JP6234958B2 - 流動床を使用して粒子を操作するための方法及びシステム - Google Patents
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Description
kgは水である。ディスポーザブル(使い捨て)装置を使用するとさらに廃棄物流が増加することになるが、他方リユーザブル(再利用可能)材料は水の使用量を増加させる。
ら分離するために使用できる。例えば、細胞は、親和性、密度又はサイズに基づいて分離することができる。本明細書に開示した方法及びシステムは、タンパク質、炭水化物又は脂質を含むがそれらに限定されない細胞成分又は生体材料を分離するために使用できる。例えば、タンパク質の混合物は、装置の回転チャンバに進入することができ、培地条件は、タンパク質の選択された集団が沈降するような条件であり得る。そのような沈降物は、回転チャンバ内で流動床を形成し、チャンバ内に含有され、回転条件及び/又は培地の流れ力を変化させることによって取り除くことができる。沈降しなかったタンパク質は、流動床内には含有されず、回転チャンバを通って流れる。1つの態様では、本明細書に開示した方法及びシステムは、細胞へスカフォールディング材料を提供するため、又はスカフォールドから組織と結び付いた細胞などの細胞を取り除くために使用できる。また別の態様では、本明細書に開示した方法及びシステムは、細胞の静止集団もしくは増殖中の集団から細胞のサブ集団を選択的に取り除くために使用できる。さらにまた別の態様では、本明細書に開示した方法及びシステムは、培地資源を保存することができる。
る工程、分離する工程、単離する工程、抽出する工程、選択する工程、精製する工程、コーティングする工程、結合する工程、物理的に修正を加える工程、及び環境を変化させる工程からなる群から選択される、ステップと、その後に細胞を流動床から取り除くステップとを含んでいる。細胞を流動床から取り除くステップは、第2流を出口に通してチャンバ内へ流す工程であって、第2流を流す工程は、遠心力場と少なくとも部分的に同一方向にある力を作り出す、工程と、チャンバの入口を通過する細胞を収集する工程とを含んでいる。
する荷電分子流を入口に通してチャンバ内へ流す工程と、荷電粒子を細胞内に組み入れる工程とをさらに含んでいる。
前記粒子を取り除くステップは、第2流を前記出口に通して前記チャンバ内へ流す工程であって、前記第2流を流す工程は、前記遠心力場と少なくとも部分的に同一方向にある力を作り出す、工程と、前記チャンバの前記入口を通過する前記粒子を収集する工程とを含む。
ィング流を前記入口に通して前記チャンバ内へ流すことと、前記流動床内に保持された前記粒子を前記コーティング材料でコーティングすることとを含む。
可能であり、遠心力場を作り出すようになっているチャンバであって、入口と出口とを有するチャンバと、第1流体及び粒子を含有するバイオリアクターと、前記回転チャンバ及び前記バイオリアクターと流体連通している少なくとも1つのポンプと、前記チャンバと流体連通している流体マニホールドであって、該流体マニホールドは、間隔をおいて配置された複数のバルブを含み、前記複数のバルブは、使用中には自動的かつ選択的に開閉するようになっている、流体マニホールドと、前記少なくとも1つのポンプ及び前記バルブと通信する制御装置とを含む。前記制御装置は、
(i)前記バルブの開放及び閉鎖と、
(ii)前記少なくとも1つのポンプの流量と、
(iii)前記回転チャンバの回転速度と、
(iv)前記第1流体及び粒子を含有する第1流が前記バイオリアクターから前記入口を通って前記チャンバ内へ流れるときの流速と
を指令するようになっており、操作時において、前記第1流が前記バイオリアクターから前記入口を通って前記チャンバ内へ流れるときの流速は、遠心力とは相反する力を作り出すように作用し、それによって、前記チャンバ内の粒子の流動床が形成され、このとき、前記遠心力及び前記相反する力は、前記粒子上に作用するベクトル力の総和によって前記粒子を前記流動床内に実質的に固定化する。一部の他の実施形態では、前記制御装置は、第2流体を含有する第2流が前記出口を通って前記チャンバ内へ流れるときの流速をさらに指令し、操作時において、前記第2流が前記出口を通って前記チャンバ内へ流れるときの流速は、前記遠心力場と少なくとも部分的に同一方向の力を作り出し、それによって、前記流動床から前記粒子を取り除くようになっている。一部の他の実施形態では、操作時において、前記粒子は、前記チャンバの前記入口に通して収集され、前記流動床から取り除かれた後に前記バイオリアクターへ返送される。さらにまた別の実施形態では、少なくとも1つのポンプは、双方向性ポンプを含んでいる。
(i)前記バルブを開放及び閉鎖することと、
(ii)前記第1ポンプ及び第2ポンプの流量と、
(iii)約75〜500×gの遠心力を作り出すための前記チャンバの回転速度と、
(iv)約20〜300mm/分で前記チャンバを通る前記流体供給源からの前記流体の平均流速と
を指令するようになっており、操作時において、前記システムは、前記バッファー洗浄
供給源からのバッファーを用いて、前記チャンバへの標的培地を用いた初期装填後に前記流体マニホールドの規定セグメントをフラッシュし、それにより、前記流体マニホールド内のデッドレッグを浄化する。
方法及びシステムを含んでいる。本方法及びシステムには、以下の有用な適用例が含まれるがそれらに限定されない。本方法及びシステムの適用例としては、
1つの場所から別の場所への粒子(例えば、原核もしくは真核いずれかの細胞)の移動、例えば細胞数/mLの数を増加もしくは減少させるなどの粒子(例えば、細胞)を濃縮もしくは希釈すること、
培地条件を変化させること、
粒子(例えば、細胞)において何らかの作用を実行すること(例えば、細胞をトランスフェクト(transfect)する、もしくは細胞に特異的化学的活性化因子もしくは阻害剤(inhibitor)を提供することなど)、
粒子(例えば、細胞)の環境を変化させること、
例えばバイアル内もしくは他の容器内などへ、粒子もしくは細胞の制御され測定された分注を提供することがある。
