JP6132849B2 - ヒトlmnaを標的とするオリゴヌクレオチド類似体を使用する早老性ラミノパシーを処置するための方法 - Google Patents
ヒトlmnaを標的とするオリゴヌクレオチド類似体を使用する早老性ラミノパシーを処置するための方法 Download PDFInfo
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Description
本出願と関連する配列表は、紙のコピーの代わりにテキスト形式で提供され、参照により本明細書に組み込まれている。配列表を含有するテキストファイルの名称は、120178_49401WO_ SEQUENCE_LISTING.txtである。テキストファイルは約14KBであり、2012年12月6日に作製され、EFSウェブを介して電子的に提出されている。
(i)実質的に荷電していない、ヌクレアーゼ耐性骨格を有し、
(ii)哺乳動物宿主細胞による取込みが可能であり、
(iii)約12〜40のヌクレオチド塩基を含有し、
(iv)ヒトLMNAプレmRNAのエキソン10、イントロン10、エキソン11、またはこれらの組合せに対して相補的である少なくとも約12の連続的なサブユニットの標的化配列を有する。
Zは、SまたはOであり、
X=NR1R2またはOR6であり、
Y=OまたはNR7であり、
それぞれの前記連結は、以下:
(a)荷電していない連結(a)[R1、R2、R6、およびR7のそれぞれは、水素および低級アルキルから独立に選択される];
(b1)カチオン性連結(b1)[X=NR1R2であり、Y=Oであり、NR1R2は、R1R2=−CHRCHRN(R3)(R4)CHRCHR−であるように、任意選択で置換されているピペラジノ基を表し、
各R4は、H、CH3であるかまたは存在せず、
R3は、H、低級アルキル、C(=NH)NH2、Z−L−NHC(=NH)NH2、および[C(O)CHR’NH]mHから選択され、Zは、カルボニル(C(O))または直接結合であり、Lは、アルキル、アルコキシ、およびアルキルアミノから選択される結合を有する長さが18原子までの任意選択のリンカーであり、R’は、天然アミノ酸またはその1もしくは2炭素ホモログの側鎖であり、mは、1〜6である];
(b2)カチオン性連結(b2)[X=NR1R2であり、Y=Oであり、R1=HまたはCH3であり、R2=LNR3R4R5であり、L、R3、およびR4は、上記のように定義され、R5は、H、低級アルキル、または低級(アルコキシ)アルキルである]、ならびに
(b3)カチオン性連結(b3)[Y=NR7であり、X=OR6であり、R7=LNR3R4R5であり、L、R3、およびR4およびR5は、上記のように定義され、R6は、Hまたは低級アルキルである]
から選択され、
少なくとも1つの前記連結は、カチオン性連結(b1)、(b2)、および(b3)から選択される。
連結(A)について:
Wは、それぞれの出現において独立に、SまたはOであり、
Xは、それぞれの出現において独立に、−N(CH3)2、−NR1R2、−OR3または、
Yは、それぞれの出現において独立に、Oまたは−NR2であり、
R1は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
R2は、それぞれの出現において独立に、水素または−LNR4R5R7であり、
R3は、それぞれの出現において独立に、水素またはC1〜C6アルキルであり、
R4は、それぞれの出現において独立に、水素、メチル、−C(=NH)NH2、−Z−L−NHC(=NH)NH2または−[C(O)CHR’NH]mHであり、Zは、カルボニル(C(O))または直接結合であり、R’は、天然アミノ酸またはその1もしくは2炭素ホモログの側鎖であり、mは、1〜6であり、
R5は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
R6は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
R7は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C6アルキルまたはC1〜C6アルコキシアルキルであり、
Lは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長さが18原子までの任意選択のリンカーであり、
連結(B)について:
Wは、それぞれの出現において独立に、SまたはOであり、
Xは、それぞれの出現において独立に、−NR8R9または−OR3であり、
Yは、それぞれの出現において独立に、Oまたは−NR10であり、
R8は、それぞれの出現において独立に、水素またはC2〜C12アルキルであり、
R9は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C12アルキル、C1〜C12アラルキルまたはアリールであり、
R10は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C12アルキルまたは−LNR4R5R7であり、
R8およびR9は接合して、5〜18員の単環式または二環式複素環を形成し得るか、あるいはR8、R9またはR3はR10と接合して、5〜7員の複素環を形成し得、Xが4−ピペラジノであるとき、Xは、下記の構造(III):
R11は、それぞれの出現において独立に、C2〜C12アルキル、C1〜C12アミノアルキル、C1〜C12アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり、
Rは、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはC1〜C12アルキルであり、
R12は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C12アルキル、C1〜C12アミノアルキル、−NH2、−NR13R14、−NR13R14R15、C1〜C12アルキルカルボニル、オキソ、−CN、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニルグアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−SR13またはC1〜C12アルコキシであり、R13、R14およびR15は、それぞれの出現において独立に、C1〜C12アルキルであり、
サブユニット間連結の少なくとも1つは、連結(B)である。
連結(A)について:
Wは、それぞれの出現において独立に、SまたはOであり、
Xは、それぞれの出現において独立に、−N(CH3)2、−NR1R2、−OR3または、
Yは、それぞれの出現において独立に、Oまたは−NR2であり、
R1は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
R2は、それぞれの出現において独立に、水素または−LNR4R5R7であり、
R3は、それぞれの出現において独立に、水素またはC1〜C6アルキルであり、
R4は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C6アルキル、−C(=NH)NH2、−Z−L−NHC(=NH)NH2または−[C(O)CHR’NH]mHであり、Zは、カルボニル(C(O))または直接結合であり、R’は、天然アミノ酸またはその1もしくは2炭素ホモログの側鎖であり、mは、1〜6であり、
