JP5683603B2 - Ebウィルスにより誘発される腫瘍に対する融合ポリペプチドとコリシンia変異体 - Google Patents
Ebウィルスにより誘発される腫瘍に対する融合ポリペプチドとコリシンia変異体 Download PDFInfo
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Description
変異体コリシンIaをコードする遺伝子を含む組換えプラスミドの構築。
元のベクターは、プラスミドpSELECTTM‐1(8.3kb)(プロメガ社から購入)であり、これは、コリシンIaおよび免疫タンパク質の遺伝子を有する。変異体アミノ酸をコードする配列番号1〜10に示されているオリゴヌクレオチドプライマーの配列を、それぞれ、二本鎖オリゴヌクレオチド部位特異的突然変異誘発技術(QuickChangeTMキット、Strategene社)により、野生型コリシンIaの遺伝子へと機能可能に連結し、コリシンIaの変異ポリペプチドをコードする配列番号23に示されている遺伝子、および、変異体プラスミド、を得る。その後、この変異体プラスミドに、配列番号26または配列番号28の遺伝子を、コリシンIaの変異ポリペプチドの遺伝子のI626のコドンの後に挿入し、EBウィルスが原因である腫瘍に対する新規ポリペプチドのための、2種類の組換えプラスミドpCHCEB11(図1に示されている)およびpCHCEB22(図2に示されている)を得る。組換えプラスミド中の、EBウィルスに対する抗体をコードする遺伝子の調製のために設計された6対のオリゴヌクレオチドプライマーの配列が配列番号11〜22に示されている。前記組換えプラスミドを、大腸菌BL21(DE3)(ノバジェン社から購入)という改変細菌中へとトランスフェクションし、ポリペプチドを調製する。得られるポリペプチドは、配列表の、配列番号29(以下、「新規抗腫瘍ポリペプチド1」という)および配列番号31(以下、「新規抗腫瘍ポリペプチド2」という)に示されたものである。
1. 部位特異的突然変異誘発のための反応物の調製:
5μlの10×緩衝液
2μl(10ng)の、コリシンIaの野生型のポリペプチドの遺伝子および免疫タンパク質の遺伝子を有する元のプラスミドpSELECTTM‐1。
1.25μl(125ng)の、設計された5’‐3’オリゴヌクレオチドプライマー
1.25μl(125ng)の、設計された3’‐5’オリゴヌクレオチドプライマー
1μlのdNTP
再蒸留水50μl
1μl pfu
(プラスミド、プライマーおよび再蒸留水以外は、前記キットにより提供されるものである)
2. PCR増幅、増幅条件:95℃で35秒間の変性、53℃で70秒間のアニール、および68℃で17分間の伸長、を25サイクル;
3. 1μlのエンドヌクレアーゼDpn1を加えて、親DNA鎖を消化(37℃、1時間)し、1μlの反応物と50μlのXL1‐Blueコンピテント細胞とを、共に、氷上で30分間インキュベートし、42℃での45秒間のヒートショックの後に、氷中で2分間インキュベートする;
4. 0.5mlの培養培地NZYを加え、37℃および220rpmにて1時間振盪する。50〜100μlの反応物をまく(1%寒天および50μg/mlアンピシリンを加えたLB培地、37℃で一晩);
5. 18時間後にコロニーをピックアップする。プラスミドを抽出し、配列決定を行い、変異が成功していることを確認する;
6. 複数の部位における変異によって最終的に得られた50ngの組換えプラスミドを、40μlの大腸菌BL‐21(DE3)コンピテント細胞と共に氷上で5分間インキュベートし、42℃で30秒間ヒートショックを与え、氷中で2分間インキュベートする。ノバジェン社からの160μlの培養培地SOCを加え、37℃および220rpmにて1時間振盪した後にまく(1%寒天および50μg/mlアンピシリンを加えたLB培地、37℃で一晩)。
