JP6004419B2 - β‐セクレターゼ阻害剤及びβ‐セクレターゼ阻害剤を含む飲食品 - Google Patents

Description

本発明は、カレースパイス等の天然植物の抽出物を有効成分として含有するβ‐セクレターゼ阻害剤及びβ‐セクレターゼ阻害剤を含む飲食品に関する。

近年の急速な高齢化社会の到来に伴い、老人性痴呆症は、医学的、社会的にも重大な問題となっており、それにより有効な抗認知症薬の開発が強く望まれている。老人性痴呆症の代表的な疾患であるアルツハイマー型痴呆症（アルツハイマー病）は、脳の萎縮、老人班の沈着及び神経原繊維の形成を特徴とする変性疾患で、神経細胞の脱落によって痴呆症状が引き起こされると考えられている（非特許文献１）。

アルツハイマー型痴呆症の原因について未だ定説はないが、病理組織学的研究により、老人班が沈着しそれにより神経細胞が脱落し脳の萎縮が生じると考えられている。老人班の主成分であるβ‐アミロイドは細胞毒性作用を有しており、アルツハイマー型痴呆症における神経細胞死を引き起こしていると考えられている（非特許文献２〜５）。β‐アミロイドは、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）からβ‐セクレターゼという酵素の作用によって生成される。従って、このβ‐セクレターゼに対し阻害作用を有する化合物は、アルツハイマー型痴呆症の治療に有用であると考えられる。β‐セクレターゼに対し阻害作用を有する化合物に関する研究が、近年活発に行われている（特許文献１）。

このようなβ‐セクレターゼに対して阻害活性を持つ化合物は、β‐アミロイドの生成のみならず、他の生体内での反応をも阻害する可能性がある。他の生体内での反応を阻害するような物質は、β‐アミロイドの生成を阻害したとしても、患者に深刻な副作用をもたらす虞があるため、アルツハイマー型痴呆症等の治療に利用することは困難である。よって、アルツハイマー型痴呆症の治療に使用することができる、安全性の高いβ‐セクレターゼ阻害剤が求められている。

特開２００８−１３７９１４号公報

Alzheimer, A (1907) Central Bl. Nervenheilk. Phychiatr. 30, 177-179 Yankner,B. et al. Science, 245, 417-429 (1989) Cai,X., Gold, T. & Younkin,S. Science, 259, 514-516 (1993) Rose, A. Nature Med. 2, 267-269 (1996) Scheuner,D. et al. Nature Med. 2, 864-869 (1996)

本発明は、安全性が高く、β‐セクレターゼ活性に対する優れた阻害作用を有するβ‐セクレターゼ阻害剤及びβ‐セクレターゼ阻害剤を含む飲食品を提供するものである。

請求項１に係る発明は、カレーリーフからのヘキサン抽出物又は酢酸エチル抽出物を含む、アルツハイマー型認知症の予防又は進行停止のためのβ−セクレターゼ阻害剤に関する。

請求項２に係る発明は、請求項１記載のβ−セクレターゼ阻害剤を含む、アルツハイマー型認知症の予防又は進行停止のための飲食品に関する。

請求項３に係る発明は、α−カリオフィレン、β−カリオフィレン、又はその組み合わせを含むことを特徴とする、アルツハイマー型認知症の予防又は進行停止のためのβ−セクレターゼ阻害剤に関する。

請求項４に係る発明は、請求項３記載のβ−セクレターゼ阻害剤を含む、アルツハイマー型認知症の予防又は進行性停止のための飲食品に関する。

請求項５に係る発明は、β−カリオフィレンオキサイドを含むことを特徴とする、アルツハイマー型認知症の予防のためのβ−セクレターゼ阻害剤に関する。

請求項６に係る発明は、請求項５記載のβ−セクレターゼ阻害剤を含む、アルツハイマー型認知症の予防のための飲食品に関する。

請求項１、３、５に係る発明によれば、カレーリーフの抽出物又は抽出物から得られたものを有効成分とするため、人体に悪影響を与えることなく、アルツハイマー型痴呆症等の老人性痴呆症を予防又は進行停止することができるβ‐セクレターゼ阻害剤を提供することができる。

