JP6249777B2 - 皮膚におけるダイニンの調節 - Google Patents

Description

本発明は概して、ヒトの皮膚の審美上の外観及び健康を改善する方法、及び皮膚の治療に有用な化合物を同定する方法に関する。より具体的には、本発明は、皮膚におけるダイニンのレベルを調節する化合物に関する。

ダイニンは、マイナス端の方向に微小管に沿って移動するタンパク質のファミリーである。ダイニンは、ＡＴＰの加水分解由来の化学的エネルギーを、微小管に沿った段階的な移動に必要な機械的エネルギーに変換する。繊毛及び鞭毛を有する細胞のみに見られる、軸糸ダイニンは、構造体の軸糸において微小管のスライディングを生じさせる。細胞質ダイニンは、一方で、すべての動物細胞に存在すると考えられる。それは、軸糸ダイニンより、より近年になってから、同定され明らかにされた。非特許文献１及び非特許文献２を参照のこと（それらの開示は参照により本明細書に取り込まれる）。

細胞質ダイニンは、有糸分裂、細胞の極性化、小胞の細胞内移送、エンドソーム及びライソソーム、並びに細胞内の他の活動に関与する細胞骨格分子モーターである。細胞質ダイニンは、約１．５メガダルトン（ＭＤａ）の分子の大きさを有し、２つの同一の約５３０ｋＤａ／鎖の重鎖、２つの約７４ｋＤａの中鎖、４つの約５３ｋＤａと５９ｋＤａとの間の中鎖、及びいくつかの約１０ｋＤａから約１４ｋＤａの軽鎖を含む、１２又は１３以上のポリペプチドサブユニットを有する。重鎖は各々、４つのＡＴＰ結合部位（ＡＴＰ加水分解部位を含む）及び微小管結合部位を有する。中鎖は、ダイニンをカーゴに結合させると考えられる。

ダイニンタンパク質は、細胞において多様なマテリアルの活動を生み出すだめ、それらは、細胞小器官の活動、発生の決定の局在化、及びニューロンにおける潜在的な長距離シグナリングを含む、多くの細胞機能及び発生上の機能に不可欠である。ダイニンはまた、中心体の再配列、細胞骨格の再構築、端形成の誘導、及び単層細胞培養の創傷治癒の間の細胞遊走を調節することが示されている。それらはまた、ヒトのケラチノサイトにおいて取り込まれたメラノソームの核周辺凝集を介在し、それにより、核上メラニンの形成がもたらされる。

ダイニンの機能上の欠損は、これらのニューロンの軸索輸送障害により引き起こされる運動ニューロン疾患におけるニューロン異常に関わる。細胞質ダイニン鎖をコードする遺伝子の崩壊は、呼吸器疾患、原発性線毛運動障害（カルタゲナー症候群）に関連し、筋萎縮性側索硬化症といった運動ニューロン疾患に関与する可能性がある。今まで、健康な皮膚を維持すること及び皮膚老化を遅くすることにおけるダイニンの役割は、認識されていなかった。

Ｐａｓｃｈａｌ Ｂ．Ｍ．，Ｓｈｐｅｔｎｅｒ Ｈ．Ｓ．，Ｖａｌｌｅｅ Ｒ．Ｂ．，"ＭＡＰ １Ｃ ｉｓ ａ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ＡＴＰａｓｅ ｗｈｉｃｈ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｈａｓ ｄｙｎｅｉｎ−ｌｉｋｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，"Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１９８７ Ｓｅｐ；１０５（３）：１２７３−８２ Ｓｈｐｅｔｎｅｒ Ｈ．Ｓ．，Ｐａｓｃｈａｌ Ｂ．Ｍ．，ａｎｄ Ｖａｌｌｅｅ Ｒ．Ｂ．，"Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ＡＴＰａｓｅ ｏｆ ｂｒａｉｎ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｄｙｎｅｉｎ （ＭＡＰ １Ｃ），"Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，１９８８ Ｓｅｐ；１０７（３）：１００１−９

したがって、本発明の目的は、老化の皮膚科学的なサインを治療し、改善させ、抑制し及び／又は防止するための組成物及び方法を提供することである。本発明の他の目的は、皮膚細胞におけるダイニンのレベルを調節することによって、老化の皮膚科学的なサインを治療し、改善させ、抑制し及び／又は防止するための方法を提供することである。本発明のさらなる目的は、皮膚細胞におけるダイニンレベルの調節能に基づき、老化の皮膚科学的なサインを治療し、改善させ、抑制し及び／又は防止するのに有用な化合物を同定するための方法を提供することである。

前述の記載は、直面している技術の課題の特性をより良く理解するために単に提示されているにすぎず、いかなる態様においても先行技術に含まれると理解されるべきではない。

前述の目的および他の目的を踏まえて、本発明は、１又は２以上の皮膚科学的な老化のサインを改善するための、ダイニン、好ましくは細胞性ダイニンのモジュレーターを提供する。該モジュレーターは、所望の効果に依存して、皮膚におけるダイニンのレベルをアップレギュレート又はダウンレギュレートし得る。皮膚繊維芽細胞及びケラチノサイト内で産生されたダイニンのアップレギュレーターは、繊維芽細胞特異的タンパク質コラーゲン、エラスチン、及びフィブリリン、並びにケラチノサイトタンパク質ケラチンを含む、細胞内タンパク質の産生を増加させると考えられる。全体的な皮膚の強度及び健康に繊維芽細胞産生タンパク質の重要性が与えられ、ダイニンのアップレギュレーションは、皮膚の老化の徴候を低減させるのに有益な効果をもたらす。

本発明はまた、皮膚におけるダイニンのレベルをダウンレギュレートさせるモジュレーターをも包含する。ダイニンはまたヒトのケラチノサイトにおける取り込まれたメラノソームの核周辺凝集（それは核上のメラニン形成を引き起こす）を介在するので、特にケラチノサイト及び／又はメラノサイトにおけるダイニンのダウンレギュレーターは、皮膚における年齢によるしみ及び色素過剰の他の形態の治療に有用である。ダイニンのダウンレギュレーターは、乾癬を含む、増殖性疾患又は皮膚の治療に効果的であるとも考えられる。

本発明の一観点において、皮膚の審美上の外観を改善するのに有用な活性物を同定するための、候補物質のスクリーニング方法が提供される。該方法は、候補物質の、皮膚繊維芽細胞又はケラチノサイトにおけるダイニン発現の調節能をアッセイすることを含む。該方法は典型的には、ヒトの皮膚繊維芽細胞又はケラチノサイトを候補物質とともにインキュベートし、続いて、定量ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）といった定量技術により、細胞質ダイニン重鎖サブユニットＤＹＮＣ１Ｈ１をコードするｍＲＮＡのレベルを測定することを含む。

したがって、ヒトの皮膚繊維芽細胞及びケラチノサイトにおけるダイニンのレベルを調節する有効量の物質を、改善を必要とする皮膚の領域に局所適用することを含む、ヒトの皮膚の審美上の外観を改善するための方法が提供される。ダイニンのモジュレーターは、本明細書において“活性物”とされ、アップレギュレーターであってもダウンレギュレーターであってもよく、典型的には化粧品として許容可能な媒材中で製剤化され、健康又は審美上の外観を向上させるのに十分な期間、顔、首、手、胸、足等の皮膚といったヒトの外皮に局所適用される。

本発明の一観点において、細胞質ダイニンの細胞レベルを調節する（例えば、アップレギュレート又はダウンレギュレートする）有効量の活性剤を、改善を必要とする皮膚の領域に局所適用することを含む、ヒトの皮膚の審美上の外観を改善する方法が提供され、活性剤の細胞質ダイニン調節能は、活性剤に接触した細胞における細胞質ダイニンの発現レベルを測定するアッセイにより決定される。アッセイにおいて用いられる細胞は、ダイニンを発現するいかなる細胞であってもよいが、好ましくは哺乳類の、より好ましくはヒト又はマウスの細胞である。該細胞は、繊維芽細胞又はケラチノサイトといった皮膚細胞であってもよい。該アッセイは、完全な複合体を含む、ダイニンのいかなるフラグメント又はマーカーのレベルをも測定し得るが、典型的には測定されるものは細胞質ダイニン重鎖サブユニットＤＹＮＣ１Ｈ１の発現レベルであり、ヒト遺伝子ＤＹＮＣ１Ｈ１又はマウス遺伝子Ｄｙｎｃ１ｈ１により発現される。ヒト遺伝子ＤＹＮＣ１Ｈ１又はマウス遺伝子Ｄｙｎｃ１ｈ１の発現レベルは、例えば、定量ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）といった適切な手法によって、対応するｍＲＮＡの発現レベルを測定することで決定され得る。