(1)ストークスの法則(Stoke’s Law)及び向流遠心分離の法則に固有の関係、
(2)流速及び遠心力場強度の幾何学的関係
(3)培地及び粒子に及ぼす水圧の作用
を利用する。本方法及びシステムは、水平軸の周りでの回転ならびに重力、回転からの遠心力及び粒子を保持するチャンバもしくは容器に進入する培地の流れによって提供される液体流動力を含む平衡力を使用することによって、例えば細胞などの粒子の三次元配列を固定化して粒子の流動床を形成できる装置を含んでいる。
を(z)の関数として変動させることができれば、各半径距離でのこの方程式を別個に適用できる可能性がある。方程式4が有する意味を考察することは、回転軸から単一半径方向距離にある粒子の二次元配列の固定化とは対照的に、粒子の三次元配列の相対的固定化にとって重要である。
に、上記の寸法の層を通る流速の増加は、各側で層にすぐ隣接する自由空間において決定される流速の2倍を超える。各層の領域における局所流速におけるこの微視的増加は、各隣接層を別個に維持する「緩衝材」を提供し、細胞が粒子である場合は、結果として細胞の流動床が生じる。
になる。チャンバの上部では、粒子は、遠心力場の大きさの半分に過ぎない流動関連力を受けるので、したがって、流速が顕著に増大するすぐ近くの断面積が減少する領域(チャンバの液体出口ポート)が存在していたとしても、チャンバから出て行く可能性はほとんどない。
のような運動によって、必然的に、粒子の流速の大きさが増加した領域(長半径)か又は粒子の流速の大きさが小さくなる領域(短半径)のいずれかになり、遠心力場強度については、小さな変化しか生じさせない。結果として、粒子の固有質量に及ぼす重力作用に起因する粒子の周期的運動は、そのような不均衡な相反する力場が存在する状況下では大きく抑えられ、低質量粒子の場合には、その場所での振動になる。
7,029,430号明細書、第7,347,943号明細書、及び米国特許出願第11/384,524号明細書、第12/055,159号明細書及び第11/178,556号明細書に開示されており、それらの各々は全体として参照することによりここに組み入れられる。
付与し、例えば遠心分離に基づくシステム、濾過に基づくシステム、沈降システム、超音波システム、及び液体サイクロンシステムなどの現行細胞保持システムに比較して、妨げが生じない(clog-free)連続作動を提供する。本発明は、プロセス工程の回数ならびに
プロセス時間を減少させる細胞及び他の粒子のプロセッシングのための統合システムをさらに提供する。
からの培地供給源(図には示していない)などの他の供給源内で始まる経路14を有することによって、培地が提供される。培地は、バイオリアクターからバルブ13を通り、装置4の回転チャンバ5を通り、経路2に沿ってポンプ3によってポンピングされ、経路2を経由してバイオリアクター内へ戻される。バイオリアクターから出てくる培地に混入される可能性がある任意の細胞は、遠心力及び流体流動力が少なくとも部分的に整列されるために回転チャンバ5内を通って洗浄されるか、又は流体流が新規サイクルの開始時に再び逆転されると、存在する任意の細胞は回転チャンバ5内に捕捉されて細胞の流動床を形成する。
スチック粒子など)を取り除くため、細胞内タンパク質又は損傷もしくは溶解した細胞からの細胞破片を取り除くため、遊離ウイルスもしくは他の生物学的汚染物質などを取り除くために使用できる。一部の実施形態では、培地交換は古い培地を新規培地と置換するこ
とに少なくとも90%有効(古い培地の少なくとも90%が除去される)であり、例えば少なくとも95%、96%、97%、98%、99%、99.5%、又は99.9%有効である。他の実施形態では、有効な培地交換は、新規培地の使用を最小に抑えて、例えば約10チャンバ容量未満、例えば約9、8、7、6、5、4、3、又は2チャンバ容量未満で遂行できる。さらに別の実施形態では、培地交換は、細胞の高い残留率で、例えば少なくとも約60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、又は99%以上の残留率で実施することができる。例えば、細胞は、バイオリアクター1内に配置される。培地及び細胞は、バイオリアクター1から出て、経路2を経由して、バルブ15を通り、及び例えば双方向ポンプ3などのポンプを通って、回転チャンバ5を含む装置4へ流れる。バルブ17及び21は閉鎖される。細胞は、回転チャンバ5内に保持され、培地は装置4から出て経路6を経由して、図示したように浄化された培地用の容器16へ流れる。細胞は、回転チャンバ5内で流動床を形成する。
は、例えば、様々な目的のために培養中で増殖させられている細胞、例えばワクチンとして使用するために生成されている細胞、被験者からの細胞サンプル(例えば、被験者へ再投与するために増殖させられている同種異系細胞又は胚もしくは成体幹細胞)などを取り出すために使用できる。培地は、例えば容器16などの培地容器から経路6を経由して装置4及び回転チャンバ5へポンピングされる。細胞は、経路2を経由して双方向ポンプ3を通って回転チャンバ5から離れる。バルブ17は開放され、バルブ15は閉鎖され、培地は、経路19を経由して容器18内へ流入する。回転チャンバ5内に保持された細胞は、回転チャンバ5から経路2を経由して、双方向ポンプ3を通って容器18内へ流入する。1つの態様では、装置4の回転チャンバは、このプロセスを通して回転を停止させることを必要としない。回転チャンバ内に細胞を含有する1つの容器から細胞及び培地をポンピングして回転チャンバから細胞を相違する容器へ取り出すサイクルは、上記に開示したように、複数回繰り返すことができる。これは、例えば、及び1つの態様によると、細胞
の増殖及び/又は活性中のいずれの時点でも細胞に新規培地もしくは新規バッファーを提供することができるか、又は収穫もしくは保管のために培地もしくはバッファーを提供することができる。細胞が培地もしくはバッファーで洗浄された後、回転チャンバは、流体流を逆転させることによって細胞が空にされる。本明細書に開示した培地/バッファー交換の適用は、トランスフェクション、細胞分注、バイオリアクターへの播種、又は培養中の細胞の維持、増殖、収穫もしくは処理のいずれかの他のステップに先行して使用できる。
