TR201809173T4 - İnsan LMNA'sını hedef alan oligonükleotid analogları. - Google Patents

İnsan LMNA'sını hedef alan oligonükleotid analogları. Download PDF

Info

Publication number
TR201809173T4
TR201809173T4 TR2018/09173T TR201809173T TR201809173T4 TR 201809173 T4 TR201809173 T4 TR 201809173T4 TR 2018/09173 T TR2018/09173 T TR 2018/09173T TR 201809173 T TR201809173 T TR 201809173T TR 201809173 T4 TR201809173 T4 TR 201809173T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
alkyl
occurrence
independently
oligonucleotide
link
Prior art date
Application number
TR2018/09173T
Other languages
English (en)
Inventor
Kole Ryszard
Richard Bestwick Keith
Original Assignee
Sarepta Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sarepta Therapeutics Inc filed Critical Sarepta Therapeutics Inc
Publication of TR201809173T4 publication Critical patent/TR201809173T4/tr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
    • A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • A61K47/6455—Polycationic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. for complexing nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/11—Antisense
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/31—Chemical structure of the backbone
    • C12N2310/314—Phosphoramidates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/323—Chemical structure of the sugar modified ring structure
    • C12N2310/3233—Morpholino-type ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/35—Nature of the modification
    • C12N2310/351—Conjugate
    • C12N2310/3513—Protein; Peptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2320/00—Applications; Uses
    • C12N2320/30—Special therapeutic applications
    • C12N2320/33—Alteration of splicing

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Progerini kodlayan bir veya birden fazla aberan bir şekilde uçları-birleştirilmiş LMNA mRNA'sı izoformlarının ekspresyonunu azaltmak için LMNA-hedefli antisens oligonükleotidler sağlanır.