ダイニンをアップレギュレートする有効量の活性剤を、治療を必要とする皮膚の領域に局所適用することを含む、しわ及び／又は小じわを治療する方法が提供され、該活性剤の細胞質ダイニン調節能は、該活性剤に接触した細胞における細胞質ダイニンの発現レベルを測定するアッセイにより決定される。該アッセイ工程は最も典型的には、ヒト繊維芽細胞を候補物質とともにインキュベートし、続いて、細胞質ダイニン重鎖サブユニットＤＹＮＣ１Ｈ１をコードするｍＲＮＡのレベルを測定することを含み、該候補物質は、一部は、ダイニン発現のアップレギュレート能に基づき、活性剤としての使用のために選択される。

ダイニンをアップレギュレートする有効量の活性剤を、治療を必要とする皮膚の領域に局所適用することを含む、色素過剰を治療する方法が提供され、該活性剤の細胞質ダイニン調節能は、該活性剤に接触した細胞における細胞質ダイニンの発現レベルを測定するアッセイにより決定される。この実施態様におけるアッセイ工程は通常、ヒト繊維芽細胞を候補物質とともにインキュベートし、続いて、細胞質ダイニン重鎖サブユニットＤＹＮＣ１Ｈ１をコードするｍＲＮＡのレベルを測定することを含み、該候補物質は、一部は、ダイニン発現のダウンレギュレート能に基づき、活性剤としての使用のために選択される。

本発明のさらなる観点、特徴及び利点は、下記の本発明についての詳細な記載を読むことで、より良く理解されるだろう。

本明細書で用いられるすべての用語は、特に他に言及がない限り、それらの通常の意味を有するものと意図される。“化粧品として許容可能な”は、特定の成分が用いられるレベルで一般的に安全で非毒性とされることを意味する。本明細書において用いられる“防止する”（“Ｐｒｅｖｅｎｔ”）の用語は、皮膚の老化の特定のサインの開始又は進展を遅らせることを含む。“ひ薄化した皮膚”の用語は、年齢による老化でひ薄化した皮膚や若くしてひ薄化した皮膚（例えば、光老化により引き起こされ得る）を含む。“必要とする個人”という句は、男性又は女性を含む、改善された皮膚の外観又は健康からの利益を受け得るヒトを意味する。“皮膚”という用語は、限定されることなく、唇、顔、手、足、首及び胸の皮膚を含む。本明細書で用いられる“本質的に〜からなる”という用語は、本明細書を読むことで理解されるような、クレームされた発明の基本的及び新規の特徴に物質的に影響を与えることのない、特定のマテリアル又は工程及びものに本発明を限定することが意図されている。

本明細書で用いられるダイニンという用語は、細胞質ダイニンや軸糸ダイニンを意味するが、本発明による好ましいモジュレーターは、細胞質ダイニンのレベルを調節する。細胞質ダイニンは、細胞質ダイニン１複合体や細胞質ダイニン２複合体を含むが、本発明による好ましいモジュレーターは、細胞質ダイニン１複合体のレベルを調節する。ダイニンはいかなる動物由来のものでもよいが、典型的にはヒト又はマウスのダイニン、好ましくはヒトのダイニンである。本明細書で記載される細胞質ダイニンの命名は、Ｐｆｉｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｄｙｎｅｉｎ ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ，”Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．，２００５ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ７；１７１（３）：４１１−４１３によるもので（本開示は参照により本明細書に取り込まれる）、表１に示される。

“モジュレーター”という用語は、限定されることなく、有機分子；生体分子（例えば、ペプチド、タンパク質、抗体、核酸オリゴマー等）；及び植物抽出物といった物質の混合物を含む、いかなる物質をも包含する。該モジュレーターは、ダイニンの細胞レベルを調節し、これは、ダイニンタンパク質の細胞レベルが活性剤により増加又は減少することを意味する。“調節”という用語は、抑制（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ）、減衰及び／又はダウンレギュレーション若しくは抑制（ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ）とともに、アップレギュレーション、誘導、刺激、増強、及び／又は抑制の軽減を意味し得る。該モジュレーターは、限定されることなく、インヒビターであってもアンタゴニストであってもよく、例えば、部分的又は全体的に結合して、刺激をブロックし、活性を減弱、防止、遅延させ、不活性化し、減感させ、又はダイニンの遺伝子、タンパク質若しくはペプチドの発現レベルをダウンレギュレートさせる化合物である。該モジュレーターは、限定されることなく、アクチベーターであってもアゴニストであってもよく、例えば、結合して、活性を刺激し、増加させ、開始させ、活性化させ、促進し、亢進させ、感作させ、又はダイニンの遺伝子、タンパク質若しくはペプチドの発現レベルをアップレギュレートさせる化合物である。該タンパク質レベルが調節されるメカニズムは重要ではない。

本明細書で用いられる“発現レベル”という用語は、細胞において発現した遺伝子及び／又はタンパク質の量を表す。本明細書で用いられる“遺伝子”は、特定のポチペプチドをコードし得る少なくとも１つのオープンリーディングフレームを含むポリヌクレオチドを含む。本明細書で用いられる“ポリヌクレオチド”という用語は、“オリゴヌクレオチド”と同義であり、デオキシリボヌクレオチドであってもリボヌクレオチドであってもよい、あらゆる長さのヌクレオチド、又はそのアナログのポリマーの形態をも含み、限定されることなく、ｍＲＮＡ、ＤＮＡ、ｃＤＮＡ、プライマー、プローブ及び同様物が含まれる。

ダイニンの発現レベルと皮膚科学的な老化との間の相関性の発見は、潜在的なダイニンモジュレーターの同定のためのスクリーニング方法をもたらした。一実施態様において、細胞が候補物質で処理され、候補物質とインキュベートされ、又は接触された後、ダイニンの発現レベルを決定するためのアッセイが提供される。“候補物質”という用語は、該物質がこのような活性を有すると疑われるか否かにかかわらず、ダイニンのモジュレーターとしての活性が調べられるいかなる物質をも意味する。細胞は、ダイニン、好ましくは細胞質ダイニンを発現するいかなる細胞であってもよい。一実施態様において、細胞は、哺乳類の繊維芽細胞である。他の実施態様において、細胞は、哺乳類のケラチノサイトである。好ましくは、細胞は、ヒト又はマウスの細胞である。細胞は、発現レベルにおいて測定可能な変化をもたらすのに十分長い時間（典型的には、少なくとも１時間、より典型的には約１２時間−約７２時間）、候補物質とともにインキュベートされた後、それは、その後、溶解されて、ダイニン及びダイニンをコードするｍＲＮＡといった細胞成分を放出する。ダイニンタンパク質又はそのサブユニットの量は、その後、ペプチド及びタンパク質並びに／又はポリヌクレオチド（例えばｍＲＮＡ）の検出及び定量に適した任意の手法により測定され得る。

ダイニンの発現レベルを測定するのに好ましい方法は、ｍＲＮＡ発現の定量を含む。ｍＲＮＡ発現を検出するのに適切な方法は、定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）、リアルタイムＱＰＣＲ、逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）、及び定量逆転写ＰＣＲ（ＱＲＴ−ＰＣＲ）や、本技術分野の公知の方法を含む。米国特許第７，１０１，６６３号明細書及び米国特許第７，６６２，５６１号明細書に詳述されているように（これらの開示は、参照により本明細書に取り込まれる）、ｍＲＮＡを検出するための定量逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＱＲＴ−ＰＣＲ）は、（ａ）ｃＤＮＡを生成するのに適切なコンディション下で逆転写酵素及び高濃度のターゲットシークエンス特異的な逆転写酵素プライマーとともに細胞溶解液由来のＲＮＡサンプルをインキュベートし；（ｂ）続いて、ｃＤＮＡに特異的な高濃度のＰＣＲプライマーセット及び逆転写酵素反応に熱安定的なＤＮＡポリメラーゼを含む、逆転写酵素反応系に、適切なポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）試薬を加え；（ｃ）所望のサイクル数及び適切なコンディション下でＰＣＲ反応をサイクルさせて、ｃＤＮＡに特異的なＰＣＲ産物（“アンプリコン”）を生成する工程を含み得る。ＱＲＴ−ＰＣＲプロセスの生成物は、例えばサザンブロッティングにより所定のリポーター遺伝子と比較したＲＮＡ種の相対量を決定するように、固定された数のＰＣＲサイクルの後、比較され得る。より典型的には、ＰＣＲ反応の進行は、例えば、（１）二重鎖ＤＮＡで挿入する非特異的蛍光染料、及び／又は（２）相補的ＤＮＡターゲットでプローブをハイブリダイゼーションした後のみに検出を許容する蛍光性リポーターでラベルされたオリゴヌクレオチドからなる配列特異的なＤＮＡプローブによって、各ＰＣＲプライマーセットに対するアンプリコン産物の相対比率を分析することでモニターされる。

