、これらの値を、同じ細胞株に対してspadinについて決定された56.39±0.01nMと比較しなければならない。類似体2(配列番号:3)のIC50は、60±0.41nMであった(図2C)。これらのデータは、類似体3(配列番号:4)及び類似体8(配列番号:9)が、TREK-1チャネルに対する6倍高い親和性を有することを示した。類似体13(配列番号:14)のIC50は40pMであり、類似体14(配列番号:15)のIC50は4pMであり、類似体15(配列番号:20)のIC50は40pMであり、類似体16(配列番号:21)のIC50は1pMであった(図8F)。これらの類似体を、抗うつ特性を調査するために使用した。
(実施例3-行動試験)
未処置のマウスを用いて、行動実験を実施した。実験者は、実験群に対して盲検的であった。すべてのマウスは、使用されるあらゆる行動試験を受けたことがなかった。
未処置のマウスを用いて、行動実験を実施した。実験者は、実験群に対して盲検的であった。すべてのマウスは、使用されるあらゆる行動試験を受けたことがなかった。
(実施例3A-強制水泳試験(FST))
動物を、個々に、22±1℃の水を15cm満たした回避できないシリンダー(高さ30cm、直径15cm)に入れた。試行は、6分間実施した。試験の最後の4分間、無動の総期間を、手動で測定した。マウスは、頭を水の上に出したままわずかにしか動かず浮いているままである場合に無動であるとみなされた。
動物を、個々に、22±1℃の水を15cm満たした回避できないシリンダー(高さ30cm、直径15cm)に入れた。試行は、6分間実施した。試験の最後の4分間、無動の総期間を、手動で測定した。マウスは、頭を水の上に出したままわずかにしか動かず浮いているままである場合に無動であるとみなされた。
強制水泳試験において、急性注射後に、両方の類似体の抗うつ作用を、最初に研究した(Mazella,J.らの文献「spadin、ソーティリンから得られるペプチド、げっ歯類TREK-1チャネルを標的にする:抗うつ薬設計における新構想(spadin,A sortilin-derived peptide,targeting rodent TREK-1 channels: a new concept in the antidepressant drug design)」PLoS Biol 8,e1000355(2010))。この研究の主要目標は、ヒト診療所において使用することができる、したがって、投与の数日後も活性なままである分子を発見することであった。したがって、この研究は、両方の類似体の亜慢性投与後に追跡した。
ここでは再び、対照として通常のspadinを使用した。spadin又は類似体3(配列番号:4)及び類似体8(配列番号:9)の両方の10μg/kg急性静脈内(i.v.)注射は、生理食塩水注射マウスと比較して、マウスの無動時間を有意に減少させた(図3A)。値は、生理食塩水、spadin(U=0、p＜0.001)、類似体3(配列番号:4)(U=8、p=0.01)、及び類似体8(配列番号:9)(U=0、p=0.001)について(各群についてn=10)、それぞれ166.13±5.54秒、107.40±5.05秒、135.10±8.11秒、及び83.60±9.01秒であった。これらの結果は、急性 治療後の、spadinの類似体の抗うつ作用を示した。
FSTでは、spadin又は類似体での4日の亜慢性治療(10μg/kg、1日1回i.v.注射される)は、無動時間の有意な低下をもたらした。観察された無動時間は、生理食塩液、spadin、類似体3(配列番号:4)及び類似体8(配列番号:9)について、それぞれ、161.80±8.12秒、123.70±7.16秒(U=10.5、p＜0.01)、114.9±9.82秒(U=10.5、p＜0.01)、124.1±10.53秒(U=17.5、p＜0.05)であった(図3B)。このデータは、類似体が、治療の4日後ですら有効であること、また、spadinの類似体の抗うつ作用が、亜慢性治療後に達成されることを明確に示した。
spadin有効性を向上させるために、類似体は、親和性の増大に加えて、インビボで注射され、場合に、より安定でなければならない。注射の7時間後にFSTを用いて測定される場合、spadinの残存する効率は、最初の有効性のわずか30%である一方で、3時間で84％であり、17時間後には無動時間の低下は存在しなかった。無動の時間は、170.3±4.5秒、102.4±6.2秒(U=0、p＜0.001)、113.2±5.0秒(U=0、p＜0.001)、150.8±6.5秒(U=19、p＜0.05)、及び175.3±7.5秒であった(図4A)。これらのデータは、この用量のspadinの安定性及び/又は作用期間が、およそ6時間であることを示した。
この特性を調べるために、両方の類似体をi.v.注射し、マウスをFSTにおいて試験した。各類似体について、注射後の様々な時点、すなわち1、3、7、12、16、及び24時間で、10匹の未処置の動物を試験した。生理食塩水を注射した動物は、1及び24時間でのみ試験した。16時間後、どちらの類似体も、無動時間を低下させる能力を維持しているように見えた。無動時間は、1時間と16時間の間で非常に類似しており、類似体3(配列番号:4)及び類似体8(配列番号:9)について、それぞれ123.4±7.0秒と129.6±12.7秒、及び121.7±5.2秒と129.1±12.0秒であった(図4B)。生理食塩水で治療された動物についての平均値は、162.7±4.7秒であった(図4B)。これらのデータは、どちらの類似体も、spadinと比較した場合に、より長いインビボ安定性及び/又は作用期間を有することを明確に示した。
類似体13(配列番号:14)及び類似体14(配列番号:15)も、i.v.注射後に強い活性を示したのに対し、類似体15(配列番号:20)及び類似体16(配列番号:21)は示さなかった。しかし、類似体15(配列番号:20)が、i.c.v注射によって活性である一方で、類似体16(配列番号:21)は活性ではなかった。
(実施例3B-新奇環境摂食抑制(NSF))
NSFパラダイムは、2日の試験プロトコルである。第1日、マウスには食餌を与えなかった。第2日、マウスを、床を木の寝床で覆ったプラスチック箱(45×45×20cm)内の非常に明るく照らされた場所に置いた。試験は、10分間実施し;この時間の間、摂食までの潜時を測定した。この試験の間、白色の台の上の箱の中央に単一ペレットの食餌を入れた。
NSFパラダイムは、2日の試験プロトコルである。第1日、マウスには食餌を与えなかった。第2日、マウスを、床を木の寝床で覆ったプラスチック箱(45×45×20cm)内の非常に明るく照らされた場所に置いた。試験は、10分間実施し;この時間の間、摂食までの潜時を測定した。この試験の間、白色の台の上の箱の中央に単一ペレットの食餌を入れた。
新奇環境摂食抑制試験では、亜慢性治療を使用するFSTにおいて見られたのと類似の結果が得られた。spadin及び両方の類似体は、摂食までの潜時を低下させた。値は、生理食塩液、spadin、類似体3(配列番号:4)及び類似体8(配列番号:9)について、それぞれ、305.00±62.47秒、151.11±17.70秒(U=13、p＜0.05)、143.88±23.42(U=11、p＜0.05)、及び167.00±22.96(U=13、p＜0.05)であった(図3C)。
(実施例3C 学習性無力感(LH))
学習性無力試験は、4日の訓練期間と1日の試験期間に分けられる。
学習性無力試験は、4日の訓練期間と1日の試験期間に分けられる。
訓練期間の間、マウスに、8秒の試行間間隔を伴う、360回避不能な2秒のフットショックを与えた。非ショック群は、同じ期間、装置に触れさせたが、ショックは与えなかった。
この試験は、30秒の間隔によって分離される30試行にあった。1回の試行は、5秒間と定義され、その後ショックを開始し、マウスが第2の区画に移動した場合に又はショック開始の最後に停止した。試験中、すべての試行の間、各マウスについての逃避までの潜時を記録した。
(実施例3D-尾浸漬試験)
試験開始の30分前に、マウスに、100μLのボーラス又は100μLの生理食塩液(0.9% NaCl)中の10μg/kgのspadinをi.v.注射した。尾を、引っ込みが観察されるまで、48℃のウォーターバスに浸した(カットオフ時間:30秒)。2つの別の引っ込み潜時の時間決定値を平均した。
試験開始の30分前に、マウスに、100μLのボーラス又は100μLの生理食塩液(0.9% NaCl)中の10μg/kgのspadinをi.v.注射した。尾を、引っ込みが観察されるまで、48℃のウォーターバスに浸した(カットオフ時間:30秒)。2つの別の引っ込み潜時の時間決定値を平均した。
この試験を使用して、これらの類似体が、副作用を引き起こすかどうかを確認した。最初に、TREK-1チャネルが、熱痛に関与するので、本発明者らは、尾浸漬試験を介して、熱痛に対する類似体3(配列番号:4)と類似体8(配列番号:9)の両方の効果を分析した。明らかに、類似体及びspadinが、熱痛感覚を増大させなかったように見えた(図6A)。測定された尾引っ込み時間は、生理食塩水、spadin、類似体3(配列番号:4)、及び類似体8(配列番号:9)について、それぞれ、12.75±0.96秒、11.79±0.89秒、11.32±1.04秒、及び13.85±0.72秒であった(図6A)。
どちらの類似体も、行動試験において同じ性質及び同じ有効性を示したので、類似体3(配列番号:4)に焦点を合わせることを決めた。この選択は、類似体3(配列番号:4)が、spadinのレトロ-インベルソであり、したがって、類似体8(配列番号:9)よりも短いという事実によって支持された。さらに、類似体3(配列番号:4)は、インビボで、類似体8(配列番号:9)よりも長い期間、活性であると思われた(図4B参照)。
(実施例3E-カイニン酸によって誘発される発作)
カイニン酸溶液を、140mM NaCl(生理食塩液)の溶液中で調製した。spadin 10μg/kg又はビヒクルをi.v.注射し、その注射の後直ちに、カイニン酸25mg/kgを、100μLのボーラス中でi.p注射した。マウス(n=10/群)は、発作の開始及び程度について2時間観察した。重症度の6段階を、次の通りに定義した:1-無動、2-頭/首の動き、3-間代性片側性行動、4-間代性両側性行動、5-全身けいれん、及び6-死亡。発作の重症度を、盲検的に点数化した(Moha ou Maati,H.らの文献「ヒトTREK-1/HEK細胞株:神経疾患における薬物開発のための非常に効率的なスクリーニング手段(A human TREK-1/HEK cell line: a highly efficient screening tool for drug development in neurological diseases)」PLoS One 6,e25602(2011))。各群(n=10/治療)における発作行動についての点数の平均を求めることによって、発作指標を算出した。
カイニン酸溶液を、140mM NaCl(生理食塩液)の溶液中で調製した。spadin 10μg/kg又はビヒクルをi.v.注射し、その注射の後直ちに、カイニン酸25mg/kgを、100μLのボーラス中でi.p注射した。マウス(n=10/群)は、発作の開始及び程度について2時間観察した。重症度の6段階を、次の通りに定義した:1-無動、2-頭/首の動き、3-間代性片側性行動、4-間代性両側性行動、5-全身けいれん、及び6-死亡。発作の重症度を、盲検的に点数化した(Moha ou Maati,H.らの文献「ヒトTREK-1/HEK細胞株:神経疾患における薬物開発のための非常に効率的なスクリーニング手段(A human TREK-1/HEK cell line: a highly efficient screening tool for drug development in neurological diseases)」PLoS One 6,e25602(2011))。各群(n=10/治療)における発作行動についての点数の平均を求めることによって、発作指標を算出した。
TREK-1チャネル活性化は、てんかんの予防にも関与する。10μg/Kgの用量の類似体3(配列番号:4)がi.v.注射され、100μLのボーラス中の25mg/Kgの用量のカイニン酸注射によって誘発されるてんかん発作に対する重要な予防効果を有していた。カイニン酸と類似体3(配列番号:4)の両方を注射された10匹のマウスのうち、2匹のみ、てんかん発作の、重症度が低い2つの段階、すなわち無動及び首又は頭の動きに達した。類似体3(配列番号:4)を注射されたマウスについては、他の段階のてんかんは観察されなかった。10匹の生理食塩水を注射されたマウスのうち、少なくとも9匹は、2つの第１段階に到達しており、そのうちの5匹は死亡した(図6B)。1μg/Kgの用量は、予防効果を示さなかったので、類似体3(配列番号:4)の効果は、用量依存的であった(図6B)。
(実施例4-神経発生)
