JP5512548B2 - 走査型イオンコンダクタンス顕微鏡法 - Google Patents
走査型イオンコンダクタンス顕微鏡法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5512548B2 JP5512548B2 JP2010544789A JP2010544789A JP5512548B2 JP 5512548 B2 JP5512548 B2 JP 5512548B2 JP 2010544789 A JP2010544789 A JP 2010544789A JP 2010544789 A JP2010544789 A JP 2010544789A JP 5512548 B2 JP5512548 B2 JP 5512548B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- probe
- measurement
- scanning
- examining
- resolution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01Q—SCANNING-PROBE TECHNIQUES OR APPARATUS; APPLICATIONS OF SCANNING-PROBE TECHNIQUES, e.g. SCANNING PROBE MICROSCOPY [SPM]
- G01Q60/00—Particular types of SPM [Scanning Probe Microscopy] or microscopes; Essential components thereof
- G01Q60/44—SICM [Scanning Ion-Conductance Microscopy] or apparatus therefor, e.g. SICM probes
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y35/00—Methods or apparatus for measurement or analysis of nanostructures
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01Q—SCANNING-PROBE TECHNIQUES OR APPARATUS; APPLICATIONS OF SCANNING-PROBE TECHNIQUES, e.g. SCANNING PROBE MICROSCOPY [SPM]
- G01Q10/00—Scanning or positioning arrangements, i.e. arrangements for actively controlling the movement or position of the probe
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01Q—SCANNING-PROBE TECHNIQUES OR APPARATUS; APPLICATIONS OF SCANNING-PROBE TECHNIQUES, e.g. SCANNING PROBE MICROSCOPY [SPM]
- G01Q10/00—Scanning or positioning arrangements, i.e. arrangements for actively controlling the movement or position of the probe
- G01Q10/02—Coarse scanning or positioning
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01Q—SCANNING-PROBE TECHNIQUES OR APPARATUS; APPLICATIONS OF SCANNING-PROBE TECHNIQUES, e.g. SCANNING PROBE MICROSCOPY [SPM]
- G01Q10/00—Scanning or positioning arrangements, i.e. arrangements for actively controlling the movement or position of the probe
- G01Q10/04—Fine scanning or positioning
- G01Q10/06—Circuits or algorithms therefor
- G01Q10/065—Feedback mechanisms, i.e. wherein the signal for driving the probe is modified by a signal coming from the probe itself
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Measurement Of Length, Angles, Or The Like Using Electric Or Magnetic Means (AREA)
- Length Measuring Devices With Unspecified Measuring Means (AREA)
Description
a)表面領域内のそれぞれ離れた位置において、SICMプローブを表面に接近させる動作を繰り返し、各位置における表面高さを測定する工程、
b)前記測定した表面高さに基づいて、前記領域の表面粗さ又はその他の表面特性を試算する工程、および、
c)前記領域内のそれぞれ離れた位置であって、前記試算された表面粗さ又はその他の表面特性のもととなった位置の間において、SICMプローブを表面に接近させる動作を繰り返し、前記表面粗さ又はその他の表面特性に適合した解像度で前記領域の画像を取得する工程、
