JP5789299B2 - 滅菌プロセスをモニターするための方法 - Google Patents
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Description
生/死のバチルス・アトロファエウス芽胞の膜電位の評価は、膜電位変化とバイアビリティとの間の相関を説明する。膜電位は、DiOC6(3)およびPicofluor蛍光メーターを使用して測定する。生存可能および(オートクレーブされた)生存不能な両芽胞を、37℃にて代表的な時間、トリプシン性大豆培地およびDiOC6(3)内で培養する。示した培養時間後、これらの生物を取り出し、そしてトリス/EDTA(pH7.4)にて洗浄する。次に蛍光測定を行う。この結果を図1に示す。
平面上の生存可能なゲオバチルス・ステアロサーモフィルス芽胞の電気的検出
伝導性金属化材料を、およそクレジットカードのサイズの非伝導性マイラーシート上に均等に成型する。マイラーシートは気体および液体の両方に不透過性である。ポリアクリルアミド/ポリアニリン混合物を、金属化層の上に成型する。ポリアクリルアミド/ポリアニリン混合物は、気体および蒸気の両方に透過性である。ゲオバチルス・ステアロサーモフィルス芽胞を、108cfu/mlの濃度にてポリアクリルアミド/ポリアニリン混合物中に再懸濁する。この芽胞濃度は、インクジェットプリンターからそれぞれ10pL(ピコリットル)の液滴に単一の芽胞を与える。芽胞ポリアクリルアミド/ポリアニリン混合物を、アレイフォーマットにて、成型したポリアクリルアミド/ポリアニリンフィルム上に堆積する。第2の伝導性金属化材料を芽胞のアレイの上方に成型する。これは生物学的インジケータ(BI)カードを形成する。芽胞が出芽するときに、材料の導電率が増加し始める。電流を、ダーリントンカップルのようなシリアルトランジスタプリアンプによって検出する。これらのダーリントントランジスタは対であるため、それらは電流の増幅を可能にする。ダーリントントランジスタを、システムの電流をモニターするリードに連結する。マイラーのような気体バリアを、使用直前まで、剥離性接着剤によってインジケータの上に付着する。使用時にこのバリアを取り外し、滅菌装置内に設置されたときに、蒸気または気体がシステムを透過し得る。インジケータの遠端に、生存可能な芽胞を出芽させることを可能にする培養培地を含む小さい破壊容易なチャンバをおく。蒸気または蒸発性過酸化水素を利用する滅菌プロセス後、生物学的インジケータを培養する。
平面上の生存可能なゲオバチルス・ステアロサーモフィルス芽胞の蛍光検出
ポリアクリルアミド層を、およそクレジットカードのサイズのポリプロピレンバッキング上に成型する。ポリアクリルアミド層は、水和している単分子層として作用する。ゲオバチルス・ステアロサーモフィルス芽胞を、次いで生物のスポット内にプリントする。スポットを、アレイまたはグリッドフォーマットにてプリントし、各スポットは150〜300芽胞を含む。一端に、必要な蛍光体を有する培養培地を含む破壊容易なチャンバをおく。滅菌プロセスの完了時に、BIカードを、滅菌装置内に統合されているカードリーダー/インキュベータースロット内に挿入する。リーダー/インキュベーターは、培養温度を維持する加熱ブロック、LED励起源、蛍光検出のための発光ダイオード、ユーザーが読むことができる形態にサイクルパラメーターおよびロードIDを示すプリントヘッド、BIカードをスロット内に先導し、培養培地を含みかつ培地分散を助ける破壊容易なチャンバを壊すことによってBIを自動的に活性させるローラー、磁気ストリップスキャナー、ならびにデバイスロードおよび滅菌サイクルまでBIカードの結果をたどるバーコードリーダーからなる。
独立型リーダー/インキュベーター
リーダー/インキュベーターは、実施例2および実施例3に記載のいずれかのリーダー/インキュベーターについて独立型ユニットであり得る。独立型ユニットにおいて、全ての電子装置は、滅菌装置自体の中に統合されたリーダー/インキュベーターと同じである。
Claims (14)
- 滅菌プロセスの有効性をモニターするための方法であって;
(A)滅菌プロセスの間、滅菌される物品および生物学的インジケータを滅菌培地に曝露する工程であって、該生物学的インジケータが、形質膜を有する芽胞を含む、工程;および