の近辺で発生することがあり、完全なバッファー洗浄を得るために清浄培地/バッファーですすぎ洗う(rinsing)ことができる。本明細書で使用する「清浄」培地/バッファー
は、培地/バッファーが無菌もしくは実質的無菌であることを意味し得る。図36は、この結果を達成するための典型的な方法及びシステムを示している。第1ポンプP1は、チャンバを通る培地の流動を制御する。第2ポンプP2は、第1ポンプP1より高速で稼働するように設定されている。細胞の装填中、デッドレッグは、バルブV1及びV7又はその近辺で発生することがある。デッドレッグをすすぎ洗うためには、細胞が装填された後、及びバッファーすすぎ洗いが行われている間に、第2ポンプP2のスイッチを入れ、バ
ルブV8を閉鎖することができる。バルブV3及びV5は、バッファー洗浄のために既に開放されている。バルブV1は、そのバルブでデッドレッグを(ポンプP2からの過剰な流れを用いて)フラッシュするために短時間開放される。次に、ポンプP2は、スイッチが切られ、残りのバッファー洗浄時間のためにバルブV8が開放され、バルブV1が閉鎖される。収穫ルーチンを開始する前に、ポンプP2が、再びスイッチが入れられ、バルブV8が、閉鎖される。次に、バルブV7は、隣接デッドレッグをフラッシュするために短時間開放される。次に、ポンプP2はスイッチが切られ、バルブV7は閉鎖され、バルブV8は開放される。この時点で、汚染されていない収穫を行うことができる。一部の実施形態では、気泡検出器BS1、BS2、BS3、及びBS4は、流体流の末端を検知し、このためにプロセスの次の段階(例えば、洗浄)を始動させることができる。本発明の方法及びシステムのいずれにおいても、気泡検出器又は他の流動検出器を使用できると理解されたい。
物もしくは因子の提供のために使用できる。この態様では、本方法及びシステムは、細胞に提供される材料によって限定されない。例えば、トランスフェクション法では、少なくともDNA及び/又はRNA又は対象となる核酸構築物を含むトランスフェクション反応複合体は、容器29内に含有されていて、容器29から出て経路30を経由してバルブ31及び経路32を通って、例えば双方向ポンプ3などのポンプによって細胞の流動床を含有する回転チャンバ5がある装置4へポンピングされる。トランスフェクション反応複合体は、回転チャンバ5内の細胞の流動床を通って、経路6及び33を通ってバルブ34へ、経路35を通って容器29内へ流入するので、その結果としてトランスフェクション反応複合体は再循環する。トランスフェクション反応複合体は、細胞の適正な曝露を保証するために必要とされる限り再循環させることができる。
を使用して細胞又は生体材料に影響を及ぼすための方法及びシステムを含んでいる。例えば、電流は、細胞膜の透過性を変化させ、核酸又は他の荷電分子の、細胞又は例えばミトコンドリアなどの細胞成分内への進入を可能にすることができる。図29は、そのような方法及びシステムの1つの態様を示している。この態様では、細胞を含有する培地は、培地中の細胞の容器1から経路2を経由して、双方向ポンプ3を経由して、回転チャンバ5を含む装置4内へポンピングされる。回転チャンバ5内の細胞は、電流場を印加することによって作用され、細胞膜の透過性が変化させられる。様々な態様では、膜の透過性を変化させるため、又は何らかの様式で細胞に影響を及ぼすために、電場の1つ以上のパルスを細胞に印加することができる。細胞を取り囲んでいる培地は、変化した透過性で細胞膜を横断できる1つ以上の核酸配列、タンパク質、塩又はイオンを含むことができる。エレクトロポレーション後、細胞は、回転チャンバ5から容器1へ、経路2を経由して、例えば双方向ポンプ3などのポンプを通って容器1内へ戻ることができる。電気穿孔処理(electroporating)にかけられた細胞は、また別の容器8内に、培地及び細胞を回転チャン
バ5から経路2を経由して、例えば双方向ポンプ3などのポンプを通して、バルブ7を通って容器8内にポンピングするステップによって保存することができる。培地は、所望の時間量にわたって回転チャンバ5及び経路、又はチュービングを通ってポンピングすることができる。廃棄培地及び/又は細胞は、回転チャンバ5から経路6を経由して廃棄物容器9へ取り除くことができる。
チャンバ5を含む装置4内にポンピングされる。細胞は、回転チャンバ5内に維持され、細胞流動床としてチャンバ内で濃縮される。細胞は、この時点において洗浄することができ、分子(容器10内に保存された)を含有する流体は、経路11及び12を経由して細胞流動床に通して再循環させることができる。電場は、分子を細胞に組み入れるために短パルスで印加される。エレクトロポレーションが完了すると、細胞は、その後のプロセッシングのために収集することができる。細胞は、1つ以上の場所にポンピングすることができる。
いる。培地及び細胞は、容器1から出て、経路2を経由して、バルブ15を通り、及び例えば双方向ポンプ3などのポンプを通って、回転チャンバ5を含む装置へ流れる。細胞は、回転チャンバ5内に保持され、培地は、装置4から出て経路6を経由して、バルブ36を通って容器37内へ流入する。より小さい及び/又は軽量の細胞を取り除くためには、培地が回転チャンバ5内にポンピングされる速度を増加又は減少させることによって流体力が変化させられる、及び/又は回転チャンバ5の回転速度を変化させることによって遠心力が増加又は減少させられる。流体力もしくは遠心力のいずれか一方、又は両方を変化させると、細胞の小集団を取り除くことができる。残留している細胞は流動床を再形成し、次に流体力もしくは遠心力のいずれか一方又は両方は、上記に記載したように類似細胞のまた別の小集団を取り除くために変化させられ、所望に応じて頻回に繰り返すことができる。細胞の小集団を取り除くための方法が完了すると、所望の集団が回転チャンバ内に残留し、流体流は、流体力及び遠心力が完全ではなくても少なくとも部分的に整列するように逆転させられる。その後に細胞は、回転チャンバからまた別の容器に取り出すことができる。細胞培養方法では、小細胞又は大細胞を選択するのが所望であることがあり、そして本発明は、所望のタイプを選択するための細胞の分離を提供できる方法及びシステムを提供する。