5-ブロモ-2-デオキシウリジン(BrdU)の注射の1日後、動物あたり12mgを100μlの4回のボーラスに分け、spadin又は類似体3(配列番号:4)及び類似体8(配列番号:9)と共に2時間ごとに注射し、マウスをイソフルランで麻酔し、20mlの0.9%NaCl、続いて20mlパラホルムアルデヒド(4%/NaCl中、0.9%の濃度)で経心的に灌流した。ビブラトーム(Leica社)を使用することによって、脳を、海馬全体にわたって40μm切片に切断した。8切片、すなわち十字縫合3.3から十字縫合5.3を、先に記載した通りのBrdU免疫組織化学(Heurteaux,C.らの文献、「背景カリウムチャネルTREK-1の欠損は、うつ病抵抗性の表現型をもたらす(Deletion of the background potassium channel TREK-1 results in a depression-resistant phenotype)」Nat Neurosci 9,1134(2006))を進行させるために保持した。各BrdU標識のために、切片を、最初に、マウスモノクローナル抗BrdU抗体(1/8000、Becton Dinckinson)と共にインキュベートした。発色性免疫検出のために、次いで、切片を、ビオチン結合種特異的二次抗体(1/400;Vector laboratories社)、それに続いてペルオキシダーゼ-アビジン複合体溶液中で、2時間インキュベートして、反応を増幅した。免疫複合体のペルオキシダーゼ活性を、製造業者のプロトコル(Vector laboratories社)に従ってVectaStain ABCキットを使用する3-3’ジアミノベンジジン(DAB)染色を用いて視覚化した。
5-ブロモ-2-デオキシウリジン(BrdU)の注射の1日後、動物あたり12mgを100μlの4回のボーラスに分け、spadin又は類似体3(配列番号:4)及び類似体8(配列番号:9)と共に2時間ごとに注射し、マウスをイソフルランで麻酔し、20mlの0.9%NaCl、続いて20mlパラホルムアルデヒド(4%/NaCl中、0.9%の濃度)で経心的に灌流した。ビブラトーム(Leica社)を使用することによって、脳を、海馬全体にわたって40μm切片に切断した。8切片、すなわち十字縫合3.3から十字縫合5.3を、先に記載した通りのBrdU免疫組織化学(Heurteaux,C.らの文献、「背景カリウムチャネルTREK-1の欠損は、うつ病抵抗性の表現型をもたらす(Deletion of the background potassium channel TREK-1 results in a depression-resistant phenotype)」Nat Neurosci 9,1134(2006))を進行させるために保持した。各BrdU標識のために、切片を、最初に、マウスモノクローナル抗BrdU抗体(1/8000、Becton Dinckinson)と共にインキュベートした。発色性免疫検出のために、次いで、切片を、ビオチン結合種特異的二次抗体(1/400;Vector laboratories社)、それに続いてペルオキシダーゼ-アビジン複合体溶液中で、2時間インキュベートして、反応を増幅した。免疫複合体のペルオキシダーゼ活性を、製造業者のプロトコル(Vector laboratories社)に従ってVectaStain ABCキットを使用する3-3’ジアミノベンジジン(DAB)染色を用いて視覚化した。
spadinでの4日の亜慢性治療が、海馬における神経発生を増大させることが、以前に示された(Mazella,J.らの文献「spadin、ソーティリンから得られるペプチド、げっ歯類TREK-1チャネルを標的にする:抗うつ薬設計における新構想(spadin,A sortilin-derived peptide,targeting rodent TREK-1 channels: a new concept in the antidepressant drug design)」PLoS Biol 8,e1000355(2010))。両方の類似体が、海馬における新神経発生を誘発する能力を調べた。DNA合成マーカー5-ブロモ-2’デオキシウリジン(BrdU)を取り込んだ前駆細胞の数を数えることによって、マウス海馬の歯状回における神経発生を分析した。顆粒細胞下帯(SGZ)では、spadin又は類似体での4日の治療は、生理食塩水条件と比較した場合、BrdU-陽性細胞の数を有意に増加させた(図5A,B)。
これらのデータは、どちらの類似体も、spadinだけでなくSSRI又は三環系について認められる神経発生を誘発する能力を保っていることを示した。
(実施例5-心臓の再分極電流に対する副作用)
spadinとしての類似体3(配列番号:4)が、心臓段階で2つの主な再分極電流、すなわち速い成分IKr及び遅い成分IKsに対する影響を有しないことを確認することも、非常に重要であった。これらのチャネルは、死をもたらす可能性があるトルサード・ド・ポワントの原因であるので、非常に重要である。抗うつ分子の最も重要な副作用の1つは、トルサード・ド・ポワントを誘発することである。
spadinとしての類似体3(配列番号:4)が、心臓段階で2つの主な再分極電流、すなわち速い成分IKr及び遅い成分IKsに対する影響を有しないことを確認することも、非常に重要であった。これらのチャネルは、死をもたらす可能性があるトルサード・ド・ポワントの原因であるので、非常に重要である。抗うつ分子の最も重要な副作用の1つは、トルサード・ド・ポワントを誘発することである。
0mVでIKrについて測定された電流密度は、類似体3(配列番号:4)の非存在下又は存在下において、第1のパルスの最後でそれぞれ、225.14±33.09 pA/pF(n=5)及び224.48±35.94 pA/pF(n=5)であった(図6C)。同じ電位で、類似体3(配列番号:4)の非存在下又は存在下での末尾電流密度は、それぞれ、204.59±34.18 pA/pF(n=5)及び212.99±38.38 pA/pF(n=5)であった(図6C)。0mVで測定されたIKs密度電流も、非常に近い。これらの値は、パルスの最後で、類似体3(配列番号:4)の非存在下又は存在下において、それぞれ、17.65±3.84 pA/pF(n=5)及び17.58±4.03 pA/pF(n =5)であった(図6D)。IKS末尾電流密度は、類似体3(配列番号:4)の非存在下又は存在下において、それぞれ、8.33±1.78 pA/pF(n=5)及び8.33±2.06 pA/pF(n=5)であった(図6D)。
類似体3(配列番号:4)は、HEK細胞において発現されるIKr又はIKSチャネルのどちらによって発生される電流も改変しなかった(図6C、D)。
(実施例6-慢性治療)