請求項２、４、６に係る発明によれば、β‐セクレターゼ活性に対する優れた阻害作用を有するβ‐セクレターゼ阻害剤を含む飲食品であるため、β‐セクレターゼ阻害剤を日常的に容易に摂取することができ、アルツハイマー型痴呆症等の老人性痴呆症を予防又は進行停止することができる。

以下、本発明に係るβ‐セクレターゼ阻害剤及びβ‐セクレターゼ阻害剤を含む飲食品について説明する。

本発明のβ‐セクレターゼ阻害剤は、α‐カリオフィレン、β‐カリオフィレン、β‐カリオフィレンオキサイド、クルクミン１、クルクミン２、クルクミン３、ピペリン及びセサミンからなる群から選択される１以上の化合物を有効成分として含有する。

α‐カリオフィレンは、ＣＡＳ番号６７５３‐９８‐６であって、下式（化１）に示す構造を有している。

β‐カリオフィレンは、ＣＡＳ番号８７‐４４‐５であって、下式（化２）に示す構造を有している。

β‐カリオフィレンオキサイドは、ＣＡＳ番号１１３９‐３０‐６であって、下式（化３）に示す構造を有している。

クルクミン１は、ＣＡＳ番号４５８‐３７‐７であって、下式（化４）に示す構造を有している。

クルクミン２は、ＣＡＳ番号２９７１６０‐２７‐１であって、下式（化５）に示す構造を有している。

クルクミン３は、ＣＡＳ番号３３１７１‐０５‐０であって、下式（化６）に示す構造を有している。

ピペリンは、ＣＡＳ番号９４‐６２‐２であって、下式（化７）に示す構造を有している。

セサミンは、ＣＡＳ番号６０７‐８０‐７であって、下式（化８）に示す構造を有している。

本発明において、α‐カリオフィレン、β‐カリオフィレン及びβ‐カリオフィレンオキサイドは標準品を用いることができる。また、カレースパイス等の抽出物から得たものを用いることができ、特にカレーリーフの抽出物から得たものを用いることができる。

カレーリーフ（英名：Ｃｕｒｒｙ ｌｅａｆ、学名：Murraya koenigii (L.) Sprengel）は、ミカン科ゲッキツ属の双子葉植物である。芳香のある常緑の低木であり、琉球、南中国からインドに分布する。葉は香辛料として広くカレーの芳香付けに利用され、また強壮剤にもされる。

本発明のβ‐セクレターゼ阻害剤には、α‐カリオフィレン、β‐カリオフィレン及びβ‐カリオフィレンオキサイドを有効成分とするもの、及びカレーリーフの抽出物を有効成分とするものを用いることができる。
カレーリーフの抽出物としては、葉の乾燥物のヘキサン抽出物を好適に用いることができる。その理由は、カレーリーフの葉をヘキサンで抽出することにより、α‐カリオフィレン、β‐カリオフィレン及びβ‐カリオフィレンオキサイドを多く溶出させることができるからである。

本発明において、クルクミン１、クルクミン２及びクルクミン３は標準品を用いることができる。また、カレースパイス等の抽出物から得たものを用いることができ、特にターメリックの抽出物から得たものを用いることができる。

ターメリック（英名：Ｔｕｒｍｅｒｉｃ、学名：Curcuma longa L.）は、ショウガ科ウコン属の単子葉植物である。発達した根茎を有する多年草であり、栽培される重要な香辛料植物が含まれる。