ｍＲＮＡは、表１に示されるサブユニットをコードするｍＲＮＡを含む、ダイニンに関連するいかなるｍＲＮＡであってもよい。一実施態様において、ｍＲＮＡは重鎖サブユニットＤＹＮＣ１Ｈ１をコードし、それは、特に、“細胞質ダイニン１重鎖”又は“標準（ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌ）細胞質ダイニン重鎖”として論文で同義として知られている。好ましい実施態様において、ｍＲＮＡは、ヒトＤＹＮＣ１Ｈ１をコードする。

ｍＲＮＡ発現のレベルは、調節の相対的な程度を決定するために、候補物質で処理されていないコントロールと比較され得る。いくつかの実施態様において、候補物質は、ｍＲＮＡ発現を、少なくとも約１０％、より適切には少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、又は少なくとも約５０％アップレギュレートさせる。好ましくは、候補物質は、ｍＲＮＡ発現を、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、又は少なくとも約１００％アップレギュレートさせる。他の実施態様において、候補物質は、ｍＲＮＡ発現を、少なくとも約１０％、より適切には少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、又は少なくとも約５０％ダウンレギュレートさせる。これらの基準に合致する候補物質は、さらなる評価に対する使用のために選択され得る。

前述のスクリーニングプロトコールにより同定されたダイニンのモジュレーターは、化粧品の調製において活性剤として用いられ得、皮膚への局所適用のために組成物中に例えば媒材といった他の化粧品として許容可能な成分とともに製剤化され得る。該組成物は、効果的な量で皮膚に局所適用され、その量は、皮膚の健康における測定可能な改善又は老化の１若しくは２以上の皮膚科学的なサインの減少を達成するのに十分な量を意味する。皮膚老化のこのようなサインは、限定されることなく、下記を含む。
（ａ）小じわ又はしわを治療、低減、及び／又は防止する、
（ｂ）皮膚の毛穴のサイズを小さくする、
（ｃ）皮膚の厚み、ふくよかさ、及び／又はつっぱり感を改善する、
（ｄ）皮膚のしなやかさ、及び／又は柔軟性を改善する、
（ｅ）皮膚のトーン、輝き、及び／又は透明度を改善する、
（ｆ）プロコラーゲン及び／又はコラーゲンの生成を改善する、
（ｇ）エラスチンの維持及び再構築を改善する、
（ｈ）皮膚のきめを改善し、及び／又は再組織化を促進する、
（ｉ）皮膚バリアを修復し、及び／又はその機能を改善する、
（ｊ）皮膚の輪郭を改善する、
（ｋ）皮膚の艶及び／又は明るさを修復する、
（ｌ）皮膚の必須栄養素及び／又は構成要素を補充する、
（ｍ）老化及び又は更年期により減少された皮膚の外観を改善する、
（ｎ）皮膚の潤いを改善する、
（ｏ）皮膚の伸縮性及び／又は弾力性を向上させる、
（ｐ）皮膚のたるみを治療し、低減させ及び／又は防止する、並びに／又は
（ｑ）色素沈着を低減させる。

実際に、ダイニンの発現レベルを調節する剤単独、又は化粧品として許容可能な媒材中の該剤を含む、本発明の組成物は、治療を必要とする皮膚に適用される。すなわち、該皮膚とは、前述の特性のいずれかが不足又は喪失した皮膚、又は前述の皮膚の特性のいずれかにおける改善により恩恵を受ける皮膚である。皮膚は典型的には、１日１回又は２回治療される。治療は、１週間、２週間、４週間、８週間、６カ月間又はそれ以上続けられ得る。

一実施態様において、化粧品として許容可能な媒材中の活性剤は、皮膚における小じわ及び／又はしわの外観を防止し、治療し、及び／又は改善させるために、小じわ及び／又はしわのある皮膚に、局所的に適用される。この場合、該組成物は、治療を必要とする皮膚に適用され、それは、すでに小じわ及び／若しくはしわのある皮膚又は小じわ及び／若しくはしわに進展するリスクのある皮膚を意味する。好ましくは、該組成物は、顔、首、胸及び／又は手の皮膚の小じわ及び／又はしわに直接適用される。本実施態様による好ましい剤は、ダイニン発現のアップレギュレーターである。好ましい実施態様において、ダイニン発現のアップレギュレーターは、皮膚繊維芽細胞におけるコラーゲン、エラスチン及び／又はフィブリリンの産生を亢進させる。

一実施態様において、本発明は、皮膚におけるコラーゲン、エラスチン及び／又はフィブリリンの産生を増加させることにより皮膚の審美上の外観を改善させる方法に関し、該方法は、ダイニンの発現をアップレギュレートさせる有効量の剤を、改善を必要とする皮膚の領域に局所適用することを含み、前記化合物は、本明細書で記載されるアッセイを含む、物質のダイニン発現レベル調節能を測定するアッセイによって使用のために同定される。好ましくは、該アッセイは、皮膚繊維芽細胞におけるダイニンのｍＲＮＡ発現レベルを測定する。

一実施態様において、ダイニンモジュレーターは、植物抽出物といった天然の植物マテリアルを含む。ダイニンをアップレギュレートさせる天然の植物マテリアル及び植物抽出物は、以下の種由来の抽出物からなっていてもよい：Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｓ、Ｃｌｉｎａｃａｎｔｈｕｓ ｎｕｔａｎｓ、Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ ｔｕｂｕｌｏｓａ、Ｅｒｙｔｈｒｉｎａ ｉｎｄｉｃａ、Ｏｐｅｒｃｕｌｉｎａ ｔｕｒｐｅｔｈｕｍ、Ｇｙｎａｎｄｒｏｐｓｉｓ ｇｙｎａｎｄｒａ、Ｅｒｔｈｒｉｎａ Ｆｌａｂｅｌｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｈｅｌｉｃｈｒｙｓｕｍ Ｏｄｏｒａｔｉｓｓｉｍｕｍ、Ｄｅｓｍａｎｔｈｕｓ ｉｌｌｉｎｏｅｎｓｉｓ、Ｏｚｏｔｈａｍｎｕｓ Ｏｂｃｏｒｄａｔｕｓ、Ｔａｇｅｔｅｓ ｅｒｅｃｔａ Ｌｉｎｎ、Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ Ｌｉｎｎ、Ｍｅｄｅｍｉａ ｎｏｂｉｌｉｓ、Ｃａｌａｔｒｏｐｉｓ ｇｉｇａｎｔｅａｎ、Ｌｏｒｏｐｅｔａｌｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ、Ｈｅｌｉｏｔｒｏｐｉｕｍ ｉｎｄｉｃｕｍ、Ｄｉａｎｅｌｌａ ｅｎｓｉｆｏｌｉａ、Ｂｒｅｙｎｉａ ｆｒｕｔｉｃｏｓａ、Ｄｅｎｄｒａｎｔｈｅｍａ ｉｎｄｉｃｕｍ、Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ、Ｓｃｏｐａｒｉｓ ｄｕｌｃｉｓ、Ａｃａｃｉａ ｍｅｌａｎｏｘｙｌｏｎ、Ｃｌｅｒｏｄｅｎｄｒｕｍ ｆｌｏｒｉｂｕｎｄｕｍ、Ｃｏｍｍｅｒｓｏｎｉａ ｂａｒｔｒａｍｉａ、Ｄｏｄｏｎａｅａ ｖｉｓｃｏｓｅ、Ｄｕｂｏｉｓａ ｍｙｏｐｏｒｏｉｄｅｓ、Ｅｈｒｅｔｉａ ａｃｕｍｉｎａｔｅ、Ｆｉｃｕｓ ｃｏｒｏｎａｔａ、Ｇｏｏｄｅｎｉａ ｏｖａｔａ、Ｈｙｍｅｎｏｓｐｏｒｕｍ ｆｌａｖｕｍ、Ｌａｖａｔｅｒａ ｐｌｅｂｅｉａｎ、Ｍｅｌａｌｅｕｃａ ｑｕｉｎｑｕｅｒｎｅｒｖｉａ、Ｏｍｏｌａｎｔｈｅｓ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉｕｓ、及びこれらの組み合わせである。