R5は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
R6は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
R7は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C6アルキルまたはC1〜C6アルコキシアルキルであり、
Lは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長さが18原子までの任意選択のリンカーであり、
連結(B)について:
Wは、それぞれの出現において独立に、SまたはOであり、
Xは、それぞれの出現において独立に、−NR8R9または−OR3であり、
Yは、それぞれの出現において独立に、Oまたは−NR10であり、
R8は、それぞれの出現において独立に、水素またはC2〜C12アルキルであり、
R9は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C12アルキル、C1〜C12アラルキルまたはアリールであり、
R10は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C12アルキルまたは−LNR4R5R7であり、
R8およびR9は接合して、5〜18員の単環式または二環式複素環を形成し得るか、あるいはR8、R9またはR3はR10と接合して、5〜7員の複素環を形成し得、Xが4−ピペラジノであるとき、Xは、下記の構造(III):
R10は、それぞれの出現において独立に、C2〜C12アルキル、C1〜C12アミノアルキル、C1〜C12アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり、
R11は、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはC1〜C12アルキルであり、
R12は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C12アルキル、C1〜C12アミノアルキル、−NH2、−NR13R14、−NR13R14R15、C1〜C12アルキルカルボニル、−CN、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニル、グアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−SR13またはC1〜C12アルコキシであり、R13、R14およびR15は、それぞれの出現において独立に、C1〜C12アルキルであり、
R17は、それぞれの出現において独立に、非存在、水素またはC1〜C6アルキルであり、
R18およびR19は、それぞれの出現において独立に、非存在、水素、細胞透過性ペプチド、天然もしくは非天然のアミノ酸、C2〜C30アルキルカルボニル、−C(=O)OR21またはR20であり、
R20は、それぞれの出現において独立に、グアニジニル、ヘテロシクリル、C1〜C30アルキル、C3〜C8シクロアルキル;C6〜C30アリール、C7〜C30アラルキル、C3〜C30アルキルカルボニル、C3〜C8シクロアルキルカルボニル、C3〜C8シクロアルキルアルキルカルボニル、C7〜C30アリールカルボニル、C7〜C30アラルキルカルボニル、C2〜C30アルキルオキシカルボニル、C3〜C8シクロアルキルオキシカルボニル、C7〜C30アリールオキシカルボニル、C8〜C30アラルキルオキシカルボニル、または−P(=O)(R22)2
であり、
R21は、1個もしくは複数の酸素またはヒドロキシル部分またはこれらの組合せを含むC1〜C30アルキルであり、
各R22は独立に、C6〜C12アリールオキシであり、
Bは、塩基対合部分であり、
L1は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、アルキルアミノ、アミド、エステル、カルボニル、カルバメート、ホスホロジアミデート、ホスホロアミデート(phosphoroamidate)、ホスホロチオエート、ピペラジンおよびホスホジエステルから選択される結合を含む長さが18原子までの任意選択のリンカーであり、
xは、0以上の整数であり、
R18またはR19の少なくとも1つは、R20であり、ただし、R17およびR18の両方が非存在ではない。
特定の実施形態では、例えば以下が提供される:
(項目1)
早老性疾患または関連する状態の処置を必要とする被験体において早老性疾患または関連する状態を処置するための方法であって、前記被験体にアンチセンスオリゴヌクレオチドを投与することを含み、前記オリゴヌクレオチドは、ヒトLMNAプレmRNAの異常なスプライシングをモジュレートし、前記オリゴヌクレオチドは、モルホリノサブユニット、および1つのサブユニットのモルホリノ窒素と隣接するサブユニットの5’環外炭素とを接合するリン含有サブユニット間連結から構成され、かつ以下:
(i)実質的に荷電していない、ヌクレアーゼ耐性骨格を有し、
(ii)哺乳動物宿主細胞による取込みが可能であり、
(iii)約12〜40のヌクレオチド塩基を含有し、かつ
(iv)ヒトLMNAプレmRNAのエキソン10、イントロン10、エキソン11、またはこれらの組合せに対して相補的である少なくとも約12の連続的なサブユニットの標的化配列を有する、方法。
(項目2)
前記標的化配列が、ヒトLMNAプレmRNAのエキソン11潜在的スプライス部位の上流の塩基に対して相補的である、項目1に記載の方法。
(項目3)
前記標的化配列が、ヒトLMNAプレmRNAのエキソン11潜在的スプライス部位の下流の塩基に対して相補的である、項目1に記載の方法。
(項目4)
前記標的化配列が、前記ヒトLMNAプレmRNAのエキソン11潜在的スプライス部位と重複しない、項目1に記載の方法。
(項目5)
前記早老性疾患が、前記ヒトLMNAプレmRNAのエキソン11潜在的スプライス部位内の1824C>T変異と関連し、前記標的化配列が、前記1824C>T変異と重複しない、項目1に記載の方法。
(項目6)
前記標的化配列の最も3’側の塩基が、ヒトLMNAプレmRNAのエキソン11潜在的スプライス部位の約1〜30塩基下流であるLMNAエキソン11中の塩基に対して相補的である、項目1に記載の方法。
(項目7)
前記標的化配列の最も3’側の塩基が、ヒトLMNAプレmRNAのエキソン11潜在的スプライス部位の約10〜40塩基上流であるLMNAエキソン11中の塩基に対して相補的である、項目1に記載の方法。
(項目8)
前記標的化配列の最も3’側の塩基が、LMNAエキソン11の約1〜60塩基上流であるLMNAイントロン10中の塩基に対して相補的である、項目1に記載の方法。
(項目9)
前記標的化配列の最も3’側の塩基が、LMNAイントロン10の約1〜30塩基上流であるLMNAエキソン10中の塩基に対して相補的である、項目1に記載の方法。
(項目10)
前記標的化配列が、LMNAプレmRNAのエキソン10および11のスプライスドナー(SD)部位またはスプライスアクセプター(SA)部位のスプライスジャンクションと重複する領域に対して相補的であり、かつプロセシングを受ける前の前記mRNAのエキソン領域の一部およびイントロン領域の一部に対して相補的である、項目1に記載の方法。
(項目11)
前記標的化配列が、配列番号3〜34のいずれか1つを含む、項目1に記載の方法。