本発明のβ‐セクレターゼ阻害剤には、クルクミン１、クルクミン２及びクルクミン３を有効成分とするもの、及びターメリックの抽出物を有効成分とするものを用いることができる。
ターメリックの抽出物としては、根の乾燥物の酢酸エチル抽出物を好適に用いることができる。その理由は、ターメリックの根を酢酸エチルで抽出することにより、クルクミン１、クルクミン２及びクルクミン３を多く溶出させることができるからである。

ピペリンは標準品を用いることができる。また、カレースパイス等の抽出物から得たものを用いることができ、特にコショウの抽出物から得たものを用いることができる。

コショウ（英名：Ｂｌａｃｋ Ｐｅｐｐｅｒ、学名：Piper nigrum L．）は、コショウ属コショウ科の双子葉植物である。インド原産の常緑つる植物であって、その果実は最も古くから著名なスパイスの一つで、香辛味のほか防腐効果、食欲増進の効果などがある。

本発明のβ‐セクレターゼ阻害剤には、ピペリンを有効成分とするもの、及びコショウの抽出物を有効成分とするものを用いることができる。
コショウの抽出物としては、果実の乾燥物の酢酸エチル抽出物を好適に用いることができる。その理由は、コショウの果実を酢酸エチルで抽出することにより、ピペリンを多く溶出させることができるからである。

セサミンは標準品を用いることができる。また、天然植物の抽出物から得ることができ、特にゴマの抽出物から得ることができる。

ゴマ（英名：Ｓｅｓａｍｅ、学名：Sesamum indicum L．）は、ゴマ科の双子葉植物である。果実は普通４室であり、種子の色により、黒色の黒ゴマ、白色の白ゴマ、黄色の黄ゴマや金ゴマを区別する。

本発明のβ‐セクレターゼ阻害剤には、セサミンを有効成分とするもの、及びゴマの抽出物を有効成分とするものを用いることができる。
ゴマの抽出物は、乾燥物の酢酸エチル抽出物を好適に用いることができる。その理由は、ゴマを酢酸エチルで抽出することにより、セサミンを多く溶出させることができるからである。

本発明のβ‐セクレターゼ阻害剤には、カルダモン、クローブ、シナモン、フェヌグリーク、サフラン、ジンジャー、バンウコン、ガジュツ、カホクザンショウ、ホップ、アシュワガンダ、ベニバナ、ヒハツ及びハルウコンからなる群から選択される１以上の抽出物を有効成分とするものを用いることができる。

カルダモン（英名：Ｃａｒｄａｍｏｎ、学名：Elettaria cardamomum (L.)）は、ショウガ科ショウズク属の単子葉植物である。根茎のある多年草で、種子を香辛料とし、南インド、スリランカ、マレーシア等で栽培される。

クローブ（英名：Ｃｌｏｖｅ、学名：Syzygium aromaticum (L.)）は、フトモモ科フトモモ属の双子葉植物である。常緑高木であり、樹高は４〜７ｍ、ときに１０ｍ以上になる。

シナモン（英名：Ｃｉｎｎａｍｏｎ、学名：Cinnamomum zeylanicum）は、クスノキ科クスノキ属の双子葉植物である。スパイスをとるために栽植される熱帯性常緑樹である。

フェヌグリーク（英名：Ｓｉｃｋｌｅｆｒｕｉｔ ｆｅｎｕｇｒｅｅｋ、学名：Trigonella foenum-graecum L.）は、マメ科フェヌグリーク属の双子葉植物である。種子はスパイスとして用いられる。

サフラン（英名：Ｓａｆｆｒｏｎ ｃｒｏｃｕｓ、学名：Crocus sativus L.）は、アヤメ科サフラン属の単子葉植物である。観賞用に広く栽培される球茎植物で、花柱を集めて乾かしたものは、鎮静、鎮痛、通経薬として用いられる。

ジンジャー（英名：Ｇｉｎｇｅｒ、学名：Zingiber officinale L.）は、ショウガ科ショウガ属の単子葉植物である。香辛料として世界的に知られ、薬味、菓子用の他、薬用、ソース等の調味用や清涼飲料にも使用される。