ダイニンをアップレギュレートさせる他の物質は、下記を含む。

また、ダイニンをアップレギュレートさせるのに適するのはカルミクリンであり、それは、Ｃｈａｌａｒａ ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａから単離されるアリルエーテルとしてｄ−マンニトールに結合された１０−メチル−ｔｒａｎｓ−モノシクロファルネソールであり、１−Ｏ−［（Ｅ）−３−メチル−５−（２，５，６，６−テトラメチル−１−シクロヘキセン−１−イル）−２−ペンテニル］−Ｄ−マンニトールである。

一実施態様において、本発明は、皮膚におけるシミ及びその他の色素沈着過剰の徴候の外観を低減させる方法に関し、該方法は、ダイニンの発現をダウンレギュレートさせる有効量の剤を、（色素沈着の外観及び色素過剰の他の形態の）低減を必要とする皮膚の領域に局所適用することを含み、前記化合物は、本明細書で記載されるアッセイを含む、物質のダイニン発現レベル調節能を決定するアッセイによって使用のために同定される。好ましくは、該アッセイは、ケラチノサイトにおけるダイニンのｍＲＮＡ発現レベルを測定する。ダイニンのダウンレギュレーターはまた、乾癬を含む、増殖性疾患又は皮膚の治療において有効であり得る。

ダイニンをダウンレギュレートさせる天然の植物マテリアル及び植物抽出物は、Ａｍｏｒｐｈｏｐｈａｌｌｕｓ ｃａｍｐａｎｕｌａｔｕｓ、Ｇｏｍｐｈｒｅｎａ ｇｌｏｂｏｓａ Ｌｉｎｎ．、Ｆｉｂｒａｒｅｔｉｎｕｍ ｒｅｓｉｃａ Ｐｉｅｒｒｅ（Ｆｉｂｒａｕｒｅｔｉｎｅ）、Ｖｅｒｎｏｎｉａ ｃｉｎｅｒｅａ Ｌｉｎｎ．Ｌｅｓｓ、Ｃａｙｒａｔｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ、Ｐｔｅｒｉｓ ｓｅｍｉｐｉｎｎａｔａ及びこれらの組み合わせである。

ダイニンをダウンレギュレートさせる他の物質は、５−クロロ−サリチル酸、３，６−ノナジエノール、ｃｉｓ−６−ノネノール及び下記を含む。

一実施態様において、ヒトの皮膚の審美上の外観を改善させ、並びに／又は老化した及び／若しくは光のダメージを受けた皮膚の外観を改善させるための方法は、Ｍａｍｍｅａ ｓｉａｍｅｎｓｉｓ（花の抽出物）、Ｍｅｄｅｍｉａ ｎｏｂｉｌｉｓ（種の抽出物）、Ｒａｐｈｉａ ｆａｒｉｎｉｆｅｒａ（種の抽出物）、Ｅｒｙｔｈｒｉｎａ ｉｎｄｉｃａ（葉の抽出物）、Ｃｌｅｒｏｄｅｎｄｒｏｎ ｆｒａｇｒａｎｓ（植物全体の抽出物）、Ｏｐｅｒｃｕｌｉｎａ ｔｕｒｐｅｔｈｕｍ（植物全体の抽出物、根は無し）又はこれらの組み合わせからなる群より選択される天然の植物抽出物と、化粧品として許容可能な媒材と、を含む有効量の組成物を局所的に適用することを含む。

植物マテリアルは、限定されることなく、植物全体、乾燥植物、挽かれた植物、又はそれらの一部を含む、いかなる形態であってもよく、限定されることなく、種、針葉、葉、根、樹皮、球果、茎、根茎、カルス細胞、プロトプラスト、花、分裂組織、又は、天然の植物マテリアル、及び／若しくは植物の一部、若しくはこれらの組み合わせに見られる若しくは単離された成分及び／若しくは構成物質を含む。一実施態様において、天然の植物マテリアルは、植物全体由来の、又は植物の葉といった植物の選択部位由来の抽出物の形態である。“天然の植物マテリアル”はまた、天然の植物マテリアル由来の原料（ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ）、成分（ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ）、構成物質（ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ）又は抽出物を含むと理解される。他の実施態様において、本明細書で用いられる植物抽出物はまた、“合成の”抽出物、すなわち、組み合わされて天然由来の植物抽出物の組成物及び／又は活性を実質的に模倣するために組み合わされる公知の植物成分及び／又は構成成分の種々の組み合わせを含む。このような合成の抽出物は、“植物抽出物”の用語に含まれる。合成の抽出物は、植物と同様に、２以上、３以上、４以上の活性成分を有する。最も好ましくは、合成の抽出物は実質的に、天然の抽出物と同じ数の活性成分を有する。合成の抽出物と植物又は天然の抽出物との間の活性成分の数的な発生（ｎｕｍｅｒｉｃａｌ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ）の対応はまた、“共通性の割合（ｐｅｒｃｅｎｔ ｃｏｍｍｏｎａｌｉｔｙ）”の用語で表され得る。好ましくは、合成の抽出物は、植物又は天然の抽出物の化学的組成物に対して約５０パーセント又はそれ以上の共有性を有する。言い換えると、合成の抽出物は、約５０パーセント又はそれ以上の、植物又は天然の抽出物で見られる活性成分を有する。より好ましくは、合成の抽出物の化学的組成は、植物又は天然の抽出物の化学的組成に対して約７０パーセント又はそれ以上の共有性を有する。好ましくは、合成の抽出物は、植物又は天然の抽出物の化学的組成に対して約９０パーセント又はそれ以上の共有性を有する。

この開示の組成物での使用に対して、植物抽出物又は成分及び／又は活性構成物質は好ましくは、植物に直接由来する。該成分は、精製された形態、半精製された形態、又は精製されていない形態であってもよい。一実施態様において、成分は、水性又は有機溶媒抽出により得られた抽出物の形態である。有機溶媒の限定されない例は、酢酸、酢酸エチル、低級アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、ブタノール）、ジクロロメタン、ヘキサン、トルエン、キシレン、石油エーテル及びこれらの組み合わせを含む。該溶媒は、極性であっても非極性であってもよく、プロトン性であっても非プロトン性であってもよく、水混和性であっても水非混和性であってもよい。ｐＨは、酸性であっても、中性であってみ、アルカリ性であってもよい。本技術分野で公知の方法では、水性又は有機性溶媒抽出が用いられ得る。約３０℃から約９０℃の間の温度で、約１−８時間の間の抽出時間が典型的に適している。収集された抽出物は、その後、破片を除くために微細ろ過され、直接用いられてもよく、例えば溶媒を蒸留することにより又は他の公知の処理方法により濃縮され、抽出物はまた粉末の形態で提供され得る。

本発明による化粧品組成物は、局所適用に対して種々の形態で製剤化され得、ダイニンを調節する１又は２以上の活性物を、約０．００００１重量％から約９０重量％含み、好ましくは、このような活性物を、約０．００１重量％から約２５重量％、より好ましくは約０．００１重量％から約１重量％の量で含む。

