JP5785275B2 - 単離された微生物菌株、ラクトバチルスプランタルム(lactobacillusplantarum)mcc1dsm23881およびラクトバチルスガセリ(lactobacillusgasseri)mcc2dsm23882ならびにそれらの使用 - Google Patents
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Description
感染症、炎症、アレルギーおよび酸化ストレス関連の問題、例えば、食物アレルギー、尿路症状(例えば、前立腺の病気に関連する排尿異常)が経済的にさらに社会の負担になってきている。例えば、人口の最大4%が食物アレルギーに苦しんでおり、米国では、100〜200人の死亡は食物アレルギーが直接的な原因である。乳幼児についての(牛乳に対するアレルギー反応を含む)食物アレルギーは、特に深刻な問題である。乳幼児に乳製品を使用することは、乳幼児の正常な成長および発達を保証するために必須である。絶対的にアレルギー反応のない製品であると同時に非常に高く良好な生物学的品質を持つ製品を作り出すことは不可能であるため、食物のアレルゲン性の問題を解決することは非常に複雑である。UN、FAOおよびWHOの最新の議論は宣言した−アレルゲンフリー:明確にするとき;声明:すべてのアレルゲンを含まないことを宣言する実際の法律はない。したがって、アレルギー反応のある乳幼児の数を少なくとも数パーセント減少させることになる、より低アレルギー性の製品をもたらすいかなる技術的発想/解決策も高い評価を受けることになるであろう。食品のアレルゲン性を減少させるためのアレルギーの分野におけるいかなる成功も大幅な社会経済上の結果(小児および成人の生活の質の改善および治療コストの削減など)をもたらすため、アレルギー反応のいかなる割合の低減も、結論として/長期的な視点で非常に重要である。
前立腺は、以下のいくつかの不快症状を引き起こすことがある:尿路閉塞および刺激症状ならびに小骨盤部分の痛みまたは不快。前立腺の不快症状、特に、排尿に関連する不快症状は、非常に一般的であり、多くの男性の生活の質を低下させる。前立腺肥大症(良性前立腺肥大症−BPH)は、50歳男性で約半数、70歳超の男性で約70%において起こると推定される。良性前立腺肥大症に伴う下部尿路症状(LUTS)としては、刺激症状および閉塞(排尿)症状が挙げられ、これは、国際前立腺症状スコア(IPSS)を使用して評価される。男性の排尿困難を軽減するための非薬学的で実現可能な手段はすべて高く評価されるであろうし、新規の食品がそのような効果を持つのであればそれが最良であろう。
本発明の目的、L.プランタルムMCC1 DSM23881およびL.ガセリMCC2 DSM23882は、エストニア−スウェーデン間の小児のミクロフローラの比較研究の間に健康な小児の大便から単離された。菌株L.プランタルムMCC1および菌株L.ガセリMCC2は、1歳児の大便の段階希釈液を蒔くことによって単離された(0.04%チオグリコール酸を含むリン酸緩衝液中に10−2〜10−7、pH7.2)。その希釈液は、新たに作製されたMRS寒天培養培地(Oxoid、英国)に蒔かれ、微好気環境において37℃で培養された。本発明の目的である菌株は、ラクトバチルス属種に特徴的なコロニーおよび細胞形態に基づいて単離された。これには、暫定的な同定、さらにその後、以下に示されるさらに高精度な同定が続いた。
MRS寒天および培養液(Oxoid)培地での培養後に培養菌の形態的な特徴が確認された。
微生物(microbe)菌株が健康な小児の消化管由来であることは、GRAS(一般に安全と認められる)状態または微生物(microbe)菌株がヒトに対して安全で、経口投与に適していることを示す。また、乳酸桿菌、L.プランタルムおよびL.ガセリの種は、EFSAによるQPS(安全性適格推定(Qualified Presumption of Safety))状態の分類単位の一覧に入っている(例えば、非特許文献9参照)。
方法論:血液寒天プレート(Blood Agar Base No.2、Oxoid+7%ヒトまたはウマの血液)上において微好気環境下でインキュベーションした後に、L.プランタルムMCC1およびL.ガセリMCC2の溶血作用が判定された。
方法論:E−test(AB Biodisk、ソルナ)を用いて抗生物質に対するL.プランタルムMCC1およびL.ガセリMCC2の感受性が試験された。欧州委員会によって推奨される疫学的限界点に従って最小発育阻止濃度が確認された。