バンウコン（英名：Ｇａｌａｎｇａｌ、学名：Kaempferia galangal L.）は、ショウガ科バンウコン属の単子葉植物である。黄色の根茎には芳香があり、香辛料として使用される。根は部分的に肥大し球根になる。

ガジュツ（英名：Ｚｅｄｏａｒｙ、学名：Curcuma zedoaria）は、ショウガ科ウコン属の単子葉植物である。別名紫ウコンともいう。根茎が生薬として用いられ芳香健胃作用がある。

カホクザンショウ（英名：Ｓｉｃｈｕａｎ Ｐｅｐｐｅｒ、学名：Zanthoxylum bungeanum）は、ミカン科サンショウ属の双子葉植物である。果皮は香辛料や生薬などに利用される。

ホップ（英名：Ｃｏｍｍｏｎ Ｈｏｐ又はＥｕｒｏｐｅａｎ Ｈｏｐ、学名：Humulus lupulus L.）は、アサ科カラハナソウ属の双子葉植物である。雌花をビール醸造に利用するために栽培される多年草である。

アシュワガンダ（英名：Ｗｉｎｔｅｒｃｈｅｒｒｙ、学名：Withania somnifera (L.)）は、ナス科の双子葉植物である。別名インドニンジンとも呼ばれる。インドの伝統医学アーユルベーダで利用されるハーブの一つである。

ベニバナ（英名：Ｓａｆｆｌｏｗｅｒ、学名：Carthamus tinctorius L.）は、キク科ベニバナ属の双子葉植物である。紅色染料や食用油の原料として栽培される。

ヒハツ（英名：Ｌｏｎｇ Ｐｅｐｐｅｒ、学名：Piper longum L.）は、コショウ科コショウ属の双子葉植物である。インド原産でカレー等に用いられる。

ハルウコン（英名：Ｗｉｌｄ Ｔｕｒｍｅｒｉｃ、学名：Curcuma aromatica Salisb.）は、ショウガ科ウコン属の単子葉植物である。熱帯アジア原産の多年草で、インド、東南アジア、中国南部、沖縄で栽培される多年草。花期４〜６月。根茎をキョウオウ（姜黄）と称し、利胆、芳香健胃薬とする。

上記化合物及び抽出物は、１種単独で又は２種以上を混合して使用してもよい。下記実施例で詳述するように、上記化合物及び抽出物は強いβ‐セクレターゼ阻害活性を有しているので、これらを有効成分として含有する本発明のβ‐セクレターゼ阻害剤は、各種用途に使用することができる。

例えば、本発明のβ‐セクレターゼ阻害剤を医薬品として用いる場合、哺乳動物（特にヒト）における老人性痴呆症の予防薬、特にアルツハイマー型痴呆症の予防薬として用いられる。

本発明のβ‐セクレターゼ阻害剤は、慣用されている方法により錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、被覆錠剤、カプセル剤、シロップ剤、トローチ剤、吸入剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、眼軟膏剤、点眼剤、点鼻剤、点耳剤、バップ剤、ローション剤等の剤に製剤化することができる。

製剤化に通常使用される賦形剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤や、および必要により安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、抗酸化剤などを使用することができ、一般に医薬品製剤の原料として使用される成分及び配合量を適宜選択して定法により製剤化される。

本発明の医薬製剤を投与する場合、その形態は特に限定されず、通常使用される方法であればよく、経口投与でも非経口投与でもよい。本発明に係る医薬の投与量は、症状の程度、年齢、性別、体重、投与形態、疾患の具体的な種類等に応じて、製剤学的な有効量を適宜選択することができる。投与量の一例を挙げると、経口投与の場合、通常、成人において、有効成分量として０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ程度が適当であり、これを１日１回〜数回に分けて投与すればよい。