該組成物は、化粧品として許容可能な媒材を含み得る。このような媒材は、皮膚への適用に適した本技術分野において公知であるいかなる形態をもとり得、限定されることなく、水；植物油；鉱物油；オクタルパルミテート、イソプロピルミリステート及びイソプロピルパルミテートといったエステル；ジカプリルエーテル及びジメチルイソソルバイドといったエーテル；エタノール及びイソプロパノールといったアルコール；セチルアルコール、セテアリルアルコール、ステアリルアルコール、及びビフェニルアルコールといった脂肪族アルコール；イソオクタン、イソドデカン、及びイソヘキサデカンといったイソパラフィン；シクロメチコンといったシリコーン油；鉱物油、ワセリン、イソエイコサン、及びポリイソブテンといった炭化水素油；プロピレングリコール、グリセリン、ブチレングリコール、ペンチレングリコール、及びヘキシレングリコールといったポリオール；リポソーム；ワックス；又は前述の組み合わせ若しくは混合物を含み得る。

該媒材は、水相、油相、アルコール、シリコーン相、又はこれらの混合物を含み得、エマルションの形態であってもよい。適切なエマルションの限定されない例示としては、油中水型エマルション、水中油型エマルション、水中シリコーン型エマルション、シリコーン中水型エマルション、油中グリセリン型エマルション、水中ワックス型エマルション、水／油／水三相のエマルション又は同様物が挙げられる。該エマルションは、非イオン性、アニオン性、若しくは両性の界面活性剤といった乳化剤、又はゲル化剤を含み得る。

局所組成物は典型的には、約２から約８の範囲のｐＨ、好ましくは３から７の範囲のｐＨを有し得る。いくつかの実施態様において、該組成物は、３．５から５．５の範囲のｐＨを有し得る。クエン酸及びトリエタノールアミンといった適切なｐＨ調節剤を添加して、ｐＨを所望の範囲に調節することができる。

本発明の一実施態様において、組成物は、限定されることなく、植物、角質溶解剤、剥離剤（ｄｅｓｑｕａｍａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、ケラチノサイト増殖亢進剤、コラゲナーゼ阻害剤、エラスターゼ阻害剤、脱色剤、抗炎症剤、ステロイド、抗にきび剤、抗酸化剤及び終末糖化産物（ＡＧＥ）阻害剤を含む、付加的な皮膚活性剤を含み得る。

組成物は、抗老化効果を有する付加的な活性成分を含有し得る。このような組み合わせにより相乗効果が得られることが期待されるからである。典型的な抗老化成分は、限定されることなく、数例を挙げると、植物（例えば、Ｂｕｔｅａ Ｆｒｏｎｄｏｓａ抽出物）；フィトール；チオジプロピオン酸（ＴＤＰＡ）及びそのエステル；レチノイド（例えば、９−ｃｉｓ レチノイン酸、１３−ｃｉｓ レチノイン酸、全ｔｒａｎｓレチノイン酸及びそれらの誘導体、フィタン酸、レチノール（ビタミンＡ）及びそのエステル（例えば、パルミチン酸レチノール、酢酸レチノール及びプロピオン酸レチノール）、並びにそれらの塩及びその他）；ヒドロキシ酸（α−ヒドロキシ酸及びβ−ヒドロキシ酸を含む）、サリチル酸及びサリチル酸アルキル；剥離剤（例えば、グリコール酸、３，６，９−トリオキサウンデカン二酸等）、エストロゲン合成酵素促進化合物（例えば、カフェイン及び誘導体）；５α−リダクターゼ活性阻害作用を有する化合物（例えば、リノレン酸、リノール酸、フィナステライド、及びこれらの混合物）；バリア機能促進剤（例えば、セラミド、グリセリド、コレステロール、及びこれらのエステル、α−ヒドロキシ脂肪酸、ω−ヒドロキシ脂肪酸、及びこれらのエステル等）を含む。典型的なレチノイドは、限定されることなく、レチノイン酸（例えば、全ｔｒａｎｓ又は１３−ｃｉｓ）及びそれらの誘導体、レチノール（ビタミンＡ）及びそのエステル（パルミチン酸レチノール、酢酸レチノール及びプロピオン酸レチノール））、並びにそれらの塩を含む。

他の実施態様において、本発明の局所用組成物はまた、皮膚浸透促進剤、ミリスチン酸イソプロピル、ワセリン、シリコーン（例えば、メチコン、ジメチコン）、油、鉱物油、脂肪酸エステルといった皮膚軟化剤、グリセリン又はカプリリルグリコールといった湿潤剤、パルミトイルオリゴペプチド、コラーゲンといった皮膚プランパー（ｐｌｕｍｐｅｒ）、コラーゲン及び／又はグリコサミノグリカン（ＣＡＧ）の促進剤、アボベンゾンといったサンスクリーン、剥離剤、及び抗酸化剤のうちの１又は２以上を含んでいてもよい。

適切な角質除去剤は、例えば、α−ヒドロキシ酸、β−ヒドロキシ酸、オキソ酸、オキソ二酸、並びにエステル、無水物、及び塩といったそれらの誘導体を含む。適切なヒドロキシ酸は、例えば、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、２−ヒドロキシアルカン酸、マンデル酸、サリチル酸、及びこれらの誘導体を含む。好適な剥離剤は、グリコール酸である。剥離剤が存在する場合、組成物の約０．１重量％から約８０重量％で含み得る。

本発明において用いられ得る抗酸化剤の例は、アスコルビン酸及びその誘導体／エステル；β−カロテン；カテキン、クルクミン；フェルラ酸誘導体（例えば、フェルラ酸エチル、フェルラ酸ナトリウム）；没食子酸誘導体（例えば、没食子酸プロピル）；リコペン；還元酸；ロスマリン酸；タンニン酸；テトラヒドロクルクミン；トコフェロール及びその誘導体；尿酸；又はこれらの混合物といったフェノール性ヒドロキシ基を有する化合物を含む。他の適切な抗酸化剤は、グルタチオン、リポ酸、チオグリコール酸、及び他のスルフヒドリル化合物といった、還元型又は非還元型での、１又は２以上のチオール基（−ＳＨ）を有するものである。抗酸化剤は、亜硫酸水素塩、メタ亜硫酸水素塩、亜硫酸塩、又は硫黄を含む他の無機塩及び酸といった、無機物でもよい。本発明の組成物は、抗酸化剤を、組成物の全重量の好ましくは約０．００１重量％から約１０重量％、より好ましくは約０．０１重量％から約５重量％含有し得る。

他の通常用いられる添加剤は、トコフェロール及びアスコルビン酸といったビタミン；アスコルビルモノパルミテートといったビタミン誘導体；ヒドロキシアルキルセルロースといった増粘剤；ゲル化剤；構造化剤（ｓｔｒｕｃｔｕｒｉｎｇ ａｇｅｎｔ）；ＥＤＴＡといった金属キレート剤；顔料；着色料；並びにｐＨ調節剤を含む。組成物は任意に、限定されることなく、膜形成剤、モイスチャー剤、ミネラル、粘度及び／又はレオロジー改質剤、抗にきび剤、防虫剤、皮膚冷却化合物、皮膚保護剤、潤滑剤、香料、防腐剤、安定化剤、及びこれらの混合物を含む、本技術分野において当業者に公知の他の成分を含み得る。前述に加えて、本発明の化粧品組成物は、皮膚疾患の治療のための他のいかなる他の化合物をも含み得る。

該組成物は、特に局所適用のための、例えば、エマルション、ローション、クリーム、美容液（ｓｅｒｕｍ）、スプレー、エアロゾル、ケーキ（ｃａｋｅ）、軟膏、エッセンス、ゲル、ペースト、パッチ、ペンシル、ウェットティッシュ（ｔｏｗｅｌｅｔｔｅ）、マスク、スティック、フォーム、エリキシル剤、濃縮物、及び同様物といった種々の製品の形態で製剤化され得る。好ましくは、該組成物は、エマルション、ローション、クリーム、軟膏、美容液（ｓｅｒｕｍ）、又はゲルとして製剤化される。

本発明は、老化の皮膚科学的なサインを低減させ、改善させ、後退させ又は防止するのに十分な期間、患部領域に、好ましくは化粧品として許容可能な媒材中にダイニンを調節する活性剤を含む組成物を、局所適用することで、老化している皮膚を治療する方法を提供する。