慢性治療は、PLA/PEG共重合体をベースにした長時間作用型製剤を使用して実現した。本明細書に記載する製剤は、薬物としてspadin(配列番号:1)又は類似体3(配列番号:4)を含有するポリマーの有機溶液をベースにしていた。典型的には、ジブロック共重合体とトリブロック共重合体の定義された質量比の混合物に相当する0.4グラムのポリマーを、一定の磁気的撹拌下で一晩、室温の0.59グラムの生体適合性の溶媒に溶解した。溶媒は、単一の溶媒又は溶媒の組み合わせのいずれかであった。翌日、このポリマー溶液に、1〜10mgの薬物を添加し、完全に溶解するまで撹拌した。この製剤を、使用前にシリンジに装入した。spadin及び類似体3(配列番号:4)の製剤の組成を、表1に示す。
表1:長時間作用型製剤の組成
慢性治療は、PLA/PEG共重合体をベースにした長時間作用型製剤を使用して実現した。本明細書に記載する製剤は、薬物としてspadin(配列番号:1)又は類似体3(配列番号:4)を含有するポリマーの有機溶液をベースにしていた。典型的には、ジブロック共重合体とトリブロック共重合体の定義された質量比の混合物に相当する0.4グラムのポリマーを、一定の磁気的撹拌下で一晩、室温の0.59グラムの生体適合性の溶媒に溶解した。溶媒は、単一の溶媒又は溶媒の組み合わせのいずれかであった。翌日、このポリマー溶液に、1〜10mgの薬物を添加し、完全に溶解するまで撹拌した。この製剤を、使用前にシリンジに装入した。spadin及び類似体3(配列番号:4)の製剤の組成を、表1に示す。
表1:長時間作用型製剤の組成
製剤番号27を、その最適なインビトロ放出プロフィールについて選択し、10μgの類似体3(配列番号:4)/kg/日を放出するように調節した。1、2、及び4週後に、FSTによって、製剤27の有効性を測定した。各時点で、試験されたマウスはすべて、この試験を受けたことがなかった。製剤27を注射したマウスは、無動時間の有意な低下を示した。1週後、測定された無動時間は、プラセボ注射及び類似体3(配列番号:4)製剤注射マウスについて、それぞれ、134.40±10.45秒対112.00±9.31秒(U=21.5、p＜0.05)であった。2週後、無動値は、プラセボ注射及び類似体3(配列番号:4) 製剤注射マウスについて、それぞれ、133.80±11.03秒対99.60±4.92秒(U=17.5、p＜0.05)であった。興味深いことに、MedinGel製剤によって放出される類似体3(配列番号:4)は、4週後もまだ活性であり、プラセボ注射及び類似体3(配列番号:4)製剤注射マウスについて、それぞれ、137.20±6.93秒対101.10±14.05秒(U=20、p＜0.05)であった。この結果を、FST及びNSF(それぞれ図10及び図11)において、コルチコステロンであらかじめ治療したマウスにおいて確認した。
(考察)
spadinは、げっ歯類モデルにおける新規抗うつ薬と特定された。FSTによって測定されたspadinのインビボ半減期は、比較的短く、およそ7時間であった(図4)。TREK-1は、以前に、うつ病進行におけるspadinの標的と特定された。薬物摂取量を減らす目的で、天然のspadin同等物と比較した場合の、TREK-1チャネルに対する親和性の増大と、生体利用効率の増大との両方を示すspadin類似体をスクリーニングした。
spadinは、げっ歯類モデルにおける新規抗うつ薬と特定された。FSTによって測定されたspadinのインビボ半減期は、比較的短く、およそ7時間であった(図4)。TREK-1は、以前に、うつ病進行におけるspadinの標的と特定された。薬物摂取量を減らす目的で、天然のspadin同等物と比較した場合の、TREK-1チャネルに対する親和性の増大と、生体利用効率の増大との両方を示すspadin類似体をスクリーニングした。
本発明を、様々な好ましい実施態様に関して説明してきたが、当分野の技術者は、本発明の範囲を逸脱せずに、様々な改変、置換、省略、及び変更を行うことができることを理解するであろう。したがって、本発明の範囲は、その等価物を含めた、以下の特許請求の範囲によって限定されることが意図される。
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。
（構成１）
spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物と、許容し得るビヒクルとを含む組成物。
（構成２）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、レトロ-インベルソペプチドである、構成1記載の組成物。
（構成３）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、エンドキャップ処理される、構成1又は構成2記載の組成物。
（構成４）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される、構成3記載の組成物。
（構成５）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、以下の群:
（化１）
、及びそれらの混合物から選択される、構成1から4のいずれか1項記載の組成物。
（構成６）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、
（化２）
である、構成1から5のいずれか1項記載の組成物。
（構成７）
前記許容し得るビヒクルが、蒸留水、緩衝液、グリセロール、ポリプロピレングリコール、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水・デキストロース、エタノール、及びそれらの混合物の群から選択される、構成1から6のいずれか1項記載の組成物。
（構成８）
spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物と、医薬として許容し得るビヒクルとを含む医薬組成物。
（構成９）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、レトロ-インベルソペプチドである、構成8記載の医薬組成物。
（構成１０）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、エンドキャップ処理される、構成8又は構成9記載の医薬組成物。
（構成１１）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される、構成10記載の医薬組成物。
（構成１２）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、以下の群:
（化３）
及びそれらの混合物から選択される、構成8から11のいずれか1項記載の医薬組成物。