を含む、走査型イオンコンダクタンス顕微鏡法(SICM)を用いた表面の調べる方法を提供する。
本発明の方法を実施するための装置は、走査プローブ(マイクロピペット)を含んだSICM装置、走査される表面からプローブ先端までの距離を測定および/または制御する手段、および表面に対して横方向にプローブを動かす手段を含む。
(i)視覚とプローブ先端を通るイオン電流の変化や変調の観測に基づいて、表面から規定された距離まで先端を動かす。
(ii)繰り返しサイクル中に、プローブは表面から少し離れたところまで引き戻され、次いで規定された速さまたは変化率で表面に向かって進行する。
(iii)これらの各サイクル中、表面に向かって進行する間、電流が事前に設定された閾値レベルを下回るまで、イオン電流が観測され、閾値を下回った時、プローブは再度引き戻される。
(iv)表面構造との横向きの衝突を避けるため、横向き運動制御システムが周期的なプローブの進行と引き戻しの際に作動し、それによりそのサイクル中の前進の間および引き戻しの早い段階における、このような横向き運動が抑制される。
(v)領域が選択され、その領域に分布するいくつかの先行点の表面の高さを測定するためにプローブが用いられる。既に示されているように、領域が正方形である場合には、測定は正方形の四隅で行われる。
(vi)領域内の追加の測定点数は、工程(v)で測定された先行点の高さの分布を解析することにより決定することができる。前記先行点のすべてが同程度の高さであると観測された場合には、領域内のその他の点も同様の高さを有するであろうと考えるのが妥当であり、さらなる点を測定する必要はほとんどまたは全くない。先行点の高さにおける有意な変動が観測された場合には、領域内の表面の形状をより忠実に決定するために、領域内に分布する追加点の高さを測定することが妥当である。同様の高さを有すると推定される点においては測定を行わず、それによって、測定しようとする点の総数を減らし、表面の画像を作成する総時間を有意に減らすことができる。
(i)走査プローブ
(ii)走査する表面からプローブ先端までの距離を測定および/または制御する手段
(iii)表面に対して横方向にプローブを動かす手段
を含み、プローブの先端の距離を測定および/または制御する手段には、応答時間の異なる2つのピエゾアクチュエータを含む。
従来の回線走査をする代わりに、撮像しようとする表面全体をいくつかの個々の正方形に分割する。これらの正方形をそれぞれ異なる分解能で撮像することができるため、結果として得られる画像はそれぞれの解像度を有する。正方形のサイズは画素で表され、各画素は撮像点としても使用される。使用される正方形のサイズは、4×4、6×6、8×8、16×16および32×32画素であった。画像サイズは、512×512に固定される。個々の正方形を1つずつ撮像することによって、撮像しようとする表面全体が走査される。32×32の正方形は、1列に16個の正方形で16行を形成し、画像全体では256個の正方形数となる。4×4の正方形を用いる場合には、1列に128個の正方形で128行が生じ、画像全体では16384個の正方形となる。
圧縮レベルは画像の分解能を決定する。圧縮レベルが高いほど圧縮が高くなり、よって分解能が低くなる。しかしながら、これにより撮像点は少なく、走査時間は短くなる。使用する圧縮レベルは1、2、4、6、8、16および32である。これらのレベルは画素でも表される。圧縮レベル1は全画素の撮像を意味し、レベル4は4画素ごとに1画素を撮像することを意味する。正方形は、その辺の長さよりも高い圧縮レベルを有することはできない。32×32の正方形は32までのいずれの圧縮レベルも使用できるが、4×4の正方形は4までの圧縮レベルしか使用できない。例えば、図4に示されるような4×4の正方形を使用する場合には、圧縮レベル1はその正方形中の全画素を走査して16個の撮像点を提供し、圧縮レベル2はその正方形中の2画素毎に走査して4個の撮像点を提供し、圧縮レベル4はその正方形中の4画素毎に走査して1個の撮像点を提供する。圧縮を1標準レベル減らすことで分解能は2倍になるが、走査時間は4倍になる。標準圧縮レベルの各対の間にさらなる「中間」圧縮レベルを導入(図9参照)することにより、分解能および走査スピードに対するより微細な調整が可能となる。圧縮レベルdに対応する測定点の格子2枚を、xy両方向にd/2画素分ずらして重ね合わせることによって中間圧縮レベルd/√2が作成される(図9参照)。中間圧縮レベルd/√2により、最も近い、より高い標準分解能レベルよりも、√2倍高い分解能が、たった2倍の遅さの走査スピードで得られる。
各正方形について、走査は前走査および最終走査からなる。前走査を利用して正方形の分解能が決定され、それに続く最終走査によって正方形のトポグラフィーデータが記録される。
前走査では、図5Aで示されるように、プローブはSCIM制御装置によって動かされて、正方形の四隅の画素のそれぞれを順番に調べる。コンピュータは、プローブの信号を処理して四隅の点のそれぞれについて対象表面の高さ(z)値を比較するように設定されている。これら4つの画素間の最大の差は、定められた「粗さ」のz高さ閾値と比較される。その差が閾値よりも大きければ、四隅の点で囲まれた正方形領域は粗く、よって、高分解能の最終走査を使用でき、そうでなければ低分解能が使用される。
最終走査では、前走査後にトポグラフィーデータが記録される。最終走査は、多数の不連続位置で、同様の正方形領域を撮像する。最終走査の撮像位置間の間隔は、前走査の後にコンピュータによって選ばれた圧縮レベルに依存する。図5Bから分かるように、図5Aにおける境界の四隅で撮像された正方形は、最終走査では16個の位置で撮像される。トポグラフィーデータを収集するために対象表面の領域を走査するのに使用される種々の圧縮レベルは、結果として生じる画像の解像度を表す。画像中の全箇所で同じ分解能を使用するために、単一の圧縮レベルのみを使用することも可能である。