また、本発明のβ‐セクレターゼ阻害剤は、強いβ‐セクレターゼ阻害活性を有することから、例えば、入浴剤、石鹸、芳香剤、アロマテラピー用エッセンシャルオイル、香水、整髪料等の製品に加えて使用することができる。

本発明のβ‐セクレターゼ阻害剤は、各製品全体に対し、通常０．００１〜１００重量％程度、好ましくは０．１〜５重量％程度含有していればよい。

本発明のβ‐セクレターゼ阻害剤は、食品添加剤として、例えば清涼飲料水、乳製品（加工乳、ヨーグルト）、菓子類（ゼリー、チョコレート、ビスケット、ガム、錠菓）又はサプリメント等の各種飲食品に配合することもできる。

食品添加剤として使用する場合、その添加量については、特に限定されず、食品の種類に応じて適宜決定すればよい。一例としては、上記した抽出物の乾燥重量として、含有量が０．０００５〜５０重量％程度の範囲となるように添加すればよい。

上記飲食品は、本発明のβ‐セクレターゼ阻害剤の他に、賦形剤、呈味剤、着色剤、保存剤、増粘剤、安定剤、ゲル化剤、酸化防止剤等を含有してもよい。
このうち、賦形剤としては、これらに限定されないが例えば、微粒子二酸化ケイ素のような粉末類、ショ糖脂肪酸エステル、結晶セルロース・カルボキシメチルセルロースナトリウム、リン酸水素カルシウム、小麦デンプン，米デンプン，トウモロコシデンプン，バレイショデンプン，デキストリン，シクロデキストリン等のでんぷん類、結晶セルロース類、乳糖，ブドウ糖，砂糖，還元麦芽糖，水飴，フラクトオリゴ糖，ガラクトオリゴ糖，大豆オリゴ糖，イソマルトオリゴ糖，キシロオリゴ糖，マルトオリゴ糖，乳果オリゴ糖などの糖類、ソルビトール，エリストール，キシリトール，ラクチトール，マンニトール等の糖アルコール類が挙げられる。これらの賦形剤は、単独で又は二種以上組み合わせて使用することができる。

呈味剤としては、これらに限定されないが例えば、果汁エキスであるボンタンエキス、ライチエキス、リンゴ果汁、オレンジ果汁、ゆずエキス、ピーチフレーバー、ウメフレーバー、甘味剤であるアセスルファムＫ、エリストール、オリゴ糖類、マンノース、キシリトール、異性化糖類、茶成分である緑茶、ウーロン茶、バナバ茶、杜仲茶、鉄観音茶、ハトムギ茶、アマチャヅル茶、マコモ茶、昆布茶、及びヨーグルトフレーバー等が挙げられる。

以下、本発明の実施例を説明することにより、本発明の効果をより明確なものとする。但し、本発明は以下の実施例には限定されない。

（合成例）
（試薬の調製−１）
酢酸ナトリウム（分子量：８２．０３）４．１ｇに酢酸４００ｍｌを加えて溶解させｐＨ４．５に調整した。溶液を純水で５００ｍｌにメスアップし、０．１Ｍ酢酸緩衝液（１）を得た。
基質ペプチドＭＯＣＡｃ−ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ（Ｄｎｐ）−Ａｒｇ−Ａｒｇ−ＮＨ２（(Ｔｒｉｆｌｕｏｒｏａｃｅｔａｔｅ Ｆｏｒｍ)、分子量：２００１．０８、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ３２１２−ｖ）を１ｍＭになるようにＤＭＳＯ５５０μｌ中に溶解させ基質ペプチド溶液（２）を得た。

（試薬の調製−２）
上記０．１Ｍ酢酸緩衝液（１）を水で５倍希釈し、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を加え、２０ｍＭ酢酸緩衝液（３）を得た。
β‐セクレターゼ（β‐Ｓｅｃｒｅｔａｓｅ，ｅｘｔａｃｅｌｌｕｌａｒ ｄｏｍａｉｎ ｈｕｍａｎ，ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｓｉｇｍａ Ｓ−４１９５）を、２０ｍＭ酢酸緩衝液（３）で５０倍希釈し、１００Ｕｎｉｔｓ／ｍｌに調整し、β‐セクレターゼ溶液（４）を得た。
基質ペプチド溶液（２）を２０ｍＭ酢酸緩衝液（３）で１０倍希釈し、基質希釈溶液（５）を得た。