（構成１３）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、
（化４）
である、構成8から12のいずれか1項記載の医薬組成物。
（構成１４）
前記医薬として許容し得るビヒクルが、蒸留水、緩衝液、グリセロール、ポリプロピレングリコール、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水・デキストロース、エタノール、及びそれらの混合物の群から選択される構成8から13のいずれか1項記載の医薬組成物。
（構成１５）
(a)次式を有する生分解性トリブロック共重合体:
PLA v -PEG w -PLA x
(式中、v、w、及びxは、4から1090又は6から1090の範囲である反復単位の数であり、かつ、v=x又はv≠xである);
(b)次式を有する生分解性ジブロック共重合体:
mPEG y -PLA z
(式中、y及びzは、3から237又は7から371の範囲である反復単位の数であり、
ここでは、前記生分解性医薬組成物中の、(a)の生分解性トリブロック共重合体と(b)の生分解性ジブロック共重合体の比は、1:3から1:8又は1: 1から1:19又は3:2から1:19である)
を含む生分解性徐放性ビヒクル中に、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を含む、生分解性医薬組成物。
（構成１６）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、レトロ-インベルソペプチドである、構成15記載の生分解性医薬組成物。
（構成１７）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、エンドキャップ処理される、構成15又は構成16記載の生分解性医薬組成物。
（構成１８）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される、構成17記載の生分解性医薬組成物。
（構成１９）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、以下の群:
（化５）
及びそれらの混合物から選択される、構成15から18のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２０）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、
（化６）
である、構成15から19のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２１）
前記組成物が、室温で注射可能な液体であり、かつ体内に注射された場合に埋め込み体を形成する、又は固体小粒子又はロッド型埋め込み体又は空間的製剤である、構成15から20のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２２）
前記ポリエチレングリコール鎖のサイズが、200Daから12kDa又は194Daから12kDaの範囲であり、エンドキャップ処理されたポリエチレングリコール鎖のサイズが、100Daから2kDa又は164から2kDAの範囲である、構成15から21のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２３）
前記類似体が、組成物全体の1%から20%(w%/w%)の量で存在する、構成15から22のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２４）
前記ポリマーが、組成物全体の20%から50%(w%/w%)の量で存在する、構成15から23のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２５）
前記トリブロック共重合体が、組成物全体の3.0%から45%(w%/w%)の量で存在する、構成15から24のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２６）
前記ジブロック共重合体が、組成物全体の8.0%から50%(w%/w%)の量で存在する、構成15から25のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２７）
該組成物中の、エチレンオキシドに対するポリエステル反復単位のモル比が、トリブロック共重合体では0.5から3.5又は0.5から22.3、ジブロック共重合体では2から6又は0.8から13である、構成15から26のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２８）
(a)次式を有する生分解性トリブロック共重合体:
PLA v -PEG w -PLA x
(式中、v、w、及びxは、4から1090又は6から1090の範囲である反復単位の数であり、かつ、v=x又はv≠xである);
(b)次式を有する生分解性ジブロック共重合体:
mPEG y -PLA z
(式中、y及びzは、3から237又は7から371の範囲である反復単位の数であり、
ここでは、前記生分解性医薬組成物中の、(a)の生分解性トリブロック共重合体と(b)の生分解性ジブロック共重合体の比は、1:3から1:8又は1: 1から1:19又は3:2から1:19である)
を含む生分解性徐放性ビヒクル中に、
（化７）
を含む、生分解性医薬組成物。
（構成２９）
前記組成物が、室温で注射可能な液体であり、かつ体内に注射された場合に埋め込み体を形成する、又は固体小粒子又はロッド型埋め込み体又は空間的製剤である、構成28記載の生分解性医薬組成物。
（構成３０）
前記ポリエチレングリコール鎖のサイズが、200Daから12kDa又は194Daから12kDaの範囲であり、エンドキャップ処理されたポリエチレングリコール鎖のサイズが、100Daから2kDa又は164から2kDAの範囲である、構成28から又は29記載の生分解性医薬組成物。
（構成３１）
前記類似体が、組成物全体の1%から20%(w%/w%)の量で存在する、構成28から30のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成３２）
前記ポリマーが、組成物全体の20%から50%(w%/w%)の量で存在する、構成28から31のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成３３）
前記トリブロック共重合体が、組成物全体の3.0%から45%(w%/w%)の量で存在する、構成28から32のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成３４）
