JP5942197B2 - 高いスクワレン産生能を有する新規微生物及びこれによるスクワレンの製造方法 - Google Patents
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Description
本発明の新規株は、沖縄県の海岸に生息するマングローブの葉より採取及び分離したものである。当該株は以下の特徴を有する。
外観の形状的特徴:寒天培地で培養した本発明のオーランチオキトリウム属の株は、オレンジ色〜赤色を呈し得る(図1)。
細胞の形状的特徴:形状は球形であり、大きさは、5〜15μm程度である(図2)。
基本的に栄養細胞は球形で、不動であり得る。培養の初期対数増殖期においては、鞭毛をもつ遊送子がしばしばみられるが、静止期ではこの遊送子が全く観察されず、球形の栄養細胞だけとなることがある。
本発明のオーランチオキトリウム属の新規株の増殖は、当該株を天然水又は人工海水で調製した適当な培地に播種し、定法にしたがって培養することにより行われる。培地としては、任意の公知のものを使用できる、例えば、炭素源としてはグルコース、フルクトース、サッカロース、デンプンなどの炭水化物の他、オレイン酸、大豆油などの油脂類や、グリセロール、酢酸ナトリウムなどがある。これらの炭素源を、例えば、培地1リットル当たり20〜120gの濃度で使用する。窒素源としては、酵母エキス、コーンスチープリカー、ポリペプトン、グルタミン酸ナトリウム、尿素等の有機窒素、又は酢酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム等の無機窒素、又はタンパク質消化物等がある。無機塩としては、リン酸カリウム等を適宜組み合わせて使用できる。また、上記培地は適宜ビタミン類や、プロテアーゼペプトン、酵母抽出物等を含むこともできる。培養液中、天然水又は人工海水の割合は、約50質量%である。上記の培地は、調製後、適当な酸又は塩基を加えることにより適宜pHを調整できる。培地のpHは、pH2.0〜11.0、好ましくはpH3.0〜10.0、より好ましくはpH4.0〜9.0、より好ましくはpH4.5〜9.0であり、通常はpH6.5を用いる。当該培地に、オーランチオキトリウム属の新規株を含有する溶液を添加前に、当該培地をオートクレーブにより殺菌する。培養は、培養温度5〜40℃、好ましくは10〜35℃、より好ましくは10〜30℃にて、通常1〜10日間、好ましくは3〜7日間培養を行う。培養は通気攪拌培養、振とう培養又は静置培養で行うことができるが、好ましくは通気攪拌培養又は振とう培養で培養する。
本発明のオーランチオキトリウム属の新規株が産生するスクワレン含有脂質は、当業者に既知の方法で抽出及び分析することができる。例えば、上記の通り培養して増殖させ、得られた培養液から遠心分離又は濾過等により回収した湿藻体を、凍結乾燥又は加温による乾燥等により乾燥させる。または、培養後の培地をそのままスクワレン含有脂質の抽出ステップに用いてもよい。
したがって、1リットル当たりのスクワレンの産生量としては、1.0〜2.0gとなる。
GPY培地(培地1L当たりグルコース20g、ポリペプトン10g、及び酵母エキストラクト5g)に海水(培地1L当たり500ml)、及び蒸留水を添加し、本発明のオーランチオキトリウム属の株を含む溶液と合わせて1Lとした(pH6.5)。これを120℃で20分間オートクレーブした後、25℃で4日間、通気条件下で振とう培養した。
得られた本発明のオーランチオキトリウム属の株を含む培養液に、クロロホルム・メタノール(2:1,V/V)を加えて脂質を抽出し、濃縮乾固後、n−ヘキサンで再抽出した。
Claims (3)
- オーランチオキトリウム(Aurantiochytrium)属に属する株であって、当該株が産生する全脂質中、スクワレンが10質量%以上であり、且つオレンジ色〜赤色を呈するコロニーを形成することを特徴とする株。
- 前記株が、オーランチオキトリウム・tsukuba−3株(受託番号:FERM BP-11442)である、請求項1に記載の株。
- 請求項1又は2のいずれか1項に記載のオーランチオキトリウム属に属する株を用いるスクワレンの製造方法。
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