JP5934203B2 - 抗addlモノクローナル抗体およびこの使用 - Google Patents
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Description
(a)
(i)配列Arg−Ser−Ser−Gln−Ser−Ile−Val−His−Ser−Asn−Gly−Asn−Thr−Tyr−Leu−Glu(配列番号1)を有するCDR1、
(ii)配列Lys−Ala−Ser−Asn−Arg−Phe−Ser(配列番号2)を有するCDR2、および
(iii)配列Phe−Gln−Gly−Ser−Xaa1−Xaa2−Xaa3−Xaa4−Xaa5(配列番号3)を有し、Xaa1がArg、LysまたはTyrであり、Xaa2がVal、AlaまたはLeuであり、Xaa3がPro、HisまたはGlyであり、Xaa4がAla、ProまたはValであり、Xaa5がSer、GlyまたはPheであるCDR3
を含む軽鎖可変領域;ならびに
(b)
(i)配列Gly−Phe−Thr−Phe−Ser−Ser−Phe−Gly−Met−His(配列番号4)を有するCDR1、
(ii)配列Tyr−Ile−Ser−Arg−Gly−Ser−Ser−Thr−Ile−Tyr−Tyr−Ala−Asp−Thr−Val−Lys−Gly(配列番号5)を有するCDR2、および
(iii)配列Gly−Ile−Thr−Thr−Ala−Leu−Asp−Tyr(配列番号6)を有するCDR3
を含む重鎖可変領域
を含む、アミロイドβ由来拡散性リガンド(ADDL)と結合する単離抗体またはこれらの抗原結合断片を対象とする。
(a)
(i)配列Arg−Ser−Ser−Gln−Ser−Ile−Val−His−Ser−Xaa1−Gly−Xaa2−Thr−Tyr−Leu−Glu(配列番号53)を有し、Xaa1がAsn、Ser、Thr、Ala、AspまたはGluであり、Xaa2がAsn、His、Gln、Ser、Thr、AlaまたはAspであるCDR1、
(ii)配列Lys−Ala−Ser−Xaal−Arg−Phe−Ser(配列番号54)を有し、Xaa1がAsn、Gln、Ser、ThrまたはAlaであるCDR2、および
(iii)配列Phe−Gln−Gly−Ser−Arg−Leu−Gly−Pro−Ser(配列番号10)を有するCDR3
を含む軽鎖可変領域、ならびに
(b)
(i)配列Gly−Phe−Thr−Phe−Ser−Ser−Phe−Gly−Met−His(配列番号4)を有するCDR1、
(ii)配列Tyr−Ile−Ser−Arg−Gly−Ser−Ser−Thr−Ile−Tyr−Tyr−Ala−Asp−Thr−Val−Lys−Gly(配列番号5)を有するCDR2、および
(iii)配列Gly−Ile−Thr−Thr−Ala−Leu−Asp−Tyr(配列番号6)を有するCDR3
を含む重鎖可変領域
を含む、アミロイドβ由来拡散性リガンド(ADDL)と結合する単離抗体またはこれらの抗原結合断片を対象とする。
(a)ニューロンを含む組成物とADDLとを、薬剤の存在下で接触させるステップ、
(b)該組成物と単離抗ADDL抗体またはこれらの抗原結合断片とを接触させるステップ、および
(c)薬剤の存在下で結合した、抗体または抗原結合断片の量を検出するステップ
を含み、薬剤の不在下で結合した抗体の量と比較して、薬剤の存在下で結合した抗体または抗原結合断片の量の減少が、薬剤が、ニューロンへのADDLの結合を減衰させるための推定治療薬であることを示す、ニューロンへのアミロイドβ由来拡散性リガンド(ADDL)の結合を減衰させる推定治療薬を同定する方法である。
A.ADDLモノクローナル抗体の作製
