JP2007527707A - ピロプラスミドワクチン - Google Patents
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Abstract
Description
・配列番号2に示すアミノ酸配列を有する、バベシア・ボビス(Babesia bovis)からのピロプラスミドIIA番号1(BIIA1)、
・配列番号4に示すアミノ酸配列を有する、タイレリア・アヌラタ(Theileria annulata)からのピロプラスミドIIA番号1(TIIA1)、
・配列番号6に示すアミノ酸配列を有する、バベシア・ボビス(Babesia bovis)からのピロプラスミドIIA番号2(BIIA2)、
・配列番号8に示すアミノ酸配列を有する、タイレリア・アヌラタ(Theileria annulata)からのピロプラスミドIIA番号2(TIIA2)、
・配列番号10に示すアミノ酸配列を有する、バベシア・ボビス(Babesia bovis)からのピロプラスミドIIA番号3(BIIA3)。
・BIIA1(配列番号1)に関して、EST配列:
B bovis−11e05.plc、
B bovis−344e09.qlc、
B bovis−384f06.qlc、
B bovis−261d05.qlc、
B bovis−5e5.plc、
B bovis−373g01.qlc、
B bovis−418b06.qlc、
B bovis−375d02.qlc、
B bovis−407d03.qlc、
B bovis−284−f07.qlc、
・BIIA1(配列番号1)に関して、合体コンティグ:
Bbovis.CONTIG.1029、
Bbovis.CONTIG.227、
・BIIA2(配列番号5)に関して、EST配列:
B bovis−417g12.qlc、
B bovis−376a10.qlc、
・TIIA2(配列番号7)に関して、合体コンティグ:
gnl|Sanger 5874|Contig1548、
・TIIA1(配列番号3)に関して、合体コンティグ:
gnl|Sanger 5874|Contig1。
Tm=[81.5℃+16.6(logM)+0.41(%GC)−0.61(%ホルムアミド)−500/L]−1℃/1%ミスマッチ
から導かれる。
・直接的な又は中間的構造体を介したアミノ酸配列の脱水、エステル化などによるカップリング、コンジュゲート化または架橋により化学的に、
・巨大分子構造体内または巨大分子構造体上での捕捉によるカップリングにより物理的に、あるいは好ましくは、
・単一の連続的発現産物が最終的に産生されるようそれらの2つのそれぞれをコードしうる核酸の断片を含む組換え核酸分子の組合せによる分子生物学的融合により行うことが可能である。そのような分子操作技術が好ましい。
イヌ:エールリキア・カニス(Ehrlichia canis)、バベシア・ギブソニ(Babesia gibsoni)、バベシア・ボゲリ(B.vogeli)、バベシア・ロッシ(B.rossi)、リーシュマニア・ドノバニ(Leishmania donovani)複合体、イヌパルボウイルス、イヌジステンパーウイルス、レプトスピラ・インテルロガンス・セロバルス・キャニコラ(Leptospira interrogans serovars canicola)、イクテロヘモラジエ(icterohaemorrhagiae)、ポモナ(pomona)、グリッポチホサ(grippotyphosa)、ブラチスラバ(bratislava)、イヌ肝炎ウイルス、イヌパラインフルエンザウイルス、狂犬病ウイルス、ヘパトゾーン・カニス(Hepatozoon canis)およびボレリア・ブルグドルフェリ(Borrelia burgdorferi)、
ウシ:ウシヘルペスウイルス、ウシウイルス性下痢ウイルス、パラインフルエンザ3型ウイルス、ウシパラミクソウイルス、口蹄疫ウイルス、パスツレラ・ヘモリチカ(Pasteurella haemolytica)、ウシRSウイルス、タイレリア種(Theileria sp.)、バベシア種(Babesia sp.)、トリパノゾーマ種(Trypanosoma sp.)、アナプラスマ種(Anaplasma sp.)、ネオスポラ・カニヌム(Neospora caninum)、スタフィロコッカス・アウレウス(Staphylococcus aureus)、ストレプトコッカス・アガラクチエ(Streptococcus agalactiae)、マイコプラズマ(Mycoplasma)、大腸菌(E.coli)、エンテロバクター(Enterobacter)、クレブシエラ(Klebsiella)、シトロバクター(Citrobacter)、クリプトスポリジウム(Cryptosporidium)、サルモネラ(Salmonella)およびストレプトコッカス・ジスガラクチエ(Streptococcus dysgalactiae)、ならびに
ウマ:ストレプトコッカス・エクイ(Streptococcus equi)、ストレプトコッカス・ズーエピデミクス(Streptococcus zooepidemicus)、ロドコッカス・エクイ(Rhodococcus equi)、コリネバクテリウム・シュードツベルクローシス(Corynebacterium pseudotuberculosis)、シュードモナス・マレイ(Pseudomonas mallei)、アクチノバシラス・エクイリ(Actinobacillus equili)およびパスツレラ・マルトシダ(Pasteurella multocida)、ポトマック熱因子(Potomac fever agent)、クロストリジウム・テタニイ(Clostridium tetanii)、マイコバクテリウム・シュードマルレイ(Mycobacterium pseudomallei)、水疱性口炎ウイルス、ボルナ病ウイルス、ウマインフルエンザウイルス、アフリカ馬疫ウイルス、ウマ動脈炎ウイルス、ウマヘルペスウイルス1〜4、伝染性貧血ウイルス、ウマ脳脊髄炎ウイルスおよびB型日本脳炎ウイルス。
1.1.1.B.bovisインビトロ培養
バベシア・ボビス(B.bovis)イスラエル分離体(クローン系C61411)を、既に記載されているとおりに(Levy & Ristic 1980,Science,vol.207,p.1218−1220)インビトロで培養した。簡潔に説明すると、40% ウシ血清(成体ドナーウシ由来)、50μgml−1 ゲンタマイシン(Gibco BRL)、25mM 炭酸水素ナトリウムおよびウシ赤血球(5% パック細胞容積(PCV))と共に培地M199(Cambrex Bioscience,Belgium)を含有する24ウェルプレート(全容量1.2ml)または25cm2 ボトル(全容量15ml)内にバベシア・ボビス培養物を維持した。培養物を37℃、空気中の5% CO2中でインキュベートし、寄生虫血症を毎日の希釈により1%〜12%に維持した。
λZAP−cDNA(登録商標)Synthesis Kit(Stratagene)を該製造業者の指示に従い使用して、5μgのバベシア・ボビス(B.bovis)mRNAからcDNAライブラリーを構築した。0.5〜4kbのcDNA断片をセファロースCL4Bカラム上のゲル濾過により集め、λuniZAP−XR ExpressベクターのEcoRI/XhoI部位内に連結した。Giga pack III Goldを使用してファージ粒子のパッケージングを行い、ついで大腸菌(Escherichia coli)XL−1 BlueMRF’細胞の形質転換を行った。1.2×106個のプラークを得、その増幅ライブラリーを作製した。
PCRにより作製した特異的プローブで、BIIA1およびBIIA2の遺伝子のクローンを単離するために、該バベシア・ボビス(B.bovis)ゲノムライブラリーおよびcDNAライブラリーをスクリーニングした。使用した特異的プライマーは以下のとおりであった:
BIIA1遺伝子の場合:
BIIA1およびBIIA2のクローンをpCR2.1クローニングプラスミドからPCRによりサブクローニングした。
BIIA1およびBIIA2遺伝子を完全に配列決定した後、試験動物の免疫化による特異的ポリクローナル抗体の誘導のために、コンピューター翻訳配列からペプチドを選択した。
抗体応答をELISAにより評価した。96ウェルマイクロタイタープレートを1ウェル当たり150ngのペプチド1またはペプチド2でコートし、37℃で30分間インキュベートし、PBS/BSAで1時間ブロッキングした。個々のウサギ血清の連続希釈物(1:50〜1:50,000)を37℃で1時間インキュベートした。該プレートを洗浄し、1:2000希釈ブタ抗ウサギHRP結合二次抗体を1時間インキュベートした。該プレートを洗浄し、ABTS[2,2’−アジノビス(3−エチルベンズチアゾリンスルホン酸)]−ペルオキシダーゼ基質(Roche biochemicals)で45分間現像した。OD405を記録し、比較ELISA力価を計算した。