Description

TARIFNAME INSAN LMNA'SINI HEDEF ALAN OLIGONÜKLEOTID ANALOGLARI ALT-YAPI Teknik Saha Mevcut bulus genel olarak, insan Iamin A hedefli antisens bilesikler ile ilgilidir.
Ilgili Teknigin Açiklamasi Hutchinson-Gilford progeria sendromu (HGPS), prematüre arterioskleroz ve vasküler düz kas hücrelerinin (SMC'Ierin) dejenerasyonu ile karakterize edilen bir nadir genetik bozukluktur. HGPS etkilenmis çocuklarda kendisini en göze çarpan sekilde hizlandirilmis, prematüre yaslanma olarak gösterir. HGPS'II çocuklar, progresif semptomlara, örnegin, büyüme retardasyonuna, alopesiye, subkütan yag kaybina ve kemik anormalliklerine, sahiptir. Ortalama yasam-süresi, en yaygin ölüm nedeninin miyokard enfarktüs veya inme olmasi ile 12 yildir. Çogu HGPS olgusu, Iamin A (LMNA) geninde, progerinin, Iamin A'nin bir kirpilmis uç- birlestirme mutantinin, üretilmesi ile sonuçlanan, bir tek-nokta mutasyonundan kaynaklanir. Tek-nokta mutasyonu, Iamiri A (LMNA) geninin ekzon 11'inde bir de novo sessiz sübstitüsyondur (1824C>T, Gly608GIy). Sübstitüsyon, 50 amino asitlik bir iç silinme tasiyan bir dominant negatif mutant Iamin A proteininin üretilmesine yol açan bir kriptik uç-birlestirme donör yerini aktive eder. Progerin olarak adlandirilan mutant protein, nükleer membran üzerinde birikir, karakteristik nükleer çikintiya neden olur ((Scaffidi and Misteli 2005; Cao, Blair et al., 2011)).
Aberan uç-birlestirmenin fosforodiamidat morfolino oligonükleotidleri (PMO'Iar) veya daha spesifik olarak, uç-birIestirme-degistirme oligonükleotidleri (SSO'Iar) kullanilarak düzeltilebilecegi bilinir. SSO'Iar, yerlerde veya yakinlarinda hibridize etme, böylece hücresel uç-birlestirme mekanizmasi tarafindan taninmayi önleme, ile aberan uç- birlestirme yerlerini bloke eder. Tercih edilen SSO'Iar, nükleazlara dirençlidir ve elde edilen çift-sarmalli yapi, RNaz H tarafindan RNA klevaji olasiligini elimine eder.
SSO'Iarin, talasemi ve Duchenne müsküler distroti için hem in vitro hem de in vivo uç- birlestirme paternini etkili bir sekilde onardigi gösterilmistir (Kinali, ArechavaIa-Gomeza et al., 2009; Svasti, Suwanmanee et al., 2009). LMNA'nin HGPS ile iliskili aberan uç- birlestirmesinin, hem hücre kültüründe (Scaffidi and Misteli, 2005) hem de bir ilgili hayvan modelinde (Osorio, Navarro et al., 2011) aktive edilmis kriptik uç-birlestirme yerine hedeflenmis modifiye edilmis antisens oligonükleotidler kullanilarak aberan uç- birlestirme olayinin düzeltilmesi ile azaltildigi gösterilmistir.
LMNA'nin HGPS'deki rolü göz önüne alindiginda, progerinin ekspresyonunu elimine etmek için LMNA pre-mRNA'sinin uç-birlestirmesini modüle eden oligonükleotidler gereklidir.
Fernando G. Osorio et al., "Splicing-Directed Therapy in a New Mouse Model of Human Accelerated Aging“, Science Translational Medicine, American Association for progeria sendromu (HGPS) baglaminda, patojenik Lmna uç-birlestirmesini önleyen, progerinin birikmesini ve bunun iliskili nükleer kusurlarini azaltan, bir antisens morfolino-bazli terapi ile ilgilidir. modüle etmek için bilesikleri, bilesimleri ve yöntemleri açiklar.
Paola Scaffidi et al., "Reversal of the oellular phenotype in the premature aging disease Hutchinson-Gilford progeria syndrome", Nature Medicine, vol. 11, no. 43, pages 440- 445, HGPS hücrelerinde endojen Iamin A transkriptinde aberan uç-birlestirmenin düzeltilmesi ile ilgilidir.
Loren G. Fong et al., "Activating the synthesis of progerin, the mutant prelamin A in Hutchinson-Gilford progeria syndrome, with antisens oligonucleotides", Human yerinden asagi akis ekzon 11 dizilerine karsi antisens oligonükleotidlerin hem dogal sus hem de HGPS fibroblastlarinda uç-birlestirmeyi dönüsümlü olarak degistirdigini böylece progerinin sentezini arttirdigini, gösterir.
KISA AÇIKLAMA Mevcut bulus ekli istemlerde izah edilir.
Bu dogrultuda, mevcut bulus anormal bir sekilde uçlari-birlestirilmis LMNA mRNA'sinin ekspresyonunu azaltmak için bir antisens oligonükleotid ile ilgilidir, oligonükleotid bir büyük ölçüde yüksüz omurgaya sahiptir ve morfolino alt-birimlerinden ve bir alt-birimin bir morfolino nitrojenini bir bitisik alt-birimin bir 5'-ekzosiklik karbonuna birlestiren fosfor- içeren alt-birim-arasi baglantilardan olusturulur, -40 baz içerir ve burada antisens oligonükleotid bir hücreye-nüfuz etme peptidine ve baglayici kisma kovalent olarak tutturulur, burada baglayici kisim glisin, sistein, prolin, 6- aminohekzanoik asit (Ahx), ß-alanin (B) ve Ahx-B arasindan seçilir ve hücreye-nüfuz etme peptidi SEQ ID NO.'Iari: 39-54 araligindan seçilir.
Mevcut bulus ayrica bir antisens oligonükleotid ile de ilgilidir, burada oligonükleotid anormal bir sekilde uçlari-birlestirilmis LMNA mRNA'sinin ekspresyonunu azaltir, oligonükleotid bir omurga içerir, omurga, alt-birim-arasi baglantilar ile birlestirilmis bir morfolino halka yapisinin bir dizisini içerir, alt-birim-arasi baglantilar, bir morfolino halka yapisinin 3'-ucunu bir bitisik morfolino halka yapisinin bir 5'-ucuna birlestirir, burada her bir morfolino halka yapisi, bir baz-eslesme kismina baglanir, böylece oligonükleotid, bir hedef nükleik aside bir dizi-spesifik sekilde baglanabilir; SEQ ID NO.'Iari: 4, 5, 10, 11, 13, 14 ve 16'nin herhangi birini içeren bir hedefleme dizisini içerir, burada alt-birim- arasi baglantilar asagidaki genel yapiya (I) veya bunun bir tuzuna veya izomerine sahiptir: ve burada alt-birim-arasi baglantilarin (I) her biri bagimsiz bir sekilde (A) baglantisidir veya (B) baglantisidir: burada (A) baglantisi için: W, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde S'dir veya O'dur; X, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde -N(CH3)2'dir, -NR1R2'dir, - OR3'tür Y, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde O'dur veya -NRZ'dir, R1, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya metildir; R2, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya - LNR4R5R7'dir; R3, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya 01-05 alkildir; R4, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, metildir, -C(=NH)NH2, -Z-L-NHC(=NH)NH2 veya -[C(O)CHR'NH]mH'dir, burada 2, karbonildir (C(O)) veya bir dogrudan bagdir, R', bir dogal olusumlu amino asidin bir yan zinciridir veya bunun bir- veya iki-karbonlu homologudur ve m, 1 ila 6 araligindadir; R5, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, metildir veya bir elektron çiftidir; R5, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya metildir; R7, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir Ci-Cs alkildir veya Ci-Cs alkoksialkildir; L, alkil, alkoksi veya alkilamino gruplarini veya bunlarin kombinasyonlarini içeren en fazla 18 atom uzunlugundaki bir opsiyonel baglayicidir; ve burada (B) baglantisi için: W, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde S'dir veya O'dur; X, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde -NRBRg'dur veya -OR3'tür; ve Y, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde O'dur veya -NR10'dur veya R8, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya C2-C12 alkildir; aralkildir veya arildir; Rio, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, 01-012 alkildir veya - LNR4R5R7'dir; burada R8 ve R9, bir 5-18 üyeli mono veya bisiklik heterosiklik olusturmak için birlesebilir veya R5, R9 veya R3, bir 5-7 üyeli heterosiklik olusturmak için R10 ile birlesebilir ve burada X, 4-piparazin0 oldugunda, X, asagidaki yapiya (III) sahiptir: aminoalkildir, 01-012 alkilkarbonildir, arildir, heteroarildir veya heterosiklildiri ve R, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde bir elektron çiftidir, hidrojendir veya 01-012 alkildir; ve triflorometildir, amidildir, amidinildir, amidinilalkildir, amidinilalkilkarbonil guanidinildir, guanidinilalkildir, guanidinilalkilkarbonildir, kolattir, deoksikolattir, arildir, heteroarildir, heterosikliktir, -SR13 veya 01-012 alkoksidir, burada R”, R14 ve R15, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde 01-012 alkildir; burada alt-birim-arasi baglantilarin en az biri (B) baglantisidir veya burada, mevcut oldugunda, her bir (B) baglantisi her bir bulunusunda ayni yapiya sahiptir; ve burada antisens oligonükleotid bir hücreye-nüfuz etme peptidine ve baglayici kisma kovalent olarak tutturulur, burada baglayici kisim glisin, sistein, prolin, 6- aminohekzanoik asit (Ahx), ß-alanin (B) ve Ahx-B arasindan seçilir ve hücreye- nüfuz etme peptidi SEQ ID NO.'Iari: 39-54 araligindan seçilir. Bulusun uygulamalari bagimli istemlerde ve asagida izah edilir.
Mevcut bulusun baglaminda, LMNA pre-mRNA'sinin aberan uç-birlestirmesini modüle eden bilesimler açiklanir. Örnegin, mevcut bulusun baglaminda, burada bir insan LMNA pre-mRNA'sinin aberan uç-birlestirmesini modüle etmede kullanim için antisens oligonükleotidlerin saglandigi açiklanir, bu oligonükleotidler morfolino alt-birimlerinden ve bir alt-birimin bir morfolino nitrojenini bir bitisik alt-birimin bir 5'-ekzosiklik karbonuna birlestiren fosfor-içeren alt-birim-arasi baglantilardan olusur ve: (i) bir büyük ölçüde yüksüz, nükleaz dirençli omurgaya sahiptir; (ii) memeli konak hücreleri tarafindan alinabilir; (iii) yaklasik 12-40 araliginda nükleotid bazi içerir; ve (iv) bir insan LMNA pre-mRNA'sinin ekzon 10'una, intron 10'una, ekzon 11'ine veya bunlarin kombinasyonlarina komplementer bitisik en az yaklasik 12 alt-birimlik bir hedefleme dizisine sahiptir.
Daha spesifik uygulamalarda, oligonükleotidin hedefleme dizisi, bir insan LMNA pre- mRNA'sinin ekzon 11 kriptik uç-birlestirme yerinin yukari akis bazlarina komplementerdir. Diger spesifik uygulamalarda, hedefleme dizisi, bir insan LMNA pre- mRNA'sinin ekzon 11 kriptik uç-birlestirme yerinin asagi akis bazlarina komplementerdir. Daha baska spesifik uygulamalarda, hedefleme dizisi, insan LMNA pre-mRNA'sinin ekzon 11 kriptik uç-birlestirme yeri ile kesismez.
Ilave uygulamalarda, bulusun yöntemlerinde kullanilan oligonükleotid içindeki hedefleme dizisi, 1824C>T mutasyonu ile kesismez.
Bir baska spesifik uygulamada, hedefleme dizisinin en 3'-bazi, LMNA ekzon 11'i içinde, bir insan LMNA pre-mRNA'sinin ekzon 11 kriptik uç-birlestirme yerinin asagi akis yaklasik 1-30 bazlari olan, bir baza komplementerdir.
Bir baska spesifik uygulamada, hedefleme dizisinin en 3'-bazi, LMNA ekzon 11'i içinde, bir insan LMNA pre-mRNA'sinin ekzon 11 kriptik uç-birlestirme yerinin asagi akis yaklasik 1-30 bazlari olan, bir baza komplementerdir.
Daha bir baska spesifik uygulamada, hedefleme dizisinin en 3'-bazi, LMNA ekzon 11'i içinde, bir insan LMNA pre-mRNA'sinin ekzon 11 kriptik uç-birlestirme yerinin yukari akis yaklasik 10-40 bazlari olan, bir baza komplementerdir.
Burada ayrica mevcut bulusun baglaminda, hedefleme dizisinin en 3'-bazinin, LMNA intron 10'u içinde, LMNA ekzon 11'inin yukari akis yaklasik 1-60 bazlari olan, bir baza komplementer oldugu da açiklanir.
Burada ayrica mevcut bulusun baglaminda, hedefleme dizisinin en 3'-bazinin, LMNA ekzon 10'u içinde, LMNA intron 10'unun yukari akis yaklasik 1-30 bazlari olan, bir baza komplementer oldugu da açiklanir.
Daha bir baska spesifik uygulamada, hedefleme dizisi, LMNA pre-mRNA'sinin ekzonlari 10'un ve 11'in uç-birlestirme donörünün (SD) veya uç-birlestirme akseptörünün (SA) uç-birlestirme baglanti-yeri ile kesisen bir bölgeye komplementerdir ve ön-islenmis mRNA'nin bir ekzonik bölgesinin bir kismina ve bir intronik bölgesinin bir kismina komplementerdir.
Bulusun daha da spesifik uygulamalarinda, oligonükleotidin hedefleme dizisi, SEO ID NO.'Iari: 3-34'ün herhangi birinin bitisik en az 12 bazina komplementerdir veya SEO ID NO.'Iari: 3-34'ün herhangi birine en az %90 özdestir veya SEO lD NO.'Iari: 3-34'ün herhangi birini içerir veya SEO ID NO.'Iari: 3-34'ün herhangi birinden olusur.
Bulusun daha da spesifik uygulamalarinda, oligonükleotidin hedefleme dizisi, SEO ID NO.'Iari: 3-7'nin veya 14-16'nin herhangi birinin bitisik en az 12 bazina komplementerdir veya SEO ID NO.'Iari: 3-7'nin veya 14-16'nin herhangi birine en az SEQ ID NO.'Iari: 3-7'nin veya 14-16'nin herhangi birinden olusur.
Bulusun daha da spesifik uygulamalarinda, oligonükleotidin hedefleme dizisi, SEO ID NO: 4'ün bitisik en az 12 bazina komplementerdir ve SEO ID NO: 4'e en az %90 özdestir veya SEO ID NO: 4'ü içerir veya SEO ID NO: 4'ten olusur.
Bulusun diger daha spesifik uygulamalarinda, oligonükleotidin hedefleme dizisi, SEO özdestir veya SEQ ID NO: 11'i içerir veya SEQ ID NO: 11'den olusur.
Diger uygulamalarda, oligonükleotid, bir fosforodiamidat morfolino oligonükleotididir (PMO) veya bir veya birden fazla piperazin-içeren alt-birim-arasi baglanti içeren bir PMO'dur (PMOp/us) veya bir PMO-X oligonükleotididir.
Bulusun belirli uygulamalarina göre, emsal morfolino alt-birimleri, asagidaki yapiya uygun sekilde, fosforodiamidat baglantilari ile birlestirilir: burada 2, S'dir veya O'dur, X = NR1R2'dir veya ORB'dir, Y = O'dur veya NR7'dir, ve söz konusu her bir baglanti asagidakilerden seçilir: (a) yüksüz baglanti (a), burada R“in, R2'nin, Rö'nin ve R7'nin her biri bagimsiz bir sekilde hidrojen ve düsük alkil arasindan seçilir; (b1) katyonik baglanti (b1), burada X = NR1R2'dir ve Y: O'dur ve NR1R2, bir opsiyonel sübstüte edilmis piperazino grubunu temsil eder, böylece R1R2 = - CHRCHRN(R3)(R4)CHRCHR-'dir, burada her bir R4, H'dir, CHa'tür veya yoktur ve R3, H, düsük alkil, C(=NH)NH2, Z-L-NHC(=NH)NH2 ve [C(O)CHR'NH]mH arasindan seçilir, burada Z, karbonil (C(O))'dur veya bir dogrudan bagdir, L, alkil, alkoksi ve alkilamino arasindan seçilen baglara sahip olan en fazla 18 atom uzunlugundaki bir opsiyonel baglayicidir, R', bir dogal olusumlu amino asidin bir yan zinciridir veya bunun bir- veya iki-karbonlu homologudur ve m, 1 ila 6 araligindadir; (b2) katyonik baglanti (b2), burada X = NR1R2'dir ve Y = O'dur, R1 = H'dir veya CHg'tür ve R2 = LNR3R4R5'tir, burada L, R3 ve R4, yukarida oldugu sekilde tanimlanir ve R5, H'dir, düsük alkildir veya düsük (alkoksi)alkildir; ve (b3) katyonik baglanti (b3), burada Y = NR7'dir ve X = ORe'dir ve R7 = LNR3R4R5'tir, burada L, R3 ve R4 ve R5, yukarida oldugu sekilde tanimlanir ve R6, H'dir veya düsük alkildir; ve en az bir söz konusu baglanti, katyonik baglantilar (b1), (b2) ve (b3) arasindan seçilir.
Yukaridaki yapinin daha spesifik bir uygulamasinda, Rl'in ve Rz'nin her biri, (a) tipi baglantilarinda, metildir.
Yukaridaki yapinin bir baska spesifik uygulamasinda, en az bir baglanti, (b1) tipindedir, burada her bir R, H'dir, R4, H'dir, CH3'IÜI' veya bir elektron çiftidir ve R3, H, CH3, C(=NH)NH2 ve C(O)-L-NHC(=NH)NH2 arasindan seçilir.
Yukaridaki yapinin bir baska spesifik uygulamasinda, en az bir baglanti, (b1) tipindedir, burada her bir R, H'dir, R4, bir elektron çiftidir ve R3, C(=NH)NH2 ve C(O)-L- Yukaridaki yapinin daha bir baska spesifik uygulamasinda, en az bir baglanti, (b1) tipindedir, burada her bir R, H'dir, R4, bir elektron çiftidir ve R3, C(=NH)NH2 ve C(O)-L- Yukaridaki yapinin daha da bir baska spesifik uygulamasinda, R3, C(O)-L- NHC(NH)NH2'dir ve L, -(CH2)n- yapisina sahip olan bir hidrokarbondur, burada n, 1 ila 12 araligindadir.
Yukaridaki yapinin bir baska spesifik uygulamasinda, en az bir baglanti, (b1) tipindedir, burada her bir R, H'dir ve R3'ün ve R4'ün her biri bagimsiz bir sekilde H'dir veya CHg'tür.
Bulusun diger uygulamalarinda, antisens oligonükleotid bir hücreye-nüfuz etme peptidine, örnegin, bir arjinin açisindan zengin peptide, kovalent olarak tutturulur. Daha spesifik bir uygulamada, arjinin açisindan zengin peptit, bunun C-ucundan bir- veya iki- amino asitli baglayici vasitasiyla oligonükleotidin 5' ucuna tutturulur. Alternatif olarak, bir baska uygulamada, peptit, bunun C-ucundan bir- veya iki-amino asitli baglayici vasitasiyla oligonükleotidin 3' ucuna tutturulur. Tercih edilen bir uygulamada, hücreye- nüfuz etme peptidi, bir glisin amino asidi vasitasiyla oligonükleotide baglanir.
Bulusun bir ilave uygulamasinda, bir omurga içeren bir oligonükleotid saglanir, omurga, alt-birim-arasi baglantilar ile birlestirilmis bir morfolino halka yapisinin bir dizisini içerir, alt-birim-arasi baglantilar, bir morfolino halka yapisinin 3'-ucunu bir bitisik morfolino halka yapisinin bir 5'-ucuna birlestirir, burada her bir morfolino halka yapisi bir baz- eslesme kiSmina baglanir, böylece oligonükleotid bir hedef nükleik asidi bir dizi-spesifik sekilde baglayabilir; SEQ ID NO.'Iari: 1-34'ün herhangi birinde izah edilen bir dizinin en az 12 bazina komplementer olan veya SEO ID NO.'Iari: 3-34'ün herhangi birini veya birden fazlasini içeren bir hedefleme dizisi içeren bir oligonükleotid saglanir, burada alt- birim-arasi baglantilar asagidaki genel yapiya (I) veya bunun bir tuzuna veya izomerine sahiptir: ve burada alt-birim-arasi baglantilarin (I) her biri bagimsiz bir sekilde (A) baglantisidir veya (B) baglantisidir: burada (A) baglantisi için: W, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde S`dir veya O'dur; X, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde -N(CH3)2'dir, -NR1R2`dir, -ORs'tür Fa6 Fa8 R5 >_< R4/ H (3 Y, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde O'dur veya -NR2'dir, R1, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya metildir; R2, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya -LNR4R5R7'dir; R3, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya Ci-Cs alkildir; R4, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, C1-C5 alkildir, - C(=NH)NH2, -Z-L-NHC(=NH)NH2 veya -[C(O)CHR'NH]mH'dir, burada Z, karbonildir (C(O)) veya bir dogrudan bagdir, R', bir dogal olusumlu amino asidin bir yan zinciridir veya bunun bir- veya iki-karbonlu homologudur ve m, 1 ila 6 araligindadir; R5, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, metildir veya bir elektron çiftidir; R5, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya metildir; R7, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir Ci-CG alkildir veya C1- C5 alkoksialkildir; L, alkil, alkoksi veya alkilamino gruplarini veya bunlarin kombinasyonlarini içeren en fazla 18 atom uzunlugundaki bir opsiyonel baglayicidir; ve burada (B) baglantisi için: W, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde S'dir veya O'dur; X, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde -NRng'dur veya -OR3'tür; ve Y, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde O`dur veya -NR10'dur, R8, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya C2-C12 alkildir; R9, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, Ci-C12 alkildir, Ci-C12 aralkildir veya arildir; Rlo, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, 01-012 alkildir veya - LNR4R5R7'dir; burada R8 ve R9, bir 5-18 üyeli mono veya bisiklik heterosiklik olusturmak için birlesebilir veya R8, R9 veya R3, bir 5-7 üyeli heterosiklik olusturmak için R10 ile birlesebilir ve burada X, 4-piparazino oldugunda, X, asagidaki yapiya (III) sahiptir: R11 LJ > aminoalkildir, 01-012 alkilkarbonildir, arildir, heteroarildir veya heterosiklildir; ve R, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde bir elektron çiftidir, hidrojendir veya 01-012 alkildir; ve triflorometildir, amidildir, amidinildir, amidinilalkildir, amidinilalkilkarbonil guanidinildir, guanidinilalkildir, guanidinilalkilkarbonildir, kolattir, deoksikolattir, arildir, heteroarildir, heterosikliktir, -SR13 veya 01-012 alkoksidir, burada R”, R14 ve R15, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde 01-012 alkildir; ve burada alt- birim-arasi baglantilarin en az biri (B) baglantisidir.
Yukaridaki yapinin bazi uygulamalarinda, alt-birim-arasi baglantilarin en az %5'i (B) baglantisidir. Ilgili bir uygulamada, alt-birim-arasi baglantilarin %10 ila %50'si (B) baglantisidir. Bir baska ilgili uygulamada, her bir (B) baglantisi, her bir bulunusunda ayni yapiya sahiptir. Yukaridaki yapinin daha bir baska spesifik uygulamasinda, her bir Y ve her birW, O'dur.
Insan LMNA genindeki ekzon 10'un veya ekzon 11'in bir veya birden fazla bazina komplementer olan ve SEO ID NO.'Iari: 3-34'ün herhangi birinde izah edilen bir diziye komplementer bitisik en az 12 baz içeren bir hedefleme dizisi içeren bir antisens oligonükleotid burada açiklanir.
Bulusun ilave uygulamalari, bir omurga içeren bir antisens oligonükleotid saglar, omurga, (A), (B) tipi alt-birim-arasi baglantilar veya bunlarin kombinasyonlari ile birlestirilmis morfolino halka yapilarinin bir dizisini içerir, burada her bir morfolino halka yapisi bir baz-eslesme kismini destekler, böylece oligonükleotid bilesigi, bir hedef nükleik asidi bir dizi-spesifik sekilde baglayabilir; SEQ ID NO.'Iari: 1-34'ün en az 12 bazina komplementer olan veya SEQ ID NO.'Iari: 3-34'ün herhangi birini veya birden fazlasini içeren bir hedefleme dizisi içeren bir oligonükleotid saglar ve burada oligonükleotid bir 3' ucu, bir 5' ucu içerir ve asagidaki yapiya (XVII) veya bunun bir tuzuna veya izomerine sahiptir ve: ' ucu R'7 R"3 3' ucu burada (A) baglantisi için: W, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde S'dir veya O'dur; X, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde -N(CH3)2'dir, -NRlRZ'dir, -OR3'tür Y, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde O'dur veya -NRz'dir, R1, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya metildir; R2, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya -LNR4R5R7'dir; R3, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya C1-Cs alkildir; R4, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, metildir, -C(=NH)NH2, -Z-L-NHC(=NH)NH2 veya -[C(O)CHR'NH]mH'dir, burada Z, karbonildir (C(O)) veya bir dogrudan bagdir, R', bir dogal olusumlu amino asidin bir yan zinciridir veya bunun bir- veya iki-karbonlu homologudur ve m, 1 ila 6 araligindadir; R5, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, metildir veya bir elektron çiftidir; R5, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya metildir; R7, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir Ci-Ce alkildir veya C1- 05 alkoksialkildir; L, alkil, alkoksi veya alkilamino gruplarini veya bunlarin kombinasyonlarini içeren en fazla 18 atom uzunlugundaki bir opsiyonel baglayicidir; ve burada (B) baglantisi için: W, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde S'dir veya O'dur; X, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde -NRBRg'dur veya -OR3'tür; ve Y, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde O'dur veya -NR10'dur, R8, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya C2-C12 alkildir; R9, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, C1-C12 alkildir, C1-C12 aralkildir veya arildir; R”, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, C1-C12 alkildir veya - LNR4R5R7'dir; burada R8 ve R9, bir 5-18 üyeli mono veya bisiklik heterosiklik olusturmak için birlesebilir veya R8, R9 veya R3, bir 5-7 üyeli heterosiklik olusturmak için R10 ile birlesebilir ve burada X, 4-piparazino oldugunda, X, asagidaki yapiya (III) sahiptir: Rio, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde C2-012 alkildir, 01-012 aminoalkildir, 01-012 alkilkarbonildir, arildir, heteroarildir veya heterosiklildir; ve R”, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde bir elektron çiftidir, hidrojendir veya C1-C12 alkildir; R”, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, Ci-C12 alkildir, Ci-Ci2 triflorometildir, amidildir, amidinildir, amidinilalkildir, amidinilalkilkarbonildir, guanidinildir, guanidinilalkildir, guanidinilalkilkarbonildir, kolattir, deoksikolattir, arildir, heteroarildir, heterosikliktir, -SR13 veya C1-C12 alkoksidir, burada R”, R14 ve R15, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde C1-C12 alkildir; ve R”, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde yoktur, hidrojendir veya 01-06 alkildir; R18 ve R19, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde yoktur, hidrojendir, bir hücreye-nüfuz etme peptididir, bir dogal veya dogal-olmayan amino asittir, 02- C30 alkilkarbonildir, -C(=O)OR21'dir veya RZO'dir; R20 is, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde guanidinildir, heterosiklildir, C1- Cso alkildir, C3-Cs sikloalkildir; Ce-Cao arildir, 07-030 aralkildir, Ca-Cao alkilkarbonildir, Cs-Cg sikloalkilkarbonildir, Cs-Cs sikloalkilalkilkarbonildir, C7-C30 arilkarbonildir, C7-Cao aralkilkarbonildir, 02-030 alkiloksikarbonildir, C3-Cg sikloalkiloksikarbonildir, C7-C30 ariloksikarbonildir, Ca-Cso aralkiloksikarbonildir veya -P(=O)(R22)2'dir; R“, bir veya birden fazla oksijen veya hidroksil kismi veya bunlarin kombinasyonlarini içeren C1-C30 alkildir; her bir R”, bagimsiz bir sekilde 06-012 ariloksidir; B, bir baz-eslesme kismidir; L1, alkil, hidroksil, alkoksi, alkilamino, amid, ester, karbonil, karbamat, fosforodiamidat, fosforoamidat, fosforotiyoat, piperazin ve fosfodiester arasindan seçilen baglar içeren en fazla 18 atom uzunlugundaki bir opsiyonel baglayicidir; x, 0 veya daha büyük olan bir tam sayidir; ve burada R17'nin ve R18'in her ikisinin de bulunmamasi kaydiyla ve R18'in veya R19'un en az biri, Rzo'dir.
Bulusun bu ve diger yönleri asagidaki detayli açiklamaya basvurma üzerine anlasilir olacaktir. Bu amaçla, belirli alt-yapi bilgisini, prosedürleri, bilesikleri ve/veya bilesimleri daha detayli bir sekilde tarif eden çesitli referanslar burada izah edilir.
SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1A, bir fosforodiamidat baglantisi ile bir emsal morfolino oligomer yapisini gösterir; Sekil 18, Sekil 1A'da oldugu sekilde bir morfolino oligomerini gösterir, ancak burada omurga baglantilari bir (piperazino) fosforodiamidat baglantisi formunda Sekil 10, bulusun bir uygulamasina uygun sekilde, bir arjinin açisindan zengin peptidin ve bir antisens oligomerin bir konjugatini gösterir; Sekiller 1D-G, D ile G arasindaki harfler ile gösterilen, emsal morfolino oligonükleotidlerinin tekrar eden alt-birim segmentini gösterir.
Sekil 2, progerinin ve Iamin A/C'nin immünoflüoresans taramasi için sonuçlari gösterir.
Sekil 3, Iamin A'nin ve progerinin Western analizi için sonuçlari gösterir.
Sekil 4, Iamin A'nin ve progerinin RT-qPCR analizi için sonuçlari gösterir.
Sekil 5, lamin A'nin, lamin C'nin ve progerinin Western analizi için sonuçlari gösterir.
DETAYLI AÇIKLAMA Mevcut bulus, burada tarif edildigi sekilde oligonükleotidler ve bunu içeren bilesim ile ilgilidir. Mevcut bulusun baglaminda ayrica, in vitro yöntemler de açiklanir, burada oligonükleotidler, örnegin, LMNA pre-mRNA'sinin uç-birlestirmesini modüle etme ile, mutant LMNA proteini mRNA'sinin ekspresyonunu inhibe eder.
Tanimlar Aksi tanimlanmadikça, burada kullanilan tüm teknik ve bilimsel terimler, bulusun ait oldugu teknikte normal uzmanligi olan kisiler tarafindan yaygin bir sekilde anlasilan ile ayni anlama sahiptir. Burada tarif edilenlere benzer veya es-deger olan herhangi bir yöntemin ve materyalin mevcut bulusun pratiginde veya testlerinde kullanilabilmesine ragmen, tercih edilen yöntemler ve materyaller tarif edilir. Mevcut bulusun amaçlari için, asagidaki terimler asagida tanimlanir. fazlasini (yani, en az birini) ifade etmek için kullanilir. Örnek olarak, "bir eleman", bir eleman veya birden fazla eleman anlamina gelir. kadar çesitlilik gösteren bir nicelik, düzey, deger, sayi, siklik, yüzde, boyut, boy, miktar, agirlik veya uzunluk kastedilir. nükleik asit dizisi kastedilir. Aksine, "kodlamayan dizi" terimi, bir genin polipeptit ürünü için koda katki saglamayan herhangi bir nükleik asit dizisini ifade eder.
Bu spesifikasyon boyunca, baglam aksini gerektirmedikçe, "içermek", "içerir" ve elemanlar grubunun dahil edildigini, ancak herhangi bir baska adimin veya elemanin veya adimlar veya elemanlar grubunun dislanmadigini gösterdigi anlasilacaktir. kastedilir. Böylelikle, "olusan“ ifadesi, listelenen elemanlarin gerektigini veya mecburi oldugunu ve baska elemanlarin bulunamayacagini gösterir. "Esas olarak olusan" ile, ifadeden sonra listelenen herhangi bir elemani içerdigi ve listelenen elemanlar için açiklamada belirtilen aktiviteye veya etkiye müdahale etmeyen veya katki saglamayan diger elemanlar ile sinirli oldugu kastedilir. Böylelikle, "esas olarak olusan" ifadesi, listelenen elemanlarin gerektigini veya mecburi oldugunu, ancak diger elemanlarin opsiyonel oldugunu ve bunlarin listelenen elemanlarin aktivitesini veya etkisini maddesel olarak etkileyip etkilememesine bagli olarak bulunabilecegini veya bulunamayacagini gösterir. polinükleotidi (yani, nükleotidlerin bir dizisini) ifade eder. Örnegin, "A-G-T'i dizisi, "T-C- A" dizisine komplementerdir. Tamamlayicilik, “parsiyel” olabilir, burada nükleik asitlerin' bazlarinin yalnizca bazilari baz eslesme kuralarina göre eslesir. Veya burada "nükleik asitler arasinda "tam" veya "toplam" tamamlayicilik olabilir. Nükleik asit sarmallari arasindaki tamamlayiciligin derecesi, nükleik asit sarmallari arasindaki hibridizasyonun etkinligi ve gücü üzerinde anlamli etkilere sahiptir. Mükemmel tamamlayicilik siklikla arzu edilirken, bazi uygulamalar hedef RNA açisindan bir veya birden fazla, ancak tercihen 6, 5, 4, 3, 2 veya 1 yanlis-eslesme içerebilir. Oligomer içindeki herhangi bir yakin dizi içindeki varyasyonlar genel olarak, içteki varyasyonlara kiyasla tercih edilebilir ve mevcut oldugunda tipik olarak 5' ve/veya 3' ucunun tipik olarak yaklasik 6, , 4, 3, 2 veya 1 nükleotidi içindedir. kullanilir ve katyonik hücreye nüfuz etme peptitlerini ifade eder, ayni zamanda tasima peptitleri, tasiyici peptitler veya peptit iletim alanlari olarak da adlandirilir. Burada gösterildigi üzere, peptitler verilen bir hücre kültürü popülasyonunun hücrelerinin, aralardaki tüm tam sayilar dahil olmak üzere, %30'unda, %40'inda, %50'sinde, kapasitesine sahiptir ve sistemik uygulama üzerine çok sayida dokuda in vivo makro- moleküler translokasyona izin verir. hedef dizi içinde bir nükleik asitzoligomer heterodubleksi olusturmak için, baz-eslesme kisimlarinin bir nükleik asit (tipik olarak bir RNA) içindeki bir hedef diziye Watson-Crick baz eslesmesi ile hibridize olmasina izin veren alt-birim-arasi baglantilar ile baglanmis, bir baz-eslesme kismi tasiyan siklik alt-birimlerin bir dizisini ifade eder. Siklik alt- birimler, riboz veya bir baska pentoz sekerine veya belirli uygulamalarda, bir morfolino grubuna dayanabilir (asagidaki morfolino oligomerlerinin açiklamasina bakiniz). Peptit nükleik asitleri (PNA'Iar), kilitli nükleik asitler (LNA'Iar) ve 2'-O-Metil oligonükleotidler ve teknikte bilinen diger antisens ajanlar da tasarlanir.
Bu tarz bir antisens oligomer, mRNA'nin translasyonunu bloke etmek veya inhibe etmek için veya dogal pre-mRNA uç-birlestirme islemesini inhibe etmek için veya hedeflenmis mRNA'Iarin parçalanmasini indüklemek için tasarlanabilir ve bunun bununla hibridize oldugu bir hedef diziye "yönlendirildigi" veya "karsi hedeflendigi" söylenebilir. Belirli uygulamalarda, hedef dizi, bir mRNA'nin bir AUG baslangiç kodonunu, bir ön-islenmis mRNA'nin bir 3' veya 5' uç-birlestirme yerini veya bir dallanma noktasini çevreleyen veya içeren bir bölgedir. Hedef dizi, bir ekzon içinde veya bir intron içinde veya bir kombinasyonu içinde olabilir. Bir uç-birlestirme yeri için hedef dizi, bir ön-islenmis mRNA'nin bir normal uç-birlestirme akseptör baglanti yerinin asagi akis bunun 5' ucu 1 ila yaklasik 25 baz çiftine sahip olan bir mRNA dizisi içerebilir. Bir uç-birlestirme için bir tercih edilen hedef dizi, bir pre-islenmis mRNA'nin, bir uç-birlestirme yeri içeren veya bütünüyle bir ekzon kodlama dizisi içine dahil edilen veya bir uç-birlestirme akseptör veya donör yerine uzanan, herhangi bir bölgedir. Bir oligomerin daha genel olarak, bu yukarida tarif edildigi sekilde hedefin nükleik asidine karsi hedeflendiginde, bir biyolojik olarak ilgili hedefe, örnegin, mevcut bulusta, Iamin A proteinini kodlayan bir insan LMNA geni pre-mRNA'sina, "karsi hedeflendigi" söylenir.
Emsal hedefleme dizileri, SEQ lD NO.'Iari: 3-34'ü içerir.
SEQ ID NO.'Iari: 3-34'ün birini veya birden fazlasini içeren, esas olarak bundan olusan veya olusan antisens oligonükleotidler dahil edilir. Ayrica, bu antisens oligomerlerin, SEQ ID NO.'Iari: 3-34'ün herhangi birine (aralardaki tüm tam sayilar dahil olmak üzere) sahip olan varyant oligomerleri ve/veya bu dizilerden yaklasik 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 veya 10 nükleotid farklilik gösteren varyantlari, tercihen bir hücre içinde progerin ekspresyonunu modüle eden varyantlari içeren, varyantlari da dahil edilir. Ayrica, SEO uygun bir sayida, örnegin, her bir 2-5 yüksüz baglanti için en fazla yaklasik 1, örnegin, her bir 10 yüksüz baglanti için yaklasik 4-5, katyonik veya baska modifiye edilmis baglanti içeren ve/veya ayrica burada da tarif edildigi üzere, buna tutturulmus bir Arg açisindan zengin hücreye-nüfuz etme tasima peptidi içeren oligonükleotidler de dahil oligomeri) terimleri, morfolino alt-birimi yapilarindan olusan bir oligonükleotid analogunu ifade eder, burada (i) yapilar, bir alt-birimin morfolino nitrojenini bir bitisik alt- birimin bir 5' ekzosiklik karbonuna birlestiren, bir ile üç atom uzunlugunda, tercihen iki atom uzunlugunda ve tercihen yüksüz veya katyonik olan, fosfor-içeren baglantilar ile birbirine baglanir ve (ii) her bir morfolino halkasi bir pürin veya pirimidin veya baz spesifik hidrojen baglama ile bir polinükleotid içindeki bir bazi baglamak için etkili olan bir es-deger baz-eslesme kismi tasir. Bunlar baglamaya veya aktiviteye müdahale etmedigi sürece, bu baglantiya varyasyonlar yapilabilir. Örnegin, fosfora tutturulmus oksijen, sülfür ile sübstüte edilebilir (tiyofosforodiamidat). 5' oksijen, amino veya düsük alkil sübstüte edilmis amino ile sübstüte edilebilir. Fosfora tutturulmus asili nitrojen sübstüte edilmeyebilir, (opsiyonel olarak sübstüte edilmis) düsük alkil ile mono-sübstüte edilebilir veya di-sübstüte edilebilir. Ayrica, asagidaki katyonik baglantilarin tartismasina bakiniz. Pürin veya pirimidin baz eslesme kismi tipik olarak, adenindir, sitozindir, guanindir, urasildir, timindir veya inosindir. Morfolino oligomerlerinin sentezi, baglantilar) ve U808/012804 (iyilestirilmis sentez) Numarali PCT Basvurulari'nda detaylandirilir. herhangi bir sayida (1-piperazino)fosfinilidenoksi, (1-(4-(w-guanidino-alkanoil))- piperazino)fosfinilidenoksi baglantisi (A2 ve A3) içeren fosforodiamidat morfolino oligomerlerini ifade eder. açiklandigi üzere fosforodiamidat morfolino oligomerlerini ifade eder. Burada kullanisli bulunabilir.
Bir "fosforamidat" grubu, tutturulmus üç oksijen atomu ve tutturulmus bir nitrojen atomu içerirken, bir " fosfordiamidat " grubu, tutturulmus iki oksijen atomuna ve tutturulmus iki US7,943,762`de tarif edilen oligomerlerin yüksüz veya modifiye edilmis alt-birim-arasi baglantilarinda, bir nitrojen daima omurga zincirine asilidir. Bir fosforodiamidat baglantisindaki, ikinci nitrojen tipik olarak, bir morfolino halka yapisi içindeki halka nitrojenidir. fosforodiamidat baglantilaridir, burada bir oksijen atomu, tipik olarak, omurgaya asili oksijen, sülfür ile degistirilir. ifade eder.
Burada kullanildigi sekliyle, "yüklü , yüksüz", "katyonik" ve "anyonik", nötrala yakin, örnegin, yaklasik 6 ila 8 araligindaki, pH'ta bir kimyasal kismin hakim olan halini ifade eder. Örnegin, terim fizyolojik, yani, yaklasik 7,4, pH'ta kimyasal kismin hakim olan halini ifade edebilir. oligo- ve polinükleotidlerde bulunan standart fosfodiester baglanti disindaki bir omurgaya ve (ii) opsiyonel olarak, modifiye edilmis seker kisimlarina, örnegin, riboz veya deoksiriboz kisimlarindan ziyade morfolino kisimlarina, sahip olan bir oligonükleotidi ifade eder. Oligonükleotid analoglari, standart polinükleotid bazlarina Watson-Crick baz eslesmesi ile hidrojen baglama yapabilen bazlari destekler, burada analog omurgasi Oligonükleotid analog molekülü ve bir standart polinükleotid (örnegin, tek-sarmalli RNA veya tek-sarmalli DNA) içindeki bazlar arasinda bir dizi-spesifik sekilde bu tarz hidrojen baglamaya izin veren bir sekilde bazlari sunar. Tercih edilen analoglar, bir büyük ölçüde yüksüz, fosfor içeren omurgaya sahip olanlardir.
Bir Oligonükleotid analogu içindeki bir büyük ölçüde yüksüz, fosfor içeren omurga, burada alt-birim baglantilarinin çogunlugunun, örnegin, bu baglantilarin %50-100`ünün, tipik olarak en az %60 ila %100'ünün veya %75'inin veya %80'inin, yüksüz oldugu ve bir tek fosfor atomu içerdigi bir omurgadir. Antisens oligonükleotidler ve Oligonükleotid analoglari, (aralardaki tüm tam sayilar ve araliklar dahil olmak üzere) yaklasik 8 ile 40 alt-birim, tipik olarak yaklasik 8-25 alt-birim ve tercihen yaklasik 12 ila 25 alt-birim, içerebilir. Belirli uygulamalarda, oligonükleotidler, asagida tanimlandigi üzere, hedef diziye tam dizi tamamlayiciligina veya yakin tamamlayiciliga sahip olabilir.
Bir oligonükleotidin bir "alt-birimi", bir nükleotid (veya nükleotid analogu) birimi ifade eder. Terim, bir "yüklü alt-birimi" ifade ettiginde, yükün tipik olarak alt-birim-arasi baglanti (örnegin, bir fosfat veya fosforotiyoat baglantisi veya bir katyonik baglanti) içinde yer almasina ragmen, tutturulmus alt-birim-arasi baglanti içeren veya tutturulmus alt-birim-arasi baglanti içermeyen nükleotidi ifade edebilir.
Pürin veya pirimidin bazi eslesme kismi tipik olarak, adenindir, sitozindir, guanindir, urasildir, timindir veya inosindir. Bazlar, örnegin, piridin-4-0n, piridin-2-on, fenil, psödourasil, 2,4,6-trimet0ksi benzen, 3-metil urasil, dihidroüridin, naftil, aminofenil, 5- alkilsitidinler (örnegin, 5-metilsitidin), 5-alkilüridinler (örnegin, ribotimidin), 5-haloüridin (örnegin, 5-bromoüridin) veya 6-azapirimidinler veya 6-alkilpirimidinler (örnegin, 6- metilüridin), propin, kuesosin, 2-tiyoüridin, 4-tiy0üridin, vibütosin, vibütoksosin, 4- asetiltidin, 5-(karboksihidroksimetil)üridin, 5'-karboksimetilaminometiI-2-tiyoüridin, 5- karboksimetilaminometilüridin, ß-D-galaktosilkueosin, 1-metiladenosin, 1-metilinosin, 2,2-dimetilguanosin, 3-metilsitidin, 2-metiladenosin, 2-metilguanosin, Nö-metiladenosin, 7-metilguanosin, 5-metoksiaminometiI-2-tiyoüridin, 5-metilaminometilüridin, 5- metilkarbonilmetilüridin, 5-metiloksiüridin, 5-metiI-2-tiyoüridin, 2-metiltiyo-N6- izopenteniladenosin, ß-D-mannosilkueosin, üridin-5-0ksiasetik asit, 2-tiyositidin, treonin yukarida) de dahil edilir. Bu yönünde "modifiye edilmis bazlar" ile, yukarida gösterildigi üzere, adenin (A), guanin (G), sitozin (C), timin (T) ve urasil (U) disindaki nükleotid bazlari kastedilir; bu tarz bazlar antisens molekül içindeki herhangi bir pozisyonda kullanilabilir. Teknikte uzmanligi olan kisiler, oligomerlerin kullanimlarina bagli olarak, T'Ierin ve U'Iarin birbiri ile degistirilebilir oldugunu anlayacaktir. Mesela, diger antisens kimyalar, örnegin, daha çok RNA-benzeri olan 2'-O-metil antisens oligonükleotidler ile, T bazlari U olarak gösterilebilir (bakiniz, örnegin, Dizi Listesi).
Bir "amino asit alt-birimi" veya "amino asit rezidüsü", bir oi-amino asit rezidüsünü (-CO- CHR-NH-) veya bir (3- veya baska amino asit rezidüsünü (örnegin, -CO-(CH2)nCHR- NH-) ifade edebilir, burada R, bir yan zincirdir (hidrojen içerebilir) ve n, 1 ila 7 araligindadir, tercihen 1 ila 4 araligindadir. asidi, örnegin, protein biyosentezi sirasinda yararlanilan 20 (L)-amino asitlerini ayni zamanda digerlerini, örnegin, 4-hidroksipr0lini, hidroksilizini, desmosini, izodesmosini, homosisteini, sitrüllini ve ornitini, ifade eder. "Dogal-olmayan amino asitler" terimi, dogada bulunan proteinlerde bulunmayan amino asitleri ifade eder, örnekler beta- alanini (ß-Ala), 6-amin0hekzanoik asidi (Ahx) ve 6-aminopentanoik asidi içerir. "Dogal- olmayan amino asitler'in" ilave ömekleri, sinirlandirma olmaksizin, teknikte uzmanligi olan bir kisi tarafindan bilinen, (D)-amin0 asitleri, norlösini, norvalini, p-florofenilalanini, etiyonini ve benzerlerini, içerir. i'Izole edilmis" ile, normalde buna bunun natif halinde eslik eden bilesenlerden büyük ölçüde veya esas olarak yoksun olan materyal kastedilir. Örnegin, burada kullanildigi sekliyle, bir "izole edilmis polinükleotid" veya "izole edilmis oligonükleotid", bir dogal- olusumlu halde bunun iki yaninda yer alan dizilerden saflastirilmis veya uzaklastirilmis bir polinükleotidi, örnegin, fragmana normalde bitisik olan dizilerden uzaklastirilmis olan bir DNA fragmanini, ifade edebilir.
Bir "etkili miktar", antisens oligomerinin progerinin ekspresyonunu in vitro modüle etmek için etkili olan bir miktarini ifade eder. etmek" veya "stimüle etme" ile genel olarak, antisens bilesik veya bir kontrol bilesigi olmadan neden olunan yanit ile karsilastirildiginda, birinin veya antisens bilesiklerin veya bilesimlerin bir hücre Içinde daha büyük birfizyolojik yanit (yani, asagi akis etkiler) üretme veya bunlara neden olma yetisini ifade eder. Bir "arttirilmis" veya bilesik (bir ajanin olmamasi) veya bir kontrol bilesigi olmadan üretilen miktarin 1,1, 1,2, kati) (aralardaki ve 1'in üstündeki tüm tam sayilar ve ondalik sayilar dahil olmak üzere), örnegin, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, vb.) kati olan bir artisi içerebilir. antisens bilesiginin, tanisal teknikteki rutin tekniklere göre ölçüldügü üzere, bir ilgili fizyolojik veya hücresel yaniti,, "düsürme" yetisi ile ilgili olabilir. Ilgili fizyolojik veya hücresel yanitlar (in vivo veya in vitro) teknikte uzmanligi olan kisiler için anlasilir olacaktir ve örnegin, mRNA ve/veya protein düzeyleri ile ölçüldügü üzere progerinin ekspresyonundaki düsüsleri, içerebilir. Bir yanittaki bir "düsüs", antisens bilesik veya bir kontrol bilesimi olmamasi ile üretilen yanit ile karsilastirildiginda "istatistiksel olarak anlamli" olabilir ve aralardaki tüm tam sayilar dahil olmak üzere, bir %1'lik, %2'lik, yönlendirildigi bir kismini, yani, oligonükleotidin bir komplementer dizinin Watson-Crick baz eslesmesi ile buna hibridize olacagi diziyi ifade eder. Belirli uygulamalarda, hedef dizi, hem intron hem de ekzon hedef diziyi içeren, bir pre-mRNA'nin bir kesintisiz bölgesi olabilir. Belirli diger uygulamalarda, hedef dizi özel olarak, intron veya ekzon dizilerinden olusacaktir. baska antisens içinde, RNA genomu içindeki hedef diziye komplementer (yani, buna ek olarak, büyük ölçüde komplementer) olan diziyi ifade eder. Antisens bilesigin tüm dizisi veya yalnizca bir kismi, hedef diziye komplementer olabilir. Örnegin, 20-30 baza sahip hedefleme dizileri olabilir. Tipik olarak, hedefleme dizisi, bitisik bazlardan olusturulur, ancak alternatif olarak, örnegin, oligonükleotidin karsi uçlarindan, birlikte konumlandirildiginda, hedef diziyi kapsayan diziyi olusturan bitisik-olmayan dizilerden olusturulabilir.
Hedef diziler ve hedefleme dizileri, bir anti-paralel konfigürasyonda hibridizasyon gerçeklestiginde, bir digerine "komplementer" olarak tarif edilir. Bir hedefleme dizisi, hedef diziye "yakin" veya "büyük ölçüde" tamamlayiciliga sahip olabilir ve hala mevcut bulusun amaci için islev gösterebilir, yani, bu hala fonksiyonel olarak "komplementer" olabilir. Belirli uygulamalarda, bir oligonükleotid hedef dizi ile 10 nükleotidden en fazla bir yanlis-eslesmeye ve tercihen 20 nükleotidden en fazla bir yanlis-eslesmeye sahip olabilir. Alternatif olarak, bir oligonükleotid, burada tarif edilen emsal antisens hedefleme dizileri ile, en az %90 dizi homolojisine ve tercihen en az %95 dizi homolojisine sahip olabilir.
Bir oligonükleotid, oligomer fizyolojik kosullar altinda 45°C'den büyük ölçüde daha yüksek olan, tercihen en az 50°C ve tipik olarak 60°C-80°C veya daha yüksek, olan bir Tm ile hedefe hibridize oldugunda, bir hedef polinükleotide" spesifik olarak hibridize olur. Bu tarz hibridizasyon tercihen, sert hibridizasyon kosullarina karsilik gelir. Verilen bir iyonik güçte ve pH'ta, Tm, bir hedef dizisinin %50'sinin bir komplementer polinükleotide hibridize oldugu sicakliktir. Yine, bu tarz hibridizasyon, antisens oligomerin hedef diziye “yakin" veya "büyük ölçüde" tamamlayiciligi ile ayni zamanda tam tamamlayiciligi ile gerçeklesebilir. yüzdesini ifade eder. Homoloji, dizi karsilastirma programlari, örnegin, GAP (Deveraux sekilde, burada alinti yapilanlara bir benzer veya bunlardan büyük ölçüde farkli uzunluktaki dizi hizalama içine bosluklarin yerlestirilmesi ile karsilastirilabilir, bu tarz bosluklar, örnegin, GAP ile kullanilan karsilastirma algoritmasi ile, belirlenir.
Burada kullanildigi sekliyle, "dizi özdesligi veya örnegin, ...'ye %50 özdes bir dizi" içeren, terimler, dizinin bir karsilastimia penceresi boyunca bir nükleotid-nükleotid temelinde veya bir amino asit-amino asit temelinde ne derece özdes oldugunu ifade eder. Böylelikle, bir "dizi özdesligi yüzdesi", karsilastirma penceresi boyunca optimal olarak hizalanmis iki diziyi karsilastirma, burada eslesmis pozisyonlarin sayisini üretmek için her iki dizide özdes nükleik asit bazinin (örnegin, A, T, C, G, l) veya özdes amino asit rezidüsünün (örnegin, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys ve Met) bulundugu pozisyonlarin sayisini belirleme, eslesmis pozisyonlarin sayisina karsilastirma penceresi içindeki pozisyonlarin toplam sayisina (yani, pencere boyutuna) bölme ve dizi özdesligi yüzdesini üretmek için sonucu 100 ile çarpma ile hesaplanabilir.
Iki veya daha fazla polinükleotid veya polipeptit arasindaki dizi iliskilerini tarif etmek için kullanilan terimler, "referans dizi'yi", "karsilastirma penceresi'ni", "dizi özdesligi'ni", "dizi özdesligi yüzdesi'ni" ve "büyük ölçüde özdesligi içerir. Bir "referans dizi", nükleotidler ve amino asit rezidüleri dahil olmak üzere, en az 8 veya 10 ancak siklikla 15 ila 18 ve siklikla en az 25 monomer birimi uzunlugundadir. Iki polinükleotidin her biri (1) iki polinükleotid arasinda benzer olan bir diziyi (yani, tam polinükleotid dizisinin yalnizca bir kismini) ve (2) iki polinükleotid arasinda farkli olan bir diziyi içerebildiginden, iki (veya daha fazla) polinükleotid arasindaki dizi karsilastirmalari tipik olarak, dizi özdesliginin lokal bölgelerini tanimlamak ve karsilastirmak için bir "karsilastirma penceresi" boyunca iki polinükleotidin dizilerini karsilastirma ile gerçeklestirilir. Bir ayni sayidaki bitisik pozisyonlarin bir referans dizisi ile karsilastirildiginda bitisik en az 6, genel olarak yaklasik 50 ila yaklasik 100, daha genel olarak yaklasik 100 ila yaklasik 150, pozisyonluk bir kavramsal segmenti ifade eder. Karsilastirma penceresi, iki dizinin optimal hizalamasi için (eklenmeler veya silinmeler içermeyen) referans dizi ile karsilastirildiginda yaklasik %20 veya daha az olan eklenmeler veya silinmeler (yani, bosluklar) içerebilir.
Bir karsilastirma penceresini hizalamak için dizilerin optimal hizalamasi, algoritmalarin bilgisayarli uygulamalari (Wisconsin Genetics Software Package Release 7.0, Genetics Computer Group, 575 Science Drive Madison, Wl, ABD içindeki GAP, BESTFIT, FASTA ve TFASTA) ile veya inceleme ve çesitli yöntemlerin seçilen herhangi biri ile üretilen en iyi (yani, karsilastirma penceresi boyunca en yüksek homoloji yüzdesi ile sonuçlanan) hizalama ile yürütülebilir. Referans ayrica, örnegin, Altschul et al., 1997, Nucl. Acids Res. 25:3389, tarafindan açiklandigi üzere BLAST programlari familyasina da yapilabilir. Dizi analizinin detayli bir tartismasi, Ausubel et al., "Current Protocols in 19.3'ünde bulunabilir.
Bir "nükleaz-dirençli" oligomerik molekül (oligomer), omurgasi, hibridize edilmemis veya hibridize edilmis formda; vücut içindeki yaygin ekstraselüler ve intraselüler nükleazlar ile, nükleaz klevajina büyük ölçüde dirençli olanlari ifade eder; yani, oligomer, oligomerin bunlara maruz birakildigi vücut içindeki normal nükleaz kosullari altinda çok küçük nükleaz klevaji gösterir veya hiç nükleaz klevaji göstermez.
Bir ajan, pasif difüzyon disindaki bir mekanizma ile hücre membranini geçerek hücreye girebildiginde, "memeli hücreleri tarafindan aktif bir sekilde alinir". Ajan, örnegin, ajanin, örnegin, bir ATP-bagimli tasima mekanizmasi, ile bir memeli hücresi membranini geçerek tasinmasini ifade eden "aktif tasima" ile veya antisens ajanlarin, ajanin bir tasima proteini baglamasini gerektiren, akabinde bagli ajanin membrani geçerek geçisini kolaylastiran, bir tasima mekanizmasi ile hücre membranini geçerek tasinmasini ifade eden "kolaylastirilmis tasima" ile, tasinabilir. Hem aktif hem de kolaylastirilmis tasima için, oligonükleotid analoglari tercihen, asagida tanimlandigi üzere, bir büyük ölçüde yüksüz omurgaya sahiptir.
Bir "heterodubleks", bir antisens oligonükleotid ve bir hedef RNA'nin komplementer kismi arasindaki bir dubleksi ifade eder. Bir "nükleaz-dirençli heterodubleks", bir antisens oligomerin bunun komplementer hedefini baglamasi ile olusturulan, böylece heterodubleksin intraselüler ve ekstraselüler nükleazlar, örnegin, çift-sarmalli RNA/RNA veya RNA/DNA komplekslerini kesebilen, RNaz H, ile in vivo parçalanmaya büyük ölçüde dirençli oldugu, bir heterodubleksi ifade eder.
Burada kullanildigi sekliyle, "vücut sivisi" terimi, bir süjeden elde edilen, idrari, tükürügü, plazmayi, kani, spinal siviyi veya biyolojik orijinli baska örnegi, örnegin, cilt hücrelerini veya dermal debrisi, içeren çesitli örnek tiplerini kapsar ve bunun içinde süspanse edilen hücreleri veya hücre fragmanlarini veya sivi vasati ve bunun çözünen maddelerini ifade edebilir. karsilastirma yapildiginda kullanilir. Bir reaksiyon içinde bir kompleks olusturan bir reaktifin bagil miktari, bir kontrol numunesi ile reaksiyona giren miktar ile karsilastirildiginda, bir test numunesi ile reaksiyona giren miktardir. Kontrol numunesi, ayni analiz içinde ayri bir sekilde yürütülebilir veya bu ayni ömegin parçasi olabilir (örnegin, bir doku kesiti içinde bir malign alani çevreleyen normal doku).
Bir dogal-sus gen veya gen ürünü, bir popülasyon içinde en sik gözlenendir ve böylelikle keyfi olarak genin "normal" veya "dogal-sus" formu olarak gösterilir.
Asagidaki kimyasal terimler, aksi gösterilmedikçe, asagidaki anlamlara sahiptir: içeren), bir ila otuz karbon atomuna sahip olan ve molekülün geri kalanina bir tekli bag ile tutturulan bir düz veya dallanmis hidrokarbon zinciri radikalini ifade eder. 1 ila 30 araliginda herhangi bir sayida karbon atomu içeren alkiller dahil edilir. En fazla 30 karbon atomu içeren bir alkil, bir 01-030 alkil olarak ifade edilir, benzer sekilde, örnegin, en fazla 12 karbon atomu içeren bir alkil, bir 01-012 alkildir. Diger sayilarda karbon atomlari içeren alkiller (ve burada tanimlanan diger kisimlar) benzer sekilde temsil alkili, 03-08 alkili ve 04-08 alkili, içerir. Temsili alkil gruplari, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, metil, etil, n-propil, 1-metiletil (izo-propil), n-bütil, i-bütil, s-bütil, n-pentil, 1,1- dimetiletil (t-bütil), 3-metilhekzil, 2-metilhekzil, etenil, prop-1-enil, büt-1-enil, pent-1-enil, penta-1,4-dienil, etinil, propinil, büt-2-inil, büt-3-inil, pentinil, hekzinil ve benzerlerini, içerir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir alkil grubu asagida tarif edildigi üzere opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. veya dallanmis iki-degerlikli hidrokarbon zincirini ifade eder. Alkilenler, doymus veya doymamis olabilir (yani, bir veya birden fazla ikili ve/veya üçlü bag içerir). Temsili alkilenler, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, C1-012 alkileni, Ci-Cs alkileni, Ci-Ce alkileni, C1-C4 alkileni, Ci-Cs alkileni, C1-C2 alkileni, C1 alkileni, içerir. Temsili alkilen gruplari, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, metileni, etileni, propileni, n-bütileni, etenileni, propenileni, n-bütenileni, propinileni, n-bütinileni ve benzerlerini, içerir. Alkilen zinciri, molekülün geri kalanina bir tekli veya ikili bag vasitasiyla ve radikal gruba bir tekli veya ikili bag vasitasiyla tutturulur. Alkilen zincirinin molekülün geri kalanina ve radikal gruba tutturulma noktasi zincir içindeki bir karbon veya herhangi iki karbon vasitasiyla olabilir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir alkilen zinciri, asagida tarif edildigi üzere, opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. alkil radikalidir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir alkoksi grubu, asagida tarif edildigi Üzere, opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. sekilde bir alkil radikalidir ve burada Rh, tanimlandigi sekilde bir alkilen radikalidir.
Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir alkoksialkil grubu, asagida tarif edildigi üzere, opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. tanimlandigi sekilde bir alkil radikalidir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir alkilkarbonil grubu, asagida tarif edildigi üzere, opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. tanimlandigi sekilde bir alkil radikalidir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir alkiloksikarbonil grubu, asagida tarif edildigi üzere, opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. bagimsiz bir sekilde, yukarida tanimlandigi sekilde bir alkil radikalidir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir alkilamino grubu. asagida tarif edildigi üzere, opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. tanimlandigi sekilde bir alkil veya aril radikalidir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir amidil grubu, asagida tarif edildigi üzere, opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. yukarida tanimlandigi sekilde bir alkilen radikalidir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir amidinilalkil grubu, asagida tarif edildigi üzere, opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. yukarida tanimlandigi sekilde bir alkilen radikalidir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir amidinilalkilkarbonil grubu, asagida tarif edildigi üzere, opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. sekilde bir alkilen radikalidir ve her bir Ra, bagimsiz bir sekilde bir hidrojendir veya bir alkil radikalidir. sekilde bir alkil radikalidir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir tiyoalkil grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. halka sisteminden türetilen bir radikali ifade eder. Aril radikali, kaynastirilmis veya köprülü halka sistemlerini içerebilen, bir monosiklik, bisiklik, trisiklik veya tetrasiklik halka sistemi olabilir. Aril radikalleri, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, aseantrilen, asenaftilen, asefenantrilen, antrasen, azulen, benzen, krisen, floranten, floren, as- indasen, s-indasen, indan, inden, naftaleni fenalen, fenantren, pleiaden, piren ve trifenilen hidrokarbon halka sistemlerinden türetilen aril radikallerini, içerir.
Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, "aril" veya "ar-" ön-eki (örnegin, sekilde bir alkilen zinciridir ve R0, yukarida tanimlandigi sekilde bir veya birden fazla aril radikalidir, örnegin, benzildir, difenilmetildir, tritildir ve benzerleridir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir aralkil grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. tanimlandigi sekilde bir veya birden fazla aril radikalidir, örnegin, fenildir.
Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir arilkarbonil grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. tanimlandigi sekilde bir veya birden fazla aril radikalidir, örnegin, fenildir.
Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir ariloksikarbonil grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. tanimlandigi sekilde bir alkilen zinciridir ve R0, yukarida tanimlandigi sekilde bir veya birden fazla aril radikalidir, örnegin, fenildir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir aralkilkarbonil grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. yukarida tanimlandigi sekilde bir alkilen zinciridir ve RC, yukarida tanimlandigi sekilde bir veya birden fazla aril radikalidir, örnegin, fenildir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir aralkiloksikarbonil grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. sekilde bir veya birden fazla aril radikalidir, örnegin, fenildir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir arilkarbonil grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. doymamis olan ve molekülün kalanina bir tekli bag ile tutturulan bir kararli, aromatik- olmayan, monosiklik veya polisiklik karbosiklik halkayi ifade eder. Temsili sikloalkiller, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, üç ila on bes karbon atomuna ve üç ila sekiz karbon atomuna sahip olan sikloalkilleri, içerir. Monosiklik sikloalkil radikalleri, örnegin, siklopropili, siklobütili, siklopentili, siklohekzili, sikloheptili ve siklooktili, içerir. Polisiklik radikaller, örnegin, adamantili, norbornili, dekalinili ve 7,7-dimetiI-bisiklo[2.2.1]heptanili, içerir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir sikloalkil grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. tanimlandigi sekilde bir alkilen zinciridir ve R1, yukarida tanimlandigi sekilde bir sikloalkil radikalidir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir sikloalkilalkil grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir.
Sikloalkilkarbonil", -C(=O)Rd formülünün bir radikalini ifade eder, burada Rd, yukarida tanimlandigi sekilde bir sikloalkil radikalidir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir sikloalkilkarbonil grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. yukarida tanimlandigi sekilde bir sikloalkil radikalidir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir sikloalkiloksikarbonil grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. bir halka yapisini ifade eder. Kaynastirilmis halka, bir heterosiklil halkasidir veya bir heteroaril halkasidir, kaynastirilmis heterosiklil halkasinin veya kaynastirilmis heteroaril halkasinin parçasi haline gelen var olan halka yapisi üzerindeki herhangi bir karbon atomu bir nitrojen atomu ile degistirilebilir. yukarida tanimlandigi sekilde bir alkilen radikalidir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir guanidinilalkil grubu, asagida tarif edildigi üzere, opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. burada Rb, yukarida tanimlandigi sekilde bir alkilen radikalidir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir guanidinilalkilkarbonil grubu, asagida tarif edildigi üzere, opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. fazla halo radikali ile sübstüte edilen bir alkil radikalini, örnegin, triflorometili, diflorometili, florometili, triklorometili, 2,2,2-trifl0roetili, 1,2-difloroetili, 3-br0mo-2- floropropili, 1,2-dibrom0etili ve benzerlerini, ifade eder. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir haloalkil grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. veya ror atomu ile degistirilmis oldugu bir kismi ifade eder. oksijenden, fosfordan ve sülfürden olusan gruptan seçilen bir ila 8 heteroatom içeren bir kararli 3- ila 24-üyeli aromatik-olmayan halka radikalini ifade eder. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, heterosiklil radikali, kaynastirilmis veya köprülü halka sistemleri içerebilen bir monosiklik, bisiklik, trisiklik veya tetrasiklik halka sistemi olabilir; ve heterosiklil radikali içindeki nitrojen, karbon veya sülfür atomlari opsiyonel olarak oksitlenebilir; nitrojen atomu opsiyonel olarak kuatemize edilebilir; ve heterosiklil radikali parsiyel olarak veya tamamen doymus olabilir. Bu tarz heterosiklil radikallerinin örnekleri, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, dioksolanil, tiyenil[1,3]ditiyanil, dekahidroizokuinolil, imidazolinil, imidazolidinil, izotiyazolidinil, izoksazolidinil, morfolinil, oktahidroindolil, oktahidroizoindolil, 2-oksopiperazinil, 2-oksopiperidinil, 2- oksopirrolidinil, oksazolidinil, piperidinil, piperazinil, 4-piperidonil, pirrolidinil, pirazolidinil, kuinüklidinil, tiyazolidinil, tetrahidrofüril, tritiyanil, tetrahidropiranil, içerir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir heterosiklil grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. fosfordan ve sülfürden olusan gruptan seçilen bir ila alti heteroatom ve en az bir aromatik halka içeren bir 5- ila 14-üyeli halka sistemi radikalini ifade eder. Bu bulusun amaçlari için, heteroaril radikali, kaynastirilmis veya köprülü halka sistemleri içerebilen bir monosiklik, bisiklik, trisiklik veya tetrasiklik halka sistemi olabilir;s ve heteroaril radikali içindeki nitrojen, karbon veya sülfür atomlari opsiyonel olarak oksitlenebilir; nitrojen atomu opsiyonel olarak kuaternize edilebilir. Örnekler, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, azepinil, akridinil, benzimidazolil, benzotiyazolil, benzindolil, benzodioksolil, benzofü ranil, benzookdazolil, benzotiyazolil, benzotiyadiazolil, benzo[b][1,4]dioksepinil, 1,4-benzodi0ksanil, benzonaftofü ranil, benzoksazolil, benzodioksolil, benzodioksinil, benzopiranil, benzopiranonil, benzofü ranil, benzofüranonil, benzotiyenil (benzotiyofenil), benzotriazolil, benzo[4,6]imidazo[1,2- a]piridinil, karbazolil, sinnolinil, dibenzofüranil, dibenzotiyofenil, füranil, füranonil, izotiyazolil, imidazolil, indazolil, indolil, indazolil, izoindolil, indolinil, izoindolinil, izokuinolil, indolizinil, izoksazolil, naftiridinil, oksadiazolil, 2-0ksoazepinil, oksazolil, oksiranil, 1-oksidopiridinil, 1-0ksidopirimidinil, 1-oksidopirazinil, 1-oksidopiridazinil, 1- feniI-1H-pirrolil, fenazinil, fenotiyazinil, fenokdazinil, ftalazinil, pteridinil, pürinil, pirrolil, pirazolil, piridinil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, kuinazolinil, kuinoksalinil, kuinolinil, kuinüklidinil, izokuinolinil, tetrahidrokuinolinil, tiyazolil, tiyadiazolil, triazolil, tetrazolil, triazinil ve tiyofenil (yani, tiyenil), içerir. Spesifikasyonda spesifik olarak aksi ifade edilmedikçe, bir heteroaril grubu opsiyonel olarak sübstüte edilebilir.
Yukaridaki tüm gruplar sübstüte edilebilir veya sübstüte edilmeyebilir. Burada kullanildigi sekliyle, "sübstüte edilmis" terimi, yukaridaki gruplarin herhangi birinin (yani, alkil, alkilen, alkoksi, alkoksialkil, alkilkarbonil, alkiloksikarbonil, alkilamino, amidil, amidinilalkil, amidinilalkilkarbonil, aminoalkil, aril, aralkil, arilkarbonil, ariloksikarbonil, sikloalkilalkilkarbonil, sikloalkiloksikarbonil, guanidinilalkil, guanidinilalkilkarbonil, haloalkil, heterosklil ve/veya heteroaril) ilaveten islevsellestirilebildigi anlamina gelir, burada en az bir hidrojen atomu bir bag tarafindan bir hidrojen-olmayan atom sübstitüentine degistirilir. Spesifikasyonda spesifik olarak ifade edilmedikçe, bir sübstüte edilmis grup, asagidakilerden seçilen bir veya birden fazla sübstitüenti içerebilir: okso, -COzH, nitril, nitro, hidroksil, tiyooksi, alkil, alkilen, alkoksi, alkoksialkil, sikloalkilalkilkarbonil, sikloalkiloksikarbonil, heterosiklil, heteroaril, dialkilaminler, arilaminler, alkilarilaminler, diarilaminler, N-oksitler, imidler ve enaminler; gruplarda, örnegin, trialkilsilil gruplarinda, dialkilarilsilil gruplarinda, alkildiarilsilil gruplarinda, triarilsilil gruplarinda, perfloroalkilde veya perfloroalkokside, örnegin, triflorometilde veya triflorometokside, bir silikon atomu. "Sübstüte edilmis" ayrica, burada bir veya birden fazla hidrojen atomunun bir daha yüksek-mertebedeki bag (örnegin, bir ikili- veya üçlü-bag) vasitasiyla bir heteroatoma, örnegin, okso, karbonil, karboksil ve ester gruplarinda oksijene ve gruplarda, örnegin, iminlerde, oksimlerde, hidrazonlarda ve nitrillerde, nitrojene, degistirildigi, yukaridaki gruplarin herhangi biri anlamina da gelir. Örnegin, "sübstüte edilmis", burada bir veya birden fazla hidrojen atomunun - SOZRg, -OSOzRg, -SOzORg, :N802Rg ve -SOgNRgRi1 ile degistirildigi, yukaridaki gruplarin herhangi birini içerir. "Sübstüte edilmis" ayrica, burada bir veya birden fazla hidrojen atomunun -C(=O)Rg, -C(=O)ORg, -CH2802R9, -CH2802NRth, -SH, -SRg veya -SSRg ile degistirildigi yukaridaki gruplarin herhangi biri anlamina da gelir. Yukarida, Rg ve Rh aynidir veya farklidir ve bagimsiz bir sekilde, hidrojendir, alkildir, alkoksidir, alkilaminodir, tiyoalkildir, arildir, aralkildir, sikloalkildir, sikloalkilalkildir, haloalkildir, heterosiklildir, N-heterosiklildir, heterosiklilalkildir, heteroarildir, N-heteroarildir ve/veya heteroarilalkildir. Buna ek olarak, yukaridaki sübstitüentlerin her biri ayrica opsiyonel olarak yukaridaki sübstitüentlerin biri veya birden fazlasi ile opsiyonel olarak da sübstüte edilebilir. ilaveten, yukaridaki gruplarin herhangi biri, bir veya birden fazla iç oksijen veya sülfür atomu içermesi için sübstüte edilebilir. Örnegin, bir alkil grubu, bir eter veya polieter grubu olusturmak için bir veya birden fazla iç oksijen atomu ile sübstüte edilebilir. Benzer sekilde, bir alkil grubu, bir tiyoeter, disülfit, vb. olusturmak için bir veya birden fazla iç sülfür atomu ile sübstüte edilebilir. Amidil kisimlari, en fazla 2 halo atomu ile sübstüte edilebilirken, yukaridaki diger gruplar bir veya birden fazla halo atomu ile sübstüte edilebilir. Alkil gruplari istisnasi ile, tüm diger gruplar ayrica amino veya monoalkilamino ile de sübstüte edilebilir. Alkil ve alkilkarbonil gruplari istisnasi ile, tüm diger gruplar ayrica guanidinil veya amidinil ile de sübstüte edilebilir.
Yukaridaki gruplarin herhangi biri için opsiyonel sübstitüentler ayrica, arilfosforili, örnegin, -RaP(Ar)3'ü, de içerir, burada Ra, bir alkilendir ve Ar, aril kismidir, örnegin, fenildir. emsallendirildigi üzere, bir ila alti karbon atomunun bir alkil radikalini ifade eder. Belirli uygulamalarda, bir "düsük alkil" grubu, bir ila dört karbon atomuna sahiptir. Diger uygulamalarda, bir "düsük alkil" grubu, bir ila iki karbon atomuna sahiptir; yani, metil veya etil. Benzer sekilde, "düsük alkenil", allil ve bütenil ile emsallendirildigi üzere, iki ila alti, tercihen üç veya dört, karbon atomunun bir alkenil radikalini ifade eder.
Bir "araya-girmeyen" sübstitüent, burada tarif edildigi üzere bir antisens oligomerin bunun amaçlanan hedefini baglama yetisini advers bir sekilde etkilemeyen sübstitüenttir. Bu tarz sübstitüentler, küçük ve/veya görece polar-olmayan gruplari, örnegin, metili, etili, metoksiyi, etoksiyi veya floroyu, içerir.
LMNA Hedefleme Örnekler, asagida tartisilan, SEQ lD NO.'Iari 1'i ve/veya 2'yi hedef alan antisens oligonükleotidleri içerir.
Belirli antisens oligonükleotidler, dogal-sus diziyi (SEQ ID NO: 1) ve/veya SEO ID NO: 2'de gösterildigi üzere, HGPS hastalarinda bulunan diziyi içeren insan LMNA genindeki ekzon 11'in bir veya birden fazla bazina komplementer olan bir hedefleme dizisini içerebilir. Bu hedef diziler, asagida Tablo 1'de gösterilir: Tablo 1. Emsal LMNA Hedef Dizileri ADI DIZISI SEQ lD NO: LMNA ekzon 11 1 CCTÃGCGCACICTGGGGCGCÄGTCGGGGIÜGCA;C TICGGGGECÄETCTGGTCACCCGCTÇCTÄCCICCT HGPS ekzon 11 2 TGCC`CHTCTICCML_mGTCTCiC,JT_7TTCGCI GCTACCGCAGTGTGGGGGGCAGTGGGGGISGCÄGC T`(W%3(H%Pi?APWWGÖ(H%ÜTÜLZKJCQH`TÇYITÃIMITFY`T GGGCÃACTCCÃGCCCC:GAECCCAG Örnekler, Tablo 1'de SEQ ID NO: 1'de ve 2'de alti çizili LMNA ekzon 11'inin kriptik uç- birlestirme yerine (örnegin, CAGGTGGGCIT) de komplementer olanlari içeren LMNA ekzon 11'ine (SEQ lD NO: 1'e veya 2'ye) tam olarak komplementer olan antisens oligonükleotidleri içerir. Belirli antisens oligonükleotidler, bir hedefleme dizisi içerebilir, burada en 3'-baz, LMNA ekzon 11'i içinde, SEQ ID NO: 1'de veya 2'de alti çizili kriptik komplementerdir (bakiniz, Tablo 1) veya LMNA ekzon 11'i içinde, kriptik uç-birlestirme komplementerdir. Bu tipin emsal oligonükleotidleri asagida SEQ ID NO.'Iari: 3-16'da listelenenler arasindadir. Belirli antisens oligonükleotidler, bir hedefleme dizisi içerebilir, burada en 3'-baz, LMNA intron 10'u içinde, LMNA ekzon 11'i SEQ ID NO: 1'in veya komplementerdir (bakiniz, Tablo 1). Belirli antisens oligonükleotidler, bir hedefleme dizisi içerebilir, burada en 3'-baz, LMNA ekzon 10'u içinde, LMNA intron 10'unun yukari antisens ajanlarin bir kombinasyonunun kullanimi ile ilgilidir. Spesifik uygulamalar, 39 veya 40 bazini) içeren antisens oligonükleotidleri içerir.
Antisens oligonükleotidler ayrica, bir ön-islenmis LMNA mRNA'si, örnegin, bir ekzon, bir intron, bir ekzon-intron baglanti-yeri veya bir uç-birlestirme baglanti-yeri, içinde çesitli bölgelere karsi yönlendirilebilir veya komplementer de olabilir. Örnegin, belirli antisens oligonükleotidler, LMNA pre-MRNA'nin ekzonlari 10'un ve 11'in bir uç- birlestirme donörünün (SD) veya uç-birlestirme akseptörünün (SA) uç-birlestirme baglanti-yeri ile kesisen bir bölgeye (hedef diziye) komplementer olan ve ön-islenmis 23, 24 veya 25 nükleotide) komplementer olan bir hedefleme dizisi içerebilir. Yukaridaki tiplerdeki emsal hedefleme dizileri asagida SEQ ID NO.'Iari: 17-34 olarak Iistelenir.
Seçilmis antisens hedefleme dizileri daha kisa, örnegin, yaklasik 12 bazlik veya daha uzun, örnegin, yaklasik 40 bazlik, yapilabilir ve dizi uç-birlestirmeyi ve/veya hedef ile hibridizasyon üzerine inhibisyonun baska formunu etkilemek için yeterli sekilde komplementer oldugu ve hedef RNA ile 45°C veya daha yüksek olan bir Tm'ye sahip olan bir heterodubleks olusturdugu sürece, az sayida yanlis-eslesme içerebilir.
Belirli uygulamalarda, hedef ve antisens hedefleme dizisi arasindaki tamamlayiciligin derecesi, bir kararli dubleks olusturmak için yeterlidir. Antisens oligomerlerin hedef RNA dizisi ile tamamlayicilik bölgesi, 8-11 baz kadar kisa olabilir, ancak tercihen, bu araliklar arasindaki tüm tam sayilar ve araliklar dahil olmak üzere, 12-15 bazdir veya bazlik bir antisens oligomer genel olarak, hedef mRNA içinde bir essiz komplementer diziye sahip olmak için yeterli uzunluktadir. Belirli uygulamalarda, komplementer bazlarin bir minimum uzunlugu, asagida tartisildigi üzere, zorunlu baglama Tm'sini basarmak için gerekli olabilir.
Belirli uygulamalarda, 40 baz kadar uzun oligomerler uygun olabilir, burada en az bir minimum baz sayisi, örnegin, 10-12 baz, hedef diziye komplementerdir. Bununla birlikte, genel olarak, hücrelerdeki kolaylastirilmis veya aktif alim, yaklasik 30'dan daha az olan oligomer uzunluklarinda optimize edilir. Asagida ilaveten tarif edilen, PMO oligomerleri için, baglama kararliliginin ve alimin bir optimum dengesi genel olarak, 18- olusan antisens oligomerler (örnegin, PNA'lar, LNA'Iar, 2'-OMe, MOE, PMO'Iar) dahil bitisik-olmayan baz, SEQ ID NO.'Iari 1'in ve/veya 2'nin hedef dizilerini veya bunlarin varyantlarini içeren, burada tarif edilen bir hedef diziye komplementerdir.
Belirli uygulamalarda, antisens oligomerler, LMNA pre-mRNA nükleik asit hedef dizisine %100 komplementer olabilir veya bunlar, oligomer ve hedef dizi arasinda olusturulan bir heterodubleks hücresel nükleazlarin etkisine ve in vivo gerçeklesebilen diger parçalanma veya yer-degistirme modlarina karsi koymak için yeterli bir sekilde kararli oldugu sürece, örnegin varyantlara uyum saglamak için, yanlis-eslesmeler içerebilir. Nükleazlar tarafindan klevaja daha az duyarli olan oligomer omurgalari asagida tartisilir. Mevcut oldugunda, yanlis-eslesmeler, orta bölgelerine kiyasla hibrit dubleksin uç bölgelerine dogru daha az destabilize olur. Yanlis-eslesmelerin izin verilen sayisi, dubleks kararliliginin iyi anlasilmis prensiplerine göre, oligomerin uzunluguna, dubleks içindeki G:C baz çiftlerinin yüzesine ve dubleks içindeki yanlis-eslesmelerin pozisyonuna bagli olacaktir. Bu tarz bir antisens oligomerin hedef diziye zorunlu bir sekilde %100 k0mplementer olmamasina ragmen, bu hedef diziyi kararli bir sekilde ve spesifik olarak baglamak için etkilidir, böylece nükleik asit hedefinin bir biyolojik aktivitesi, örnegin, progerin proteininin ekspresyonu, modüle edilir.
Bir oligomer ve bir hedef dizi arasinda olusturulan dubleksin kararliligi, baglama Tm'sinin ve dubleksin hücresel enzimatik klevaja duyarliliginin bir fonksiyonudur.
Komplementer-dizi RNA'si açisindan bir antisens bilesigin Tm'si, geleneksel yöntemler, tarafindan tarif edilenler ile veya Miyada C.G. ve Wallace R.B., 1987, Oligonucleotide hybridization techniques, Methods Enzymol. Vol. 154 pp. 94-107, kaynaginda tarif edildigi üzere ölçülebilir. Belirli uygulamalarda, antisens oligomer, bir komplementer- dizi RNA'si açisindan, vücut sicakligindan daha yüksek olan ve tercihen 50°C'den daha yüksek olan, bir baglama Tm'sine sahip olabilir. &SO-80°C araliginda veya daha yüksek olan Tm'ler tercih edilir. Iyi bilinen prensiplere göre, bir komplementer-bazli RNA hibridi açisindan, bir oligomer bilesiginin Tm'si, dubleks içindeki C:G eslesmis bazlarin oranini arttirma ile ve/veya heterodubleksin (baz çiftleri açisindan) uzunlugunu arttirma ile arttirilabilir. Ayni zamanda, hücresel alimi optimize etme amaçlari için, oligomerin boyunu sinirlandirmak avantajli olabilir. Bu amaçla, yüksek Tm degerleri için 'ten daha fazla baz gerektirenlere kiyasla, 25 veya daha az bazlik bir uzunlukta yüksek Tm (50°C veya yüksek) gösteren bilesikler genel olarak tercih edilir.
Belirli uygulamalarda, bu tarz PMO oligomerlerinde, bir oligomerin antisens aktivitesi, Sekil 1C'de emsallendirildigi üzere, yüksüz ve katyonik fosforodiamidat baglantilarinin bir karisiminin kullanimi ile güçlendirilebilir. Oligomer içindeki katyonik baglantilarin toplam sayisi, (aralardaki tüm tam sayilar dahil olmak üzere) 1 ila 10 araliginda çesitlilik gösterebilir ve oligomer boyunca aralikli konumlandirilabilir. Tercihen, yüklü baglantilarin sayisi, en az 2'dir ve toplam omurga baglantilarinin en fazla yarisidir, örnegin, 2, 3, 4, 5, 6, 7 veya 8 pozitif yüklü baglanti arasindadir ve tercihen her bir yüklü baglanti, omurga boyunca en az 1, 2, 3, 4 veya 5 yüksüz baglanti ile ayrilir.
Bulusun bir tercih edilen katyonik baglantisi. Tablo 3'te gösterildigi üzere apn baglantisi B10'u içerir.
Insan LMNA pre-mRNA'sini hedef almak için emsal antisens diziler asagida Tablo 1'de gösterilir. Antisens oligonükleotidler bu hedefleme dizilerinin tümünü veya bir kismini içerebilir.
Tablo 2. Emsal HGPS Hedefleme Dizileri* PMO adi Hedefleme Dizisi 5' - 3' SEQ Exo1OSD.25.69 ACGTGGTGGTGATGGAGCAGGTCAT 17 Exo1OSD.25.73 ACTCACGTGGTGGTGATGGAGCAGG 18 PMO adi Hedefleme Dizisi 5' - 3' SEQ Exo1OSD.25.92 GGCCTCAGCGGCGGCTACCACTCAC 23 HsEX1O GCTACCACTCACGTGGTGGTGATGG-ACRsG 35 HsEX10-apn GCapnTACCACapnTCACGapnTGGTGGapnTGATGG 37 HSEX11-apn GGGapnTCCACCCACCapnTGGGCaWTCCapnTGAG 38 ** AcReG, bir emsal hedefleme dizisinin 3' ucuna bir glisin baglayici ile konjuge edilmis bir tercih edilen hücreye-nüfuz etme peptidi tasiyicisini (açillenmis R6; SEO lD NO: 45) gösterir. SEQ ID NO.'lari: 19 ve 20 içindeki apnT, asagida Tablo 3'te ilaveten tarif edildigi üzere, bir apn alt-birim-arasi baglantiyi, baglanti BlO'u, ifade eder.
Antisens Oligonükleotid Bilesikleri Mevcut bulusun antisens oligonükleotidleri tipik olarak, (a) memeli hücreleri tarafindan aktif bir sekilde alinma yetisine sahiptir ve (b) alindiginda, yaklasik 45°C'den daha yüksek olan bir Tm ile hedef RNA ile bir dubleks olusturur. Belirli uygulamalarda, oligomer omurgasi büyük ölçüde yüksüz olabilir ve tercihen hücre membranini geçerek aktif veya kolaylastirilmis tasima için bir substrat olarak taninabilir. Oligomerin hedef RNA ile bir kararli dubleks olusturma yetisi ayrica, oligomer omurgasinin, hedef açisindan antisens oligomerin uzunlugunu ve tamamlayicilik derecesini içeren diger özellikleri, G:C ila A-T baz eslesmelerinin orani ve herhangi bir yanlis-eslesmis bazin pozisyonlari ile de ilgili olabilir. antisens oligomerin hücresel nükleazlara direnme yetisi, ajanin sag kalimini ve hücre sitoplazmasina nihai aktarimini destekleyebilir. Burada tarif edilen PMO, PMO+ (PMOp/us), PMO-X, LNA, PNA'Iar ve/veya 2'O-Me-bazli kimyalardan olusan antisens oligomerler dahil edilir. Genel olarak, PNA ve LNA kimyalari, PMO ve 2'O-Me oligomerleri ile karsilastirildiginda, bunlarin görece yüksek hedef baglama gücünden dolayi daha kisa hedefleme oligomerlerinden yararlanir.
Peptit nükleik asitleri (PNA'Iar), burada omurganin, buna pirimidin veya pürin bazlarinin tutturuldugu N-(2-aminoetil) glisin birimlerinden olusan, bir deoksiriboz omurgasi ile yapisal olarak homomorf oldugu DNA analoglaridir. Dogal pirimidin ve pürin bazlari içeren PNA'Iar, Watson-Crick baz-eslesme kurallarina uyarak komplementer oligonükleotidlere hibridize olur ve baz çifti tanima açisindan DNA'yi taklit eder (Egholm, Buchardt et al., 1993). PNA'Iarin omurgasi, fosfodiester baglarindan ziyade peptit baglari ile olusturulur, bu bunlari antisens uygulamalar için gayet uygun hale getirir (asagidaki yapiya bakiniz). Omurga yüksüzdür, bu normale kiyasla daha büyük termal kararlilik gösteren PNA/DNA veya PNA/RNA dubleksleri ile sonuçlanir. PNA'Iar nükleazlar veya proteazlar tarafindan taninmaz.
PNA'lar, teknikte bilinen herhangi bir teknik kullanilarak sentetik olarak üretilir. PNA, burada bir poliamid omurgasinin asagida gösterildigi üzere DNA`nin geleneksel fosfat riboz halkasinin yerini aldigi bir DNA analogudur.
Dogal RNA veya DNA yapisina bir radikal yapisal degisime ragmen, PNA bir heliks form içinde DNA'yi veya RNA'yi dizi-spesifik baglayabilir. PNA'nin karakteristikleri, komplementer DNA'ya veya RNA'ya bir yüksek baglama afinitesini, tek-baz yanlis- eslesmesinden kaynaklanan bir destabilize etme etkisini, nükleazlara ve proteazlara direnci, tuz konsantrasyonundan bagimsiz olarak DNA veya RNA ile hibridizasyonu ve homo-pürin DNA ile tripleks olusumunu içerir. PanageneTM, bunun tescilli Bts PNA monomerlerini (Bts; benzotiyazoI-Z-sülfonil grubu) ve tescilli oligomerizasyon prosesini gelistirmistir. Bts PNA monomerleri kullanilan PNA oligomerizasyonu, tekrarli koruyucu- grubun uzaklastirilmasi, kuplaj ve basliklandirma sikluslarindan olusturulur. Bu ögreten temsili Amerika Birlesik Devletleri patentleri, bunlarla sinirli kalmamak Oligonükleotid bilesikleri ayrica, "kilitli nükleik asi" alt-birimleri (LNA'Iar) da içerebilir.
LNA'larin yapilari teknikte bilinir: örnegin, Wengel et al., Chemical Communications gösterilir: Nukieobaz Nukleobaz Nükleobaz Nükleobaz 14.' F.: Bulusun bilesikleri, bir veya birden fazla LNA katabilir. Münferit LNA nükleosid alt- birimlerinin sentezi ve bunlarin oligonükleotidlere katilmasi için yöntemler teknikte fosforotiyoat kisimlarini içerir; alternatif olarak, fosfor-içermeyen baglantilar kullanilabilir. Bir tercih edilen uygulama, bir LNA içeren bilesiktir, burada her bir LNA alt-birimi bir DNA alt-birimi (yani, bir deoksiriboz nükleotidi) ile ayrilir. ilaveten tercih edilen bilesikler, degisen LNA ve DNA alt-birimlerinden olusturulur, burada alt-birim- arasi baglanti fosforotiyoattir.
Bir tercih edilen oligomer yapisi, yukarida tarif edildigi üzere, yüksüz baglantilar ile birlestirilen, baz-eslesme kisimlari tasiyan morfolino-bazli alt-birimleri kullanir. Bir büyük ölçüde yüksüz fosforodiamidat-bagli morfolino oligomeri (PMO) özellikle tercih edilir. Antisens oligomerleri içeren morfolino oligonükleotidleri, örnegin, müsterek U.S.
Morfolino-bazli alt-birimlerin belirli özellikleri asagidakileri içerir: kararli, yüksüz omurga baglantilari ile bir oligomerik formda baglanma yetisi; bir nükleotid bazini (örnegin, adenini, sitozini, guanini veya urasili) destekleme yetisi, böylece olusturulan polimer hedef RNA'yi içeren bir komplementer-bazli hedef nükleik asit ile, yüksek Tm ile, hatta -14 bazlik kadar kisa oligomerler ile, hibridize olabilir; oligomerin memeli hücrelerine aktif bir sekilde tasinma yetisi ve oligomerzRNA heterodubleksinin RNaz parçalamasina direnme yetisi.
Morfolino-bazli alt-birimlerin özellikleri asagidakileri içerir: 1) kararli, yüksüz veya pozitif yüklü omurga baglantilari ile bir oligomerik formda baglanma yetisi; 2) bir nükleotid bazini (örnegin, adenini, sitozini, guanini, timidini, urasili ve hipoksantini) destekleme yetisi, böylece olusturulan polimer hedef RNA'yi içeren, bir komplementer-bazli hedef nükleik asit ile, görece kisa (Örnegin, 10-15 bazlik) oligonükleotidlerde yaklasik 45°C'nin üstünde Tm degerleri ile, hibridize olabilir; 3) oligonükleotidin memeli hücrelerine aktif veya pasif bir sekilde tasinma yetisi; ve 4) antisens oligonükleotidzRNA heterodubleksinin sirasiyla RNaz ve RNazH parçalamasina direnme yetisi.
Fosfor-içeren omurga baglantilarina sahip olan morfolino oligonükleotidlerinin örnekleri Sekiller 1A-1 C'de gösterilir. Mevcut bulusun bir yönüne uygun sekilde, bunun omurga baglantilarinin tercihen %10-%50'sinde pozitif yüklü gruplar içermesi için modifiye edilen bir tercih edilen fosforodiamidat-bagli morfolino oligonükleotidi Sekil 1C'de gösterilir. Her biri bir yüksüz veya pozitif yüklü, fosfor-içeren alt-birim baglantisi ile baglanmis, talep edilen söz konusu antisens oligonükleotidler için emsal omurga yapilari Sekiller 1A-1C`de gösterilen morfolino alt-birim tiplerini içerir. Sekil 1D, bes atomlu tekrarlama-birimi omurgasini olusturan bir fosfor-içeren baglantiyi gösterir, burada morfolino halkalari, bir 1-atomlu fosfoamid baglantisi ile baglanir. Sekil 1E, bir 6-at0mlu tekrarlama-birimi omurgasini üreten bir baglantiyi gösterir. Bu yapida, 5' morfolino karbonunu fosfor grubuna baglayan Y atomu, sülfür, nitrojen, karbon veya tercihen oksijen olabilir. Fosfordan asilan X kismi, flor, bir alkil veya sübstüte edilmis alkil, bir alkoksi veya sübstüte edilmis alkoksi, bir tiyoalkoksi veya sübstüte edilmis tiyoalkoksi veya siklik yapilari, örnegin, morfolinleri veya piperidinleri, içeren, sübstüte edilmemis, mono-sübstüte edilmis veya di-sübstüte edilmis nitrojen olabilir. Alkil, alkoksi ve tiyoalkoksi tercihen, 1-6 karbon atomu içerir. Z kisimlari, sülfürdür veya oksijendir ve tercihen oksijendir.
Sekiller 1F'de ve 1G'de gösterilen baglantilar, 7-atomlu birim-uzunluktaki omurgalar için gösterilir. Sekil 1F'de, X kismi, Sekil 1E'de oldugu sekildedir ve Y kismi, metilen, sülfür veya tercihen, oksijen olabilir. Sekil 1G'de, X ve Y kisimlari, Sekil 1E'de oldugu sekildedir. Özel olarak tercih edilen morfolino oligonükleotidleri, Sekil 1E'de gösterilen formdaki morfolino alt-birim yapilarindan olusanlari içerir, burada X=NH2'dir, N(CH3)2'dir veya 1-piperazindir veya baska yüklü gruptur, Y=O'dur ve Z=O'dur.
Yukarida bildirildigi üzere, büyük ölçüde yüksüz oligonükleotid, yüklü baglantilar, örnegin, her bir 2-5 yüksüz baglanti için en fazla yaklasik 1, örnegin, her bir 10 yüksüz baglanti için yaklasik 4-5, içermesi için bulusun bir yönüne uygun sekilde modifiye edilebilir. Belirli uygulamalarda, antisens aktivitesindeki optimal iyilestirme, omurga baglantilarinin yaklasik %25'i katyonik olugunda görülebilir. Belirli uygulamalarda, güçlendirme, küçük bir sayida, örnegin, %10-20, katyonik baglanti ile veya burada katyonik baglantilarin sayisi %50-80 araliginda, örnegin, yaklasik %60, oldugunda görülebilir. Eklenmis katyonik omurga yükleri ile görülen güçlendirme, bazi durumlarda, örnegin, bu yüklü baglantilarin en az %70'inin en-merkezdeki 10 baglanti içinde lokalize oldugu, 8 katyonik omurga baglantisi içeren bir 20-mer oligonükleotid içinde, antisens oligonükleotidin "merkez-bölgesi" omurga baglantilarinin yakinindaki yüklerin yiginini dagitma ile ilaveten güçlendirilebilir.
Bulusun antisens bilesikleri, yukarida alinti yapilan referanslarda veya asagida yüksüz ve katyonik omurga baglantilarinin bir karisimina sahip olan oligonükleotidlerin sentezi açisindan detaylandirilan yöntemler kullanilarak, adim-adim kati-faz sentezi ile hazirlanabilir. Bazi durumlarda, örnegin, bilesigin farmakokinetiklerini güçlendirmek için veya yakalanmasini veya saptanmasini kolaylastirmak için, antisens bilesige ilave kimyasal kisimlar eklemek arzu edilebilir. Bu tarz bir kisim, standart sentetik yöntemlere göre, tipik olarak oligomerin bir ucuna, kovalent olarak tutturulabilir. Örnegin, bir polietilenglikol kisminin veya baska hidrofilik polimerin, örnegin, 10-100 monomerik alt-birime sahip olan birinin, eklenmesi çözünürlügü arttirmada yararli olabilir. Bir veya birden fazla yüklü grup, örnegin, anyonik yüklü grup, örnegin, bir organik asit, hücre alimini arttirabilir.
Bir raportör kisim, örnegin, floresein veya bir radyoaktif olarak etiketlenmis grup, saptama amaçlari için tutturulabilir. Alternatif olarak, oligomere tutturulmus olan raportör etiket, bir etiketlenmis antikoru veya streptavidini, baglayabilen bir Iigand, örnegin, bir antijen veya biyotin olabilir. Bir antisens bilesigin tutturulmasi veya modifikasyonu için bir kismi seçmede, genel olarak elbette biyo-uyumlu olan ve büyük olasilikla, istenmeyen yan etkiler olmadan, bir süje tarafindan tolere edilecek olan kimyasal bilesiklerin gruplarini seçmek arzu edilir.
Yukarida bildirildigi üzere, antisens bilesiklerin bazilari, aralarina yukarida tarif edilen tipteki yüksüz baglantilar konumlandirilmis seçilmis bir sayida katyonik baglantilar içermesi için yapilabilir. Hem yüksüz hem de katyonik, alt-birim-arasi baglantilar tercihen, asagidaki yapiya sahip olan, fosfor-içeren baglantilardir: W, S'dir veya O'dur ve tercihen O'dur, X = NR1R2'dir veya ORö'dir, Y = O'dur veya NR7'dir, ve oligomer içindeki söz konusu her bir baglanti asagidakilerden seçilir: (a) yüksüz baglanti (a), burada R“in, R2'nin, Rö'nin ve R7'nin her biri bagimsiz bir sekilde hidrojen ve düsük alkil arasindan seçilir; (b1) katyonik baglanti (b1), burada X = NR1R2'dir ve Y: O'dur ve NR1R2, bir opsiyonel sübstüte edilmis piperazino grubunu temsil eder, böylece R1R2 = - CHRCHRN(R3)(R4)CHRCHR-'dir, burada her bir R, bagimsiz bir sekilde H'dir veya CHg'tür, R4, H'dir, CHg'tür veya bir elektron çiftidir ve R3, H, düsük alkil, örnegin, CH3, C(=NH)NH2, Z-L-NHC(=NH)NH2 ve bagdir, L, alkil, alkoksi ve alkilamino arasindan seçilen baglara sahip olan en fazla 18 atom. tercihen en fazla 12 atom ve daha tercihen en fazla 8 atom uzunlugundaki bir opsiyonel baglayicidir, R', bir dogal olusumlu amino asidin bir yan zinciridir veya bunun bir- veya iki-karbonlu homologudur ve m, 1 ila 6 araligindadir, tercihen 1 ila 4 araligindadir; (b2) katyonik baglanti (b2), burada X = NRlRZ'dir ve Y = O'dur, R1 = H'dir veya CHg'tür ve R2 = LNR3R4R5'tir, burada L, R3 ve R4, yukarida oldugu sekilde tanimlanir ve R5, H'dir, düsük alkildir veya düsük (alkoksi)alkildir; ve (b3) katyonik baglanti (b3), burada Y = NR7'dir ve X = ORG'dir ve R7 = LNR3R4R5'tir, burada L, R3, R4 ve R5, yukarida oldugu sekilde tanimlanir ve R5, H'dir veya düsük alkildir; ve en az bir söz konusu baglanti, katy0nik baglantilar (b1), (b2) ve (b3) arasindan seçilir.
Belirli uygulamalarda, bir oligomer ardisik en az iki (a) tipi baglanti (yani, yüksüz baglanti) içerebilir. Ilave uygulamalarda, oligomer içindeki baglantilarin en az %5'i, katyonik baglantilardir (yani, tip (b1), (b2) veya (b3)); örnegin, baglantilarin %10 ila Bir uygulamada, en az bir baglanti, (b1) tipidir, burada, tercihen, her bir R, H'dir, R4, H'dir, CHs'tür veya bir elektron çiftidir ve R3, H, düsük alkil, örnegin, CHa, C(=NH)NH2 ve C(O)-L-NHC(=NH)NH2 arasindan seçilir. R3'ün son iki uygulamasi sirasiyla, pepirazin halkasina dogrudan tutturulmus veya bir baglayici grup L'ye asili bir guanidino kismi saglar. Sentez kolayligi için, gösterildigi üzere, R3 içindeki Z degiskeni, tercihen C(O)'dur (karbonil).
Yukarida bildirildigi üzere, baglayici grup L, L içindeki uç atomlarin (örnegin, karbonile veya nitrojene bitisik olanlarin) karbon atomlari olasi kaydiyla, bunun omurgasi içinde alkil (örnegin, -CH2-CH2-), alkoksi (-C-O-) ve alkilamino (örnegin, -CH2-NH-) arasindan seçilen baglar içerir. Dallanmis baglantilarin (örnegin, -CH2-CHCH3-) mümkün olmasina ragmen, baglayici tercihen dallanmamistir. Bir uygulamada, baglayici, bir hidrokarbon baglayicidir. Bu tarz bir baglayici, -(CH2)n- yapisina sahip olabilir, burada n, 1-12 araligindadir, tercihen 2-8 araligindadir ve daha tercihen 2-6 araligindadir.
Morfolino alt-birimleri asagidaki yapiya sahip olabilir: burada Pi, bir baz-eslesme kismidir ve yukarida gösterilen baglantilar, (i)'nin nitrojen atomunu bir bitisik alt-birimin 5' karbonuna baglar. Baz-eslesme kisimlari Pi, ayni veya farkli olabilir ve genel olarak, bir hedef nükleik asidi baglayan bir dizi saglamak için tasarlanir. Morfolino alt-birimlerini baglamak için yukaridaki (b1), (b2) ve (b3) tipi baglantilarin uygulamalarinin kullanimi asagida oldugu sekilde grafiksel olarak gösterilebilir: r 4“- -II J. 4' Pi o '1) le "N, NRJR. i [Li`_- NR R R O p (R , 414%“ i 0...__4 o Pj M L p, Tercihen, oligomer içindeki tüm katyonik baglantilar, ayni tiptedir; yani, tümü (b1) tipidir, tümü (2) tipidir veya tümü (b3) tipidir.
Ilave uygulamalarda, katyonik baglantilar, asagida gösterildigi üzere, (b1') ve (b1") baglantilari arasindan seçilir, burada (b1') burada, bir "Pip" baglantisini ifade eder ve (b1") burada, bir "GuX" baglantisini ifade eder: WZP-N( 1R2) W=P-N NHZ* (b1”) Yukaridaki yapilarda, W, S'dir veya O'dur ve tercihen O'dur; R“in ve R2'nin her biri bagimsiz bir sekilde, hidrojen ve düsük alkil arasindan seçilir ve tercihen metildir; ve A, hidrojeni veya (b1“) ve (b1") içindeki bir veya birden fazla karbon atomu üzerinde bir araya-girmeyen sübstitüenti temsil eder. Tercihen, piperazin halkasi içindeki halka karbonlari sübstüte edilmemistir; bununla birlikte, bunlar, araya-girmeyen sübstitüentler, örnegin, metil veya flor, içerebilir. Tercihen, en fazla bir veya iki karbon atomu bu sekilde sübstüte edilir. Ilave uygulamalarda, baglantilarin en az %10'u, (b1') veya (b1") tipi olabilir.
Belirli uygulamalarda, oligomer yukaridaki (b1') tipi baglantilari içermez. Alternatif olarak, oligomer (b1) tipi baglantilari içermez, burada her bir R, H'dir, R3, H'dir veya CHa'tür ve R4, H'dir, CHg'tür veya bir elektron çiftidir.
Morfolino alt-birimleri ayrica, asagida ilaveten tarif edildigi üzere, fosfor-olmayan-bazli alt-birim-arasi baglantilar ile de baglanabilir, burada en az bir baglanti, yukarida tarif edildigi üzere, bir asili katyonik grup ile modifiye edilir.
Bunlarin modifiye edilmemis halinde yüksüz olan, ancak ayrica bir asili amin sübstitüenti de tasiyabilen baska oligonükleotid analogu baglantilar kullanilabilir. Örnegin, bir morfolino halkasi üzerinde bir 5' nitrojen atomu, bir sülfamid baglantisinda veya bir üre baglantisinda kullanilabilir (burada fosfor sirasiyla karbon veya sülfür ile degistirilir) ve yukaridaki (b3) yapisindaki 5'-nitrojen atomuna benzer bir sekilde modifiye edilebilir.
Tam olarak katyonik-baglanmis oligomerleri içeren, herhangi bir sayida katyonik baglantiya sahip olan oligomerler saglanir. Bununla birlikte, tercihen, oligomerler, örnegin, %10-%80'i, parsiyel olarak yüklenir. Tercih edilen uygulamalarda, baglantilarin yaklasik %10 ila %60'i ve tercihen %20 ila %50'si katyoniktir.
Bir uygulamada, katyonik baglantilar omurga boyunca aralikli konumlandirilir. Parsiyel olarak yüklü oligomerler tercihen, ardisik en az iki yüksüz baglanti içerir; yani, oligomer tercihen, bunun tüm uzunlugu boyunca bir kati bir sekilde dönüsümlü (alternatif) paterne sahip degildir.
Katyonik baglantilarin bloklarina ve yüksüz baglantilarin bloklarina sahip olan oligomerler de düsünülür; örnegin, yüksüz baglantilarin bir merkezi blokunun iki yaninda, katyonik baglantilarin bloklari yer alabilir veya tam tersi. Bir uygulamada, oligomer yaklasik olarak esit-uzunlukta 5', 3' ve merkez bölgelerine sahiptir ve merkez bölgesindeki katyonik baglantilarin yüzdesi, yaklasik %50'den büyüktür, tercihen yaklasik %70'ten büyüktür.
Antisens uygulamalarinda kullanim için oligomerler genel olarak, yaklasik 10 ila uzunlugu araligindadir. Örnegin, bulusun 19-20 alt-birime, bir antisens bilesik için kullanisli bir uzunluk, sahip olan bir oligomeri ideal olarak iki ila on, örnegin, dört ila sekiz, katyonik baglantiya sahip olabilir ve geri kalanlar yüksüz baglantilardir. 14-15 alt- birime sahip olan bir oligomer ideal olarak, iki ila yedi, örnegin, 3,4 veya 5, katyonik baglantiya sahip olabilir ve geri kalanlar yüksüz baglantilardir.
Her bir morfolino halka yapisi, tedavi edilmekte olan bir hücrede veya bir süjede bir seçilmis antisens hedefe hibridize olmasi için tipik olarak tasarlanan baz eslesme kisimlarinin bir dizisini olusturmak için, bir baz eslesme kismini destekler. Baz eslesme kismi, natif DNA veya RNA içinde bulunan bir pürin veya pirimidin (örnegin, A, G, C, T veya U) veya bir analog, örnegin, hipoksantin (nükleosid inosinin baz bileseni) veya 5- metil sitozin olabilir.
Yukarida bildirildigi üzere, belirli uygulamalar, PMO-X oligomerlerini ve modifiye edilmis uç gruplara sahip olanlari içeren, yeni alt-birim-arasi baglantilar içeren oligomerlere yöneliktir. Bazi uygulamalarda, bu oligomerler, karsilik gelen modifiye edilmemis oligomerlere olana kiyasla DNA ve RNA için daha yükse afiniteye sahiptir ve baska alt- birim-arasi baglantilara sahip olan oligomerler ile karsilastirildiginda iyilestirilmis hücre aktarimi, potens ve/veya doku dagilimi özellikleri gösterir. Bir uygulamada, oligomerler, burada tanimlandigi sekilde en az bir (B) tipi alt-birim-arasi baglanti içerir. Oligomerler ayrica, burada tanimlandigi üzere bir veya birden fazla (A) tipi alt-birim-arasi baglanti da içerebilir. Çesitli baglanti tiplerinin ve oligomerlerin yapisal nitelikleri ve özellikleri, asagidaki tartismada daha detayli bir sekilde tarif edilir. Bu ve ilgili oligomerlerin sentezi, bütünüyle referans olarak eklenmis olan, müsterek U.S. Basvuru No. 13/1 18,298'de tarif edilir.
(A) Baglantisi Basvuru sahipleri, antisens aktivitesinin, biyo-dagilimin ve/veya diger arzu edilebilir özelliklerin güçlendirilmesinin çesitli alt-birim-arasi baglantilara sahip olan oligomerler hazirlama ile optimize edilebilecegini bulmustur. Örnegin, oligomerler opsiyonel olarak (A) tipi bir veya birden fazla alt-birim-arasi baglanti içerebilir ve belirli uygulamalarda, oligomerler (A) tipi en az bir baglanti içerir. Bazi diger uygulamalarda, (A) tipi her bir baglanti ayni yapiya sahiptir. (A) tipi baglantilar, burada bütünüyle referans olarak eklenmis olan, müsterek U.S. Patent No. 7,943,762'de açiklanan baglantilari içerebilir.
(A) baglantisi asagidaki yapiya (I) veya bunun bir tuzuna veya izomerine sahiptir, burada 3' ve 5', morfolino halkasinin (yani, asagida tartisilan yapi (i)), sirasiyla, 3' ve 5' uçlarina tutturulma noktasini gösterir: W, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde S'dir veya O'dur; X, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde -N(CH3)2'dir, -NR1R2'dir, -OR3'tür Y, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde O'dur veya -NR2'dir, R1, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya metildir; R2, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya -LNR4R5R7'dir; R3, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya C1-Ce alkildir; R4, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, Ci-Cs alkildir, - C(=NH)NH2, -Z-L-NHC(=NH)NH2 veya -[C(O)CHR'NH]mH'dir, burada 2, -C(=O) veya bir dogrudan bagdir, R', bir dogal olusumlu amino asidin bir yan zinciridir veya bunun bir- veya iki-karbonlu homologudur ve m, 1 ila 6 araligindadir; R5, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, metildir veya bir elektron çiftidir; R5, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya metildir; R7, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir Ci-Ce alkildir veya Ci- Cs alkoksialkildir; ve L, alkil, alkoksi veya alkilamino gruplarini veya bunlarin kombinasyonlarini içeren en fazla 18 atom uzunlugundaki bir opsiyonel baglayicidir.
Bazi örneklerde, oligomer, (A) tipi en az bir baglanti içerir. Bazi diger uygulamalarda, oligomer (A) tipi en az iki ardisik baglanti içerir. Ilave uygulamalarda, oligomer içindeki baglantilarin en az %5'i, (A) tipidir; örnegin, bazi uygulamalarda, baglantilarin %5- spesifik uygulamalarda, en az bir (A) tipi baglanti, -N(CH3)2'dir. Diger uygulamalarda, (A) tipi her bir baglanti, -N(CH3)2`dir. Diger uygulamalarda, en az bir (A) tipi baglanti, piperizin-i-ildir, örnegin, sübstüte edilmemis piperazin-i-ildir (örnegin, A2 veya A3).
Diger uygulamalarda, en az bir (A) tipi baglanti, piperizin-1-ildir, örnegin, sübstüte edilmemis piperazin-1-ildir.
Bazi uygulamalarda, W, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde S'dir veya O'dur ve belirli uygulamalarda, W, O'dur.
Bazi uygulamalarda, X, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde -N(CH3)2'dir, - NR1R2'dir, -OR3'tür. Bazi uygulamalarda, X, -N(CH3)2'dir. Diger yönlerinde, X, - NR1R2'dir ve diger örneklerde, X, -OR3'tür.
Bazi uygulamalarda, R1, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya metildir. Bazi uygulamalarda, R1, hidrojendir. Diger uygulamalarda, X, metildir.
Bazi uygulamalarda, R2, her bir bulunusunda, hidrojendir. Diger uygulamalarda, R2, her bir bulunusunda, -LNR4R5R7'dir. Bazi uygulamalarda, R3, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya 01-06 alkildir. Diger uygulamalarda, R3, metildir.
Daha baska uygulamalarda, R3, etildir. Bazi diger uygulamalarda, R3, n-propildir veya izopropildir. Bazi diger uygulamalarda, R3, C4 alkildir. Diger uygulamalarda, R3, C5 alkildir. Bazi uygulamalarda, R3, Ce alkildir.
Belirli uygulamalarda, R4, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir. Diger uygulamalarda, R4, metildir veya etildir. Daha baska uygulamalarda, R4, - C(=NH)NH2'dir ve diger uygulamalarda, R4, -Z-L-NHC(=NH)NH2'dir. Daha da baska uygulamalarda, R4, -[C(=O)CHR'NH]mH'dir. Bir uygulamada, Z, -C(=O)-'dur ve bir baska uygulamada, 2, bir dogrudan bagdir. R', bir dogal olusumlu amino asidin bir yan zinciridir. Bazi uygulamalarda, R', bir dogal olusumlu amino asidin bir yan zincirinin bir- m, 1 ila 6 araligindaki bir tam sayidir. m, 1 olabilir. m, 2 olabilir, m, 3 olabilir, m, 4 Bazi uygulamalarda, R5, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, metildir veya bir elektron çiftidir. Bazi uygulamalarda, R5, hidrojendir. Diger uygulamalarda, R5, metildir. Daha baska uygulamalarda, R5, bir elektron çiftidir.
Bazi uygulamalarda, R6, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya metildir. Bazi uygulamalarda, R6, hidrojendir. Diger uygulamalarda, R6, metildir.
Diger uygulamalarda, R7, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, C1-Cs alkildir veya 02-06 alkoksialkildir. Bazi uygulamalarda, R7, hidrojendir. Diger uygulamalarda, R7, Ci-Ce alkildir. Daha baska uygulamalarda, R7, Cz-Cs alkoksialkildir.
Bazi uygulamalarda, R7, metildir. Diger uygulamalarda, R7, etildir. Daha baska uygulamalarda, R7, n-propildir veya izopropildir. Bazi diger uygulamalarda, R7, C4 alkildir. Bazi uygulamalarda, R7, C5 alkildir. Bazi uygulamalarda, R7, C5 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R7, C2 alkoksialkildir. Bazi diger uygulamalarda, R7, C3 alkoksialkildir. Daha baska uygulamalarda, R7, C4 alkoksialkildir. Bazi uygulamalarda, R7, C5 alkoksialkildir. Diger uygulamalarda, R7, Cs alkoksialkildir.
Yukarida bildirildigi üzere, baglayici grup L bunun omurgasinda, L içindeki uç atomlarin (örnegin, karbonile veya nitrojene bitisik olanlarin) karbon atomlari olmasi kaydiyla, alkil (örnegin, -CH2-CH2-), alkoksi (örnegin, -C-O-C-) ve alkilamino (örnegin, -CH2-NH- ) arasindan seçilen baglar içerir. Dallanmis baglantilarin (örnegin, -CH2-CHCH3-) mümkün olmasina ragmen, baglayici, genel olarak, dallanmamistir. Bir uygulamada, baglayici, bir hidrokarbon baglayicidir. Bu tarz bir baglayici, (CH2)n- yapisina sahip olabilir, burada n, 1-12 araligindadir, tercihen 2-8 araligindadir ve daha tercihen 2-6 araligindadir.
Herhangi bir sayida (A) tipi baglantiya sahip olan oligomerler saglanir. Bazi uygulamalarda, oligomer, (A) tipi baglanti içermez. Belirli uygulamalarda, baglantilarin (B) Baglantisi Bazi uygulamalarda, oligomerler, (B) tipi en az bir baglanti içerir. Örnegin, oligomerler, 1, 2, 3, 4, 5, 6 veya daha fazla (B) tipi baglanti içerebilir. (B) tipi baglantilar, bitisik olabilir veya oligomer boyunca aralikli konumlandirilabilir. (B) tipi baglanti, asagidaki yapiya (I) veya bunun bir tuzuna veya izomerine sahiptir: X / 93` 3' W, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde S'dir veya O'dur; X, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde -NRBRg'dur veya -OR3'tür; ve Y, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde O'dur veya -NR10'dur, R3, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya 01-06 alkildir; R8, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya 02-012 alkildir; aralkildir veya arildir; R”, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, 01-012 alkildir veya - LNR4R5R7'dir; burada R8 ve R9, bir 5-18 üyeli mono veya bisiklik heterosiklik olusturmak için birlesebilir veya R8, R9 veya R3, bir 5-7 üyeli heterosiklik olusturmak için R10 ile birlesebilir ve burada X, 4-piparazin0 oldugunda, X, asagidaki yapiya (III) sahiptir: (111) burada: aminoalkildir, 01-012 alkilkarbonildir, arildir, heteroarildir veya heterosikliktir; R, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde bir elektron çiftidir, hidrojendir veya 01-012 alkildir; ve triflorometildir, amidildir, amidinildir, amidinilalkildir, amidinilalkilkarbonil guanidinildir, guanidinilalkildir, guanidinilalkilkarbonildir, kolattir, deoksikolattir, arildir, heteroarildir, heterosikliktir, -SR13 veya C1-012 alkoksidir, burada R”, R14 ve R15, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde C1-C12 alkildir.
Bazi örneklerde, oligomer, (B) tipi bir baglanti içerir. Bazi diger uygulamalarda, oligomer, (B) tipi iki baglanti içerir. Bazi diger uygulamalarda oligomer, (B) tipi üç baglanti içerir. Bazi diger uygulamalarda, oligomer, (B) tipi dört baglanti içerir. Daha da baska uygulamalarda, (B) tipi baglantilar ardisiktir (yani, (B) tipi baglantilar, birbirine bitisiktir). Ilave uygulamalarda, oligomer içindeki baglantilarin en az %5'i (B) tipidir; veya %10 ila %35'i (B) tipi baglanti olabilir.
Diger uygulamalarda, R3, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya Ci-Cs alkildir. Daha baska uygulamalarda, R3, metil olabilir. Bazi uygulamalarda, R3, etil olabilir. Bazi diger uygulamalarda, R3, n-propil veya izopropil olabilir. Daha baska uygulamalarda, R3, C4 alkil olabilir. Bazi uygulamalarda, R3, C5 alkil olabilir. Bazi uygulamalarda, R3, Ce alkil olabilir.
Bazi uygulamalarda, R8, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya C2- 012 alkildir. Bazi uygulamalarda, R8, hidrojendir. Daha baska uygulamalarda, R8, etildir.
Bazi diger uygulamalarda, R8, n-propildir veya izopropildir. Bazi uygulamalarda, R8, C4 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R8, C5 alkildir. Diger uygulamalarda, R8, Ce alkildir.
Bazi uygulamalarda, R8, 07 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R8, Ca alkildir. Diger uygulamalarda, R8, C9 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R5, Cm alkildir. Bazi diger uygulamalarda, R8, 011 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R8, C12 alkildir. Bazi diger uygulamalarda, R5, C2-C12 alkildir ve 02-012 alkil, bir veya birden fazla ikili bag (örnegin, alken), üçlü bag (örnegin, alkin) veya her ikisini içerir. Bazi uygulamalarda, R8, sübstüte edilmemis 02-012 alkildir.
Bazi uygulamalarda, R9, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, C1-Ci2 alkildir, C1-C12 aralkildir veya arildir. Bazi uygulamalarda, R9, hidrojendir. Daha baska uygulamalarda, R9, C1-C12 alkildir. Diger uygulamalarda, R9, metildir. Daha baska uygulamalarda, R9, etildir. Bazi diger uygulamalarda, R9, n-propildir veya izopropildir.
Bazi uygulamalarda, R9, C4 alkildir. Bazi uygulamalarda, R9, Cs alkildir. Daha baska uygulamalarda, R9, Cs alkildir. Bazi diger uygulamalarda, R9, C7 alkildir. Bazi uygulamalarda, R9, Cs alkildir. Bazi uygulamalarda, R9, Cg alkildir. Bazi diger uygulamalarda, R9, 010 alkildir. Bazi diger uygulamalarda, R9, Cu alkildir. Daha baska uygulamalarda, R9, C12 alkildir.
Bazi diger uygulamalarda, R9, C1-C12 aralkildir. Örnegin, bazi uygulamalarda n, R9, benzildir ve benzil opsiyonel olarak, fenil halkasi veya benzilik karbon üzerinde sübstüte edilebilir. Bu baglamlarda sübstitüentler, alkil ve alkoksi gruplarini, örnegin, metili veya metoksiyi, içerir. Bazi uygulamalarda, benzil grubu benzilik karbonda metil ile sübstüte edilir. Örnegin, bazi uygulamalarda, R9, asagidaki yapiya (XIV) sahiptir: R1/6\\ ;î Diger uygulamalarda, R9, arildir. Örnegin, bazi uygulamalarda, R9, fenildir ve fenil, opsiyonel olarak sübstüte edilebilir. Bu baglamdaki sübstitüentler sübstitüentler, alkil ve alkoksi gruplarini, örnegin, metili veya metoksiyi, içerir. Diger uygulamalarda, R9, fenildir ve fenil, bir taç eter kismi, örnegin, bir 12-18 üyeli taç eter, içerir. Bir uygulamada, taç eter, 18 üyelidir ve ilaveten bir ilave fenil kismi içerir. Örnegin, bir uygulamada, R9, asagidaki yapilarin (XV) veya (XVI) birine sahiptir: 1/\\ o R!6 veya \// Bazi uygulamalarda, Rw, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, C1-C12 alkildir veya -LNR4R5R7'dir, burada R4, R5 ve R7, (A) baglantisi açisindan yukarida tanimlandigi sekildedir. Diger uygulamalarda, R1°, hidrojendir. Diger uygulamalarda, Rlo, C1-C12 alkildir ve diger uygulamalarda, R1”, -LNR4R5R7'dir. Bazi uygulamalarda, Rlo, metildir. Daha baska uygulamalarda, Rw, etildir. Bazi uygulamalarda, R1°, C3 alkildir. Bazi uygulamalarda, R1°, C4 alkildir. Daha baska uygulamalarda, Rm, C5 alkildir. Bazi diger uygulamalarda, R1°, Cs alkildir. Diger uygulamalarda, R”, 07 alkildir.
Daha baska uygulamalarda, Rlo, C8 alkildir. Bazi uygulamalarda, R”, 09 alkildir. Diger uygulamalarda, R1”, 010 alkildir. Daha baska uygulamalarda, Rlo, C11 alkildir. Bazi diger uygulamalarda, Rw, 012 alkildir.
Bazi uygulamalarda, R8 ve R9, bir 5-18 üyeli mono veya bisiklik heterosiklik olusturmak için birlesir. Bazi uygulamalarda, heterosiklik, bir 5 veya 6 üyeli monosiklik heterosikliktir. Örnegin, bazi uygulamalarda, (B) baglantisi, asagidaki yapiya (IV) sahiptir: Diger uygulamalarda, heterosiklik, bisiklik, örnegin, bir 12-üyeli bisiklik heterosikliktir.
Heterosiklik, piperizinil olabilir. Heterosiklik, morfolino olabilir. Heterosiklik, piperidinil olabilir. Heterosiklik, dekahidroizokuinolin olabilir. Temsili heterosiklikler asagidakileri R1? R1? R12 (111) (V) (\"l) (vii) ve R1/ _\N_I Bazi uygulamalarda, R11 is, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde 02-012 alkildir, 01-012 aminoalkildir, arildir, heteroarildir veya heterosiklildir.
Bazi uygulamalarda, R”, 02-012 alkildir. Bazi uygulamalarda, R”, etildir. Diger uygulamalarda, R”, 03 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R”, izopropildir. Bazi diger uygulamalarda, R”, 04 alkildir. Diger uygulamalarda, R”, 05 alkildir. Bazi uygulamalarda, R”, 03 alkildir. Diger uygulamalarda, R”, 07 alkildir. Bazi uygulamalarda, R”, 03 alkildir. Diger uygulamalarda, R”, 09 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R”, 010 alkildir. Bazi diger uygulamalarda, R”, 011 alkildir. Bazi uygulamalarda, R”, 012 alkildir.
Diger uygulamalarda, R”, 01-012 aminoalkildir. Bazi uygulamalarda, R”, metilaminodur. Bazi uygulamalarda, R”, etilaminodur. Diger uygulamalarda, R”, 03 aminoalkildir. Daha baska uygulamalarda, R”, 04 aminoalkildir. Bazi diger uygulamalarda, R”, 05 aminoalkildir. Diger uygulamalarda, R”, 03 aminoalkildir. Daha baska uygulamalarda, R“, 07 aminoalkildir. Bazi uygulamalarda, R“, 08 aminoalkildir.
Diger uygulamalarda, R”, 09 aminoalkildir. Daha baska uygulamalarda, R”, 010 aminoalkildir. Bazi diger uygulamalarda, R”, 011 aminoalkildir. Diger uygulamalarda, R”, 012 aminoalkildir.
Diger uygulamalarda, R”, 01-012 alkilkarbonildir. Daha baska uygulamalarda, R”, 01 alkilkarbonildir. Diger uygulamalarda, R”, 02 alkilkarbonildir. Bazi uygulamalarda, R”, 03 alkilkarbonildir. Daha baska uygulamalarda, R”, 04 alkilkarbonildir. Bazi uygulamalarda, R”, 05 alkilkarbonildir. Bazi diger uygulamalarda, R”, 03 alkilkarbonildir. Diger uygulamalarda, R”, 07 alkilkarbonildir. Daha baska uygulamalarda, R”, 03 alkilkarbonildir. Bazi uygulamalarda, R”, 09 alkilkarbonildir.
Daha baska uygulamalarda, R”, 010 alkilkarbonildir. Bazi diger uygulamalarda, R”, 011 alkilkarbonildir. Bazi uygulamalarda, R”, 012 alkilkarbonildir. Daha baska uygulamalarda, R”, -C(=O)(CH2)n002H'dir, burada n, 1 ila 6 araligindadir. Örnegin, bazi uygulamalarda, n, 1'dir. Diger uygulamalarda, n, 2'dir. Daha baska uygulamalarda, n, 3'tür. Bazi diger uygulamalarda, n, 4'tür. Daha baska uygulamalarda, n, 5'tir. Diger uygulamalarda, n, ö'dir.
Diger uygulamalarda, R”, arildir. Örnegin, bazi uygulamalarda, R”, fenildir. Bazi uygulamalarda, fenil, örnegin, bir nitro grubu ile, sübstüte edilir.
Diger uygulamalarda, R”, heteroarildir. Örnegin, bazi uygulamalarda, R”, piridinildir.
Diger uygulamalarda, R”, pirimidinildir.
Diger uygulamalarda, R”, heterosiklildir. Örnegin, bazi uygulamalarda, R”, Bazi uygulamalarda, R”, etildir, izopropildir, piperidinildir, pirimidinildir, kolattir, deoksikolattir veya -C(=O)(CH2)n002H'dir, burada n, 1 ila 6 araligindadir.
Bazi uygulamalarda, R, bir elektron çiftidir. Diger uygulamalarda, R, hidrojendir ve diger uygulamalarda, R, C1-C12 alkildir. Bazi uygulamalarda, R, metildir. Bazi uygulamalarda, R, etildir. Diger uygulamalarda, R, 03 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R, izopropildir. Bazi diger uygulamalarda, R, C4 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R, C5 alkildir. Bazi uygulamalarda, R, Ce alkildir. Diger uygulamalarda, R, C7 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R, Cs alkildir. Diger uygulamalarda, R, Cg alkildir. Bazi uygulamalarda, R, 010 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R, 011 alkildir. Bazi uygulamalarda, R, C12 alkildir.
Bazi uygulamalarda, R12, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde, hidrojendir, 01-012 amidildir, amidinildir, amidinilalkildir, amidinilalkilkarbonildir, guanidinildir, guanidinilalkildir, guanidinilalkilkarbonildir, kolattir, deoksikolattir, arildir, heteroarildir, bulunusunda, bagimsiz bir sekilde C1-C12 alkildir.
Bazi uygulamalarda, R”, hidrojendir. Bazi uygulamalarda, R12, C1-C12 alkildir. Bazi uygulamalarda, R”, C1-C12 aminoalkildir. Bazi uygulamalarda, R12, -NH2'dir. Bazi uygulamalarda, R”, C1-C12 alkikarbonildir. Bazi uygulamalarda, R”, oksodur. Bazi uygulamalarda, R”, -CN'dir. Bazi uygulamalarda, R”, triflorometildir. Bazi uygulamalarda, R”, amidildir. Bazi uygulamalarda, R”, amidinildir. Bazi uygulamalarda, R12, amidinilalkildir. Bazi uygulamalarda, R12, amidinilalkilkarbonildir.
Bazi uygulamalarda, R12, guanidinildir, örnegin, mono metilguanidinildir veya dimetilguanidinildir. Bazi uygulamalarda, R”, guanidinilalkildir. Bazi uygulamalarda, R12, amidinilalkilkarbonildir. Bazi uygulamalarda, R12, kolattir. Bazi uygulamalarda, R12, deoksikolattir. Bazi uygulamalarda, R”, arildir. Bazi uygulamalarda, R12, heteroarildir.
Bazi uygulamalarda, R”, heterosikliktir. Bazi uygulamalarda, R”, -SR13'tür. Bazi uygulamalarda, R1?, C1-C12 alkoksidir. Bazi uygulamalarda, R1?, dimetil amindir.
Diger uygulamalarda, R12, metildir. Daha baska uygulamalarda, R”, etildir. Bazi uygulamalarda, R12, C3 alkildir. Bazi uygulamalarda, R12, izopropildir. Bazi uygulamalarda, R12, C4 alkildir. Diger uygulamalarda, R12, C5 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R12, Cs alkildir. Bazi diger uygulamalarda, R12, 07 alkildir. Bazi uygulamalarda, R”, Ca alkildir. Daha baska uygulamalarda, R”, C9 alkildir. Bazi uygulamalarda, R12, C10 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R”, C11 alkildir. Diger uygulamalarda, R”, 012 alkildir. Daha baska uygulamalarda, alkil kismi, bir eter kismi, örnegin, bir metoksimetil kismi, olusturmak için bir veya birden fazla oksijen atomu ile sübstüte edilir.
Bazi uygulamalarda, R12, metilaminodur. Diger uygulamalarda, R12, etilaminodur. Daha baska uygulamalarda, R12, Ca aminoalkildir. Bazi uygulamalarda, R12, C4 aminoalkildir.
Daha baska uygulamalarda, R”, C5 aminoalkildir. Bazi diger uygulamalarda, R”, C5 aminoalkildir. Bazi uygulamalarda, R”, C7 aminoalkildir. Bazi uygulamalarda, R”, Ca aminoalkildir. Daha baska uygulamalarda, R12, C9 aminoalkildir. Bazi diger uygulamalarda, R12, C10 aminoalkildir. Daha baska uygulamalarda, R”, 011 aminoalkildir. Diger uygulamalarda, R”, 012 aminoalkildir. Bazi uygulamalarda, amino alkil, bir dimetilamino alkildir.
Daha baska uygulamalarda, R12, asetildir. Bazi diger uygulamalarda, R”, C2 alkilkarbonildir. Bazi uygulamalarda, R”, C3 alkilkarbonildir. Daha baska uygulamalarda, R12, C4 alkilkarbonildir. Bazi uygulamalarda, R'Z, 05 alkilkarbonildir.
Daha baska uygulamalarda, R”, 06 alkilkarbonildir. Bazi diger uygulamalarda, R'Z, C7 alkilkarbonildir. Bazi uygulamalarda, R12, Ca alkilkarbonildir. Daha baska uygulamalarda, R12, C9 alkilkarbonildir. Bazi diger uygulamalarda, R”, Cm alkilkarbonildir. Bazi uygulamalarda, R”, C11 alkilkarbonildir. Diger uygulamalarda, R”, 012 alkilkarbonildir. Alkilkarbonil bir karboksi kismi ile sübstüte edilir, örnegin, alkilkarbonil bir süksinik asit kismi (yani, bir 3-karboksialkilkarbonil) olusturmak için sübstüte edilir. Diger uygulamalarda, alkilkarbonil bir uç -SH grubu ile sübstüte edilir.
Bazi uygulamalarda, R12, amidildir. Bazi uygulamalarda, amidil, örnegin, -SH, karbamat veya bunlarin kombinasyonlari ile, ilaveten sübstüte edilmis bir alkil kismi içerir. Diger uygulamalarda, amidil, bir aril kismi, örnegin, fenil, ile sübstüte edilir. Belirli uygulamalarda, R1?, (IX) asagidaki yapiya sahip olabilir: R16// 0 R18/\:_ H _S_ burada R16, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, C1-C12 alkildir, C1-C12 alkoksidir, -CN'dir, arildir veya heteroarildir.
Bazi uygulamalarda, R”, metoksidir. Diger uygulamalarda, R”, etoksidir. Daha baska uygulamalarda, R”, 03 alkoksidir. Bazi uygulamalarda, R12, C4 alkoksidir. Bazi uygulamalarda, R12, 05 alkoksidir. Bazi diger uygulamalarda, R”, Ce alkoksidir. Diger uygulamalarda, R”, C7 alkoksidir. Bazi diger uygulamalarda, R”, C8 alkoksidir. Bazi uygulamalarda, R12, C9 alkoksidir. Diger uygulamalarda, R”, Cm alkoksidir. Bazi uygulamalarda, R”, 011 alkoksidir. Daha baska uygulamalarda, R”, 012 alkoksidir.
Belirli uygulamalarda, R”, pirrolidinildir, örnegin, pirrolidin-1-ildir. Diger uygulamalarda, R12, piperidinildir, örnegin, piperidin-l-ildir veya piperidin-4-ildir. Bir baska uygulamada, R12, morfolinodur, örnegin, morfolin-4-ildir. Diger uygulamalarda, R”, fenildir ve hatta ilave uygulamalarda, fenil, örnegin, bir nitro grubu ile, sübstüte edilir. Daha da baska uygulamalarda, R12, pirimidinildir, örnegin, pirimidin-2-ildir.
Diger uygulamalarda, R”, R14 ve R15, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde C1-C12 alkildir. Bazi uygulamalarda, R13, R14 veya R15, metildir. Daha baska uygulamalarda, R”, R14 veya R15, etildir. Diger uygulamalarda, R”, R14 veya R15, C3 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R13, R14 veya R15, izopropildir. Diger uygulamalarda, R”, R14 C7 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R13, R14 veya R15, Cs alkildir. Diger uygulamalarda, R”, R14 veya R15, C9 alkildir. Bazi uygulamalarda, R”, R14 veya R15, uygulamalarda, R”, R14 veya R15, C12 alkildir.
Yukarida bildirildigi üzere, bazi uygulamalarda, R12, bir aril kismi ile sübstüte edilmis amidildir. Bu baglamda, R15'nin her bir bulunusunda, ayni veya farkli olabilir. Bu uygulamalarin bazilarinda, Rle, hidrojendir. Diger uygulamalarda, R16, -CN'dir. Diger uygulamalarda, R”, heteroarildir, örnegin, tretrazolildir. Belirli diger uygulamalarda, R”, metoksidir. Diger uygulamalarda, R”, arildir ve aril opsiyonel olarak sübstüte edilir. Bu baglamda opsiyonel sübstitüentler asagidakileri içerir: C1-C12 alkil, C1-C12 alkoksi, örnegin, metoksi; trifloromeoksi; halo, örnegin, kloro; ve triflorometil.
Diger uygulamalarda, R18, metildir. Daha baska uygulamalarda, R”, etildir. Bazi uygulamalarda, R”, 03 alkildir. Bazi diger uygulamalarda, R16, izopropildir. Daha baska uygulamalarda, R16, C4 alkildir. Diger uygulamalarda, R”, 05 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R16, Cs alkildir. Bazi diger uygulamalarda, Rlö, C7 alkildir. Bazi uygulamalarda, R”, Ca alkildir. Daha baska uygulamalarda, R16, Cg alkildir. Bazi diger uygulamalarda, R15, C1o alkildir. Diger uygulamalarda, Rlö, C11 alkildir. Bazi diger uygulamalarda, R15, C12 alkildir.
Bazi uygulamalarda, Rle, metoksidir. Bazi uygulamalarda, R16, etoksidir. Daha baska uygulamalarda, R”, 03 alkoksidir. Bazi diger uygulamalarda, R”, C4 alkoksidir. Diger uygulamalarda, R16, C5 alkoksidir. Bazi diger uygulamalarda, R”, Ce alkoksidir. Daha baska uygulamalarda, R16, 07 alkoksidir. Bazi diger uygulamalarda, R16, Ca alkoksidir.
Daha baska uygulamalarda, R15, Cg alkoksidir. Bazi diger uygulamalarda, R16, C10 alkoksidir. Bazi uygulamalarda, R15, C11 alkoksidir. Bazi diger uygulamalarda, R16, C12 alkoksidir.
Bazi diger uygulamalarda, R8 ve R9, bir 12-18 üyeli taç eter olusturmak için birlesir. Örnegin, bazi uygulamalarda, taç eter, 18 üyelidir ve diger uygulamalarda, taç eter, 15 üyelidir. Belirli uygulamalarda, R8 ve R9, asagidaki yapilarin (X) veya (XI) birine sahip olan bir heterosiklik olusturmak için birlesir: Bazi uygulamalarda, R8, R9 veya R3, bir 5-7 Üyeli heterosiklik olusturmak için R” ile birlesir. Örnegin, bazi uygulamalarda, R3, bir 5-7 üyeli heterosiklik olusturmak için R10 ile birlesir. Bazi uygulamalarda, heterosiklik, 5-üyelidir. Diger uygulamalarda, heterosiklik, 6-üyelidir. Diger uygulamalarda, heterosiklik, 7-üyelidir. Bazi uygulamalarda, heterosiklik, asagidaki yapi (XII) ile temsil edilir: 2' /E\ R12 »nmwm burada 2', bir 5-7 üyeli heterosiklik'i temsil eder. Yapinin (XI) belirli uygulamalarinda, R”, her bir bulunusunda, hidrojendir. Örnegin, (B) baglantisi, asagidaki yapilarin (B1), (82) veya (BS) birine sahip olabilir: Belirli diger uygulamalarda, Rlz, bir arilfosforil kismi, örnegin, bir trifenil fosforil kismi, ile ilaveten sübstüte edilmis C1-C12 alkilkarbonildir veya amidildir. Bu yapiya sahip olan baglantilarin örnekleri, 856`yi ve 855'i içerir.
Belirli uygulamada, (B) baglantisi, A1-A5 arasindaki yapilarin herhangi birine sahip degildir. Tablo 3, temsili (A) ve (B) tipi baglantilari gösterir.
Tablo 3. Temsili Alt-birim-arasi Baglantilar No. Adi Yapisi A1 PMO / \ 3 PMO+ (gösterilen bN/R 5 A2 HN / ;1 3. protonlanmamis form) \// O\ A3 PMO+ (+) ,rk PMOMW(mH PMOGUX PMOcps PMOcpr PivioShc Yapnsi PMomorfolino (m) Piviotri (t) PMOheks (h) pMododek PModiheks ivivioapn (a) PMOpyr (p) PMOpyr (HCI Tuzu) PMOrba F>Mosba PModimetilapn PMOetpip pivioiprpip PMopyrQMe Adi Yapßi PMObu / A \ 3 PMObi g PMOND (:::),/Ã::;jq /Iî3. pMoodmb //\ /P\ .
PMocîfb Piviomfb Piviodmb F3C \ 'l Piviohy F>ivioece F>ivionpp PMocyp PMOmop pModmepip PMONppip Piviobipip piviosuc PMoglutarik PMolet Prviotivo' (SH) piviopros PMOpror Pivioca No. Adi Yapisi 853 PMOdca dCA/N\// O\ dCA = Kolat 854 PMoguanig› ww( @N /âî 3. 855 PMO”°S / \ go; by 856 PMOapnfos Dizilerde ve asagidaki tartismada, baglantilar için yukaridaki adlar siklikla kullanilir. Örnegin, bir PMOap" baglantisi içeren bir baz, ap"B olarak gösterilir, burada B, bir bazdir. Diger baglantilar benzer sekilde gösterilir. Buna ek olarak, kisaltilmis gösterimler kullanilabilir, örnegin, parantezler içindeki kisaltilmis gösterimler kullanilabilir (örnegin, 38, apnB'yi ifade eder). Diger kolaylikla tanimlanabilir kisaltmalar da kullanilabilir.
Yukaridaki bildirildigi üzere, mevcut açiklama ayrica, modifiye edilmis uç gruplari içeren bir oligomer de saglar. Basvuru sahipleri, oligomerin 3' ve/veya 5' ucunun çesitli kimyasal kisimlar ile modifikasyonunun, oligomerlere yararli terapötik özellikler (örnegin, arttirilmis hücresel alim, potens ve/veya doku dagilimi, vb.) sagladigini bulmustur. Çesitli uygulamalarda, modifiye edilmis uç gruplari, bir hidrofobik kismi içerirken, diger uygulamalarda, modifiye edilmis uç gruplari bir hidrofilik kismi içerir.
Modifiye edilmis uç gruplari, yukarida tarif edilen baglantilar ile veya bunlar olmadan bulunabilir. Örnegin, bazi uygulamalarda, oligomerler bir veya birden fazla modifiye edilmis uç grup ve (A) tipi baglantilar, örnegin, burada X'in, -N(CH3)2 oldugu baglantilar, içerir. Diger uygulamalarda, oligomerler bir veya birden fazla modifiye edilmis uç grup ve (B) tipi baglantilar, örnegin, burada X'in, 4-aminopiperidin-1-il (yani, APN) oldugu baglantilar, içerir. Daha baska uygulamalarda, oligomerler bir veya birden fazla modifiye edilmis uç grup ve (A) ve (B) baglantilarinin bir karisimini içerir. Örnegin, oligomerler, bir veya birden fazla modifiye edilmis uç grup (örnegin, tritil veya trifenil asetil) ve burada X'in, -N(CH3)2 oldugu baglantilar ve burada X'in, 4-aminopiperidin-1-il oldugu baglantilar içerebilir. Modifiye edilmis uç gruplarin ve modifiye edilmis baglantilarin diger kombinasyonlari da oligomerlere olumlu terapötik özellikler saglar.
Bir uygulamada, uç modifikasyonlar içeren oligomerler asagidaki yapiya (XVlI) veya bunlarin bir tuzuna veya izomerine sahiptir: l 5' ucu burada X, W ve Y, (A) ve (B) baglantilarinin herhangi biri için yukarida tanimlandigi sekildedir ve: R”, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde yoktur, hidrojendir veya 01-05 alkildir; R18 ve R19, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde yoktur, hidrojendir, bir hücreye-nüfuz etme peptididir, bir dogal veya dogal-olmayan amino asittir, C2- C30 alkilkarbonildir, -C(=O)OR21'dir veya Rzo'dir; R20 is, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde guanidinildir, heterosiklildir, C1- alkilkarbonildir, Cs-Cg sikloalkilkarbonildir, 03-05 sikloalkilalkilkarbonildir, 07-030 arilkarbonildir, 07-030 aralkilkarbonildir, C2-C30 alkiloksikarbonildir, Ca-Cg sikloalkiloksikarbonildir, C7-C30 ariloksikarbonildir, Ca-Cso aralkiloksikarbonildir veya -P(=O)(R22)2'dir; B, bir baz-eslesme kISmidir; L1, alkil, hidroksil, alkoksi, alkilamino, amid, ester, karbonil, karbamat, fosforodiamidat, fosforoamidat, fosforotiyoat, piperazin ve fosfodiester arasindan seçilen baglar içeren en fazla 18 atom uzunlugundaki bir opsiyonel baglayicidir ve x, 0 veya daha büyük olan bir tam sayidir; ve burada R18'in veya R19'un en az biri, Rzo'dir; ve burada R17'nin ve R18'in her ikisinin de bulunmamasi kaydiyla ve R18'in veya R19'un en az biri, R2O'dir.
Modifiye edilmis uç gruplari olan oligomerler, herhangi bir sayida (A) ve (B) tipi baglantilar içerebilir. Örnegin, oligomerler yalnizca (A) tipi baglanti içerebilir. Örnegin, her bir baglanti içinde X, -N(CH3)2 olabilir. Alternatif olarak, oligomerler yalnizca (B) baglantisi içerebilir. Belirli uygulamalarda, oligomerler, (A) ve (B) baglantilarinin bir karisimini, örnegin, 1 ila 4 araliginda (B) tipi baglantinin ve baglantilarin kalaninin (A) tipi oldugu bir karisimi, içerir. Bu baglamda baglantilar, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, burada X'in (B) tipi için aminopiperidinil ve (A) tipi için dimetil amino oldugu baglantilari, içerir.
Bazi uygulamalarda, R”, yoktur. Bazi uygulamalarda, R”, hidrojendir. Bazi uygulamalarda, R”, C1-Cç,` alkildir. Bazi uygulamalarda, R”, metildir. Daha baska uygulamalarda, R”, etildir. Bazi uygulamalarda, R”, C3 alkildir. Bazi baska uygulamalarda, R”, izopropildir. Diger uygulamalarda, R", C4 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R”, 05 alkildir. Bazi baska uygulamalarda, R”, Cs alkildir.
Diger uygulamalarda, R18, yoktur. Bazi uygulamalarda, R18, hidrojendir. Bazi uygulamalarda, R18, asagida daha detayli bir sekilde tarif edildigi üzere bir hücreye- nüfuz etme peptididir. Bazi uygulamalarda, R“, bir dogal veya dogal-olmayan amino asittir, örnegin, trimetilglisindir. Bazi uygulamalarda, R“, RZÜ'dir.
Diger uygulamalarda, R19, yoktur. Bazi uygulamalarda, R19, hidrojendir. Bazi uygulamalarda, R19, asagida daha detayli bir sekilde tarif edildigi üzere bir hücreye- nüfuz etme peptididir. Bazi uygulamalarda, R19, bir dogal veya dogal-olmayan amino asittir, Örnegin, trimetilglisindir. Bazi uygulamalarda, R19, -C(=O)OR17'dir, örnegin, R19, asagidaki yapiya sahip olabilir: Diger uygulamalarda, R18 veya R19, C2-C30 alkilkarbonildir, örnegin, - C(=O)(CH2)nC02H'dir, burada n, 1 ila 6 araligindadir, örnegin, 2'dir. Diger örneklerde, R18 veya R19, asetildir.
Bazi uygulamalarda, RZO, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde guanidinildir, heterosiklildir, C1-Cao alkildir, Cs-Ca sikloalkildir; Cß-C30 arildir, C7-030 aralkildir, Ca-Cgo alkilkarbonildir, Cs-Cg sikloalkilkarbonildir, C3-C3 sikloalkilalkilkarboniIdir, C5-C30 sikloalkiloksikarbonildir, C7-C30 ariloksikarbonildir, Ca-Cao aralkiloksikarbonildir, - C(=O)OR21'dir veya -P(=O)(R22)2'dir, burada R21, bir veya birden fazla aoksijen veya hidroksil kismi veya bunlarin kombinasyonlarini içeren 01-030 alkildir ve her bir R22, C6- C12 ariloksidir.
Belirli diger uygulamalarda, R19, -C(=O)OR21'dir ve R”, hidrojendir, guanidinildir, heterosiklildir, C1-C30 alkildir, C3-Cs sikloalkildir; Cs-Cso arildir, C3-C30 alkilkarbonildir, C3- Cs sikloalkilkarbonildir, Cs-Cs sikloalkilalkilkarbonildir, C7-Cao arilkarbonildir, C7-C30 aralkilkarbonildir, Cz-Cso alkiloksikarbonildir, Ca-Ca Sikloalkiloksikarbonildir, C7-C30 ariloksikarbonildir, Ca-Cao aralkiloksikarbonildir veya -P(=O)(R22)2'dir, burada her bir R22, 05-012 ariloksidir.
Diger uygulamalarda, RZÜ, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde guanidinildir, heterosiklildir C1-C30 alkildir, Cs-Cs sikloalkildir, Ce-Cao arildir, C3-C30 alkilkarbonildir, Ca- Cs sikloalkilkarbonildir, Ca-Cs sikloalkilalkilkarbonildir, C7-C30 arilkarbonildir, C7-C30 ariloksikarbonildir, Cs-Cso aralkiloksikarbonildir veya -P(=O)(R22)2'dir. Böyleyken diger örneklerde, RZO, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde guanidinildir, heterosiklildir, aralkilkarbonildir, C2-C30 alkiloksikarbonildir, C3-Cg sikloalkiloksikarbonildir, 07-030 ariloksikarbonildir, C8-C30 aralkiloksikarbonildir veya -P(=O)(R22)2'dir.
Bazi uygulamalarda, RZÜ, guanidinildir, örnegin, mono metilguanidinildir veya dimetilguanidinildir. Diger uygulamalarda, RZO, heterosiklildir. Örnegin, bazi uygulamalarda, RZO, piperidin-4-ildir. Bazi uygulamalarda, piperidin-4-il, tritil veya 800 gruplari ile sübstüte edilir. Diger uygulamalarda, R”, Cs-Cs sikloalkildir. Diger uygulamalarda, R2”, C5-C30 arildir.
Bazi uygulamalarda, R20, C7-C30 arilkarbonildir. Örnegin, bazi uygulamalarda, R”, asagidaki yapiya (XVIII) sahiptir: burada R23, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, halodur, 01-030 heteroarildir, heterosiklildir veya heterosiklalkildir ve burada bir R23, bir heterosiklil halkasi olusturmak için bir baska R23 ile birlesebilir. Bazi uygulamalarda, en az bir R23, hidrojendir, örnegin, bazi uygulamalarda, her bir R23, hidrojendir. Diger uygulamalarda, en az bir R23, 01-030 alkoksidir, örnegin, bazi uygulamalarda, her bir R23, metoksidir.
Diger uygulamalarda, en az bir R23, heteroarildir, örnegin, bazi uygulamalarda, en az bir R23, asagidaki yapilarin (XVIIla) veya (XVIIIb) birine sahiptir: (XVIIIH) (XVIIlbl Daha baska uygulamalarda, bir R23, bir heterosiklil halkasi olusturmak için bir baska R23 ile birlesebilir. Örnegin, bir uygulamada, RZO, 5-karboksifloreseindir.
Diger uygulamalarda, R2”, 07-030 aralkilkarbonildir. Örnegin, çesitli uygulamalarda, RZO, asagidaki yapilarin (XlX), (XX) veya (XXl) birine sahiptir: burada R23, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, halodur, C1-C30 alkildir, C1-C30 alkoksidir, C1-C30 alkiloksikarbonildir, C7-C30 aralkildir, arildir, heteroarildir, heterosiklildir veya heterosiklalkildir, burada bir R23, bir heterosiklil halkasi olusturmak için bir baska R23 ile birlesebilir, X, -OH'dir veya halodur ve m, 0 ila 6 araligindaki bir tam sayidir. Bazi spesifik uygulamalarda, m, 0'dir. Diger uygulamalarda, m, 1 iken, diger uygulamalarda, m, 2'dir. Diger uygulamalarda, en az bir R23, hidrojendir, örnegin, bazi uygulamalarda, her bir R23, hidrojendir. Bazi uygulamalarda, X, hidrojendir. Diger uygulamalarda, X, -OH'dir. Diger uygulamalarda, X, Cl'dir. Diger uygulamalarda, en az bir R23, 01-030 alkoksidir, örnegin, metoksidir.
Daha baska uygulamalarda, RZO, 07-030 aralkildir, örnegin, tritildir. Diger uygulamalarda, RZÜ, metoksi tritildir. Bazi uygulamalarda, RZO, asagidaki yapiya (XXII) sahiptir: burada R23, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, halodur, C1-C30 alkildir, C1-Cso alkoksidir, 01-030 alkiloksikarbonildir, C7-C30 aralkildir, arildir, heteroarildir, heterosiklildir veya heterosiklalkildir ve burada bir R23, bir heterosiklil halkasi olusturmak için bir baska R23 ile birlesebilir. Örnegin, bazi uygulamalarda, her bir R23, hidrojendir. Diger uygulamalarda, en az bir R23, C1-030 alkoksidir, örnegin, metoksidir.
Daha baska uygulamalarda, R”, C7-C30 aralkildir ve R”, asagidaki yapiya (XXIII) sahiptir: Bazi uygulamalarda, en az bir R23, halodur, örnegin, klorodur. Bazi baska uygulamalarda, bir R23, para pozisyonunda klorodur.
Diger uygulamalarda, R2”, C1-C30 alkildir. Örnegin, bazi uygulamalarda, RZO, bir C4-C20 alkildir ve opsiyonel olarak bir veya birden fazla ikili bag içerir. Örnegin, bazi uygulamalarda, R2°, bir üçlü bag, örnegin, bir uç üçlü bag, içeren bir C4-1o alkildir. Bazi uygulamalarda, RZÜ, hekzin-6-ildir. Bazi uygulamalarda, RZO, asagidaki yapilarin (XXIV), (XXV), (XXVI) veya (XXVII) birine sahiptir: CH3 \ CH3 3)) Daha baska uygulamalarda, R20_ bir Cs-Cao alkilkarbonildir, örnegin, bir C3-C10 alkil karbonildir. Bazi uygulamalarda, RZÜ, -C(=O)(CH2)pSH'dir veya -C(=O)(CH2)pSSHet'tir, burada p, 1 ila 6 araligindaki bir tam sayidir ve Het, bir heteroarildir. Örnegin, p, 1 olabilir veya p, 2 olabilir. Bir baska örnekte, Het, piridinildir, örnegin, piridin-2-ildir. Diger uygulamalarda, C3-C30 alkilkarbonil bir ilave oligomer ile sübstüte edilir, örnegin, bazi uygulamalarda, oligomer 3' pozisyonunda oligomeri bir baska oligomerin 3' pozisyonuna baglayan bir C3-C30 alkil karbonil içerir. Bu tarz uç modifikasyonlari mevcut açiklamanin kapsamina dahil edilir.
Diger uygulamalarda, RZO, bir arilfosforil kismi, örnegin, trifenil fosforil, ile ilaveten sübstüte edilen bir Ca-Cao alkil karbonildir. Bu tarz R2° gruplarinin örnekleri Tablo 2'deki yapi 33'ü içerir.
Diger örneklerde, R20. Ca-Cs sikloalkilkarbonildir, örnegin, 05-07 alkil karbonildir. Bu uygulamalarda, R20, asagidaki yapiya (XXVIII) sahiptir: burada R23, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, halodur, 01-030 heteroarildir, heterosiklildir veya heterosiklalkildir ve burada bir R23, bir heterosiklil halkasi olusturmak için bir baska R23 ile birlesebilir. Bazi uygulamalarda, R”, heterosiklilalkildir, örnegin, bazi uygulamalarda, R23, asagidaki yapiya sahiptir: Bazi baska uygulamalarda, R2“, Ca-Ca sikloalkilaIkilkarbonildir. Diger uygulamalarda, RZO, Cz-Cso alkiloksikarbonildir. Diger uygulamalarda, RZO, C3-C8 sikloalkiloksikarbonildir. Diger uygulamalarda, RZO, C7-C30 ariloksikarbonildir. Diger uygulamalarda, R20, Cs-Cso aralkiloksikarbonildir. Diger uygulamalarda, RZÜ, - P(=O)(R22)2'dir, burada her bir R2?, Cö-C12 ariloksidir, örnegin, bazi uygulamalarda R2“, asagidaki yapiya (C24) sahiptir: Diger uygulamalarda, RZO, bir veya birden fazla halo atomu içerir. Örnegin, bazi uygulamalarda, R2°, yukaridaki R2° kisimlarinin herhangi birinin bir perfloro analogunu içerir. Diger uygulamalarda, R”,p-trifluorometilfenildir, triflorometiltritildir, perfloropentildir veya pentaflorofenildir.
Bazi uygulamalarda, 3' ucu, bir modifikasyon içerir ve diger uygulamalarda, 5' ucu, bir modifikasyon içerir. Diger uygulamalarda, hem 3' hem de 5' uçlari modifikasyonlar içerir. Bu dogrultuda, bazi uygulamalarda, R18, yoktur ve R19, Rzo'dir. Diger uygulamalarda, R19, yoktur ve R18, R2O'dir. Daha baska uygulamalarda, R18'in ve R19'un her biri Rzo'dir.
Bazi uygulamalarda, oligomer, bir 3' veya 5' modifikasyonuna ek olarak bir hücreye- nüfuz etme peptidi içerir. Bu dogrultuda, bazi uygulamalarda, R19, bir hücreye-nüfuz etme peptididir ve R“, R2°'dir. Diger uygulamalarda, R”, bir hücreye-nüfuz etme peptididir ve R”, Rzo'dir. Yukaridakilerin ilave uygulamalarinda, hücreye-nüfuz etme peptidi, bir arjinin açisindan zengin peptittir.
Bazi uygulamalarda, 5' ucu grubunu (yani, R19) oligomere baglayan baglayici L1, mevcut olabilir veya olmayabilir. Baglayicinin bunun 5' ucu grubunu oligomere baglama yetisini muhafaza etmesi kaydiyla ve baglayicinin oligomerin bir dizi spesifik sekilde bir hedef diziyi baglama yetisine müdahale etmemesi kaydiyla, baglayici çok sayida fonksiyonel grup ve uzunluk içerir. Bir uygulamada, L, fosforodiamidat ve piperazin baglari içerir. Örnegin, bazi uygulamalarda, L, asagidaki yapiya (XXIX) sahiptir: N ”3-0 burada R24, yoktur, hidrojendir veya C1-Cs alkildir. Bazi uygulamalarda, R24, yoktur.
Bazi uygulamalarda, R24, hidrojendir. Bazi uygulamalarda, R24, Ci-Ce alkildir. Bazi uygulamalarda, R24, metildir. Diger uygulamalarda, R24, etildir. Daha baska uygulamalarda, R“, 03 alkildir. Bazi baska uygulamalarda, R“, izopropildir. Daha baska uygulamalarda, R“, 04 alkildir. Bazi uygulamalarda, R24, C5 alkildir. Daha baska uygulamalarda, R24, Cs alkildir.
Daha baska uygulamalarda, RZO, Cs-C30 alkilkarbonildir ve R”, asagidaki yapiya (XXX) sahiptir: burada R25, hidrojendir veya -Sst'dir, burada st, hidrojendir, C1-Cso alkildir, heterosiklildir, arildir veya heteroarildir ve q, 0 ila 6 araligindaki bir tam sayidir.
Yukaridakilerin herhangi birinin ilave uygulamalarinda, R”, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, halodur, C1-Cso alkildir, C1-C30 alkoksidir, arildir, heteroarildir, heterosiklildir veya heterosiklalkildir.
Bazi baska uygulamalarda, oligomerin yalnizca 3' ucu, yukarida bildirilen gruplarin birine konjuge edilir. Bazi baska uygulamalarda, oligomerin yalnizca 5' ucu, yukarida bildirilen gruplarin birine konjuge edilir. Diger uygulamalarda, hem 3' hem de 5' uçlari yukarida bildirilen gruplarin birini içerir. Uç grup, yukarida bildirilen gruplarin herhangi birinden veya Tablo 4'te gösterilen spesifik gruplarin herhangi birinden seçilebilir.
Tablo 4. Temsili Uç Gruplar No. Adi Yapisi C1 Trimetoksibenzoil 5 l \ fe): H3CO / 02 9-fl0ren-karb0ksil 4-karbazolilbenzoil 4-indazolil0nbenzoil Farnesil Geranil Prenil Difenilasetil -7 / / / CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 ' Klorodifenilasetil Hidroksidifenilasetil Trifenilpropiyonil Trifenilpropil Trifenilasetil Metoksitritil (MeOTr) Metilsüksinimidilsiklohekzoil Tiyoasetil COCH2CH2$SPy Guanidinil Trimetilglisin Lau roil Trietilenglikoloil (E63) Süksinikasetil Difenilfosforil Piperidin-4-il Tritilpiperidin-4-il BOC-Piperidin-4-il Hekzin-G-il -karboksifloresein Benzhidril p-Klorobenzhidril 032 Piperazinil (pip) CS3 Trifenilfos C34 Dimerize edilmis Peptit Tasiyicilar Bulusa göre, söz konusu oligomer, oligomerin hücrelere tasinmasini arttirmak için etkili olan bir hücreye-nüfuz etme peptidi tasima kismina konjuge edilir. Örnegin, bazi uygulamalarda, peptit tasiyici kisim, bir arjinin açisindan zengin peptittir. Ilave uygulamalarda, tasima kismi, oligomerin 5' veya 3' ucuna tutturulur. Bu tarz peptit uçlarin birine konjuge edildiginde, akabinde karsi uç burada tarif edildigi üzere bir Oligo = bir ilave oligomer modifiye edilmis uç gruba ilave konjugasyon için müsaittir.
Yukaridaki için bazi uygulamalarda, peptit tasima kismi, X' alt-birimleri, Y' alt-birimleri ve Z' alt-birimleri arasindan seçilen 6 ila 16 alt-birim içerir, (a) her bir X' alt-birimi, bagimsiz bir sekilde Iizini, arjinini veya bir arjinin analogunu temsil eder, söz konusu analog, R33N=C(NH2)R34 yapisinin bir yan zincirini içeren bir katyonik oi-amino asittir, burada R33, H'dir veya R'dir; R34, R35'tir, NH2'dir, NHR'dir veya NR34'tür, burada R35, düsük alkildir veya düsük alkenildir ve ilaveten oksijen veya nitrojen içerebilir; R33 ve R34 birlikte bir halka olusturabilir; ve yan zincir söz konusu amino aside R33 veya R34 vasitasiyla baglanir; (b) her bir Y' alt-birimi, bagimsiz bir sekilde bir nötral amino asidi -C(O)-(CHR)n-NH- temsil eder, burada n, 2 ila 7 araligindadir ve her bir R, bagimsiz bir sekilde H'dir veya metildir; ve (o) her bir 2' alt-birimi, bagimsiz bir sekilde bir nötral aralkil yan zincirine sahip olan bir a-amino asidi temsil eder; burada peptit, (X'Y'X')p, (X'Y')m ve (X'Z'Z')p'nin biri ile temsil edilen bir diziyi içerir, burada p, 2 ila 5 araligindadir ve m, 2 ila 8 araligindadir.
Seçilmis uygulamalarda, her bir X' için, yan zincir kismi, amino asit alt-birimi arjininde (Arg) oldugu gibi, guanidildir. Ilave uygulamalarda, her bir Y', -CO-(CH2)n-CHR-NH-'dir, burada n, 2 ila 7 araligindadir ve R, H'dir. Örnegin, n, 5 oldugunda ve R, H oldugunda, Y', burada Ahx olarak kisaltilan, bir 6-amin0hekzan0ik asit alt-birimidir; n, 2 oldugunda ve R, H oldugunda, Y', bir ß-alanin alt-birimidir.
Belirli uygulamalarda, bu tipin peptitleri, tek Y' alt-birimleri ile dönüsümlü olarak bulunan arjinin dimerleri içerenleri içerir, burada Y', Ahx'tir. Örnekler, (RY'R)p formülüne veya (RRY')p formülüne sahip olan peptitleri içerir, burada Y', Ahx'tir. Bir uygulamada, Y', bir 6-aminohekzanoik asit alt-birimidir, R, arjinindir ve p, 4'tür.
Ilave bir uygulamada, her bir Z', fenilalanindir ve m, 3'tür veya 4'tür.
Bazi uygulamalarda, konjuge edilmis peptit, oligomerin bir ucuna bir baglayici Ahx-B vasitasiyla baglanir, burada Ahx, bir 6-aminohekzan0ik asit alt-birimidir ve B, bir [3- alanin alt-birimidir.
Seçilmis uygulamalarda, her bir X' için, yan zincir kismi bagimsiz bir sekilde, guanidilden (HN=C(NH2)NH-), amidinilden (HN=C(NH2)C-), 2-aminodihidropirimidilden, 2-aminotetrahidropirimidilden, 2-amin0piridinilden ve 2-aminopirimid0nilden olusan gruptan seçilir ve bu tercihen, guanidilden ve amidinilden seçilir. Bir uygulamada, yan zincir kismi, amino asit alt-birimi arjininde (Arg) oldugu gibi, guanidildir.
Bazi uygulamalarda, Y' alt-birimleri, süreklidir, yani, Y' alt-birimleri arasina X' alt- birimleri girmez veya X' alt-birimleri arasina tek bir sekilde aralikli konumlandirilmaz.
Bununla birlikte, bazi uygulamalarda, baglama alt-birimi, Y' alt-birimleri arasinda olabilir. Bir uygulamada, Y' alt-birimleri peptit tasiyicinin bir ucundadir; diger uygulamalarda bunlarin iki yaninda X' alt-birimleri yer alir. Ilave uygulamalarda, her bir Y', -CO-(CH2)n-CHR-NH-'dir, burada n, 2 ila 7 araligindadir ve R, H'dir. Örnegin, n, 5 oldugunda ve R, H oldugunda, Y', burada Ahx olarak kisaltilan bir 6-aminohekzan0ik asit alt-birimidir. Bu grubun seçilmis uygulamalarinda, her bir X', bir arjinin alt-biriminde oldugu gibi, bir guanidil yan zincir kismi içerir. Bu tipin emsal peptitleri, tek Y' alt- birimleri ile dönüsümlü olarak bulunan arjinin dimerleri içerenleri içerir, burada Y', tercihen Ahx'tir. Örnekler, (RY'R)4 formülüne veya (RRY')4 formülüne sahip olan peptitleri içerir, burada Y', tercihen Ahx'tir. Bazi uygulamalarda, nükleik asit analogu, bir uç Y' alt-birimine, tercihen C-ucundan, baglanir. Diger uygulamalarda, baglayici, AhxB yapisidir, burada Ahx, bir 6-aminohekzanoik asit alt-birimidir ve B, bir ß-alanin alt- Yukarida tarif edildigi üzere peptit tasima kisimlarinin, tutturulmus tasima kismi yoklugunda oligomerin alimina kiyasla ve Y' hidrofobik alt-birimlerinden yoksun olan bir tutturulmus tasima kismi ile alima kiyasla tutturulmus oligomerin hücreye girisini büyük ölçüde arttirdigini gösterilmistir. Bu tarz arttirilmis alim, Y' hidrofobik alt-birimlerinden yoksun olan bir tutturulmus tasima kismi ile ajanin alimina kiyasla, bilesigin memeli hücrelerine aliminda en az bir iki-katlik artis veya diger uygulamalarda, bir dört-katlik artis ile kanitlanabilir. Bazi uygulamalarda, alim, konjuge edilmis bilesige kiyasla, en az yirmi kat veya en az kirk kat arttirilir.
Peptit tasima kisminin bir ilave yarari, bunun bir antisens oligomer ve bunun hedef nükleik asit dizisi arasindaki bir dubleksi stabilize etmesine yönelik beklenen yetisidir.
Teoriye bagli kalmadan, bunun bir dubleksi stabilize etme yetisi, pozitif yüklü tasima kismi ve negatif yüklü nükleik asit arasindaki elektrostatik etkilesimden kaynaklanabilir.
Bazi uygulamalarda, tasiyici içindeki yüklü alt-birimlerin sayisi, yüklü alt-birimlerin çok daha yüksek bir sayisi dizi özdesliginde bir düsüse yol açabileceginden, yukarida bildirildigi üzere, 14'ten daha azdir veya diger uygulamalarda, 8 ila 11 araligindadir.
Mevcut açiklama ayrica, peptit tasima kisimlarinin ve nükleik asit analoglarinin konjugatlarini da katar. Yukarida bildirildigi üzere, peptit tasima kisimlari genel olarak, nükleik asit analoglarinin hücre nüfuzunu arttirmak için etkilidir. Basvuru sahipleri ayrica, nükleik asit analogu ve peptit tasima kisminin geri kalani arasinda (örnegin, tasiyici peptidin karboksi veya amino ucunda) bir glisin (G) veya prolin (P) amino asit alt-birimi içermenin, etkinlik ayni kalirken veya peptit tasima kismi ve nükleik asit analogu arasinda farkli baglantilari olan konjugatlara kiyasla iyilestirilirken, konjugatin toksisitesini azalttigini da kesfetmistir. Böylelikle, mevcut sekilde açiklanan konjugatlar diger peptit-oligomer konjugatlarina kiyasla bir daha iyi terapötik pencereye sahiptir ve daha çok umut vadeden ilaç adaylaridir.
Azaltilmis toksisiteye ek olarak, nükleik asit analogu ve tasiyici peptit arasinda bir glisin veya prolin amino asit alt-biriminin varliginin ilave avantajlar sagladigina inanilir. Örnegin, glisin ucuzdur ve herhangi bir rasemizasyon olasiligi olmadan nükleik asit analoguna (veya opsiyonel baglayiciya) kolaylikla kuple edilir. Benzer sekilde, prolin rasemizasyon olmadan kolaylikla kuple edilebilir ve ayrica heliks olusturuculari olmayan tasiyici peptitler de saglar. Prolinin hidrofobisitesi ayrica, tasiyicin peptidin hücrelerin lipit ikili-tabakasi ile etkilesimi açisindan da belirli avantajlar saglanabilir ve çok sayida prolin içeren tasiyici peptitler (Örnegin, bazi uygulamalarda) G-tetrapleks olusuma direnebilir. Son olarak, belirli uygulamalarda, prolin kismi bir arjinin amino asit alt-birimine bitisik oldugunda, arjinin-prolin amid bagi yaygin endopeptidazlar tarafindan yarilamadigindan, prolin kismi konjugatlara metabolik kararlilik saglar.
Bazi uygulamalarda, peptitlerin antisens oligonükleotidlere konjugasyonu, örnegin, bir peptit konjuge edilmis oligonükleotid, CPP ve antisens oligonükleotid arasinda baglayici olarak glisinden yararlanir. Örnegin, bulusun antisens oligonükleotidleri, bir arjinin açisindan zengin peptide, örnegin, (Arg)6Gly'ye, kuple edilebilir (bir oligonükleotide baglanmis 6 arjinin ve 1 glisin).. Bir örnek olarak, bu peptit bir PMO'ya konjuge edilebilir ve "Rö-G-PMO" olarak bilinir. Çesitli baglayicilar (C, G, P, Ahx, B) içeren ilave emsal arjinin açisindan zengin hücreye-nüfuz etme peptidi tasiyicilari asagida Tablo 5'te verilir. Yukarida Tablo 2'de açiklandigi üzere, bir tercih edilen hücreye-nüfuz etme peptidi tasiyicisi, bir glisin baglayici (RBG) vasitasiyla 3' ucundan bir PMO'ya konjuge edilmis SEQ ID NO: 45'tir.
RsG'nin 5' ucuna baglantisi da tercih edilen bir uygulamadir.
Tablo 5. Arjinin Açisindan Zengin Hücreye-Nüfuz Etme Peptidi Tasiyicilari ADI (GÖSTERIMI) DIZISI SEQ ID rTAT RRRQRRKKR 39 Tat RKKRRQRRR 40 R5F2R4 RRRRRFFRRRR 42 R4 RRRR 43 R5 RRRRR 44 R5 RRRRRR 45 R7 RRRRRRR 46 R8 RRRRRRRR 47 R9 RRRRRRRRR 48 ADI (GÖSTERIMI) DIZISI SEQ ID ASEQ lD NO.'Iarina tayin edilen diziler, baglanti kismi (örnegin, C, G, P, Ahx, B, AhxB, burada Ahx ve B sirasiyla, 6-aminohekzan0ik asidi ve beta-alanini ifade eder) içermez.
In Vitro Kullanim Yöntemleri Bir baska yönünde, bir veya birden fazla mRNA izorformunun ve/veya mutant proteinin ekspresyonunu yararli bir sekilde azaltmak için bir hücreyi veya dokuyu in vitro tedavi etmek için burada tarif edilen LMNA ve/veya HGPS-hedefli antisens oligonükleotidlerin kullaniminin yöntemleri mevcut bulusun baglaminda açiklanir. Mevcut bulusun antisens oligonükleotidleri tarafindan modüle edilebilen hücreler veya doku tercihen memeli hücreleridir veya daha tercihen insan hücreleridir. Bu tarz hücreler, örnegin, progerin eksprese eden hücreler, bir saglikli halde veya bir hastalikli halde olabilir.
Belirli yönlerinde, hücre, bir progeroid Iaminopati ile sonuçlanan, progerin eksprese eden bir hücredir.
Bundan dolayi genel olarak, anormal bir sekilde uçlari-birlestirilmis LMNA mRNA'sinin in vitro ekspresyonunu azaltmak için, bir hücreyi burada tarif edilen bir veya birden fazla antisens oligonükleotidi veya bunlari içeren bir bilesim ile temas ettirmeyi, böylece progerinin ekspresyonunu azaltmayi, içeren yöntemler mevcut bulusun baglaminda açiklanir. Bu ve ilgili yöntemler, burada tarif edilen ve teknikte bilinen mutant LMNA mRNA'si izoformlarinin herhangi birinin veya birden fazlasinin ekspresyonunu azaltmak için kullanilabilir.
In vitro yöntemler, farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyicilar ile kombinasyon halinde, oligonükleotidleri içeren bilesimleri kullanabilir. "Farmasötik olarak kabul edilebilir" ifadesi, saglam tibbi muhakeme kapsaminda, bir akla uygun yarar/risk orani ile orantili olarak, asiri toksisite, iritasyon, alerjik yanit veya baska problem veya komplikasyon olmadan hücreler ve/veya dokular ile temas halinde kullanim için uygun olan bilesikleri, materyalleri, bilesimleri ve/veya dozaj formlarini ifade etmek için burada kullanilir.
Burada kullanildigi sekliyle, "farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici" ifadesi, bir farmasötik olarak-kabul edilebilir materyal, bilesim veya vehikül, örnegin, bir sivi veya kati dolgu, diluent, eksipiyan, üretim yardimcisi (örnegin, yaglayici, talk magnezyum, kalsiyum veya çinko stearat veya sterik asit) veya çözücü enkapsüle etme materyali, anlamina gelir. Her bir tasiyici, formülasyonun diger içerik maddeleri ile uyumlu olma ve temas edilmekte olan hücreye veya dokuya zararli olmama anlaminda "kabul edilebilir" olmak zorundadir.
Farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyicilar görevi görebilen materyallerin bazi örnekleri, sinirlandirma olmaksizin, asagidakileri içerir: (1) seker, örnegin, Iaktoz, glikoz ve Sükroz; (2) nisastalar, örnegin, misir nisastasi ve patates nisastasi; (3) selüloz ve bunun türevleri, örnegin, sodyum karboksimetil selüloz, etil selüloz ve selüloz asetat; (4) toz haline getirilmis kitre; (5) malt; (6) jelatin; (7) talk; (8) eksipiyanlar, örnegin, kakao yagi ve süpozituvar mumlar; (9) sivi yaglar, örnegin, yer fistigi yagi, pamuk tohumu yagi, aspir yagi, susam yagi, zeytinyagi, misir yagi ve soya fasulyesi yagi; (10) glikoller, örnegin, propilen glikol; (11) polioller, örnegin, gliserin, sorbitol, mannitol ve polietilen glikol; (12) esterler, örnegin, etil oleat ve etil Iaurat; (13) agar; (14) tamponlama ajanlari, örnegin, magnezyum hidroksit ve alüminyum hidroksit; (15) aljinik tamponlu çözeltiler; (21) poliesterler, polikarbonatlar ve/veya polianhidritler; ve (22) farmasötik formülasyonlarda kullanilan diger toksik-olmayan uyumlu maddeler.
Yukaridaki bulusun, anlasilmanin berrakligi amaçlari için açiklama ve örnek yoluyla bazi detaylar ile tarif edilmis olmasina ragmen, bu bulusun ögretileri isiginda, ekli istemlerin kapsami içinde buna belirli degisimlerin ve modifikasyonlarin yapilabilecegi teknikte normal uzmanligi olan bir kisi tarafindan kolaylikla görülecektir. Asagidaki örnekler yalnizca örnek olarak gösterilir ve sinirlandirma olarak gösterilmez. Teknikte uzmanligi olan kisiler, esas olarak benzer sonuçlari üretmek için degistirilebilen veya modifiye edilebilen çesitli kritik-olmayan parametreleri kolaylikla fark edecektir.
DIZI LISTESI TABLOSU ADI DIZI SEQ ID LMNA ekzon 11 1 ADI DIZI SEQ ID L` %LIT`LILILII\(IT`Ã%LIF.1$LIIEI%L`I`ZIL$LÄIÇL5L17\(. L L \ HT`L L MT* HGPS ekzon 11 2 -nAGVLL JGL bLubbüGLJLL LLlGLJGL GL_ GLS GTC G(TGbJTGJALV r.TCîCCT `TG3CTÇ TT `TG; -.L:î'I`Li`l"î:^`\›.L`<_` _i"LL_` \L_` CLJL`Ã1LJLS IU“. L". _10 L. E_ "Cl -'1'l_`-î ADI DIZI SEQ ID Exo1OSD.25.87 CAGCGGCGGCTACCACTCACGTGGT 21 HsEx1O GCTACCACTCACGTGGTGGTGATGG-AcReG 35 HsEx10-apn GCapnTACCACaPWCACGaWTGGTG Gap“TGATGG 37 HsEx1 1 -apn GGGapnTCCACCCACCaPnTGGGCaPnTCCapnTGAG 38 rTAT RRRQRRKKR 39* Tat RKKRRQRRR 40* ADI DIZI SEQ ID R9F2 RRRRRRRRRFF 41* R5F2R4 RRRRRFFRRRR 42* R4 RRRR 43* R5 RRRRR 44* R7 RRRRRRR 46* R9 RRRRRRRRR 48* ÖRNEKLER HGPS HÜCRELERININ LMNA 'YI HEDEF ALAN ANTISENS OLIGONÜKLEO TIDLER KULLANILAN MUAMELESI Iki primer fibroblast, HGPS fibroblastlari (HGADFN167) ve kontrol fibroblastlari (HGFDFN168), kullanilmistir. HGPS ve kontrol hücreleri, yaklasik 10.000 hücre/göz olan yogunlukta bir 24-gözlü tabaga ekilmistir. Lamin-A pre-mRNA'sinin ekzonlari 11'e ve/veya 10'a hedeflenmis morfolino oligonükleotidleri, kültürlenmis HGPS hücrelerine serbest alim ile veya nükleofeksiyon (Amaxa, örnegin) ile münferit olarak uygulanmistir. Serbest alim için, hücreler 25 uM veya 50 uM veya 80 uM PMO oligonükleotid içeren bir vasat içinde 1-2 hafta boyunca kültürlenmistir. Bu hücreler akabinde anti-progerin veya anti-Iamin A/C antikorlari ile immünoflüoresans ile taranmistir. Progerin boyamanin flüoresans yogunluklari, Zeiss flüoresans mikroskobu ve bir SPOT programi kullanilarak kantifiye edilmistir. Deneyler, üç kopya halinde gerçeklestirilmistir ve progerini asagi yönde regüle etmede etkiler gösteren PMO'Iar ilave analiz için seçilmistir. Analiz progerin-spesifik primer ile kantitatif RT-PCR'yi ve anti-progerin antikorlari ile Western blotlama analizini içermistir.
LMNA 'YI HEDEF ALAN ANTISENS OLIGONÜKLEOTIDLER iLE MUAMELEYI TAKIBEN HGPS HÜCRELERININ IMMÜNOFL ÜORESANS BOYAMASI immünoflüoresans Boyama: immünoflüoresans için, hücreler 4-göz bölmeli Iamlara tohumlanmistir. %4 paraformaldehit/PBS içinde oda sicakliginda 15 dakika boyunca fiksasyondan sonra, hücreler oda sicakliginda 5 dakika boyunca %05 Triton X- 100/PBS ile geçirgen hale getirilmistir, bunu bloke etme çözeltisi içinde 4°C'de gece boyu inkübasyon izlemistir (Bloke etme çözeltisi: %4 BSA/TBS). Hücreler, sonraki gün oda sicakliginda 3 saat boyunca fare monoklonal anti-Iamin A/C (MAB3211, Chemicon) ve tavsan poliklonal anti-progerin (alisilagelmis peptit antikoru, Yenzm) ile boyanmistir. Primer antikorlar, Alexa Fluor-etiketli sekonder antikorlar (Invitrogen) ile saptanmistir. DAPI içeren Vectashield gömme vasati ile gömülmüs Iamlar, bir Zeiss flüoresans mikroskobu ile gözlenmistir. Maruziyet süreleri ve edinim ayarlari deneylerin her bir setinin baslangicinda belirlenmistir ve tüm muameleler için sabit tutulmustur.
Deneylerin sonuçlari Sekil 2'de izah edilir. Oligonükleotidlerin bir kaçi progerini anlamli bir sekilde asagi-yönde regüle etmistir.
LMNA'YI HEDEF ALAN ANTISENS OLIGONÜKLEOTIDLER ILE MUAMELEYI TAKIBEN HGPS HÜCRELERININ SDS-PAGE VE WESTERN BLOTLAMA ANALIZI SDS-PAGE ve Western Blotlama analizi.' Muamele edilmis hücreler toplanmistir, PBS ile iki kere durulanmistir ve akabinde Laemmli SDS-PAGE yükleme tamponu içinde Iize edilmistir. Numuneler. 95°C'de 15 dakika boyunca isitilmistir ve akabinde %10'Iuk SDS-PAGE jellerine yüklenmistir. Western blot analizi için oldugu gibi, proteinler nitroselüloz membranlara transfer edilmistir. Membranlar, 4°C'de gece boyu %5 süt/TBST ile bloke edilmistir ve %4 BSA/TBST içinde seyreltilmis primer antikorlar ile oda sicakliginda 1-3 saat boyunca inkübe edilmistir. TBST ile yikamalardan sonra, membranlar %1 süt/TBST içinde 1:5000 seyreltilmis sekonder antikorlar içinde oda sicakliginda 1 saat boyunca inkübe edilmistir. Kemilüminesans bir ECL western blotlama saptama kiti (Pierce) ile saptanmistir. Kullanilan primer antikorlar, fare monoklonal anti-lamin A/C'yi (MABB211, Chemicon), tavsan poliklonal anti-progerini (alisilagelmis peptit antikoru, Yenzm) ve tavsan poliklonal anti-aktini (Pan-aktin, Cell Signaling) içerir. Deneylerin sonuçlari Sekil 3'te izah edilir. karsilik gelen oligonükleotid, bunun LMNA'nin ekzon 11 kriptik uç-birlestirme yerinden uzaklastirilmis olmasina veya bununla kesismemesine ragmen, deneyde progerinin anlamli asagi-yönde regülasyonunu göstermistir.
LMNA 'YI HEDEF ALAN ANTISENS OLIGONÜKLEOTIDLER ILE MUAMELEYI TAKIBEN HGPS HÜCRELERININ KANTITA TIF RT-PCR ANALIZI Kantitatif RT-PCR: Kantitatif RT-PCR (qRT-PCR) deneyleri, oligonükleotid 699 (SEQ HGPS) progerinin, lamin A'nin ve ß-aktinin ekspresyon düzeylerini ölçmek için gerçeklestirilmistir. Tüm reaksiyonlar üreticinin talimatlarina göre SYBR Green mix (Qiagen) kullanilarak bir Applied Biosystems 7900HT Fast Real-Time PCR System üzerinde üç kopya halinde yürütülmüstür. Reaksiyon kosullari asagidaki sekildedir: 57°C'de 1 dakikalik; ve 72°C'de 45 saniyelik 40 siklus. ß-aktin ileri primeri için dizi, TCTTTGCAGCCACATTCCCG'dir ve geri primer, GGCTTGCGGGTGTTAAAAGC'dir.
Progerin/lamin A'yi çogaltmak için ileri primerin dizisi, GCAACAAGTCCAATGAGGACCA'dir. Progerin- ve Iamin A-spesifik geri primerler, amplifikasyon-refrakter mutasyon sistemi stratejine göre, özgüllügü arttirmak için sondaki bir önceki baza bir mutasyon uygulama ile, tasarlanmistir. Progerin-spesifik primer dizisi, CATGATGCTGCAGTTCTGGGGGCTCTGGAC'dir ve lamin A için bu, CATGATGCTGCAGTTCTGGGGGCTCTGGAT'dir. Deneylerin sonuçlari Sekil 4'te izah LMNA 'YI HEDEF ALAN ANTISENS OLIGONÜKLEOTIDLER ILE MUAMELEYI TAKIBEN HGPS HÜCRELERININ SDS-PAGE VE WESTERN BLOTLAMA ANALIZI SDS-PAGE ve Western Blot/ama ana/izi.' Muamele edilmis hücreler toplanmistir, PBS ile iki kere durulanmistir ve akabinde Laemmli SDS-PAGE yükleme tamponu içinde Iize edilmistir. Örnekler, 95°C'de 15 dakika boyunca isitilmistir ve akabinde %10'Iuk SDS- PAGE jellerine yüklenmistir. Western blot analizi için oldugu gibi, proteinler nitroselüloz membranlara transfer edilmistir. Membranlar, 4°C'de gece boyu %5 süt/TBST ile bloke edilmistir ve %4 BSA/TBST içinde seyreltilmis primer antikorlar ile oda sicakliginda 1-3 saat boyunca inkübe edilmistir. TBST ile yikamalardan sonra, membranlar %1 süt/TBST içinde 1:5000 seyreltilmis sekonder antikorlar içinde oda sicakliginda 1 saat boyunca inkübe edilmistir. Kemilüminesans bir ECL western blotlama saptama kiti (Pierce) ile saptanmistir. Kullanilan primer antikorlar, fare monoklonal anti-Iamin A/C'yi (MABS211, Chemicon), tavsan poliklonal anti-progerini (alisilagelmis peptit antikoru, Yenzm) ve yaban turpu peroksidazi (HRP)-konjuge edilmis anti-aktini (Sigma) içerir.
Deneylerin sonuçlari Sekil 5'te izah edilir. Oligonükleotid , bunun LMNA'nin ekzon 11 kriptik uç-birlestirme yerinden uzaklastirilmis olmasina ve bununla kesismemesine ragmen, progerinin bir asagi-yönde regülasyonuna ve lamin A'nin bir yukari-yönde regülasyonuna sebebiyet vermistir.
REFERANSLAR Cao, K., C. D. Blair, et al. (2011). "Progerin and telomere dysfunction collaborate to trigger cellular senescence in normal human fibroblasts.“ J Clin Invest.
Egholm, M., 0. Buchardt, et al. (1993). "PNA hybridizes to complementary oligonucleotides obeying the Watson-Crick hydrogen-bonding rules." Nature Kinali, M., V. ArechavaIa-Gomeza, et al. (2009). "Local restoration of dystrophin expression with the morpholino oligomer AVI-4658 in Duchenne muscular dystrophy: a single-blind, placebo-controlled, dose-escalation, proof-of-concept study." LLcet M 8(10): 918-28.
Osorio, F. G., O. L. Navarro, et al. (2011). "Splicing-directed therapy in a new mouse Scaffidi, P. and T. Misteli (2005). "Reversal of the cellular phenotype in the premature aging disease Hutchinson-Gilford progeria syndrome." Nat Med 11(4): 440-5.
Svasti, S., T. Suwanmanee, et al. (2009). "RNA repair restores hemoglobin expression DIZI LISTESI <110> Sarepta Therapeutics, Inc. <120> INSAN LMNA'SINI HEDEF ALAN OLIGONÜKLEOTID ANALOGLARI <160> 54 <170> Patentln versiyonu 3.5 <210> 1 < 211› 270 < 212› DNA < 213> Yapay <220> <400> 1 <210>2 < 211> 270 < 212› DNA < 213› Yapay <220> 999t99C89C <400> 2 <210>3 < 211> 25 < 212> DNA < 213› Yapay <220> <400> 3 <210> 4 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 4 <210> 5 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 5 <210> 6 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 6 <210>7 < 211> 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 7 <210> 8 < 211› 25 < 212› DNA < 213> Yapay <220> <400> 8 <210> 9 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 9 <210> 10 < 211› 25 < 212› DNA < 213> Yapay <220> <400> 10 <210> 11 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 11 <210> 12 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 12 <210> 13 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 13 <210> 14 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 14 <210> 15 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 15 <210> 16 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 16 <210> 17 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 17 <210> 18 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400› 18 <210> 19 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 19 <210> 20 < 211› 25 < 212> DNA < 213› Yapay <220> <400> 20 <210> 21 < 211› 25 < 212> DNA < 213› Yapay <220> <400> 21 <210> 22 < 211> 25 < 212> DNA < 213› Yapay <220> <400> 22 <210> 23 < 211› 25 < 212> DNA < 213› Yapay <220> <400> 23 <210> 24 < 211› 25 < 212> DNA < 213> Yapay <220> <400> 24 <210> 25 < 211› 25 < 212> DNA < 213> Yapay <220> <400> 25 <210> 26 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 26 <210> 27 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 27 <210> 28 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 28 <210> 29 < 211> 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 29 <210> 30 < 211› 25 < 212› DNA < 213> Yapay <220> <400> 30 <210> 31 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 31 <210> 32 < 211› 25 < 212› DNA < 213> Yapay <220> <400> 32 <210> 33 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 33 <210> 34 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <400> 34 <210> 35 < 211› 26 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <220> < 221› çesitli_özellik < 222› (26)..(26) < 223› n = tercih edilen bir hücreye nüfuz eden peptit transportörü <400> 35 <210> 36 < 211› 26 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <220> < 221› çesitli_özellik < 222› (26)..(26) < 223› n = tercih edilen bir hücreye nüfuz eden peptit transportörü <400> 36 <210> 37 < 211› 25 < 212› DNA < 213› Yapay <220> <220> < 221› çesitli_özellik < 222› (3)..(3) < 223› ri = bir apn alt birimler arasi bagi <220> < 221› çesitli_özellik < 222› (9)..(9) < 223› n = bir apn alt birimler arasi bagi <220> < 221› çesitli_özellik < 222› (14)..(14) < 223› n = bir apn alt birimler arasi bagi <220> < 221› çesitli_özellik < 222› (20)..(20) < 223› n = bir apn alt birimler arasi bagi <400> 37 <210> 38 < 211› 25 < 212› DNA < 213> Yapay <220> <220> < 221› çesitli_özellik < 222› (4)..(4) < 223› ri = bir apn alt birimler arasi bagi <220> < 221› çesitli_özellik < 222› (14)..(14) < 223› ri = bir apn alt birimler arasi bagi <220> < 221› çesitli_özellik < 222› (19)..(19) < 223› n = bir apn alt birimler arasi bagi <220> < 221› çesitli_özellik < 222› (22)..(22) < 223› n = bir apn alt birimler arasi bagi <400> 38 <210> 39 < 211› 9 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <400> 39 <210> 40 < 211› 9 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <400> 40 <210> 41 < 211› 11 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <400> 41 <210> 42 < 211› 11 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <400> 42 <210> 43 < 211› 4 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <400> 43 <210> 44 < 211› 5 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <400> 44 <210> 45 < 211› 6 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <400> 45 <210> 46 < 211› 7 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <400> 46 <210> 47 < 211› 8 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <400> 47 <210> 48 < 211› 9 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <400> 48 <210> 49 < 211› 16 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <220> < 221› MOD_RES < 222› (2)..(2) < 223› Xaa = Acp <220> < 221› MOD_RES < 222› (4)..(4) < 223› Xaa = Acp <220> < 221› MOD_RES < 222› (6)..(6) < 223› Xaa = Acp <220> < 221› MOD_RES < 222› (8)..(8) < 223› Xaa = Acp <220> < 221› MOD_RES < 222› (10)..(10) < 223> Xaa = Acp <220> < 221› MOD_RES < 222› (12)..(12) < 223› Xaa - Acp <220> < 221> MOD_RES < 222› (14)..(14) < 223› Xaa = Acp <220> < 221› MOD_RES <222>(16)116) < 223› Xaa = Acp <400> 49 1 5 10 15 <210> 50 < 211› 12 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <220> < 221› MOD_RES < 222› (2)..(2) < 223› Xaa - 6-aminohekzanoik asit <220> <22t>MOD_RES <222>(5›45) < 223> Xaa = 6-amin0hekzanoik asit <220> < 221› MOD_RES < 222› (8)..(8) < 223> Xaa = 6-amin0hekzanoik asit <220> < 221› MOD_RES < 222› (11)..(11) < 223› Xaa = ö-aminohekzanoik asit <400> 50 <210> 51 < 211› 15 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <220> < 221› MOD_RES < 222› (2)..(2) < 223› Xaa = 6-amin0hekzanoik asit <220> < 221› MOD_RES < 222› (5)..(5) < 223› Xaa = 6-aminohekzanoik asit <220> < 221› MOD_RES < 222› (8)..(8) < 223› Xaa = G-aminohekzanoik asit <220> < 221› MOD_RES < 222› (11)..(11) < 223› Xaa = 6-amin0hekzan0ik asit <220> < 221› MOD_RES < 222› (14)..(14) < 223› Xaa = ö-aminohekzanoik asit <400> 51 1 5 10 15 <210> 52 < 211› 12 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <220> < 221› MOD_RES < 222› (2)..(2) < 223› Xaa = 6-aminohekzanoik asit <220> < 221› MOD_RES < 222› (5)..(5) < 223› Xaa = beta-alanin <220> < 221› MOD_RES <222>(8)18) < 223› Xaa = ö-aminohekzanoik asit <220> < 221> MOD_RES < 222› (11)..(11) < 223› Xaa = beta-alanin <400> 52 <210> 53 < 211› 15 < 212› PRT < 213› Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Transportör <400> 53 Arg Ala Arg Arg Ala Arg Arg Ala Arg Arq Ala Atq Phe Phe Cys 1 5 10 15 <210> 54 < 211› 15 < 212> PRT < 213> Yapay <220> < 223› Arjininden Zengin Hücreye Nüfuz Eden Peptit Transportörü <400> 54 Arg Gly Arg Arg Gly Arg Arg Gly Arg Arg Gly Arq Phe Phe Cys

