JP5773473B2 - Nk活性増強剤およびその利用 - Google Patents
Nk活性増強剤およびその利用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5773473B2 JP5773473B2 JP2009200935A JP2009200935A JP5773473B2 JP 5773473 B2 JP5773473 B2 JP 5773473B2 JP 2009200935 A JP2009200935 A JP 2009200935A JP 2009200935 A JP2009200935 A JP 2009200935A JP 5773473 B2 JP5773473 B2 JP 5773473B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- activity
- cells
- lymphocytes
- blood
- nanobubble water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
(I)NK活性増強剤
(I-1)動的光散乱法で求められる個数平均径が300nm以下の気泡を含むナノバブル水を有効成分とする、NK活性増強剤。
(II-1)生体から分取したリンパ球を(I-1)に記載するNK活性増強剤の存在下で培養して調製される、NK活性増強リンパ球。
(II-2)生体から分取したリンパ球を、(I-1)に記載するNK活性増強剤の存在下で培養する工程を有する、NK活性増強リンパ球の調製方法。
(II-3)生体から分取したリンパ球を含む単核球を、(I-1)に記載するNK活性増強剤の存在下で培養して調製される、NK活性増強単核球。
(II-4)生体から分取したリンパ球を含む単核球を、(I-1)に記載するNK活性増強剤の存在下で培養する工程を有する、NK活性増強単核球の調製方法。
(II-5)(II-1)に記載するNK活性増強リンパ球またはNK活性増強単核球を含有する細胞免疫製剤。
(II-6)生体から分取したリンパ球またはリンパ球を含む単核球を、(I-1)に記載するNK活性増強剤の存在下で培養する工程を有する、(II-5)に記載する細胞免疫製剤の調製方法。
(II-7)(II-1)に記載するNK活性増強リンパ球、(II-3)に記載するNK活性増強単核球、または(II-5)に記載する細胞免疫製剤を含有する輸液製剤。
(III-1)生体から分取した少なくともリンパ球を含む血液を、(I-1)に記載するNK活性増強剤の存在下で培養して調製される、NK活性増強血液製剤。
(III-2)生体から分取した少なくともリンパ球を含む血液を、(I-1)に記載するNK活性増強剤の存在下で培養する工程を有する、NK活性増強血液製剤の調製方法。
本発明のNK活性増強剤は、動的光散乱法で求められる個数平均径が300nm以下の微細気泡を含むナノバブル水を有効成分とすることを特徴とする。
個数 :n1、n2、・・・、ni、・・・、nk
粒子径:d1、d2、・・・、di、・・・、dk
体積 :v1、v2、・・・、vi、・・・、vk。
本発明が対象とするNK活性増強リンパ球および単核球は、それぞれ生体から分取したリンパ球および単核球を、前述するNK活性増強剤の存在下で培養することにより調製することができる。
前述するNK活性増強リンパ球またはNK活性増強単核球を、例えばヒトアルブミンを含む輸液用生理食塩液中に懸濁した形態で製剤化することにより、悪性腫瘍(ガン)あるいは各種感染症を予防または治療するための細胞免疫製剤として用いることができる。
本発明のNK活性増強血液製剤は、生体から分取した少なくともリンパ球を含む血液を、前述するNK活性増強剤の存在下で培養することで調製することができる。ここで血液は、末梢血、臍帯血、または骨髄液であってもよい。取得の容易性から好ましくは末梢血である。また、少なくともリンパ球を含むものであればよく、必ずしも全血である必要はなく、例えば末梢血から得られるPBMCであってもよい。なお、PBMCは、生体から採取した血液から(II)で説明する比重遠心分離法を用いて調製することができる。
(1)NK活性の測定方法
まず被験者の末梢血からNK細胞を含むPBMCを分取し、これに被験物質を添加して、RPMI-1640培地を用いて、5%CO2、37℃の条件で20時間培養する。
被験物質として、下記の方法で調製した(a)酸素ナノバブル水、(b)有機ゲルマニウム粉末、および(c)ハナビラタケを使用した。これらの被験物質のうち、(b)と(c)は、NK細胞活性作用があると報告されている物質である(特開平10-330207号公報、特開2004-292415号公報参照)。
酸素ナノバブル水として、(株)NAGA MRE販売の500ml入り酸素ナノバブル水(製品名:ナーガの雫)(賞味期限2008年9月20日)(原水)を使用した。原水を0.22μmフィルターで濾過滅菌し試験に使用した。具体的には、原水と培地とを混合し培養時に原水が6倍希釈されたもの(原水を16.7%含有)を試験濃度「1倍」とし、原水と培地とを混合し培養時に原水が60倍希釈されたもの(原水を1.67%含有)を試験濃度「1/10倍」とした。なお、当該酸素ナノバブル水中に含まれる酸素ナノバブルの粒径を動的光散乱法(検出法:ヘテロダイン法)に基づいて測定したところ(動的光散乱式粒子径・粒度分析計ナノトラックUPA-UT151型、日機装(株)製)、下記に説明する方法で算出される体積平均径(MV)が0.3734μm(標準偏差:SD=0.0784μm)、個数平均径(MN)が0.2995μm(標準偏差:SD=0.1002μm)と、動的光散乱法による個数平均径が300nm未満のナノバブルであることが確認された。
一つの粉体の集団を仮定する。この中に粒子径の小さな順から、d1、d2、・・・、di、・・・、dkの粒子径(μm)を有する粒子がそれぞれn1、n2、・・・、ni、・・・、nk個あるとする。また粒子1個当たりの体積(μm3)をv1、v2、・・・、vi、・・・、vkとする。すなわち、個数と粒子径と体積は下記の関係にある。
個数 :n1、n2、・・・、ni、・・・、nk
粒子径:d1、d2、・・・、di、・・・、dk
体積 :v1、v2、・・・、vi、・・・、vk。
有機ゲルマニウム粉末として、(株)浅井ゲルマニウム研究所製のものを使用した。 これをRPMI-1640 培地に懸濁し、室温で1時間撹拌し溶解した。これを0.22μmフィルターで濾過滅菌した後、RPMI-1640 培地で培養時の最終濃度が0.022mg/mlとなるように希釈し、試験に使用した。
ハナビラタケとして、(株)ミネターから購入した乾燥粉末製品(ハナビラタケ100:商品名)を使用した。これをRPMI-1640 培地に懸濁し、室温で1時間撹拌し溶解した。これを0.22μmフィルターで濾過滅菌した後、RPMI-1640 培地で培養時の最終濃度が0.022mg/mlとなるように希釈し、試験に使用した。
上記(1)に記載する方法に従って、上記各種の被験物質で処理したPBMCのNK活性を測定した。具体的には、まず、被験者(60代男性)1名の末梢血(全血採血後、30時間以内に使用)から比重遠心分離法を用いてPBMC層を分離した後、一定濃度(培養時濃度:2×106cells/ml)のPBMC溶液を調製した。
酸素ナノバブル水に代えて水素ナノバブル水を用いて実験例1と同様にしてPBMCを処理して、NK活性を測定した。
水素ナノバブル水として、電気分解から得られた、エヌディーアクア株式会社製の水素ナノバブル水(商標名:「真・水素水」、賞味期限2008年12月12日、ロット番号2008.12.12)(原水)を用いた。原水を0.22μmフィルターで濾過滅菌し試験に使用した。具体的には、原水と培地とを混合し培養時に原水が6倍希釈されたもの(原水を16.7%含有)を試験濃度「1倍」とし、原水と培地とを混合し培養時に原水が60倍希釈されたもの(原水を1.67%含有)を試験濃度「1/10倍」とした。ちなみに電気分解によって得られたアルカリイオン水中の水素気泡は3〜200nmであり、水素ナノバブル水には200nm以下の径のバブルが存在することが知られている(“電解アルカリ性水の科学”、ウォーター研究会会報、No.8、p.5(2001))。そこで、当該水素ナノバブル水中に含まれる水素ナノバブルの粒径を、実験例1に記載する方法に従って動的光散乱法に基づいて測定したところ(動的光散乱式粒子径・粒度分析計ナノトラックUPA-UT151型、日機装(株)製)、実験例1で説明する方法で算出される体積平均径(MV)は0.0027μm(標準偏差SD=0.0004μm)、個数平均径(MN)が0.0024μm(標準偏差SD=0.0005μm)と、動的光散乱法による個数平均径が300nm未満(3nm未満)のナノバブルであることが確認された。
実験例1(1)に記載する方法に従って、上記被験物質(水素ナノバブル水)で処理したPBMCのNK活性を測定した。具体的には、まず、被験者2名(50代男性:被験者1、60代男性:被験者2)の末梢血(全血採血後、30時間以内に使用)から比重遠心分離法を用いてPBMC層を分離した後、一定濃度(培養時濃度:2×106cells/ml)のPBMC溶液を調製した。
酸素ナノバブル水に代えて大気ナノバブル水を用いて実験例1と同じ方法でPBMCを処理してNK活性を測定した。
大気ナノバブル水として、ジャパンエコール株式会社製の大気ナノバブル水(ロット番号08121602)(原水)を用いた。大気中には窒素が約78%、酸素が約20.9%および二酸化炭素が約0.03%含まれている。なお、大気ナノバブル水の作成にあたり、空気(山梨県忍野村)を「インライン型クリーンフィルター、FCS500シリーズ」(ポリプロピレン+ウレタン製中空糸膜、濾過精度0.01μm、除去効率99.99%のフィルター)(CKD社製)に通して調製した大気を使用した。
実験例1(1)に記載する方法に従って、上記被験物質(大気ナノバブル水)で処理したPBMCのNK活性を測定した。具体的には、まず、(健常な男女7名:平均年齢47.3±13.7歳)の末梢血(全血採血後、30時間以内に使用)から比重遠心分離法を用いてPBMC層を分離した後、大気ナノバブル水を65%含む培地を使用して、一定濃度(培養時濃度:2×106cells/ml)のPBMC溶液を調製した。
(1)酸素ナノバブル水および大気ナノバブル水によるNK活性の増強
被験物質として下記のナノバブル水を使用して、実験例1の記載に従ってPBMCを処理して、NK活性(%)を測定した。
A:酸素ナノバブル水(ナーガの雫:(株)NAGA MRE製)、体積平均径(MV):0.3734μm(標準偏差SD=0.0784μm)、個数平均径(MN):0.2995μm(標準偏差SD=0.1002μm)
B:大気ナノバブル水(Lot.08121602、ジャパンエコール(株)製)、体積平均径(MV):0.0019μm(標準偏差SD=0.0003μm)、個数平均径(MN):0.0018μm(標準偏差SD=0.0003μm)
C:酸素ナノバブル水(美粒水:ジャパンエコール(株)製)、体積平均径(MV):0.0015μm(標準偏差SD=0.0002μm)、個数平均径(MN):0.0014μm(標準偏差SD=0.0002μm)。
被験物質としてIL−2単独(0〜50ng/ml)、およびIL−2(0〜50ng/ml)と上記ナノバブル水A〜Cとを組み合わせて使用し、実験例1の記載に従ってPBMCを処理して、NK活性を測定した。
Claims (3)
- 動的光散乱法で求められる個数平均径が300nm以下の気泡を含むナノバブル水を有効成分とする、NK細胞のがん細胞傷害及びウイルス感染細胞傷害に関わる活性増強剤。
- 生体から分取したリンパ球または単核球を、請求項1に記載するNK細胞のがん細胞傷害及びウイルス感染細胞傷害に関わる活性増強剤の存在下で培養する工程を有する、NK細胞のがん細胞傷害及びウイルス感染細胞傷害に関わる活性増強リンパ球又はNK細胞のがん細胞傷害及びウイルス感染細胞傷害に関わる活性増強単核球を含有する細胞免疫製剤の製造方法。
- 生体から分取した少なくともリンパ球を含む血液を、請求項1に記載するNK細胞のがん細胞傷害及びウイルス感染細胞傷害に関わる活性増強剤の存在下で培養する工程を有する、NK細胞のがん細胞傷害及びウイルス感染細胞傷害に関わる活性増強血液製剤の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009200935A JP5773473B2 (ja) | 2008-09-01 | 2009-08-31 | Nk活性増強剤およびその利用 |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008223076 | 2008-09-01 | ||
JP2008223076 | 2008-09-01 | ||