代謝産物の特性
方法論:代謝産物特性は、微好気的増殖環境における24hおよび48hのインキュベーションに続くガスクロマトグラフィー(HP6890)によって確認された(表2)。ラクトバチリーは、MRS寒天培養培地において10%C02環境下で48時間増殖させられ、その後、マクファーランドに従い0.9%NaCl溶液中、密度が109微生物(microbe)/mLの懸濁液が調製され、1.0mLの得られた懸濁液は、9.0mLのMRS液体培養培地に接種された。代謝産物の量mmol/Lは、キャピラリーカラム、HP−INNOWax(15m×0.25mm;0.15μm)を使用して測定された。カラム温度プログラム 60℃ 1分、20℃/分 120℃ 10分;検出器(FID)350℃。
方法論:乳凝固能力。UHT無脂肪乳中、微好気的条件下、37℃で菌株を48hインキュベートした後、乳を凝固する能力が調査された。以下の方式に従い凝固能力が評価された:
1.強い(+)−24hの間に乳が凝固する、
2.遅い(+/−)−48hの間に乳が凝固する、
3.なし(−)−乳が凝固しない。
タガトース(Arla Food Ingredients)、Raftilose P95(Beneo Orafti)、Raftilose Synergy 1(Beneo Orafti)およびRaftilose L60/75(Orafti)の発酵を評価するために、試験されたラクトバチルス菌種の48h培養物0.05mLが、グルコースの代わりに0.5%のソルビット、タガトースまたはメレシトースを含むMRS培養培地に接種される。指示薬としてクロロフェノールレッド(0.004%)が培養培地に添加された。発酵は、48h後の色の変化(レッドから黄色)に基づいて評価された。
方法論:抗菌特性の評価のために画線法が使用された(例えば、非特許文献12参照)。
L.プランタルムMCC1およびL.ガセリMCC2の一般的なタンパク質分解特性は、MRS培養液中で48h間予め増殖させた菌株を画線した、試験培養培地、SMA培養培地(スキムミルク−寒天培地)およびCa−カゼイナート寒天上で調査された。これらは、微好気環境、37℃で7日間インキュベートされた。タンパク質分解の強度は、以下の評価システムに基づいて評価された(6試験、算術平均):4−強い、3−中程度、2−弱い、1−非常に弱い、0−なし。
L.プランタルムMCC1およびL.ガセリMCC2がどのようにさまざまな乳タンパク質を加水分解するのかわかっていなかった。そのため、まず加水分解の間に起こる分子マススペクトルの変化が、個々の純粋な乳タンパク質(β−ラクトグロブリン、α−S1カゼイン、β−カゼイン)を使用して確認され、後で乳脂を取り除いていない乳のタンパク質のスペクトル変化が分析された。乳タンパク質加水分解生成物の分子量は、MALDI−TOF(マトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間型)質量分析計により測定された(例えば、非特許文献13参照)。マクファーランド4標準液により、KCl生理溶液中の密度が109CFU/mLの懸濁液が培養物から作製された。10μlの乳タンパク質画分が添加されて懸濁液が得られた。これらの画分の溶液中の菌株の生存は、試験前後の希釈系列を画線することにより判定された。菌株は、対応するタンパク質画分の環境、37℃において2〜6日インキュベートされた。その後、そのサンプルは、遠心分離され、タンパク質特性が質量分析計(Voyager DE Pro、Applied Biosystems)により測定された(図1および図2)。本発明の目的の菌株は、栄養分が乏しい環境に対して代謝を調節できることがわかった。例えば、この試験では、栄養源は、α−S1カゼイン、β−ラクトグロブリン、β−カゼインまたは菌株細胞自体から得られる物質のいずれかのみであった。試験の終わりの時点で、3つすべてのタンパク質画分の環境(α−S1カゼイン、β−ラクトグロブリン、β−カゼイン)において菌株は検出可能であった。