(項目12)
前記標的化配列が、配列番号3〜7または14〜16のいずれか1つを含む、項目1に記載の方法。
(項目13)
前記標的化配列が、配列番号4から本質的になる、項目1に記載の方法。
(項目14)
前記標的化配列が、配列番号11から本質的になる、項目1に記載の方法。
(項目15)
前記オリゴヌクレオチドが、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド(PMO)、1つもしくは複数のピペラジン含有サブユニット間連結を含むPMO(PMOプラス)またはPMO−Xオリゴヌクレオチドである、項目1に記載の方法。
(項目16)
前記オリゴヌクレオチドが、約10%〜50%のサブユニット間カチオン性連結を含有する、項目1に記載の方法。
(項目17)
前記オリゴヌクレオチド中の前記モルホリノサブユニットが、下記の構造:
に従ってホスホロジアミデート連結によって接合しており、
式中、Zは、SまたはOであり、
X=NR 1 R 2 またはOR 6 であり、
Y=OまたはNR 7 であり、そして
それぞれの前記連結は、以下:
(a)荷電していない連結(a)であって、ここで、R 1 、R 2 、R 6 、およびR 7 のそれぞれは、水素および低級アルキルから独立に選択される、荷電していない連結(a);
(b1)カチオン性連結(b1)であって、ここで、X=NR 1 R 2 であり、Y=Oであり、NR 1 R 2 は、R 1 R 2 =−CHRCHRN(R 3 )(R 4 )CHRCHR−であるように、任意選択で置換されているピペラジノ基を表し、
各R 4 は、H、CH 3 であるかまたは存在せず、かつ
R 3 は、H、低級アルキル、C(=NH)NH 2 、Z−L−NHC(=NH)NH 2 、および[C(O)CHR’NH] m Hから選択され、ここで、Zは、カルボニル(C(O))または直接結合であり、Lは、アルキル、アルコキシ、およびアルキルアミノから選択される結合を有する長さが18原子までの任意選択のリンカーであり、R’は、天然アミノ酸またはその1もしくは2炭素ホモログの側鎖であり、かつmは、1〜6である、カチオン性連結(b1);
(b2)カチオン性連結(b2)であって、ここで、X=NR 1 R 2 であり、Y=Oであり、R 1 =HまたはCH 3 であり、かつR 2 =LNR 3 R 4 R 5 であり、ここで、L、R 3 、およびR 4 は、上記のように定義され、かつR 5 は、H、低級アルキル、または低級(アルコキシ)アルキルである、カチオン性連結(b2);ならびに
(b3)カチオン性連結(b3)であって、ここで、Y=NR 7 であり、X=OR 6 であり、かつR 7 =LNR 3 R 4 R 5 であり、ここで、L、R 3 、およびR 4 およびR 5 は、上記のように定義され、かつR 6 は、Hまたは低級アルキルである、カチオン性連結(b3);
から選択され、
少なくとも1つの前記連結は、カチオン性連結(b1)、カチオン性連結(b2)、およびカチオン性連結(b3)から選択される、項目1に記載の方法。
(項目18)
タイプ(a)の連結におけるR 1 およびR 2 のそれぞれが、メチルである、項目17に記載の方法。
(項目19)
少なくとも1つの連結が、タイプ(b1)のものであり、各Rが、Hであり、R 4 が、H、CH 3 、または電子対であり、かつR 3 が、H、CH 3 、C(=NH)NH 2 、およびC(O)−L−NHC(=NH)NH 2 から選択される、項目17に記載の方法。
(項目20)
少なくとも1つの連結が、タイプ(b1)のものであり、各Rが、Hであり、R 4 が、電子対であり、かつR 3 が、C(=NH)NH 2 およびC(O)−L−NHC(=NH)NH 2 から選択される、項目17に記載の方法。
(項目21)
少なくとも1つの連結が、タイプ(b1)のものであり、各Rが、Hであり、R 4 が、電子対であり、かつR 3 が、C(=NH)NH 2 およびC(O)−L−NHC(=NH)NH 2 から選択される、項目17に記載の方法。
(項目22)
R 3 が、C(O)−L−NHC(NH)NH 2 であり、Lが、構造−(CH 2 ) n −を有する炭化水素であり、nが、1〜12である、項目21に記載の方法。
(項目23)
少なくとも1つの連結が、タイプ(b1)のものであり、各Rが、Hであり、かつR 3 およびR 4 のそれぞれが独立に、HまたはCH 3 である、項目17に記載の方法。
(項目24)
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、細胞透過性ペプチドに共有結合的に付着している、項目1から23のいずれか一項に記載の方法。
(項目25)
前記細胞透過性ペプチドが、アルギニンに富んだペプチドである、項目24に記載の方法。
(項目26)
前記アルギニンに富んだペプチドが、1つまたは2つのアミノ酸リンカーを介してそのC末端において前記オリゴヌクレオチドの5’端に付着している、項目25に記載の方法。
(項目27)
前記ペプチドが、1つまたは2つのアミノ酸リンカーを介してそのC末端において前記オリゴヌクレオチドの3’端に付着している、項目25に記載の方法。
(項目28)
前記早老性疾患または前記関連する状態が、早老性ラミノパシー、年齢に関連する状態、心血管疾患、HGPSまたはアテローム性動脈硬化症から選択される、項目1に記載の方法。
(項目29)
早老性ラミノパシーの処置を必要とする被験体において早老性ラミノパシーを処置するための方法であって、前記方法は、前記被験体にアンチセンスオリゴヌクレオチド、またはこれを含む医薬組成物を投与することを含み、前記オリゴヌクレオチドは、ヒトLMNAプレmRNAの異常なスプライシングをモジュレートし、前記オリゴヌクレオチドは、骨格を含み、前記骨格は、サブユニット間連結によって接合されているモルホリノ環構造の配列を含み、前記サブユニット間連結は、1つのモルホリノ環構造の3’端と隣接するモルホリノ環構造の5’端とを接合し、各モルホリノ環構造は、前記オリゴヌクレオチドが、配列番号1〜34のいずれか1つにおいて記載した配列の少なくとも12塩基に対して相補的であるか、または配列番号3〜34の任意の1つもしくは複数を含む標的化配列を含む標的核酸に配列特異的様式で結合することができるように、塩基対合部分に結合しており、前記サブユニット間連結は、以下の一般構造(I):
またはその塩もしくは異性体を有し、前記サブユニット間連結(I)のそれぞれは、独立に、連結(A)または連結(B)であり、
ここで連結(A)について:
Wは、それぞれの出現において独立に、SまたはOであり、
Xは、それぞれの出現において独立に、−N(CH 3 ) 2 、−NR 1 R 2 、−OR 3 または、
であり、
Yは、それぞれの出現において独立に、Oまたは−NR 2 であり、
R 1 は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
R 2 は、それぞれの出現において独立に、水素または−LNR 4 R 5 R 7 であり、
R 3 は、それぞれの出現において独立に、水素またはC 1 〜C 6 アルキルであり、
R 4 は、それぞれの出現において独立に、水素、メチル、−C(=NH)NH 2 、−Z−L−NHC(=NH)NH 2 または−[C(O)CHR’NH] m Hであり、ここで、Zは、カルボニル(C(O))または直接結合であり、R’は、天然アミノ酸またはその1もしくは2炭素ホモログの側鎖であり、かつmは、1〜6であり、
R 5 は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
R 6 は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
R 7 は、それぞれの出現において独立に、水素、C 1 〜C 6 アルキルまたはC 1 〜C 6 アルコキシアルキルであり、
Lは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長さが18原子までの任意選択のリンカーであり、そして
連結(B)について:
Wは、それぞれの出現において独立に、SまたはOであり、
Xは、それぞれの出現において独立に、−NR 8 R 9 または−OR 3 であり、
Yは、それぞれの出現において独立に、Oまたは−NR 10 であり、
R 8 は、それぞれの出現において独立に、水素またはC 2 〜C 12 アルキルであり、
R 9 は、それぞれの出現において独立に、水素、C 1 〜C 12 アルキル、C 1 〜C 12 アラルキルまたはアリールであり、
R 10 は、それぞれの出現において独立に、水素、C 1 〜C 12 アルキルまたは−LNR 4 R 5 R 7 であり、
ここで、R 8 およびR 9 は接合して、5〜18員の単環式または二環式複素環を形成し得るか、あるいはR 8 、R 9 またはR 3 はR 10 と接合して、5〜7員の複素環を形成し得、そしてXが4−ピペラジノであるとき、Xは、下記の構造(III):
を有し、式中、
R 11 は、それぞれの出現において独立に、C 2 〜C 12 アルキル、C 1 〜C 12 アミノアルキル、C 1 〜C 12 アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり、かつ
Rは、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはC 1 〜C 12 アルキルであり、かつ
R 12 は、それぞれの出現において独立に、水素、C 1 〜C 12 アルキル、C 1 〜C 12 アミノアルキル、−NH 2 、−NR 13 R 14 、−NR 13 R 14 R 15 、C 1 〜C 12 アルキルカルボニル、オキソ、−CN、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニルグアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−SR 13 またはC 1 〜C 12 アルコキシであり、ここで、R 13 、R 14 およびR 15 は、それぞれの出現において独立に、C 1 〜C 12 アルキルであり、そして
前記サブユニット間連結の少なくとも1つは、連結(B)である、方法。
(項目30)
前記サブユニット間連結の少なくとも5%が、連結(B)である、項目29に記載の方法。
(項目31)
前記サブユニット間連結の10%〜50%が、連結(B)である、項目29に記載の方法。
(項目32)
各連結(B)が、それぞれの出現において同じ構造を有する、項目29に記載の方法。
(項目33)
各Yおよび各Wが、Oである、項目29に記載の方法。
(項目34)
前記標的化配列が、配列番号3〜7または14〜16のいずれか1つを含む、項目29に記載の方法。
(項目35)
前記標的化配列が、配列番号4から本質的になる、項目29に記載の方法。
(項目36)
前記標的化配列が、配列番号11から本質的になる、項目29に記載の方法。
(項目37)
前記早老性疾患または前記関連する状態が、早老性ラミノパシー、年齢に関連する状態、心血管疾患、HGPSまたはアテローム性動脈硬化症から選択される、項目29に記載の方法。
他に定義しない限り、本明細書において使用する全ての技術および科学用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載されているものと同様または同等である任意の方法および材料を、本発明の実施または試験において使用することができるが、好ましい方法および材料を記載する。本発明の目的のために、下記の用語を、下記で定義する。
本発明の方法において使用するための例には、下記で考察する、配列番号1および/または2を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドが含まれる。
本発明の方法において使用するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドは典型的には、(a)哺乳動物細胞によって能動的に取り込まれる能力を有し、(b)取り込まれると、標的RNAと約45℃超のTmを有する二重鎖を形成する。特定の実施形態において、オリゴマー骨格は、実質的に荷電していなくてもよく、好ましくは、細胞膜を横切る能動輸送または促進輸送のための基質として認識し得る。標的RNAと安定的な二重鎖を形成するオリゴマーの能力はまた、標的に関するアンチセンスオリゴマーの長さおよび相補性の程度、G:C塩基マッチとA:T塩基マッチとの比、ならびに任意のミスマッチの塩基の位置を含めた、オリゴマー骨格の他の特色に関し得る。細胞ヌクレアーゼに抵抗するアンチセンスオリゴマーの能力は、生存、および細胞の細胞質への薬剤の最終的な送達を促進し得る。含まれるのは、本明細書に記載されているPMO、PMO+(PMOプラス)、PMO−X、LNA、PNA、および/または2’O−Meをベースとする化学物質から構成されるアンチセンスオリゴマーである。一般に、PNAおよびLNA化学物質は、PMOおよび2’O−Meオリゴマーと比較してこれらの相対的に高い標的結合強度によって、より短い標的化オリゴマーを利用する。
Wは、SまたはOであり、好ましくはOであり、
X=NR1R2またはOR6であり、
Y=OまたはNR7であり、
オリゴマー中のそれぞれの前記連結は、
(a)荷電していない連結(a)[R1、R2、R6およびR7のそれぞれは、水素および低級アルキルから独立に選択される];
(b1)カチオン性連結(b1)[X=NR1R2であり、Y=Oであり、NR1R2は、R1R2=−CHRCHRN(R3)(R4)CHRCHR−であるように、任意選択で置換されているピペラジノ基を表し、
各Rは独立に、HまたはCH3であり、
R4は、H、CH3、または電子対であり、
R3は、H、低級アルキル、例えば、CH3、C(=NH)NH2、Z−L−NHC(=NH)NH2、および[C(O)CHR’NH]mHから選択され、Zは、C(O)または直接結合であり、Lは、アルキル、アルコキシ、およびアルキルアミノから選択される結合を有する長さが18原子まで、好ましくは12原子まで、より好ましくは長さが8原子までの任意選択のリンカーであり、R’は、天然アミノ酸またはその1もしくは2炭素ホモログの側鎖であり、mは、1〜6、好ましくは1〜4である];
(b2)カチオン性連結(b2)[X=NR1R2であり、Y=Oであり、R1=HまたはCH3であり、R2=LNR3R4R5であり、L、R3、およびR4は、上記に定義されている通りであり、R5は、H、低級アルキル、または低級(アルコキシ)アルキルである]、ならびに
(b3)カチオン性連結(b3)[Y=NR7であり、X=OR6であり、R7=LNR3R4R5であり、L、R3、R4およびR5は、上記に定義されている通りであり、R6は、Hまたは低級アルキルである]
から選択され、
少なくとも1つの前記連結は、カチオン性連結(b1)、(b2)、および(b3)から選択される。
アンチセンス活性の増強、体内分布および/または他の望ましい特性は、様々なサブユニット間連結を有するオリゴマーを調製することによって最適化することができることを出願人等は見出した。例えば、本発明の方法において使用するためのオリゴマーは、1つまたは複数のタイプ(A)のサブユニット間連結を任意選択で含み得、特定の実施形態において、オリゴマーは、少なくとも1つのタイプ(A)の連結を含む。いくつかの他の実施形態において、タイプ(A)の各連結は、同じ構造を有する。タイプ(A)の連結は、参照により本明細書にその全体が組み込まれている共有の米国特許第7,943,762号に開示されている連結を含み得る。連結(A)は、下記の構造(I):
Wは、それぞれの出現において独立に、SまたはOであり、
Xは、それぞれの出現において独立に、−N(CH3)2、−NR1R2、−OR3または、
Yは、それぞれの出現において独立に、Oまたは−NR2であり、
R1は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
R2は、それぞれの出現において独立に、水素または−LNR4R5R7であり、
R3は、それぞれの出現において独立に、水素またはC1〜C6アルキルであり、
R4は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C6アルキル、−C(=NH)NH2、−Z−L−NHC(=NH)NH2または−[C(=O)CHR’NH]mHであり、Zは、−C(=O)−または直接結合であり、R’は、天然アミノ酸またはその1もしくは2炭素ホモログの側鎖であり、mは、1〜6であり、
R5は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
R6は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
R7は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C6アルキルまたはC1〜C6アルコキシアルキルであり、
Lは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長さが18原子までの任意選択のリンカーである。
いくつかの実施形態において、本発明の方法において使用するためのオリゴマーは、少なくとも1つのタイプ(B)の連結を含む。例えば、オリゴマーは、1つ、2つ、3つ、4つ、5つ、6つまたはそれより多いタイプ(B)の連結を含み得る。タイプ(B)連結は、隣接してもよく、またはオリゴマーを通して散在し得る。連結タイプ(B)は、下記の構造(I):
Wは、それぞれの出現において独立に、SまたはOであり、
Xは、それぞれの出現において独立に、−NR8R9または−OR3であり、
Yは、それぞれの出現において独立に、Oまたは−NR10であり、
R3は、それぞれの出現において独立に、水素またはC1〜C6アルキルであり、
R8は、それぞれの出現において独立に、水素またはC2〜C12アルキルであり、
R9は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C12アルキル、C1〜C12アラルキルまたはアリールであり、
R10は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C12アルキルまたは−LNR4R5R7であり、
R8およびR9は接合して、5〜18員の単環式または二環式複素環を形成し得るか、あるいはR8、R9またはR3はR10と接合して、5〜7員の複素環を形成し得、Xが4−ピペラジノであるとき、Xは、下記の構造(III):
R11は、それぞれの出現において独立に、C2〜C12アルキル、C1〜C12アミノアルキル、C1〜C12アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり、
Rは、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはC1〜C12アルキルであり、
R12は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C12アルキル、C1〜C12アミノアルキル、−NH2、−NR13R14、−NR13R14R15、C1〜C12アルキルカルボニル、オキソ、−CN、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニルグアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−SR13またはC1〜C12アルコキシであり、R13、R14およびR15は、それぞれの出現において独立に、C1〜C12アルキルである。
R17は、それぞれの出現において独立に、非存在、水素またはC1〜C6アルキルであり、
R18およびR19は、それぞれの出現において独立に、非存在、水素、細胞透過性ペプチド、天然もしくは非天然のアミノ酸、C2〜C30アルキルカルボニル、−C(=O)OR21またはR20であり、
R20は、それぞれの出現において独立に、グアニジニル、ヘテロシクリル、C1〜C30アルキル、C3〜C8シクロアルキル;C6〜C30アリール、C7〜C30アラルキル、C3〜C30アルキルカルボニル、C3〜C8シクロアルキルカルボニル、C3〜C8シクロアルキルアルキルカルボニル、C7〜C30アリールカルボニル、C7〜C30アラルキルカルボニル、C2〜C30アルキルオキシカルボニル、C3〜C8シクロアルキルオキシカルボニル、C7〜C30アリールオキシカルボニル、C8〜C30アラルキルオキシカルボニル、または−P(=O)(R22)2であり、
Bは、塩基対合部分であり、
L1は、アルキル、ヒドロキシル、アルコキシ、アルキルアミノ、アミド、エステル、カルボニル、カルバメート、ホスホロジアミデート、ホスホロアミデート、ホスホロチオエート、ピペラジンおよびホスホジエステルから選択される、結合を含む長さが18原子までの任意選択のリンカーであり、
xは、0以上の整数であり、R18またはR19の少なくとも1つは、R20であり、
R18またはR19の少なくとも1つは、R20であり、ただし、R17およびR18の両方が非存在ではない。
本発明の方法のいくつかの実施形態において、対象オリゴマーは、ペプチド輸送体部分、例えば、細胞中へのオリゴマーの輸送を増強するのに有効な細胞透過性ペプチド輸送部分に結合体化している。例えば、いくつかの実施形態において、ペプチド輸送体部分は、アルギニンに富んだペプチドである。さらなる実施形態において、輸送部分は、オリゴマーの5’末端または3’末端に付着している。このようなペプチドがいずれかの末端に結合体化しているとき、反対の末端は本明細書に記載の修飾された末端基へのさらなる結合体化のために利用可能である。
(a)各X’サブユニットは、独立に、リシン、アルギニンまたはアルギニン類似体を表し、前記類似体は、構造R33N=C(NH2)R34の側鎖を含むカチオン性α−アミノ酸であり、R33は、HまたはRであり、R34は、R35、NH2、NHR、またはNR34であり、R35は、低級アルキルまたは低級アルケニルであり、酸素または窒素をさらに含み得、R33およびR34は、一緒に環を形成し得、側鎖は、R33またはR34を介して前記アミノ酸に連結しており、
(b)各Y’サブユニットは、独立に、中性アミノ酸−C(O)−(CHR)n−NH−を表し、nは、2〜7であり、各Rは独立に、Hまたはメチルであり、
(c)各Z’サブユニットは、独立に、中性アラルキル側鎖を有するα−アミノ酸を表し、
ペプチドは、(X’Y’X’)p、(X’Y’)m、および(X’Z’Z’)pの1つによって表される配列を含み、pは、2〜5であり、mは、2〜8である。
本発明は、その必要がある被験体に本明細書に記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド、またはこれを含有する医薬組成物を投与することによって、被験体において早老性疾患、例えば、ラミノパシーおよび関連する疾患または状態を処置するための方法に関し、オリゴヌクレオチドは、LMNAプレmRNAのスプライシングをモジュレートすることによって、変異体LMNAタンパク質mRNAの発現を阻害する。特定の態様において、例えば、これらおよび関連する方法は、プロジェリン発現が疾患、例えば、HGPSと関連する臨床状況における早老性ラミノパシーの処置に適用することができる。これらおよび関連する実施形態はまた、本発明の方法を他の処置と共に併行的または逐次的に行うことによって、早老性ラミノパシーを処置または低減させる方法と合わせることができる。
LMNAを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用したHGPS細胞の処理
2種の初代線維芽細胞系統であるHGPS線維芽細胞(HGADFN167)および対照線維芽細胞(HGFDFN168)を使用した。HGPSおよび対照細胞を、約10,000個の細胞/ウェルの密度で24ウェルディッシュ中に播種した。ラミン−AプレmRNAのエキソン11および/または10を標的としたモルホリノオリゴヌクレオチドを、遊離取込みによって、またはnucleofection(例えば、Amaxa)によって、培養したHGPS細胞中に個々に導入した。遊離取込みのために、細胞を、25μMまたは50μMまたは80uMのPMOオリゴヌクレオチドを含有する培地中で1〜2週間培養した。次いで、これらの細胞を、抗プロジェリン抗体または抗ラミンA/C抗体を伴う免疫蛍光によってスクリーニングした。プロジェリン染色の蛍光強度を、Zeiss蛍光顕微鏡およびSPOTプログラムを使用して定量化した。実験は三連で行い、プロジェリンの下方調節において効果を示したPMOを、さらなる分析のために選択した。分析は、プロジェリン特異的プライマーによる定量的RT−PCR、および抗プロジェリン抗体によるウエスタンブロッティング分析を含んだ。
LMNAを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理の後のHGPS細胞の蛍光免疫染色
蛍光免疫染色:免疫蛍光のために、細胞を4ウェルチャンバースライド上に播種した。4%パラホルムアルデヒド/PBS中で室温にて15分間固定化した後、細胞を0.5%Triton X−100/PBSで室温にて5分間透過処理し、それに続いてブロック溶液中で4℃にて一晩インキュベートした(ブロック溶液:4%BSA/TBS)。細胞を、マウスモノクローナル抗ラミンA/C(MAB3211、Chemicon)およびウサギポリクローナル抗プロジェリン(カスタムペプチド抗体、Yenzm)で、翌日3時間室温にて染色した。一次抗体を、Alexa Fluor−標識二次抗体(Invitrogen)で検出した。DAPIを含有するVectashield封入剤を乗せたスライドを、Zeiss蛍光顕微鏡で観察した。曝露時間および取得の設定を、実験の各セットの初めに確立し、全ての処理について一定に維持した。実験の結果を、図2において記載する。オリゴヌクレオチドのいくつかは、プロジェリンを有意に下方調節した。
LMNAを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理の後のHGPS細胞のSDS−PAGEおよびウエスタンブロッティング分析
SDS−PAGEおよびウエスタンブロッティング分析:処理された細胞を集め、PBS中で2回すすぎ、次いでLaemmli SDS−PAGEローディングバッファー中で溶解した。試料を95℃にて15分間加熱し、次いで10%SDS−PAGEゲル上にロードした。ウエスタンブロット分析に関して、タンパク質を、ニトロセルロース膜上に移した。膜を5%ミルク/TBSTで4℃にて一晩ブロックし、4%BSA/TBSTに希釈した一次抗体と共に室温にて1〜3時間インキュベートした。TBSTで洗浄した後、膜を1%ミルク/TBSTに1:5000で希釈した二次抗体中で室温にて1時間インキュベートした。化学発光は、ECLウエスタンブロッティング検出キット(Pierce)で検出した。使用した一次抗体は、マウスモノクローナル抗ラミンA/C(MAB3211、Chemicon)、ウサギポリクローナル抗プロジェリン(カスタムペプチド抗体、Yenzm)およびウサギポリクローナル抗アクチン(汎アクチン、Cell Signaling)を含む。実験の結果を、図3において記載する。699(配列番号4)に相当するオリゴヌクレオチドは、LMNAのエキソン11潜在的スプライス部位から取り出されており、LMNAのエキソン11潜在的スプライス部位と重複しないにも関わらず、実験においてプロジェリンの有意な下方調節を示した。
LMNAを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理の後のHGPS細胞の定量的RT−PCR分析
定量的RT−PCR:定量的RT−PCR(qRT−PCR)実験を行い、オリゴヌクレオチド699(配列番号4)および706(配列番号11)による処理に続いて、164線維芽細胞(p13、古典的HGPS)におけるプロジェリン、ラミンAおよびβ−アクチンの発現レベルを測定した。全ての反応は、製造業者の指示によって、SYBR Greenミックス(Qiagen)を使用してApplied Biosystems7900HT FastリアルタイムPCRシステムにて三連で行った。反応条件は、以下の通りであった。50℃にて2分を1サイクル;95℃にて15分を1サイクル;ならびに95℃にて15秒、57℃にて1分、および72℃にて45秒を40サイクル。β−アクチンフォワードプライマーについての配列は、TCTTTGCAGCCACATTCCCGであり、リバースプライマーは、GGCTTGCGGGTGTTAAAAGCである。プロジェリン/ラミンAを増幅するためのフォワードプライマーの配列は、GCAACAAGTCCAATGAGGACCAである。プロジェリン特異的リバースプライマーおよびラミンA特異的リバースプライマーについて、末位から2番目の塩基において変異を導入して、特異性を増大させることによって、増幅困難な変異系戦略により設計した。プロジェリン特異的プライマー配列は、CATGATGCTGCAGTTCTGGGGGCTCTGGACであり、ラミンAについての特異的プライマー配列は、CATGATGCTGCAGTTCTGGGGGCTCTGGATである。実験の結果を、図4において記載する。
LMNAを標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処理の後のHGPS細胞のSDS−PAGEおよびウエスタンブロッティング分析
SDS−PAGEおよびウエスタンブロッティング分析:処理された細胞を集め、PBS中で2回すすぎ、次いでLaemmli SDS−PAGEローディングバッファー中で溶解した。試料を95℃にて15分間加熱し、次いで10%SDS−PAGEゲル上にロードした。ウエスタンブロット分析に関して、タンパク質を、ニトロセルロース膜上に移した。膜を5%ミルク/TBSTで4℃にて一晩ブロックし、4%BSA/TBSTに希釈した一次抗体と共に室温にて1〜3時間インキュベートした。TBSTで洗浄した後、膜を1%ミルク/TBSTに1:5000で希釈した二次抗体中で室温にて1時間インキュベートした。化学発光は、ECLウエスタンブロッティング検出キット(Pierce)で検出した。使用した一次抗体は、マウスモノクローナル抗ラミンA/C(MAB3211、Chemicon)、ウサギポリクローナル抗プロジェリン(カスタムペプチド抗体、Yenzm)および西洋ワサビペルオキシダーゼ(HRP)結合体化抗アクチン(Sigma)を含む。実験の結果を、図5において記載する。オリゴヌクレオチド699(配列番号4)は、これがLMNAのエキソン11潜在的スプライス部位から取り出され、LMNAのエキソン11潜在的スプライス部位と重複しないにも関わらず、プロジェリンの下方調節およびラミンAの上方調節を起こした。
Claims (21)
- 被験体においてハッチンソン−ギルフォード早老症候群を処置するのに使用するための、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物であって、前記組成物は、ハッチンソン−ギルフォード早老症候群の処置を必要とする被験体に投与されることを特徴とし、前記オリゴヌクレオチドは、ヒトLMNAプレmRNAの異常なスプライシングをモジュレートし、前記オリゴヌクレオチドは、モルホリノサブユニット、および1つのサブユニットのモルホリノ窒素と隣接するサブユニットの5’環外炭素とを接合するリン含有サブユニット間連結から構成され、かつ以下:
(i)実質的に荷電していない、ヌクレアーゼ耐性骨格を有し、
(ii)哺乳動物宿主細胞による取込みが可能であり、
(iii)25〜40塩基を含有し、かつ
(iv)配列番号4、5、10、11、13、14および16のいずれか1つを含む標的化配列を有し、
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、リンカー部分を介して細胞透過性ペプチドに共有結合的に付着しており、前記リンカー部分は、グリシン、システイン、プロリン、6−アミノヘキサン酸(Ahx)、β−アラニン(B)およびAhx−Bから選択され、前記細胞透過性ペプチドは、配列番号39〜54から選択される、組成物。 - 前記オリゴヌクレオチド中の前記モルホリノサブユニットが、下記の構造:
に従ってリン含有サブユニット間連結によって接合しており、
式中、Zは、SまたはOであり、
X=NR1R2またはOR6であり、
Y1=OまたはNR7であり、
Pjはプリンまたはピリミジン塩基対合部分であり、そして
それぞれの前記連結は、以下:
(a)荷電していない連結(a)であって、ここで、R1、R2、R6、およびR7のそれぞれは、水素および低級アルキルから独立に選択される、荷電していない連結(a);
(b1)カチオン性連結(b1)であって、ここで、X=NR1R2であり、Y1=Oであり、NR1R2は、R1R2=−CHRCHRN(R3)(R4)CHRCHR−であるように、任意選択で置換されているピペラジノ基を表し、
各R4は、H、CH3であるかまたは存在せず、かつ
R3は、H、低級アルキル、C(=NH)NH2、Z−L−NHC(=NH)NH2、および[C(O)CHR’NH]mHから選択され、ここで、Zは、カルボニル(C(O))または直接結合であり、Lは、アルキル、アルコキシ、およびアルキルアミノから選択される結合を有する長さが18原子までの任意選択のリンカーであり、R’は、天然アミノ酸またはその1もしくは2炭素ホモログの側鎖であり、かつmは、1〜6である、カチオン性連結(b1);
(b2)カチオン性連結(b2)であって、ここで、X=NR1R2であり、Y1=Oであり、R1=HまたはCH3であり、かつR2=LNR3R4R5であり、ここで、L、R3、およびR4は、上記のように定義され、かつR5は、H、低級アルキル、または低級(アルコキシ)アルキルである、カチオン性連結(b2);ならびに
(b3)カチオン性連結(b3)であって、ここで、Y1=NR7であり、X=OR6であり、かつR7=LNR3R4R5であり、ここで、L、R3、およびR4およびR5は、上記のように定義され、かつR6は、Hまたは低級アルキルである、カチオン性連結(b3);
から選択され、
少なくとも1つの前記連結は、カチオン性連結(b1)、カチオン性連結(b2)、およびカチオン性連結(b3)から選択される、請求項1に記載の組成物。 - (i)タイプ(a)の連結におけるR1およびR2のそれぞれが、メチルである;
(ii)少なくとも1つの連結が、タイプ(b1)のものであり、各Rが、Hであり、R4が、H、CH3、または電子対であり、かつR3が、H、CH3、C(=NH)NH2、およびC(O)−L−NHC(=NH)NH2から選択される;
(iii)少なくとも1つの連結が、タイプ(b1)のものであり、各Rが、Hであり、R4が、電子対であり、かつR3が、C(=NH)NH2およびC(O)−L−NHC(=NH)NH2から選択される;
(iv)少なくとも1つの連結が、タイプ(b1)のものであり、各Rが、Hであり、R4が、電子対であり、かつR3が、C(=NH)NH2およびC(O)−L−NHC(=NH)NH2から選択され、そして任意選択で、R3が、C(O)−L−NHC(NH)NH2であり、Lが、構造−(CH2)n−を有する炭化水素であり、nが、1〜12である;または
(v)少なくとも1つの連結が、タイプ(b1)のものであり、各Rが、Hであり、かつR3およびR4のそれぞれが独立に、HまたはCH3である、請求項2に記載の組成物。 - 前記細胞透過性ペプチドが、前記リンカー部分を介してそのC末端において前記オリゴヌクレオチドの5’端または3’端に付着している、請求項1から3のいずれか一項に記載の組成物。
- 被験体においてハッチンソン−ギルフォード早老症候群を処置するのに使用するための、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記医薬組成物は、ハッチンソン−ギルフォード早老症候群の処置を必要とする被験体に投与されることを特徴とし、前記オリゴヌクレオチドは、ヒトLMNAプレmRNAの異常なスプライシングをモジュレートし、前記オリゴヌクレオチドは、骨格を含み、前記骨格は、サブユニット間連結によって接合されているモルホリノ環構造の配列を含み、前記サブユニット間連結は、1つのモルホリノ環構造の3’端と隣接するモルホリノ環構造の5’端とを接合し、各モルホリノ環構造は、前記オリゴヌクレオチドが、配列番号4、5、10、11、13、14および16のいずれか1つを含む標的化配列を含む標的核酸に配列特異的様式で結合することができるように、塩基対合部分に結合しており、前記サブユニット間連結は、以下の一般構造(I):
またはその塩もしくは異性体を有し、前記サブユニット間連結(I)のそれぞれは、独立に、連結(A)または連結(B)であり、
ここで連結(A)について:
Wは、それぞれの出現において独立に、SまたはOであり、
Xは、それぞれの出現において独立に、−N(CH3)2、−NR1R2、−OR3または、
であり、
Yは、それぞれの出現において独立に、Oまたは−NR2であり、
R1は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
R2は、それぞれの出現において独立に、水素または−LNR4R5R7であり、
R3は、それぞれの出現において独立に、水素またはC1〜C6アルキルであり、
R4は、それぞれの出現において独立に、水素、メチル、−C(=NH)NH2、−Z−L−NHC(=NH)NH2または−[C(O)CHR’NH]mHであり、ここで、Zは、カルボニル(C(O))または直接結合であり、R’は、天然アミノ酸またはその1もしくは2炭素ホモログの側鎖であり、かつmは、1〜6であり、
R5は、それぞれの出現において独立に、水素、メチルまたは電子対であり、
R6は、それぞれの出現において独立に、水素またはメチルであり、
R7は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C6アルキルまたはC1〜C6アルコキシアルキルであり、
Lは、アルキル、アルコキシまたはアルキルアミノ基、またはこれらの組合せを含む長さが18原子までの任意選択のリンカーであり、そして
連結(B)について:
Wは、それぞれの出現において独立に、SまたはOであり、
Xは、それぞれの出現において独立に、−NR8R9または−OR3であり、
Yは、それぞれの出現において独立に、Oまたは−NR10であり、あるいは
WおよびYは、それぞれOであり、
R8は、それぞれの出現において独立に、水素またはC2〜C12アルキルであり、
R9は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C12アルキル、C1〜C12アラルキルまたはアリールであり、
R10は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C12アルキルまたは−LNR4R5R7であり、
ここで、R8およびR9は接合して、5〜18員の単環式または二環式複素環を形成し得るか、あるいはR8、R9またはR3はR10と接合して、5〜7員の複素環を形成し得、そしてXが4−ピペラジノであるとき、Xは、下記の構造(III):
を有し、式中、
R11は、それぞれの出現において独立に、C2〜C12アルキル、C1〜C12アミノアルキル、C1〜C12アルキルカルボニル、アリール、ヘテロアリールまたはヘテロシクリルであり、かつ
Rは、それぞれの出現において独立に、電子対、水素またはC1〜C12アルキルであり、かつ
R12は、それぞれの出現において独立に、水素、C1〜C12アルキル、C1〜C12アミノアルキル、−NH2、−NR13R14、−NR13R14R15、C1〜C12アルキルカルボニル、オキソ、−CN、トリフルオロメチル、アミジル、アミジニル、アミジニルアルキル、アミジニルアルキルカルボニルグアニジニル、グアニジニルアルキル、グアニジニルアルキルカルボニル、コレート、デオキシコレート、アリール、ヘテロアリール、複素環、−SR13またはC1〜C12アルコキシであり、ここで、R13、R14およびR15は、それぞれの出現において独立に、C1〜C12アルキルであり、そして
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、リンカー部分を介して細胞透過性ペプチドに共有結合的に付着しており、前記リンカー部分は、グリシン、システイン、プロリン、6−アミノヘキサン酸(Ahx)、β−アラニン(B)およびAhx−Bから選択され、前記細胞透過性ペプチドは、配列番号39〜54から選択される、医薬組成物。 - 前記標的化配列が、配列番号4、5、10、11、13、14および16のいずれか1つからなる、請求項1または5に記載の医薬組成物。
- 前記標的化配列が、配列番号4からなる、請求項6に記載の医薬組成物。
- 前記標的化配列が、配列番号5からなる、請求項6に記載の医薬組成物。
- 前記標的化配列が、配列番号10からなる、請求項6に記載の医薬組成物。
- 前記標的化配列が、配列番号11からなる、請求項6に記載の医薬組成物。
- 前記標的化配列が、配列番号13からなる、請求項6に記載の医薬組成物。
- 前記標的化配列が、配列番号14からなる、請求項6に記載の医薬組成物。
- 前記標的化配列が、配列番号16からなる、請求項6に記載の医薬組成物。
- 被験体においてハッチンソン−ギルフォード早老症候群を処置するのに使用するための、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含む医薬組成物であって、前記組成物は、ハッチンソン−ギルフォード早老症候群の処置を必要とする被験体に投与されることを特徴とし、前記オリゴヌクレオチドは、ヒトLMNAプレmRNAの異常なスプライシングをモジュレートし、前記オリゴヌクレオチドは、
式:
の化合物またはその薬学的に許容される塩であって、式中:
Rは、リンカー部分を介して付着した細胞透過性ペプチドであり、前記リンカー部分は、グリシン、システイン、プロリン、6−アミノヘキサン酸(Ahx)、β−アラニン(B)およびAhx−Bから選択され、前記細胞透過性ペプチドは、配列番号39〜54から選択され、
各Pjは、プリンまたはピリミジン塩基対合部分であり、一緒になって標的化配列を形成し、前記標的化配列は、
a)配列番号4(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)、ここでXは23である、
b)配列番号5(GCTCCTGAGCCGCTGGCAGATGCCT)、ここでXは23である、
c)配列番号10(AGATGGGTCCACCCACCTGGGCTCC)、ここでXは23である、
d)配列番号11(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)、ここでXは23である、
e)配列番号13(AAGAGCCAGAGGAGATGGGTCCACC)、ここでXは23である、
f)配列番号14(CAGAAGAGCCAGAGGAGATGGGTCC)、ここでXは23である、および
g)配列番号16(ACTGGAGGCAGAAGAGCCAGAGGAG)、ここでXは23である、
から選択される、医薬組成物。 - 前記標的化配列が配列番号4(CTGAGCCGCTGGCAGATGCCTTGTC)であり、Xが23である、請求項14に記載の医薬組成物。
- 前記標的化配列が配列番号5(GCTCCTGAGCCGCTGGCAGATGCCT)であり、Xが23である、請求項14に記載の医薬組成物。
- 前記標的化配列が配列番号10(AGATGGGTCCACCCACCTGGGCTCC)であり、Xが23である、請求項14に記載の医薬組成物。
- 前記標的化配列が配列番号11(GAGGAGATGGGTCCACCCACCTGGG)であり、Xが23である、請求項14に記載の医薬組成物。
- 前記標的化配列が配列番号13(AAGAGCCAGAGGAGATGGGTCCACC)であり、Xが23である、請求項14に記載の医薬組成物。
- 前記標的化配列が配列番号14(CAGAAGAGCCAGAGGAGATGGGTCC)であり、Xが23である、請求項14に記載の医薬組成物。
- 前記標的化配列が配列番号16(ACTGGAGGCAGAAGAGCCAGAGGAG)であり、Xが23である、請求項14に記載の医薬組成物。
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