7. 増幅のためにシングルコロニーをピックアップし、8〜16リットルFB培地、250rpm、30℃で4〜5時間とし、42℃でヒートショックを与え、250rpmにて30分間、37℃にて2時間。細菌を、6000gおよび4℃での20分間の遠心分離により沈殿させる。4℃の50mMホウ酸緩衝液(2mM EDTA+2mM DTT)および50〜80mlの細菌懸濁液は、250mlの0.2M PMSFを加え、超音波処理により処理する(4℃、400W、2分)。細菌破砕物(debris)を高速遠心分離する(4℃、75,000g、90分)。その上清には、500万単位の硫酸ストレプトマイシンを加え、DNAを沈殿させる。15000gおよび4℃での10分間の遠心分離による沈殿の後、その上清を、4℃にて、50mMホウ酸緩衝液中、分子量15,000の透析バッグ中で一晩透析する。再び15000gおよび4℃での10分間の遠心分離による沈殿の後、その上清を、CMイオン交換カラムにロードする。このカラムを、0.1〜0.3M NaCl+50mMホウ酸緩衝液の勾配を用いて溶出し、組換え抗腫瘍ポリペプチドを得る。
cgt att aca aat ccc GCA gca gaa tcg ctg ggg
配列番号2、コリシンの遺伝子におけるG11Aの変異のために設計されたオリゴヌクレオチドプライマー3’‐5’:
ccc cag cga ttc tgc TGC ggg att tgt aat acg
配列番号3、コリシンの遺伝子におけるH22Gの変異のために設計されたオリゴヌクレオチドプライマー5’‐3’:
gat tca gat ggc GGT aaa tta tgg gtg
配列番号4、コリシンの遺伝子におけるH22Gの変異のために設計されたオリゴヌクレオチドプライマー3’‐5’:
cac cca taa ttt ACC gcc atc tga atc
配列番号5、コリシンの遺伝子におけるA26Gの変異のために設計されたオリゴヌクレオチドプライマー5’‐3’:
gaaa ttatgGGTgt tgatatttat
配列番号6、コリシンの遺伝子におけるA26Gの変異のために設計されたオリゴヌクレオチドプライマー3’‐5’:
ataaatatacaacACCcataatttc
配列番号7、コリシンの遺伝子におけるV31Lの変異のために設計されたオリゴヌクレオチドプライマー5’‐3’:
gt tgatatttat CTC aaccctc cacgtgtc
配列番号8、コリシンの遺伝子におけるV31Lの変異のために設計されたオリゴヌクレオチドプライマー3’‐5’:
gacacgtggagggttGAGataaatatcaac
配列番号9、コリシンの遺伝子におけるH40Dの変異のために設計されたオリゴヌクレオチドプライマー5’‐3’:
cgtgtcga tgtctttGATggtaccccgc ctgcat
配列番号10、コリシンの遺伝子におけるH40Dの変異のために設計されたオリゴヌクレオチドプライマー3’‐5’:
atgcaggcggggtaccATCaaagacatcgacacg
gcg aat aag ttc tgg ggt att TCC TTC GGT ATG CAT TGG GTG CGTCAGtaa ata aaa tat aag aca ggc
配列番号12、組換えプラスミドpCHCEB11中のVHCDR1の遺伝子のためのプライマー3’‐5’:
gcc tgt ctt ata ttt tat tta CTG ACG CAC CCA ATG CAT ACC GAA GGA aat acc cca gaa ctt att cgc
配列番号13、組換えプラスミドpCHCEB11中のVHFR2の遺伝子のためのプライマー5’‐3’:
ggt atg cat tgg gtg cgt cag GCC CCC GAG AAA GGT CTG GAG TGG GTG GCC taa ata aaa tat aag aca ggc
配列番号14、組換えプラスミドpCHCEB11中のVHFR2の遺伝子のためのプライマー3’‐5’:
gcc tgt ctt ata ttt tat tta GGC CAC CCA CTC CAG ACCT TTT CTC GGG GGC ctg acg cac cca atg cat acc
配列番号15、組換えプラスミドpCHCEB11中の(Rev)VlCDR3の遺伝子のためのプライマー5’‐3’:
aaa ggt ctg gag tgg gtg gcc ACC TAC CCC TAC TCC TAC GGT CAG GGT taa ata aaa tat aag aca ggc
配列番号16、組換えプラスミドpCHCEB11中の(Rev)VLCDR3の遺伝子のためのプライマー3’‐5’:
gcc tgt ctt ata ttt tat tta ACC CTG ACC GTA GGA GTA GGG GGT ggc cac cca ctc cag acc ttt
配列番号17、組換えプラスミドpCHCEB22中のVHCDR1の遺伝子のためのプライマー5’‐3’:
gcg aat aag ttc tgg ggt att TCC TTC GGT ATG CAT TGG GTG CGT CAG taa ata aaa tat aag aca ggc
配列番号18、組換えプラスミドpCHCEB22中のVHCDR1の遺伝子のためのプライマー3’‐5’:
gcc tgt ctt ata ttt tat tta CTG ACG CAC CCA ATG CAT ACC GAA GGA aat acc cca gaa ctt att cgc
配列番号19、組換えプラスミドpCHCEB22中のVHFR2の遺伝子のためのプライマー5’‐3’:
ggt atg cat tgg gtg cgt cag GCC CCC GAG AAA GGT CTG GAG TGG GTG GCC taa ataaaa tat aag aca ggc
配列番号20、組換えプラスミドpCHCEB22中のVHFR2の遺伝子のためのプライマー3’‐5’:
gcc tgt ctt ata ttt tat tta GGC CAC CCA CTC CAG ACCT TTT CTC GGG GGC ctg acg cac cca atg cat acc
配列番号21、組換えプラスミドpCHCEB22中のVLCDR3の遺伝子のためのプライマー5’‐3’:
aaa ggt ctg gag tgg gtg gcc GGT CAG GGT TAC TCC TAC CCC TAC ACC taa ata aaa tat aag aca ggc
配列番号22、組換えプラスミドpCHCEB22中のVLCDR3の遺伝子のためのプライマー3’‐5’:
gcc tgt ctt ata ttt tat tta GGT GTA GGG GTA GGA GTA ACC CTG ACC ggc cac cca ctc cag acc ttt
組換えプラスミドpCHCEB11およびpCHCEB22から調製した新規抗腫瘍ポリペプチドの免疫効果の観察。
実施例1において得られた組換えプラスミドpCHCEB11およびpCHCEB22から調製した新規抗腫瘍ポリペプチド1および新規抗腫瘍ポリペプチド2、ならびに、発明者が所有する、先の発明(ZL200410081446.8)からの抗腫瘍ポリペプチド1および抗腫瘍ポリペプチド2、により、マウスを免疫する。上述の各タンパク質をアジュバントと混合する。プライミング投与量およびブースト投与量は、各マウスにつき50μg(0.5ml)の1回の腹腔内注射、2週間の間隔をあけて合計5回の注射、である。血清力価は、間接ELISA法により決定する。本発明により調製した新規抗腫瘍ポリペプチド1および2により免疫したマウスの力価は、10−3〜10−4の範囲であり、一方、抗腫瘍ポリペプチド1および抗腫瘍ポリペプチド2により免疫したマウスの力価は、10−4〜10−5の範囲である。
本発明の新規抗腫瘍ポリペプチドにより誘発される過敏性反応の可能性は、野生型コリシンIaを含む抗腫瘍ポリペプチドにより誘発される過敏性反応の可能性よりも1桁〜2桁低い、とのことがわかる。
新規抗腫瘍ポリペプチドを形成するコリシンIaの変異ポリペプチドの低感作効果の実験。
実施例1の、コリシンIaの変異ポリペプチドの変異体プラスミド(水溶性チャネルドメインのペプチド鎖において、G11A、H22G、A26G、V31L、およびH40Dのアミノ酸残基に変異を受けている)を、変異ポリペプチドのN末端またはC末端にて、黄色ブドウ球菌のフェロモンAgrD1(YSTCDFIM)に機能可能に連結し、2種類の抗菌ポリペプチドを得る。当該変異体コリシンIaのカルボキシル末端におけるAgrD1の連結により得られるポリペプチドを、黄色ブドウ球菌に対するポリペプチド1と名付け、当該変異体コリシンIaのアミノ末端におけるAgrD1の連結により得られるポリペプチドを、緑膿菌に対するポリペプチド1と名付ける。野生型コリシンIaについてのプラスミドを、アミノ末端にて、黄色ブドウ球菌のフェロモンAgrD1(YSTCDFIM)に連結し、緑膿菌に対するポリペプチド2を得る。
処理方法:
致死量のMRSA(ATCC BAA42)の腹腔内注射の1時間後に:
コントロールグループ:0.5mlの0.3M NaCl+50mMホウ酸緩衝液を、尾静脈を介して1回注射する;
アンピシリンのグループ:2.5mg/kgのアンピシリンを、尾静脈を介して1回注射する;
黄色ブドウ球菌に対するポリペプチドのグループ:6mg/kgの、本発明者が所有する、黄色ブドウ球菌に対するポリペプチド(ZL01128836.1)を、尾静脈を介して1回注射する;
黄色ブドウ球菌に対するポリペプチド1のグループ:6mg/kgの、黄色ブドウ球菌に対するポリペプチド1を、尾静脈を介して1回を注射する;
結果:コントロールグループおよびアンピシリンのグループのマウスは、すべて、2日以内に死亡。黄色ブドウ球菌に対するポリペプチドのグループおよび黄色ブドウ球菌に対するポリペプチド1のグループの85%のマウスは生き残る。
マウスに、致死量の多剤耐性緑膿菌(四川大学華西医院実験医学科からの臨床分離株13578)を腹腔内注射する。1時間の後、
コントロールグループに、0.5mlの0.3M NaCl+50mMホウ酸緩衝液を、尾静脈を介して1回注射する;
レボフロキサシンのグループに、5mg/kgのレボフロキサシンを、尾静脈を介して1回注射する;
セフトリアキソンナトリウムのグループに、30mg/kgのセフトリアキソンナトリウムを、尾静脈を介して1回注射する;
緑膿菌に対するポリペプチド2のグループに、8mg/kgの、緑膿菌に対するポリペプチド2を、尾静脈を介して1回注射する;
緑膿菌に対するポリペプチド1のグループに、8mg/kgの、緑膿菌に対するポリペプチド1を、尾静脈を介して1回注射する。
コントロールグループおよびレボフロキサシンのグループのマウスは、すべて、1日以内に死亡。セフトリアキソンナトリウムのグループの25%のマウスは生き残る。緑膿菌に対するポリペプチド2のグループの60%のマウスは生き残る。緑膿菌に対するポリペプチド1のグループのマウスは、すべて、生き残る。宿主の抗体が、変異ポリペプチドの殺傷効果を、野生型ポリペプチドの殺傷効果よりも低く妨害をすることが示されている。
図3を参照のこと。
EBウィルスが原因であるバーキットリンパ腫に対する新規抗腫瘍ポリペプチドのin vitroにおける殺傷効果。
EBV陽性細胞株およびEBV陰性細胞株は、米国のATCCからの、標準的な細胞株である。
細胞培養:起こしたRaji細胞の懸濁液0.1mlを、ゆっくりと、培養ディッシュ中の3mlの1640液体培地(10%血清を加えたもの)へと加え(希釈率、1:30)、混合し、CO2を含有する37℃インキュベーター中で培養する。当該EBV陽性細胞株は、ATCC CCL‐86(世界中の研究室において使用されている標準的なバーキットリンパ腫細胞。Raji細胞。12歳のアフリカの少年から1963年に単離されたもの)である。
この試験細胞を、3つのグループにグループ分けする。
グループ1は、ブランクのグループであり、抗腫瘍ポリペプチドを含有しない保存液(10mMPB+0.2M NaClリン酸緩衝液(pH7.4))が加えられたものである。
グループ2は、200μg/mlの新規抗腫瘍ポリペプチド1(プラスミドpCHCEB11、保存液、10mMPB+0.2M NaClリン酸緩衝液、pH7.4)が加えられたものである。
グループ3は、200μg/mlの新規抗腫瘍ポリペプチド2(プラスミドpCHCEB22、保存液、10mMPB+0.2M NaClリン酸緩衝液、pH7.4)が加えられたものである。
24時間の培養後、培養ディッシュに、上述の処理剤を加える。これらの処理剤の添加の72時間後、この培養ディッシュに、20μlの100μMolヨウ化プロピジウム(PI)を加え、10分後、この培養ディッシュを顕微鏡下で観察する。その結果が示すのは、ブランクのグループの細胞はよく成長し、新規抗腫瘍ポリペプチド1のグループの細胞の大部分はPIにより赤く染色されるということであり、この抗腫瘍ポリペプチドによって、細胞膜が破壊されることを示しており、これは腫瘍細胞の死を導く。死細胞の数を比較すると、2種類の新規抗腫瘍ポリペプチドのうちで、新規抗腫瘍ポリペプチド2の効果はあまり良くない。図5を参照のこと。
EBウィルスが原因であるバーキットリンパ腫の細胞および他の腫瘍細胞に対する新規抗腫瘍ポリペプチドのin vitroにおける殺傷効果についての多重蛍光染色の観察。
細胞培養の条件は実施例2と同じである。本実験では、次の3種類の細胞株を使用する:EBウィルス陽性細胞株:ATCC CCL‐86(Raji細胞。バーキットリンパ腫細胞);EBウィルスおよびカポジ肉腫ウィルスが陽性の、46歳のAIDS男性患者由来の悪性リンパ肉腫細胞の株である、ATCC CRL‐2230;EBウィルス陰性細胞株:ATCC CRL‐1648(CA‐46。アメリカのバーキットリンパ腫患者の腹水から単離された細胞)。
各株は、2つの試験グループにグループ分けする。グループ1は、新規抗腫瘍ポリペプチドを含有しない保存液(10mMPB+0.2M NaClリン酸緩衝液(pH7.4))が加えられたものである。グループ2は、200μg/mlの新規抗腫瘍ポリペプチド1(プラスミドpCHCEB11)が加えられたものであり、保存液は10mMPB+0.2M NaClリン酸緩衝液、pH7.4である。
24時間の培養後、培養ディッシュに、上述のグループの処理剤を加える。これらの処理剤の添加の72時間後、この培養ディッシュに、2種類の蛍光色素、すなわち、20μlの50μMol FITCと、20μlの50uMol ローダミン123とを加え、10分後、この培養ディッシュを顕微鏡オリンパスIX‐71下で観察する。
その結果、EBV陰性腫瘍細胞の株は、新規抗腫瘍ポリペプチド1の処理後、よく成長すること、及び、EBV陽性腫瘍細胞の株は、いずれの株も、大部分の細胞がミトコンドリアおよび核を消失し、膨張し、ネクローシスを起こし、それらのうちのほとんどが死んでいることを示す。実施例4のPI染色実験と比較すると、明らかに、多重蛍光染色実験からの結果は、EBウィルス陽性腫瘍細胞に対する新規抗腫瘍ポリペプチド1の強力な殺傷効果を、より明確に示しているようである。図6を参照のこと。
EBV陰性腫瘍細胞はよく成長し、当該新規抗腫瘍ポリペプチドは、細胞膜中にEBウィルスの表面抗原を有しない細胞を攻撃しないことを意味する。本発明の新規抗腫瘍ポリペプチドは理想的なターゲティング特異性と安全性とを有している、とのことが示唆される。
EBウィルスが原因であるバーキットリンパ腫の細胞を移植したヌードマウスの体内で成長した固形腫瘍に対する新規抗腫瘍ポリペプチドの殺傷効果。
SCID免疫不全マウスは、中国科学院上海実験動物センターから購入したものである。マウスは、標準飼育要件に従って飼育する。水、敷き藁および飼料は、すべて、高温またはUV光により滅菌する。マウスは、相対的無菌条件下で、1週間飼育し、異常性が全くみとめられない場合に、本接種実験に使用する。
対数期にあるRaji(ATCC CCL‐86)および1648(ATCC CRL‐1648)の細胞の懸濁液を、50mlの遠心管中に集め、4℃で遠心する。次いで、その上清を捨てる。細胞を、1640液体培養培地(仔ウシ血清を加えたもの)に再懸濁して、1.0×107細胞/mlにする。0.1mlのRajiの細胞懸濁液をマウスの左腋窩、また、0.1mlの1648(ATCC CRL‐1648)の細胞懸濁液をマウスの右腋窩に、皮下注射する。
注射の3〜4日後、腫瘍は成長して約2×2mmとなる。腫瘍を有するマウスを、以下のグループに分ける:
(グループA)コントロールグループとしての、抗腫瘍ポリペプチドを含有しない保存液(10mM PBS+0.2M NaClリン酸緩衝液(pH7.4));
(グループB)処理グループとしての、新規抗腫瘍ポリペプチド1(プラスミドpCHCEB11)、300μg/マウス/日(25gとして計算)で20日間連続。
各グループの10匹のマウスに、1日2回、20日間連続で、0.5ml皮下注射する。マウスの挙動は、毎日観察および記録する。腫瘍の大きさについては、2日ごとに測定し、写真撮影する。
その結果(図7参照)は、新規抗腫瘍ポリペプチドのグループBの腫瘍の成長が有意に阻害され、7匹のマウスの腫瘍は消失し、残りの3匹のマウスの腫瘍は、コントロールグループのそれよりも明らかに小さいことを示す。新規抗腫瘍ポリペプチドは、リンパ肉腫のEBV陽性細胞により引き起こされるマウス体内の固形腫瘍の成長を阻害するのに効果的である。しかし、当該新規抗腫瘍ポリペプチドは、リンパ肉腫のEBV陰性細胞により引き起こされるマウス体内の固形腫瘍の成長の阻害には効果がない。
腫瘍消失のin vivo実験の病理学的観察
腫瘍の組織病理学的観察:実施例6の実験の終わりにマウスを屠殺する。腫瘍を抽出し、10%ホルマリン中で固定する。パラフィンスライスを、HE染色し、常用の光学顕微鏡法に基づき観察する。
顕微鏡下で観察すると、コントロールグループのマウス由来の固形腫瘍は活発に増殖しており、;当該新規抗腫瘍ポリペプチドのグループのマウス由来のEBV陽性固形腫瘍の細胞は著しく縮小している。切片中のこれら細胞塊のほとんどは壊死した腫瘍細胞であり、多量の、腫瘍周辺のリンパ球浸潤が観察される。この組織病理学的結果は、20日間の処理の間に、新規抗腫瘍ポリペプチドが、固形腫瘍中の腫瘍細胞をほぼすべて殺傷したことを示唆している(図8、Dを参照のこと)。
Claims (12)
- イオンチャネルを形成することのできるコリシンIaの変異ポリペプチドと、抗EBウィルス抗体のポリペプチドまたは抗EBウィルス抗体模倣物のポリペプチドとの機能可能な連結により形成される、EBウィルスが原因である腫瘍に対する新規ポリペプチドであって、前記イオンチャネルを形成することのできるコリシンIaの変異ポリペプチドが、野生型コリシンIaの、G11A、H22G、A26G、V31L、およびH40Dのアミノ酸残基の変異により得られるものであり、前記抗EBウィルス抗体のポリペプチドのアミノ酸配列が、ATCC HB‐168のハイブリドーマにより分泌されるモノクローナル抗体のポリペプチドと同じである、新規ポリペプチド。
- 前記抗体模倣物のポリペプチドが、抗EBウィルス抗体の、重鎖のCDR1領域と、重鎖のCDR1‐CDR2連結ペプチドセグメントと、軽鎖のCDR3との結合ペプチドである、請求項1に記載の、EBウィルスが原因である腫瘍に対する新規ポリペプチド。
- 前記EBウィルスが原因である腫瘍に対する新規ポリペプチドが、配列番号29に示されるアミノ酸配列を有する、請求項2に記載の、EBウィルスが原因である腫瘍に対する新規ポリペプチド。
- 請求項1〜請求項3のいずれか1項に記載のEBウィルスが原因である腫瘍に対する新規ポリペプチドをコードする遺伝子。
- 配列番号30に示されているヌクレオチド配列を有する、請求項4に記載の遺伝子。
- 請求項4または請求項5に記載の遺伝子を含む組換えプラスミド。
- 請求項1〜請求項3のいずれか1項に記載のEBウィルスが原因である腫瘍に対する新規ポリペプチドの生産方法であって、請求項6に記載の組換えプラスミドを、発現のために発現系へと形質転換する工程、および、発現したポリペプチドを単離する工程、を含む生産方法。
- 請求項1〜請求項3のいずれか1項に記載のEBウィルスが原因である腫瘍に対する新規ポリペプチドの、EBウィルスが原因である腫瘍の治療および予防のための医薬の生産における使用。
- アミノ酸配列が、配列番号24に示されているものである、コリシンIaの変異ポリペプチド。
- 請求項9に記載のコリシンIaの変異ポリペプチドをコードする遺伝子。
- 請求項10に記載の遺伝子の使用であって、前記遺伝子を、前記ペプチドを誘導する遺伝子と機能可能に連結し、発現ベクターにクローニングし、次いで、前記発現ベクターを、発現系に形質転換し、発現したポリペプチドを単離する、ペプチド医薬の生産における、前記遺伝子の使用。
- 請求項1〜請求項3のいずれか1項に記載の新規ポリペプチドを含有する、EBウィルスが原因である腫瘍の治療および予防のための医薬組成物。
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