CLAは、二重結合が共役した18炭素の脂肪酸であり、リノール酸(LA、シス−9、シス−12−18:2)の異性体の群を表わす。CLAは、天然に生物学的水素化および酸化の過程において生成される。CLAは、抗脂質生成、抗発がん、抗糖尿病誘発性および抗炎症効果、免疫系に対する調節性効果、サイトカインおよび免疫グロブリンの生産ならびに特異的な転写因子により直接的または間接的に特定の遺伝子の発現を調節する能力を有していると考えられている(例えば、非特許文献15参照)。いくつかの乳酸菌は、リノール酸を共役リノール酸に変えることができるため、その結果、発酵乳製品中のCLA含有量を増加させることが可能であろう(例えば、非特許文献16参照)。これについて、どの乳酸菌がCLA生成者であるか試験するべきである。微生物(microbe)の増殖環境に生じる遊離脂肪酸は、静菌作用を有し、微生物(microbe)の増殖および細胞膜透過性に影響を及ぼすことが知られている。効果の強さは、脂肪酸によって決まる。飽和度が高い長鎖脂肪酸ほど抗菌作用が強い。二重結合の空間的配置も抗菌活性に影響を与える:シス配置を有する脂肪酸は、トランス形態よりも強い阻害物質である(例えば、非特許文献17参照)。微生物(microbe)は、その生命維持機能を抑制する化合物に対抗するための防御メカニズムを確立してきた:多価不飽和脂肪酸は、低抑制性の変形物に異性化される。例えば、より強い静菌作用を有するリノール酸(LA)は、CLAに変えられる(例えば、非特許文献16参照)。発生したCLAの大半は、その環境にとどまるが、一部は細胞膜の脂質に付加される。少量のCLAが微生物細胞中にある場合もあることがわかった。ラクトバチルス種を含む典型的な微生物いくつかの属において、LAおよび他の脂肪酸(オレイン酸、リシノール酸)を共役させる能力が発見された。増殖環境(MRS、スキムミルク)に添加されたリノール酸に基づいてCLAを産生する菌株の能力は、本発明者らが開発したCLA測定法を使用して定量的に評価された。必要とされる意図したタンパク質分解作用を有するL.プランタルムMCC1およびL.ガセリMCC2がCLAを大幅に産生することが明らかになった(表7)。同時に、これらの菌株は、LAの静菌作用の影響を実質的に受けにくかった。
(抗酸化性)
特異的で制限されたタンパク質分解特性、さらにCLA産生力を有する菌株L.プランタルムMCC1およびL.ガセリMCC2が生理学的に著しい酸化抵抗性を有するかどうかが調査された。酸化抵抗性は、少なくとも2つの方法により測定されるべきである。
意図した情報を得るために、予め選択された菌株(特異的で制限されたタンパク質分解特性、CLA産生、抗酸化性)がさらに、NOおよびH2O2産生に関して調査された。文献によると、微生物菌株によるNOおよびH2O2の同時産生についての過去の研究はない。測定は、ISO−HPO2およびISO−NOPタイプの電極を使用した電気化学的測定(Apollo 4000 free radical analyzer WPI、ベルリン、ドイツ)を使用して生きた細胞を用いて行われた。MRS培養液(Oxoid)中で増殖させた培養物に電極が入れられた、5〜7分間のシグナルが同時に記録され、測定時間中の平均信号強度が算出された。それぞれ実験点は、4つの独立した並列回路として測定された、それぞれの並列回路は2回測定された。調査されたサンプル中のNOおよびH2O2の濃度は、サンプル信号を標準曲線と比較することによって求められた。
−食品および/または栄養補助食品の生産のための抗酸化タンパク質分解成分としての、
−乳アレルギーを低減する低アレルギー性の食品および/または栄養補助食品の生産のための、
−良性前立腺肥大症に伴う下部尿路刺激症状ならびにこれらに関連する酸化ストレスおよび炎症を低減する食品および/または栄養補助食品の生産のための
別々のまたは同時の使用である。
A)乳タンパク質を含む最初の混合物を、37±2℃まで加温する段階;
B)L.プランタルムMCC1および/もしくはL.ガセリMCC2または両方を一緒に添加する段階。L.プランタルムMCC1が単独で使用される場合、最大1.2体積パーセント、好ましくは、1体積パーセント、菌数が0.4×108〜4.8×108CFU/mLで添加されることになる。L.ガセリMCC2が単独で使用される場合、最大1.2体積パーセント、好ましくは、1体積パーセント、菌数が0.8×107〜1.2×108CFU/mLで添加されることになる。上記の両方の菌株が一緒に使用される場合、最大1.2体積パーセント、好ましくは、1体積パーセント添加されることになり、ここで、L.プランタルムMCC1は、0.25×108〜2×108CFU/mL、L.ガセリMCC2は、0.5×107〜0.5×108CFU/mLで添加されることになる。発酵の終了pHは4.2±0.25である。