JP2009200935A JP5773473B2 (ja) | 2008-09-01 | 2009-08-31 | Nk活性増強剤およびその利用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010075180A JP2010075180A (ja) | 2010-04-08 |
JP5773473B2 true JP5773473B2 (ja) | 2015-09-02 |
Family
ID=42206412
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009200935A Expired - Fee Related JP5773473B2 (ja) | 2008-09-01 | 2009-08-31 | Nk活性増強剤およびその利用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5773473B2 (ja) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5319607B2 (ja) * | 2010-05-31 | 2013-10-16 | 丸井 智敬 | 微小気泡を含有する液体の組成物、および、微小気泡を含有する組成物の製造方法 |
KR101588246B1 (ko) * | 2012-12-04 | 2016-01-26 | 중앙대학교 산학협력단 | 미세버블수를 함유한 세포 배양 배지 및 이를 이용한 세포 배양 방법 |
CN104968607A (zh) * | 2012-12-04 | 2015-10-07 | 中央大学校产学协力团 | 使用超声振动器生产微气泡水的设备、包含微气泡水的细胞培养基、使用该细胞培养基的细胞培养方法、使用微气泡的高效混合燃料以及用于制造高效混合燃料的设备 |
JP2016063804A (ja) * | 2013-12-27 | 2016-04-28 | 亀井 一郎 | ミトコンドリア活性化組成物 |
JP5934735B2 (ja) * | 2014-03-28 | 2016-06-15 | 株式会社オプトクリエーション | ナノバブル・フコイダン水素水 |
CN106794490B (zh) | 2014-09-05 | 2020-09-11 | 坦南特公司 | 用于供应具有纳米气泡的处理液体的系统和方法 |
JP6555880B2 (ja) * | 2014-12-11 | 2019-08-07 | 株式会社メニコン | 微細気泡含有滅菌液の製造方法、該製造方法により得られる微細気泡含有滅菌液、および微細気泡含有滅菌液 |
JP6351044B2 (ja) * | 2015-09-11 | 2018-07-04 | 株式会社熊本アイディーエム | 輸液生成装置 |
CN109415686B (zh) | 2016-05-13 | 2023-02-21 | 株式会社希古玛科技 | 可给药到活体的水溶液及其制备方法 |
JP2023066654A (ja) * | 2021-10-29 | 2023-05-16 | キヤノン株式会社 | ウルトラファインバブル含有液の製造方法、およびウルトラファインバブルの製造装置 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001029191A1 (fr) * | 1999-10-21 | 2001-04-26 | Keisuke Teshigawara | Methode de culture in vitro de lymphocytes et compositions de therapie genique |
JP3904374B2 (ja) * | 2000-02-29 | 2007-04-11 | 独立行政法人科学技術振興機構 | キラー活性を増強したリンパ球 |
JP2002255849A (ja) * | 2001-02-28 | 2002-09-11 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | 細胞免疫療法補助剤 |
JP4080440B2 (ja) * | 2004-03-05 | 2008-04-23 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 酸素ナノバブル水およびその製造方法 |
JP2006213688A (ja) * | 2005-02-07 | 2006-08-17 | Toshio Oshiro | Nk活性増強剤 |
JP4275680B2 (ja) * | 2006-04-28 | 2009-06-10 | 裕 照沼 | リンパ球の活性・増殖に係る培養方法 |
JP4611328B2 (ja) * | 2007-02-28 | 2011-01-12 | シャープ株式会社 | インスリン量を増加させるとともに血糖値を低下させる装置 |
-
2009
- 2009-08-31 JP JP2009200935A patent/JP5773473B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2010075180A (ja) | 2010-04-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5773473B2 (ja) | Nk活性増強剤およびその利用 | |
AU2021203382B2 (en) | Therapeutic pooled blood apoptotic cell preparations and uses thereof | |
Tomić et al. | Graphene quantum dots suppress proinflammatory T cell responses via autophagy-dependent induction of tolerogenic dendritic cells | |
CN106692181B (zh) | 纳米硒作为cik细胞增敏剂的应用 | |
Serafino et al. | Thymosin α1 as a stimulatory agent of innate cell‐mediated immune response | |