前記ジブロック共重合体が、組成物全体の8.0%から50%(w%/w%)の量で存在する、構成28から33のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成３５）
前記組成物中の、エチレンオキシドに対するポリエステル反復単位のモル比が、トリブロック共重合体では0.5から3.5又は0.5から22.3、ジブロック共重合体では2から6又は0.8から13である、構成28から34のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成３６）
哺乳類におけるうつ病を治療するための方法であって、前記治療を必要とする前記動物に、医薬として許容し得る量の、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物と、医薬として許容し得るビヒクルとを投与することを含む前記方法。
（構成３７）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、レトロ-インベルソペプチドである、構成36記載の、動物におけるうつ病を治療するための方法。
（構成３８）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、エンドキャップ処理される、構成36又は構成37記載の、動物におけるうつ病を治療するための方法。
（構成３９）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される、構成38記載の、動物におけるうつ病を治療するための方法。
（構成４０）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、以下の群:
（化８）
及びそれらの混合物から選択される、構成36から39のいずれか1項記載の、動物におけるうつ病を治療するための方法。
（構成４１）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、
（化９）
である、構成36から40のいずれか1項記載の動物におけるうつ病を治療するための方法。
（構成４２）
前記医薬として許容し得るビヒクルが、蒸留水、緩衝液、グリセロール、ポリプロピレングリコール、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水・デキストロース、エタノール、及びそれらの混合物の群から選択される、構成36から41のいずれか1項記載の、動物におけるうつ病を治療するための方法。
（構成４３）
哺乳類におけるうつ病を治療するための方法であって、前記治療の必要がある前記動物に、構成15から35のいずれか1項記載の医薬として有効な量の生分解性医薬組成物を投与することを含む前記方法。
（構成４４）
うつ病を治療するための医薬品の製造のための、構成8から14のいずれか1項記載の医薬組成物。
（構成４５）
うつ病を治療するための医薬として有効な量の、構成15から35のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成４６）
うつ病を治療するための医薬品の製造のための、構成15から35のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成４７）
TREK-1チャネル活性を阻止するための方法であって、動物に、構成1から7のいずれか1項記載の有効量の組成物を投与することを含む前記方法。
（構成４８）
TREK-1チャネル活性を阻止するための方法であって、動物に、構成8から14のいずれか1項記載の有効量の医薬組成物を投与することを含む前記方法。
（構成４９）
TREK-1チャネル活性を阻止するための方法であって、動物に、構成15から35のいずれか1項記載の有効量の生分解性医薬組成物を投与することを含む前記方法。
本件出願は、以下の構成の発明を提供する。
（構成１）
spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物と、許容し得るビヒクルとを含む組成物。
（構成２）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、レトロ-インベルソペプチドである、構成1記載の組成物。
（構成３）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、エンドキャップ処理される、構成1又は構成2記載の組成物。
（構成４）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される、構成3記載の組成物。
（構成５）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、以下の群:
（化１）
（構成６）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、
（化２）
（構成７）
前記許容し得るビヒクルが、蒸留水、緩衝液、グリセロール、ポリプロピレングリコール、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水・デキストロース、エタノール、及びそれらの混合物の群から選択される、構成1から6のいずれか1項記載の組成物。
（構成８）
spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物と、医薬として許容し得るビヒクルとを含む医薬組成物。
（構成９）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、レトロ-インベルソペプチドである、構成8記載の医薬組成物。
（構成１０）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、エンドキャップ処理される、構成8又は構成9記載の医薬組成物。
（構成１１）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される、構成10記載の医薬組成物。
（構成１２）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、以下の群:
（化３）
（構成１３）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、
（化４）
（構成１４）
前記医薬として許容し得るビヒクルが、蒸留水、緩衝液、グリセロール、ポリプロピレングリコール、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水・デキストロース、エタノール、及びそれらの混合物の群から選択される構成8から13のいずれか1項記載の医薬組成物。
（構成１５）
(a)次式を有する生分解性トリブロック共重合体:
PLA v -PEG w -PLA x
(式中、v、w、及びxは、4から1090又は6から1090の範囲である反復単位の数であり、かつ、v=x又はv≠xである);
(b)次式を有する生分解性ジブロック共重合体:
mPEG y -PLA z
(式中、y及びzは、3から237又は7から371の範囲である反復単位の数であり、
ここでは、前記生分解性医薬組成物中の、(a)の生分解性トリブロック共重合体と(b)の生分解性ジブロック共重合体の比は、1:3から1:8又は1: 1から1:19又は3:2から1:19である)
を含む生分解性徐放性ビヒクル中に、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を含む、生分解性医薬組成物。
（構成１６）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、レトロ-インベルソペプチドである、構成15記載の生分解性医薬組成物。
（構成１７）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、エンドキャップ処理される、構成15又は構成16記載の生分解性医薬組成物。
（構成１８）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される、構成17記載の生分解性医薬組成物。
（構成１９）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、以下の群:
（化５）
（構成２０）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、
（化６）
（構成２１）
前記組成物が、室温で注射可能な液体であり、かつ体内に注射された場合に埋め込み体を形成する、又は固体小粒子又はロッド型埋め込み体又は空間的製剤である、構成15から20のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２２）
前記ポリエチレングリコール鎖のサイズが、200Daから12kDa又は194Daから12kDaの範囲であり、エンドキャップ処理されたポリエチレングリコール鎖のサイズが、100Daから2kDa又は164から2kDAの範囲である、構成15から21のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２３）
前記類似体が、組成物全体の1%から20%(w%/w%)の量で存在する、構成15から22のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２４）
前記ポリマーが、組成物全体の20%から50%(w%/w%)の量で存在する、構成15から23のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２５）
前記トリブロック共重合体が、組成物全体の3.0%から45%(w%/w%)の量で存在する、構成15から24のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２６）
前記ジブロック共重合体が、組成物全体の8.0%から50%(w%/w%)の量で存在する、構成15から25のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２７）
該組成物中の、エチレンオキシドに対するポリエステル反復単位のモル比が、トリブロック共重合体では0.5から3.5又は0.5から22.3、ジブロック共重合体では2から6又は0.8から13である、構成15から26のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成２８）
(a)次式を有する生分解性トリブロック共重合体:
PLA v -PEG w -PLA x
(式中、v、w、及びxは、4から1090又は6から1090の範囲である反復単位の数であり、かつ、v=x又はv≠xである);
(b)次式を有する生分解性ジブロック共重合体:
mPEG y -PLA z
(式中、y及びzは、3から237又は7から371の範囲である反復単位の数であり、
ここでは、前記生分解性医薬組成物中の、(a)の生分解性トリブロック共重合体と(b)の生分解性ジブロック共重合体の比は、1:3から1:8又は1: 1から1:19又は3:2から1:19である)
を含む生分解性徐放性ビヒクル中に、
（化７）
（構成２９）
前記組成物が、室温で注射可能な液体であり、かつ体内に注射された場合に埋め込み体を形成する、又は固体小粒子又はロッド型埋め込み体又は空間的製剤である、構成28記載の生分解性医薬組成物。
（構成３０）
前記ポリエチレングリコール鎖のサイズが、200Daから12kDa又は194Daから12kDaの範囲であり、エンドキャップ処理されたポリエチレングリコール鎖のサイズが、100Daから2kDa又は164から2kDAの範囲である、構成28から又は29記載の生分解性医薬組成物。
（構成３１）
前記類似体が、組成物全体の1%から20%(w%/w%)の量で存在する、構成28から30のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成３２）
前記ポリマーが、組成物全体の20%から50%(w%/w%)の量で存在する、構成28から31のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成３３）
前記トリブロック共重合体が、組成物全体の3.0%から45%(w%/w%)の量で存在する、構成28から32のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成３４）
前記ジブロック共重合体が、組成物全体の8.0%から50%(w%/w%)の量で存在する、構成28から33のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成３５）
前記組成物中の、エチレンオキシドに対するポリエステル反復単位のモル比が、トリブロック共重合体では0.5から3.5又は0.5から22.3、ジブロック共重合体では2から6又は0.8から13である、構成28から34のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成３６）
哺乳類におけるうつ病を治療するための方法であって、前記治療を必要とする前記動物に、医薬として許容し得る量の、spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物と、医薬として許容し得るビヒクルとを投与することを含む前記方法。
（構成３７）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、レトロ-インベルソペプチドである、構成36記載の、動物におけるうつ病を治療するための方法。
（構成３８）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、エンドキャップ処理される、構成36又は構成37記載の、動物におけるうつ病を治療するための方法。
（構成３９）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、アセチル化N-末端若しくはアミド化C-末端、又はアセチル化N-末端とアミド化C-末端を用いてエンドキャップ処理される、構成38記載の、動物におけるうつ病を治療するための方法。
（構成４０）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、以下の群:
（化８）
（構成４１）
前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物が、
（化９）
（構成４２）
前記医薬として許容し得るビヒクルが、蒸留水、緩衝液、グリセロール、ポリプロピレングリコール、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水・デキストロース、エタノール、及びそれらの混合物の群から選択される、構成36から41のいずれか1項記載の、動物におけるうつ病を治療するための方法。
（構成４３）
哺乳類におけるうつ病を治療するための方法であって、前記治療の必要がある前記動物に、構成15から35のいずれか1項記載の医薬として有効な量の生分解性医薬組成物を投与することを含む前記方法。
（構成４４）
うつ病を治療するための医薬品の製造のための、構成8から14のいずれか1項記載の医薬組成物。
（構成４５）
うつ病を治療するための医薬として有効な量の、構成15から35のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成４６）
うつ病を治療するための医薬品の製造のための、構成15から35のいずれか1項記載の生分解性医薬組成物。
（構成４７）
TREK-1チャネル活性を阻止するための方法であって、動物に、構成1から7のいずれか1項記載の有効量の組成物を投与することを含む前記方法。
（構成４８）
TREK-1チャネル活性を阻止するための方法であって、動物に、構成8から14のいずれか1項記載の有効量の医薬組成物を投与することを含む前記方法。
（構成４９）
TREK-1チャネル活性を阻止するための方法であって、動物に、構成15から35のいずれか1項記載の有効量の生分解性医薬組成物を投与することを含む前記方法。
Claims (3)
- spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を含む、TREK-1チャネル活性を阻止するための医薬組成物であって、前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくは前記spadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記混合物が、Ac-rlGwsvGipGswrplpa-NH2(配列番号:4)、Ac-rlGwsvGipGswrplpaappppadlrdq-NH2(配列番号:9)、Ac-rrwrGGrpfaGGaaaarlGwsvGipGswrplpaappppadlrdq-NH2(配列番号:13)、Ac-rlawsvaipaswrplpa-NH2(配列番号:15)、c(rlGwsvGipGswrplpa)(配列番号:20)、c(rlGwsvGipGswrplparlGwsvGipGswrplpa)(配列番号:21)、及びそれらの混合物からなる群から選択される、前記医薬組成物。
- spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を含む、うつ病を治療するための医薬組成物であって、前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくは前記spadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記混合物が、Ac-rlGwsvGipGswrplpa-NH2(配列番号:4)、Ac-rlGwsvGipGswrplpaappppadlrdq-NH2(配列番号:9)、Ac-rrwrGGrpfaGGaaaarlGwsvGipGswrplpaappppadlrdq-NH2(配列番号:13)、Ac-rlawsvaipaswrplpa-NH2(配列番号:15)、c(rlGwsvGipGswrplpa)(配列番号:20)、c(rlGwsvGipGswrplparlGwsvGipGswrplpa)(配列番号:21)、及びそれらの混合物からなる群から選択される、前記医薬組成物。
- spadinの少なくとも1種の類似体若しくはspadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記少なくとも1種の類似体のその混合物を含む、組成物であって、前記spadinの少なくとも1種の類似体若しくは前記spadinのプロペプチドの少なくとも1種の類似体、又は前記混合物が、Ac-rlGwsvGipGswrplpa-NH 2 (配列番号:4)、Ac-rlGwsvGipGswrplpaappppadlrdq-NH 2 (配列番号:9)、Ac-rrwrGGrpfaGGaaaarlGwsvGipGswrplpaappppadlrdq-NH 2 (配列番号:13)、Ac-rlawsvaipaswrplpa-NH 2 (配列番号:15)、c(rlGwsvGipGswrplpa)(配列番号:20)、c(rlGwsvGipGswrplparlGwsvGipGswrplpa)(配列番号:21)、及びそれらの混合物からなる群から選択される前記組成物の、うつ病を治療する医薬の製造のための使用。
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