JP5748658B2 - 新規マラリアワクチン - Google Patents
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Description
(I-1)下記一般式(1)で表されるポリペプチド:
X1−A−B−X2−Y−X3−(Y)n−X4−(Y)n−X5 (1)
(式中、
X1は配列番号1で示されるポリペプチドの第1〜7アミノ酸残基を表し、
X2は上記ポリペプチドの第73〜177アミノ酸残基を表し、
X3は上記ポリペプチドの第178〜258アミノ酸残基を表し、
X4は上記ポリペプチドの第259〜289アミノ酸残基を表し、
X5は上記ポリペプチドの第290〜334アミノ酸残基を表し、
Aは熱帯熱マラリア原虫のSERAポリペプチドの47kd領域内の8merリピート配列を表し、
Bは熱帯熱マラリア原虫のSERAポリペプチドの47kd領域内のセリンリッチ領域の配列を表し、Yは、A-A、A-B及びBから選択されるいずれかである。
ただし、nは0又は1の整数である。)。
X1−A1-B−X2−(A2-B)−X3−X4−X5 (2)
X1−A1-B−X2−(A2-B)−X3−(A3-B)−X4−X5 (3)
X1−A1-B−X2−(A2-B)−X3−(A3-B)−X4−(A4-B)−X5 (4)
X1−A1-B−X2−(A2-A5)−X3−(A3-A6)−X4−(A4-A7)−X5 (5)
X1−A1-B−X2−(B)−X3−(B)−X4−(B)−X5 (6)
(式中、
X1は配列番号1で示されるポリペプチドの第1〜7アミノ酸残基を表し、
X2は上記ポリペプチドの第73〜177アミノ酸残基を表し、
X3は上記ポリペプチドの第178〜258アミノ酸残基を表し、
X4は上記ポリペプチドの第259〜289アミノ酸残基を表し、
X5は上記ポリペプチドの第290〜334アミノ酸残基を表し、
A1〜A7はそれぞれ配列番号2〜8に示すアミノ酸配列を表し、
Bは配列番号9に示すアミノ酸配列を表す。)。
(II-1)(I-1)〜(I-5)のいずれかに記載のポリペプチドの少なくとも1種を有効成分として含有する、熱帯熱マラリア原虫感染症の予防及び/又は治療用ワクチン。
(III-1)(I-1)〜(I-5)のいずれかに記載のポリペプチドに対する抗体。
マラリア原虫感染症のワクチンとして有用な本発明のポリペプチド(1)及び(2)について、以下に詳述する。なお、本明細書において、ポリペプチド(1)及び(2)を、「本発明のポリペプチド」と総称することがある。
SARA(serine-repeat antigen)ポリペプチドは、赤血球内期のPf遺伝子により発現される合計989アミノ酸からなる分子量115kdのタンパク抗原であり、その構造はN末端からC末端方向に順に、47kd−50kd−18kdの3つのドメインからなる。これらのドメインの前駆体としてのSERAは、合計5868塩基からなるSERA遺伝子(DNA)上に分散する4つのエキソンによる発現後、赤血球内期でのメロゾイト放出の際にプロセッシングされ、上記3ドメインに開裂する(Molecular and Biochemical Parasitology,86,pp.249-254,1997;及びExperimental Parasitology,85,pp.121-134,1997)。なお、SERA遺伝子(DNA)とこれがコードするアミノ酸配列の完全長データはGenBankで公開され入手可能である(Accession Number:J04000;http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)。また、SERAのN末端領域(以下「47kd領域」と表記する)は、合計382アミノ酸残基からなり、その配列に係るPf株間のホモロジー検索によれば、アミノ酸の欠失や付加、約20ヵ所におけるアミノ酸の変異(非同義置換)等の散在がみられ、多様である(Molecular and Biochemical Parasitology,同前;及びExperimental Parasitology,同前)。
ポリペプチド(2)は、配列番号1で示されるオリジナルSE36ポリペプチドである。
ポリペプチド(1)は、上記配列番号1で示されるポリペプチド(2)にさらに改良を加え、より高い免疫原性を有する改良型のSE36ポリペプチドである。
X1−A-B−X2−Y−X3−(Y)n−X4−(Y)n−X5 (1)
式中、
X1は配列番号1で示されるポリペプチドの第1〜7アミノ酸残基を表し、
X2は上記ポリペプチドの第73〜177アミノ酸残基を表し、
X3は上記ポリペプチドの第178〜258アミノ酸残基を表し、
X4は上記ポリペプチドの第259〜289アミノ酸残基を表し、
X5は上記ポリペプチドの第290〜334アミノ酸残基を表し、
Yは、A-A、A-B及びBから選択されるいずれか一つである。
ただし、nは0又は1の整数である。
A1:TGESQTGNTGGGQAGNTVGDQAGSTGGSPQGSTGASQPGS(配列番号2)
A2:TGESQTGNTGGGQAGNTGGDQAGSTGGSPQGSTGASPQGSTGASPQGSTGASQPGS(配列番号3)
A3:TGESQTGNTGGGQAGNTVGDQAGNTVGDQAGSTGGSPQGSTGASQPGS(配列番号4)
A4:TGESQTGNTGGGQAGNTGGGQAGNTVGDQAGSTGGSPQGSTGASQPGS(配列番号5)
A5:TGESQTGNTGGGQVGNTGGGQAGSTGGSPQGSTGASQPGSSEPSNPVS(配列番号6)
A6:TGESQTGNTGGGQAGNTVGGQAGNTGGGQAGNTGGDPQGSTGGSQPGS(配列番号7)
A7:TGESQTGNAGGGQAGNTVGDQAGSTGGSPQGSTGASPQGSTGASPQGSTGASQPGS(配列番号8)。
B: SEPSNPVSSGHSVSTVSVSQTSTSS(配列番号9)。
一般式:X1−A-B−X2−Y−X3−(Y)n−X4−(Y)n−X5 (1)
SE36-1:X1−A1-B−X2−(A2-B)−X3−(Y)0−X4−(Y)0−X5
SE36-2:X1−A1-B−X2−(A2-B)−X3−(A3-B)−X4−(Y)0−X5
SE36-3:X1−A1-B−X2−(A2-B)−X3−(A3-B)−X4−(A4-B)−X5
SE36-4:X1−A1-B−X2−(A2-A5)−X3−(A3-A6)−X4−(A4-A7)−X5
SE36-5:X1−A1-B−X2−(B)−X3−(B)−X4−(B)−X5
(上記式中、(Y)0は、Yに該当するアミノ酸残基がないこと、すなわちシングルボンドを意味する。)。
本発明のポリペプチドの合成には、従来公知の方法を採用することができる。特に限定されないが、例えば、ポリペプチド(2)を合成する場合には、まずポリペプチド(2)をコードするDNA断片(以下、「SE36遺伝子(DNA)」と記載することがある)を合成し、クローニングした後、その合成遺伝子クローンの発現ベクターを構築し、次いで、これを宿主(例えば大腸菌)にトランスフェクションして、作製された形質転換体を培養することにより行うことができる。
Pfの机上のSE36遺伝子(Pfコドンを有するSE36遺伝子)の塩基配列とそれがコードするアミノ酸配列は、周知の遺伝子データベース公開機関、例えば、DDBJ、GenBank、EMBL等からインターネットにより入手可能である。ポリペプチド(2)のアミノ酸配列は、配列番号16に示される塩基配列によってコードされる(図1−3参照)。従って、配列番号16に基づいて、ポリペプチド(2)のアミノ酸配列(配列番号1)をコードするSE36遺伝子(DNA)を合成する。なお、ポリペプチド(1)については、例えばSE36-1〜SE36-5のアミノ酸配列(配列番号10〜14)をコードする配列番号17〜22に示される塩基配列に基づいてDNAを合成する。
SE36遺伝子(DNA)の発現ベクターの作成には、既知又は市販の、宿主が大腸菌の発現用ベクター(“Cloning Vectors:A Laboratory Manual”、同前に多種多様に紹介されている)、例えば、プラスミドpET-3aと、大腸菌BL21(DE3)pLysS、又は大腸菌BL21(DE3)pLysEとの組合せ[Stratagene社(米国)製]を用いることができる。かかる作製は、例えば、前記クローニングベクターからSE36遺伝子(DNA)を含む制限酵素断片を切出した後、これと同一の酵素で開裂したベクターの制限酵素サイトに挿入連係することにより行う。また、pET-SE47’(前述のVaccine)からも作製することができる。この場合には、例えば、pET-SE47’又はこれが保有のSE47’合成遺伝子からセリン反復領域をコードする全領域ないしは一部領域を制限酵素で切除することにより、上記と同様にして作成することができる。次いで、作成した発現ベクターを宿主に移入することにより形質転換体が得られる。かかる形質転換体から、ポリペプチドの量産を指標として、SE36遺伝子(DNA)の発現系として産業上利用の観点から適確なものを選別することができる。