a)乳タンパク質を含む最初の混合物、チーズ産業から入手し、分離によって脂肪相を減少させ、チーズかすを除いたホエイ(表8の化学的−物理的特性)を、発酵温度37±2℃に加温した;
b)1体積パーセントの菌株L.プランタルムMCC1(菌数が0.5×108〜4×108CFU/mL)もしくは菌株L.ガセリMCC2(菌数が1×107〜1×108CFU/mL)または両方一緒(0.5体積パーセントで密度が0.25〜2×108CFU/mLの範囲の菌株L.プランタルムMCC1の生きた細胞および密度が0.5×107〜0.5×108CFU/mLの範囲の菌株L.ガセリMCC2の生きた細胞の両方)。
d)(1種または複数の)菌株L.プランタルムMCC1および/またはL.ガセリMCC2を不活化する(死滅させる)ために、混合物を82±2℃で30〜35分間低温殺菌し、20〜30℃の温度に冷却した;
e)得られた混合物を、選択した添加物により風味付けした。これには、果実もしくはベリーの汁、濃縮物、シロップ、ジュース飲料または果実もしくはベリーのジャムが可能であった。例えば、シーバックソーンジャムを16〜17体積パーセントまたは濃縮サクランボジュース飲料およびシーバックソーンの汁を4.7〜5体積パーセントならびにラズベリー−ブルーベリー濃縮ジュース飲料を9.8〜10.2体積パーセント使用した。
食品I(またはFP−I):乳タンパク質を含む混合物+L.プランタルムMCC1+L.ガセリMCC2;添加物はシーバックソーンの汁(BT);
食品II(またはFP−II):乳タンパク質を含む混合物+L.プランタルムMCC1;添加物、ラズベリー−ブルーベリー濃縮ジュース飲料(RB)。
栄養補助食品II(またはDS/FP−II):乳タンパク質を含む混合物+L.プランタルムMCC1;添加物はラズベリー−ブルーベリー濃縮ジュース飲料(RB)。
1)安全性
毎日の質問票の科学的分析により、2週間の使用中に不快感または腸管内の問題を訴えた被験者はおらず、ネガティブな症状も生じなかったことが示された。FP−IまたはFP−IIの使用に、生化学的および臨床的パラメータを固有の基準限界値から外させる作用はなかった。試験期間前と比較して、重要なアレルギーマーカーの1つとしての被験者のIgE抗体の量は増えなかった。炎症反応は生じなかった(hsCRP、oxLDL、MPO、IL−6)。または、血中脂質、リポタンパク質(TG、LDL、HDL)およびグルコースの値は変わらなかった。体内のOxSのレベルも増加しなかた(イソプロスタン、oxLDL、MPO、sdLDL、LDL b2GPI)(表11)。さらに、腎機能を損なうこともなかった(尿中クレアチニン)。したがって:本発明のイデオロギーに基づいて得られるFP−IおよびFP−IIにより、炎症反応、一般的なアレルギーの感作、OxSは生じなかったため、健常者の生物に障害を与えることはなかった。
臨床試験の結果の分析から、FP−IまたはFP−IIの使用により、統計学的に有意でいくぶん異なるいくらかのプラスの効果が引き起こされることが示された(表11)。FP−Iは、全身のOxS負荷を低減する効果(尿中イソプロスタンおよび血中MPOレベルの低下)および抗炎症効果(血中MPOの低下)を発揮した。FP−IIは、全身のOxS負荷を低減し(尿中イソプロスタンレベルの低下)、抗炎症効果を発揮した(hc−CRPの低下およびIL−10の増加)。同時に、両方の食品を使用しても、免疫グロブリンIgM、IgAおよびIgMの数量的な値は変化しなかった。
牛乳タンパク質によって引き起こされる反応は、乳幼児の5〜15%に起こる(例えば、非特許文献3参照)が、牛乳タンパク質アレルギー(CMPA)が起こるのは2〜7.5%である(例えば、非特許文献4参照)。CMPAは、IgE依存性または非IgE依存性である場合がある。通例、初期反応は、蕁麻疹、血管浮腫、嘔吐またはアトピー性皮膚炎の増悪である。遅延反応としてアトピー性皮膚炎の増悪または胃腸の不快症状が起こる(例えば、非特許文献5参照)。既存の診断検査のいずれも、その小児がCMPAであるか否かを証明するものでも否定するものでもない(例えば、非特許文献20参照)。したがって、CMPAの診断の判断基準は除去食の後の誘発である(例えば、非特許文献5参照)。誘発試験の手順として国際的に認められたIsolauriらによって示されたそのような調査のためのスキームを使用した(例えば、非特許文献21、非特許文献22参照)。
食品FP−IIおよびFP−Iによるオープン誘発を、Children’s Clinic of the Tartu University Clinics FoundationのCentre of Allergic Diseasesにおいて行った(世界医師会のヘルシンキ宣言に従い、Tartu University Ethics Review Committeeによって承認された)。9ヶ月から4歳8ヶ月の小児(平均年齢25.1ヶ月)に試験を20回行った(被験者の一部は、両方の食品の試験に参加した)。試験前の背景は以下のとおりであった:すべての小児は、病歴および補助的な調査によりChildren’s Clinic of the Tartu University Clinic FoundationのCentre of Allergic Diseasesの医師によって牛乳アレルギーおよび/または不耐性と診断された(乳に対するIgE試験、乳に対するNTT)。研究群のすべての小児は、乳を含まない除去食の状態であった。乳の使用後、9名の小児に発疹、通常アトピー性皮膚炎の増悪が出た。1名の小児には急性蕁麻疹が出た。1名の小児は下痢症になった。1名の小児は、加工された乳製品を食べた後にのみ呼吸困難になり、発疹が出た。3名の小児が共に喘息と診断され、そのうちの1名はアレルギー性鼻炎もあり、1名は花粉アレルギー(花粉症)だった。1名の小児には、併発症として喘息および花粉アレルギーがあった。どの小児も抗ヒスタミン剤または副腎皮質ステロイド薬の治療を受けていなかった。3名の小児に併発した喘息は寛解したため、誘発試験が行われたときには、持続的な喘息治療を受けていなかった。
食物のアレルゲン性の問題を解決することは、非常に複雑であり、絶対的にアレルギー反応がないが非常に高い生物学的特質を持つ製品を作り出すことは不可能である。現在、小児は、いくつかの食品に対して(他の共通因子に対しても)同時にアレルギー反応がある場合があるため、この問題はさらに難しくなる。このことは、我々の試験でも観察された(表12を参照のこと)。このことが、所与の時点における陽性反応の発疹が他の原因による惹起により現われたのではないと除外するのを困難にする。そこで、アレルギー反応を低減するために本調査の焦点が向けられた。すなわち、得られる食品は牛乳よりも低アレルギー性のものであろう。与えた食品に対してアレルギーがないかアレルギーがより軽い小児が1パーセント増えるごとに、生物学的発達の最も重要な期間に、発達のために十分な生物学的に高品質の食物を得ることになる小児の数が増加することになろう。誘発試験により、両食品FP−IIならびにFP−Iは牛乳よりも低アレルギー性であったことが示された(表12)。12名のうち少なくとも3〜4名の小児には、誘発試験に基づくFP−Iの使用後、いかなるアレルギー反応も出なかった。8名のうち3名の被験者には、FP−IIの使用後いかなるアレルギー反応も出なかった。FP−Iがいくらかの反応を引き起こした5名の被験者のうち3名は、FP−IIを許容した(60%)。このように、FP−IIは、この件に関してFP−Iよりもさらに低アレルギー性であった。大半の小児はまた、味の特性によりFP−IIの方を好んだ。
試験には、軽度または中程度のIPSS(国際前立腺症状スコア)<8である55名の男性(FP−I投与)および5名の男性(FP−II投与)が参加した。IPSSの質問票には、下部尿路刺激症状を評価する3つの質問および尿路閉塞(閉塞症状)を評価する4つの質問が含まれる。また、研究群の正確な選択のために、必要とされる事前の試験(PSA、前立腺分泌物)を行った。これは、前立腺分泌物調査およびNIH−CPSI質問票を用いて活動期の前立腺炎(前立腺の炎症)を排除し、PSA試験および指診を使用することによって、前立腺癌の臨床的な可能性が排除したことを意味する。したがって、不快症状の他の原因(前立腺炎、前立腺癌)を排除した軽度または中程度の泌尿器障害の男性を研究群に含めた。(軽度および中程度の排尿障害はあるが、炎症反応はない)患者が、200gの食品FP−IまたはFP−IIを2週間毎日使用した。
FP−I.2つの試験シリーズを行った。第1の試験には、23名の患者が参加し、第2の試験には(プラセボ対照も行った)32名の患者が参加した(表13)。両方の場合について、炎症マーカー、HsCRPおよびOxSマーカー、イソプロスタンに統計学的に有意な低下が観察された。第2の試験シリーズでも、抗炎症性のIL−10および炎症/OxSマーカー、oxLDLに統計学的にプラスの変化が示された。第1の試験シリーズ(n=23)でも、このマーカーにプラスの変化の傾向が観察された。第2の試験シリーズでは、糖化ヘモグロビンのレベルも測定し、この低下は、統計に基づくものだった。