本明細書において「合成」ADDLと称される種である可溶性Aβオリゴマーを、完全フロイントアジュバント(初回および2回目のワクチン接種)または不完全フロイントアジュバント(その後のすべてのワクチン接種)と1:1で混合し、皮下注射(最初の2回のワクチン接種)または腹腔内注射により3匹のマウスに、全容積1mL/マウスを与えた。個々の注射は、194±25μgの総タンパク量に相当する精製ADDLからなった。マウスに、およそ3週間ごとに注射した。6回の注射後、1匹のマウスが死亡し、その脾臓を凍結した。もっとも高い力価の血清を有するマウス由来の脾臓を、その後ポリエチレングリコールの存在下でSP2/0骨髄腫細胞と融合させ、6枚の96ウェルプレートに播種した。細胞を、37℃、5%CO2で10日間、200μLのヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン(HAT)選択培地において培養し、HAT選択培地は、イスコフ改変ダルベッコ培地(IMDM)、(Sigma−Aldrich、St.Louis、MO)などの栄養強化合成培地に10%ウシ胎児血清(FBS)、1μg/mLのHYBRI−MAX(登録商標)(アザセリン−ヒポキサンチン;Sigma−Aldrich、MO)およびSP2/0細胞培養液から回収した30%の馴化培地を補足して構成されている。培養液に、10%のFBSを補足したIMDM(Sigma−Aldrich、St.Louis、MO)を、10日目に一度供給し、培養上清を14日目に取り除き、ELISAにおいて陽性のウェルをスクリーニングした。陽性培養液を、限界希釈法により0.3細胞/ウェルの確率でさらにクローニングした。陽性クローンをELISAにおいて確認し、さらに拡大(expanded)した。その後、モノクローナル抗体を作製し、使用のために精製した(QED Bioscience、San Diego、CA)。
ADDLを、すでに記載の方法を使用して調製した(Heplerら、2006,Biochemistry,45:15157−15167;Shughrueら、2010,Neurobiol.Aging,31:189−202)。
モノマー調製物を作製するために、RT Aβ1−40またはAβ1−42ペプチドフィルムを、2mLの25mMホウ酸緩衝液(pH8.5)/ペプチド1mgに溶解し、アリコートに分割し、使用まで−70℃において凍結した。線維調製物を、2mLの10mM塩酸/Aβ1−42ペプチドフィルム1mgを加えることによって作製した。溶液をボルテックスミキサーにおいて、可能な限り低い速度で5分から10分間混合し、得られた調製物を使用まで37℃において18から24時間保存した。
初代ニューロン培養液を、BrainBits(Springfield、IL)から購入したラットの海馬および/または皮質組織から調製した。解離後、細胞を35,000細胞/ウェルでラミニンおよびポリ−D−リジンで予備コーティングされた96ウェルプレートにプレーティングした(Corning Life Sciences、Lowell、MA)。細胞を、37℃、5%CO2で培地(2%のB27、1%のL−グルタミンおよび1%のpen/strepを補足したNeurobasal;Invitrogen、Carlsbad、CA)において2−3週間維持し、その後結合研究に使用した。
抗ADDL抗体がADDLの結合を遮断する効果を測定するために、抗ADDL抗体を500nMのbADDLと混合し、最終抗体濃度は1.8nMから450nMに及んだ。対照として、同じ濃度の熱変性(98℃、30分間)させた抗体を、bADDLと混合させた。抗体−bADDL混合物を、シリコン処理をした微小遠心管(Fischer Scientific、Pittsburgh、PA)において、低速で初めから終わりまで一定速度で回転しながら、37℃で1時間インキュベートした。その後、混合物を、初代海馬および/または皮質培養液に適用し、37℃において1時間インキュベートした。インキュベーションを、培養培地を取り除くことによって終了させた。細胞を、上記のように固定化および固定後処理に供した。その後、細胞をストレプトアビジン標識アルカリホスフェート(AP)と一緒に一晩4℃においてインキュベートし、PBSで5回洗浄し、Tropix(登録商標)CDP(登録商標)−Star化学発光基質(Life Technologies(商標)、Carlsbad、CA)と一緒に室温において30分間反応させた。bADDLの結合強度を、EnVision(登録商標)マイクロプレートリーダー(PerkinElmer、Waltham、MA)を用いて測定し、記録した。
ビオチン化ADDL(bADDL)またはモノマーAβ1−40またはAβ1−42を、PBS中100μl/ウェルのコーティング試薬を1μMで用いた高容量ストレプトアビジンコーティングプレート(Sigma−Aldrich、St.Louis、MO)に加え、2時間、室温においてインキュベートした。プレートを、0.05%Tweenを含むPBS中で洗浄し(6回)、その後PBS単独(3回)で洗浄し、その後PBS中5%脱脂粉乳を用いて、1時間、室温においてウェルを遮断した。その後ウェルを洗浄し、抗体試料の段階希釈液をプレートに加え、2時間、室温において結合させた。インキュベーションおよび洗浄後、抗体の結合を、ホースラッディシュペルオキシダーゼ(HRP)で標識されたヤギ抗ヒトIgG−Fc二次抗体を用いて検出した(1:1,000;1時間、室温において)。HRP標識を、テトラメチルベンジジン(Virolabs、Chantilly、VA)を基質として用いて可視化し、マイクロプレートリーダーにおいて450nmで読み取った。
A.ヒト化抗体ライブラリのパニング
軽鎖CDR3アミノ酸配列の一部がランダム突然変異誘発に供された、ヒト化抗ADDL抗体の親和性成熟ライブラリ、h3B3(米国特許出願公開第2006/0228349号明細書および第2008/0175835号明細書を参照されたい)を構築した。全CDR3領域を占めるために、2つのサブライブラリを作り上げた。1つのライブラリは、親の重鎖可変領域重鎖および軽鎖CDR3の左半分の変異アミノ酸で構成され、他方は軽鎖CDR3の右半分の変異アミノ酸で構成される。同様の戦略を、3つのサブライブラリを用いた重鎖CDRのランダム突然変異誘発に使用した。
軽鎖親和性成熟の取り組みから、ファージ/Fab ELISAにおいてh3B3と比較した場合、7種のクローンのパネルがADDLへの強い結合活性を示した(データ未掲載)。7種のクローンを、IgG変換のために選択し、さらなる特徴付けのためにモノクローナル抗体を作製し、精製した。
実施例2に記載のライブラリのパニングおよびスクリーニングの後、7種のリーディングFabクローン(表3−5)を、IgG変換のために選択した。表3は、親抗体のh3B3に対して、軽鎖親和性成熟ライブラリから選択されたクローンとのアミノ酸類似性を示す。表4Aは、選択されたクローンの軽鎖のCDR3における、親抗体のh3B3に関する軽鎖のCDR3とのアミノ酸の数の違いを要約する。表4Bは、選択されたクローンの軽鎖のCDR1における、親抗体の19.3に関する軽鎖のCDR3とのアミノ酸の数の違いを要約する。表4Cは、選択されたクローンの軽鎖のCDR2における、親抗体の19.3に関する軽鎖のCDR3とのアミノ酸の数の違いを要約する。表5は、選択されたクローンと親抗体h3B3に関する軽鎖可変領域の一部(21−117位)のアライメントである。各クローンのCDR3は太字で示してある。
変換されたIgGを、プラスミドに基づくベクターを使用して発現させることができる。発現ベクターを、可変領域を除くすべての必要な成分をそれらが含有するように作り上げた。基本ベクターにおいて、軽鎖および重鎖の両方の発現を、ヒトCMVプロモーターおよびウシ成長ホルモンのポリアデニル化シグナルにより駆動させた。IgG変換のために選択された7種のクローンに関して、重鎖可変領域を、ヒトIgG2重鎖定常領域(配列番号20および21)とインフレーム融合させ、一方、軽鎖可変領域は、カッパ軽鎖定常領域(配列番号18および19)とインフレーム融合させた。抗体の培養培地への分泌を仲介する、重鎖(配列番号29および30)および軽鎖(配列番号31および32)のリーダー配列もまた、それに応じて可変領域とインフレーム融合させた。重鎖発現ベクターに関して、定常領域は、異なるサブクラスのアイソタイプ、例えばIgG1またはIgG2から選択することができる。