ると、例えば細胞などの特定標的を選択することができる。親和性標的には、特定細胞タイプ、例えば胚もしくは成体幹細胞、多能性細胞、組織特異的細胞、又は特定分化段階の細胞を含むことができる。親和性マトリックスは、回転チャンバ内に含有されてよく、1つ以上の標的を含む混合集団を回転チャンバ内に移送することができる。親和性マトリックスは、親和性標的に結合し、流動床を形成できる、例えば標準クロマトグラフィー材料などの任意の適切な粒子、ビーズ、又は樹脂であってよい。親和性マトリックスは、親和性標的、例えば抗体(ポリクローナル、モノクローナル、フラグメント、Fc領域など)、プロテインA及びプロテインG含有材料、染料、受容体、リガンド、核酸などに結合する材料を含むことができる。マトリックスに対する親和性を有する細胞もしくは粒子は、マトリックスによって結合又は保持されるが、他の粒子もしくは細胞は、チャンバから出て行く。出て行く材料は、それが再び親和性マトリックスに近付くために回転チャンバ内に再進入するように再循環させることができる。親和性マトリックスと結合又は結び付けられる細胞もしくは粒子は、回転チャンバ内の培地の流れに溶出培地(elution media)
を加えることによって遊離させることができる。遊離した細胞もしくは粒子は、親和性マトリックスからの遊離後に収集できる。図31を参照されたい。
及び親和性マトリックスを1回以上通過するために再循環させられ、出て行く細胞−veは、バルブ8を通って容器11内に保存される。溶出培地は、容器12からバルブ9を通って、双方向ポンプ3を経由し、経路2を経由して装置4の回転チャンバ5内にポンピングされる。溶出培地は、標的細胞と親和性マトリックスとの関連を破壊するので、標的細胞+veは、マトリックスから取り除かれる。標的細胞は、回転チャンバ5から出て経路6を通り、バルブ7を経由して流れ、容器10内に含有される。
)することのできる三次元構造を含んでいる。そのようなスカフォールドは、例えば細胞を含む組織中、又は細胞が除去されている組織中で見いだされる天然構造などの天然であってよい、又は三次元形状を形成するために合成もしくは天然材料から製造することができる。例えば、コラーゲンスカフォールドは、例えば脱細胞化された血管、又はコラーゲン分子からなどの天然構造を用いて使用できる、又はランダム三次元形状を形成するスカフォールディング材料として使用できる。スカフォールディング材料の他の例には、アルギン酸塩及びプロテオグリカンが含まれるが、それらに限定されない。図33は、本明細書に開示した方法及びシステムの別の実施例を示している。スカフォールディング材料を含有する培地は、容器10から、バルブ8を経由し、双方向ポンプ3を経由して、経路2を経由して回転チャンバ5を含む装置4へポンピングされる。スカフォールディング材料
は、回転チャンバ5内に保持される。スカフォールディング材料は、架橋結合できてもできなくてもよい。細胞を含有する培地は、容器1からポンピングされ、バルブ7を通って、双方向ポンプ3を経由し、経路2を経由して装置4の回転チャンバ5内に流入する。細胞は回転チャンバ内に保持され、スカフォールディング材料と結び付けられる、又はスカフォールディング材料の上及び内部に包埋される。スカフォールディング材料は、架橋結合できてもできなくてもよい。スカフォールディング材料及び細胞の添加の順序は逆転することができ、細胞が先に回転チャンバ5内に入り、その後にスカフォールディング材料の添加が行われてもよい。回転チャンバは開放することができ、結び付いた細胞を備える三次元スカフォールドを取り除くことができる。
動できる)、1つ以上のバルブ、及び/又は1つ以上のポンプを使用することができる。これらの構成要素は、1つ以上の制御装置によって制御することができる。換言すると、単一制御装置が、全構成要素を制御できる、又は構成要素の一部もしくは全部が専用の制御装置を有していてよい。一部の実施形態では、本制御装置は、
1)バルブの開放及び閉鎖、
2)ポンプの流量、
3)直接的又はモーターを経由してのいずれかによるローターの回転速度、
4)チャンバの回転速度、及び/又は
5)バイオリアクターなどの流体供給源からの流体及び/又は粒子の流速
を指令する。一部の実施形態では、制御装置は、例えば上記でより詳細に記載したエレクトロポレーション技術において印加される電場などの電場の印加を指令することができる。
[実施例1]
0rpmで回転した。交換速度は1容量/日であり、サイクル時間は30分間であった。
Claims (8)
- 混合された粒子群を分離するための方法であって、
入口と出口とを有するチャンバを、遠心力場を作り出すために軸の周りで回転させるステップと、
前記チャンバ内で流動床として親和性マトリックスを実質的に固定化するステップと、
第1培地と混合された粒子群とを含有する第1流を前記入口に通して前記チャンバ内へ流すステップであって、前記混合された粒子群は、標的粒子と非標的粒子とを含む、ステップと、
前記標的粒子を前記チャンバ内の前記親和性マトリックス内に保持するステップと、
前記チャンバの前記出口を通過する前記第1培地及び前記非標的粒子を収集するステップと、
前記流動床から前記親和性マトリックスを取り除くステップとを含み、
前記親和性マトリックスを取り除くステップは、前記出口に通して流れを前記チャンバ内へ流動させる工程と、前記チャンバの前記入口を通過する前記親和性マトリックスを収集する工程を含み、
前記流れを前記チャンバ内へ流動させる工程は、前記遠心力場と少なくとも部分的に同一方向にある力を作り出す工程を含む、方法。 - 溶出培地を含有する第2流を前記入口に通して前記チャンバ内へ流すステップと、
前記標的粒子を前記親和性マトリックスから遊離させるステップと、
前記チャンバの前記出口を通過する前記標的粒子を収集するステップとをさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 混合された粒子群を分離するための方法であって、