（抽出物の調製）
表１及び表２に記載の３種のカレーパウダー及びゴマについて、乾燥原料を１ｋｇ粉砕し、４０℃のヘキサン５０００ｍｌで２時間の攪拌抽出を２回行った。次いで、４０℃で減圧濃縮し、ヘキサン抽出物を得た。
次いで、その残渣を４０℃の酢酸エチル５０００ｍｌで２時間の攪拌抽出を２回行った。次いで、４０℃で減圧濃縮し、酢酸エチル抽出物を得た。
次いで、その残渣を４０℃のメタノール５０００ｍｌで２時間の攪拌抽出を２回行った。次いで、４０℃で減圧濃縮し、メタノール抽出物を得た。

（試験サンプルの調製）
７８μｌの２０ｍＭ酢酸緩衝液（３）、１０μｌのβ‐セクレターゼ溶液（４）、及び上記抽出物２μｌを混合し、溶液（６）を調製した。７８μｌの２０ｍＭ酢酸緩衝液（３）、１０μｌのβ‐セクレターゼ溶液（４）、及び２μｌのＤＭＳＯの混合物を混合し、溶液（７）を得た。溶液（６）及び溶液（７）を９６ウェルプレート（黒）に添加し、３７℃で１０分間インキュベートし、それぞれ試料溶液及びコントロール溶液を得た。これらに１０μｌの基質ペプチド希釈溶液（５）及び２０ｍＭ酢酸緩衝液を加え、サンプル濃度を１．２５％（２５０μｇ／ｍｌ）及び０．２５％（５０μｇ／ｍｌ）に調整し、３７℃で３時間インキュベートした。イオン強度Ｉ＝０．１５のリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）９００μｌを加え反応を停止させた。

（β‐セクレターゼ阻害率の測定）
この反応生成物をＨＰＬＣで分離し、試料溶液及びコントロール溶液それぞれの蛍光標識分解生成物の発光強度を測定した。
（ＨＰＬＣ条件）
Ａ液：０．１％ギ酸アセトニトリル、Ｂ液：０．１％ギ酸水
０分：Ａ液１０％、Ｂ液９０％
グラジエント２５分：Ａ液６０％、Ｂ液４０％
２５．０１分：Ａ液９０％、Ｂ液１０％
３０分：Ａ液１０％、Ｂ液９０％
検出器：蛍光検出器ＥＸ３２８ｎｍ、ＥＭ３９３ｎｍ
Ｆｌｏｗ Ｒａｔｅ １ｍｌ／ｍｉｎ
カラム：Ｌ‐カラムＯＤＳ２５０ｍｍ、４．６ｍｍ

セクレターゼ阻害率（％）＝｛１−（Ｓ／Ｃ）｝×１００
式中、Ｃはコントロール溶液中の蛍光標識分解生成物の発光強度を示し、Ｓは試料溶液中の蛍光標識分解生成物の発光強度を示す。結果を表１及び表２に示す。

表１及び表２の結果から、カレーリーフのヘキサン抽出物、ターメリックの酢酸エチル抽出物、コショウの酢酸エチル抽出物、及びゴマの酢酸エチル抽出物に高いβ‐セクレターゼ阻害活性が見られた。

カレーリーフのヘキサン抽出物の分画
上記カレーリーフのへキサン抽出物１０ｇを、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル６０ ５００ｇ、メルク社製）を用い、ヘキサンで溶出した。さらに順次、ヘキサン‐酢酸エチルの混合液で溶出した。溶媒の量と流液比、及び収量を下記表３に示す。