リーダー配列と定常領域との間の、遺伝子間配列は、In−Fusion cloning strategy(Clontech、Mountain View、CA)を使用する、入ってくる可変領域と、その5’末端におけるリーダー配列とのシームレスなインフレーム融合およびその3’末端における定常領域とのシームレスなインフレーム融合のために、クローニング配列を含有する。In−Fusion(商標)Dry−Down PCR Cloning Kits(Clontech、Mountain View、CA)を、可変領域のPCR増幅のために使用した。dry−down cloning kitは、PCR反応に必要なすべての成分を含有する。PCRプライマーおよび鋳型DNAを加えた。発現ベクターは、EBVウイルスゲノム由来のoriPを担持する。oriP/EBNA1対は、多くの場合、トランスフェクトされた細胞内部の発現ベクターの存在を遅延するために使用され、293EBNA細胞、カナマイシン選択マーカーのための細菌配列および大腸菌の複製起点における遅延発現のための、発現期間の延長のために広く使用される(Lindnerら、2007,Plasmid 58:1−12)。可変領域を挿入した場合、IgGが、哺乳動物細胞において直接発現された。本明細書のすべての重鎖可変領域を、IgG1発現ベクター(pV1JNSA−BF−HCG1)内にクローニングし、軽鎖可変領域を、適合するカッパまたはラムダ発現ベクター(pV1JNSA−GS−FB−LCK)内にクローニングした。
得られた抗体発現ベクターのためのクローニング手順は以下のとおりである。可変領域をPCR増幅し、PCR反応は、高正確性PCRマスターミックス(high fidelity PCR master mix)、鋳型体積1μLおよびフォワードプライマーおよびリバースプライマー:各1μLを含有する体積25μLで実施した。PCR条件:94℃、2分を1サイクル;94℃、1.5分;60℃、1.5分;72℃、1.5分および72℃、7分を25サイクル;取り出しまで4℃。PCR産物を、次いでDpnIを用いて消化し、QIAquick plate kit(Qiagen、Venlo、The Netherlands)を用いて精製した。100ngの対応する、すでに直線化された重鎖または軽鎖ベクターを、10ngのPCR断片にIn−Fusion reaction(IN−Fusion Dry−Down Cloning Kit、Clontech、Mountain View、CA)を用いてアニーリングした。反応混合物を、XL2 Blue MRF’コンピテント細胞に形質転換させ、50μg/mLのカナマイシンを含有する寒天プレートに一晩プレーティングした。軽鎖構築体を、HindIII+NotIを用いて消化し、重鎖構築体をAspI+Hindlllを用いて消化し、制限分析により構造を確認した。すべてのクローンに関するDNA配列を、シークエンシングにより確認した。
軽鎖および重鎖DNAmpシークエンシングにより確認された構築体を、293Freestyle細胞(Invitrogen、Carlsbad、CA)にトランスフェクトした。293Freestyle細胞を、293Transfectin(Invitrogen、Carlsbad、CA)を使用してトランスフェクトした。EBNA単相細胞を、PEIに基づくトランスフェクション試薬を使用してトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞を、37℃/5%CO2において7日間、Opti−MEM無血清培地(Invitrogen、Carlsbad、CA)においてインキュベートした。培地を回収し、遠沈させ、0.22μmのろ過系(Millipore、Billerica、MA)を介してろ過し、その後、Centricon(登録商標)遠心フィルター(Millipore、Billerica、MA)により濃縮した。濃縮された培地を結合緩衝液(Pierce、Thermo Fisher Scientific、Rockford、IL)と1:1で混合し、次いで、予備平衡化プロテインA/Gカラム(Pierce、Thermo Fisher Scientific、Rockford、IL)またはGE Healthcare、Waukesha、WIによるHI trap rProtein A FFに添加した。添加されたカラムを結合緩衝液で洗浄し、溶出緩衝液(Pierce、Thermo Fisher Scientific、Rockford、IL)で溶出した。溶出された抗体を迅速に中和し、緩衝液PBSに対して一晩透析した。透析された抗体を、Amicon 遠心フィルター(Pierce、Thermo Fisher Scientific、Rockford、IL)を用いて濃縮し、タンパク質濃度を、OD280nmにより1.34mg/mLの減衰係数を用いて決定した。生成された抗体を、SDS−PAGE(Invitrogen、Carlsbad、CA)またはタンパク質用ラボチップ(protein labchip)(Caliper LifeSciences、Hopkinton、MA)を使用して分析した。SDS−PAGEを、非還元条件下で行った。
選択された抗ADDL抗体、すなわち親抗体のh3B3に由来する抗体を、まず三方向AβELISAにおいて査定し、モノマーAβ、ADDLおよび線維性Aβに対する抗体の結合を評価した。図1に示すように、抗体9.2を除くすべての抗ADDL抗体が、h3B3、選択的(Comp1および3:ADDLだけに結合)、非選択性(Comp2:評価したすべてのAβ型と結合する)比較因子および対照(抗体なし)と相対的なADDLの優先的結合を示した。抗体9.2は、Aβのすべての型と低い結合を示し、これは、その結合親和性がIgG変換および/または抗体産生の間に悪影響を及ぼすことを示唆した。全滴定曲線(図2)を、各抗体およびh3B3に関して作製し、モノマーAβと比較した、ADDLに関するそれらの結合親和性を決定した。7つの親和性成熟抗体のうちの6つがADDLに対して優先的結合を示したにもかかわらず、出願者らは、ADDLへの優先的結合を有するいくつかの抗ADDL抗体が、初代海馬ニューロンへのADDLの結合を防止できないことをすでに示している(Shughrueら、2010、Neurobiol.Aging,31:189−202、図1)。
固定化されたヒトFcRnと結合および解離する抗ADDL抗体の能力を特徴付けるために、7種の本明細書の抗ADDL抗体を、Biacore FcRn結合アッセイにおいて評価し、代理系を使用して、抗体のPKを評価し、非ヒト霊長類における抗体の末期相半減期(t1/2)を予測した。
親和性成熟抗体19.3を、さらなる特徴付けのために選択した。軽鎖の可変領域に関する完全DNA配列および推定アミノ酸配列、それぞれ配列番号14および15を決定した。重鎖可変領域(配列番号17)および軽鎖(配列番号15)可変領域ともっとも近い生殖細胞系(配列番号47)とのアライメントを図6Aに示した。重鎖および軽鎖の可変領域の3Dモデルおよび6つの相補性決定領域(CDR)の位置を、図6Bに示す。
抗体凝集体形成に関する可能性を査定するための生物物理学的特徴付けを実施し、本明細書の抗ADDL抗体がストレス条件下で安定であり、治療としての使用に適切であることを示す。抗ADDL抗体19.3を50mg/mLを上回るように濃縮し、pHが5.0から8.0の範囲の多くの製剤に配置した。2組の試料を、37℃および45℃において1週間インキュベートした。第3の試料のセットは、−70℃に配置し、5回の凍結/解凍のサイクルを開始した。サイズ排除クロマトグラフィー分析により、抗体調製物が主に(>95%)モノマー状態であり、ダイマーは少量であることが示され、これはモノクローナル抗体に典型的であった。ダイマーおよび高分子量オリゴマーの量は、すべての緩衝液にわたって温度ストレス後に増加せず、分裂は観察されなかった。表8に要約するように、近紫外濁度分析もまた、凝集の欠如を示した。凍結/解凍ストレスがかかった試料は、濁度において緩衝液依存性増加を示し、これは他のモノクローナル抗体に匹敵した。50mg/mLにおける粘度は2センチポイズを下回り、20センチポイズレベルが皮下注射の実用限界であると一般的に考えられているので、許容可能な注射粘度を示した。示差走査熱量測定法もまた、許容可能な熱安定性を明らかにし、Fabは約72℃においてアンフォールディングであり、もっとも安定性が低いCH2ドメインは65℃より上でアンフォールディングであった。総合すると、抗体19.3は、皮下送達に対応する生物物理学的特性を有する非常に優れた構造安定性が実証された。
A.ヒトFcRnマウスにおける薬物動態研究
ヒトFcRnマウス(ヘテロ接合Tg276)(Jackson Laboratories、Bar Harbor、ME)は、近年、モノクローナル抗体薬物動態を評価するための有益な代理システムとして提案されている。ヒトFcRnマウスにおいて抗ADDL抗体19.3の薬物動態を特徴付けるために、3匹の動物に、尾静脈を介して10mg/kgの抗体19.3の単回静脈内注射を与えた。その後、一連の10μLの血液試料を、抗体19.3またはh3B3のIV投与後0、25、50、75、100、150、250および350時間の時点で回収し、認証された抗ヒトIgG免疫アッセイを使用して、抗体の血中レベルを決定した。図7に示すように、抗体19.3の血中レベルは二相の様式で低下し、明白なt1/2は77±6時間であり、これは親抗体のh3B3の半減期の約29±9時間より大幅に長かった。これらの半減期は、インビトロのFcRn結合アッセイにより予測された差と一致した(図5)。排出相末期相半減期を、非コンパートメントモデル(WinNonlin(登録商標)、Pharsight、Sunnyvale、CA)を使用して決定し、データは、投薬後3日および15日の間を示す。
霊長類における19.3の予測t1/2を確認するために、霊長類の薬物動態研究を、抗ADDL抗体19.3に関して、大槽内移植アカゲザルのコホートにおいて実施した。6匹の動物(3匹の雄/3匹の雌)に、抗体19.3(5mg/kg)の単回静脈内ボーラス投与または皮下注射を投薬し、抗体投与後に血液試料を回収した。同時に、CSF試料を、大槽内移植から0、2、4、8、12、24、30、48、54および72時間に回収し、血清およびCSF中の抗体19.3の濃度を、抗ヒトIgG ELISAアッセイを用いて決定した。動物に、抗体19.3の単回IVボーラス注射を投与した場合、254±28時間のt1/2が観察され、一方、皮下投与後204±49時間のt1/2が見られた(図8)。さらに、出願者らは、抗体19.3が霊長類のCSFを超えることができ、最初の48時間の間に濃度が上昇し、投薬された抗体の約0.1%でピークに達したことを見出した(図9)。
脳に達する抗体の濃度を決定する試みにおいて、12ヵ月齢の雄Tg2576マウス(B6系統;SJL−TgN APPSWE)に、200μgの125I標識19.3抗体(約8mg/kg)、または2つの比較抗体のうちの1つを注射し(尾静脈)、血液およびCSFを2時間後に回収した。残留放射能を、脳の取り出し前にPBSを用いて心かん流を介して脳の血管から一掃した。血液、CSFおよび脳全体の試料を、次いでガンマカウンターに配置し、各試料中に存在する放射標識抗体の量を決定した。計数後、脳を、4%パラホルムアルデヒドにおいて48時間固定し、その後、浮遊性免疫細胞化学のために処理した。マウス脳における抗体19.3の局在化を、抗ヒト二次抗体および標準ABC検出方法を用いて検出した。この免疫反応性を、次いでチオフラビンS染色(プラークを検出する染料)と組み合わせ、マウスの脳における抗体とプラークの共局在化を決定した。
脳においてADDLのアミロイドプラークへの沈着を減らす、抗ADDL抗体19.3の能力をさらに査定するために、12ヵ月齢の雄Tg2576マウス(Taconic、NY)に、毎週片側性にカニューレを挿入し、bADDL(50pmol/μL)を毎週、4週間の間海馬に注入した(図11A)。最終のbADDL処置の1週間後、マウスの半数(n=5/処置)に、毎週、4週間の間PBSを投薬し(尾静脈)、一方、残りの動物には、200μgの抗ADDL抗体(約8mg/kg)を毎週投薬した。すべての動物を、最終処置の1週間後に安楽死させ、それらの脳を免疫細胞化学のために処理した。bADDLおよびプラークの検出のために、脳の切片を、Streptavidin Alexa Fluor(登録商標)594(Invitrogen、Carlsbad、CA)とともにインキュベートし、スライドに載せ、プラークはチオフラビンSを用いて染色した。その後、プラークの蛍光画像を、PerkinElmer Rapid Confocal ImagerおよびUltraVIEW ERSソフトウェアを用いて取り込み、プラーク成長の違いを定量化した。このモデルの詳細は、近年発表された(Gasparら、2010,Exp.Neurol.,223:394−400)。処置の1ヵ月後、ビヒクル単独で処置した動物と比較した場合(図11B)、新しいADDLの既存のプラークへの沈着における有意な減少が、抗体19.3(図11C)を用いて処置された動物において見られた。
Claims (13)
- (a)
(i)配列番号1のCDR1、
(ii)配列番号2のCDR2、および
(iii)配列番号10のCDR3
を含む軽鎖可変領域;ならびに
(b)
(i)配列番号4のCDR1、
(ii)配列番号5のCDR2、および
(iii)配列番号6のCDR3
を含む重鎖可変領域
を含む、アミロイドβ由来拡散性リガンドと結合する単離抗体またはこれらの抗原結合断片。 - 前記抗体の軽鎖可変領域が配列番号15を含み、前記抗体の重鎖可変領域が配列番号17を含む、請求項1に記載の単離抗体。
- 配列番号21の重鎖定常領域をさらに含む、請求項1に記載の単離抗体。
- 抗体がモノクローナル抗体である、請求項1に記載の単離抗体。
- 請求項1に記載の抗体または抗原結合断片を、医薬として許容可能な担体と混合して含む医薬組成物。
- ニューロンへのアミロイドβ由来拡散性リガンドの結合を減衰させるための、請求項5に記載の医薬組成物。
- アミロイドβ1−42ペプチドを含有する試料と、請求項1に記載の抗体または抗原結合断片とを接触させ、その結果Aβ由来拡散性リガンドのアセンブリを阻害するステップを含む、アミロイドβ由来拡散性リガンドのアセンブリを阻害する方法。
- タウタンパク質を含有する試料と、請求項1に記載の抗体または抗原結合断片とを接触させ、その結果Ser202/Thr205におけるタウタンパク質のリン酸化を阻害するステップを含む、Ser202/Thr205におけるタウタンパク質のリン酸化を阻害する方法。
- アミロイドβ由来拡散性リガンドに関連する疾患の症状を減衰させる治療薬を製造するための請求項1に記載の抗体または抗原結合断片の使用。
- (a)ニューロンを含む組成物とアミロイドβ由来拡散性リガンドとを、薬剤の存在下で接触させるステップ、
(b)該組成物と請求項1に記載の抗体または抗原結合断片とを接触させるステップ、および
(c)薬剤の存在下で結合した、抗体または抗原結合断片の量を検出するステップ
を含み、薬剤の不在下で結合した抗体の量と比較して、薬剤の存在下で結合した抗体または抗原結合断片の量の減少が、薬剤が、ニューロンへのアミロイドβ由来拡散性リガンドの結合を減衰させるための推定治療薬であることを示す、ニューロンへのアミロイドβ由来拡散性リガンドの結合を減衰させる推定治療薬を同定する方法。 - 試料と請求項1に記載の抗体または抗原結合断片とを接触させるステップ、およびアミロイドβ由来拡散性リガンドおよび前記抗体または抗原結合断片を含む複合体の存在を決定するステップを含む、試料中のアミロイドβ由来拡散性リガンドを検出する方法。
- アミロイドβ由来拡散性リガンドに関連する疾患を診断する方法に使用される請求項1に記載の抗体または抗原結合断片を含むキットであって、該方法は、試料と請求項1に記載の抗体または抗原結合断片とを接触させるステップおよびアミロイドβ由来拡散性リガンドおよび前記抗体または抗原結合断片を含む複合体の存在を決定するステップを含み、前記複合体が、アミロイドβ由来拡散性リガンドに関連する疾患の診断である、当該キット。
- 請求項1に記載の抗体または抗原結合断片を含む、アミロイドβ由来拡散性リガンドを検出するためのキット。
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