本発明のポリペプチドが細胞外へ分泌される場合には、上記の形質転換体の培養物の除菌培養液を上記SE36ポリペプチド抽出の出発材料として用いる。細胞内に蓄積される場合は、例えば、培養物から遠心、濾過等により集菌し採取した菌体から上記ポリペプチドを抽出する。先ず、抽出第一段階としての菌体の破砕には、酵素による消化、浸透圧による破壊、急激な加圧減圧、超音波、種々のホモジナイザー等々を用いることができる。次いで、菌体破砕物を分別するための手段として、物理的な低速遠心、超遠心、濾過、分子ふるい、膜濃縮等、化学的な沈殿剤、可溶化剤、吸脱着剤、分散剤等、物理化学的な電気泳動、カラムクロマトグラフィー、支持体、透析、塩析等を、それぞれ組合せて用いることができる。また、これ等の手段の適用においては、温度、圧力、pH、イオン強度等の物理化学的条件を適宜、設定できる。
上記のようにして得られた本発明のポリペプチドの検出とサイズの確認は、例えば、沈降係数の測定、分子ふるい、SDS−ポリアクリルアミド電気泳動等により行うことができる。また、本発明のポリペプチドの抗原性は、SERAの47kdに対するポリクローナル抗体やモノクローナル抗体を用いるWestern blot分析、ELISA、凝集反応,蛍光抗体法、ラジオイムノアッセイ等での抗原抗体反応により確認できる。更に、本発明のポリペプチドの免疫原性、及び抗SE36抗体のPf原虫増殖阻害能は、熱帯熱マラリア原虫感染症患者の血清や、当該ポリペプチドで免疫した実験小動物、例えば、ラットやマウス等の血清等を用いる抗原抗体反応、Pf merozoiteの赤血球内での増殖阻止試験(いわゆる中和反応)、抗SE36抗体の保有者の血中Pf数の測定等により確認することができる。
本発明は、上記本発明のポリペプチドを含むマラリアワクチンを提供する。マラリア原虫感染症には、三日熱マラリア、四日熱マラリア、卵形マラリア及び熱帯熱マラリアが知られている。本発明のワクチンは、熱帯熱マラリアの抗原としての特異性が顕著に高いことから、熱帯熱マラリアワクチンとして好適である。但し、他のマラリア原虫感染症に対する使用を制限するものではない。
前記の精製されたポリペプチド(2)を抗原として、これを溶媒、例えば、等張のPBS(phosphate buffer saline)に溶解させ、ワクチン原液を調製する。
ワクチンの工程管理及び品質管理に係る検定は、薬事法(昭和35年法律第145号)第42条第1項の規定に基づく日本国の規程「生物学的製剤基準」、WHOの勧告“Requirements for Biological Substances”[WHO Technical Report Series(TRS)、No.889、pp.105-111、1999]等に準拠して行われる。マラリアワクチンは、未だ実用化されておらず、その製剤基準が存在しないので、その検定は、これに類似のワクチンに係る基準、例えば、上記WHOの勧告“Requirements for Hepatitis B Vaccines Made by Recombinant DNA Techniques”(上記TRS、No.786、1898、及びNo.889、1999)、“Requirements for Japanese Encephalitis Vaccine(Inactivated)for Human Use”(上記TRS、No.771、1988)等に記載の安全性と有効性に関する種々の規定に準拠し行うことができる。例えば、無菌、異常毒性否定、タンパク質含量、純度、水素イオン濃度、抗原確認、抗原ポリペプチド等、要求あるいは勧告される種々の試験規定に準拠して検定を行い、これ等の全ての検定試験に合格した製造ロットを適格なマラリアワクチン製剤として実用に供する。
ワクチン接種は、当業界において通常の方法に従って行うことができ、特に限定されないが、例えば、1ドーズ0.25〜0.5mlを皮下接種する。尚、かかる接種は、約2〜4週間隔で1〜3回行うことが好ましい。
(3-1)上記ワクチンの製造において、ポリペプチド(1)は、当該ポリペプチドと共に、従来公知のアジュバントを組み合わせて用いても良い。アジュバントとしては、本発明の免疫効果を増強し得るものであれば特に限定されないが、例えば、水酸化アルミニウムゲル、ヒト型TLR9リガンドアジュバントであるK3(KタイプCpGアジュバント)、D35(DタイプCpG ODNアジュバント )、及びsHZ(合成ヘモゾインアジュバント)等が挙げられる。さらに、これらのアジュバントの他にも、自然免疫賦活作用を有するリガンドをアジュバントとして用いることもできる。
ポリペプチド(1)又は(2)に対する抗体は、マラリア原虫感染症の診断に使用することができる。すなわち、本発明によれば、上記ポリペプチド(1)または(2)に対する抗体を有効成分として含有するマラリア原虫感染症の診断剤を提供することができる。ポリペプチド(1)または(2)に対する抗体は、例えば、前記ポリペプチドを、常法に従って、動物、例えば、ウサギ、モルモット、マウス等の腹腔内、皮下や筋肉内等に接種し、抗体産生させたこれらの動物の血清から採取することができる。かかる抗体は、抗原検出用として使用でき、マラリア原虫の感染が疑われる患者の血清等の被験試料中に抗原が検出されれば、マラリア原虫に感染していると診断することができる。
本発明のワクチンは、前述のように、高い抗体価を有していることから、マラリア原虫の感染を防止するために予め、被験者(例えばマラリア原虫の感染を予防する必要がある者)に投与することによって効果的にマラリア原虫感染症を予防することができる。
本発明者らは、以前に、SE36(配列番号1)に対するエピトープマッピングの結果から、N端領域に存在する8 merリピートまたはセリンリッチ領域、あるいはその両方の領域が防御エピトープとして重要であるという結果を得ている(これを開示する文献名を記載します。)。
ポリペプチド(2)(配列番号1)の発現系の構築は、次のように行った。
上記で得た大腸菌BL/SE36をアンピシリン50μg/ml含有のLB培地[Bacto-trypton 1%(W/V)、Bacto-yeast extract 0.5%(W/V)、及びNaCl 1%(W/V)]で37℃にて18時間培養しシードを調製した。次いで、上述の新鮮LB培地5Lに上記シード50mlを接種した後、37℃で培養した。菌数が1×108/mlに達した時点で、IPTG(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside)を、最終濃度が50μg/mlになるよう添加混合の後、更に、37℃にて3時間培養した。培養終了後、遠心(5,000rpm、10分)により集菌し、細胞ペースト3.2gを得た。このペーストを、9.6mlの氷冷した溶菌(lysis)緩衝液(50mM Tris-HCl、pH8.0、及び1mM EDTA)に懸濁の後、以下(1)-(6)の操作を記載の順に、4℃で行った。
超音波(19.5kHz、50W)で20秒間、6回処理により上記ペースト細胞を破砕の後、その遠心(15,000rpm、30分)上清を採取し、20ml容のビーカーに移注した。
上記ビーカー内液に、攪拌下で2.37gの結晶(NH4)2SO4を35%(W/W)飽和になるよう添加混合し、更に、30分間撹拌を続け塩析を行った。次いで、これを遠心(12,000rpm、10分)し、その上清を捨て、沈渣に、30%(W/W)硫安飽和になるよう9mlの氷冷硫安溶液[1.1M(NH4)2SO4を含有の前記lysis緩衝液]を加え、懸濁した。この懸濁液を遠心(12,000rpm、10分)し、その上清を捨てた後、8.8mlの溶解緩衝液[50mM Tris-HCl(pH8.0)、1mM EDTA,50mM 2-メルカプトエタノール、9M 尿素、及び1%(W/V)Tween 80]を添加し、沈渣を再懸濁し回収した。この再懸濁液の1/2量(4.4ml)を60℃で10分間保温し、再び氷冷の後、0.45μm-フィルター[Millipore社(米国)製]で濾過した。
上記濾液を、GF緩衝液[50mM Tris-HCl(pH8.0)、1mM EDTA、50mM 2-メルカプトエタノール、及び8M 尿素]で平衡化したSephacryl S-300(26/60)カラムクロマトグラフィー(流速0.3ml/分、4℃)で分画(3.5ml/分画)した後、第22-43各分画をSDS-ポリアクリルアミド電気泳動にかけ、その泳動像に基づき検出されるSE36タンパク質を多量に含む第32-37分画をプールした。残りの再懸濁液(4.4ml)も上記と同様に処理した後、前記の分画プールと併せて次(4)の操作に用いた。
上記の分画プールを室温に置き、攪拌下でこの分画プール1ml当たり0.093gの(NH4)2SO4を添加混合し、硫安の最終濃度が0.7Mになるよう調整した。一方、容量13mlの水性カラムOctyl Sepharose(Pharmacia Biotech)を10倍量のHlC緩衝液[0.7M(NH4)2SO4を含有の前記GF緩衝液]で平衡化した。このカラムに上記の硫安濃度調整の分画プールを流速0.5ml/分にて流入した。更に、吸光度が下がるまで、HlC緩衝液を流入の後、確認のため、(NH4)2SO4を含有しないGF緩衝液により吸着成分を溶出した。このカラムでの未吸着分画を透析バッグに入れ、1Lの20mM Tris-HCl緩衝液(pH8.0)(1mM EDTA含有)を外液に用い4℃で10時間、透析した。尚、この透析の間、外液を2回交換した。
透析済みバッグを更に、0.3Lの50%(W/W)飽和(NH4)2SO4溶液[20mM Tris-HCl(pH8.0)及び1mM EDTA含有]を外液に用い4℃で10時間、透析することにより、タンパク質を沈澱させた。この沈殿物は、遠心(12,000rpm、10分)により、沈渣として回収の後、2mlのGF緩衝液に懸濁した。
上記の懸濁液を60℃で10分間保温の後、4℃に戻した。これを前記0.45μm-フィルターで濾過し、その濾液を流速0.3ml/分にて、GF緩衝液2[10mM Tris-HCl(pH8.0),1mM EDTA、20mM 2-メルカプトエタノール、及び8M 尿素]で平衡化した前記S-300カラム(26/60)にかけ分画した。前述(3)と同様にして、各分画のSDS-ポリアクリルアミド電気泳動にかけ、SE36タンパク質の分画を選別の後、これ等をプールして該分画12mlを得た。この分画プールを希釈用緩衝液[10mM Tris-HCl(pH8.0)、1mM EDTA、及び2M尿素]に撹拌添加し、SE36タンパク質の濃度が25μg/mlとなるように希釈した。この希釈液を2LのPBS[9mM NaHPO4、3mMNaH2PO4、及び137mM NaCl(pH7.4)]を外液に用い4℃で10時間、透析した。尚、この透析の間、外液を2回交換した。次いで、透析終了後の内液を、Centprep 30で濃縮した後、Durapore 0.22μm-フィルター[Millipore社(米国)製]で濾過滅菌し、SE36タンパク質を1mg/mlを含有の無菌標品10mlを得、これをSE36ワクチン原液として4℃に保存した。
前述のようにして得られたポリペプチド(2)のアミノ酸配列は、タンパク質シークエンサーApplied Biosystems 473A[PE社(米国)製]を用いるエドマン分解により決定し、配列番号1に記載されるアミノ酸配列を有することが確認された。
抗原として、ポリペプチド(1)(SE36-1〜SE36-5ポリペプチド)、ポリペプチド(2)及びネガティブSE36ポリペプチドを用いて、下記に試験を行った。
96-well MaxiSorp NUNC-Immuno plate (442404: Nunc)にCoating Buffer ((pH9.6):1Lの蒸留水中、3.4 g Na2CO3及び5.7 g NaHCO3)でSE36を希釈(1μg/ml, 100μl/well)した、希釈されたSE36を1 wellに100 μlずつ分注し、Wash Buffer(0.05% Tween 20を含有するPBS(-))で2回洗浄した。その後、Blocking Buffer(5% Skim Milk及び0.05% Tween 20を含むPBS(-))でブロッキングし、4℃、2時間、インキュベートした。ブロッキング後のELISAプレートを、Wash Bufferで4〜5回洗浄し、使用する迄の間、−20℃で保存した。
(a)スタンダード血清
横12 well又は縦8 wellプレートを使用し、1 well目を150 μl、それ以降を100 μlずつBlocking Bufferを分注した。1 well目に1.5 μlのスタンダードとなる血清を入れ、良く混合した(1/100希釈)。1 well目の50μlを隣のwell移し、良く混合した(1/3希釈)。これを最後のwellまで繰り返し行った(これにより、1/100, 1/300, 1/900, 1/2700,…と段階希釈できる)。
Blocking Bufferによるサンプル(血清)の希釈(1/100, 1/500, 1/1000など:必ずスタンダードの範囲内にO.D.値が来るようにした)し、1 wellに100μlずつ分注した。室温で2〜3時間、又は4℃で一晩インキュベートした。その後、Wash Bufferで4〜5回洗浄した。
2次抗体(Anti-Mouse IgG (Goat Anti-Mouse IgG (H+L)) (1031-05: SouthernBiotech))を希釈倍率でBlocking Bufferと混合し、1 wellに100μlずつ分注した後、室温で2〜3時間、又は4℃で一晩インキュベートした。その後、Wash Bufferで4〜5回洗浄した。なお、二次抗体の希釈倍率は、任意に設定することができる。
発色基質であるTMB(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine:SIGMA: T8665-100ML)を1 wellに50μlずつ分注し、適当な濃さに青色になったところで、1 mol/l-硫酸(ナカライテスク: 95626-06)を50μlずつ分注した。その後、プレートリーダーを用いて、450 nmで検出し、540 nmでBackgroundを引いた。
さらに第4週目の血清を用いてエピトープマッピングを行った。エピトープマッピングには、配列番号23〜37に示される15本のペプチド(図1−9参照)をそれぞれ、0.03mMの濃度で各ウェルをコートし、上記ELISA法に供することで実施した。結果を図4に示す。エピトープマッピングの結果、ポリペプチド(1) (SE36-1〜SE36-5)は防御エピトープとして重要なN端領域に対する抗体の誘導を優位に促進していることが示された。
下記に示すように、アジュバント(水酸化アルミニウムゲル、K3(KタイプCpGアジュバント)、D35(DタイプCpGアジュバント)、sHZ(合成ヘモゾインアジュバント))を組み合わせて、ポリペプチド(2)の免疫原性に対する増強作用を評価した。
抗原として、ポリペプチド(2)のみ、水酸化アルミニウムゲルとポリペプチド(2)の組み合わせ、K3とポリペプチド(2)の組み合わせ、ならびに、水酸化アルミニウムゲル及びK3とポリペプチド(2)の組み合わせを用いて免疫を行った。試験方法は、上記試験例2に準じて行った。最初の免疫から第4週目に抗SE36-IgG抗体価を測定した。その結果を図5に示す。図5の結果から、抗原のみを投与した場合(図5中「none」で示される)、水酸化アルミニウムゲル単独をアジュバントとして用いた場合(図5中「Alum 」で示される)、及びK3単独をアジュバントとして用いた場合(図5中「K3」で示される)に比べ、水酸化アルミニウムゲルとK3をアジュバントとして併用することによって(図5中「Alum+K3」で示される)、顕著に抗SE36抗体が誘導されることが示された。
さらに、本発明者らは、水酸化アルミニウムゲルとK3の組み合わせ以外のアジュバントによる、ポリペプチド(2)の免疫原性の向上を評価した。また、本試験においては、長期に亘って被験動物における抗体価を評価した。具体的な試験方法は以下の通りである。
最も抗体価の高かった時(図6中(*)で示す)の血清を用いてエピトープマッピングを行った。エピトープマッピングは、図1−9に示す15本のペプチド(配列番号23〜37)(濃度0.03mM)で各ウェルをコートし、上記ELISA法に供した。各グループの中で最もN端領域に対する抗体価が高かった1個体ずつで比較したところ、K3(KタイプCpGアジュバント)を加えることでN端領域に対する抗体価が亢進するという結果が得られた(図7:枠部分)。
ポリペプチド(2)にアジュバント(水酸化アルミニウムゲル、K3(KタイプCpGアジュバント))を組み合わせて、リスザルを免疫し、マラリア原虫に対する防御効果を評価した。
配列番号2は、A1のアミノ酸配列を表す。
配列番号3は、A2のアミノ酸配列を表す。
配列番号4は、A3のアミノ酸配列を表す
配列番号5は、A4のアミノ酸配列を表す。
配列番号6は、A5のアミノ酸配列を表す。
配列番号7は、A6のアミノ酸配列を表す。
配列番号8は、A7のアミノ酸配列を表す。
配列番号9は、Bのアミノ酸配列を表す。