概して、コンディション及び／又は審美上の外観における改善は、年齢による老化、光老化、ホルモンによる老化、及び／又は化学線による老化の皮膚科学的なサインを低減させる；線及び／又はしわの外観を防止及び／又は低減させる；顔の線及びしわ、頬、額のしわ、眉間のしわ、目の上及び口の周りの横じわ、マリオネットライン、並びに特に深いしわ又は折り目の外観を低減させる；眼窩下の線及び／又は眼窩周囲の線の外観を改善させる；目尻のしわの外観を低減させる；皮膚、具体的には老化した皮膚を若返らせ、及び／又は再生させる；皮膚の脆弱性を低減させる；グリコサミノグリカン及び／又はコラーゲンの喪失を防止及び／又は後退させる；エストロゲンのアンバランスの影響を改善させる；皮膚萎縮を防止する；色素過剰又は色素過剰減少を防止し、低減させ及び又は治療する；皮膚の退色を最小限化する；皮膚のトーン、輝き、明るさ、及び／又はこわばりを改善させる；皮膚のたるみを防止し、低減させ、及び／又は改善する；皮膚の硬さ、ふくよかさ（ｐｌｕｍｐｎｅｓｓ）、柔軟性、及び／又はしなやかさを改善する；プロコラーゲン及び／又はコラーゲン生成を改善させる；皮膚のきめを改善させ、及び／又は再組織化を促進する；皮膚のバリア修復及び／又は機能を改善させる；皮膚の輪郭の外観を改善させる；皮膚の光沢及び／又は輝きを回復させる；疲労及び／又はストレスの皮膚科学的なサインを最小化する；環境的なストレスに耐える；老化及び／又は更年期により減少した皮膚の成分を補充する；皮膚細胞間のコミュニケーションを改善させる；細胞増殖及び／又は増加を促進する；老化及び／又は更年期により減少した皮膚細胞の代謝を促進する；細胞の老化を遅らせる；皮膚の湿潤を向上させる；皮膚の厚さを強化させる；皮膚のひ薄化を遅らせ又は停止させる；皮膚の弾性及び／又は弾力性を増加させる；剥離を亢進させる；微小循環を改善させる；セルライト形成を低減させ及び／又は抑制する；並びにこれらの組み合わせからなる群より選択される。

一実施態様において、組成物は、ダイニンのモジュレーターを、約０．００００１重量％から約２０重量％、より典型的には約０．００１重量％から約１０重量％含み、約０．０１重量％から約１重量％を含む。好ましくは、該モジュレーターは、繊維芽細胞におけるダイニンのアップレギュレーターであってもよい。また、好ましくは、該モジュレーターは、ケラチノサイトにおけるダイニンのアップレギュレーターであってもよい。該モジュレーターは、ケラチノサイトにおけるダイニンのダウンレギュレーターであってもよい。さほど好ましくないが、本発明の範囲内において、該モジュレーターは、繊維芽細胞におけるダイニンのダウンレギュレーターであってもよい。一実施態様において、該モジュレーターは、繊維芽細胞及びケラチノサイトの両方におけるダイニンのアップレギュレーターである。モジュレーターの組み合わせもまた、意図される。一実施態様において、該モジュレーターは、繊維芽細胞及び／又はケラチノサイトにおけるダイニンのアップレギュレーターである２又は３以上の物質の組み合わせである。

組成物は典型的には、所望の結果が得られるのに必要な期間、毎日１回、２回、又は３回、皮膚に適用される。この治療レジメンは、少なくとも１週間、少なくとも２週間、少なくとも４週間、少なくとも８週間、少なくとも１２週間、又はそれ以上、毎日適用することを含み得る。長期間の治療レジメンもまた意図される。小じわ及びしわの形成又は外観に対する組成物の効果は、定性的に（例えば、目視検査による）又は定量的に（例えば、しわの形態（例えば、皮膚の単位領域あたりのしわの数、深さ、長さ、面積、体積及び又は幅）の顕微鏡測定又はコンピューター測定による）評価され得る。一実施態様において、本発明の組成物は、皮膚に、約０．００１ｍｇ／ｃｍ^２から約１００ｍｇ／ｃｍ^２、より典型的には約０．０１ｍｇ／ｃｍ^２から約２０ｍｇ／ｃｍ^２、好ましくは約０．１ｍｇ／ｃｍ^２から約１０ｍｇ／ｃｍ^２の量で適用される。

本発明の組成物は、治療を必要とする個人のひ薄化した皮膚に該組成物を局所適用することによって、ひ薄化した皮膚の治療にも有用である。“ひ薄化した皮膚”は、年齢による老化、更年期又は光によるダメージに起因してひ薄化した皮膚、及び若くしてひ薄化している皮膚を含むと解釈される。いくつかの実施態様において、該治療は男性のひ薄化した皮膚を対象とし、一方、他の実施態様においては、該治療は更年期前又は更年期後の女性のひ薄化した皮膚を対象とする。皮膚のひ薄化は、男性と女性とで年齢により異なり、特に女性において年齢の段階により異なると考えられているからである。

本発明の方法は、（対象として）皮膚の老化のサインを呈していない個人（通常２５歳以下の個人）を含む個人における老化を未然に防ぐように、予防的に利用され得る。該方法はまた、通常２５歳以上といった個人によくある、いったん現れた老化のサインを後退若しくは治療し得、又はこういった個人の皮膚科学的な老化の進行を遅らせ得る。

下記の実施例は、本発明を説明するために本発明の特定の態様を記述しているが、本発明を限定するように理解されるべきではない。本実施例は単に、本発明及びその種々の態様を理解し実施するのに有用な、特定の方法論を提供するにすぎない。

（実施例１）皮膚繊維芽細胞におけるダイニンの年齢に伴う発現

新生児（ｎ＝３）及び年齢３１−３９歳の女性のドナー（ｎ＝３）由来の正常皮膚繊維芽細胞を、ＤＭＥＭ（１０％ＦＢＳ、４．５ｇ／Ｌグルコース）中で１０ｃｍディッシュに撒き、サブコンフルエントまで増殖させた。細胞を冷却したＰＢＳで洗い、ＲＮＡｑｕｅｏｕｓ ｋｉｔを用いて、使用説明書に従ってＲＮＡを単離した。ＲＮＡの完全性及び濃度を、ＲＮＡ Ｎａｎｏ Ｃｈｉｐを用いて、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ ２１００により確認した。遺伝子発現分析を、単離したＲＮＡ及びＡＢＩ ７９００ ＨＴ ＲＴ−ＰＣＲ機器を用いて行った。用いられたダイニンのプローブは、ヒト、細胞質、重鎖の、ＡＢＩコードＤＹＮＣ１Ｈ１−Ｈｓ００３００２４３＿ｍ１のＤＹＮＣ１Ｈ１であった。内部コントロールが含まれ、ダイニンの遺伝子発現は、ＧＡＰＤＨに対して標準化された。ダイニン発現の顕著な（〜１４％）減少は、新生児の細胞に比べて、３０歳台のドナー由来の細胞において見られた。内因性（標準化された）遺伝子発現レベルを、下述の表２に示す。

他の実験において、ヒト生検を、ＵＶ照射の暴露の後のＤＹＮＣ１Ｈ１発現に対して分析した。若年（年齢１８−２５歳、ｎ＝１５）及び老年（年齢４５−６５歳、ｎ＝１５）の健康な女性の白人ドナーの（光照射された）前腕背部及び（光から保護された）上部脇下由来の予備的な皮膚の生検を収集し、ホルマリンで固定し、パラフィンで包埋した。５つの切片に切り分け、スライド上に置いた。ＩＨＣをダイニンに対するラビットポリクローナル抗体を用いて行い、ベクターブルー結合ヤギａｎｔｉ−ウサギ第二抗体を用いて視覚化した。若年コホートでは、６２％の対象でダイニンの発現の増加がみられ、一方で、老年の対象では３３％しか増加がみられなかった。これらのデータにより、老年の皮膚は、必要とされるときのダイニンの生成において、より効果的でないことが示される。ＵＶ照射における遺伝子発現レベルの増加を、下述の表２に示す。

表２のデータにより、細胞質ダイニンの発現は、年齢に応じて減少し、ＵＶ照射といったストレッサーに反応しての皮膚のダイニン発現のアップレギュレート能も同様であることが示唆される。したがって、ダイニンの調節は、老化及び皮膚の環境に伴う老化に対抗する合理的なアプローチであることが考えられる。

（実施例２）ダイニン調節アッセイ

正常なヒト皮膚繊維芽細胞及びケラチノサイトを、適切な培養培地を含む、９６ウェルの組織培養処置プレートで培養した。活性剤のストック溶液を適切な媒材（水／エタノール／プロピレングリコール）中で作製した。細胞を、１０％ＣＯ_２の加湿した３７℃のインキュベーター内で、２４時間、培養培地で希釈されたテストマテリアル又は各媒材コントロールで処理した。インキュベーション後、各々のプレートの培養培地を取り除き、１００μＬの溶解バッファーをウェルに加え、３０分間、１０％ＣＯ_２の３７℃のインキュベーター内に置いた。インキュベーションの最後に、細胞をフリーザープレートに収集し、分析まで−８０℃のフリーザーに置いた。処理後のダイニンのｍＲＮＡの変化を、分岐ＤＮＡ技術を用いたＰａｎｏｍｉｃｓ Ｑｕａｎｔｉｇｅｎｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅｘアッセイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ、ＣＡ）を用いて、使用説明書に従って分析した。細胞質ダイニンの重鎖ＤＹＮＣ１Ｈ１に対するｍＲＮＡの増加（アップレギュレーション）又は減少（ダウンレギュレーション）の割合を、テスト結果をコントロールと比較することで算出した。アップレギュレーション又はダウンレギュレーションの割合は、下述の表３に示すように、スケール化されたスコアに変換される。

（実施例３）ダイニンのアップレギュレーション

種々の植物抽出物のダイニンのアップレギュレート能を、実施例２の方法に従って試験した。結果を下述の表４に示す。各抽出物の濃度は、所定の植物抽出物の乾燥重量（揮発性の抽出物溶媒が除去された後の抽出物の重量を意味する）に基づき提供される。試験された細胞は、ケラチノサイト（Ｋ）か繊維芽細胞（Ｆ）のいずれかであった。

また、化合物１−５及びカルミクリンのダイニンのアップレギュレート能を、実施例２の方法に従って試験した。結果を表５に報告する。

（実施例４）ダイニンのダウンレギュレーション

種々の化合物及び植物抽出物の、ダイニンのダウンレギュレート能を、実施例２の方法に従って試験した。結果を下述の表６に示す。植物抽出物の濃度は、所定の植物抽出物の乾燥重量に基づき示される。各々の場合において、ｐ＜０．０５レベル又はそれ以上の有意レベルを統計的有意とした。

サリチル酸誘導体は、ケラチノサイトにおいて４５．０３％減少させ（ｐ＝０．０２）、細胞質ダイニンの重鎖ＤＹＮＣ１Ｈ１に対するｍＲＮＡの最も高い程度のダウンレギュレーションをもたらし、次いで、Ｔｌｉｌｉａｃｏｒａ Ｔｒｉａｎｄｒａが繊維芽細胞で３６．７％の減少をもたらした（ｐ＝０．０１）。

（実施例５）Ｉｎ ｖｉｖｏでのダイニンのアップレギュレーション

植物抽出物のｉｎ ｖｉｖｏでのダイニンのアップレギュレート能を試験した。皮膚タイプＩＩ及びＩＩＩの３３名の、年齢３０−６５歳の健康な女性の白人の対象の前腕背部を、３週間（半閉鎖下で連続３回の５×２４時間のパッチテスト）、成分で処理した。試験物及び媒材を、各々の前腕の５部位にランダム割付にて適用した。適用した用量は、２ｍｇ／ｃｍ^２であった。処理後、２ｍｍのパンチ生検を各処理部位より得、４％パラホルムアルデヒドで固定し、ＩＨＣ試験に進めた。ＩＨＣを、ダイニンに対するウサギポリクローナル抗体を用いて行い、実施例１で記載されるように、ベクターブルー結合ヤギａｎｔｉ−ウサギ第二抗体を用いて視覚化した。下述の表７に示される結果は、ダイニンレベルのアップレギュレーション、変化無し、又はダウンレギュレーションを示す患者の数（Ｎ）として表される。

表７に示すように、試験されたほとんどすべての植物抽出物が、皮膚に局所適用されたときに、ｉｎ ｖｉｖｏでダイニンをアップレギュレートさせた。Ｏｐｅｒｃｕｌｉｎａ ｔｕｒｐｅｔｈｕｍは、本試験では顕著なアップレギュレーション又はダウンレギュレーションを示さなかったが、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの有効性に基づき、皮膚への移行を改善させる浸透亢進剤の使用及び／又は用量若しくは治療期間の増加により結果は改善すると考えられる。

本明細書で引用された特許出願及び公開を含むすべての参照は、各々個々の公開又は特許若しくは特許効果がすべての目的に対して全体において参照により取り込まれるように特別に及び個別に示唆されるのと同程度まで、全体において全ての目的に対して参照により本明細書に取り込まれる。本発明の多くの改変および変化は、本技術分野における当業者に明らかであるように、本発明の範囲および趣旨から逸脱することなくなされ得る。本明細書に記載される特定の実施態様は、例示のためにだけに提供され、本発明は、特許請求の範囲に記載のものと同等物の全範囲に沿って、添付された特許請求の範囲の用語によってのみ限定される。

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０１０年１２月３０日に出願された米国仮出願第６１／４２８，２７２号に基づく優先権を主張しており、この出願の内容は参照として本明細書に含まれる。
（付記）
（付記１）
活性剤の、細胞質ダイニンの調節能は、前記活性剤に接触した細胞における細胞質ダイニンの発現レベルを測定するアッセイによって決定される、
ことを特徴とする細胞質ダイニンの細胞レベルを調節する、有効量の活性剤を、改善を必要とする皮膚の領域に局所適用することを含む、ヒトの皮膚の審美上の外観を改善させる方法。
（付記２）
前記細胞質ダイニンは、ヒト又はマウスの細胞質ダイニンである。
ことを特徴とする付記１に記載の方法。
（付記３）
前記アッセイは、細胞質ダイニンの重鎖サブユニットＤＹＮＣ１Ｈ１の発現レベルを測定する、
ことを特徴とする付記２に記載の方法。
（付記４）
前記アッセイは、重鎖サブユニットＤＹＮＣ１Ｈ１をコードするヒト遺伝子ＤＹＮＣ１Ｈ１又はマウス遺伝子Ｄｙｎｃ１ｈ１の発現レベルを測定する、
ことを特徴とする付記３に記載の方法。
（付記５）
重鎖サブユニットＤＹＮＣ１Ｈ１をコードするヒト遺伝子ＤＹＮＣ１Ｈ１又はマウス遺伝子Ｄｙｎｃ１ｈ１の前記発現レベルは、対応ｍＲＮＡの発現レベルを測定することにより決定される、
ことを特徴とする付記４に記載の方法。
（付記６）
ｍＲＮＡの前記発現レベルは、定量ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）により測定される、
ことを特徴とする付記４に記載の方法。
（付記７）
前記細胞は、皮膚繊維芽細胞である、
ことを特徴とする付記２に記載の方法。
（付記８）
前記細胞は、皮膚ケラチノサイトである、
ことを特徴とする付記２に記載の方法。
（付記９）
前記剤は、細胞質ダイニンの発現レベルを増加させる、
ことを特徴とする付記１に記載の方法。
（付記１０）
前記剤は、細胞質ダイニンの発現レベルを減少させる、
ことを特徴とする付記１に記載の方法。
（付記１１）
前記皮膚の前記審美上の外観の改善は、
（ａ）小じわ又はしわを治療、低減、及び／又は防止する、
（ｂ）皮膚の毛穴のサイズを小さくする、
（ｃ）皮膚の厚み、ふくよかさ、及び／又はつっぱり感を改善する、
（ｄ）皮膚のしなやかさ、及び／又は柔軟性を改善する、
（ｅ）皮膚のトーン、輝き、及び／又は透明度を改善する、
（ｆ）エラスチンの維持及び再構築を改善する、
（ｇ）皮膚のきめを改善し、及び／又は再組織化を促進する、
（ｈ）皮膚バリアを修復し、及び／又はその機能を改善する、
（ｉ）皮膚の輪郭を改善する、
（ｊ）皮膚の艶及び／又は明るさを修復する、
（ｋ）更年期により減少された皮膚の外観を改善する、
（ｌ）皮膚の潤いを改善する、
（ｍ）皮膚の伸縮性及び／又は弾力性を向上させる、
（ｎ）皮膚のたるみを治療し、低減させ及び／又は防止する、並びに
（ｏ）色素沈着を低減させる、
ことからなる群より選択される、
ことを特徴とする付記１に記載の方法。
（付記１２）
皮膚繊維芽細胞又はケラチノサイトにおける候補物質のダイニン発現調節能をアッセイすることを含む、皮膚の審美上の外観を改善させるのに有用な活性剤を同定する方法。
（付記１３）
前記アッセイは、前記候補物質とともにヒト皮膚繊維芽細胞又はケラチノサイトをインキュベートする工程と、それに続く、細胞質ダイニンの重鎖サブユニットＤＹＮＣ１Ｈ１をコードするｍＲＮＡのレベルを測定する工程と、を含む、ことを特徴とする付記１２に記載の方法。
（付記１４）
前記測定工程は、定量ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＰＣＲ）により行われる、
ことを特徴とする付記１３に記載の方法。
（付記１５）
前記細胞は、皮膚繊維芽細胞である、
ことを特徴とする付記１３に記載の方法。
（付記１６）
前記細胞は、皮膚ケラチノサイトである、
ことを特徴とする付記１３に記載の方法。
（付記１７）
活性剤の、細胞質ダイニン調節能は、前記活性剤に接触した細胞における細胞質ダイニンの発現レベルを測定するアッセイによって決定される、
ことを特徴とするダイニンをダウンレギュレートする、有効量の活性剤を、治療を必要とする皮膚の領域に局所適用することを含む、色素過剰を治療する方法。
（付記１８）
前記アッセイ工程は、前記候補物質とともにヒト皮膚ケラチノサイトをインキュベートする工程と、それに続く、細胞質ダイニンの重鎖サブユニットＤＹＮＣ１Ｈ１をコードするｍＲＮＡのレベルを測定する工程と、を含む、ことを特徴とする付記１７に記載の方法。
（付記１９）
活性剤の、細胞質ダイニン調節能は、前記活性剤に接触した細胞における細胞質ダイニンの発現レベルを測定するアッセイによって決定される、
ことを特徴とするダイニンをアップレギュレートする、有効量の活性剤を、治療を必要とする皮膚の領域に局所適用することを含む、しわ及び／又は小じわを治療する方法。
（付記２０）
前記アッセイ工程は、前記候補物質とともにヒト皮膚繊維芽細胞をインキュベートする工程と、それに続く、細胞質ダイニンの重鎖サブユニットＤＹＮＣ１Ｈ１をコードするｍＲＮＡのレベルを測定する工程と、を含む、ことを特徴とする付記１９に記載の方法。
（付記２１）
皮膚繊維芽細胞又はケラチノサイトにおけるダイニンをアップレギュレートするのに有効な量の、Ｏｒｔｈｏｓｉｐｈｏｎ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｓ、Ｃｌｉｎａｃａｎｔｈｕｓ ｎｕｔａｎｓ、Ｃｉｓｔａｎｃｈｅ ｔｕｂｕｌｏｓａ、Ｅｒｙｔｈｒｉｎａ ｉｎｄｉｃａ、Ｏｐｅｒｃｕｌｉｎａ ｔｕｒｐｅｔｈｕｍ、Ｇｙｎａｎｄｒｏｐｓｉｓ ｇｙｎａｎｄｒａ、Ｅｒｔｈｒｉｎａ Ｆｌａｂｅｌｌｉｆｏｒｍｉｓ、Ｈｅｌｉｃｈｒｙｓｕｍ Ｏｄｏｒａｔｉｓｓｉｍｕｍ、Ｄｅｓｍａｎｔｈｕｓ ｉｌｌｉｎｏｅｎｓｉｓ、Ｏｚｏｔｈａｍｎｕｓ Ｏｂｃｏｒｄａｔｕｓ、Ｔａｇｅｔｅｓ ｅｒｅｃｔａ Ｌｉｎｎ、Ｃａｅｓａｌｐｉｎｉａ ｓａｐｐａｎ Ｌｉｎｎ、Ｍｅｄｅｍｉａ ｎｏｂｉｌｉｓ、Ｃａｌａｔｒｏｐｉｓ ｇｉｇａｎｔｅａｎ、Ｌｏｒｏｐｅｔａｌｕｍ ｃｈｉｎｅｎｓｅ、Ｈｅｌｉｏｔｒｏｐｉｕｍ ｉｎｄｉｃｕｍ、Ｄｉａｎｅｌｌａ ｅｎｓｉｆｏｌｉａ、Ｂｒｅｙｎｉａ ｆｒｕｔｉｃｏｓａ、Ｄｅｎｄｒａｎｔｈｅｍａ ｉｎｄｉｃｕｍ、Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ、Ｓｃｏｐａｒｉｓ ｄｕｌｃｉｓ、Ａｃａｃｉａ ｍｅｌａｎｏｘｙｌｏｎ、Ｃｌｅｒｏｄｅｎｄｒｕｍ ｆｌｏｒｉｂｕｎｄｕｍ、Ｃｏｍｍｅｒｓｏｎｉａ ｂａｒｔｒａｍｉａ、Ｄｏｄｏｎａｅａ ｖｉｓｃｏｓｅ、Ｄｕｂｏｉｓａ ｍｙｏｐｏｒｏｉｄｅｓ、 Ｅｈｒｅｔｉａ ａｃｕｍｉｎａｔｅ、Ｆｉｃｕｓ ｃｏｒｏｎａｔａ、Ｇｏｏｄｅｎｉａ ｏｖａｔａ、Ｈｙｍｅｎｏｓｐｏｒｕｍ ｆｌａｖｕｍ、Ｌａｖａｔｅｒａ ｐｌｅｂｅｉａｎ、Ｍｅｌａｌｅｕｃａ ｑｕｉｎｑｕｅｒｎｅｒｖｉａ、Ｏｍｏｌａｎｔｈｅｓ ｐｏｐｕｌｉｆｏｌｉｕｓ、Ｍａｍｍｅａ ｓｉａｍｅｎｓｉｓ、Ｃｌｅｒｏｄｅｎｄｒｏｎ ｆｒａｇｒａｎｓ、Ｃｈａｌａｒａ ｍｉｃｒｏｓｐｏｒａ及びこれらの混合物からなる群より選択される植物抽出物と、局所的に許容可能な媒材と、を含む組成物。
（付記２２）
有効量の、付記２１に記載の組成物を、改善を必要とする皮膚の領域に局所適用することを含む、ヒトの皮膚の審美上の外観を改善させる方法。
（付記２３）
前記皮膚は、小じわ及び／又はしわを有する、
ことを特徴とする付記２２に記載の方法。
（付記２４）
皮膚繊維芽細胞又はケラチノサイトにおけるダイニンをアップレギュレートするのに有効な他の植物抽出物と組み合わせたＭｅｌｉｃｏｐｅ ｈａｙｅｓｉｉ由来の抽出物と、局所的に許容可能な媒材と、を含む組成物。
（付記２５）
下記の化合物１乃至５、

カルミクリン、及びこれらの化粧品として許容可能な塩からなる群より選択される、皮膚繊維芽細胞又はケラチノサイトにおけるダイニンをアップレギュレートするのに有効な量の化合物と、局所的に許容可能な媒材と、を含む組成物。
（付記２６）
有効量の、付記２５に記載の組成物を、改善を必要とする皮膚の領域に局所適用することを含む、ヒトの皮膚の審美上の外観を改善させる方法。

Claims (4)

1. 皮膚繊維芽細胞又はケラチノサイトにおける細胞質ダイニンをアップレギュレートするのに有効な量の、Ｍｅｄｅｍｉａ ｎｏｂｉｌｉｓのエタノール抽出物と、局所的に許容可能な媒材と、を含む組成物。
2. 有効量の、請求項１に記載の組成物を含み、改善を必要とする皮膚の領域に局所適用されるように用いられることを特徴とするヒトの皮膚の審美上の外観を改善させるための組成物。
3. 前記皮膚は、小じわ及び／又はしわを有する、
   ことを特徴とする請求項２に記載の組成物。
4. カルミクリン、及びこの化粧品として許容可能な塩からなる群より選択される、皮膚繊維芽細胞又はケラチノサイトにおける細胞質ダイニンをアップレギュレートするのに有効な量の化合物と、局所的に許容可能な媒材と、を含むヒトの皮膚の審美上の外観を改善させるための組成物。