溶液
海馬ニューロン(実施例2)の走査に使用した標準外液には、NaCl 145mM、KCl 3mM、CaCl2 2.5mM、MgCl2 1.2mM、グルコース 10mM、HEPES 10mMが含まれる。シナプスボタンのFM1-43染色に使用した添加液には、NaCl 103mM、KCl 45mM、CaCl2 2.5mM、MgCl2
1.2mM、グルコース 10mM、HEPES 10mMおよび10μM FM1-43(モレキュラープローブ社)が含まれる。PBS(組成:NaCl 137mM、KCl 2.7mM、KH2PO4 1.5mM、Na2HPO4 4.3mM、pH7.2)を、固定した培養コルチ器外植片の高分解能画像に、外液として使用した。すべての実験において、ナノピペットをPBSで満した。撮像中のナノピペットの閉塞を最小限にするために、外液およびピペット溶液をいずれも、滅菌済み0.2μmアクロディスクシリンジフィルター(ポール社、米国)を用いて濾過した。
コルチ器外植片を、生後2〜4日(P2〜4)のマウスから切り取り、ガラス底ペトリ皿(WillCo Wells社、オランダ)に入れた。外植片を、25mM HEPESおよび7%ウシ胎仔血清(インビトロジェン社、カリフォルニア州カールズバッド)を添加したDMEM培地中で、37℃、95%空気/5%CO2で培養した。培養コルチ器は、実験において1〜5日以内に使用された。いくつかの実験では、10μg/mlのアンピリシン(カルバイオケム社、カリフォルニア州ラ・ホーヤ)を培地に添加した。マウスの左右の蝸牛からのコルチ器を、同時に処理した。培養コルチ器を、2mM CaCl2を添加した0.1Mのカコジル酸バッファー中の2.5%グルタルアルデヒド中に室温で1〜2時間浸した。片方の蝸牛をHPICM撮像に使用し、もう一方の蝸牛はSEM撮像に使用した。
海馬ニューロンは、Shah et al, J. Neurophysiol. 2000; 83:2554-2561に記載されているとおりに調製し、共焦点顕微鏡法が可能となるようにガラスカバースリップ上で培養した。細胞を、37℃、95%空気/5%CO2のインキュベーター内で1〜2時間保持した。インキュベーターの外に出されてすぐに、細胞を、室温にて標準外液で洗浄し2時間以内に走査した。トポグラフィー/蛍光の組合せ測定用に、海馬ニューロンは、まず、シナプスボタンをFM1-43で染色するために1.5mlの添加液中で室温で90秒間インキュベートし、次に、全量で少なくとも10mlの標準外液で3回洗浄し、撮像の前に15分間暗所に放置した。
ナノピペットは、ホウケイ酸ガラス(O.D. 1mm、I.D. 0.58、Intracell社、英国)から、レーザー搭載プラーP-2000型(サッター社、米国)を用いて引き伸ばした。100MΩ〜150MΩの範囲の抵抗(標準外液中で測定)を示し、100nmに近い内径の標準ピペットである、2つの異なるピペットを使用した。これらのピペットを、海馬ニューロンの走査に用いた(実施例2)。蝸牛有毛細胞における不動毛の束の高分解能画像(実施例1)を、およそ400MΩ(範囲300〜500MΩ)の抵抗および30nmに近い推定内径を有する鋭いピペットを用いて記録した。ピペット内径は、ピペット抵抗から、3°の半円錐角を用いて推定する。
ホッピング技術は、付属プローブを備えたZ−ピエゾの広く素早い垂直方向の運動から生じる機械的振動を十分に減衰させることを必要とする。装置はZ方向に動くナノピペットを有し、試料はX−Y平面上で動く別のピエゾシステム上に載せられる(図1)。X−YピエゾからZ−ピエゾをこのように分離することは、機械的な干渉を防ぐために必要である。また、ピエゾの動きをZ軸に沿って動かす回路は、1ms程度の速さの非振動的なステップ応答を可能にするよう調整される。
ホッピングプローブの垂直方向のZ位置決めおよびXY平面での試料の動きは、SBC6711 DSPボード(Innovative Integration社、米国)を20kHzのサンプリング周波数で利用してSICM制御装置(イオンスコープ社、英国)で制御した。各撮像点での高さの測定は3段階で構成される。まず、プローブを、プローブが存在する位置から、指定の距離だけ、または指定の絶対的高さレベルまで、引き戻した。次に、XYナノポジショニングステージがXY平面上の新たな点への試料の動きを完了する間、プローブの垂直方向の位置を10msの間保持した。この間に基準電流IREFを、HPICMプローブを通るDC電流の平均として測定した。最後に、IREFとプローブを通る電流の瞬時値IMVとの電流の差ΔIをモニタリングしながら、プローブを(標準ピペットには)100nm/msまたは(鋭いピペットには)30nm/msという一定の降下速度で下げた。少なくとも4つの連続した(200μsである)測定期間中、ΔIが設定値の指定の値ISを超えるとすぐに、プローブの垂直方向の位置は対応する画像画素に保存され、プローブは指定のホップ振幅で素早く引き戻されて新たな測定サイクルを開始する。IS値は、IREFの0.25%から1%にわたる。
海馬ニューロンの入ったシャーレを、15分間暗所に保持した後に、走査ヘッドのXYナノポジショニングステージ上に載せた。粗い動きには10×対物レンズならびにX移動ステージ、Y移動ステージおよびZ移動ステージを用いて、HPICMピペットを、目的の領域上にポジショニングし、試料表面から約200μmの安全距離まで下げた。次に、100×油侵対物レンズが選ばれ、自動アプローチアルゴリズムにより、HPICMプローブが試料表面から約1ピペット半径長の距離まで運ばれた。次に、顕微鏡の台全体のXYポジショニングが、共焦点レーザー光とともに、ピペットの先端にそろうよう調整された。光退色を最小限に抑えるため、選択領域の蛍光画像は、トポグラフィーとは別に、3分以内に記録した。急速な蛍光取得中のピペットと試料との衝突を避けるため、HPICMプローブをおよそ24μm引き戻した。蛍光画像を取得した直後に、同一領域のトポグラフィー撮像を行った。
固定したコルチ器を、超純粋蒸留水中で解体し、段階的な濃度のアセトン中で脱水し、液体CO2から臨界点乾燥した。次に、標本を、膜厚モニタ(EMS 150)とともに制御下において、5.0nmの白金でスパッタコーティングした(EMS 575Xスパッタコーター、Electron Microscopy Sciences社、米国)。コーティングした標本を、電界放出SEM(S-4800、日立、日本)を用いて低加速電圧(1〜5kV)で観察した。
種々の分解能で取得した未加工の高さデータを、双線形補間法を用いて補間し、512×512画素の最終画像を作成した。必要な場合には、画像を補正して、Z軸におけるXYナノポジショニングステージの小さな位置ずれによって生じる縞を除去し、また、プレパラートに存在する傾斜についてさらに画像を補正して、微細な細部の映像化を助けた。
表面から離れて記録された基準電流(IREF)のパーセンテージとして表される確実に検出可能な最小の電流低下は0.25%(内径100nmの標準ピペットについて)〜0.75%(内径30nmの鋭いピペットについて)にわたる、ということを実験のアプローチカーブは示している。我々の実験装置における電流測定の高いシグナル・ノイズ比のため、1%設定値における試算される垂直方向の分解能は、標準ピペットでは9nm、鋭いピペットでは6nmである。実際の垂直方向の分解能は、特徴物の横方向の寸法に依存する。30nmピペットの垂直方向の感度を、標準の5kHzの代わりに1kHzローパスフィルターを用いることによって、およそ3nmまでさらに改良することができる。しかしながら、これはフィードバック制御の応答時間を減少させるであろう。
当該技術のロバスト性を判定するために、培養コルチ器外植片中の聴覚有毛細胞の機械感受性不動毛を撮像した。これまでに、不動毛をAFMまたはラスタ走査SICMで撮像するといういくつかの試みが行われているが、これらの研究では、不動毛の束の大まかな構造さえも解像されたことはない。標本を固定し、本発明(ホッピングプローブイオンコンダクタンス顕微鏡法−HPICM)で取得した画像と走査型電子顕微鏡(SEM)で取得した画像とを比較した(図6a〜c)。HPICMは、不動毛を、およそ100nm以下の直径を有する最も短いものまでも、非常によく解像した(図6b、c)。また、これらの若い生後聴覚有毛細胞に存在する運動毛(真の繊毛)も映像化された(図6c、矢印)。HPICMの分解能の限界を調査するため、不動毛を相互に連結しそれらの機械感受性の機能に重要である、微細な細胞外フィラメント(の輪)を撮像した。これらの輪の直径は、およそ8〜10nm程度に小さいこともあり得る。野生型の有毛細胞において、輪の大部分はHPICMプローブにとっては近づきづらい。HPICMプローブは束に対して垂直方向に接近するためである。したがって、Shaker2マウスの、異常に短いにも関わらず機械感受性の不動毛を用いた(図6d〜f)。およそ30nmの内径を有するHPICMプローブは、直径16±5nm(n=37)の特徴物として現れるこれらの輪を解像することができた(図6f)。HPICMは、SICMと同じセンサーを使用するため、横方向および垂直方向の分解能を決定する同じ物理的原理を共有する。SEM画像上の同一の不動毛の輪の見かけ上の直径は22±5nm(n=41)であった。白金コートの厚み(両面に5nm)を差し引いた後、これらの輪の直径について、12±5nmという独立した推定値が得られる。したがって、HPICM観察およびSEM観察は、見事に一致して、達成可能な高分解能を示している。
生きた細胞の動きは、高速撮像にさらなる要件を課す。複雑な生きた細胞の構造を映像化するのに適合HPICMが十分速いかどうかを試験するために、生きた海馬ニューロンを調査した(図7a)。生きた海馬ニューロンの調査は、軸索および樹状突起によって形成される複雑な三次元の形状のために、いずれの走査型プローブ顕微鏡法にとっても、未解決の課題である。HPICMは、暫定的に軸索と特定された非常に微細な(直径50〜60nm以上)突起(図7b、c)だけでなく、シナプスボタンに似た構造も明らかにした(図7b、c)。この標本を、エンドサドーシスとエキソサイトーシスとのサイクルの間にシナプス小胞に蓄積される活性依存マーカーであるFM1-43で標識し、同一試料のトポグラフィーおよびFM1-43の蛍光を記録した。蛍光シグナルが観察された場合には常に、画像中の結節状構造を同定することも可能であった(図7d〜g)。これらの結節状構造のサイズおよび形状は、シナプスボタンに期待される幾何学的形状と一致する。よって、この調製で生じる細胞の再構成および移動は比較的(数十分のタイムスケールで)遅いにもかかわらず、適応HPICMのスピードが、これらの生きた複雑な回路網中の軸索、樹状突起およびボタンの「スナップショット」を生成するのに十分であることは明らかである。より速い原動力は、より小さい領域の撮像することおよび/または分解能を減少させることによりフォローすることができる。
細胞膜上のイオンチャネルをマッピングすることは、生物学において大きな関心事の1つである。ホッピングモードでは、生きたニューロンを刺激し、それらのイオンチャネルを細胞膜の脱分極によって開かせた。ニューロンの応答は、同時走査とともに蛍光検出を用いて測定された。高カルシウム濃度に感受性のfluo4色素で細胞を負荷し、カリウムを含む溶液でピペットを満たした。ピペットが表面に近い間に、ピペット先端から放出されるカリウムイオンによって細胞膜が脱分極し、それにより細胞膜がそのカルシウムチャネルを開かせた。カルシウムイオンは、これらのチャネルを介して細胞に入り、fluo4に結合し、色素に蛍光を生じさせた。
Claims (13)
- 走査型イオンコンダクタンス顕微鏡法(SICM)を用いた表面を調べるための方法であって、
a)表面領域内のそれぞれ離れた位置において、SICMプローブを表面近くに繰り返し動かし、各位置における表面高さを測定する工程、
b)前記表面高さ測定に基づいて前記領域の表面粗さまたはその他の表面特性を試算する工程、および、
c)前記領域内のそれぞれ離れた位置において、前記プローブを表面の近くに繰り返し動かし(回数および前記位置は領域における前記試算された表面粗さまたはその他の表面特性に基づいたものである。)、前記表面粗さまたはその他の表面特性に適合した分解能で前記領域の画像を取得する工程、
を含み、
前記表面高さの測定が、以下の(1)〜(3)で構成されることを特徴とする、前記表面を調べるための方法。
(1)プローブの新たな位置への動きが完了する間に、プローブの垂直方向の位置を保持して基準電流I REF を、プローブを通るDC電流の平均として測定する。
(2)I REF とプローブを通る電流の瞬時値I MV との電流の差ΔIをモニタリングしなが
ら一定の降下速度でプローブを下げる。
(3)ΔIが指定の値I S を超えるとすぐに、プローブの垂直方向の位置が保存され、プ
ローブが引き戻されて新たな測定サイクルを開始する。 - 前記工程b)およびc)が、必要とする解像度によって反復的に繰り返される、請求項1に記載の表面を調べるための方法。
- プローブ電流が0.25%〜1%減少した時に前記接近が終了する、請求項1又は2に記載の表面を調べるための方法。
- 各測定において、前記プローブが移動する、前記表面から離れている位置から前記閾値の位置までの距離が1μmよりも大きい、請求項1〜3のいずれか1項に記載の表面を調べるための方法。
- 前記プローブが表面から離れている時と前記プローブが表面の近くにある時との走査測定値を得て、第一の測定値から第二の測定値を差し引くことによって表面の差分マップを取得する、請求項1〜4のいずれか1項に記載の表面を調べるための方法。
- 作用因子またはその他の刺激が前記プローブの先端において適用され、前記表面から離れた位置と前記表面の近い位置とで前記作用因子または刺激への応答が測定され、第一の測定値からの第二の測定値を差し引くことにより前記表面の差分マップが得られる、請求項5に記載の表面を調べるための方法。
- 表面構造により活性化される蛍光色素分子の存在下で行われ、レーザー光の焦点が前記プローブの先端に合わせられて蛍光が測定され、前記表面から離れた位置と前記表面に近い位置とで走査測定値が蛍光測定値とともに取得され、第一の蛍光測定値から第二の蛍光測定値を差し引くことにより蛍光の位置ごとの変化を明らかとする、請求項5に記載の表面を調べるための方法。
- プローブを表面の近くに動かす前記工程中、個別の閾値で前記接近が終了し画像を取得する、請求項5〜7のいずれか1項に記載の表面を調べるための方法。
- プローブ電流が1%、5%および10%減少した時に前記接近が終了する、請求項8に記載の表面を調べるための方法。
- 工程(b)および(c)が、試算された表面粗さを用いて行われる、請求項1〜9のいずれか1項に記載の表面を調べるための方法。
- 工程(b)および(c)が、蛍光シグナルの存在を測定することにより行われる、請求項1〜9のいずれか1項に記載の表面を調べるための方法。
- 画像がプローブ電流における複数の異なる閾値で取得され、得られた結果の差によって、表面の機械的特性に関する情報を得る、または前記表面の下の構造に関する情報を明らかにする、請求項1〜11のいずれか1項に記載の表面を調べるための方法。
- 工程(c)が異なる印加電圧で行われ、得られた結果における差によって前記表面の機械的特性に関する情報を得る、または前記表面の下層の構造に関する情報を明らかとする、請求項1〜11のいずれか1項に記載の表面を調べるための方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GBGB0801900.2A GB0801900D0 (en) | 2008-02-01 | 2008-02-01 | Scanning probe microscopy |
GB0801900.2 | 2008-02-01 | ||
PCT/GB2009/050092 WO2009095720A2 (en) | 2008-02-01 | 2009-02-02 | Scanning probe microscopy |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011511286A JP2011511286A (ja) | 2011-04-07 |
JP2011511286A5 JP2011511286A5 (ja) | 2012-03-22 |
JP5512548B2 true JP5512548B2 (ja) | 2014-06-04 |
Family
ID=39204098
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010544789A Expired - Fee Related JP5512548B2 (ja) | 2008-02-01 | 2009-02-02 | 走査型イオンコンダクタンス顕微鏡法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20110131690A1 (ja) |
EP (1) | EP2238428A2 (ja) |
JP (1) | JP5512548B2 (ja) |
GB (1) | GB0801900D0 (ja) |
WO (1) | WO2009095720A2 (ja) |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7406860B2 (en) * | 2006-04-28 | 2008-08-05 | Seagate Technology Llc | Atomic force microscopy scanning and image processing |
GB201006364D0 (en) * | 2010-04-16 | 2010-06-02 | Univ Warwick | Intermittent control scanning electrochemical microscopy |
CN102455371A (zh) * | 2010-10-22 | 2012-05-16 | 国家纳米技术与工程研究院 | 一种评估神经母细胞瘤恶性程度的装置及方法 |
US9598281B2 (en) * | 2011-03-03 | 2017-03-21 | The Regents Of The University Of California | Nanopipette apparatus for manipulating cells |
JP6014502B2 (ja) * | 2013-01-25 | 2016-10-25 | 株式会社日立製作所 | 走査プローブ顕微鏡およびこれを用いた試料の観察方法 |
CN108593927A (zh) | 2013-03-14 | 2018-09-28 | 加利福尼亚大学董事会 | 用于亚细胞分析的纳米移液管装置和方法 |
JP6104667B2 (ja) * | 2013-03-28 | 2017-03-29 | 株式会社日立ハイテクサイエンス | アクチュエータの位置算出装置、位置算出方法及び位置算出プログラム |
JP2017508161A (ja) * | 2014-03-10 | 2017-03-23 | オープンアイオーラブズ リミテッド | 走査型イオンコンダクタンス顕微鏡法 |
US10316355B2 (en) * | 2014-07-25 | 2019-06-11 | Kalim Mir | Nanopipette analysis of polymers |
CN107850620B (zh) * | 2015-06-25 | 2020-11-17 | 布鲁克纳米公司 | 用于扫描探针显微镜的样本容器保持器 |
US10436815B2 (en) * | 2015-08-14 | 2019-10-08 | Indiana University Research And Technology Corporation | Electrospray imaging and deposition |
US10828785B2 (en) | 2015-10-13 | 2020-11-10 | Sensapex Oy | Integrated measurement and micromechanical positioning apparatus for real-time test control |
CN105807792B (zh) * | 2016-03-09 | 2018-08-10 | 西安交通大学 | 扫描离子电导显微镜的片上化控制器及控制方法 |
JP7067760B2 (ja) * | 2017-09-08 | 2022-05-16 | 国立大学法人金沢大学 | 表面計測方法、イオン伝導顕微鏡およびプローブ |
CN112305209B (zh) * | 2020-10-26 | 2021-11-23 | 南开大学 | 一种无接触贴壁细胞三维形态测量方法及细胞封接方法 |
CN113640549B (zh) * | 2021-08-04 | 2023-12-05 | 镇江微纳测控技术有限责任公司 | 基于隧道磁阻效应和离子电导技术的扫描成像系统及方法 |
CN113721043B (zh) * | 2021-08-31 | 2022-12-09 | 西安交通大学 | 一种基于阵列线激光的sicm扫描系统及方法 |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5266801A (en) | 1989-06-05 | 1993-11-30 | Digital Instruments, Inc. | Jumping probe microscope |
JPH0687003B2 (ja) | 1990-02-09 | 1994-11-02 | 株式会社日立製作所 | 走査型トンネル顕微鏡付き走査型電子顕微鏡 |
CA2059990C (en) * | 1991-01-29 | 1997-11-25 | Shun-Ichi Shido | Moving apparatus, a moving method and an information detection and/or input apparatus using the same |
JP3078354B2 (ja) * | 1991-06-18 | 2000-08-21 | 日立建機株式会社 | 走査型トンネル顕微鏡の測定方法 |
US5376790A (en) * | 1992-03-13 | 1994-12-27 | Park Scientific Instruments | Scanning probe microscope |
US5729015A (en) * | 1995-01-30 | 1998-03-17 | Olympus Optical Co., Ltd. | Position control system for scanning probe microscope |
AU4130200A (en) * | 1999-04-19 | 2000-11-02 | Imperial College Innovations Limited | Optical microscopy and its use in the study of cells |
JP4327993B2 (ja) | 2000-05-29 | 2009-09-09 | 日本分光株式会社 | プローブ開口作製装置、及びそれを用いた近接場光学顕微鏡 |
GB0107231D0 (en) * | 2001-03-22 | 2001-05-16 | Imp College Innovations Ltd | Patch clamp |
JP2003106977A (ja) * | 2001-09-28 | 2003-04-09 | Jasco Corp | 近接場分光装置 |
JP2003227788A (ja) * | 2002-02-05 | 2003-08-15 | Inst Of Physical & Chemical Res | 走査型プローブ顕微鏡及び試料の表面構造測定方法 |
EP1644937A1 (en) * | 2003-07-15 | 2006-04-12 | University Of Bristol | Probe for an atomic force microscope |
US20050074900A1 (en) | 2003-10-07 | 2005-04-07 | Morgan Nicole Y. | Microfluidic flow-through immunoassay for simultaneous detection of multiple proteins in a biological sample |
JP4432806B2 (ja) * | 2005-03-09 | 2010-03-17 | 株式会社島津製作所 | 走査型プローブ顕微鏡 |
US7665349B2 (en) * | 2005-04-12 | 2010-02-23 | Veeco Instruments Inc. | Method and apparatus for rapid automatic engagement of a probe |
-
2008
- 2008-02-01 GB GBGB0801900.2A patent/GB0801900D0/en not_active Ceased
-
2009
- 2009-02-02 WO PCT/GB2009/050092 patent/WO2009095720A2/en active Application Filing
- 2009-02-02 US US12/864,302 patent/US20110131690A1/en not_active Abandoned
- 2009-02-02 JP JP2010544789A patent/JP5512548B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2009-02-02 EP EP09706263A patent/EP2238428A2/en not_active Withdrawn
-
2013
- 2013-07-29 US US13/953,122 patent/US9354249B2/en active Active
-
2016
- 2016-05-27 US US15/167,666 patent/US9709598B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2011511286A (ja) | 2011-04-07 |
US9709598B2 (en) | 2017-07-18 |
US20130312143A1 (en) | 2013-11-21 |
US20110131690A1 (en) | 2011-06-02 |
US9354249B2 (en) | 2016-05-31 |
EP2238428A2 (en) | 2010-10-13 |
US20160274146A1 (en) | 2016-09-22 |
GB0801900D0 (en) | 2008-03-12 |
WO2009095720A2 (en) | 2009-08-06 |
WO2009095720A3 (en) | 2009-10-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5512548B2 (ja) | 走査型イオンコンダクタンス顕微鏡法 | |
JP4912465B2 (ja) | 生細胞を調べるための走査型イオンコンダクタンス顕微鏡法 | |
Langer et al. | Adhesion forces measured at the level of a terminal plate of the fly's seta | |
US7870616B2 (en) | Probe arrangement | |
Costa | Imaging and probing cell mechanical properties with the atomic force microscope | |
Shevchuk et al. | Angular approach scanning ion conductance microscopy | |
JP2011511286A5 (ja) | ||
WO2009012766A1 (de) | Verfahren und vorrichtung zum kombinierten untersuchen einer probe mit zu untersuchenden objekten | |
Langer et al. | Lateral mechanical coupling of stereocilia in cochlear hair bundles | |
DE60023678T2 (de) | Optische mikroskopie und deren verwendung bei der untersuchung von zellen | |
Schäffer et al. | Scanning ion conductance microscopy | |
Pellegrino et al. | Integrated SICM-AFM-optical microscope to measure forces due to hydrostatic pressure applied to a pipette | |
US7057171B2 (en) | Patch-clamping and its use in analyzing subcellular features | |
WO2013028782A1 (en) | Electrochemically-grown nanowires and uses thereof | |
Yang et al. | Design and analysis of electrical resistance feedback for automated patch clamp on adherent cells | |
Pham | Two-Electrode Voltage Clamp (TEVC) Based Scanning Ion Conductance Microscopy: New Methodology and Validation | |
Galeano-Naranjo et al. | Stereocilia Bundle Imaging with Nanoscale Resolution in Live Mammalian Auditory Hair Cells | |
Pellegrino et al. | Scanning ion conductance microscopy (SICM): from measuring cell mechanical properties to guiding neuron growth | |
Fei et al. | Scanning ion conductance microscopy | |
Krohs et al. | Automated cell characterization by a nanohandling robot station | |
McPhee | Elasticity as an indicator of cell responses to topography and chemically modified surfaces: an atomic force microscopy approach | |
Langer et al. | Adhesion forces measured at the level of a terminal plate of | |
Pellegrino et al. | Use of scanning ion conductance microscopy to map elastic properties of cell membranes | |
Li et al. | Prior knowledge based fast imaging for scanning ion conductance microscopy | |
Campus et al. | Articles in PresS. Am J Physiol Heart Circ Physiol (October 19, 2012). doi: 10.1152/ajpheart. 00499.2012 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120201 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20120201 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20130523 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130528 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130828 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130904 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130925 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20131002 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20131028 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20131105 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20131127 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20140311 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140326 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5512548 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |