JP5707683B2 - 試料分析チップ、これを用いた試料分析装置及び試料分析装置、並びに遺伝子解析方法 - Google Patents
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Description
また請求項2に係る発明は、熱溶融性物質は、ウェルに固定された試薬を覆うように配置されていることを特徴とする請求項1に記載の試料分析チップである。
また請求項2に係る発明は、熱溶融性物質の融点が、25℃以上80℃以下であることを特徴とする請求項1に記載の試料分析チップである。
また請求項3に係る発明は、熱溶融性物質の溶解時の比重が、ウェルに注入する溶液よりも軽いことを特徴とする請求項1又は2のいずれかに記載の試料分析チップである。
また請求項4に係る発明は、試料分析チップは前記ウェル及び前記流路を形成した第一の基材と、該基材と貼り合わせた第二の基材とを有する請求項1〜3のいずれかに記載の試料分析チップである。
また請求項5に係る発明は、基材の少なくともいずれか一方が光透過性材料で形成されていることを特徴とする請求項4に記載の試料分析チップである。
また請求項6に係る発明は、第一の基材が光透過性の樹脂材料であり、第二の基材が金属材料であることを特徴とする請求項5に記載の試料分析チップである。
また請求項7に係る発明は、請求項1〜6のいずれかに記載の試料分析チップを設置し、回転させる手段と、ウェルでの反応を検出するための検出測定手段と、を有する試料分析装置である。
また請求項8に係る発明は、請求項1ないし7のいずれかに記載の試料分析チップの前記液溜め部に溶液を注入する工程と、試料分析チップを回転させて溶液を前記各ウェルに配液する工程と、試料分析チップを加熱して前記熱溶融性物質を溶融させた状態で、該試料分析チップを回転させる工程とを有する試料分析方法である。
また請求項9に係る発明は、前記試料分析チップを回転させて溶液を前記各ウェルに配液する工程の後、溶液よりも比重の軽いオイルを試料分析チップに注入し、該試料分析チップを回転させる工程を有することを特徴とする請求項8に記載の試料分析方法である。
また請求項10に係る発明は、請求項8又は9に記載の試料分析方法を用いたことを特徴とする遺伝子解析方法である。
また請求項11に係る発明は、試料分析チップ内でPCR反応させる工程を含み、該工程を試料分析チップを回転させながら行なうことを特徴とする請求項10に記載の遺伝子解析方法である。
図1(A)及び(B)は本発明の試料分析チップの様態を示した平面図である。本発明のチップは、基材101上に複数のウェル102と、ウェルに溶液、例えば液体試料(溶液)を送液するための流路を有している。そして、ウェルの少なくとも一つには熱溶融性物質502が配置されている。
本発明の試料分析チップはウェル及び流路(液溜め部106及び支流路105を含む)を形成した第一の基材401に、第二の基材402を貼り合わせることで作製することができる。第一の基材及び第二の基材の少なくとも一方には試料分析装置の具備するチップ回転機構によってチップを回転させるための回転手段として、例えばチップ回転機構に固定するための担持部405を有する。また注入口及び空気の脱出口を兼ねた出口(INLET/OUTLET)のための貫通孔を第一の基材及び第二の基材の一方に、少なくとも一つ形成する。貫通孔は基材を貼り合わせたときに液溜め部106内所定の位置に一致するようにする。以下では、説明の便宜上、蛍光反応等を検出、測定する際に測定する面に位置する基材側を「上側」、下側に位置する側を「下側」とする。
性、強度を確保でき、凹部の加工を確実に行うことができる。
ヒトゲノムの中には、その約0.1%に個人特有の塩基配列の違いが存在し、SNP(Single Nucleotide Polymorphism)と呼ばれおり、生殖細胞変異のひとつである。SNPの特定方法の一つとして、例えば蛍光を用いたPCR‐PHFA(PCR−Preferential Homoduplex Formation Assay)法が利用されている。PCR‐PHFA法は検出変異部位を増幅するPCR工程と、増幅断片と対応プローブによる競合的鎖置換反応工程から成り立っている。当該方法によれば、蛍光試薬の発光差によって変異を検出するが、本発明の試料分析チップを用いることで、各ウェルの配液バラツキが少ないため、正確なSNPs検出を行うことが出来る。また上記以外のSNP検出方法としてインベーダー法(登録商標)、Taqman PCR法等についても同様に本発明の試料分析チップを用いることが可能である。
上がん細胞に特徴的な変異、また分子標的薬に抵抗性を示す変異はそのほとんどが体細胞変異である.生殖細胞変異(SNPなど)の場合、どの細胞でも共通の変異が見られるのに対し、体細胞変異では変異を起こした細胞でのみ変異がみられ、変異を起こしていない細胞(通常は正常細胞)では変異は見られない.
102・・・ウェル
103・・・主流路
105・・・支流路
106・・・液溜め部
107・・・注入口/出口
201・・・山部
202・・・谷部
301・・・溶液
401・・・第一の基材
402・・・第二の基材
403・・・注入口/出口(貫通孔)
405・・・担持部
501・・・固定試薬類
502・・・熱溶融性物質
Claims (11)
- 基材に複数のウェルと、主流路、前記主流路から分岐し各ウェルに繋がる支流路と、前記主流路に溶液を注入するための注入口とを有し、該基材を回転させてウェルに溶液を配液する試料分析チップであって、
当該チップの回転中心側から、前記主流路、前記支流路、前記ウェルの順に配置され、前記ウェルが当該チップの回転中心側から最も遠い円周上に配置され、前記ウェルからさらに円周の外側に開口がなく、
前記主流路が、前記支流路と当該チップの回転中心側の間で蛇行して配設され、
当該チップの回転中心から最も遠い点で、前記蛇行した主流路(谷部)から前記支流路が分岐し、
前記谷部と、前記支流路の分岐点の両側の当該チップ回転中心側に蛇行する前記主流路(山部)で液溜め部を形成し、
前記液溜め部によって、支流路およびウェルへの送液量が規定され、
前記ウェルの少なくとも一つには、熱溶融性物質が配置されており、
前記熱溶融性物質は、ウェルに固定された試薬を覆うように配置されている
ことを特徴とする試料分析チップ。 - 前記熱溶融性物質の融点が、25℃以上80℃以下であることを特徴とする請求項1に記載の試料分析チップ。
- 前記熱溶融性物質の溶解時の比重が、ウェルに注入する溶液よりも軽いことを特徴とする請求項1又は2のいずれかに記載の試料分析チップ。
- 前記試料分析チップは前記ウェル及び前記流路を形成した第一の基材と、該基材と貼り合わせた第二の基材とを有する請求項1〜3のいずれかに記載の試料分析チップ。
- 前記基材の少なくともいずれか一方が光透過性材料で形成されていることを特徴とする請求項4に記載の試料分析チップ。
- 第一の基材が光透過性の樹脂材料であり、第二の基材が金属材料であることを特徴とする請求項5に記載の試料分析チップ。
- 請求項1〜6のいずれかに記載の試料分析チップを設置し、回転させる手段と、
前記ウェルでの反応を検出するための検出測定手段と、を有する試料分析装置。 - 請求項1ないし7のいずれかに記載の試料分析チップの前記液溜め部に溶液を注入する工程と、
試料分析チップを回転させて溶液を前記各ウェルに配液する工程と、
試料分析チップを加熱して前記熱溶融性物質を溶融させた状態で、該試料分析チップを回転させる工程と、
を有する試料分析方法。 - 前記試料分析チップを回転させて溶液を前記各ウェルに配液する工程の後、溶液よりも比重の軽いオイルを試料分析チップに注入し、該試料分析チップを回転させる工程を有することを特徴とする請求項8に記載の試料分析方法。
- 請求項8又は9に記載の試料分析方法を用いたことを特徴とする遺伝子解析方法。
- 前記試料分析チップ内でPCR反応させる工程を含み、該工程を試料分析チップを回転させながら行なうことを特徴とする請求項10に記載の遺伝子解析方法。
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