Wheat et al. | Suppression of canine dendritic cell activation/maturation and inflammatory cytokine release by mesenchymal stem cells occurs through multiple distinct biochemical pathways | |
Garay et al. | Crosstalk between PKA and Epac regulates the phenotypic maturation and function of human dendritic cells | |
ES2633102T3 (es) | El uso de células apoptóticas ex vivo para generar linfocitos T reguladores | |
Noori et al. | Tehranolide molecule modulates the immune response, reduce regulatory T cell and inhibits tumor growth in vivo | |
KR20200030084A (ko) | 씨디39 기질 줄기세포 단리 방법 및 용도 | |
Li et al. | Exosomes released from human bone marrow–derived mesenchymal stem cell attenuate acute graft-versus-host disease after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation in mice | |
Michelini et al. | Gold nanoparticles (AuNPs) impair LPS-driven immune responses by promoting a tolerogenic-like dendritic cell phenotype with altered endosomal structures | |
Ehx et al. | Comprehensive analysis of the immunomodulatory effects of rapamycin on human T cells in graft-versus-host disease prophylaxis | |
Yin et al. | The role of extracellular vesicles in osteoarthritis treatment via microenvironment regulation | |
WO2011036722A1 (ja) | Nk活性増強剤およびその利用 | |
TW201110972A (en) | Methods for treating allergic disease | |
JP2023540827A (ja) | 高純度及び高効率の自然殺害細胞の製造方法及びその用途 | |
CN109803681B (zh) | 用于治疗免疫病症的免疫抑制组合物 | |
KR100797050B1 (ko) | 아토피성 피부염에 치료효과를 갖는 cd8 t 세포 | |
Banyer et al. | Combinations of IFN-γand IL-4 induce distinct profiles of dendritic cell-associated immunoregulatory properties | |
Tao et al. | Nicotine Protects Dendritic Cells from Apoptosis and Support DCs-dependent CD4+ T-cell Priming in vitro. | |
Yavuz et al. | Gold-based nano-adjuvants | |
WO2020246535A1 (ja) | Htlv-i特異的ctl活性化剤 | |
Su et al. | Exploring the therapeutic potential of regulatory T cell in rheumatoid arthritis: Insights into subsets, markers, and signaling pathways | |
Aktanova et al. | ASSESSING EFFECTS OF CUCURBITURILS ON MONOCYTES AND NK-CELLS IN HEALTHY VOLUNTEERS |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120823 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140304 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140425 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20141021 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20141220 |
|
RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20141220 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20141225 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20141222 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150212 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20150605 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20150626 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5773473 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |