JP5837481B2 - 糸球体腎炎治療 - Google Patents

Description

本発明は、糸球体腎炎の治療のための特定なポリ不飽和長鎖ケトンの使用、特に、かかる治療における、カルボニル官能基に対してアルファの位置に電子求引性置換基を有するケトンに関する。

糸球体腎炎（glomerular nephritis、ＧＮと略される）としても知られる糸球体腎炎（glomerulonephritis）は、糸球体または腎臓における微小血管の炎症を特徴とする腎臓病である。糸球体腎炎は、単独血尿および／またはタンパク尿を呈したり、あるいはネフローゼ症候群、急性腎不全、または慢性腎不全として現れる可能性がある。糸球体腎炎は、大きくは非増殖性または増殖性の種類に分けられるいくつかの異なる病理学的なパターンに分類される。異なる種類では転帰および処置が異なるので、ＧＮのパターンを診断することが重要である。

糸球体腎炎の主要な原因は腎臓に内因するものであるが、副次的な原因は、特定の感染症（細菌性、ウイルス性、もしくは寄生性の病原体）、薬物、全身性疾患（ＳＬＥ、脈管炎）、または癌である。

糸球体は、内皮細胞、メサンギウム細胞、および内臓の上皮細胞という３種類の特殊な細胞を有する特有の血管網である。メサンギウム細胞（ＭＣ）は、毛細血管網の構造支持、糸球体の血行動態の調節、ならびに高分子および免疫複合体の除去を可能にする食細胞機能を含む、腎臓の糸球体毛細血管における多くの機能を果たす。ＭＣの増殖は、ＩｇＡ腎症、膜性増殖性糸球体腎炎、ループス腎炎、および糖尿病性腎症を含む糸球体疾患の顕著な特徴である。

例えば、低タンパク食での治療による糸球体疾患モデルにおけるＭＣの増殖の減少は、細胞外マトリックスの増殖および糸球体の硬化的変化をもたらすことが示されている。ＭＣ増殖の防止剤は、したがって、増殖性糸球体疾患の処置に対する治療機会を提供する可能性がある。

メサンギウム増殖性糸球体腎炎は、腎臓糸球体における炎症を伴う糸球体腎炎の一形態である。糸球体毛細血管の一部であるメサンギウム細胞は大きさが増して、糸球体に粒々状の外観をもたらす。当該疾患は、通常、尿中のタンパク質喪失を示す腎炎症候群の原因である。当該疾患は急性、緩性、または急速進行性糸球体腎炎として存在し得、慢性腎不全まで進行する場合がある。

ＭＣの増殖は、様々な薬剤、例えば、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）、サイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ）、血小板由来増殖因子などに対する阻害剤により阻害されることが知られている。

糸球体はまた、酸化窒素シンターゼ（ＮＯＳ）のアイソフォームをいくつか発現する可能性がある。糸球体腎炎における免疫傷害に対する急速な初期応答の一部として、誘導型ＮＯＳの誘導が起こる。糸球体におけるＮＯＳにより生じるＮＯの役割は依然としてはっきりしていないが、いくつかの研究では、ＮＯの阻害がタンパク尿および白血球浸潤の程度、ならびに血栓症、増殖、およびマトリックス産生などの他の傷害の症状を変化させ得ることが示されている。

ＮＯの減少がメサンギウム増殖の改善に寄与し、したがって糸球体腎炎の症状の緩和をもたらすことが明らかであると考えられる。

本発明者らは、ＧＮおよび関連する症状に対する新規の治療法を探究する。上記のように、現在提案されている治療法は、リシノプリルおよび類似化合物などのアンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤に基づく場合がある。これら阻害剤は血圧を低下させる（これはすべての降圧薬に一般的な特徴である）が、これら阻害剤はまた、腎臓内のＭＣの増殖の阻害活性を有し、またタンパク尿を減少させると考えられる。他の治療法は、ＣＤＫ２拮抗薬またはカルシウム拮抗薬の使用を含む。

本発明者らは、いくつかは新規であり他のものは公知である請求項に記載の化合物が、増殖性の症状一般および特に糸球体腎炎の治療に可能性があることを見出した。本発明者らは、長鎖不飽和脂肪酸分子に基づくある種の化合物が糸球体腎炎の治療に有用であることを見出した。

本発明での使用が提案されている化合物のいくつかは以前に、例えば、ＥＰ−Ａ−１４６９８５９に開示されているが、当該文献中では乾癬の治療の文脈においてのみ開示されている。本発明者らは、これらの化合物などが糸球体腎炎や他の増殖性疾患の治療にも有用であることを見出した。

したがって、本発明の一態様によれば、糸球体腎炎の治療で使用するための、式（Ｉ）の化合物
Ｒ−Ｌ−ＣＯ−Ｘ （Ｉ）
（式中、Ｒは、場合によってはＳ、Ｏ、Ｎ、ＳＯ、ＳＯ₂から選ばれる１個以上のヘテロ原子またはヘテロ原子の群によって割り込まれていてもよいＣ_10-24不飽和炭化水素基であり、当該炭化水素基は、少なくとも４個の非共役二重結合を含み；
Ｌは、Ｒ基と前記カルボニルＣＯとの間に原子を１〜５個有する橋状結合を形成する連結基であり；
Ｘは、電子求引基である）またはその塩である。

図１は、メサンギウム細胞におけるサイトカイン刺激性ＰＧＥ₂形成に対する実施例の阻害剤の効果を示す。 図２は、メサンギウム細胞におけるサイトカイン刺激性ｓＰＬＡ₂タンパク質（Ａ）およびｍＲＮＡ（Ｂ）発現ならびにプロモーター活性に対する実施例の阻害剤の効果を示す。 図３は、メサンギウム細胞におけるサイトカイン刺激性ＮＯ形成に対する実施例の阻害剤の効果を示す。 図４は、メサンギウム細胞におけるサイトカイン刺激性ｉＮＯＳタンパク質（Ａ）およびｍＲＮＡ（Ｂ）発現ならびにプロモーター活性に対する実施例の阻害剤の効果を示す。 図５は、メサンギウム細胞における［３Ｈ］チミジン取り込みに対する実施例の阻害剤の効果を示す。 図６は、メサンギウム細胞におけるＩＬ−１β刺激性ＮＦｋＢ活性化に対する実施例の阻害剤の効果を示す。

別の態様によれば、本発明は、動物、好ましくは哺乳類、例えばヒト、に、有効量の上記の式（Ｉ）の化合物のまたはその塩を投与することを含む、糸球体腎炎の治療方法を提供する。

別の態様によれば、本発明は、糸球体腎炎の治療用薬剤の製造に使用するための、上記式（Ｉ）の化合物またはその塩の使用を提供する。

［詳細な説明］
本発明は、糸球体腎炎および関連する症状の治療における式（Ｉ）の化合物またはその塩の使用を伴う。糸球体腎炎は、糸球体の炎症を特徴とする腎臓病である。

基Ｒは、好ましくは、二重結合を５〜９個、好ましくは二重結合を５〜８個、例えば、二重結合を５〜７個、例えば、二重結合を５個または６個含む。これらの結合は非共役結合であるのがよい。また、二重結合は、カルボニル官能基と共役していないことが好ましい。

基Ｒにおける二重結合は、シスまたはトランス配置であってもよいが、存在する二重結合の大部分が（つまり、少なくとも５０％）がシス配置であることが好ましい。さらに有利な実施形態では、基Ｒにおける二重結合がすべてシス配置であるか、またはカルボニル基に最も近い二重結合がトランス配置であってもよいことを除いてはすべての二重結合がシス配置である。

基Ｒは、炭素原子を１０〜２４個、好ましくは炭素原子を１２〜２０個、特に炭素原子を１７〜１９個有してもよい。

Ｒ基は、少なくとも１個のヘテロ原子またはヘテロ原子の群により割り込まれていてもよいが、これは好ましくなく、Ｒ基の主鎖は炭素原子のみを含むことが好ましい。

Ｒ基は、例えば、ハロ、メチルなどのＣ_1-6アルキル、Ｃ_1-6アルコキシから選ばれる置換基を３個まで有していてもよい。存在している場合は、置換基は好ましくは無極性であり、メチル基などの小さい基である。しかしながら、Ｒ基は非置換のままであるのが好ましい。

Ｒ基は好ましくは直鎖である。これは、好ましくは、長鎖脂肪酸またはエステルなどの自然源に由来することが好ましい。特に、Ｒ基は、ＡＡ、ＥＨＡ、またはＤＨＡに由来してもよい。

連結基Ｌは、Ｒ基と前記カルボニルとの間に、主鎖原子が１〜５個の、好ましくは主鎖原子が２〜４個の橋掛け基を提供する。連結基の主鎖における原子は、炭素および／またはＮ、Ｏ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ₂などのヘテロ原子であってもよい。当該原子は、環の一部を形成してもよく、連結基の主鎖原子は側鎖、例えば、Ｃ_1-6アルキル、オキソ、アルコキシ、またはハロなどの基で置換されていてもよい。

連結基の好ましい構成要素は、−ＣＨ₂−、−ＣＨ（Ｃ_1-6アルキル）−、−Ｎ（Ｃ_1-6アルキル）−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＯ−、−ＳＯ−、−ＳＯ₂−であり、これらは、（化学的に意味のある）任意の順番で互いに組み合わされて連結基を形成してもよい。したがって、２個のメチレン基および１個の−Ｓ−基を使用することにより、連結基−ＳＣＨ₂ＣＨ₂−が形成される。

連結基Ｌは、主鎖に少なくとも１個のヘテロ原子を含むことが非常に好ましい。Ｒ基に結合した連結基の１個目の主鎖原子がヘテロ原子またはヘテロ原子の群であることも好ましい。

連結基Ｌは、主鎖に少なくとも１個の−ＣＨ₂−リンクを含むことが非常に好ましい。理想的には、カルボニルに隣接する連結基の原子が、−ＣＨ₂−である。

基Ｒまたは基Ｌ（Ｌ基の大きさによる）は、カルボニルに対してα、β、γ、またはδ、好ましくはカルボニルに対してβまたはγに位置するヘテロ原子またはヘテロ原子の群を提供することが好ましい。好ましくは、ヘテロ原子は、Ｏ、Ｎ、もしくはＳ、またはＳＯなどの硫黄誘導体である。