配列番号10は、SE36-1ポリペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号11は、SE36-2ポリペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号12は、SE36-3ポリペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号13は、SE36-4ポリペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号14は、SE36-5ポリペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号15は、ネガティブSE36ポリペプチドのアミノ酸配列である。
配列番号16は、ポリペプチド(2)のアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの塩基配列である。
配列番号17は、SE36-1ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの塩基配列である。
配列番号18は、SE36-2ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの塩基配列である。
配列番号19は、SE36-3ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの塩基配列である。
配列番号20は、SE36-4ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの塩基配列である。
配列番号21は、SE36-5ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの塩基配列である。
配列番号22は、ネガティブSE36ポリペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの塩基配列である。
配列番号23〜37は、エピトープマッピング用ポリペプチド1〜15のアミノ酸配列である。
Claims (11)
- 配列番号1で表されるポリペプチド、K3(KタイプCpGアジュバント)及び水酸化アルミニウムゲルを含有する熱帯熱マラリア原虫感染症の予防及び/又は治療用ワクチン。
- アジュバントとして、K3(KタイプCpGアジュバント)及び水酸化アルミニウムゲルの組み合わせが用いられる、配列番号1で表されるポリペプチドを含有する熱帯熱マラリア原虫感染症の予防及び/又は治療用ワクチン。
- 下記一般式(1)で表されるポリペプチド:
X1−A-B−X2−Y−X3−(Y)n−X4−(Y)n−X5 (1)
(式中、
X1は配列番号1で示されるポリペプチドの第1〜7アミノ酸残基を表し、
X2は上記ポリペプチドの第73〜177アミノ酸残基を表し、
X3は上記ポリペプチドの第178〜258アミノ酸残基を表し、
X4は上記ポリペプチドの第259〜289アミノ酸残基を表し、
X5は上記ポリペプチドの第290〜334アミノ酸残基を表し、
Aは熱帯熱マラリア原虫のSERAポリペプチドの47kd領域内の8merリピート配列を表し、
Bは熱帯熱マラリア原虫のSERAポリペプチドの47kd領域内のセリンリッチ領域の配列を表し、
Yは、AA、AB及びBから選択されるいずれかである。
ただし、nは0又は1の整数である。)。 - 前記一般式(1)において、YがA-B又はBである、請求項3に記載のポリペプチド。
- 前記一般式(1)において、Aが配列番号2〜8から選択される1種のアミノ酸配列であり、Bが配列番号9で表されるアミノ酸配列である、請求項3に記載のポリペプチド。
- 配列番号10〜14のいずれかに示されるアミノ酸配列からなる請求項3に記載のポリペプチド。
- 請求項3〜6のいずれかに記載するポリペプチドの少なくとも1種をコードするポリヌクレオチド。
- 請求項3〜6のいずれかに記載のポリペプチドの少なくとも1種を有効成分として含有するか、または当該ポリペプチドとアジュバンドを有効成分として含有する、熱帯熱マラリア原虫感染症の予防及び/又は治療用ワクチン。
- 上記アジュバンドが、水酸化アルミニウムゲル、K3(KタイプCpGアジュバント)、D35(DタイプCpGアジュバント)、及びsHZ(合成ヘモゾインアジュバント)からなる群より選択される少なくとも1種である、請求項8に記載のワクチン。
- 請求項3〜6のいずれかに記載のポリペプチドに対する抗体。
- 請求項3〜6のいずれかに記載するポリペプチド、又は請求項10に記載する抗体を含有する熱帯熱マラリア原虫感染症の診断剤。
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