Claims (1)

  1. ISTEMLER . Anormal bir sekilde uçlari-birlestirilmis LMNA mRNA'sinin ekspresyonunu azaltmak için bir antisens oligonükleotid olup, özelligi oligonükleotidin bir büyük ölçüde yüksüz omurgaya sahip olmasi ve morfolino alt-birimlerinden ve bir alt- birimin bir morfolino nitrojenini bir bitisik alt-birimin bir 5'-ekzosiklik karbonuna birlestiren fosfor-içeren alt-birim-arasi baglantilardan olusturulmasi, 25-40 baz içermesi ve hedefleme dizisi içermesidir, burada antisens oligonükleotid, bir hücreye-nüfuz etme peptidine ve baglayici kisma kovalent olarak tutturulur, burada baglayici kisim, glisin, sistein, prolin, 6- aminohekzanoik asit (Ahx), ß-alanin (B) ve Ahx-B arasindan seçilir ve hücreye- nüfuz etme peptidi SEQ ID NO.'Iari: 39-54 araligindan seçilir. . Istem 1'e göre oligonükleotid olup, özelligi oligonükleotid içindeki morfolino alt- birimlerinin, asagidaki yapiya uygun olarak fosfor-içeren baglantilar ile birlestirilmesidir: burada 2, S'dir veya O'dur, X = NR1R2'dir veya ORB'dir, Y = O'dur veya NR7'dir, Pj, bir pürin veya pirimidin bazi-eslesme kismidir, ve söz konusu her bir baglanti asagidakilerden seçilir: (a) yüksüz baglanti (a), burada Rl'in, R2'nin, Rö'nin ve R7'nin her biri bagimsiz bir sekilde hidrojen ve düsük alkil arasindan seçilir; (b1) katyonik baglanti (b1), burada X = NRlRZ'dir ve Y: O'dur ve NR1R2, bir opsiyonel sübstüte edilmis piperazino grubunu temsil eder, böylece R1R2 = - CHRCHRN(R3)(R4)CHRCHR-'dir, burada her bir R4, H'dir, CH3'IÜI' veya yoktur ve R3, H, düsük alkil, C(=NH)NH2, Z-L-NHC(=NH)NH2 ve [C(O)CHR'NH]mH arasindan seçilir, burada 2, karbonil (C(O))'dur veya bir dogrudan bagdir, L, alkil, alkoksi ve alkilamino arasindan seçilen baglara sahip olan en fazla 18 atom uzunlugundaki bir opsiyonel baglayicidir, R', bir dogal olusumlu amino asidin bir yan zinciridir veya bunun bir- veya iki-karbonlu homologudur ve m, 1 ila 6 araligindadir; (b2) katyonik baglanti (b2), burada X = NR1R2'dir ve Y = O'dur, R1 = H'dir veya CH3'tür ve R2 = LNR3R4R5'tir, burada L, R3 ve R4, yukarida oldugu sekilde tanimlanir ve R5, H'dir, düsük alkildir veya düsük (alkoksi)alkildir; ve (b3) katyonik baglanti (b3), burada Y = NR7'dir ve X = ORö'dir ve R7 = LNR3R4R5'tir, burada L, R3 ve R4 ve R5, yukarida oldugu sekilde tanimlanir ve R6, H'dir veya düsük alkildir; ve en az bir söz konusu baglanti, katyonik baglantilar (b1), (b2) ve (b3) arasindan seçilir. . istem 2'ye göre oligonükleotid olup, özelligi (i) R1'in ve Rz'nin her birinin, (a) tipi baglantilarinda metil olmasi; (ii) en az bir baglantinin, (b1) tipinde olmasidir, burada her bir R, H'dir, R4, H'dir, CHg'tür veya bir elektron çiftidir ve R3, H, CH3, C(=NH)NH2 ve C(O)-L- (iii) en az bir baglanti, (b1) tipindedir. burada her bir R. H'diri R4, bir elektron çiftidir ve R3, C(=NH)NH2 ve C(O)-L-NHC(=NH)NH2 arasindan seçilir; (iv) en az bir baglanti, (b1) tipindedir, burada her bir R, H'dir, R4, bir elektron çiftidir ve R3, C(=NH)NH2 ve C(O)-L-NHC(=NH)NH2 arasindan seçilir ve opsiyonel olarak burada R3, C(O)-L-NHC(NH)NH2'dir ve L, -(CH2)n- yapisina sahip olan bir hidrokarbondur, burada n, 1 ila 12 araligindadir; veya (v) en az bir baglanti, (b1) tipindedir, burada her bir R, H'dir ve R3'ün ve R4'ün her biri bagimsiz bir sekilde H'dir veya CH3'tür. Istemler 1 - 3'ten herhangi birine göre oligonükleotid olup, özelligi hücreye-nüfuz etme peptidinin bunun C-ucundan baglayici kisim vasitasiyla oligonükleotidin 5' ucuna veya 3' ucuna tutturulmasidir. Bir antisens oligonükleotid olup, özelligi oligonükleotidin anormal bir sekilde uçlari-birlestirilmis LMNA mRNA`sinin ekspresyonunu azaltmasidir, oligonükleotid bir omurga içerir, omurga, alt-birim-arasi baglantilar ile birlestirilmis bir morfolino halka yapisinin bir dizisini içerir, alt-birim-arasi baglantilar, bir morfolino halka yapisinin 3'-ucunu bir bitisik morfolino halka yapisinin bir 5'-ucuna birlestirir, burada her bir morfolino halka yapisi, bir baz- eslesme kismina baglanir, böylece oligonükleotid, bir hedef nükleik aside bir herhangi birini içeren bir hedefleme dizisini içerir, burada alt-birim-arasi baglantilar asagidaki genel yapiya (I) veya bunun bir tuzuna veya izomerine sahiptir: ve burada alt-birim-arasi baglantilarin (l) her biri, bagimsiz bir sekilde (A) baglantisidir veya (B) baglantisidir: burada (A) baglantisi için: W, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde S'dir veya O'dur; X, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde -N(CH3)2'dir, -NRlRz'dir, - OR3'tür veya; Y, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde O'dur veya -NRZ'dir; R1, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya metildir; R2, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya - LNR4R5R7'dir; R3, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya 01-06 alkildir; R4, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, metildir, - C(=NH)NH2. -Z-L-NHC(=NH)NH2 veya -[C(O)CHR'NH]mH'dIr, burada Z, karbonildir (C(O)) veya bir dogrudan bagdir, R', bir dogal olusumlu amino asidin bir yan zinciridir veya bunun bir- veya iki-karbonlu homologudur ve m, 1 ila 6 araligindadir; R5, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, metildir veya bir elektron çiftidir; R6, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya metildir; R7, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir Ci-Ce alkildir veya 01-05 alkoksialkildir; L, alkil, alkoksi veya alkilamino gruplarini veya bunlarin kombinasyonlarini içeren en fazla 18 atom uzunlugundaki bir opsiyonel baglayicidir; ve burada (B) baglantisi için: W, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde S'dir veya O'dur; X, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde -NRng'dur veya -OR3'tür; Y, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde O'dur veya -NRlo'dur veya R8, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir veya 02-012 alkildir; R9, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, Ci-C12 alkildir, C1-C12 aralkildir veya arildir; Rw, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, 01-012 alkildir veya -LNR4R5R7'dir; burada R8 ve R9. bir 5-18 üyeli mono veya bisiklik heterosiklik olusturmak için birlesebilir veya R8, R9 veya R3, bir 5-7 üyeli heterosiklik olusturmak için R10 ile birlesebilir ve burada X, 4-piparazino oldugunda, X, asagidaki yapiya (IlI) sahiptir: R”, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde C2-C12 alkildir, C1-C12 aminoalkildir, C1-C12 alkilkarbonildir, arildir, heteroarildir veya heterosiklildir; ve R, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde bir elektron çiftidir, hidrojendir veya 01-012 alkildir; ve R”, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde hidrojendir, Ci-C12 alkildir, oksodur, -CN, triflorometildir, amidildir, amidinildir, amidinilalkildir, amidinilalkilkarbonildir, guanidinildir, guanidinilalkildir, guanidinilalkilkarbonildir, kolattir, deoksikolattir, arildir, heteroarildir, heterosikliktir, -SR13 veya C1-C12 alkoksidir, burada R”, R14 ve R15, her bir bulunusunda, bagimsiz bir sekilde Ci-C12 alkildir; burada alt-birim-arasi baglantilarin en az biri (B) baglantisidir veya burada, mevcut oldugunda, her bir (B) baglantisi her bir bulunusunda ayni yapiya sahiptir; ve burada antisens oligonükleotid bir hücreye-nüfuz etme peptidine ve baglayici kisma kovalent olarak tutturulur, burada baglayici kisim glisin, sistein, prolin, 6-amin0hekzanoik asit (Ahx), ß-alanin (B) ve Ahx-B arasindan seçilir ve hücreye-nüfuz etme peptidi SEQ ID NO.'Iari: 39-54 araligindan seçilir. Istemler 1 - 5'ten herhangi birine göre oligonükleotid olup, özelligi hedefleme olusmasidir. Istemler 1 - 67dan herhangi birine göre dizisinin, SEQ ID NO: 4 olmasidir. Istemler 1 - 6'dan herhangi birine göre dizisinin, SEQ ID NO: 5 olmasidir. Istemler 1 - 6'dan herhangi birine göre dizisinin, SEQ ID NO: 10 olmasidir. Istemler 1 - 6'dan herhangi birine göre dizisinin, SEQ ID NO: 11 olmasidir. Istemler 1 - 6'dan herhangi birine göre dizisinin, SEO ID NO: 13 olmasidir. Istemler 1 - öidan herhangi birine göre dizisinin, SEQ ID NO: 14 olmasidir. Istemler 1 - 6'dan herhangi birine göre dizisinin, SEQ ID NO: 16 olmasidir.
TR2018/09173T 2011-12-08 2012-12-07 İnsan LMNA'sını hedef alan oligonükleotid analogları. TR201809173T4 (tr)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161568590P 2011-12-08 2011-12-08

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201809173T4 true TR201809173T4 (tr) 2018-07-23

Family

ID=47429038

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/09173T TR201809173T4 (tr) 2011-12-08 2012-12-07 İnsan LMNA'sını hedef alan oligonükleotid analogları.

Country Status (15)

Country Link
US (7) US9066967B2 (tr)
EP (3) EP3399038B1 (tr)
JP (7) JP6132848B2 (tr)
CY (1) CY1120495T1 (tr)
DK (1) DK2788487T3 (tr)
ES (2) ES2935606T3 (tr)
HR (1) HRP20181022T1 (tr)
HU (1) HUE038369T2 (tr)
LT (1) LT2788487T (tr)
PL (1) PL2788487T3 (tr)
PT (1) PT2788487T (tr)
RS (1) RS57467B1 (tr)
SI (1) SI2788487T1 (tr)
TR (1) TR201809173T4 (tr)
WO (2) WO2013086441A2 (tr)

Families Citing this family (36)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8067571B2 (en) 2005-07-13 2011-11-29 Avi Biopharma, Inc. Antibacterial antisense oligonucleotide and method
WO2011150408A2 (en) 2010-05-28 2011-12-01 Avi Biopharma, Inc. Oligonucleotide analogues having modified intersubunit linkages and/or terminal groups
WO2012031243A2 (en) 2010-09-03 2012-03-08 Avi Biopharma, Inc. dsRNA MOLECULES COMPRISING OLIGONUCLEOTIDE ANALOGS HAVING MODIFIED INTERSUBUNIT LINKAGES AND/OR TERMINAL GROUPS
EP3613852A3 (en) 2011-07-22 2020-04-22 President and Fellows of Harvard College Evaluation and improvement of nuclease cleavage specificity
US9278987B2 (en) 2011-11-18 2016-03-08 Sarepta Therapeutics, Inc. Functionally-modified oligonucleotides and subunits thereof
ES2935606T3 (es) 2011-12-08 2023-03-08 Sarepta Therapeutics Inc Análogos de oligonucleótidos dirigidos a LMNA humana
US9163284B2 (en) 2013-08-09 2015-10-20 President And Fellows Of Harvard College Methods for identifying a target site of a Cas9 nuclease
CN111235149B (zh) * 2013-09-05 2024-04-16 萨罗塔治疗公司(美国) 酸性α-葡糖苷酶中反义诱导的外显子2纳入
US9228207B2 (en) 2013-09-06 2016-01-05 President And Fellows Of Harvard College Switchable gRNAs comprising aptamers
UA117768C2 (uk) 2013-12-24 2018-09-25 Сентісс Фарма Прайвет Лімітед Офтальмологічний розчин тартрату бримонідину для місцевого застосування
US10077453B2 (en) 2014-07-30 2018-09-18 President And Fellows Of Harvard College CAS9 proteins including ligand-dependent inteins
JP6954843B2 (ja) 2015-05-19 2021-10-27 サレプタ セラピューティクス，インコーポレイテッド ペプチドオリゴヌクレオチドコンジュゲート
MA50829A (fr) 2015-06-01 2018-04-11 Sarepta Therapeutics Inc Exclusion d'exon induite pat technologie antisens dans le collagène de type vii
US11020417B2 (en) 2015-06-04 2021-06-01 Sarepta Therapeutics, Inc Methods and compounds for treatment of lymphocyte-related diseases and conditions
EA201892467A1 (ru) * 2016-04-29 2019-05-31 Сарепта Терапьютикс, Инк. Олигонуклеотидные аналоги, нацеленные на lmna человека
AU2017306676B2 (en) 2016-08-03 2024-02-22 President And Fellows Of Harvard College Adenosine nucleobase editors and uses thereof
CA3033327A1 (en) 2016-08-09 2018-02-15 President And Fellows Of Harvard College Programmable cas9-recombinase fusion proteins and uses thereof
WO2018039438A1 (en) 2016-08-24 2018-03-01 President And Fellows Of Harvard College Incorporation of unnatural amino acids into proteins using base editing
CN110214180A (zh) 2016-10-14 2019-09-06 哈佛大学的校长及成员们 核碱基编辑器的aav递送
WO2018119359A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 President And Fellows Of Harvard College Editing of ccr5 receptor gene to protect against hiv infection
US11898179B2 (en) 2017-03-09 2024-02-13 President And Fellows Of Harvard College Suppression of pain by gene editing
EP3594346A4 (en) * 2017-03-10 2020-12-16 National Center For Child Health And Development ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE AND COMPOSITION FOR THE PREVENTION OR TREATMENT OF GLYCOGEN STORAGE DISEASE TYPE IA
JP2020510439A (ja) 2017-03-10 2020-04-09 プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバード カレッジ シトシンからグアニンへの塩基編集因子
KR20190130613A (ko) 2017-03-23 2019-11-22 프레지던트 앤드 펠로우즈 오브 하바드 칼리지 핵산 프로그램가능한 dna 결합 단백질을 포함하는 핵염기 편집제
WO2018209320A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 President And Fellows Of Harvard College Aptazyme-embedded guide rnas for use with crispr-cas9 in genome editing and transcriptional activation
JP7246729B2 (ja) * 2017-05-18 2023-03-28 国立大学法人京都大学 脊髄小脳変性症３６型の予防又は治療用組成物
WO2019023680A1 (en) 2017-07-28 2019-01-31 President And Fellows Of Harvard College METHODS AND COMPOSITIONS FOR EVOLUTION OF BASIC EDITORS USING PHAGE-ASSISTED CONTINUOUS EVOLUTION (PACE)
US11319532B2 (en) 2017-08-30 2022-05-03 President And Fellows Of Harvard College High efficiency base editors comprising Gam
US11795443B2 (en) 2017-10-16 2023-10-24 The Broad Institute, Inc. Uses of adenosine base editors
CN111511915A (zh) * 2018-03-09 2020-08-07 第一三共株式会社 糖原病Ia型治疗药
WO2020051360A1 (en) * 2018-09-05 2020-03-12 The Broad Institute, Inc. Base editing for treating hutchinson-gilford progeria syndrome
EP3860336A1 (en) 2018-10-05 2021-08-11 Xenotherapeutics, Inc. Xenotransplantation products and methods
US10883084B2 (en) 2018-10-05 2021-01-05 Xenotherapeutics, Inc. Personalized cells, tissues, and organs for transplantation from a humanized, bespoke, designated-pathogen free, (non-human) donor and methods and products relating to same
EP3942040A1 (en) 2019-03-19 2022-01-26 The Broad Institute, Inc. Methods and compositions for editing nucleotide sequences
MX2022014008A (es) 2020-05-08 2023-02-09 Broad Inst Inc Métodos y composiciones para la edición simultánea de ambas cadenas de una secuencia de nucleótidos de doble cadena objetivo.
WO2024097822A1 (en) * 2022-11-02 2024-05-10 Sarepta Therapeutics, Inc. Formulation of an antisense oligomer conjugate

Family Cites Families (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH445129A (fr) 1964-04-29 1967-10-15 Nestle Sa Procédé pour la préparation de composés d'inclusion à poids moléculaire élevé
US3459731A (en) 1966-12-16 1969-08-05 Corn Products Co Cyclodextrin polyethers and their production
US3426011A (en) 1967-02-13 1969-02-04 Corn Products Co Cyclodextrins with anionic properties
US3453257A (en) 1967-02-13 1969-07-01 Corn Products Co Cyclodextrin with cationic properties
US3453259A (en) 1967-03-22 1969-07-01 Corn Products Co Cyclodextrin polyol ethers and their oxidation products
US4235871A (en) 1978-02-24 1980-11-25 Papahadjopoulos Demetrios P Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles
EP0215942B1 (en) 1985-03-15 1995-07-12 Antivirals Inc. Polynucleotide assay reagent and method
US5506337A (en) 1985-03-15 1996-04-09 Antivirals Inc. Morpholino-subunit combinatorial library and method
US5034506A (en) 1985-03-15 1991-07-23 Anti-Gene Development Group Uncharged morpholino-based polymers having achiral intersubunit linkages
US5166315A (en) 1989-12-20 1992-11-24 Anti-Gene Development Group Sequence-specific binding polymers for duplex nucleic acids
US5217866A (en) 1985-03-15 1993-06-08 Anti-Gene Development Group Polynucleotide assay reagent and method
US5521063A (en) 1985-03-15 1996-05-28 Antivirals Inc. Polynucleotide reagent containing chiral subunits and methods of use
US5185444A (en) 1985-03-15 1993-02-09 Anti-Gene Deveopment Group Uncharged morpolino-based polymers having phosphorous containing chiral intersubunit linkages
US4737323A (en) 1986-02-13 1988-04-12 Liposome Technology, Inc. Liposome extrusion method
US4794499A (en) 1988-02-16 1988-12-27 Ott John N Grounding device for lamp with shielded electrodes
KR0166088B1 (ko) 1990-01-23 1999-01-15 . 수용해도가 증가된 시클로덱스트린 유도체 및 이의 용도
US5539082A (en) 1993-04-26 1996-07-23 Nielsen; Peter E. Peptide nucleic acids
US5719262A (en) 1993-11-22 1998-02-17 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having amino acid side chains
US5714331A (en) 1991-05-24 1998-02-03 Buchardt, Deceased; Ole Peptide nucleic acids having enhanced binding affinity, sequence specificity and solubility
WO1993001286A2 (en) 1991-06-28 1993-01-21 Massachusetts Institute Of Technology Localized oligonucleotide therapy
EP0786522A2 (en) 1992-07-17 1997-07-30 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic RNA molecules for treatment of stenotic conditions
US5885613A (en) 1994-09-30 1999-03-23 The University Of British Columbia Bilayer stabilizing components and their use in forming programmable fusogenic liposomes
US5820873A (en) 1994-09-30 1998-10-13 The University Of British Columbia Polyethylene glycol modified ceramide lipids and liposome uses thereof
US5753613A (en) 1994-09-30 1998-05-19 Inex Pharmaceuticals Corporation Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells
IL115849A0 (en) 1994-11-03 1996-01-31 Merz & Co Gmbh & Co Tangential filtration preparation of liposomal drugs and liposome product thereof
US6245747B1 (en) 1996-03-12 2001-06-12 The Board Of Regents Of The University Of Nebraska Targeted site specific antisense oligodeoxynucleotide delivery method
US7572582B2 (en) 1997-09-12 2009-08-11 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US6794499B2 (en) 1997-09-12 2004-09-21 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
WO1999042091A2 (en) 1998-02-19 1999-08-26 Massachusetts Institute Of Technology Use of polycations as endosomolytic agents
US7084125B2 (en) 1999-03-18 2006-08-01 Exiqon A/S Xylo-LNA analogues
PT1178999E (pt) 1999-05-04 2007-06-26 Santaris Pharma As Análogos de l-ribo-lna
US7070807B2 (en) 1999-12-29 2006-07-04 Mixson A James Branched histidine copolymers and methods for using same
WO2001047496A1 (en) 1999-12-29 2001-07-05 Mixson A James Histidine copolymer and methods for using same
JP2005514005A (ja) 2001-09-04 2005-05-19 エクシコン エ／エス 新規のｌｎａ組成物およびその使用
KR100464261B1 (ko) 2002-01-24 2005-01-03 주식회사 파나진 Ｐｎａ 올리고머를 합성하기 위한 신규한 단량체 및 그의제조방법
KR20030084444A (ko) 2002-04-26 2003-11-01 주식회사 파나진 Ｐｎａ 올리고머를 합성하기 위한 신규한 단량체 및 그의제조방법
US7569575B2 (en) 2002-05-08 2009-08-04 Santaris Pharma A/S Synthesis of locked nucleic acid derivatives
US7211668B2 (en) 2003-07-28 2007-05-01 Panagene, Inc. PNA monomer and precursor
WO2007047913A2 (en) 2005-10-20 2007-04-26 Isis Pharmaceuticals, Inc Compositions and methods for modulation of lmna expression
HUE036995T2 (hu) 2006-05-10 2018-08-28 Sarepta Therapeutics Inc Az alegységek között kationos kötéssel rendelkezõ oligonukleotid analógok
US20100016215A1 (en) * 2007-06-29 2010-01-21 Avi Biopharma, Inc. Compound and method for treating myotonic dystrophy
AU2008271050B2 (en) 2007-06-29 2014-11-06 Sarepta Therapeutics, Inc. Tissue specific peptide conjugates and methods
MX2010004955A (es) 2007-11-15 2010-06-30 Avi Biopharma Inc Metodo de sintesis de oligomeros de morfolina.
US8076476B2 (en) 2007-11-15 2011-12-13 Avi Biopharma, Inc. Synthesis of morpholino oligomers using doubly protected guanine morpholino subunits
AU2008345033B2 (en) 2007-12-28 2014-04-03 Sarepta Therapeutics, Inc. Immunomodulatory agents and methods of use
CA3066050A1 (en) * 2008-10-24 2010-04-29 Sarepta Therapeutics, Inc. Multiple exon skipping compositions for dmd
DE102009046261B4 (de) 2009-10-30 2012-05-16 GLOBALFOUNDRIES Dresden Module One Ltd. Liability Company & Co. KG Verfahren zur Herstellung von Transistoren mit Metallgateelektrodenstrukturen mit großem ε, die vor den Drain/Source-Gebieten auf der Grundlage eines Opferkohlenstoffabstandshalters hergestellt werden
KR101944119B1 (ko) * 2009-11-13 2019-01-30 사렙타 쎄러퓨틱스 인코퍼레이티드 안티센스 항바이러스 화합물 및 인플루엔자 바이러스 감염을 치료하는 방법
US8012804B1 (en) 2009-12-23 2011-09-06 Western Digital (Fremont), Llc Method and system for mounting lasers on energy assisted magnetic recording heads
WO2011150408A2 (en) 2010-05-28 2011-12-01 Avi Biopharma, Inc. Oligonucleotide analogues having modified intersubunit linkages and/or terminal groups
JPWO2012115096A1 (ja) 2011-02-23 2014-07-07 日本ゼオン株式会社 二次電池用負極、二次電池、負極用スラリー組成物及び二次電池用負極の製造方法
EP2704749A1 (en) 2011-05-05 2014-03-12 Sarepta Therapeutics, Inc. Peptide oligonucleotide conjugates
US9278987B2 (en) 2011-11-18 2016-03-08 Sarepta Therapeutics, Inc. Functionally-modified oligonucleotides and subunits thereof
ES2935606T3 (es) 2011-12-08 2023-03-08 Sarepta Therapeutics Inc Análogos de oligonucleótidos dirigidos a LMNA humana

Also Published As

Publication number Publication date
LT2788487T (lt) 2018-09-10
PL2788487T3 (pl) 2018-10-31
JP6581132B2 (ja) 2019-09-25
JP2017099416A (ja) 2017-06-08
US9833468B2 (en) 2017-12-05
RS57467B1 (sr) 2018-09-28
EP2788487B1 (en) 2018-04-04
ES2935606T3 (es) 2023-03-08
EP3399038B1 (en) 2022-11-16
WO2013086441A3 (en) 2013-08-01
EP2788487A2 (en) 2014-10-15
JP2019172691A (ja) 2019-10-10
US9682097B2 (en) 2017-06-20
US11071749B2 (en) 2021-07-27
EP3399038A2 (en) 2018-11-07
US10398721B2 (en) 2019-09-03
WO2013086444A2 (en) 2013-06-13
US10076536B2 (en) 2018-09-18
JP6132848B2 (ja) 2017-05-31
JP2015505839A (ja) 2015-02-26
CY1120495T1 (el) 2019-07-10
JP2021104052A (ja) 2021-07-26
JP2019129848A (ja) 2019-08-08
PT2788487T (pt) 2018-07-03
ES2674929T3 (es) 2018-07-05
EP2788488A2 (en) 2014-10-15
JP6132849B2 (ja) 2017-05-31
JP2015501817A (ja) 2015-01-19
US20170051278A1 (en) 2017-02-23
US20140024698A1 (en) 2014-01-23
US20140024821A1 (en) 2014-01-23
US20160102307A1 (en) 2016-04-14
WO2013086441A2 (en) 2013-06-13
US9066967B2 (en) 2015-06-30
HUE038369T2 (hu) 2018-10-29
JP2017101080A (ja) 2017-06-08
DK2788487T3 (en) 2018-07-23
US9326992B2 (en) 2016-05-03
JP6596032B2 (ja) 2019-10-23
SI2788487T1 (sl) 2018-09-28
HRP20181022T1 (hr) 2018-08-24
EP3399038A3 (en) 2019-02-13
US20180092938A1 (en) 2018-04-05
US20200147119A1 (en) 2020-05-14
US20180271893A1 (en) 2018-09-27
WO2013086444A3 (en) 2013-08-01
JP7277503B2 (ja) 2023-05-19
EP2788488B1 (en) 2018-03-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TR201809173T4 (tr) İnsan LMNA&#39;sını hedef alan oligonükleotid analogları.
US11225662B2 (en) Peptide oligonucleotide conjugates
JP2024032974A (ja) ペプチドオリゴヌクレオチドコンジュゲート
AU2011257980B2 (en) Oligonucleotide analogues having modified intersubunit linkages and/or terminal groups
AU2013235691B2 (en) Boronic acid conjugates of oligonucleotide analogues
JP2018501816A (ja) Ｔｇｆ−ｒシグナリング阻害剤としてのアンチセンス−オリゴヌクレオチド
US11459563B2 (en) Treatment for NEAT1 associated disease
CN117957022A (zh) 用于靶向cug重复序列的反义化合物和方法