したがって、連結基は、−ＮＨ₂ＣＨ₂、−ＮＨ（Ｍｅ）ＣＨ₂−、−ＳＣＨ₂−、−ＳＯＣＨ₂−、−ＣＯＣＨ₂−であることが非常に好ましい。

また、連結基が環であるかまたは環を含むことも本発明の範囲内である。したがって、例えば、連結基は、２、４−チオフェンなどのチオフェンであってもよく、この場合カルボニルに対して原子２個（最短経路で）の橋状結合が提供される。連結基が、フラン、テトラヒドロフラン、ピペリジン、シクロヘキサン、ベンゼン、またはピリジンなどの環であることも可能である。連結基が環を含む場合は、この環が５または６員環であることが好ましい。環が少なくとも１個のヘテロ原子またはヘテロ原子の群を含むことが好ましい。環は、不飽和であるか芳香性であることが好ましい。Ｒ基およびＣＯＸ基が、かかる環へ直接結合するときは、Ｒ基およびＣＯＸ基は、違う原子に結合することが好ましく、環の炭素原子に結合することが好ましい。

置換パターンは、Ｒおよびカルボニルの置換基が互いに対してアルファ、ガンマ（つまり、１，３、または２，４、または３，５−スプリット）であるのが好ましい。

誤解を避けるため、原子１〜５個の橋状結合が、連結基の最初からカルボニルまでの最短経路として数えられるべきであることを強調しておく。

適切な環状連結基を下記に示し、ここでＲ基およびカルボニルは、これらの環上の任意の２個の炭素原子に結合することができる。

また、連結基が環状および非環状部分、例えば、ＣＨ₂−チオフェンまたはＮＨ₂−チオフェンなどを含むことも本発明の範囲内である。かかる連結基では、Ｒ基が環に直接結合し、カルボニル基が、非環状部分、例えば、−ＣＨ₂−結合に結合することが好ましい。当業者であれば、本発明での使用に適切な様々な連結基を何れも思いつくであろう。

非常に好ましい連結基は、−ＣＨ₂−、−ＣＨ₂−ＣＨ₂−、−ＣＨ（Ｍｅ）、−ＣＨ（Ｍｅ）ＣＨ₂−、−ＣＨ（Ｍｅ）−ＣＨ（Ｍｅ）−、ＳＣＨ₂、ＮＨＣＨ₂、Ｎ（Ｍｅ）ＣＨ₂、２，４−チオフェン、および２，５−チオフェンである。

基Ｘは、電子求引基である。この点において適切な基としては、Ｏ−Ｃ_1-6アルキル、ＣＮ、ＯＣＯ₂−Ｃ_1-6アルキル、フェニル、ＣＨａｌ₃、ＣＨａｌ₂Ｈ、ＣＨａｌＨ₂が挙げられ、ここでＨａｌは、ハロゲン、例えばフッ素、塩素、臭素、またはヨウ素、好ましくはフッ素を表す。

好ましい実施形態では、電子吸引基は、ＣＨａｌ₃、特にＣＦ₃である。

したがって、好ましい式（Ｉ）の化合物は、式（Ｉ’）の化合物である。

Ｒ−Ｙ１−Ｙ２−ＣＯ−Ｘ
式中、ＲおよびＸは、上に定義のとおりであり；
Ｙ１は、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、Ｎ（Ｃ_1-6−アルキル）、ＳＯ、またはＳＯ₂から選ばれ、Ｙ２は、（ＣＨ₂）_nまたはＣＨ（Ｃ_1-6アルキル）であるか；あるいは、
Ｙ１およびＹ２は、一緒になって５員または６員の単素または複素の、場合によって不飽和または芳香性であってもよい、環を形成するか；あるいは、
Ｙ１は、５員または６員の単素または複素の、場合によって不飽和または芳香性であってもよい、環を形成し、Ｙ２は（ＣＨ₂）_nであり；
ここでｎは、１〜３、好ましくは１である。

本発明での使用に非常に好ましい（公知の）化合物を下記に示す。

いくつかの化合物は新規であり、本発明のさらなる態様を成す。

したがって、別の態様から見ると、本発明は、式（Ｉ’’）の化合物を提供する。

Ｒ−Ｙ１−Ｙ２−ＣＯ−Ｘ （Ｉ’’）
式中、ＲおよびＸは、上に定義のとおりであり；
Ｙ１およびＹ２は、一緒になって５員または６員の単素または複素の、場合によって不飽和または芳香性であってもよい、環を形成するか；あるいは、
Ｙ１は、５員または６員の単素または複素の、場合によって不飽和または芳香性であってもよい、環を形成し、Ｙ２は（ＣＨ₂）_nであり；
ここでｎは、１〜３、好ましくは１である。

新規のさらなる化合物としては、化合物ＲＮ（Ｃ_1-6アルキル）ＣＯＸが挙げられる。

したがって、別の態様から見ると、本発明は、式（ＩＩ）の化合物を提供する。

ＲＮ（Ｃ_1-6アルキル）（ＣＨ₂）_nＣＯＸ （ＩＩ）
式中、Ｒ、ｎ、およびＸは、上に定義のとおりである。当該化合物は、特に次の化合物である。

新規であるさらなる好ましい化合物は、Ｌ基が環であるかまたは環を含むものである。したがって、別の態様から見ると、本発明は、式（ＩＩＩ）の化合物を提供する。

Ｒ−Ｌ’−ＣＯ−Ｘ （ＩＩＩ）
式中、ＲおよびＸは、上に定義のとおりであり、Ｌ’は、Ｒ基とカルボニルＣＯとの間に原子を１〜５個有する橋状結合を形成する連結基を表し、ここで当該Ｌ’は、環構造を含む。

式（ＩＩＩ）の好ましい化合物を下記に示す。

式中、ｎは１〜３、例えば１〜２である。

特に好ましくは、上記基は、環の２位および４位に結合する（図中、原子１がＳ原子である）。

別の態様から見ると、本発明は、少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と組み合わせた、上に定義するような任意の新規の化合物を含む医薬組成物を提供する。

下記の化合物が、本発明での使用に非常に好ましい。

可能であれば、本発明の化合物は、塩、溶媒和物、プロドラッグ、またはエステルの形態、特に塩の形態で投与することができる。しかしながら、好ましくは、かかる形態は使用しない。

典型的には、薬学的に許容される塩は、所望の酸を使うことにより容易に調製され得る。塩は、溶液から析出させ、ろ過により採取してもよいし、溶媒の蒸発により回収してもよい。例えば、塩酸などの酸の水溶液は、式（Ｉ）の化合物の水性懸濁液に加えてもよく、得られる混合物を蒸発乾固させ（凍結乾燥）、固形物として酸付加塩が得られる。あるいは、式（Ｉ）の化合物は、適切な溶媒、例えば、イソプロパノールなどのアルコールに溶解してもよく、酸は、同じ溶媒または別の適切な溶媒に加えてもよい。次いで、得られる酸付加塩を直接またはジイソプロピルエーテルもしくはヘキサンなどのより極性の低い溶媒を加えることにより析出させてもよく、ろ過により単離される。

適切な付加塩は、非毒性の塩を形成する無機酸または有機酸から形成され、例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸水素塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、グルコン酸塩、コハク酸塩、ピルビン酸塩、シュウ酸塩、オキサロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、糖酸塩、安息香酸塩、アルキルもしくはアリールスルホン酸塩、（例えば、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、もしくはｐ−トルエンスルホン酸塩）、およびイセチオン酸塩が挙げられる。代表的な例としては、トリフルオロ酢酸塩ならびにギ酸塩、例えば、ビストリフルオロ酢酸塩もしくはトリストリフルオロ酢酸塩、およびモノギ酸塩もしくはジギ酸塩、特に、トリストリフルオロ酢酸塩もしくはビストリフルオロ酢酸塩およびモノギ酸塩が挙げられる。

さらなる非常に好ましい実施形態では、本発明の化合物はスルホニウム塩である。かかる化合物では、分子の主鎖中（例えば、連結基中）の硫黄原子は、Ｃ_1-6−アルキル基を有するように官能化されている。これは、ハロゲン化アルキル、例えば、ヨウ化メチルを用いて反応させて達成することができる。ハロゲン化物イオンは、塩の対イオンを形成する。

さらなる好ましい実施形態では、したがって、本発明は、式（Ｉ）の化合物のスルホニウム塩を提供する。好ましくは、当該化合物は、式（ＶＩ）のものである。

ＲＳ（Ｃ_1-6アルキル）ＣＨ₂ＣＯＸ⁺Ｚ^- （ＶＩ）
式中、ＲおよびＸは上に定義のとおりであり、Ｚは、例えば、ハロゲン化物などの対イオンである。当該化合物は、例えば、下記の化合物である。

式（Ｉ）の化合物は、公知の化学合成経路を用いて製造されてもよい。市販の化合物であるアラキドン酸（ＡＡ）、ＥＰＡ（ａｌｌ−Ｚ−エイコサ−５，８，１１，１４，１７−ペンタエン酸）、またはＤＨＡ（ａｌｌ−Ｚ−ドコサ−４、７、１０、１３、１６、１９−ヘキサエン酸）から合成を開始することが都合がよい。これらの化合物の酸官能基の、例えば、−ＣＯＣＦ₃基への変換は、例えば、カルボン酸をその対応する酸クロリドに変換し、それをピリジンの存在下で無水トリフルオロ酢酸と反応させることにより容易に達成することができる。

炭素鎖へのヘテロ原子の導入も容易に達成される。都合良くは、例えば、出発の酸を、アルコールに還元し、必要であれば、対応するチオールに変換する。次に、ＢｒＣＨ₂ＣＯＣＦ₃などの基で求核性チオールを反応させてもよく、これによりカルボニルおよび電子求引性種が導入される。合成プロトコルの詳細は、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ １、２０００、２２７１〜２２７６またはＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，１６１，３４２１に見出すことができる。

分子の主鎖が窒素原子を含んでいる場合は、別の合成が必要である。ポリ不飽和アルコールの形成は、上記Perkin Transの論文中に記載のプロトコルを用いて達成することができる。その後、例えば、フタルイミドおよびその後のヒドラジン還元を用いたアルコール−ＯＨの−ＮＨ₂への変換により、トリフルオロプロピレンオキシド（ＴＦＰＯ）との反応およびケトンへの水酸基の酸化による−ＮＨ₂ＣＨ₂ＣＯＣＦ₃基の形成が可能になる。この反応を下記に示す。

この反応の前に、Ｎ−ＢＯＣ基の形成および、例えば水素化アルミニウムリチウムを用いた還元により窒素のメチル化を行ってもよい。ＴＦＰＯとの反応および酸化により連結基であるＮＭｅ−ＣＨ₂が得られる。

これは、本発明のさらなる態様を成し、したがって、本発明は、下記工程を含む式（Ｉ）の化合物の調製方法を提供する。

（Ｉ）化合物Ｒ−ＯＨをＲ−ＮＨ₂に変換すること；
（ＩＩ）場合によってはＮ原子をメチル化すること；
（ＩＩＩ）ＴＦＰＯと反応させること；および
（ＩＶ）形成された水酸基をケトンまで酸化すること。

本発明の化合物は、中でも糸球体腎炎の治療における使用を主として提案される。本発明の化合物は、一般に糸球体腎炎の治療に役立つが、増殖型の当該疾患の治療において特に有用である。

治療すること、または治療により下記の少なくとも１つを意味する。

（ｉ）．哺乳類において発症した疾患の臨床的な症状の出現を予防するかまたは遅延させること；
（ｉｉ）．疾患を阻害すること、つまり、疾患の発症、またはその再発、またはその臨床的もしくは亜臨床的な症状の少なくとも１つを停止させる、減少させる、または遅延させること；あるいは
（ｉｉｉ）．疾患の臨床的もしくは亜臨床的な症状の１つ以上を軽減させるかまたは減退させること。

治療される被験者に対する利益は、統計的に有意なものであるか、または患者もしくは医師に少なくとも知覚可能であるものかのいずれかである。一般に、当業者であれば「治療」がいつ起こるかを理解することができる。

本明細書において「治療」なる語はまた、予防的治療、つまり問題となる疾患を発症する危険性のある被験者を処置することを含む。

本発明の化合物は、任意の動物被験体、特に哺乳類、より具体的にはヒトまたは疾患モデルとしての役割を果たす動物（例えば、マウス、サルなど）に対して使用できる。

疾患を治療するため、有効量の活性物質を患者に投与する必要がある。「治療上有効な量」とは、状態、疾患、または症状を治療するための動物に投与された場合に、そのような治療をもたらすのに十分な化合物の量を意味する。「治療上有効な量」は、化合物、疾患およびその重症度、ならびに治療される被験者の年齢、体重、健康状態および応答性よって異なり、最終的には主治医の判断によることになる。

本発明の方法での使用には、式Ｉの化合物を原薬として投与することが可能であるが、例えば、意図する投与経路および標準的な薬務に関連して選ばれた薬学的に許容される担体と活性成分とを混合した医薬製剤にて当該活性成分を提供することが好ましい。

「担体」なる語は、活性化合物が共に投与される希釈剤、賦形剤、および／またはベヒクルを指す。本発明の医薬組成物は、１種を超える担体の組み合わせを含んでもよい。かかる医薬担体は、当技術分野において周知である。医薬組成物はまた、任意の適切な結合剤、滑沢剤、懸濁化剤、コーティング剤、および／または可溶化剤などを含んでもよい。当該組成物はまた、他の活性成分、例えば、糸球体腎炎の治療用の他の薬剤を含んでもよい。

なお、本発明による使用のための医薬組成物は、経口、腸管外、経皮、吸入、舌下、局所、移植、経鼻、または腸内投与される（または他の粘膜投与される）懸濁剤、カプセル剤、または錠剤の形態でもよく、これらは、１種以上の薬学的に許容される担体または賦形剤を用いて、従来の方法で製剤化されてもよい。本発明の組成物はまた、ナノ粒子製剤として製剤化できる。

本発明の化合物は、即時放出性か、遅延放出性か、調節放出性、徐放性、パルス放出性、または制御放出性用途のために投与することができる。

本発明の医薬組成物は、活性物質を体積当たり０．０１〜９９％重量含んでもよい。

治療上有効な量の本発明の化合物は、当技術分野で公知の方法により決定することができる。治療上有効な量は、患者の年齢および全身の生理的状態、投与経路、ならびに使用する医薬製剤によって決まる。治療用量は、一般に、約１０〜２０００ｍｇ／日の間、好ましくは約３０〜１５００ｍｇ／日の間である。使用し得る他の範囲としては、例えば、５０〜５００ｍｇ／日、５０〜３００ｍｇ／日、１００〜２００ｍｇ／日が挙げられる。

投与は、１日１回、１日２回、またはより頻繁に行われてもよく、疾患または疾病の維持期においては減らしてもよく、例えば、毎日または１日２回に代わって２日または３日に１回でもよい。用量および投与頻度は、当業者に分かる少なくとも１つ、好ましくは１つを超える急性期の臨床徴候の減少や消失によって寛解期が持続していることが確認される臨床徴候によって決まる。

本発明の薬剤を経口的に服用することが有利である。

本発明の化合物は、糸球体腎炎および関連する疾患の治療に使用してもよい。特に、本発明の化合物は、メサンギウム増殖性糸球体腎炎、ネフローゼ症候群、慢性もしくは急性腎不全、タンパク尿、血尿症、ＩｇＡ腎症、膜性増殖性糸球体腎炎、ループス腎炎、糖尿病性腎症、および糸球体硬化を治療するために使用してもよい。

本発明の化合物は、糸球体腎炎の治療目的のための他の公知の薬剤と組み合わせて糸球体腎炎を治療するために使用されてもよく、これは本発明のさらなる態様を成す。他の有用な薬剤としては、コルチコステロイド、免疫抑制剤、降圧薬、および利尿剤が挙げられる。