FP−IならびにFP−IIの投与により、中程度の下部尿路の不快症状(IPSSスコア<8)および主要な刺激症状のあった被験者のOxSおよび炎症のレベルが低下した。FP−Iの場合、中程度の下部尿路の不快症状(IPSSスコア<8)および主要な刺激症状がある研究群男性(55名)の66%において、不快症状が少なくとも20%緩和され、研究群の30%において不快症状が平均40%緩和された。患者の臨床的および生化学的パラメータ(hs−CRP、IL−10、oxLD、8−イソプロスタン)は、ことによると統計学的に改善された。対照群では変化がなかった。
L.プランタルムMCC1およびL.ガセリMCC2を含む食品および栄養補助食品は、低アレルギー性で、OxSのレベルを低下させ、中程度の下部尿路の不快症状および主要な刺激症状があるような人の前立腺の不快症状に対して統計学的に実証された効果がある。
Claims (11)
- 単離された微生物菌株L.プランタルムMCC1 DSM23881。
- 単離された微生物菌株L.ガセリMCC2 DSM23882。
- 死滅した状態であることを特徴とする請求項1または2に記載の微生物。
- 1種または複数の請求項1から3に記載の微生物を含むことを特徴とする組成物。
- 1種の微生物が存在する場合、前記微生物の含有量は、0.8〜1.2体積パーセントの範囲であり、
菌数は、L.プランタルムMCC1の場合、0.25×108〜4×108CFU/mLであり、L.ガセリMCC2の場合、0.5×107〜1×108CFU/mLであり、両方の微生物が存在する場合、両方の含有量は、0.4〜0.6体積パーセントの範囲であり、
L.プランタルムMCC1の菌数は、0.2×108〜2.4×108CFU/mLの範囲であり、L.ガセリMCC2の菌数は、0.4×107〜0.6×108CFU/mLの範囲である、
ことを特徴とする請求項4に記載の組成物。 - 食品および/または栄養補助食品の生産のための抗酸化タンパク質分解成分としての、一緒または別々での、請求項1および/または2に記載の微生物の使用。
- 低アレルギー性の乳アレルギーを低減する食品および/または栄養補助食品の生産のための、一緒または別々での、請求項1から3に記載の微生物の使用。
- 良性前立腺肥大症に伴う下部尿路刺激症状ならびにこれらに関連する酸化ストレスおよび炎症を低減する食品および/または栄養補助食品の生産のための、一緒または別々での、請求項1から3に記載の微生物の使用。
- 乳アレルギーおよび尿路の不快症状ならびにこれらに関連する酸化ストレスおよび炎症を低減する食品および栄養補助食品の生産のための方法であって、次の段階:
A)乳タンパク質を含む最初の混合物を加温する(37±2℃)段階と、
B)1体積パーセントの、菌数が0.4×108〜4.8×108CFU/mLの請求項1に記載の微生物または菌数が0.8×107〜1.2×108CFU/mLの請求項2に記載の微生物またはそれぞれ0.25×108〜2×108CFU/mLおよび0.5×107〜0.5×108CFU/mLの請求項1および請求項2に記載の微生物を一緒に添加する段階と、
C)得られた混合物を37±2℃の温度で18〜26時間発酵させる段階と、
D)前記混合物を82±2℃の温度で30〜35分間低温殺菌し、20〜30℃の温度に冷却する段階と、
E)前記混合物を添加物により風味付けし、得られた食品を2〜6℃に冷却する段階と、
F)粉末の栄養補助食品の生産のために、粉末のコンシステンシーが達成されるまで前記混合物から水を除去する段階と、および
液体の栄養補助食品の生産ために、所望のコンシステンシーが達成されるまで前記混合物から水を部分的に除去する段階と
を含むことを特徴とする方法。 - 前記添加物は、果実もしくはベリーの汁、濃縮物、シロップもしくはジュース飲料または果実もしくはベリーのジャム、好ましくは、シーバックソーン、ブルーベリーまたはラズベリーの汁であることを特徴とする請求項9に記載の方法。
- 前記乳タンパク質原料は、ホエイ、濃縮されたホエイ、ホエイパウダー、乳、粉乳または乳タンパク質濃縮物であることを特徴とする請求項9に記載の方法。
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