JP5483731B2 - 保存可能な生虫卵懸濁液の製造 - Google Patents
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Description
重クロム酸溶液またはフェントン試薬のいずれを使用した場合も、虫卵の損傷を回避するためには、該溶液は短時間のうちに除去されなければならない。さらに、実験により、あらかじめ浄化ステップを経ているにもかかわらず、浄化後の幼虫形成期間(22〜25℃、3カ月)に微生物が大量増殖することも、その後の幼虫包蔵卵保存期間(2〜8℃)に微生物が増殖することも、避けられないことが明らかになった。したがって、一旦このような殺菌・殺ウイルス性の薬品が除去されれば、豚鞭虫卵懸濁液中で微生物が新たに増殖すると考えられる。
0.01〜0.2%、特に0.1〜0.2%ソルビン酸、
0.1〜0.3%安息香酸、
0.02〜0.3重量%p−ヒドロキシ安息香酸エステル、
5〜20重量%プロピレングリコール、および
上述の濃度域にある上述の防腐剤の組み合わせ
から成る群より選択される1種以上の防腐剤を使用することが特に好ましい。
ドイツ薬局方(DAB)(German Pharmacopoeia,section 2.6.12,last updated with the 24th Supplement in 2006)の規定に従い、豚鞭虫卵(Trichuris suis ova:TSO)を2,400虫卵/mlの濃度でリン酸緩衝液(pH7)に懸濁し、該懸濁液中の微生物数を測定した。その結果、微生物数は190,000cfu/mlであった。次に、該懸濁液を希H2SO4溶液を用いてpH2に再度調整した。30℃で3時間保存後、微生物数は20cfu/ml未満に減少した。
a.DAB2.6.13に規定されている栄養懸濁液に、表1に詳述する胞子形成試験細菌株および胞子非形成試験細菌株を植菌した。次に、これらを希H2SO4溶液を用いてpH2に再度調整し、30℃で6時間保存した。その後、微生物数を測定し、表1に示すデータを得た。
豚鞭虫卵(TSO)懸濁液の調製における、マウス白血病ウイルス(Murine leukemia virus:MuLV)、仮性狂犬病ウイルス(Pseudorabies virus:PRV)、ブタパルボウイルス(Porcine parvovirus:PPV)およびネコカリシウイルス(Feline calicivirus:FCV)の不活化。使用したこれらのウイルスはモデルウイルスである。
pH2からpH4へのpH上昇および防腐剤の添加
実施例4a〜4eの実験条件:
各実施例において、各試料は、pH4のリン酸緩衝液中に、0.2%安息香酸、0.1%ソルビン酸、15%プロピレングリコールのいずれか、および10,000TSO/ml(±10%)を含むものであった。これらの試料に、以下の微生物を加えた。:
−アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)のみ
−シュードモナス・エルジノーサ(Pseudomonas aeruginosa)、スタフィロコッカス・アウレウス(Staphylococcus aureus)、カンジダ・アルビカンス(Candida albicans)およびエシェリキア・コリ(Escherichia coli)をアスペルギルス・ニガーと併用
40,000虫卵/mlの未成熟卵を、種類の異なる培地中で懸濁し、幼虫形成させた(22〜25℃)。60日および90日間かけて幼虫形成させた後、各々の懸濁液を顕微鏡下で観察し、幼虫形成率(embryonation coefficient:EC)を、虫卵総数および形態学的に無傷な幼虫包蔵卵数に基づいて計算した。幼虫形成率は虫卵の生存能力の指標である。幼虫形成初期には、未成熟卵のみが存在するため、幼虫形成率はゼロである。幼虫形成率は幼虫形成期間中に増加し、選択した培養条件において60日以降で最大に達する。概して、90%程度の数値が得られる。
Claims (11)
- ヒト制御性T細胞に刺激を与えるための経口投与用医薬品の調製方法であって、該医薬品はヒトに対して非病原性の寄生蠕虫である豚鞭虫(Trichuris suis)の生虫卵が懸濁している保存可能な懸濁液を含み、経口摂取後に十分な数の蠕虫が発育するものであり、第1のステップで蠕虫卵懸濁液をpH2以下の酸処理に付し、さらなるステップでpHを4以上に調整し、薬理学的に許容できる防腐剤を加えることを特徴とする、経口投与用医薬品の調製方法。
- 前記酸処理を硫酸の添加により行うことを特徴とする、請求項1に記載の方法。
- 防腐剤が、ソルビン酸、安息香酸、これらの酸の塩、p−安息香酸エステル、プロピレングリコール、およびこれらの防腐剤の組み合わせから成る群より選択されることを特徴とする、請求項1または請求項2に記載の方法。
- 0.01〜0.2%ソルビン酸、
0.1〜0.3%安息香酸、
0.02〜0.3重量%p−ヒドロキシ安息香酸エステル、
5〜20重量%プロピレングリコール、および
上述の濃度域にある上述の防腐剤の組み合わせ
から成る群より選択される1種以上の防腐剤を加えることを特徴とする、請求項3に記載の方法。 - 薬学的に許容できる添加物をさらに懸濁液に加えることを特徴とする、請求項1〜4のいずれかに記載の方法。
- ヒト制御性T細胞に刺激を与えるための経口投与用医薬品であって、該医薬品はヒトに対して非病原性の寄生蠕虫である豚鞭虫(Trichuris suis)の生虫卵が懸濁している保存可能な懸濁液を含み、経口摂取後に十分な数の蠕虫が発育するものであり、コロニーを形成する微生物数が懸濁液1ml当たり1,000未満であり、請求項1〜5に記載のいずれかの方法により調製されることを特徴とする、経口投与用医薬品。
- 懸濁液1ml当たりに含まれる微生物数が100コロニー形成単位未満であることを特徴とする、請求項6に記載の経口投与用医薬品。
- 懸濁液1ml当たりに含まれる微生物数が10コロニー形成単位未満であることを特徴とする、請求項7に記載の経口投与用医薬品。
- 前記微生物が、細菌、ウイルス、真菌、酵母、および原虫から成る群より選択されることを特徴とする、請求項6〜8のいずれかに記載の経口投与用医薬品。
- 腸管の炎症性疾患の治療用医薬品を製造するための、請求項1〜5のいずれかに記載の方法により調製した、寄生蠕虫である豚鞭虫の虫卵を懸濁した、保存可能な懸濁液の使用。
- 腸管の炎症性疾患がクローン病であることを特徴とする、請求項10に記載の使用。
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