カレーリーフのヘキサン抽出物の分画のβ‐セクレターゼ阻害活性測定
次いで、カレーリーフのヘキサン抽出物のＦＲ１〜１８のβ‐セクレターゼ阻害活性を上述した方法と同様の方法で評価した。結果を下記表４に示す。

表４の結果より、溶媒中のヘキサンの比が高い分画のβ‐セクレターゼ阻害率が高いことがわかった。

次いで、β‐セクレターゼ阻害率が高いカレーリーフのヘキサン抽出物のＦＲ１及びＦＲ２を、それぞれガスクロマトグラフ−質量分析計（ＧＣ−ＭＳ）に供し、分析した。ＦＲ１のＧＣＭＳデータを下記表５に、ＦＲ２のＧＣＭＳデータを下記表６に示す。

ＦＲ１及びＦＲ２の成分の定量
次いで、ＦＲ１及びＦＲ２の化合物を定量した。定量方法は各標準品より絶対検量線法にて、下記の条件で行った。
（分析条件）
分析機器：ＧＣ６９８０（アジレント社製）
注入量：１．０ｕ
スプリット比：１／８０
インジェクション温度：２５０℃
カラム：ｉｎｅｒｔｃａｐ ｐｕｒｅ ｗａｘ ６０ｍ ０．２５ｍｍ
カラム温度：５０℃（２分）→２．５℃／分→２４０℃

ＦＲ１の定量結果を下記表７に、ＦＲ２の定量結果を下記表８に示す。

以上の結果から、カレーリーフのヘキサン抽出物のうち、β‐セクレターゼ阻害活性の有効成分は、α‐カリオフィレン、β‐カリオフィレン及びβ‐カリオフィレンオキサイドであることが示唆された。

上記５種類の化合物について、０．５ｍＭでのβ‐セクレターゼ阻害率を測定した。結果を下記表９に示す。

表９の結果から、α‐カリオフィレン、β‐カリオフィレン及びβ‐カリオフィレンオキサイドがβ‐セクレターゼ阻害活性の有効成分であることが確認された。さらに、ｄ‐リモネンとα‐フェランドレンを除外して、更に様々な濃度で実験を行った。結果を下記表１０に示す。

表１０の結果から、α‐カリオフィレン、β‐カリオフィレン及びβ‐カリオフィレンオキサイドが、非常に高いβ‐セクレターゼ阻害活性を有することがわかった。
この結果からＩＣ５０を計算すると以下の数値となった。
α‐カリオフィレン ：２．３ｍＭ
β‐カリオフィレンオキサイド：１．２ｍＭ
β‐カリオフィレン ：４．２ｍＭ

高いβ‐セクレターゼ阻害活性が見られたターメリックの酢酸エチル抽出物、コショウの酢酸エチル抽出物、及びゴマの酢酸エチル抽出物についても、ＨＰＬＣを用いて有効成分の同定を行った。
その結果、ターメリックの酢酸エチル抽出物にクルクミン１が２９．８２％、クルクミン２が９．７９％、クルクミン３が６．４２％、クルクミノイドが４６．０３％含有されており、コショウの酢酸エチル抽出物にピペリンが７２．７３％、ゴマの酢酸エチル抽出物にセサミンが５．９％含有されており、これら化合物が高いβ‐セクレターゼ阻害活性を有することがわかった。クルクミン１、クルクミン２及びクルクミン３のβ‐セクレターゼ阻害率を下記表１１に、ピペリンのβ‐セクレターゼ阻害率を下記表１２に、セサミンのβ‐セクレターゼ阻害率を下記表１３に示す。

表１１〜１３の結果から、クルクミン１、クルクミン２、クルクミン３、ピペリン及びセサミンが、非常に高いβ‐セクレターゼ阻害活性を有することがわかった。
この結果からクルクミン１、クルクミン２、クルクミン３、ピペリンについてＩＣ５０を計算すると以下の数値となった。
クルクミン１：０．５６ｍＭ
クルクミン２：０．６３ｍＭ
クルクミン３：１．５０ｍＭ
ピペリン ：０．５８ｍＭ

さらに、カルダモン、クローブ、シナモン、フェヌグリーク、サフラン、ジンジャー、バンウコン、ガジュツ、カホクザンショウ、ホップ、アシュワガンダ、ベニバナ、ヒハツ及びハルウコンについても、β‐セクレターゼ阻害率を測定した。

（抽出物の調製）
カルダモン、クローブ、シナモン、フェヌグリーク、サフラン、ジンジャー、バンウコン、ガジュツ、カホクザンショウ、ホップ、アシュワガンダ、ベニバナ、ヒハツ及びハルウコン夫々２０ｇを５倍量の７０ｖｏｌ％メタノールにて、４０℃で攪拌抽出を２回行った。ついで、減圧濃縮し、７０％メタノール抽出物を得た。
別途、上記植物について、乾燥原料を１ｋｇ粉砕し、４０℃のヘキサン５０００ｍｌで２時間の攪拌抽出を２回行った。次いで、４０℃で減圧濃縮し、ヘキサン抽出物を得た。
次いで、その残渣を４０℃の酢酸エチル５０００ｍｌで２時間の攪拌抽出を２回行った。次いで、４０℃で減圧濃縮し、酢酸エチル抽出物を得た。
次いで、その残渣を４０℃のメタノール５０００ｍｌで２時間の攪拌抽出を２回行った。次いで、４０℃で減圧濃縮し、メタノール抽出物を得た。

得られた７０％メタノール抽出物、ヘキサン抽出物、酢酸エチル抽出物、及びメタノール抽出物のβ‐セクレターゼ阻害率を、カレースパイスと同様の上記方法により測定した。
７０％メタノール抽出物のβ‐セクレターゼ阻害率を下記表１４，１５に、ヘキサン抽出物のβ‐セクレターゼ阻害率を下記表１６，１７に、酢酸エチル抽出物のβ‐セクレターゼ阻害率を下記表１８，１９に、メタノール抽出物のβ‐セクレターゼ阻害率を下記表２０，２１に示す。

表１４〜２１の結果より、カルダモン、クローブ、シナモン、フェヌグリーク、サフラン、ジンジャー、バンウコン、ガジュツ、カホクザンショウ、ホップ、アシュワガンダ、ベニバナ、ヒハツ及びハルウコンの抽出物は、優れたβ‐セクレターゼ阻害活性を有することがわかった。

本発明は、アルツハイマー型痴呆症を予防するための医薬品に好適に使用することができ、入浴剤、石鹸、芳香剤、アロマテラピー用エッセンシャルオイル、香水、整髪料等の製品、又は清涼飲料水、乳製品、菓子類又はサプリメント等の各種飲食品の添加剤に好適に使用することができる。

Claims (6)

1. カレーリーフからのヘキサン抽出物又は酢酸エチル抽出物を含む、アルツハイマー型認知症の予防又は進行停止のためのβ−セクレターゼ阻害剤。
2. 請求項１記載のβ−セクレターゼ阻害剤を含む、アルツハイマー型認知症の予防又は進行停止のための飲食品。
3. α−カリオフィレン、β−カリオフィレン、又はその組み合わせを含むことを特徴とする、アルツハイマー型認知症の予防又は進行停止のためのβ−セクレターゼ阻害剤。
4. 請求項３記載のβ−セクレターゼ阻害剤を含む、アルツハイマー型認知症の予防又は進行性停止のための飲食品。
5. β−カリオフィレンオキサイドを含むことを特徴とする、アルツハイマー型認知症の予防のためのβ−セクレターゼ阻害剤。
6. 請求項５記載のβ−セクレターゼ阻害剤を含む、アルツハイマー型認知症の予防のための飲食品。