本発明を、次の非限定的な実施例および図を参照して下記にさらに記載する。

［図面の簡単な説明］
図１は、メサンギウム細胞におけるサイトカイン刺激性ＰＧＥ₂形成に対する実施例の阻害剤の効果を示す。休止細胞を、表示の濃度のＡＫＨ−２１７およびＡＶＸ００２の非存在下（−）または存在下で、ＤＭＥＭ（−）またはＩＬ−１β（１ｎＭ）のいずれかで刺激した。上清を採取し、ＥＬＩＳＡを用いたＰＧＥ２の定量に利用した。データは、最大のＩＬ−１β刺激性ＰＧＥ２に対する％として表し、平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３）である。

図２は、メサンギウム細胞におけるサイトカイン刺激性ｓＰＬＡ₂タンパク質（Ａ）およびｍＲＮＡ（Ｂ）発現ならびにプロモーター活性に対する実施例の阻害剤の効果を示す。休止細胞を、ＡＫＨ−２１７（ｅｔＯＨ）、ビヒクル対照の非存在下（−）または存在下で、ＤＭＥＭ（−）またはＩＬ−１β（１ｎＭ）のいずれかで刺激した。

（Ａ）上清をタンパク質の析出に利用し、析出したタンパク質を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ラットｓＰＬＡ₂に対するモノクローナル抗体を用いたウエスタンブロット分析に供した。データは、デュプリケートで行った代表的な実験の結果を示す。

（Ｂ）細胞をＲＮＡ抽出に利用し、ラットＩＩＡ−ｓＰＬＡ₂および１８ Ｓ ＲＮＡの定量ＰＣＲ分析に供した。ΔΔＣｔ値を算出し、結果は最大のＩＬ−１β刺激性の応答に対する％として表し、平均＋Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３）である。

（Ｃ）細胞を、レニラルシフェラーゼをコードするプラスミドを加えたｓＰＬＡ２プロモーターコンストラクトでトランスフェクトした。トランスフェクトした後、細胞を、ビヒクル（−）、ＩＬ−１β（１ｎＭ）、または１０μＭのＡＫＨ−２１７を加えたＩＬ−１βで２４時間刺激した。ｓＰＬＡ２プロモーター活性を算出し、結果は相対ルシフェラーゼ単位（ＲＬＵ）として表し、平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３）である。

図３は、メサンギウム細胞におけるサイトカイン刺激性ＮＯ形成に対する実施例の阻害剤の効果を示す。休止細胞を、表示の濃度のＡＫＨ−２１７、ＡＶＸ００２、またはＡＡＣＯＣＦ３の非存在下または存在下で、ＤＭＥＭ（−）またはＩＬ−１β（１ｎＭ；＋）のいずれかで刺激した。上清を採取し、Ｇｒｉｅｓｓ反応アッセイを用いた酸化炭素（ＮＯ）の定量に利用した。データは、上清中のＮＯをμＭで表し、平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３）である。

図４は、メサンギウム細胞におけるサイトカイン刺激性ｉＮＯＳタンパク質（Ａ）およびｍＲＮＡ（Ｂ）発現ならびにプロモーター活性に対する実施例の阻害剤の効果を示す。休止細胞を、表示の濃度（μＭ）のＡＶＸ００１、ＡＶＸ００２、ＥｔＯＨ、ビヒクル対照の非存在下（−）または存在下で、ビヒクル（ＤＭＥＭ）またはＩＬ−１β（１ｎＭ）のいずれかで刺激した。（Ａ）細胞をタンパク質抽出に利用し、等量のタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ｉＮＯＳに対するポリクローナル抗体を１：２０００の希釈度で用いたウエスタンブロット分析に供した。データは少なくとも３つの別々の実験を表し、同様の結果が得られた。

（Ｂ）細胞をＲＮＡ抽出に利用し、ラットｉＮＯＳおよび１８ Ｓ ＲＮＡの定量ＰＣＲ分析に供した。ΔΔＣｔ値を算出し、結果は、最大のＩＬ−１β応答に対する％として表し、平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３）である。

（Ｃ）細胞を、レニラルシフェラーゼをコードするプラスミドを加えたラットｉＮＯＳプロモーターコンストラクトでトランスフェクトした。トランスフェクトした後、細胞を、ビヒクル（−）、ＩＬ−１β（１ｎＭ）、または１０μＭのＡＶＸ００１を加えたＩＬ−１βで刺激した。ｉＮＯＳプロモーター活性を算出し、結果は、相対ルシフェラーゼ単位（ＲＬＵ）として表し、平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３）である。

図５は、メサンギウム細胞における［³Ｈ］チミジン取り込みに対する実施例の阻害剤の効果を示す。休止細胞を、［³Ｈ］チミジンの存在下、表示の濃度のＡＶＸ００１またはＡＶＸ００２の非存在下（−）または存在下で、ビヒクル（ＤＭＥＭ）または１００μＭのＡＴＰで２４時間刺激した。

（Ｂ）細胞を、［³Ｈ］チミジンの存在下、１０μＭのＡＶＸ００１またはＡＶＸ００２の非存在下（−）または存在下で、インスリン（１００ｎｇ／ｍｌ）またはＩＧＦ（５０ｎｇ／ｍｌ）で２４時間刺激した。ＤＮＡに取り込まれたチミジンを測定し、結果は、対照に対する％として表し、平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３）である。

図６は、メサンギウム細胞におけるＩＬ−１β刺激性ＮＦｋＢ活性化に対する実施例の阻害剤の効果を示す。休止細胞を、ＡＶＸ００１またはＡＶＸ００２（１０μＭ、２時間の前処理）の非存在下（−）または存在下（＋）で、ビヒクル（ＤＭＥＭ）またはＩＬ−１β（２ｎＭ）のいずれかで３０分間刺激した。その後、細胞溶解物をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、ホスホ−ｐ６５（ＮＦｋＢ）（上側のパネル）、添加対照としてのＨｕＲ（中央のパネル）、およびＩｋＢ（下側のパネル）に対するポリクローナル抗体を用いたウエスタンブロット分析に供した。図６Ａのデータは、デュプリケートで行った代表的な実験の結果を示す。図６Ｂおよび図６Ｃは、ＮＦｋＢおよびＩｋＢバンドの濃度評価を示す。

［実施例］
次の化合物を実験で使用した。

ＡＫＨ−２１７／ＡＶＸ００１

ＡＶＸ００２

Ｘ＝ＣＦ₃

ＡＡＣＯＣＦ₃
これらの化合物は、Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ １、２０００、２２７１〜２２７６に基づいて合成した。

ラット腎臓メサンギウム細胞におけるＰＧＥ２形成に対する阻害剤の効果
メサンギウム細胞におけるＰＧＥ２形成に対する阻害剤の効果を調査した。ＰＧＥ２形成は、炎症誘発性サイトカインＩＬ−１βによる細胞の刺激により高度に誘導される。このＰＧＥ２の誘導は、阻害剤の存在下で用量依存的に減少する。最も大きな効果は、３〜１０μＭのＡＫＨ−２１７（ＡＶＸ００１）および化合物Ｂ（ＡＶＸ００２）で見られた（図１）。

メサンギウム細胞におけるサイトカイン誘導性ＰＧＥ２形成がｓＰＬＡ２およびｃＰＬＡ２両方の活性化を伴うことが過去に示されている（Ｐｆｅｉｌｓｃｈｉｆｔｅｒら、１９９３年）、次いで、我々は、ｓＰＬＡ２タンパク質およびｍＲＮＡ発現に対する上記阻害剤の効果を調べた。図２に見られるように、ＡＫＨ−２１７は、ＩＩＡ−ｓＰＬＡ２タンパク質発現および分泌（図２Ａ）、ならびにＩＩＡ−ｓＰＬＡ２ ｍＲＮＡ発現（図２Ｂ）も減少させることができた。ｓＰＬＡ２ ｍＲＮＡの発現に対するこの効果は、遺伝子転写に対する減少効果によるものであった。これは、ｓＰＬＡ２プロモーター活性を反映したルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイにより示された。

このために、Ｓｃｈｏｌｚ−Ｐｅｄｒｅｔｔｉら（２００２年）の方法に従って、ラットＩＩＡ−ｓＰＬＡ２プロモーターの２．２６ｋｂ断片をクローニングした。この断片を、ルシフェラーゼ含有ベクター（ｐＧＬ３）にライゲーションし、メサンギウム細胞を形質転換するために使用した。図２Ｃに見られるように、ＩＬ−１β刺激性プロモーター活性は、ＡＫＨ−２１７により十分に減少した。

これらのデータは、ＩＬ−１βにより活性化されｓＰＬＡ２遺伝子転写にとって不可欠である転写因子のいくつかに本発明の阻害剤が影響を与え得ることを示唆している。有力な候補としては、ＮＦｋＢおよびＰＰＡＲが挙げられる。

ラット腎臓メサンギウム細胞における酸化窒素（ＮＯ）形成に対する阻害剤の効果
酸化窒素（ＮＯ）もまた、メサンギウム細胞のサイトカイン治療にて誘導型ＮＯ合成酵素（ｉＮＯＳ）により生じる炎症誘発性のメディエーターと考えられる。過去の様々な研究では、ｉＮＯＳ発現がｓＰＬＡ２と同じ転写因子により調節されることが示されている。我々はまた、サイトカイン誘発性ｉＮＯＳ発現も阻害剤により影響されるかどうかを調査した。

メサンギウム細胞におけるＮＯ形成は、ＩＬ−１β治療により高度に誘導された。この刺激されたＮＯ形成は、ＡＫＨ−２１７およびＡＶＸ００２の存在下で用量依存的に減少した（図３）。さらに、ＩＬ−１βにより誘導される（図４Ａ）ｉＮＯＳのタンパク質発現は、ＡＫＨ−２１７およびＡＶＸ００２の存在下でダウンレギュレートされる（図４Ａ）。定量リアルタイムＰＣＲ分析を行うと、ｉＮＯＳ ｍＲＮＡ発現に対して同様の減少効果も見られた（図４Ｂ）。この効果がｉＮＯＳの改変遺伝子転写によるものかどうかを見るために、ルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイを行い、ｉＮＯＳプロモーター活性を測定した。ラットｉＮＯＳプロモーターの４．５ｋｂ断片は、Ｋ．Ｆ．Ｂｅｃｋ博士（ｐｈａｒｍａｚｅｎｔｒｕｍ ｆｒａｎｋｆｕｒｔ）の好意により提供していただいた。図４Ｃに見られるように、メサンギウム細胞のＩＬ−１β刺激は、ｉＮＯＳプロモーターを１０倍刺激した。ＡＫＨ２１７の存在下では、プロモーター活性は完全に失われた。

これらのデータは、ｉＮＯＳの場合でも、ＡＶＸ阻害剤が、遺伝子転写に対して減少効果を有し、恐らくｓＰＬＡ２転写の場合と同じ転写因子に影響を与えているはずである、ということを示唆している。

メサンギウム細胞増殖に対する阻害剤の効果
糸球体腎炎は、第一段階では糸球体間質のアポトーシスの増加を特徴とし、第二段階では反対の事象、つまりメサンギウム細胞の過剰増殖と置き換わる。過去の様々な研究では、ＰＤＧＦ、インスリン、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）を含む様々な増殖因子あるいはＡＴＰおよびＵＴＰなどの細胞外ヌクレオチドに曝露されると、培養下の静止メサンギウム細胞は、細胞周期に再び入り得ることが示されている。これらのデータはここでは、インスリン、ＩＧＦ、およびＡＴＰが、ＤＮＡへの［³Ｈ］チミジン取り込みの増加を引き起こすことにより確認された（図５Ａおよび図５Ｂ）。ＡＫＨ２１７またはＡＶＸ００２のいずれかの存在下では、アゴニスト刺激性［³Ｈ］チミジン取り込みは減少する（図５Ａおよび図５Ｂ）。細胞をＰＤＧＦで刺激すると、同様のデータも得られた。これらのデータは、阻害剤の抗増殖能を示唆している。

メサンギウム細胞におけるＮＦｋＢ活性に対する阻害剤の効果。

実施例１および２ではｉＮＯＳおよびｓＰＬＡ２の発現が、同じような様式で阻害剤により調節されることが分かったので、さらにこれら阻害剤がＮＦｋＢ活性化に効果を有するかどうかを検討した。ＮＦｋＢ活性化は、ウエスタンブロット分析によって活性転写因子サブユニットを表すホスホ−ｐ６５の量を検出することにより測定した。ＩＬ−１β（３による細胞の短期の刺激によりホスホ−ｐ６５の小さいがはっきりとした増加が示され（図６、上側のパネル）、これはサイトカインがＮＦｋＢを活性化するという過去の多くのレポートと一致している。この効果は、ＡＫＨ２１７により減少した（図６）。さらに、非刺激細胞において構成的に発現されるｋＢ（ＩｋＢ）の阻害剤は、ＩＬ−１β刺激によりダウンレギュレートされ、このダウンレギュレーションは、阻害剤により元に戻る（図６、下側のパネル）。同等の添加量では、核ＨｕＲ安定化因子が染色された（図６、中央のパネル）。

Claims (11)

1. 糸球体腎炎、ループス腎炎、または糖尿病性腎症の治療において用いられるための、式（Ｉ）の化合物またはその塩を含む組成物。
   Ｒ−Ｌ−ＣＯ−Ｘ （Ｉ）
   （式中、Ｒは、Ｃ_10-24不飽和炭化水素基であり、当該炭化水素基は、少なくとも４個の非共役二重結合を含み；
   Ｌは、Ｒ基と前記カルボニルＣＯとの間に原子を１〜５個有する橋状結合を形成する連結基であり、前記Ｌは、少なくとも一つのヘテロ原子を含み、前記Ｌは、−ＣＨ₂−、−ＣＨ（Ｃ_1-6アルキル）−、−Ｎ（Ｃ_1-6アルキル）−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−Ｏ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＣＯ−、−ＳＯ−、または−ＳＯ₂−からなる１つ以上の基から形成され；
   Ｘは、ＣＨａｌ₃であり、ここで、Ｈａｌはハロゲンを意味する。）
2. 前記炭化水素基が、二重結合を５〜７個有する、請求項１に記載の組成物。
3. 二重結合が前記カルボニル基と共役していない、請求項１または２に記載の組成物。
4. 二重結合がいずれもシス配置である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
5. 前記カルボニル基に最も近い二重結合を除く、すべての二重結合がシス配置である、請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
6. Ｒ基が炭素原子を１７〜１９個含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
7. Ｌが、少なくとも１つのＯ、Ｓ、Ｎ、またはＳＯを含む、請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
8. Ｌが、−ＳＣＨ ₂ −、−ＳＯＣＨ₂−、または−ＣＯＣＨ₂−である、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
9. 前記化合物が、下記式を有するか、またはその塩である、請求項１に記載の組成物。
   

   

   ［前記式中、ＸはＣＨａｌ₃であり、ここで、Ｈａｌはハロゲンを意味する］
10. 前記化合物が、式（Ｉ’）
    Ｒ−Ｙ１−Ｙ２−ＣＯ−Ｘ （Ｉ’）
    （式中、ＲおよびＸは、上に定義のとおりであり；
    Ｙ１は、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、Ｎ（Ｃ_1-6−アルキル）、ＳＯ、またはＳＯ₂から選ばれ、Ｙ２は、（ＣＨ₂）_nまたはＣＨ（Ｃ_1-6アルキル）であり；
    ここでｎは、１〜３である）
    を有する、請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
11. 前記化合物が、以下の式を有するか、またはその塩である請求項１に記載の組成物。
    

    

    ［前記式中、Ｘ＝ＣＦ₃］、ＡＶＸ００１
    

    

    ［前記式中、Ｘ＝ＣＦ₃］、ＡＶＸ００２

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