BIIA1およびBIIA2からのペプチドに対する抗血清によるバベシア・ボビス(B.bovis)メロゾイトの認識を間接免疫蛍光アッセイ(IFA)により試験した。薄い血液塗抹標本を冷却メタノールで固定した。ポリクローナルウサギ抗BIIA1(1:40)またはポリクローナルマウス抗BIIA1(1:5〜1:160)の存在下の30分間の一次インキュベーションの後、5分間の3回の洗浄工程を行った。スライドを1:80ヤギ抗ウサギ免疫グロブリンG(IgG)フルオレセインイソチオシアナート標識抗体(Nordic)と共に30分間インキュベートした。該スライドを再び洗浄し、Vectashield(登録商標)溶液(Vector laboratories)を適用し、対象をカバーグラスで覆い、FITCフィルター(450〜480/515〜565nm)を伴うUV蛍光顕微鏡上で可視化した。1:5に希釈された陰性免疫前血清と比較して、該寄生虫の陽性認識を伴う最終血清希釈度として、IFA力価を測定した。
インビトロ侵入のために前記のとおりに調製したメロゾイトのサンプル800μlを1.2μM ポリプロピレンプレフィルター(Millipore,AN1202500)上の濾過により赤血球ゴーストから部分的に分離した。濾過されたメロゾイトをプールし、25mM 炭酸水素ナトリウムを含有する20容量のPBS(pH8.0)中で2回洗浄し、ついで2000g、4℃で20分間遠心分離した。2回目の洗浄の後、ペレットを等容量のPBS(pH8.0)に再懸濁させ、200μlのアリコートに分割し、これらを遠心分離(10,000×g、4℃で5分間)し、上清除去後、100μlの細胞ペレット(2×109 メロゾイト)として−20℃で保存した。凍結したメロゾイトペレットを使用直前に解凍し、細胞溶解し、還元し、アルキル化し(Proteoprep(登録商標)膜抽出キット(Sigma)を該製造業者の指示に従い使用することにより行った)、最終的に、SDS−ポリアクリルアミドゲルまたは等電点電気泳動(IEF)ストリップへの直接適用に適した1.7mlのバッファー中に得た。不溶性物質を16,000×g、4℃で3分間の遠心分離により除去した。タンパク質濃度をブラッドフォード法(Anal.Biochem.1976,vol.72,p.248−254)により測定した。該抽出物は相当な量の赤血球タンパク質を含有していたため、未感染赤血球の培養から開始すること以外は同じ方法で対照抽出物を調製した。
タンパク質をβ−メルカプトエタノールの存在下または非存在下で分解(resolve)し、10% SDS−PAGE上で分離し、Immobilon(商標)−Pメンブレン(Millipore)に電気泳動的にトランスファーした。該ブロットを、0.5% Tween(登録商標)20を含有するリン酸緩衝食塩水(PBST)中で希釈された5% 脱脂乳で37℃で1時間ブロッキングした。PBST中の2% 脱脂乳中の一次抗体の適当な希釈物(1:500)を1時間一晩インキュベートした。該ブロットをPBSTで洗浄し、ついで抗ウサギホースラディッシュペルオキシダーゼ(HRP)結合二次抗体(DAKO)の1:10,000希釈物と共に37℃で1時間インキュベートした。該ブロットを、PBSTで洗浄した後、TMB MB基質キット(Lucron Bioproducts BV;KPL 50−77−00)または増強化学発光(ECL)+(Amersham;RPN2132)で現像した。
全メロゾイト抽出物、侵入上清およびBIIA1タンパク質サンプルを再水和溶液(7M 尿素,2M チオ尿素,4% CHAPS,2% 担体両性電解質混合物 pH4−7NL(IPGバッファーおよび20mM DTT))に再懸濁させた。担体両性電解質混合物pH3−10NLを使用して、BIIA2タンパク質サンプルを一次元で分離した。特に示さない限り、使用したIEF装置、IPGゲルおよび試薬はAmersham Biosciencesからのものであった。35μgの全メロゾイトタンパク質または35μgの侵入上清およびプロテアーゼインヒビター(Complete,Roche)を7cmのストリップ(pH4−7NL)上にローディングした。13cmのストリップには、150μgの全メロゾイトタンパク質または150μgの侵入上清をローディングした。ストリップを再水和(10〜14時間)させ、自動運転[300Vで1分間、90分間(この間に3500Vまで電圧を上昇させる)、ついで3500Vで連続的フォーカシング、合計35〜40kVh、IPGPhor(商標)上]で一晩(14〜17時間)フォーカシングを行った。
既に記載されている方法(Fransenら 2003,Microbes Infect.vol.5,p.365−372)に若干の変更を加えた方法により、侵襲(侵入)を行った。6〜8% 寄生虫血症のバベシア・ボビス(B.bovis)感染赤血球を2000×g、15℃で10分間遠心分離し、等容量のVyMsバッファー(Vega & Martinez,Fransen,前掲を参照されたい)に再懸濁させた。パルスコントローラーと共にBioRad Gene Pulser(登録商標)を使用して、800μlのサンプルを、4mm BioRadキュベット(165−2088)中、5個の間欠(パルス間に10秒、0℃)高電圧パルス(2.5kV、200Ω、25μF)に付した。
前記のとおりに高電圧パルスにより放出され25mM 炭酸水素ナトリウム含有PBS(pH8.0)に再懸濁された200μlのバベシア・ボビス(B.bovis)メロゾイトを40μlのウサギ抗血清と共に20℃で1時間インキュベートした。1時間後、960μlの懸濁ウシ赤血球(空気中のCO2中、37℃で30分間プレインキュベートした、25mM 炭酸水素ナトリウムを含有するPBS(pH8.0)中の6.25% PCV)を加え、1時間のインキュベーションを行い、ついでギームザ染色スライドを調製し、計数して侵入レベルを測定した。使用したウサギ抗血清は、BIIA2およびBIA2アミノ酸配列に由来する合成ペプチドに対して産生させたものであり、対照血清は、無関係な対照ペプチド(YAGRLFSKRTAATAYKLQ)に対して産生させたものであった。ペプチドは、免疫化の前にキーホールリンペットヘモシアニン(KLH)に連結されていた。免疫前血清も該試験に含めた。
1.2.1.BIIA1およびBIIA2をコードする完全長cDNAの同定およびクローニング
PCRプローブ(BIIA1に関しては350bpおよびBIIA2に関しては450bp)でのバベシア・ボビス(B.bovis)cDNAライブラリーのプロービングは、BIIA1に関しては2181bpおよびBIIA2に関しては2385bpのcDNAのクローニングおよび配列決定をもたらした。どちらもオープンリーディングフレームと、ポリA尾部で終結する3’非コード領域とを含有していた。完全長mRNAの5’キャップ化末端を決定するために、全mRNAを脱リン酸化し、ついで5’キャップ(これは無傷のまま残っている)をタバコ酸ピロホスファターゼにより除去し、ついで特異的RNAオリゴヌクレオチドの連結を行った。ついで第1鎖cDNA上のネスティッドPCRは、BIIA1およびBIIA2に関するバベシア・ボビスmRNAの5’末端に相当する断片のクローニングおよび配列決定を可能にした。
BIIAタンパク質に関する更なる研究を可能にするために、ウサギをKLH結合合成ペプチド1−6(前掲)で免疫した。すべての抗血清は、チオレドキシンと、大腸菌(E.coli)BL21細胞内で発現されたBIIAタンパク質の部分との組換え融合産物を特異的に認識した(図1および2)。IPTGでの誘導の前(レーン1)および後(レーン2)の全細胞ライセートのポリアクリルアミドゲル電気泳動は、BIIA1およびBIIA2に関する組換え融合産物を同定した。Rec BIIA1およびBIIA2は共に、免疫ブロット上で全3個の免疫血清によっては認識されるが(レーン、5、8、11)、免疫前血清(レーン6,9,12)によっては認識されない。免疫認識は対照タンパク質としての該融合産物のBIIA部分には特異的であった。PET32aにおいて発現されたバベシア・ボビスrab5(レーン3、Asp−5〜Lys−208,GenBankアクセッション番号324137.1)の組換え融合産物はこれらの血清によっては認識されなかった(レーン7、10、13)。また、免疫認識はペプチド特異的であり、BIIA1にもBIIA2にも無関係なKLH結合合成ペプチドに対して産生した抗血清としての免疫化に使用したKLH担体タンパク質により誘導された抗体はBIIA1組換え融合産物を認識しなかった(レーン13)。
寄生虫内のBIIAタンパク質を局在化するために、BIIA1およびBIIA2の6個のKLH結合ペプチドに対するウサギ抗血清を使用する免疫蛍光研究を、メタノール固定によりガラススライドに付着したバベシア・ボビス(B.bovis)インビトロ培養上で行った(図3および4)。免疫前血清(パネルA、C、E)の存在下のインキュベーションは、感染赤血球および未感染赤血球に由来するかすかな蛍光のバックグラウンドシグナルを超えるいずれの特異的寄生虫染色をも与えなかった。これとは対照的に、免疫血清は、検査したいずれの顕微鏡視野においても、寄生虫の特異的染色を与えた(パネルB、D、F)。蛍光寄生虫は1:5の希釈度の全3個のペプチドに対する抗血清で検出可能であった。赤血球内バベシア・ボビス寄生虫および遊離メロゾイトは小さい(±1×2μm)が、最大倍率は染色パターンの明瞭な可視化を可能にした。
1時間の時間範囲内の無タンパク質バッファー中の遊離メロゾイトによる赤血球への侵入の研究を可能にするバベシア・ボビス(B.bovis)インビトロ侵入アッセイを用いて、BIIA1およびBIIA2の異なるドメインに由来する6個のペプチドに対する抗血清の効果を評価した。抗ペプチド抗血清と共に、および無関係なペプチドに対する対照血清と共に、遊離メロゾイトを20℃で1時間プレインキュベートし、ついで赤血球の添加により侵入を開始させた。BIIAペプチドに対するすべての抗血清は侵入の有意な抑制を引き起こしたが、免疫前血清および対照抗血清は侵入効率に対する有意な効果を示さなかった(図5および6)。BIIA1に関しては、ペプチド1に対する抗血清により、最強の効果(65±10%の侵入抑制)が観察された。BIIA2に関しては、ペプチド4に対する抗血清により、最強の効果(70±10%の侵入抑制)が観察された。
BIIA1およびBIIA2が赤血球への侵入中に可溶性タンパク質として媒体内に露出されるようになり、したがって、前記のSPAの一部を構成するのかどうかを判定するために、侵入上清の免疫ブロット法を行った。BIIA1およびBIIA2を二次元免疫ブロット上で局在化した。50μgの濃縮侵入上清を等電点電気泳動およびそれに続くSDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動により分離した。タンパク質をPVDFメンブレン上にブロットした。切り出したメンブレン部分(45〜90kDa)をペプチド1または3に対する抗BIIA1ペプチド抗血清と共に(図7、それぞれパネルAおよびC)、およびペプチド4および6に対する抗BIIAペプチド抗血清と共に(図8、それぞれパネルAおよびC)インキュベートした。どちらのタンパク質に関しても、ペプチド1および4に対する抗体は同一特異的スポットに結合し(矢印)、それに加えて、対照ブロット上にも存在するタンパク質の特異的染色に結合した。これらは、同一条件下であるがメロゾイトの非存在下で調製した未感染赤血球(RBC)の上清から調製されたものであった(図7および8、パネルBおよびD)。ついで、免疫ブロット法により局在化されたスポットを、侵入前に35S−Metで代謝標識した寄生虫を使用する平行実験から得た類似サンプルの銀染色二次元タンパク質ゲルと符合させた。図9は、赤血球タンパク質としてバベシア・ボビスのタンパク質のみを示すフィルムへの露出後に得たパターンが標識を含んでいないことを示す。イメージングソフトウェアを使用することにより、抗BIIA1ペプチド抗血清での免疫ブロット法により検出されたスポットを、オートラジオグラフ上および銀染色ゲル上の±70kDaのスポットの列に符合させることが可能であった(図9の矢印を参照されたい)。BIIA2は、弱い強度のスポットにより表され、このことは、該天然タンパク質の存在量がより少ないことを示している。
第1.1.2節に記載されているバベシア・ボビス(B.bovis)からの全増幅DNAをBIIA3遺伝子に関して以下のプライマーでスクリーニングした。
第1.1.4節に記載されているとおりに、BIIA1、BIIA2およびBIIA3の組換え発現産物を大腸菌(E.coli)内で作製した。細菌をペレット化し、6M グアニジニウムHCl中で可溶化した。全細胞ライセートを9000rpmで10分間遠心分離し、可溶性ライセートをGuHCL中のNi−NTAアガロースの懸濁物に結合させた。ビーズを8M 尿素で3回洗浄し、ついで特異的抗原を3M 尿素中の250mM イミダゾールで溶出した。
Claims (20)
- 配列番号2または4に示すアミノ酸配列に対して少なくとも70%の類似性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とするピロプラスミド(Piroplasmid)タンパク質または該タンパク質の免疫原性断片。