遠心力場を作り出すべく、入口と出口とを有するチャンバを軸の周りで回転させるステップと、
前記遠心力とは相反する力を作り出すステップであって、第1培地と、混合された粒子群とを含む第1流を前記入口に通して前記チャンバ内へ流すステップと、
前記チャンバ内で前記粒子の流動床を形成するステップであって、前記遠心力及び前記相反する力は、前記粒子に作用するベクトル力の総和によって前記粒子を前記流動床内に実質的に固定化するステップと、
前記粒子を実質的に前記チャンバの前記出口を通過させることなく前記第1培地を収集し、次いで、前記混合された粒子群の少なくとも一部を前記流動床から取り除き、前記チャンバの前記出口を通過する混合された粒子群の少なくとも一部を収集し、その後、前記流動床から前記粒子を取り除くステップを含み、
前記粒子を取り除くステップは、第2流を前記出口に通して前記チャンバ内へ流して、前記遠心力場と少なくとも部分的に同一方向にある力を作り出す工程と、前記チャンバの前記入口を通過する前記粒子を収集する工程を含む、方法。 - 前記混合された粒子群の少なくとも一部を取り除くことは、前記遠心力場及び/又は前記第1流の力を変化させることを含む、請求項3に記載の方法。
- 前記混合された粒子群は、サイズ、密度、及び/又は形状によって分離される、請求項3に記載の方法。
- 前記粒子は細胞である、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 前記軸は、実質的に水平軸である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記軸は、実質的に垂直軸である、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
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US9839920B2 (en) | 2009-10-06 | 2017-12-12 | Satorius Stedim North America Inc. | Apparatus for manipulating particles using at least one chamber having an inlet and an opposed outlet |
EP3431608A3 (en) * | 2009-11-17 | 2019-02-20 | E. R. Squibb & Sons, L.L.C. | Method for enhanced protein production |
CN102399680B (zh) * | 2011-11-24 | 2013-05-22 | 杭州电子科技大学 | 基于i型胶原凝胶颗粒制备与收集细胞微球的装置 |
WO2013096778A1 (en) | 2011-12-21 | 2013-06-27 | Lonza Walkersville Inc. | Scalable process for therapeutic cell concentration and residual clearance |
US20140335615A1 (en) * | 2012-01-05 | 2014-11-13 | Life Technologies Corporation | Methods of using mechanical force with somatic and pluripotent cells |
US10704021B2 (en) | 2012-03-15 | 2020-07-07 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic perfusion devices |
US9752113B2 (en) | 2012-03-15 | 2017-09-05 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic perfusion devices |
US9458450B2 (en) | 2012-03-15 | 2016-10-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustophoretic separation technology using multi-dimensional standing waves |
US9950282B2 (en) | 2012-03-15 | 2018-04-24 | Flodesign Sonics, Inc. | Electronic configuration and control for acoustic standing wave generation |
US9745548B2 (en) | 2012-03-15 | 2017-08-29 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic perfusion devices |
US10689609B2 (en) | 2012-03-15 | 2020-06-23 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic bioreactor processes |
US10967298B2 (en) | 2012-03-15 | 2021-04-06 | Flodesign Sonics, Inc. | Driver and control for variable impedence load |
US10737953B2 (en) | 2012-04-20 | 2020-08-11 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustophoretic method for use in bioreactors |
TWI637057B (zh) | 2012-11-09 | 2018-10-01 | 拜爾沙納有限公司 | 具交替生物反應器用途之不連續進料批次製程 |
JP6402926B2 (ja) | 2012-12-07 | 2018-10-10 | サン パテント トラスト | 送信装置、送信方法、受信装置、受信方法、集積回路、及びプログラム |
JP5813680B2 (ja) * | 2013-02-28 | 2015-11-17 | 株式会社日立製作所 | 細胞培養装置 |
WO2015017733A1 (en) * | 2013-07-31 | 2015-02-05 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods and apparatus for transplantation of nucleic acid molecules |
US9745569B2 (en) | 2013-09-13 | 2017-08-29 | Flodesign Sonics, Inc. | System for generating high concentration factors for low cell density suspensions |
WO2015105955A1 (en) | 2014-01-08 | 2015-07-16 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustophoresis device with dual acoustophoretic chamber |
US9744483B2 (en) | 2014-07-02 | 2017-08-29 | Flodesign Sonics, Inc. | Large scale acoustic separation device |
PT3757206T (pt) | 2014-11-05 | 2024-05-21 | Juno Therapeutics Inc | Métodos de transdução e processamento de células |
US11377651B2 (en) | 2016-10-19 | 2022-07-05 | Flodesign Sonics, Inc. | Cell therapy processes utilizing acoustophoresis |
US11021699B2 (en) | 2015-04-29 | 2021-06-01 | FioDesign Sonics, Inc. | Separation using angled acoustic waves |
US10640760B2 (en) | 2016-05-03 | 2020-05-05 | Flodesign Sonics, Inc. | Therapeutic cell washing, concentration, and separation utilizing acoustophoresis |
US11708572B2 (en) | 2015-04-29 | 2023-07-25 | Flodesign Sonics, Inc. | Acoustic cell separation techniques and processes |
US11474085B2 (en) | 2015-07-28 | 2022-10-18 | Flodesign Sonics, Inc. | Expanded bed affinity selection |
US11459540B2 (en) | 2015-07-28 | 2022-10-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Expanded bed affinity selection |
US10099228B2 (en) | 2015-10-09 | 2018-10-16 | Invetech, Inc. | Apparatus for performing counter flow centrifugation and method of using same |
GB2565664A (en) * | 2016-03-07 | 2019-02-20 | Hitachi Chemical Advanced Therapeutics Solutions Llc | A closed system for labelling and selecting live cells |
US11085035B2 (en) | 2016-05-03 | 2021-08-10 | Flodesign Sonics, Inc. | Therapeutic cell washing, concentration, and separation utilizing acoustophoresis |
US11214789B2 (en) | 2016-05-03 | 2022-01-04 | Flodesign Sonics, Inc. | Concentration and washing of particles with acoustics |
EP3500355B1 (en) * | 2016-08-21 | 2024-04-10 | ADVA Biotechnology Ltd. | Bioreactor and methods of use thereof |
TWI615134B (zh) * | 2016-09-13 | 2018-02-21 | 三鼎生物科技股份有限公司 | 自體細胞多維成形裝置 |
CA3041517A1 (en) | 2016-10-19 | 2018-04-26 | Flodesign Sonics, Inc. | Affinity cell extraction by acoustics |
SG11201901782TA (en) * | 2016-11-02 | 2019-05-30 | Emd Millipore Corp | Container for separating microcarriers from cell culture fluids |
JP7229933B2 (ja) * | 2017-03-14 | 2023-02-28 | アムジェン インコーポレイテッド | 結晶性生体分子を対象にする方法 |
EP3725092A4 (en) | 2017-12-14 | 2021-09-22 | FloDesign Sonics, Inc. | DRIVE AND CONTROL UNIT FOR ACOUSTIC CONVERTER |
US20210163868A1 (en) * | 2018-05-22 | 2021-06-03 | Nantkwest, Inc. | Methods and systems for cell bed formation during bioprocessing |
DE102018006286B3 (de) * | 2018-08-08 | 2019-10-10 | Sartorius Stedim Biotech Gmbh | Bioreaktor mit Filtereinheit und Verfahren zur Behandlung einer Zellbrühe |
WO2020086408A1 (en) * | 2018-10-26 | 2020-04-30 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | A high-yield perfusion-based transient gene expression bioprocess |
CN115885036A (zh) * | 2020-04-03 | 2023-03-31 | 米伦纽姆医药公司 | 提高的病毒转导效率 |
EP3936600A1 (en) | 2020-07-06 | 2022-01-12 | Sartorius Stedim Biotech GmbH | Automated centrifuge setup of a bioprocessing installation |
EP3936601A1 (en) | 2020-07-06 | 2022-01-12 | Sartorius Stedim Biotech GmbH | Clarification setup of a bioprocessing installation |
CA3190177A1 (en) * | 2020-08-22 | 2022-03-03 | Sunil Mehta | An automated centrifugation device and methods to continuously separate components from different mixtures |
EP4015614A1 (en) * | 2020-12-15 | 2022-06-22 | Alfa Laval Corporate AB | Method for operating a bioprocessing system and a bioprocessing system |
GB2603744A (en) * | 2020-12-15 | 2022-08-17 | Cellularevolution Ltd | A bioprocessing system |
EP4056671A1 (en) | 2021-03-10 | 2022-09-14 | Sartorius Stedim Biotech GmbH | Method for operating a bioprocess installation |
WO2023076404A1 (en) | 2021-10-27 | 2023-05-04 | Aria Pharmaceuticals, Inc. | Methods for treating systemic lupus erythematosus |
EP4209576A1 (en) * | 2022-01-11 | 2023-07-12 | Sartorius Stedim North America Inc. | Method for operating a clarification setup |
EP4209575A1 (en) * | 2022-01-11 | 2023-07-12 | Sartorius Stedim North America Inc. | Method for operating a clarification setup |
EP4299188A1 (de) | 2022-06-30 | 2024-01-03 | Sigma Laborzentrifugen GmbH | Zentrifuge, verfahren zum betrieb einer zentrifuge und computerlesbares medium |
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Family Cites Families (31)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS615390A (ja) | 1984-06-19 | 1986-01-11 | Seiko Epson Corp | カ−ドの製造方法 |
JPS62116736A (ja) | 1985-11-18 | 1987-05-28 | Hitachi Ltd | 真空遮断器用電極の製造法 |
JPS62116736U (ja) * | 1986-01-17 | 1987-07-24 | ||
US5510247A (en) * | 1993-03-29 | 1996-04-23 | University Of Pittsburgh | Centrifugal multiphase systems and method for using the same |
US20050266548A1 (en) * | 1995-03-28 | 2005-12-01 | Kbi Biopharma, Inc. | Biocatalyst chamber encapsulation system for bioremediation and fermentation with improved rotor |
US5622819A (en) * | 1995-03-28 | 1997-04-22 | Kinetic Biosystems, Inc. | Centrifugal fermentation process |
US6214617B1 (en) | 1995-03-28 | 2001-04-10 | Kinetic Biosystems, Inc. | Centrifugal fermentation process |
JPH09308482A (ja) * | 1996-05-21 | 1997-12-02 | Hitachi Ltd | 植物プロトプラストの選抜方法 |
US6090617A (en) | 1996-12-05 | 2000-07-18 | Entremed, Inc. | Flow electroporation chamber with electrodes having a crystalline metal nitride coating |
US6869796B2 (en) * | 1997-08-26 | 2005-03-22 | Avaris Ab | Method of introducing organic molecules into target cells |
JPH11143058A (ja) | 1997-11-11 | 1999-05-28 | Brother Ind Ltd | 画像記録媒体 |
AU4310899A (en) | 1998-05-21 | 1999-12-06 | Arlan K. Andrews Sr. | Methods and devices for remediation and fermentation |
JP3752862B2 (ja) | 1998-09-25 | 2006-03-08 | 日立工機株式会社 | 遠心分離システム、及び遠心分離用ロータ、及びカウンターフロー遠心法用分離チャンバ |
JP2000210539A (ja) | 1999-01-20 | 2000-08-02 | Terumo Corp | 体液処理器、中空糸膜組立体および体液処理器の製造方法 |
US20010044134A1 (en) | 1999-12-08 | 2001-11-22 | Sheppard Paul O. | Novel secreted polypeptide zsig87 |
WO2001055296A1 (en) * | 2000-01-31 | 2001-08-02 | Kinetic Biosystems, Inc. | Methods and devices for remediation and fermentation |
US6354986B1 (en) * | 2000-02-16 | 2002-03-12 | Gambro, Inc. | Reverse-flow chamber purging during centrifugal separation |
US20040017018A1 (en) * | 2000-04-28 | 2004-01-29 | Rainer Pommersheim | Method and facility for producing micromembrane capsules |
WO2002002745A2 (en) * | 2000-07-05 | 2002-01-10 | Islet Technology, Inc. | Method and system for consistent and effective encapsulation of biological material |
GB0102568D0 (en) * | 2001-02-01 | 2001-03-21 | Magnetic Biosolutions Sweden A | Method |
AU2002361623A1 (en) | 2001-11-09 | 2003-05-19 | Kinetic Biosystems Inc. | Methods and compositions for chromatography |
US20050003459A1 (en) * | 2002-01-30 | 2005-01-06 | Krutzik Siegfried Richard | Multi-purpose optical analysis disc for conducting assays and related methods for attaching capture agents |
BR0313251A (pt) | 2002-08-06 | 2005-07-05 | Metabolix Inc | Métodos de extração de polìmero |
DE10335833A1 (de) | 2003-08-05 | 2005-03-03 | Curevac Gmbh | Transfektion von Blutzellen mit mRNA zur Immunstimulation und Gentherapie |
US20070095393A1 (en) | 2004-03-30 | 2007-05-03 | Piero Zucchelli | Devices and methods for programmable microscale manipulation of fluids |
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US9279331B2 (en) * | 2012-04-23 | 2016-03-08 | United Technologies Corporation | Gas turbine engine airfoil with dirt purge feature and core for making same |
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