(B)該細胞を培養培地中で培養し、出芽芽胞の膜電位を測定する工程、
を含み、
ここで、膜電位を測定する際に膜電位の変化がゼロであれば、前記滅菌プロセスの有効性を示し、そして膜電位のいかなる変化も、該滅菌プロセスの失敗を示す、
方法。 - 前記滅菌培地が、
少なくとも1つの液体滅菌剤、あるいは
少なくとも1つのガス状滅菌剤;あるいは
蒸気
を含む、請求項1に記載の方法。 - 少なくとも1つの液体滅菌剤が、少なくとも1つの過酢酸、少なくとも1つの過酸化物、またはそれらの2つ以上の混合物を含む、請求項2に記載の方法。
- 少なくとも1つのガス状滅菌剤が、過酸化水素または過酸化水素およびアンモニアを含む、請求項2に記載の方法。
- 前記生物学的インジケータが、
ゲオバチルス・ステアロサーモフィルス、バチルス・アトロファエウス、バチルス・サブチリス、バチルス・スファエリクス、バチルス・アントラシス、バチルス・プミルス、バチルス・コアグランス、クロストリジウム・スポロゲネス、クロストリジウム・ディフィシレ、クロストリジウム・ボツリヌム、バチルス・サブチリス・グロビジ、バチルス・セレウス、バチルス・サーキュランス、またはそれらの2つ以上の混合物;あるいは
アスペルギルス・ニガー、カンジダ・アルビカンス、トリコフィトン・メンタグロフィテス、ワンギエラ・デルマティティス、またはそれらの2つ以上の混合物
を含む、請求項1〜4のいずれかに記載の方法。 - 前記生物学的インジケータが遺伝子組換え生物学的インジケータを含み、該遺伝子組換え生物学的インジケータが:
酵素を生産するために好適な少なくとも1つの試験生物および少なくとも1つのレポーター遺伝子を含み、該レポーター遺伝子が該試験生物によって取り込まれており、
該レポーター遺伝子が、少なくとも1つのプラスミドおよび/または少なくとも1つのウイルスを使用して該試験生物によって取り込まれる、
請求項1〜4のいずれかに記載の方法。 - 前記試験生物が、
ゲオバチルス・ステアロサーモフィルス、バチルス・アトロファエウス、バチルス・サブチリス、バチルス・スファエリクス、バチルス・アントラシス、バチルス・プミルス、バチルス・コアグランス、クロストリジウム・スポロゲネス、クロストリジウム・ディフィシレ、クロストリジウム・ボツリヌム、バチルス・サブチリス・グロビジ、バチルス・セレウス、バチルス・サーキュランス、またはそれらの2以上の混合物;あるいは
アスペルギルス・ニガー、カンジダ・アルビカンス、トリコフィトン・メンタグロフィテス、ワンギエラ・デルマティティス、またはそれらの2以上の混合物
を含む、請求項6に記載の方法。 - 前記生物学的インジケータが、膜電位蛍光色素を含む培養培地にて培養され;あるいは
該生物学的インジケータが、電圧感知色素の存在下にて培養される、請求項1から7のいずれかに記載の方法。 - 前記膜電位が、蛍光偏光法を使用してまたは蛍光共鳴エネルギー転移を使用して測定される、請求項1から8のいずれかに記載の方法。
- 前記生物学的インジケータが、導電性材料上に配置される、請求項1から8のいずれかに記載の方法。
- 工程(B)の間、前記生物学的インジケータが、培地中に設置され、そして該培地中の電気リードが、前記膜電位を測定するために使用される、請求項1から8のいずれかに記載の方法。
- 前記膜電位が、前記生物学的インジケータを横切ってまたは中に設置された電気リードを使用して測定される、請求項1から8のいずれかに記載の方法。
- 滅菌インジケータであって:基板上に配置された導電性材料;および該導電性材料の一部または全部の上に配置された生物学的インジケータを含み;
該生物学的インジケータが、芽胞を含む、滅菌インジケータ。 - 遺伝的に操作された生物学的インジケータが、前記レポーター遺伝子が少なくとも1つの誘導物に曝露されるまで前記レポーター遺伝子の発現を阻害する、少なくとも1つの抑制遺伝子をさらに含み、レポーター遺伝子と該抑制遺伝子が、少なくとも1つのプラスミドおよび/または少なくとも1つのウイルスを用いて試験生物に取り込まれる、請求項6の方法。
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