- 配列番号6または8に示すアミノ酸配列に対して少なくとも70%の類似性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とするピロプラスミド(Piroplasmid)タンパク質または該タンパク質の免疫原性断片。
- 配列番号10に示すアミノ酸配列に対して少なくとも70%の類似性を有するアミノ酸配列を含むことを特徴とするピロプラスミド(Piroplasmid)タンパク質または該タンパク質の免疫原性断片。
- 請求項1に記載のタンパク質または該タンパク質の免疫原性断片をコードすることを特徴とする核酸。
- 請求項2に記載のタンパク質または該タンパク質の免疫原性断片をコードすることを特徴とする核酸。
- 請求項3に記載のタンパク質または該タンパク質の免疫原性断片をコードすることを特徴とする核酸。
- 請求項4〜6のうち1つ以上の項に記載の核酸を含んでなるcDNA断片。
- 請求項4〜6のうち1つ以上の項に記載の核酸または請求項7に記載のcDNA断片(該核酸または該cDNA断片は、機能的に連結されたプロモーターの制御下にある)を含んでなる組換えDNA分子。
- 請求項4〜6のうち1つ以上の項に記載の核酸、請求項7に記載のcDNA断片(該核酸または該cDNA断片は、機能的に連結されたプロモーターの制御下にある)または請求項8に記載の組換えDNA分子を含んでなる生組換えキャリアー。
- 請求項4〜6のうち1つ以上の項に記載の核酸、請求項7に記載のcDNA断片(該核酸または該cDNA断片は、機能的に連結されたプロモーターの制御下にある)、請求項8に記載の組換えDNA分子または請求項9に記載の生組換えキャリアーを含んでなる宿主細胞。
- 請求項1〜3のうち1つ以上の項に記載のタンパク質もしくは該タンパク質の免疫原性断片、請求項4〜6のうち1つ以上の項に記載の核酸、請求項7に記載のcDNA断片、請求項8に記載の組換えDNA分子、請求項9に記載の生組換えキャリアーまたは請求項10に記載の宿主細胞またはそれらの組合せと製薬上許容される担体とを含んでなるワクチン。
- アジュバントを含む、請求項11に記載のワクチン。
- 追加的免疫活性成分または該追加的免疫活性成分をコードする核酸を含む、請求項11〜12のうち1つ以上の項に記載のワクチン。
- 請求項1〜3のうち1つ以上の項に記載のタンパク質に対する抗体もしくは該タンパク質の免疫原性断片に対する抗体またはそれらの組合せと製薬上許容される担体とを含むことを特徴とするワクチン。
- 請求項1〜3のうち1つ以上の項に記載のタンパク質もしくは該タンパク質の免疫原性断片、請求項4〜6のうち1つ以上の項に記載の核酸、請求項7に記載のcDNA断片、請求項8に記載の組換えDNA分子、請求項9に記載の生組換えキャリアーまたは請求項10に記載の宿主細胞またはそれらの組合せと製薬上許容される担体とを混合することを含んでなる請求項11に記載のワクチンの製造方法。
- ピロプラスミド(Piroplasmid)生物により引き起こされる感染またはその臨床的徴候の予防または治療のためのワクチンの製造のための、請求項1〜3のうち1つ以上の項に記載のタンパク質または該タンパク質の免疫原性断片の使用。
- ピロプラスミド(Piroplasmid)生物により引き起こされる感染またはその臨床的徴候の予防または治療のためのワクチンの製造のための、請求項4〜6のうち1つ以上の項に記載の核酸、請求項7に記載のcDNA断片、請求項8に記載の組換えDNA分子、請求項9に記載の生組換えキャリアーまたは請求項10に記載の宿主細胞の使用。
- 配列番号1、3、5、7または9に示す核酸配列に対して少なくとも70%類似している核酸または該核酸に相補的な核酸を含んでなり、該核酸のいずれかが少なくとも15ヌクレオチドの長さを有することを特徴とする、ピロプラスミド(Piroplasmid)生物に関連した核酸の検出のための診断試験。
- 請求項1〜3のうち1つ以上の項に記載のタンパク質もしくは該タンパク質の免疫原性断片またはそれらの組合せを含むことを特徴とする、ピロプラスミド(Piroplasmid)生物に対する抗体の検出のための診断試験。
- 請求項1〜3のうち1つ以上の項に記載のタンパク質に対する抗体もしくは該タンパク質の免疫原性断片に対する抗体またはそれらの組合せを含むことを特徴とする、ピロプラスミド(Piroplasmid)生物からの抗原性物質の検出のための診断試験。
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