JP5480130B2

JP5480130B2 - 新規発色性シリル保護基およびオリゴヌクレオチド化学合成における新規発色性シリル保護基の利用

Info

Publication number: JP5480130B2
Application number: JP2010509467A
Authority: JP
Inventors: デラニー，マイケル、オレン
Original assignee: サーモフィッシャーサイエンティフィックバイオサイエンシィズインク．
Priority date: 2007-05-18
Filing date: 2008-05-16
Publication date: 2014-04-23
Anticipated expiration: 2028-05-16
Also published as: WO2008144472A1; US20100216984A1; EP2147009A1; JP2010528028A; EP2147009A4; US8759508B2

Description

本願は、米国特許仮出願番号第６０/９３８，９９１（出願日：２００７年５月１８日）に基づいて優先権を主張するものであり、前記出願のすべての記載をここに引用するものである。

本発明はオリゴヌクレオチド合成の各カップリングサイクルにおけるカップリング効率を可視的に測定することを可能にする発色団または他の検出可能な部分構造を有する５’−シリル保護基に関する。

保護基類は、潜在的に多数の似通った反応性官能基類が共存する中で位置特異的な変換を行う必要から、現代の合成有機化学において重要かつ普遍的な特色ある官能基である。１９８０年代の初めから、アミン、アルコール、カルボニル、カルボン酸、チオール、ホスフェートなどほとんど全ての反応性官能基に対する保護基類の研究から、様々な化学的安定性と適用性をもつ何千もの試薬類が生み出されてきた。実際、複雑な有機合成に対して、相性の良いオルトゴナルな保護基を選択することは、合成スキームが成功するように設計する上で、しばしば重要な要因の１つである（非特許文献１参照）。

反応性のある水酸基官能基類を一時的にブロックするためにシリル保護基類を利用することは、合成有機化学において一般的になっている。トリメチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、フェニルジメチルシリル基、およびトリフェニルシリル基などの保護基類は、複雑な天然物と同様に単純なアルコール類の調製に、シリルエーテル類として水酸基類保護のために日常的に用いられている。こうしたシリル保護基類は、他のほとんどの保護基類が良から優良の安定性を示す試薬の、フッ素イオンと処理することで除去できるという利点を有している。

シリルエーテル保護基類は、オリゴヌクレオチド合成に対しても適用されている。特許文献１乃至特許文献４および非特許文献２乃至非特許文献３参照。

５’−シリル−２’−オルトエステル合成の発明により実現された著しい改良にもかかわらず、先の文献に記載される５’−シリルエーテル保護基類は、眼に見える色をもたず、カップリング効率を評価するのに有利である簡便な比色分析に用いることができない。この特徴は、例えば従来のジメトキシトリチル基（つまりＤＭＴ）５’−保護基の特徴である。このように、現在入手可能な試薬類では、カップリング工程の評価を可能にする脱保護工程（例えば、シリル保護基の脱離を経る）を眼で見えるように検出することができない。好適には、各脱保護溶液が完全に回収され、脱離した保護基の量を分光光度的に測定できることが望ましい。各合成サイクルのカップリング効率をほぼ定量的に測定するために、こうして得られる各測定値を直前の測定値と比較できるからである。

米国特許第５，８８９，１３６号明細書米国特許第６，００８，４００号明細書米国特許第６，１１１，０８６号明細書米国特許第６，５９０号明細書国際公開第ＷＯ９７／２６２７０号パンフレット米国特許第６，５９０号明細書

Ｇｒｅｅｎｅ‘ｓＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，（Ｗｕｔｓ等、第４版、ＷｉｌｅｙＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙａｎｄＳｏｎｓＩｎｃ．，２００７）Ｓｃａｒｉｎｇｅ，Ｍｅｔｈｏｄｓ２３、２０６−２１７（２００１）Ｓｃａｒｉｎｇｅ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２０、１１８２０−１１８２１（１９９８）Ｋｏｌｂ，ＤｒｕｇＤｉｓｃｏｖｅｒｙＴｏｄａｙ８，１１２８−１１３７（２００３）ＭｅｔｈｏｄｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ２０，ＰｒｏｔｏｃｏｌｓｆｏｒＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓａｎｄＡｎａｌｏｇｓ（Ａｇｒａｗａｌ編、ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，１９９３）ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓａｎｄＡｎａｌｏｇｕｅｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ（Ｅｃｋｓｔｅｉｎ編、ＩＲＬＰｒｅｓｓ，１９９１）ＯｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅＳｙｎｔｈｅｓｉｓ：ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ（Ｇａｉｔ編、ＩＲＬＰｒｅｓｓ，１９８４）Ｒｅｅｓｅ，ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ．２２，１８５９−１８６２（１９８１）

上で述べたように、各合成サイクルの個々のカップリング効率をモニターするために、比色による評価方法を用い、５’−シリル−２’−オルトエステル合成プラットフォームを利用して、ＲＮＡの効率的化学合成法を完全なものとすることが必要とされている。

本発明は、各合成サイクルのカップリング効率を可視的に確認することを可能にする、発色団または他の検出可能な部分構造を有する５’−シリル保護基類を提供する。さらに、脱離された発色団は、化学工程のカップリング効率を測定するために回収することができ、分光光度的に定量することができる。

本発明は以下の式（Ｉ）の化合物を提供する。

ここで、Ｙは発色団または他の検出可能な部分構造を示し、
Ｑは、置換基を有していてもよい脂肪族、アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、およびヘテロシクロアルキルからなる群より選ばれ、
Ｒ_１とＲ_２は、置換基を有していてもよいＣ_１−８アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ_１−８アルキルオキシ、シクロアルキルオキシ、ヘテロシクロアルキルオキシ、アルキルシリルオキシ、およびアリールシリルオキシからなる群より互いに独立して選ばれ、
Ｘはグリコシルアミンまたはアベイシック部分である。
ある実施形態では、Ｑは、Ｃ_２−１２アルケン、Ｃ_３−８アリール、ヘテロアリール、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルからなる群より選ばれる。また、別の実施形態では、Ｑは、Ｃ_２−１２アルケンおよびヘテロ原子がＮまたはＯから選ばれるＣ_３−８へテロシクロアルケン基からなる群より選ばれる。さらに別の実施形態では、Ｑは、ヘテロ原子がＮまたはＯから選ばれる、置換基を有していてもよいＣ_５−６ヘテロアリール基である。好ましい実施形態では、Ｑはオキサゾールまたはトリアゾール基、好適には、１，２，３−トリアゾール基である。

本発明の１態様では、Ｘは修飾または無修飾のヌクレオチド、ヌクレオシドまたはアベイシック分子である。
また、別の１態様では、Ｒ_１とＲ_２は置換基を有していてもよいＣ_１−８アルキルオキシおよびアルキルシリルオキシ基からなる群より互いに独立して選ばれる。

また、本発明は、式（ＩＩ）の化合物または中間体を提供するものである。

ここで、Ｌ_１はアジド、アルキン、アルケン、マレイミド、ニトリルオキシド、アルデヒドまたはイミンからなる群より選ばれる。
また、本発明は、式（Ｉ）の化合物を合成する方法を提供するものであり、前記方法は、
化学式（ＩＩ）：Ｌ_１−Ｏ−Ｓｉ（Ｒ_１）（Ｒ_２）−Ｘの化合物を式Ｙ−Ｌ_２の化合物と反応させる工程を有する。ここでＬ_１とＬ_２は、アジド、アルキン、アルケン、マレイミド、ニトリルオキシド、アルデヒドまたはイミンからなる群より互いに独立して選ばれ、Ｌ_１とＬ_２は反応して前記部分Ｑを生成する。
前記合成方法はさらに、式Ｌ_１−Ｏ−Ｓｉ（Ｒ_１）（Ｒ_２）（Ｚ）の化合物をＸと反応させ、得られた生成物（ＩＩ）Ｌ_１−Ｏ−Ｓｉ（Ｒ_１）（Ｒ_２）−Ｘを、クロマトグラフィーにより精製する工程を有していてもよい。
ここで、Ｚはハロ、イミダゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、トリフルオロメタンスルホニル、アルキルアミノまたはジアルキルアミノである。
前記方法は、さらに式Ｌ_１−Ｏ−Ｓｉ（Ｒ_１）（Ｒ_２）（Ｚ）の化合物をＸと反応させ、得られた生成物（ＩＩ）Ｌ_１−Ｏ−Ｓｉ（Ｒ_１）（Ｒ_２）−Ｘをクロマトグラフィーにより精製する工程を含んでいてもよい。ここで、Ｚはクロロである。

また、前記方法は、式Ｌ_１−Ｏ−Ｓｉ（Ｒ_１）（Ｒ_２）（Ｚ）の化合物をＸと反応させ、得られた生成物（ＩＩ）Ｌ_１−Ｏ−Ｓｉ（Ｒ_１）（Ｒ_２）−Ｘをクロマトグラフィーにより精製する工程を含んでいてもよい。ここで、ＺはＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノである。
本発明はオリゴヌクレオチド類の合成方法も提供するものであり、前記合成方法は、
（ａ）式Ｙ−Ｑ−Ｏ−Ｓｉ（Ｒ_１）（Ｒ_２）−の５’ −保護基を有する、基質結合ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドを生成する工程、
（ｂ）前記５’保護基を除去して遊離５’ＯＨ基を生成する工程、
（ｃ）３’−ホスホラミダイトを有するヌクレオシドモノマーを基質結合ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドと反応させて、前記３’−ホスホラミダイトを、ホスホトリエステルを生成するために前記基質結合ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドの前記遊離の５’−ＯＨとカップリングさせる工程、および
（ｄ）前記ホスホトリエステルをリン酸トリエステルに変換するために、（ｃ）で生成した前記ホスホトリエステルを好適な酸化剤と反応させる工程を有する。
上記（ａ）から（ｄ）までの工程は、所望の長さのオリゴを生成するために、１回以上繰り返し行ってよい。ヌクテオシドモノマーおよび基質結合ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオシドは、さらに２’−保護基を有していてもよい。また、前記合成方法は、さらに工程（ｂ）で除去した５’−保護基を検出する工程を有してもよい。

水酸基を発色性シリル保護基で保護する２ステップの手順を示す。官能基化されたクロロシランＤＰＭＢＳｉＣｌ中間体を調製する合成条件を示す。官能基化されたクロロシランＤＭＭＢＳｉＣｌ中間体を調製する合成条件を示す。官能基化されたクロロシランＢＴＭＢＳｉＣｌ中間体を調製する合成条件を示す。ディスパースレッドアジド（ＤＲ−Ｎ_３）を調製する合成条件を示す。ディスパースブルーアジド（ＤＢ−Ｎ_３）を調製する合成条件を示す。１−（２−アジドエチルアミノ）アントラセン−９，１０−ジオン（ＡＲ−Ｎ_３）を調製する合成条件を示す。ＭＰ−オルトホルメート中間体を調製する合成条件を示す。５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−ヌクレオシドホスホラミダイト類（４ｄ−１３ｄ）の合成を記載した合成スキームを示す。５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２−シリル−ヌクレオシドホスホラミダイト類（１４ｄ−２３ｄ）の合成を記載した合成スキームを示す。５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２−シリル−ヌクレオシドホスホラミダイト類（２４ｄ−３３ｄ）の合成を記載した合成スキームを示す。５’−ＤＢ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−２’−ＡＣＥ−ｒＧ（ｎ−ｉｂｕ）ホスホラミダイト（３４ｂ）の合成を記載した合成スキームを示す。５’−ＡＲ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−２’−ＡＣＥ−ｒＡ（ｎ−ｉｂｕ）ホスホラミダイト（３５ｂ）の合成を記載した合成スキームを示す。異なる溶媒中におけるＤＲ反応のＵＶ−可視スペクトル重ね図を示す。異なる溶媒中におけるＤＢ反応のＵＶ−可視スペクトル重ね図を示す。異なる溶媒中におけるＡＲ反応のＵＶ−可視スペクトル重ね図を示す。ＳＥＱＩＤＮＯ：１の合成より、カップリングステップ数に対して色素反応をプロットした図を示す。未精製の２’−保護ＳＥＱＩＤＮＯ：１のアニオン交換ＨＰＬＣクロマトグラフを示す。ＳＥＱＩＤＮＯ：２の合成より、カップリングステップ数に対して色素反応をプロットした図を示す。未精製の２’−保護ＳＥＱＩＤＮＯ：２のアニオン交換ＨＰＬＣクロマトグラフを示す。未精製の２’−保護ＳＥＱＩＤＮＯ：３のアニオン交換ＨＰＬＣクロマトグラフを示す。未精製の２’−保護ＳＥＱＩＤＮＯ：４のアニオン交換ＨＰＬＣクロマトグラフを示す。未精製の２’−保護ＳＥＱＩＤＮＯ：５のアニオン交換ＨＰＬＣクロマトグラフを示す。未精製の２’−保護ＳＥＱＩＤＮＯ：６のアニオン交換ＨＰＬＣクロマトグラフを示す。未精製の２’−保護ＳＥＱＩＤＮＯ：７のアニオン交換ＨＰＬＣクロマトグラフを示す。未精製の２’−保護ＳＥＱＩＤＮＯ：８のアニオン交換ＨＰＬＣクロマトグラフを示す。

ここに用いられるように、別に言及しない限り以下の定義を適用するものとする。
「置換基を有していてもよい」という句は、「置換または無置換の」という句と交換可能に用いられる。別に言及しない限り、置換基を有していてもよい基とは、前記基のそれぞれ置換可能な位置に置換基を１つ有してよく、各置換は他のいかなる置換とも独立している。また、置換基類の組み合わせまたは変換は、もしそのような組み合わせが安定な化合物になる場合にのみ許容される。さらに、別に言及しない限り、官能基ラジカル類は独立して選択される。「置換基を有していてもよい」との句が読点「、」で分けられた一連のグループを修飾している場合（例えば、「置換基を有していてもよいＡ、ＢまたはＣ」、または、「何々という置換基を有していてもよいＡ、ＢまたはＣ」）は、前記グループ（例えば、Ａ、ＢおよびＣ）の各々が、置換基を有していてもよいということを意味する。

「発色団」という用語は、好適な波長の光を吸収可能な成分全てを意味する。好適な発色団としては、例えば、アゾ色素（例えば、ディスパースレッド１、ディスパースレッド１３、ディスパースオレンジ１、ディスパースオレンジ３、ディスパースイエロー７、メチルレッド、メチルオレンジ）、アントラキノン系色素（例えば、ディスパースブルー１、アリザリン）、トリフェニルメタン系色素（例えば、マラカイトグリーン、フクシン、クリスタルバイオレット）、クマリン系色素（例えば、７−アミノ−４−メチルクマリン、６，８−ジフルオロ−７−ヒドロキシクマリン）、キサンテン系色素（例えば、フルオレセイン、ナフトフルオレセイン、エオシン、エリトロシン）、ローダミン系色素（例えば、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミン１１０、テトラメチルローダミン、Ｘ−ローダミン）、およびシアニン系色素（例えば、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７）、またはこれら色素の置換誘導体が含まれる。好適には、前記発色団は、可視光波長３５０ｎｍから８００ｎｍの範囲で著しい消散係数（＞５，０００Ｍ^−１ｃｍ^−１）を有する。より好適には、前記発色団は、可視光波長４５０ｎｍから５５０ｎｍの範囲で著しい消散係数（＞１０，０００Ｍ^−１ｃｍ^−１）を有する。また、蛍光または燐光特性をもつ発色団も含まれるが、その場合、吸収光の一部はそれより長波長の光として発光される。

ここで用いられる「脂肪族」または「脂肪族基」の用語は、完全に飽和されているか１つ以上の不飽和単位を含む直鎖または分岐のＣ_１−１２炭化水素鎖、または完全に飽和されているか１つ以上の不飽和単位を含む単環式Ｃ_３−８炭化水素または２環式Ｃ_８−１２炭化水素を意味する。しかし、前記単環式または２環式炭化水素（ここでは「炭素環」または「シクロアルキル」とも称する）は芳香族ではなく、さらに、分子の他の部分と結合するための結合点を１つ有し、前記２環式環系の個々の環はどれも３−７員環である。例えば、好適な脂肪族基としては、直鎖または分岐のアルキル、アルケニル、アルキニル、およびそれらの組み合わせ、例えば、（シクロアルキル）アルキル、（シクロアルケニル）アルキル、または（シクロアルキル）アルケニルが含まれるが、これらに限定されるものではない。また、トリアルキルシリルオキシなどの、置換モノ−、ジ−およびトリ−置換シリルオキシ類（アルキルシリルオキシ）も含まれるが、どの場合でも前記アルキル基は全て同じであるかまたは異なっていてもよい。例えば、トリメチルシリルオキシ、トリエチルシリルオキシ、トリプロピルシリルオキシ、トリイソプロピルシリルオキシ、ｔ−ブチルジメチルシリルオキシなどが含まれる。また、ある実施形態では、アルキルシリルオキシはＣ_１−４アルキルシリルオキシを意味する。

単独で、または相対的に大きい部分構造の一部として用いられる、「アルキル」、「アルコキシ」（または、アルキルオキシとも称する）、「ヒドロキシアルキル」、「アルコキシアルキル」および「アルコキシカルボニル」の用語は、１乃至１２個の炭素原子を含有する直鎖および分岐鎖両方を含む。例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチルなど、および、対応するアルコキシ類似体も含まれる。単独で、または相対的に大きい部分構造の一部として用いられる、「アルケニル」および「アルキニル」の用語は、２乃至１２個の炭素原子を含有する直鎖および分岐鎖両方を含む。

「ハロアルキル」、「ハロアルケニル」および「ハロアルコキシ」という用語は、一個以上のハロゲン原子で置換されていてもよいアルキル、アルケニル、またはアルコキシを意味するが、「ハロゲン」または「ハロ」という用語はＦ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩを意味する。

「ヘテロ原子」という用語は、窒素、酸素、またはイオウ原子を意味し、さらに窒素原子やイオウ原子の酸化体、および塩基性窒素が４級化された形態も含む。

単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる、「アリール」という用語は、全体で５個から１４個の環員数をもつ単環式、２環式または３環式の炭素環式環系を示し、前記環系のすくなくとも１つの環は芳香族であり、前記環系のそれぞれの環は３個から８個の環員数を含む。「アリール」という用語は、「アリール環」という用語と入れ替えて用いてよい。「アラルキル」または「アリールアルキル」という用語は、１つのアリールで置換されたアルキル基を示す。「アラルコシ」または「アリールアルコキシ」という用語は、１つのアリールで置換されたアルコキシ基を示す。「アリールシリルオキシ」は、モノ、ジおよびトリ−置換されたシリルオキシ基類（例えば、トリアリールシリルオキシ）を示す。モノアリールまたはジアリールで置換されたシリル基では、１つ以上の他の基（例えば、アルキル）によって置換されてもよいことは理解されよう。

ここに用いられるように、１つの環がｘ乃至ｙ個の員数を含む、またはｘ乃至ｙ個の員数からなると定義される場合、前記環を構成する原子（例えば、炭素またはヘテロ原子）の総数は、ｘ、ｙ、またはｘとｙとの間の整数となる。例えば、３乃至８個の炭素またはヘテロ原子を有する環は、３、４、５、６、７または８個の環員数を有する環であってよい。

ここに用いられる「ヘテロシクロアルキル」、「ヘテロサイクル」、「ヘテロサイクリル」または「ヘテロサイクリック」という用語は、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、または１４個の環員数をもつ単環式、２環式、または３環式環系を意味する。なお、前記環系において１つ以上の環構成員はヘテロ原子であり、前記環系のそれぞれの環は、３、４、５、６、７または８個の環員数をもち、非芳香族である。

単独でまたは他の用語と組み合わせて用いられる、「ヘテロアリール」という用語は、全体で５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３または１４個の環員数をもつ単環式、２環式または３環式の環系を示し、１）前記環系のすくなくとも１つの環は芳香族であり、２）前記環系の少なくとも１つの環は１つ以上のヘテロ原子を含み、および３）前記環系のそれぞれの環は３、４、５、６または７個の環員数を有する。「ヘテロアリール」という用語は、「ヘテロアリール環」または「ヘテロ芳香族」という用語と入れ替えて用いてよい。ヘテロアリール環の例としては、２−フラニル、３−フラニル、Ｎ−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、５−イミダゾリル、３−イソキサゾリル、４−イソキサゾリル、５−イソキサゾリル、２−オキサジアゾリル、５−オキサジアゾリル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、１−ピラゾリル、３−ピラゾリル、４−ピラゾリル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ピリミジル、３−ピリダジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、５−テトラゾリル、２−トリアゾリル、５−トリアゾリル、２−チエニル、３−チエニル、カルバゾリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチエニル、ベンゾフラニル、インドリル、キノリニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾオキサゾリル、ベンズイミダゾリル、イソキノリニル、インダゾリル、イソインドリル、アクリジニル、およびベンゾイソキサゾリルが含まれるが、これらに限定されるものではない。また、「ヘテロアラルキル」という用語は、１個のヘテロアリールで置換されたアルキル基を示す。「ヘテロアリールアルコキシ」という用語は、１個のヘテロアリールで置換されたアルコキシ基を示す。

アリール基（アラルキル、アラルコキシ、アリールオキシアルキルなどを含む）またはヘテロアリール基（ヘテロアラルキル、ヘテロアリールアルコキシなどを含む）は、１個以上の置換基を有していてもよい。アリール、ヘテロアリール、アラルキルまたはヘテロアラルキル基の置換されていない炭素原子上の好適な置換基としては、ハロゲン、ハロアルキル、−ＣＦ_３、−Ｒ、−ＯＲ、−ＳＲ、１，２−メチレンジオキシ、１，２−エチレンジオキシ、アシルオキシなどの保護されたＯＨ、フェニル（または、Ｐｈ）、Ｒで置換されたＰｈ、−Ｏ（Ｐｈ）、Ｒで置換された−Ｏ−（Ｐｈ）、−ＣＨ_２（Ｐｈ）、Ｒで置換された−ＣＨ_２（Ｐｈ）、−ＣＨ_２ＣＨ_２（Ｐｈ）、Ｒで置換された−ＣＨ_２ＣＨ_２（Ｐｈ）、−ＮＯ_２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＲＣＯ_２Ｒ、−ＮＲＮＲＣ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲ−ＮＲＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＲＮＲＣＯ_２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＣＯ_２Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｓ（Ｏ）_２Ｒ、−ＳＯ_２Ｎ（Ｒ）_２、−Ｓ（Ｏ）Ｒ、−ＮＲＳＯ_２Ｎ（Ｒ）_２、−ＮＲＳＯ_２Ｒ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ（Ｒ）_２、−（ＣＨ２）_ｙＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、−（ＣＨ_２）_ｙＲ、−（ＣＨ_２）_ｙＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ、−（ＣＨ_２）_ｙＮＨＣ（Ｏ）ＯＲ、−（ＣＨ_２）_ｙＮＨＳ（Ｏ）Ｒ、−（ＣＨ_２）_ｙＮＨＳＯ_２Ｒ、または−（ＣＨ_２）_ｙＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ（（Ｖ）_ｚ−Ｒ）（Ｒ）から選ばれる。ここで、各Ｒは、水素、置換基を有していてもよい脂肪族（好適にはＣ_５−６）、無置換のヘテロアリールまたはヘテロサイクリック環（好適にはＣ_５−６）、フェニル（またはＰｈ）、−Ｏ（Ｐｈ）、または−ＣＨ_２（Ｐｈ）−ＣＨ_２（Ｐｈ）の中からそれぞれ独立して選ばれ、ｙは０乃至６、ｚは０乃至１、およびＶはリンカー基である。Ｒが脂肪族である場合、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−４脂肪族）、−Ｎ（Ｃ_１−４脂肪族）_２、−Ｓ（Ｏ）（Ｃ_１−４脂肪族）、−ＳＯ_２（Ｃ_１−４脂肪族）、ハロゲン、（Ｃ_１−４脂肪族）、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ_１−４脂肪族）、−ＮＯ_２，−ＣＮ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＯ_２（Ｃ_１−４脂肪族）、−Ｏ−（ハロＣ_１−４脂肪族）または−ハロ（Ｃ_１−４脂肪族）の中から選ばれる１個以上の置換基によって置換されていてもよく、各Ｃ_１−４脂肪族は無置換である。

脂肪族基または非芳香族ヘテロサイクリック環は、１個以上の置換基を有していてもよい。脂肪族基のまたは非芳香族ヘテロサイクリック環の飽和炭素上にある好適な置換基としては、アリール基またはヘテロアリール基の不飽和炭素について上記した置換基、および以下に記した＝Ｏ、＝Ｓ、＝ＮＮＨＲ、＝ＮＮ（Ｒ）_２、＝Ｎ−、＝ＮＮＨＣ（Ｏ）Ｒ、＝ＮＮＨＣＯ_２（アルキル）、＝ＮＮＨＳＯ_２（アルキル）、または＝ＮＲのなかから選ばれる。ここで、各Ｒは、水素または置換基を有していてもよい脂肪族（好適にはＣ_１−６）から、それぞれ独立して選ばれる。Ｒが脂肪族であるときは、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−４脂肪族）、−Ｎ（Ｃ_１−４脂肪族）_２、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ_１−４脂肪族）、−ＮＯ_２，−ＣＮ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＯ_２（Ｃ_１−４脂肪族）、−Ｏ−（ハロＣ_１−４脂肪族）または−ハロ（Ｃ_１−４脂肪族）の中から選ばれる１個以上の置換基によって置換されていてもよく、各Ｃ_１−４脂肪族は無置換である。

非芳香族ヘテロサイクリック環の窒素原子上の置換基類は、−Ｒ、−Ｎ（Ｒ）_２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_２Ｃ（Ｏ）Ｒ、−ＳＯ_２Ｒ、−ＳＯ_２Ｎ（Ｒ）_２、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ）_２、−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ（Ｒ）_２またはＮＲＳＯ_２Ｒから選ばれる。ここで、各Ｒは、水素、置換基を有していてもよい脂肪族（好適にはＣ_１−６）、置換基を有していてもよいフェニル（またはＰｈ）、置換基を有していてもよい−Ｏ（Ｐｈ）、−ＣＨ_２（Ｐｈ）、置換基を有していてもよい−ＣＨ_２ＣＨ_２（Ｐｈ）、または、無置換のヘテロアリールまたはヘテロサイクリック環（好適には５−６員環）の中から、それぞれ独立して選ばれる。ＲがＣ_１−６脂肪族基またはフェニル環であるときは、−ＮＨ_２、−ＮＨ（Ｃ_１−４脂肪族）、−Ｎ（Ｃ_１−４脂肪族）_２、ハロゲン、−（Ｃ_１−４脂肪族）、−ＯＨ、−Ｏ−（Ｃ_１−４脂肪族）、−ＮＯ_２，−ＣＮ、−ＣＯ_２Ｈ、−ＣＯ_２（Ｃ_１−４脂肪族）、−Ｏ−（ハロＣ_１−４脂肪族）または−ハロ（Ｃ_１−４脂肪族）の中から選ばれる１個以上の置換基によって置換されていてもよく、各Ｃ_１−４脂肪族は無置換である。

ここで用いられる「ヌクレオチド」という用語は、リン酸化された糖にＮ−グリコシド結合したヘテロサイクリックな窒素系塩基を示す。ヌクレオチドには、天然型の塩基（標準塩基）および当分野においてよく知られた修飾塩基が含まれる。このような塩基類は、一般的にヌクレオチド糖部分の１’位に位置している。普通、ヌクレオチド類は、塩基、糖およびリン酸基を有する。ヌクレオチド類は、糖、リン酸基、および／または塩基の部分構造において無修飾であるかまたは修飾することができる。また、こうしたヌクレオチド類は、ヌクレオチド類似体、修飾ヌクレオチド、非天然型ヌクレオチド、非標準ヌクレオチドなどと交換可能に称されもする。核酸中に導入できる化学修飾された核酸塩基類および他の天然型核酸塩基類には、イノシン、プリン、ピリジン−４−オン、ピリジン−２−オン、フェニル、シュードウラシル、２，４，６−トリメトキシベンゼン、３−メチルウラシル、ジヒドロウラシル、ナフチル、アミノフェニル、５−メチルシチジンなどの５−アルキルシチジン類、リボチミジンなどの５−アルキルウリジン類、５−ブロモウリジンなどの５−ハロウリジン、６−アザピリミジン類、または６−メチルウリジンなどの６−アルキルピリミジン類、プロピン、ケオシン、２−チオウリジン、４−チオウリジン、ウイブトシン、ウイブトキソシン、４−アセチルシチジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、５’−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン、ベータ−Ｄ−ガラクトシルケオシン、１−メチルアデノシン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアノシン、３−メチルシチジン、２−メチルアデノシン、２−メチルグアノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、７−メチルグアノシン、５−メトキシアミノメチル−２−チオウリジン、５−メチルアミノメチルウリジン、５-メチルカルボニルメチルウリジン、５−メチルオキシウリジン、５−メチル−２−チオウリジン、２−メチルチオ−Ｎ−６−イソペンテニルアデノシン、ベータ−Ｄ−マンノシルケオシン、ウリジン−５−オキシ酢酸、２−チオシチジン、スレオニン誘導体などが含まれる。ここで、「修飾塩基類」とは、１’位がアデニン、グアニン、シトシン、およびウラシルまたはその等価物以外のヌクレオチド塩基類を意味する。このような塩基類は、酵素作用をする核酸分子の触媒中心部の中、および／または、前記核酸分子の基質結合領域中などの任意の位置で用いることができる。

ここで用いられる「ヌクレオシド」という用語は、糖とＮ−グリコシド結合したヘテロサイクリックな窒素系塩基を示す。ヌクレオシドには、天然型の塩基（標準塩基）および当分野においてよく知られた修飾塩基が含まれる。このような塩基類は、一般的にヌクレオシド糖部分の１’位に位置する。普通、ヌクレオシド類は、塩基および糖を有する。ヌクレオシド類は、糖、および／または塩基の部分構造で無修飾であるかまたは修飾することができる。また、こうしたヌクレオシド類は、ヌクレオシド類似体、修飾ヌクレオシド、非天然型ヌクレオシド、非標準ヌクレオシドなどと交換可能に称されもする。核酸中に導入できる化学修飾された核酸塩基類および他の天然型核酸塩基類には、イノシン、プリン、ピリジン−４−オン、ピリジン−２−オン、フェニル、シュードウラシル、２，４，６−トリメトキシベンゼン、３−メチルウラシル、ジヒドロウラシル、ナフチル、アミノフェニル、５−メチルシチジンなどの５−アルキルシチジン類、リボチミジンなどの５−アルキルウリジン類、５−ブロモウリジンなどの５−ハロウリジン、６−アザピリミジン類、または６−メチルウリジンなどの６−アルキルピリミジン類、プロピン、ケオシン、２−チオウリジン、４−チオウリジン、ウイブトシン、ウイブトキソシン、４−アセチルシチジン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウリジン、５’−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウリジン、５−カルボキシメチルアミノメチルウリジン、ベータ−Ｄ−ガラクトシルケオシン、１−メチルアデノシン、１−メチルイノシン、２，２−ジメチルグアノシン、３−メチルシチジン、２−メチルアデノシン、２−メチルグアノシン、Ｎ６−メチルアデノシン、７−メチルグアノシン、５−メトキシアミノメチル−２−チオウリジン、５−メチルアミノメチルウリジン、５-メチルカルボニルメチルウリジン、５−メチルオキシウリジン、５−メチル−２−チオウリジン、２−メチルチオ−Ｎ−６−イソペンテニルアデノシン、ベータ−Ｄ−マンノシルケオシン、ウリジン−５−オキシ酢酸、２−チオシチジン、スレオニン誘導体などが含まれる。ここで、「修飾塩基類」とは、１’位にアデニン、グアニン、シトシン、およびウラシルまたはその等価物以外のヌクレオシド塩基類を意味する。このような塩基類は、酵素作用をする核酸分子の触媒中心部の中、および／または、前記核酸分子の基質結合領域中などの任意の位置で用いることができる。

ここで用いられる「アベイシック」という用語は、塩基をもたないか、または１’位にある塩基の代わりに他の化学官能基をもつ糖の部分構造を示す。例えば、特許文献５参照。

ここで用いられる「無修飾ヌクレオシド」という用語は、β−Ｄ−リボフラノースの１’位炭素に結合したアデニン、シトシン、グアニン、チミン、およびウラシル塩基類のなかの１塩基を示す。

ここで用いられる「修飾ヌクレオシド」という用語は、無修飾ヌクレオチド塩基、糖および／またはリン酸基の化学構造に修飾が施された任意のヌクレオチド塩基を示す。

ここで用いられる「オリゴヌクレオチド」という用語は、２個以上のヌクレオチドを有する分子を示す。オリゴヌクレオチドは、リボ核酸、デオキシリボ核酸、およびそれらの組み合わせおよび／またはそれらを化学修飾した誘導体を有してもよい。全てのオリゴヌクレオチドは、酵素作用をする核酸、アンチセンス核酸、アプタマー、デコイ、アロザイム、ｓｓＲＮＡ、２本鎖ｒＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、３重鎖オリゴヌクレオチド、および２，５−Ａキメラなどの核酸類を有してもよい。

本発明は、蒸留で容易に精製される液状クロロシランを供給する方法を提供するが、このクロロシランは所望の保護基を製造するために蒸留後に発色団を用いて誘導体化可能な官能基構造を有する。この方法は、第１工程において、官能基化したクロロシラン中間体を好適に保護したヌクレオシドと反応させ、クロマトグラフィーにより所望の生成物を精製し、続いて、第２工程において、前記発色団を５’−シリル保護ヌクレオシドと反応させ、クロマトグラフィーにより所望の生成物を精製し、高収率で５’−発色性シリル保護ヌクレオシドを得る工程を必要とするものである。

また、本発明は、ＲＮＡ合成が適切に進行しているかどうかを定量的に測定するために可視的な手段を提供するとともに、５’−シリル−２’−オルトエステルＲＮＡ合成戦略用にカップリング効率をほぼ定量的に測定するための比色アッセイを可能にする。さらに、前記発色性シリル基は、迅速なフッ素イオンによる脱保護化および高効率なカップリング収率などといった今ある５’−シリル保護基類の利点を保つとともに、現在の５’−シリル保護基類の選択性を保ちながら５’−水酸基上に導入される。全ての５’−発色性シリル保護ホスホラミダイト組成物は、シロップ状の樹脂とは対照的に固体の泡状物として存在し、その結果、計量や移し替えなどの取り扱いが簡便である。また、本発明の全ての新規シリル保護基組成物は、入手容易で（バルクとしても）比較的低コストな原材料から調製される。

本発明の組成物および方法は、化学的ＤＮＡ合成と同様に化学的ＲＮＡ合成にも適用できる。この場合、現在の５’−ＤＭＴ保護基の化学に対してさらに優れた利点を有する。ＤＭＴ基に対してかなり強い酸脱保護条件を用いた場合、合成中にオリゴヌクレオチドのデピュリネーションが小さいがかなりの程度で起きえることがよく知られている。これらのデピュリネーションの部位は、切り出し工程および核酸塩基の脱保護工程中、鎖が切断される部位となり、その結果、粗生成物の混合物を複雑化するとともに完全な長さをもつオリゴヌクレオチドの収率を低下させる。非酸性フッ素イオンに不安定な５’−シリルエーテルを用いる方法は、上記問題を回避するもので、合成遺伝子の調製に通常用いられる長いオリゴヌクレオチド類（１００個を超えるヌクレオチド）を合成するために特に重要な方法である。

また、本発明を、非ヌクレオシド水酸基類、例えば、単純なアルコール類、ポリオール類、糖類、炭水化物類、ステロイド類、ビタミン類、および他の天然物類の保護に使用できることは、当業者によって理解されるであろう。前記５’−発色性シリル保護基類は、温和な塩基性条件下においてフッ素イオンに対し速やかに反応するように設計され最適化されてきた。こうして、５’−発色性シリル保護基類は、ＴＢＤＭＳなどの比較的安定なシリルエーテル類を含む様々な他の保護基類と組み合わせて有効に用いてよく、ＴＢＤＭＳを脱離させない条件下で５’−発色性シリル保護基類を選択的に脱保護してもよい。これとは別に、比較的安定なシリルエーテル類と化学的に相いれない基質類に対して、５’−発色性シリル保護基類を保護基として用いてもよい。さらに、本発明の発色性シリル保護基類は、特別な染料または機器を用いる以外それ自身ほとんど検出できない基質類に対し、可視的検出可能なまたは追跡可能な特性を付与するために用いることができる。

本発明は、式（Ｉ）で表される化合物を提供する。

で表される中間体を、一般式（ＩＩＩ）

で表される中間体と反応させる工程を含む。ここでＬ_１は、アジド、アルキン、アルケン、マレイミド、ニトリルオキシド、アルデヒドまたはイミンからなる群より選ばれ、Ｒ_１、Ｒ_２およびＸは、上記式（Ｉ）で記載されるのと同じである。前記反応によりＬ_１およびＬ_２が反応してＱとなる、式（Ｉ）で表される生成物が得られる。好ましくは、Ｑは、Ｌ_１とＬ_２との共有結合反応で生じる任意の基である。好適な実施形態としては、Ｌ_１およびＬ_２はアジドまたはアルキンであり、その結果生成するＱはトリアゾールである。

本発明の保護ヌクレオシド類の合成方法はここに開示され、当業者に明確な方法である。好適な方法としては、金属触媒１，３−双極子環化付加反応、オレフィンメタセシスおよびヘテロＤｉｅｌｓ−Ａｌｄｅｒ系の反応が含まれる。こうしたタイプの反応は、通常「クリック」反応として知られている（非特許文献４参照）。「クリック」化学の１例は、１，２，３−トリアゾールを得るために、銅（Ｉ）塩存在下アジド化合物をアルキン化合物と反応させる、Ｈｕｉｓｇｅｎの１，３−双極子環化付加反応である。もし、クロロシラン中間体上に選ばれる官能基類が、クロロシラン自身に対して反応性をもたないとともに、オリゴヌクレオチド合成過程で、迅速な脱保護に用いるフッ素イオンに対し必要な反応性をもつのであれば、別の手段または方法を用いてもよい。さらに、前記発色団は、遊離の３’−水酸基（ホスホラミダイトへの次の変換部位）と反応しないとともに既に導入されたどの保護基類（例えば、２’−ＡＣＥまたは核酸塩基保護基類）にも影響しないように、前記５’−シリル保護ヌクレオシドと共有結合して反応しなければならない。

図１はアジド−アルキン「クリック」反応を、５’−シリル保護ヌクレオシドに発色団を導入するのに適用した方法を示す。この例では、発色団成分はアジドを有し、５’−シリル保護基はアルキンを有する。銅（Ｉ）で触媒される環化付加反応により所望の５’−発色性シリル保護ヌクレオシドが得られる。この５’−発色性シリル保護ヌクレオシドから、当業者に良く知られた標準的な条件下で所望のホスホラミダイト組成物が次に得られる。

１例として、以下に５’−ディスパースレッド−シリル保護基（ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２ｓｉｌ）について述べる。

ここで、「Ｙ」は保護化されるアルコール基であり、ＲＮＡまたはＤＮＡ合成の場合には、Ｙは無修飾のまたは修飾されたヌクレオシドまたはアベイシックである。この新規保護基は、標準的なホスホラミダイト合成法に安定であり、５’−シリル−２’−オルトエステルＲＮＡ合成化学に用いられる従来の試薬類に対しても安定である。この保護基は、フッ素イオンにより３５秒という短時間で簡便に除去され、各合成サイクルのステップカップリング効率を測定するために分光光度的に容易に検出可能なディスパースレッド（ＤＲ）発色団を放出する。以下に、本発明の５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２Ｓｉｌ−２’−ＡＣＥ−リボヌクレオチドアミダイト類の一般構造を示す。

ここで、「Ｒ_１」はアルキル基またはアリール基であるか、またはヘテロ原子で置換されたアルキル基またはアリール基であるが、メチルまたは２−シアノエチルが好ましく、特にメチルが好ましい。「Ｒ_２」はアルキル基またはアリール基であるか、またはヘテロ原子で置換されたアルキル基またはアリール基であるが、イソプロピルが好ましい。「Ｒ_３」はアルキル基またはアリール基であるか、またはヘテロ原子で置換されたアルキル基またはアリール基であるが、２’−アセトキシエチルが好ましい。「Ｂａｓｅ（塩基）」は、オリゴヌクレオチド合成に用いるために適宜保護化された、アデニン、グアニン、ウラシル、チミン、またはシトシンなどの一般的な核酸塩基を表すか、または２−アミノプリン、キサントシン、イミダゾール、ベンズイミダゾール、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヨードウラシル、７−デアザ−アデニン、７−デアザ−グアニン、シュードウラシル、および６，６−ジメチルアデニンなどの一般的ではない核酸塩基を表すが、これらに限定されるものではない。

５’− ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２Ｓｉｌ保護ホスホラミダイト類を用いるオリゴヌクレオチド合成は、先行技術（非特許文献５乃至８および特許文献６参照）に記載される５’−シリル−２’−オルトエステルＲＮＡ合成用の全ての条件に正確に従って行われる。

リン酸保護基の脱保護、エキソサイクリックアミン類の脱保護、担体からの切り出し、および２’−オルトエステル基の最終脱保護は、全て先に報告した方法に従って行われる。先に述べたように、着色した５’−脱保護溶液は定量のために収集してよいが、もし合成が正常に進行していることを眼で見て確認するだけでよければ、収集する必要はない。収集した発色団の定量は、合成機器から得られた溶液を希釈し、用いた特定の発色団および希釈に用いた溶液に特有な、適切な波長での吸光度を測定することにより達成される。例えば、もしディスパースレッド発色団をアセトニトリルで希釈する場合、溶液のλmaxは４７０ｎｍであり、水では４９０ｎｍであり、０．５ＭＨ_２ＳＯ_４では５４０ｎｍである。

特定のステップについてのカップリング効率は、そのステップの前に行ったカップリングステップの吸光度と、現在行っているカップリングステップの吸光度との比から求められる。全ヌクレオチド合成の平均ステップ収率は、以下の式より計算される。
平均ステップ収率％＝（最終カップリングステップの吸光度／第１カップリングステップの吸光度）^１／ｎ × １００
ここで、「ｎ」はカップリングステップの全体数である。

以下の実施例は本発明の実施形態を例証する目的のためだけに記載されるものであり、いかなる意味においても本発明の範囲を限定するものではない。

Ａ．ＤＰＭＢＳｉＣｌの合成
ジイソプロポキシジクロロシラン（１）：この原料はＣｈａｐｐｅｌｏｗの方法（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９６０，２５，４３５−４５９）に従って合成した。２−プロパノール（８８７ｇ，１４．８ｍｏｌ）をＡｒ雰囲気下３時間かけてゆっくりとＳｉＣｌ_４（１４７５ｇ，８．７ｍｏｌ）に０℃にて加えた。反応から発生したＨＣｌガスは２５％（ｗ/ｖ）ＫＯＨ水溶液にバブリングして通して中和した。この溶液を３時間反応させ、この間Ａｒを３０分間溶液にバブリングした。続いて、この溶液を、３ｍｍガラスビーズを充填した３０ｃｍＨｅｍｐｌｅカラムで蒸留した（浴温：１８０℃、蒸留温度：１２０℃）。得られたフラクションは全て^１ＨＮＭＲによって分析した。フラクションＡ：４１１ｇ（９５％モノ体、５％ジ体）；フラクションＢ：１４０ｇ（２２％モノ体、７６％ジ体、２％トリ体）；フラクションＣ：５１１ｇ、収率２７％（９５％ジ体、５％トリ体）；およびフラクションＤ：３９３ｇ（５０％ジ体、５０％トリ体）。なお、フラクションＢとＤは、別の操作で不純物を除いたフラクションと合して後日再蒸留を行った。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d モノ体: 4.53 (h, J= 6.2 Hz, 1 H), 1.31 (d, J= 6.2 Hz, 6 H). ジ体 4.41 (h, J = 6.2 Hz, 2 H), 1.26 (d, J= 6.2 Hz, 12 H); トリ体 4.29 (h, J= 6.2 Hz, 3 H), 1.21(d, J= 6.2 Hz, 12 H). ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d ジ体 69.27, 24.85。

ジイソプロピル−（２−メチル−３−ブチン−２−オキシ）クロロシラン（ＤＰＭＢＳｉＣｌ）：乾燥させた３頚フラスコに、化合物１（６９６ｇ、３．２ｍｏｌ）、ＣＨ_２Ｃｌ_２（５００ｍｌ）およびＥｔ_３Ｎ（５５２ｇ，５．４ｍｏｌ）を加えた。このフラスコをＡｒ雰囲気下に置き、オーバーヘッドスターラーを備え付けて０℃に冷やした。２−メチル−３−ブチン−２−オール（２７０ｇ，３．２ｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（１２００ｍｌ）溶液を、先に調製した溶液に４時間かけてゆっくりと加えた。この反応を０℃に保った後、ゆっくりと１５℃にまで昇温した。１８時間撹拌後、塩をろ過して除き、明褐色の溶液を濃縮した。こうして得られた油状物を乾燥させた２Ｌのフラスコにろ過して入れ、真空蒸留した（浴温：６３℃、真空度：６３ｍＴｏｒｒ、蒸留温度：４０℃）。得られたフラクションは全て^１ＨＮＭＲによって分析した。フラクションＡ：１８７ｇ（少量の不純物を含む生成物）；フラクションＢ：４６７ｇ、収率５５％（純粋な生成物）。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 4.33 (h, J= 6.2 Hz, 2 H), 2.44 (s, 1 H), 1.60 (s, 6 H), 1.23 (d, J= 6.2 Hz, 12 H), ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 87.32, 71.30, 69.04, 67.69, 32.13, 25.10。

Ｂ．ＤＭＭＢＳｉＣｌの合成
ジメチル−（２−メチル−３−ブチン−２−オキシ）クロロシラン（ＤＭＭＢＳｉＣｌ）：乾燥させた３頚フラスコに、ジクロロジメチルシラン（６８４ｇ、５．３ｍｏｌ）、ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０００ｍｌ）およびＥｔ_３Ｎ（９４１ｇ，９．０１ｍｏｌ）を加えた。このフラスコをＡｒ雰囲気下に置き、オーバーヘッドスターラーを備え付けて０℃に冷やした。２−メチル−３−ブチン−２−オール（４４６ｇ，５．３ｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（５００ｍｌ）溶液を、先に調製した溶液に３時間かけてゆっくりと加えた。この反応を０℃に保った後、ゆっくりと１５℃にまで昇温した。２４時間撹拌後、塩をろ過して除き、明褐色の溶液を濃縮した。こうして得られた油状物を乾燥させた２Ｌのフラスコにろ過して入れ、分別蒸留した（浴温：４０℃、真空度：７３ｍＢａｒ、蒸留温度：２６℃）。初期のフラクションは廃棄して主なフラクションを残した（４２１ｇ、２．０６ｍｏｌ、収率３９％）。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 2.47 (s, 1 H), 1.56 (s, 6 H), 0.52 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 87.76, 72.14, 68.52, 32.62, 4.39。

Ｃ．ＢＴＭＢＳｉＣｌの合成
ビス−トリメチルシリルオキシ−（２−メチル−３−ブチン−２−オキシ）クロロシラン（ＢＴＭＢＳｉＣｌ）：乾燥させた３頚フラスコに、ビス−トリメチルシリルオキシジクロロシラン（９０９ｇ、３．２８ｍｏｌ）、ＣＨ_２Ｃｌ_２（１０００ｍｌ）およびＥｔ_３Ｎ（５６３ｇ，５．５７ｍｏｌ）を加えた。このフラスコをＡｒ雰囲気下に置き、オーバーヘッドスターラーを備え付けて０℃に冷やした。２−メチルー３−ブチン−２−オール（２７６ｇ，３．２８ｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（７４０ｍｌ）溶液を、先に調製した溶液に５時間かけてゆっくりと加えた。この反応を０℃に保った後、ゆっくりと１５℃にまで昇温した。４８時間撹拌後、生成した塩をろ過して除き、明褐色の溶液を濃縮した。こうして得られた油状物を乾燥させた２Ｌのフラスコにろ過して入れ、分別蒸留した（浴温：６５℃、真空度：８６ｍＴｏｒｒ、蒸留温度：３５℃）。初期のフラクションは廃棄して主なフラクションを残した（５２１ｇ、１．６ｍｏｌ、収率４９％）。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 2.41 (s, 1 H), 1.57 (s, 6 H), 0.15 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 87.41, 71.27, 68.62, 32.19, 1.59。

Ｄ．ＤＲ−Ｎ_３の合成
Ｎ−エチル−Ｎ−（２−アジドエチル）アニリン（２）：Ｎ−エチル−（２−アミノ）エタノール（９１．５ｇ、５５４ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（１４００ｍｌ）に溶かし、Ｅｔ_３Ｎ（１９２．４ｍｌ，１３８５ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液を０℃に冷やし、メタンスルホニルクロリド（５１．８ｍｌ，６６５ｍｍｏｌ）を３０分間かけてゆっくりと加えた。０．５時間後に、反応溶液をＣＨ_２Ｃｌ_２（５００ｍｌ）で希釈し、２％ＨＣｌ（５００ｍｌ）で２回、水（５００ｍｌ）、および飽和食塩水（５００ｍｌ）で続けて洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４パッドに通し、減圧濃縮して明褐色の油状物（１３５ｇ、５５４ｍｍｏｌ、１００％）を得た。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 7.25-7.19 (m, 2 H), 6.73-6.68 (m, 3 H), 4.33 (t, J= 6.2 Hz, 2 H), 3.65 (t, J= 6.2 Hz, 1 H), 3.41 (q, J= 7.1 Hz, 2 H), 2.96 (s, 3 H), 1.16 (t, J= 7.1 Hz, 3 H)。

アジ化ナトリウム（１７．４ｇ、２６７ｍｍｏｌ）を上記の油状物に加え、ＤＭＳＯ（６００ｍｌ）で希釈した。反応フラスコを７０℃に加熱して１．５時間撹拌してから室温にまで冷やした。この溶液を水（１５００ｍｌ）で希釈し、Ｅｔ_２Ｏ（６００ｍｌ）で３回抽出した。得られた有機層を合して水（８００ｍｌ）で３回洗浄し、続いて飽和食塩水（８００ｍｌ）で１回洗浄した。この有機層をＮａ_２ＳＯ_４パッドに通し、減圧濃縮して化合物２を粘性のある油状物（１０１ｇ、５３１ｍｍｏｌ、９６％）として得た。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 7.31-7.22 (m, 2 H), 6.77-6.69 (m, 3 H), 3.56-3.42 (m, 6 H), 1.19 (t, J= 10.6 Hz, 3 H)。

Ｎ−エチル−Ｎ−（２−アジドエチル−４−（４−ニトロフェニルアゾ）アニリン（ＤＲ−Ｎ_３）：２Ｌのフラスコ中、濃硫酸（１００ｍｌ）を０℃に冷やし、そこにＮａＮＯ_２（４０．７ｇ、５９０ｍｍｏｌ）を１５分間かけて少しずつ加えた。得られた明紫色の溶液を、さらに１０分撹拌し、ＡｃＯＨ（１０００ｍｌ）およびＰｒＯＨ（３００ｍｌ）により希釈した。反応を０℃に保ち、４−ニトロアニリン（８１．５ｇ、５９０ｍｍｏｌ）を１５分間かけて加えた。得られた黄色がかった褐色溶液を２時間撹拌した後、以下に記載した溶液に加えた。

オーバーヘッドスターラーを装着した５Ｌの３頚フラスコに、化合物２（１１２．３ｇ、５９０ｍｍｏｌ）、ＮａＯＡｃ（１８０ｇ）、ＡｃＯＨ（８００ｍｌ）および水（８００ｍｌ）を加え、０℃に冷やした。上記のジアゾニウム溶液を分別ロートに移し、このアジド溶液に２０分間かけてゆっくりと加えた。この操作によって、速やかに赤色物質が溶液から沈殿した。この溶液を、続いて２０％（ｗ/ｖ）ＮａＯＡｃ水溶液（１Ｌ）で希釈し、さらに３時間０℃において撹拌した。得られた赤色のペースト状物をろ過し、水（８Ｌ）で洗浄し、２０６．５ｇを得た。この物質をＣＨ_２Ｃｌ_２（１２００ｍｌ）に溶かし、水（８００ｍｌ）で５回洗浄した。水層を合してＣＨ_２Ｃｌ_２（３００ｍｌ）で１回再抽出を行い、得られた有機層を合して飽和食塩水（１０００ｍｌ）で洗浄した。この有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、ろ過後、光沢のある赤色の固体を得た。熱エタノール（９００ｍｌ）から５回再結晶を行った。固体をろ過し、冷エタノールで洗い、真空デシケーターで終夜乾燥して鈍い赤色固体を得た（１５０．８ｇ、７５％）。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.30 (d, J= 14.1 Hz, 2 H), 7.91 (d, J = 9.5 Hz, 2 H), 7.84(d, J= 7.8 Hz, 2 H), 6.72 (d, J= 10 .1 Hz, 2 H), 3.68-3.46 (m, 6 H), 1.25 (t, J= 7.1 Hz, 3 H); ¹³C NMR (CD ₃CN, 75.5 Hz) d 156.90, 150.60, 147.32, 143.86, 126.27, 124.62, 122.65, 111.46, 49.49, 48.93, 45.83, 12.26。

Ｅ．ＤＢ−Ｎ_３の合成
Ｎ−エチル−Ｎ−（２−アジドエチル）−４−（５−ニトロ−２−トリアゾール−アゾ）アニリン：ニトロ化濃硫酸（４．１ｍｌ、２０．５４ｍｍｏｌ）の溶液を、ＡｃＯＨ／ＰｒＯＨ６：１の溶液（７０ｍｌ）に０℃にてゆっくりと加えた。３０分間撹拌後、２−アミノー５−ニトロトリアゾール（）２．６０ｇ、１７．８６ｍｍｏｌ）を３０分間かけて少量ずつゆっくりと加えた。この溶液をさらに５０分間撹拌してから以下に述べる溶液にゆっくりと加えた。
別のフラスコ中、化合物２（４．９３ｇ、２５．９ｍｍｏｌ）を水（１２０ｍｌ）、ＡｃＯＨ（５ｍｌ）および濃塩酸（１ｍｌ）で希釈した。この溶液を０℃に冷やし、上記のジアゾニウム化合物溶液を１５分間かけて加えると、速やかに暗青色になった。反応溶液を室温にまで昇温して１時間撹拌した。反応溶液を１０ＭＮａＯＨ水溶液（５０ｍｌ）で氷浴にて中和した。この溶液をろ過し、水で洗浄すると黒色のタール状の物質得られた。このものをアセトンに溶かし水を加えることで再結晶を行った。ろ過して得られた黒色固体をさらにＥｔ_２Ｏで洗浄した。得られた粉末を乾燥して２．４９ｇを得た（４０％）。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.60 (s, 1 H), 7.95 (d, J= 9.3 Hz, 2 H), 6.78 (d, J = 9.3 Hz, 2 H), 3.68-3.57 (m, 6 H), 1.29 (t, J= 7.1 Hz, 3 H)。

Ｆ．ＡＲ−Ｎ_３の合成
１−[（２−アジドエチル）アミノ]アントラセン−９，１０−ジオン（ＡＲ−Ｎ_３）：化合物３（１２．８８ｇ、４８．２ｍｍｏｌ）をＫｒａｐｃｈ，Ａ．Ｐ．，およびＳｈａｗ，Ｋ．Ｊ．（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８３，４８，３３４１−３３４３）に記載される方法によって調製し、この化合物３をＣＨ_２Ｃｌ_２（５００ｍｌ）およびＥｔ_３Ｎ（１２．２０ｇ、１２０．２ｍｍｏｌ）に溶かした。この溶液を０℃に冷やし、メタンスルホニルクロリド（６．６３ｇ、５７．８４ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。２時間撹拌後に、この反応溶液をＣＨ_２Ｃｌ_２（５００ｍｌ）で希釈し、１０％ＨＣｌで洗浄した。得られた有機層を飽和食塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥した。得られた赤色溶液を減圧濃縮して赤色固体（１６．０ｇ、９６％）を得た。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.93 (b, 1 H), 8.32-8.22 (m, 2 H), 7.80- 7.50 (m, 4 H), 7.08 (d, J= 8.4 Hz, 1 H), 4.48 (t, J= 5.6 Hz, 2 H), 3.75 (q, J= 5.7 Hz, 2 H), 3.07 (s, 3 H)。
上記で得られた物質をＮａＮ_３（３．６０ｇ、５５．６ｍｍｏｌ）と混合し、９５％ＥｔＯＨ（１５０ｍｌ）に懸濁させた。この混合物を１８時間８０℃に加熱し、乾固するまで減圧濃縮した。得られた赤色のペースト状物をＣＨ_２Ｃｌ_２に溶かし、水で洗浄した。水層を１回ＣＨ_２Ｃｌ_２で再抽出し、得られた有機層を合して飽和食塩水で洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、乾固するまで減圧濃縮した。得られた赤色固体をＣＨ_２Ｃｌ_２から再結晶して赤色の針状結晶（９．１３ｇ、６５％）を得た。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.95 (b, 1 H), 8.30-8.21 (m, 2 H), 7.78-7.54 (m, 4 H), 7.07 (d, J = 7.4 Hz, 1 H), 3.66-3.54 (m, 4 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 Hz) d 185.44, 183.71, 151.28, 135.56, 135.40, 134.95, 134.94, 134.15, 133.28, 133.11, 132.78, 126.97, 117.45, 116.41, 113.76, 50.52, 42.15。

Ｇ．ＭＰオルトホルメートの合成
トリス−（２−ブチン−１−オキシ）−オルトホルメート（ＭＰ−オルトホルメート）：この原料はＳｃａｒｉｎｇｅ（米国特許第５，８８９，１３６参照）に記載される方法と同様の方法によって調製した。３Ｌの丸底フラスコに２−ブチル−１−オール（３３４ｇ、４．７７ｍｍｏｌ）、ｐ−トルエンスルホン酸１水和物（６．０ｇ、３２ｍｍｏｌ）およびトリエチルオルトホルメート（２３５．６ｇ、１．５９ｍｏｌ）を加え、ジオキサン（８００ｍｌ）で希釈した。この反応溶液を減圧下（７５ｍＢａｒ）穏やかに加熱し、１−２滴／秒の一定の滴下速度になるようにしてこの反応溶液を滴下した。１８時間後、このフラスコにジオキサン（８００ｍｌ）および２−ブチン−１−オール（２３．２ｇ、０．３３ｍｏｌ）を加え、再び加熱および減圧した。８時間後、揮発性の溶媒類を高真空（６ｍＢａｒ）で除去し、Ｅｔ_３Ｎ（２０ｍｌ）を加えて反応を止めた。生成物を分別蒸留（浴温：１７５℃、真空度：３００ｍＴｏｒｒ、蒸留温度：１０５℃）して、無色の油状物２６４ｇ（７５％）を得た。このものは２０℃で放置後固体となった。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 5.51 (s, 1 H), 4.18 (s, 6 H), 1.79 (s, 9 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) I´ 110.20, 82.62, 74.41, 52.89, 3.68。

５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２シリルアミダイト類の合成
Ａ．５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−ｒＡ（ＮｉＢｕ）アミダイト（４ｄ）
化合物４ａのシリル化：化合物４ａ（５０．０ｇ、９０．０ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（１Ｌ）にジイソプロピルアミン（１８．２ｇ、１８０．０ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を０℃に冷やした。別のフラスコ中にＤＰＭＢＳｉＣｌ（３１．０ｇ、１１７．０ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（２４０ｍＬ）にて希釈した。このシリル化溶液にジイソプロピルアミン（１４．２ｇ、１４０．４ｍｍｏｌ）を加え、この溶液をヌクレオシド溶液に滴下して加える前に、２分間撹拌した。滴下は３０分以内で終了し、反応溶液を終夜にて室温にまでゆっくりと昇温した。ＴＬＣ分析により、原料の消失が示された。ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）を加えて反応を止め、乾固するまで減圧濃縮した。この粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル１．５Ｌ；溶出液（酢酸エチル／アセトン／ヘキサン＝０：２：８（ｖ/ｖ/ｖ）から４：２：４（ｖ/ｖ/ｖ）０．１％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有）により精製した。生成物を含むフラクションを合して減圧濃縮し、４ｂを無色油状物として得た。収量は６２．５ｇ（収率８９％）であった。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.79 (b, 1 H), 8.61 (s, 1 H), 8.43 (s, 1 H), 6.19 (d, J = 5.6 Hz, 1 H), 5.37 (s, 1 H), 4.93 (t, J= 5.3 Hz, 1 H), 4.48-4.43 (m, 1 H), 4.31-4.21 (m, 2 H), 4.17-3.94 (m, 7 H), 3.72-3.59 (m, 3 H), 3.52-3.44 (m, 2 H), 3.17-3.08 (m, 1 H), 2.75 (s, 1 H), 1.96 (s, 1 H), 1.95 (s, 1 H), 1.56 (s, 6 H), 1.22-1.16 (m, 18 H); ¹³C NMR (CD ₃CN, 75.5 mHz) d 177.17, 171.90, 153.43, 153.09, 150.98, 143.62, 124.48, 113.92, 89.37, 87.84, 86.49, 77.31, 72.52, 71.80, 68.82, 67.58, 64.41, 64.27, 64.19, 64.09, 61.35, 36.71, 32.91, 31.31, 26.08, 21.45, 19.97, 14.93; ESI-TOF MS (M + H ⁺) 計算値 784.3437, 実測値 784.3417。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた４ｂの色素コンジュゲート化：ヨウ化銅（１．５７ｇ、８．０ｍｍｏｌ）を、４ｂ（６２．５ｇ、８０．０ｍｍｏｌ）、ＤＲ−Ｎ_３（３５．３ｇ、１０４．０ｍｍｏｌ）およびｉＰｒ_２ＮＥｔ（１０．３４ｇ、８０．０ｍｍｏｌ）を溶かしたトルエン溶液（１．６Ｌ）に加えた。この溶液を１分間ソニケーションし、続いて室温で３時間撹拌した後、酢酸エチルおよび飽和食塩水により分液した。水層から赤色が消えるように水層を１回酢酸エチルで再抽出した。得られた有機層を合して減圧濃縮した。この粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル１．８Ｌ；溶出液（酢酸エチル／アセトン／ヘキサン＝２：２：６（ｖ/ｖ/ｖ）から６：２：２（ｖ/ｖ/ｖ）０．１％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有）により精製した。生成物を含むフラクションを合して減圧濃縮し、４ｃを赤色泡状物として得た。収量は６９．０ｇ（収率７７％）であった。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.75 (b, 1 H), 8.57 (s, 1 H), 8.28 (s, 1 H), 8.30 (d, J= 10.6 Hz, 2 H), 7.88 (d, J= 9.7 Hz, 2 H), 7.76 (d, J = 10.6 Hz, 2 H), 7.64, s, 1 H), 6.6 d, J= 9.3 Hz, 2 H), 6.16 (d, J= 5.2 Hz, 1 H), 5.39 (s, 1 H), 4.88 (t, J = 5.1 Hz, 1 H), 4.56 (t, J= 6.0 Hz, 2 H), 4.42 (q, J = 9.4 Hz, 1 H), 4.22-4.08 (m, 3 H), 4.04-3.94 (m, 5 H), 3.90-3.84 (m, 3 H), 3.67-3.60 (m, 4 H), 3.54-3.47 (m, 1 H), 3.30 (q, J= 14.2 Hz, 2 H), 3.15-3.06 (m, 1 H), 1.94 (s, 3 H), 1.93 (s, 3 H), 1.61 (s, 6 H), 1.19 (d, J= 8.6 Hz, 6 H), 1.10 (d, J= 6.1 Hz, 12 H), 1.07 (t, J= 7.1 Hz, 3 H); ¹³C NMR (CD ₃CN, 75.5 mHz) d 177.14, 171.87, 157.94, 156.52, 153.39, 152.96, 152.62, 150.87, 148.84, 144.87, 143.48, 127.27, 126.10, 123.78, 122.83, 113.94, 1 12.81 , 87.95, 86.25, 77.43, 73.40, 71.48, 67.45, 64.36, 64.19, 64.34, 64.19, 64.14, 64.10, 51.38, 48.81, 46.41, 36.68, 31.47, 34.41, 26.07, 21.43, 21.41, 19.97, 12.69. ESI-TOF MS (M + Na ⁺) 計算値 1145.4694, 実測値 1145.4696。

化合物４ｃのホスフィチル化：ビス（ジイソプロピルアミノ）メトキシホスフィン（２４．０ｇ、９１．５ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（２００ｍＬ）に溶かし、０．５Ｍ濃度の５−エチルチオ−１−Ｈ−テトラゾールの無水アセトニトリル溶液（６１．４ｍＬ、３０．７ｍｍｏｌ）を加えた。続いて、ジイソプロピルアミン（６．１ｇ、６１．４ｍｍｏｌ）を加え、このホスフィン溶液を室温にて５分間撹拌した。別のフラスコの中に、４ｃ（６９．０ｇ、６１．４ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアミン（６．１ｇ、６１．４ｍｍｏｌ）を、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３００ｍＬ）により溶かした。こうして活性化させたホスフィン溶液をヌクレオシド溶液に加え、反応溶液を室温で撹拌した。１６時間撹拌後、無水エタノール（５０ｍＬ）で反応を止め、溶液を乾固するまで濃縮した。得られたペースト状物質をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル２Ｌ；溶出液（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ヘキサン＝５：９５（ｖ/ｖ）２％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有からアセトン／へキサン＝２：８（ｖ/ｖ）から４：６（ｖ/ｖ）０．５％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有）により精製した。生成物を含むフラクションを合して減圧濃縮し、４ｄを赤色泡状物として得た。収量は６７．５ｇ（収率８６％）であった。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.67 (s, 1 H), 8.55 (s, 1 H), 8.38 および 8.37 (各々 s, 1 H), 8.32 (d, J= 8.9 Hz, 2 H), 7.89 (d, J= 8.9 Hz, 2 H), 7.76 (d, J= 8.3 Hz, 2 H), 7.63 および 7.62 (各々 s, 1 H), 6.65 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 6.19-6.15 (m, 1 H), 5.37 および 5.30 (各々 s, 1 H), 4.99-4.92 (m, 1 H), 4.67-4.53 (m, 3 H), 4.26-4.18 (m, 3 H), 4.03-3.84 (m, 8 H), 3.72-3.50 (m, 5 H), 3.46-3.26 (m, 6 H), 3.14-3.05 (m, 1 H), 1.96- 1.90 (m, 6 H), 1.62 および 1.60 (各々 s, 6 H), 1.22-1.04 (m, 33 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 Hz) d 150.99, 150.34; ESI-TOF MS (M + Na ⁺) 計算値 1306.5664, 実測値 1306.5657。

Ｂ．５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−ｒＧ（ＮｉＢｕ）アミダイト（５ｄ）
化合物５ａのシリル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物５ａ（５０．０ｇ、８７．５ｍｍｏｌ）から化合物５ｂを収率７８％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 Hz) d 9.54 (b, 1 H), 8.10 (s, 1 H), 5.96 (d, J= 5.7 Hz, 1 H), 5.36 (s, 1 H), 4.73 (t, J= 5.4 Hz, 1 H), 4.42 (q, J= 8.6 Hz, 1 H), 4.32-4.24 (m, 2 H), 4.12-3.93 (m, 7 H), 3.72-3.62 (m, 3 H), 3.56 (m, 1 H), 3.43-3.41 (m, 1 H), 2.75 (s, 1 H), 2.70 (p, J= 6.8 Hz, 1 H), 1.98 (s, 3 H), 1.97 (s, 3 H), 1.56 (s, 6 H), 1.21-1.17 (m, 18 H); ¹³C NMR (CD ₃CN, 75.5 Hz) d 181.44, 172.04, 156.81, 150.22, 149.69, 139.05, 122.16, 113.85, 89.36, 87.17, 86.48, 77.81, 72.52, 71.91, 68.83, 67.41, 64.64, 64.44, 64.26, 64.21, 64.16, 37.06, 32.92, 26.09, 21.46, 19.68, 19.61; ESI-TOF MS (M + H ⁺) 計算値 800.3386, 実測値 800.3392。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた５ｂの色素コンジュゲート化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物５ｂ（５４．４ｇ、６８．０ｍｍｏｌ）から化合物５ｃを収率７１％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 Hz) d 9.61 (b, 1 H), 8.31 (d, J= 7.1 Hz, 2 H), 8.04 (s, 1 H), 7.88 (d, J= 7.1 Hz, 2 H), 7.77 (d, J= 9.2 Hz, 2 H), 7.59 (s, 1 H), 6.64 (d, J= 9.2 Hz, 2 H), 5.92 (d, J= 5.2 Hz, 1 H), 5.42 (s, 1 H), 4.70 (t, J= 5.1 Hz, 1 H), 4.57 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 4.40 (q, J= 4.7 Hz, 1 H), 4.25-4.11 (m, 2 H), 4.09-3.99 (m, 5 H), 3.94-3.82 (m, 4 H), 3.73-3.52 (m, 5 H), 3.34 (q, J= 6.2 Hz, 2 H), 3.08 (q, J= 7.3 Hz, 1 H), 2.69 (p, J= 6.8 Hz, 1 H), 1.96 (s, 3 H), 1.94 (s, 3 H), 1.57 (s, 6 H), 1.18-1.06 (m, 21 H); ¹³C NMR (CD ₃CN, 75.5 Hz) d 181.51, 171.97, 157.85, 156.82, 156.51, 152.58, 150.10, 149.62, 148.66, 144.83, 144.83, 129.18, 127.31, 126.03, 123.78, 122.91, 122.10, 112.61, 112,78, 87.46, 86.20, 77.86, 73.42, 71.46, 67.46, 64.34, 64.28, 64.20, 63.99, 51.46, 48.83, 47.58, 46.51, 36.92, 31.56, 31.50, 26.15, 19.78, 19.73, 12.83, 9.57; ESI- TOF MS (M +Na ⁺) 計算値 1161.4643, 実測値 1161.4640。

化合物５ｃのホスフィチル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物５ｃ（５０．４ｇ、４４．２ｍｍｏｌ）から化合物５ｄを収率８１％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 Hz) d 9.61 (b, 1 H), 8.32 (d, J= 9.7 Hz, 2 H), 8.13 および 8.12 (各々 s, 1 H), 7.88 (d, J = 9.7 Hz, 2 H), 7.78 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.72 および 7.67 (各々 s, 1 H), 6.68 (d, J= 9.2 Hz, 2 H), 5.97 (t, J= 6.7 Hz, 1 H), 5.43 および 5.38 (各々 s, 1 H), 4.78-4.72 (m, 1 H), 4.62-4.46 (m, 3 H), 4.30-4.25 (m, 3 H), 4.06-3.90 (m, 7 H), 3.87-3.82 (m, 5 H), 3,73-3.44 (m, 4 H), 3.40-3.38 (m, 4 H), 2.78-2.64 (m, 1 H), 1.98 および 1.97 (各々 s, 3 H), 1.95 および 1.94 (s, 3 H), 1.67 および 1.65 (各々 s, 6 H), 1.23-1.03 (m, 33 H). ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 Hz) d 151.98, 150.88; ESI-TOF MS (M + Na ⁺) 計算値 1322.5613; 実測値 1322.5626。

Ｃ．５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−ｒＣ（ＮＡｃ）アミダイト（６ｄ）
化合物６ａのシリル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物６ａ（５０．０ｇ、９９．４ｍｍｏｌ）から化合物６ｂを収率８６％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.01 (b, 1 H), 8.36 (d, J= 7.5 Hz, 1 H), 7.33 (d, J= 7.5 Hz, 1 H), 5.93 (d, J = 2.1 Hz, 1 H), 5.67 (s, 1 H), 4.34-4.20 (m, 3 H), 4.18-4.10 (m, 5 H), 4.07-3.96 (m, 3 H), 3.84-3.75 (m, 4 H), 3.33-3.31 (m, 1 H), 2.75 (s, 1 H), 2.13 (s, 3 H), 2.01 (s, 3 H), 1.99 (s, 3 H), 1.57 (s, 6 H), 1.21 (d, J= 6.1 Hz, 12 H); ¹³C NMR (CD ₃CN, 75.5 mHz) d 172.42, 171.99, 164.21, 156.51, 146.40, 113.88, 97.25, 90.43, 89.28, 85.11, 78.95, 72.68, 69.32, 68.84, 67.64, 65.20, 64.46, 64.37, 63.91, 63.76, 62.79, 61.36, 32.99, 26.15, 25.51, 21.51, 14.99; ESI-TOF MS (M + Na ⁺) 計算値 754.2825, 実測値 754.2839。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた６ｂの色素コンジュゲート化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物６ｂ（５９．７ｇ、６８．０ｍｍｏｌ）から化合物６ｃを収率８０％で製造した。 ¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.85 (b, 1 H), 8.31 (d, J= 9.0 Hz, 2 H), 8.28 (d, J= 7.6 Hz, 1 H), 7.89 (d, J= 9.0 Hz, 2 H), 7.79 (d, J= 8.9 Hz, 2 H), 7.63 (s, 1 H), 7.24 (d, J= 7.5 Hz, 1 H), 6.69 (d, J= 9.2 Hz, 2 H), 5.88 (m, 1 H), 5.69 (s, 1 H), 4.57 (t, J= 6.0 Hz, 2 H), 4.28-4.12 (m. 8 H), 4.07-3.99 (m, 2 H), 3.91-3.68 (m, 8 H), 3.34 (q, J = 7.0 Hz, 2 H), 2.10 (s, 3 H), 2.00 (s, 3 H), 1.98 (s, 3 H), 1.62 (s, 6 H), 1.14 (d, J= 6.1 Hz, 12 H), 1.10 (t, J= 7.1 Hz, 3 H); ¹³C NMR (CD ₃CN, 75.5 mHz) d 171.17, 171.95, 163.94, 157.93, 156.40, 156.29, 152.65, 148.94, 146.11, 144.89, 127.30, 127.11, 123.78, 122.71, 113.83, 112.83, 96.91, 90.50, 84.91, 78.90, 73.34, 69.03, 67.50, 64.45, 64.36, 63.73, 62.53, 51.36, 48.81, 46.42, 31.46, 31.41, 31.29, 26.11, 25.43, 21.45, 12.72; ESI-TOF MS (M + Na ⁺) 計算値 1093.4269, 実測値 1093.4259。

化合物６ｃのホスフィチル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物６ｃ（７３．６ｇ、６９．０ｍｍｏｌ）から化合物６ｄを収率８０％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.92 (s, 1 H), 8.34-8.27 (m, 3 H), 7.88 (d, J= 10.2 Hz, 2 H), 7.78 (d, J= 9.4 Hz, 2 H), 7.60 および7.58 (各々 s, 1 H), 7.28-7.14 (m, 2 H), 6.67 (d, J = 9.7 Hz, 2 H), 5.97-5.92 (m, 1 H), 5.66 および 5.60 (各々 s, 1 H), 4.60-4.55 (m, 2 H), 4.36-4.29 (m, 2 H), 4.24-4.01 (m, 7 H), 3.94-3.84 (m, 3 H), 3.81-3.61 (m, 4 H), 3.61-3.50 (m, 2 H), 3.37-3.27 (m, 5 H), 2.10 (s, 3 H), 1.99-1.97 (m, 6 H), 1.64 および 1.62 (各々 s, 6 H), 1.19-1.07 (m, 27 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 Hz)d 151.36, 150.55. ESI-TOF MS (M + Na ⁺) 計算値 1254.5238, 実測値 1254.5253。

Ｄ．５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−ｒＵアミダイト（７ｄ）
化合物７ａのシリル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物７ａ（２８．２ｇ、６０．９ｍｍｏｌ）から化合物７ｂを収率８０％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.12 (s, 1 H), 7.78 (d, J= 8.1 Hz, 1 H), 5.95 (d, J= 5.2 Hz, 1 H), 5.61 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 5.44 (s, 1 H), 4.34-3.92 (m, 12 H), 3.82-3.66 (m, 4 H), 2.76 (s, 1 H), 2.01 (s, 3 H), 2.00 (s, 3 H), 1.58 (s, 6 H), 1.20 (d, J= 6.1 Hz, 12 H); ¹³C NMR (CD ₃CN, 75.5 mHz) d 172.00, 164.53, 152.07, 141.81, 113.80, 103.38, 89.34, 88.06, 85.84, 77.26, 72.56, 71.02, 68.87, 67.65, 64.32, 64.27, 64.05, 61.36, 32.95, 32.93, 26.11, 21.48, 14.93; ESI-TOF MS (M + Et ₃NH ⁺) 計算値 792.3950, 実測値792.3963。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた７ｂの色素コンジュゲート化：３当量のＤＲＮ_３を用いた以外は、実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物７ｂ（２７．４ｇ、３９．６ｍｍｏｌ）から化合物７ｃを収率７０％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.22 (b, 1 H), 8.30 (d, J = 7.1 Hz, 2 H), 7.89 (d, J =9.1 Hz, 2 H), 7.82 (d, J= 10.3 Hz, 2 H), 7.73 (d, J= 8.2 Hz, 1 H), 7.62 (s, 1 H), 6.70 (d, J= 9.3 Hz, 2 H), 5.90 (d, J= 4.8 Hz, 1 H), 5.54 (d, J= 8.1 Hz, 1 H), 5.47 (s, 1 H), 4.57 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 4.32 (t, J = 5.0 Hz, 1 H), 4.22-4.00 (m, 7 H), 3.96-3.78 (m, 5 H), 3.74- 3.56 (m, 5 H), 3.34 (q, J= 14.1 Hz, 2 H), 1.99 (s, 3 H), 1.97 (s, 3 H), 1.62 (s, 6 H), 1.14- 1.09 (m, 15 H); ¹³C NMR (CD ₃CN, 75.5 Hz) d 171.94,164.53, 157.93, 156.45, 152.63, 151.96, 148.84, 144.90, 141.68, 127.32, 126.12, 123.80, 122.73, 113.78, 112.83, 103.19, 88.29, 85.59, 77.52, 73.39, 70.65, 67.50, 64.33, 64.27, 64.16, 63.69, 51.38, 48.81, 46.43, 31.45, 26.13, 21.47, 12.74; ESI-TOF MS (M + Na ⁺) 計算値 1052.4003, 実測値 1052.4000。

化合物７ｃのホスフィチル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物７ｃ（７３．６ｇ、６９．０ｍｍｏｌ）から化合物７ｄを収率８０％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.25 (b, 1 H), 8.30 (d, J= 9.0 Hz, 2 H), 7.88 (d, J= 9.0 Hz, 2 H), 7.80-7.72 (m, 3 H), 7.60 および 7.58 (各々 s, 1 H), 6.68 (d, J= 9.1 Hz, 2 H), 5.98-5.94 (m, 1 H), 5.58-5.54 (m, 1 H), 5.45 および 5.39 (各々 s, 1 H), 4.60- 4.56 (m, 2 H), 4.38-4.32 (m, 2 H), 4.23-4.04 (m, 7 H), 3.94-3.55 (m, 10 H), 3.38-3.28 (m, 5 H), 1.98 および 1.97 (各々 s, 6 H), 1.63 および 1.62 (各々 s, 6 H), 1.18-1.08 (m, 27 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 Hz) d 151.03, 150.81; ESI-TOF MS (M + Na ⁺) 計算値 1213.4973, 実測値 1213.4984。

Ｅ．５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−２’−ＯＭｅ−Ａ（ＮｉＢｕ）アミダイト（８ｄ）
化合物８ａのシリル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物８ａ（１７．５ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物８ｂを収率８５％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.70 (s, 1 H), 8.50 (s, 1 H), 8.37 (b, 1 H), 6.25 (d, J = 4.4 Hz, I H), 4.51 (d, J = 4.7 Hz, 1 H), 4.34-4.24 (m, 3 H), 4.21-4.18 (m, 1 H), 4.14 (dd, J = 11.8 Hz, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.04 (dd, J = 11.8 Hz, J = 2.4 Hz, 1 H), 3.50 (s, 2 H), 3.47 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 3.28 (p, J = 6.4 Hz, 1 H), 2.74 (d, J = 5.0 Hz, 1 H), 2.43 (s, 1 H), 1.59 (s, 6 H), 1.29 (d, J = 6.8 Hz, 6 H), 1.22 (d, J = 6.1 Hz, 12 H); ¹³C NMR (CD ₃CN, 75.5 mHz) d 177.35, 153.46, 151.00, 143.40, 124.56, 89.32, 87.55, 86.49, 84.91, 72.58, 70.66, 68.84, 67.60, 64.27, 59.52, 36.73, 32.96, 26.10, 20.02。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた８ｂの色素コンジュゲート化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物８ｂ（２２．９ｇ、３９．５ｍｍｏｌ）から化合物８ｃを収率７９％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.64 (s, 1 H), 8.38 (s, 2 H), 8.29 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.88 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.82 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.43 (s, 1 H), 6.64 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 6.17 (d, J = 3.4 Hz, 1 H), 4.52 (t, J = 6.2 Hz, 2 H), 4.45 (q, J = 5.6 Hz, 1 H), 4.24-4.15 (m, 3 H), 4.11-4.02 (m, 2 H), 3.97-3.86 (m, 3 H), 3.52 (s, 3 H), 3.30-3.22 (m, 4 H), 1.67 (s, 6 H), 1.26 (d, J = 6.8 Hz, 6 H), 1.14 (d, J = 6.0 Hz, 12 H), 1.08 (t, J = 7.1 Hz, 3 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 176.44, 156.74, 156.10, 152.75, 151.05, 150.62, 149.32, 147.81, 144.27, 141.44, 126.43, 124.89, 122.93, 122.52, 121.20, 111.55, 86.69, 84.98, 84.25, 72.63, 69.06, 66.61, 62.26, 59.01, 50.72, 47.74, 46.01, 36.19, 30.95, 30.78, 25.57, 25.53, 19.38, 12.34。

化合物８ｃのホスフィチル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物８ｃ（２８．６ｇ、３１．１ｍｍｏｌ）から化合物８ｄを収率９２％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.67 (b, 1 H), 8.56 (s, 1 H), 8.38 (s, 1 H), 8.31 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.89 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.76 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.65 および 7.63 (各々 s, 1 H), 6.66 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 6.09 (t, J = 5.1 Hz, 1 H), 4.67-4.53 (m, 3 H), 4.43 (q, J = 5.6 Hz, 1 H), 4.25-4.13 (m, 3 H), 3.98 (dd, J =11.6 Hz, J = 3.4 Hz, I H),
3.87-3.83 (m, 3 H), 3.69-3.57 (m, 2 H), 3.40 および 3.38 (各々 d, J = 13.1 Hz, 3 H), 3.33- 3.25 (m, 5 H), 3.09 (p, J = 6.8 Hz, 1 H), 1.62 および 1.61 (各々 s, 6 H), 1.21-1.11 (m, 24 H), 1.07 および 1.06 (各々 t, J = 7.0 Hz, 3 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 151.22, 149.97。

Ｆ．５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−２’−ＯＭｅ−Ｇ（ＮｉＢｕ）アミダイト（９ｄ）
化合物９ａのシリル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物９ａ（１８．４ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物９ｂを収率６７％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.44 (b, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 5.91 (d, J = 5.7 Hz, 1 H), 4.49-4.44 (m, 1 H), 4.31-4.21 (m, 3 H), 4.22-4.15 (m, 1 H), 4.05-3.95 (m, 2 H), 3.33 (s, 3 H), 3.07 (d, J = 3.9 Hz, 1 H), 2.72 (p, J = 6.9 Hz, 1 H), 2.43 (s, 1 H), 1.54 (s, 6 H), 1.22-1.16 (m, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 179.35, 155.98, 148.61, 148.03, 137.93, 121.46, 88.19, 85.95, 85.63, 84.52, 70.94, 70.35, 67.78, 66.74, 63.53, 58.86, 36.50, 32.36, 25.50, 19.24。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた９ｂの色素コンジュゲート化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物９ｂ（２０．０ｇ、３３．６ｍｍｏｌ）から化合物９ｃを収率６０％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.61 (b, 1 H), 8.31 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 8.06 (s, 1 H), 7.90 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.81 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.66 (s, 1 H), 6.64 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.87 (d, J = 4.7 Hz, 1 H), 4.64-4.60 (m, 2 H), 4.38 (q, J = 4.6 Hz, 1 H), 4.24-4.11 (m, 5 H), 4.07-4.05 (m, 1 H), 3.96-3.85 (m, 2 H), 3.42 (s, 3 H), 3.36 (d, J = 7.1 Hz, 2 H), 2.98 (d, J = 4.7 Hz, 1 H), 2.60 (p, J = 6.9 Hz, 1 H), 1.67 (s, 6 H), 1.23 (d, J = 6.9 Hz, 6 H), 1.18-1.10 (m, 15 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 179.03, 156.86, 155.78, 155.75, 150.96, 148.29, 147.91, 147.69, 144.17, 137.79, 126.41, 124.89, 122.90, 121.74, 121.65, 111.55, 86.22, 85.01, 84.41, 72.60, 69.72, 66.67, 66.63, 62.62, 58.90, 50.58, 47.91, 45.77, 36.54, 30.98, 30.74, 25.62, 25.55, 25.50, 19.30, 19.15, 12.30。

化合物９ｃのホスフィチル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物９ｃ（１８．７ｇ、２０．０ｍｍｏｌ）から化合物９ｄを収率８７％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.35 (b, 1 H), 8.32 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 8.10 (s, 1 H), 7.90 (d, J = 7.2 Hz, 2 H), 7.77 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.70 および 7.69 (各々 s, 1 H), 6.67 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.89-5.85 (m, 1 H), 4.58 (t, J = 5.9 Hz, 2 H), 4.54-4.45 (m, 1 H), 4.27-4.15 (m, 4 H), 3.94-3.80 (m, 4 H), 3.74-3.55 (m, 2 H), 3.41-3.29 (m, 8 H), 2.71-2.61 (m, 1 H), 1.64 (s, 6 H), 1.20-1.14 (m, 30 H), 1.09 (t, J = 7.1 Hz, 3 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 151.19, 150.37。

Ｇ．５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−２’−ＯＭｅ−Ｃ（ＮＡｃ）アミダイト（１０ｄ）
化合物１０ａのシリル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物１０ａ（１８．４ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物１０ｂを収率５５％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.57 (d, J= 7.5 Hz, 1 H), 8.30 (b, 1 H), 7.39 (d, J= 7.5 Hz, 1 H), 5.99 (s, 1 H), 4.33-4.21 (m, 4 H), 4.05 (dd, J = 12.2 Hz, J = 1.7 Hz, 1 H), 4.03-3.97 (m, 1 H), 3.76 (d, J = 5.2 Hz, 1 H), 3.71 (s, 3 H), 2.62 (d, J= 9.4 Hz, 1 H), 2.43 (s, 1 H), 2.20 (s, 3 H), 1.58 (s, 3 H), 1.54 (s, 3 H), 1.22 (d, J = 6.1 Hz , 12 H); ¹³C NMR (CD ₃CN, 75.5 mHz) d 172.07, 163.87, 156.28, 146.27, 96.73, 89.73, 89.29, 85.22, 84.87, 75.56, 68.84, 67.64, 62.57, 59.43, 32.92, 26.06, 25.37。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた１０ｂの色素コンジュゲート化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物１０ｂ（１４．６ｇ、２７．７ｍｍｏｌ）から化合物１０ｃを収率８７％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.95 (b, 1 H), 8.45 (d, J= 7.5 Hz, 1 H), 8.26 (d, J= 8.9 Hz, 2 H), 7.86 (d, J= 8.9 Hz, 2 H), 7.83 (d, J= 9.0 Hz, 2 H), 7.42 (s, 1 H), 7.35 (d, J= 7.4 Hz, 1 H), 6.65 (d, J= 9.1 Hz, 2 H), 5.91 (s, 1 H), 4.55 (t, J= 6.1 Hz, 2 H), 4.23-4.10 (m, 4 H), 3.97-3.88 (m, 4 H), 3.69 (d, J = 5.0 Hz, 1 H), 3.64 (s, 3 H), 3.35-3.24 (m, 3 H), 2.21 (s, 3 H), 1.66 (s, 6 H), 1.14 (d, J = 6.0 Hz, 12 H), 1.08 (t, J = 6.9 Hz, 3 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 171.03, 163.11, 156.70, 155.99, 155.11, 150.64, 147.72, 145.19, 144.23, 126.41, 124.84, 122.89, 121.11, 111.53, 96.54, 88.38, 84.11, 83.76, 72.54, 67.05, 66.57, 60.71, 58.92, 50.70, 47.69, 45.98, 30.90, 30.72, 25.52, 25.04, 12.32。

化合物１０ｃのホスフィチル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物１０ｃ（２０．８ｇ、２４．０ｍｍｏｌ）から化合物１０ｄを収率８５％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.81 (b, 1 H), 8.34-8.31 (m, 3 H), 7.90 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.79 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.59 および7.57 (各々 s, 1 H), 7.24 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 6.68 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.88-5.86 (m, 1 H), 4.52 (t, J = 5.9 Hz, 2 H), 4.33-4.15 (m, 3 H), 4.11-4.02 (m, 3 H), 3.91-3.87 (m, 2 H), 3.80-3.78 (m, 1 H), 3.63-3.53 (m, 2 H), 3.51 および 3.49 (各々 s, 3 H), 3.38-3.28 (m, 5 H), 2.14 および 2.10 (各々 s, 3 H), 1.63 および 1.62 (各々 s, 6 H), 1.17-1.08 (m, 27 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 150.75, 150.21。

Ｈ．５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−２’−ＯＭｅ−Ｕアミダイト（１１ｄ）
化合物１１ａのシリル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物１１ａ（１１．７ｇ、４５．３ｍｍｏｌ）から化合物１１ｂを収率２７％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.06 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 5.99 (d, J = 3.0 Hz, 1 H), 5.71 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 4.33-4.26 (m, 3 H), 4.22-4.15 (m, 1 H), 4.04-4.00 (m, 2 H), 3.78 (dd, J= 5.1 Hz, J= 3.0 Hz, 1 H), 3.57 (s, 3 H), 2.41 (s, 1 H), 1.56 (s, 6 H), 1.20 (d, J = 6.1 Hz, 12 H)。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた１１ｂの色素コンジュゲート化：３当量のＤＲＮ_３を用いた以外、実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物１１ｂ（７．３ｇ、１４．９ｍｍｏｌ）から化合物１１ｃを収率６７％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.37 (b, 1 H), 8.28 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.96 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.88 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 7.84 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.38 (s, 1 H), 6.66 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 5.89 (d, J = 1.5 Hz, 1 H), 5.59 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.54 (t, J = 6.2 Hz, 2 H), 4.26-4.03 (m, 5 H), 3.94-3.89 (m, 4 H), 3.70 (dd, J = 5.1 Hz, J = 1.5 Hz, 1 H), 3.56 (s, 3 H), 3.28 (q, J = 6.8 Hz, 2 H), 1.66 (s, 6 H), 1.14-1.07 (m, 15 H)。

化合物１１ｃのホスフィチル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物１１ｃ（８．４ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）から化合物１１ｄを収率９０％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.91 (b, 1 H), 8.33 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.91 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.81 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.75 および 7.74 (各々 d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.58 および 7.57 (各々 s, 1 H), 6.70 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.87 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 5.53 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.57 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 4.39-4.30 (m, 1 H), 4.24-4.15 (m, 2 H), 4.10-4.06 (m, 1 H), 3.93-3.79 (m, 5 H), 3.67-3.53 (m, 2 H), 3.40-3.28 (m, 8 H), 1.63 および1.62 (各々 s, 6 H), 1.17-1.08 (m, 27 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 151.12, 150.22。

Ｉ．５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−２’−Ｆ−Ｃ（ＮＡｃ）アミダイト（１２ｄ）
化合物１２ａのＮ−アセチル化：化合物１２ａ（２４．５ｇ、１００ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（５００ｍＬ）懸濁液を無水酢酸（７１．５ｇ、７００ｍｍｏｌ）と７０℃で３時間加熱した。フラスコを放冷後、溶媒を真空下除去した。得られた油状物を、無水ＥｔＯＨ、続いてトルエンとともに繰り返し減圧濃縮した。得られた白色の粉末はさらに精製することなく次のシリル化に用いた。
Ｎ−アセチル保護された化合物１２ａのシリル化：１２ａを溶かすのを補助するジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）を用いた以外は、実施例２の方法Ａに記載の化合物４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物１２ａ（２４．５ｇ、１００ｍｍｏｌ）から化合物１２ｂを収率５５％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.93 (b, 1 H), 8.38 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.35 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 5.95 (d, J = 16.9 Hz, 1 H), 4.96 (dd, J = 52.6 Hz, J = 3.9 Hz, 1 H), 4.37-4.24 (m, 4 H), 4.11-4.00 (m, 2 H), 3.61 (d, J = 7.5 Hz, 1 H,), 2.77 (s, 1 H), 2.15 (s, 3 H), 1.60 (s, 6 H), 1.24 (d, J = 6.1 Hz, 12 H); ¹⁹F NMR (CDCl ₃, 282.4 mHz) d -203.31。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた１２ｂの色素コンジュゲート化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物１２ｂ（２８．３９ｇ、５５．０ｍｍｏｌ）から化合物１２ｃを収率６７％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.76 (b, 1 H), 8.33 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 8.30 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 7.92 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.80 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.62 (s, 1 H), 7.25 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 6.71 (d, J = 9.3 Hz, 2 H), 5.89 (d, J = 17.0 Hz, 1 H), 4.91(dd, J = 52.7 Hz, J = 3.9 Hz, 1 H), 4.58 (t, J = 6.1 Hz, 2 H), 4.30-4.22 (m, 2 H), 4.21-4.14 (m, 4 H), 4.10-4.05 (m, 1 H), 3.94-3.87 (m, 2 H), 3.35 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 2.14 (s, 3 H), 1.62 (s, 6 H), 1.17-1.14 (m, 15 H); ¹⁹F NMR (CDCl ₃, 282.4 mHz) d -203.13。

化合物１２ｃのホスフィチル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物１２ｃ（１３．０ｇ、２８．１ｍｍｏｌ）から化合物１２ｄを収率９２％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.80 (b, 1 H), 8.35 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 8.28 および 8.27 (各々 d, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.92 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.82 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.61 および 7.60 (各々 s, 1 H), 7.27 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 6.71 (d, 9.2 Hz, 1 H), 5.93 (d, J = 17.2 Hz, 1 H), 5.02 および 5.00 (各々 dd, J = 52.2 Hz, J = 4.4 Hz, 1 H), 4.60 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 4.38-4.13 (m, 5 H), 3.97-3.90 (m, 3 H), 3.64-3.55 (m, 2 H), 3.39-3.32 (m, 5 H), 2.16 および 2.14 (各々 s, 3 H), 1.65-1.63 (m, 6 H), 1.19-1.11 (m, 27 H); ¹⁹F NMR (CD ₃CN, 282.4 mHz) d -200.66, -200.69, -200.82, -200.85; ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 151.52, 151.47, 151.29, 151.23。

Ｊ．５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−２’−Ｆ−Ｕアミダイト（１３ｄ）
化合物１３ａのシリル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物１３ａ（１２．３ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物１３ｂを収率７５％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 7.82 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 5.95 (dd, J = 17.0 Hz, 1.7 Hz, 1 H), 5.61 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.99 (dd, J= 50.3 Hz, J = 1.6 Hz, 1 H), 4.33-4.21 (m, 4 H), 4.03-3.96 (m, 4 H), 1.58 (s, 6 H), 1.21 (d, J = 6.1 Hz, 12 H)。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた１３ｂの色素コンジュゲート化：３当量のＤＲＮ_３を用いた以外、実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物１３ｂ（２４．９ｇ、５２．０ｍｍｏｌ）から化合物１３ｃを収率５９％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.93 (b, 1 H), 8.29 (d, J = 9.7 Hz, 2 H), 7.87 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.78 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.67 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.58 (s, 1 H), 6.68 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.84 (dd, J = 16.3 Hz, J = 1.1 Hz, 1 H), 5.46 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 4.89 (dd, J = 52.0 Hz, J = 4.5 Hz, 1 H), 4.54 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 4.25-4.21 (m, 1 H), 4.19-4.13 (m, 3 H), 4.02-3.92 (m, 2 H), 3.88-3.83 (m, 3 H), 3.32 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 1.58 (s, 6 H), 1.08-1.05 (m, 15 H); ¹⁹F NMR (CD ₃CN, 282.4 mHz) d -203.46。

化合物１３ｃのホスフィチル化：実施例２の方法Ａに記載の化合物４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物１３ｃ（１８．２ｇ、２２．０ｍｍｏｌ）から化合物１３ｄを収率８６％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.93 (b, 1 H), 8.29 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.87 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.77 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.68 および 7.66 (各々 d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.54 および 7.53 (各々 s, 1 H), 6.67 (d, J = 9.3 Hz, 2 H), 5.84 (d, J = 28.0 Hz, 1 H), 5.47 および 5.46 (各々 d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.97 (d, J = 48.0 Hz, 1 H), 4.54 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 4.18-4.10 (m, 2 H), 4.04-3.99 (m, 2 H), 3.89-3.78 (m, 4 H), 3.62-3.51 (m, 2 H), 3.35-3.27 (m, 5 H), 1.58 および 1.57 (各々 s, 6 H), 1.11-1.08 (m, 27 H); ¹⁹F NMR (CD ₃CN, 282.4 mHz) d -201.15, -201.19, -201.74, -201.76; ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 151.58, 151.53, 151.21, 151.14。

５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２シリルアミダイト類の合成
Ａ．５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２−シリル−ｒＡ（ＮｉＢｕ）アミダイト（１４ｄ）
化合物１４ａのシリル化：化合物１４ａ（５９．２ｇ、１０６．６ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（１Ｌ）にジイソプロピルアミン（２１．６ｇ、２１３．１ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を０℃に冷やした。別のフラスコ中に、穏やかなＡｒ気流下、ＤＭＭＢＳｉＣｌ（２６．２ｇ、１２７．９ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（２４０ｍＬ）にて希釈した。このシリル化溶液にジイソプロピルアミン（１５．５ｇ、１５３．５ｍｍｏｌ）を加え、この溶液をヌクレオシド溶液に滴下して加える前に、２分間撹拌した。滴下は３０分で終了し、反応溶液を終夜にて室温にまでゆっくりと昇温した。翌朝、ＴＬＣ分析により、原料の消失が示された。ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）を加えて反応を止め、乾固するまで減圧濃縮した。この粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル１．５Ｌ；溶出液（酢酸エチル／アセトン／ヘキサン＝０：２：８（ｖ/ｖ/ｖ）から４：２：４（ｖ/ｖ/ｖ）０．１％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有）により精製した。生成物を含むフラクションを合して減圧濃縮し、１４ｂを無色油状物として得た。収量は６２．８ｇ（収率８５％）であった。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.66 (s, 1 H), 8.42 (s, 1 H), 6.26 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 5.38 (s, 1 H), 4.83 (t, J = 4.9 Hz, 1 H), 4.45 (q, J = 4.5 Hz, 1 H), 4.23-4.12 (m, 1 H), 4.08-4.02 (m, 2 H), 3.95-3.90 (m, 2 H), 3.86-3.82 (m, 1 H), 3.74- 3.47 (m, 3 H), 3.44-3.39 (m, 1 H), 3.19-3.14 (m, 1 H), 3.05 (d, J = 4.5 Hz, 1 H), 2.42 (s, 1 H), 2.03 (s, 6 H), 1.54 (s, 6 H), 1.20 (s, 6 H), 0.12 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 176.10, 170.86, 152.70, 151.24, 149.36, 141.67, 122.32, 112.55, 141.67, 122.32, 112.55, 88.48, 86.95, 85.30, 77.36, 71.48, 70.63, 66.70, 63.24, 62.88, 62.75, 62.01, 60.46, 36.23, 32.76, 20.89, 19.27, 14.27, -0.88。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた１４ｂの色素コンジュゲート化：ヨウ化銅（１．７ｇ、８．９ｍｍｏｌ）を、１４ｂ（６１．８ｇ、８８．８ｍｍｏｌ）、ＤＲ−Ｎ_３（３９．２ｇ、１１５．４ｍｍｏｌ）およびｉＰｒ_２ＮＥｔ（１１．５ｇ、８８．８ｍｍｏｌ）を溶かしたトルエン溶液（１０００ｍＬ）に加えた。この溶液を１分間ソニケーションし、続いて室温で３．５時間撹拌した後、酢酸エチルおよび飽和食塩水により分液した。水層から赤色が消えるように水層を１回酢酸エチルで再抽出した。得られた有機層を合して減圧濃縮した。この粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル１．２Ｌ；溶出液（酢酸エチル／アセトン／ヘキサン＝２：２：６（ｖ/ｖ/ｖ）から６：２：２（ｖ/ｖ/ｖ）０．１％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有）により精製した。生成物を含むフラクションを合して減圧濃縮し、１４ｃを赤色泡状物として得た。収量は８２．９ｇ（収率９０％）であった。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.63 (b, 1 H), 8.51 (s, 1 H), 8.31 (s, 1 H), 8.26 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.71 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.61 (s, 1 H), 6.62 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 6.12 (d, J = 4.8 Hz, 1 H), 5.35 (s, 1 H), 4.76 (t, J = 4.9 Hz, 1 H), 4.49 (t, J = 6.1 Hz, 2 H), 4.34 (q, J = 4.7 Hz, 1 H), 4.03-3.91 (m, 7 H), 3.84-3.75 (m, 4 H), 3.72-3.55 (m, 4 H), 3.51-3.43 (s, 1 H), 3.28 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.01 (p, J = 6.8 Hz, 1 H), 1.88 (s, 3 H), 1.87 (s, 3 H), 1.51 (s, 6 H), 1.12 (d, J = 5.3 Hz, 6 H), 1.02 (t, J = 7.0 Hz, 3 H), -0.03 (s, 6 H); ¹³C NMR (CD ₃CN, 75.5 mHz) d 176.63, 171.40, 157.11, 156.31, 153.13, 151.61, 151.03, 149.77, 148.15, 144.67, 142.09, 126.83, 125.27, 123.33, 122.94, 121.50, 113.04, 111.98, 87.88, 85.19, 71.94, 70.10, 63.74, 63.52, 63.42, 63.33, 61.77, 51.02, 48.20, 46.38, 36.68, 31.75, 31.63, 21.42, 19.78, 12.75, 0.00。

化合物１４ｃのホスフィチル化：ビス（ジイソプロピルアミノ）メトキシホスフィン（３１．２ｇ、１１９．１ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（３００ｍＬ）に溶かし、０．５Ｍ濃度の５−エチルチオ−１−Ｈ−テトラゾールの無水アセトニトリル溶液（７９ｍＬ、３９．７ｍｍｏｌ）を加えた。続いて、ジイソプロピルアミン（８．０ｇ、７９．４ｍｍｏｌ）を加え、このホスフィン溶液を室温にて５分間撹拌した。別のフラスコの中に、１４ｃ（８２．２ｇ、７９．４ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアミン（８．０ｇ、７９．４ｍｍｏｌ）を、ＣＨ_２Ｃｌ_２（７００ｍＬ）により溶かした。こうして活性化させたホスフィン溶液をヌクレオシド溶液に加え、反応溶液を室温で撹拌した。１６時間撹拌後、無水エタノール（５０ｍＬ）で反応を止め、溶液を乾固するまで濃縮した。得られたペースト状物質をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル１．５Ｌ；溶出液（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ヘキサン＝５：９５（ｖ/ｖ）２％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有からアセトン／へキサン＝２：８（ｖ/ｖ）から４：６（ｖ/ｖ）０．５％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有）により精製した。生成物を含むフラクションを合して減圧濃縮し、１４ｄを赤色泡状物として得た。収量は６２．５ｇ（収率６６％）であった。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.51 (s, 1 H), 8.32 および 8.31 (各々 s, 1 H), 8.27 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.87 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 7.73 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.61 および 7.59 (各々 s, 1 H), 6.63 (d, J = 8.1 Hz, 2 H), 6.13 (t, J = 5.0 Hz, 1 H), 5.32 および 5.27 (各々 s, 1 H), 4.89 (q, J = 5.1 Hz, 1 H), 4.58-4.48 (m, 3 H), 4.20-4.18 および 4.14-4.12 (各々 m, 1 H), 3.95-3.73 (m, 8 H), 3.62-3.49 (m, 6 H), 3.36-3.26 (m, 6 H), 3.02 (p, J = 6.6 Hz, 1 H), 1.96-1.92 (m, 6 H), 1.52 および 1.50 (各々 s, 6 H), 1.16-1.10 (m, 18 H), 1.04 (t, J = 6.0 Hz, 3 H), -0.01- -0.04 (m, 6 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 MHzj d 150.74, 150.21。

Ｂ．５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２−シリル−ｒＧ（ＮｉＢｕ）アミダイト（１５ｄ）
化合物１５ａのシリル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物１５ａ（５２．７ｇ、１００．０ｍｍｏｌ）から化合物１５ｂを収率８３％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.11 (s, 1 H), 7.24 (s, 1 H), 6.03 (d, J = 4.2 Hz, 1 H), 5.35 (s, 1 H) , 4.22-4.15 (m, 1 H), 4.12-4.10 (m, 1 H), 4.04-3.89 (m, 2 H), 3.82-3.70 (m, 7 H), 3.65-3.58 (m, 2 H), 3.05 (d, J = 4.1 Hz, 1 H), 2.71(p, J = 6.9 Hz, 1 H), 2.50 (s, 1 H), 2.07 (s, 3 H), 2.06 (s, 3 H), 1.50 (s, 6 H), 1.24-1.21(m, 6 H), 0.23 (s, 3 H), 0.22 (s, 3 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d179.11, 171.66, 171.30, 155.61, 148.10, 147.93, 137.25, 121.16, 112.69, 88.67, 86.19, 84.79, 71.49, 70.39, 60.69, 63.26, 63.15, 62.86, 62.77, 61.71, 36.21, 32.69, 54.01, 19.04, -0.94。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた１５ｂの色素コンジュゲート化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物１５ｂ（５８．０ｇ、８１．５ｍｍｏｌ）から化合物１５ｃを収率９３％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.42 (b, 1 H), 8.28 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.94 (s, 1 H), 7.85 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.74 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.63 (s, 1 H), 6.65 (d, J = 9.3 Hz, 2 H), 5.88 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 5.36 (s, 1 H), 4.64 (d, J = 5.0 Hz, 1 H), 4.52 (t, J = 7.1 Hz, 2 H), 4.31 (q, J = 4.7 Hz, 2 H), 4.05-3.80 (m, 5 H), 3.74 (t, J = 3.5 Hz, 2 H), 3.65 (t, J = 4.3 Hz, 2 H), 3.62-3.55 (m, 3 H), 3.54-3.49 (m, 2 H), 3.31 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 2.62 (p, J = 6.8 Hz, 1 H), 1.93 (s, 3 H), 1.91 (s, 3 H), 1.53 (s, 6 H), 1.18-1.11 (m, 6 H), 1.06 (t, J = 7. I Hz, 3 H), 0.00 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 179.84, 172.31, 171.87, 157.19, 156.10, 156.08, 151.24, 148.53, 148.47, 148.08, 137.84, 126.82, 125.26, 123.29, 121.89, 121.76, 113.20, 111.96, 8716, 84.67, 79.08, 71.85, 69.78, 63.80, 63.75, 63.57, 62.86, 61.33, 60.98, 50.96, 48.24, 76.23, 36.50, 31.67, 31.59, 21.64, 21.51, 19.63, 14.77, 12.72, 0.00。

化合物１５ｃのホスフィチル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物１５ｃ（７８．３ｇ、７４．５ｍｍｏｌ）から化合物１５ｄを収率８８％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.34 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 8.06 および 8.04 (各々 s, 1 H), 7.94 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.80 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.71 および 7.70 (各々 s, 1 H), 6.72 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 5.98 (t, J = 6.2 Hz, 1 H), 5.40 および 5.36 ( 各々 s, 1 H), 4.80 (t, J = 5.7 Hz, 2 H), 4.59 (t, J = 6.2 Hz, 3 H), 4.53-4.44 (m, 1 H), 4.24- 4.17 および 4.08-4.02 (各々 m, 1 H), 4.00-3.92 (m, 4 H), 3.90-3.60 (m, 9 H), 3.58-3.35 (m, 5 H), 1.98 (s, 3 H), 1.96 (s, 3 H), 1.62 および 1.61 (各々 s, 6 H), 1.23-1.18 (m, 18 H), 1.13 (t, J = 6.4 Hz, 3 H), 0.10-0.08 (m, 6 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 150.86, 150.51。

Ｃ．５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２−シリル−ｒＣ（ＮＡｃ）アミダイト（１６ｄ）
化合物１６ａのシリル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物１６ａ（５３．４ｇ、１０６．６ｍｍｏｌ）から化合物１６ｂを収率７３％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.50 (s, 1 H), 8.57 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.36 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 5.94 (s, 1 H), 5.68 (s, 1 H) 4.29-4.07 (m, 8 H), 3.59-3.81 (m, 5 H), 2.98 (d, J = 8.1 Hz, 1 H) 2.46 (s, 1 H), 2.23 (s, 3 H), 2.02 (s, 3 H), 2.01 (s, 3 H), 1.51 (s, 6 H), 0.23 (s,
6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 169.86, 161.52, 153.73, 143.79, 111.62, 94.89, 88.24, 87.03, 82391, 70.08, 65.86, 65.36, 61.77, 61.70, 61.68, 61.54, 59.81, 58.43, 31.39, 23.62, 19.57, 12.88, -2.39。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた１６ｂの色素コンジュゲート化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物１６ｂ（４８．６ｇ、７５．５ｍｍｏｌ）から化合物１６ｃを収率９８％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.55 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 8.33 (m, 3 H), 7.93 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.89 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.37 (s, 1 H), 6.70 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.93 (s, 1 H), 5.79 (s, 1 H), 5.79 (s, 1 H), 4.58 (t, J = 6.3 Hz, 2 H), 4.32-4.08 (m, 8 H), 3.97-3.87 (m, 7 H), 3.71 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 3.35 (d, J = 7.1 Hz, 2 H), 2.20 (s, 3 H), 2.07 (s, 3 H), 2.04 (s, 3 H), 1.62 (s, 6 H) 1.15 (t, J = 7.0 Hz, 3 H), 0.12 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 170.97, 169.82, 162.14, 156.55, 155.69, 150.45, 147.64, 145.11, 144.14, 126.27, 124.72, 122.76, 120.80, 112.84, 111.40, 95.55, 89.82, 83.85, 78.31, 71.38, 66.69, 32.21, 63.17, 62.86, 59.39, 50.44, 47.61, 45.50, 31.16, 31.09, 25.06, 20.92, 12.19, -0.50, -0.65。

化合物１６ｃのホスフィチル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物１６ｃ（７１．９ｇ、７３．１ｍｍｏｌ）から化合物１６ｄを収率８６％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.75 (b, 1 H), 8.32-8.26 (m, 3 H), 7.85 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.75 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.58 および7.57 (各々 s, 1 H), 7.17 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 6.65 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 5.90 (s, 1 H), 5.61 および 5.57 (各々 s, 1 H), 4.52 (t, J = 6.1 Hz, 2 H), 4.27-4.18 (m, 2 H), 4.12-4.03 (m, 5 H), 3.94-3.66 (m, 8 H), 3.56-3.44 (m, 2 H), 3.37-3.24 (m, 5 H), 2.10 (s, 3 H), 1.94 (s, 6 H), 1.55-1.54 (m, 6 H), 1.13-1.06 (m, 15 H), 0.02- -0.01 (m, 6 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d l50.88, 150.20。

Ｄ．５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２−シリル−ｒＵアミダイト（１７ｄ）
化合物１７ａのシリル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物１７ａ（４７．５ｇ、１０２．８ｍｍｏｌ）から化合物１７ｂを収率８３％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.26 (b, 1 H), 8.09 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 5.99 (d, J = 3.1 Hz, 1 H), 5.66 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 5.51 (s, 1 H), 4.34-4.31 (m, 1 H), 4.26-4.15 (m, 5 H), 4.10-4.06 (m, 2 H), 3.93-3.90 (m, 1 H), 3.84-3.76 (m, 4 H), 2.94 (b, 1 H), 2.46 (s, 1 H), 2.05 (s, 3 H), 2.03 (s, 3 H), 1.51 (s, 6 H), 0.22 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 170.87, 163.80, 150.71, 140.28, 112.58, 102.01, 88.29, 87.74, 84.44, 77.51, 71.53, 68.81, 66.62, 63.15, 63.04, 62.97, 62.93, 60.82, 60.36, 32.67, 20.79, -1.02, -1.13。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた１７ｂの色素コンジュゲート化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物１７ｂ（５６．４ｇ、９３．６ｍｍｏｌ）から化合物１７ｃを収率９２％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.92 (b, 1 H), 8.30 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 8.06 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.90 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.86 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.33 (s, 1 H), 6.68 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.90 (d, J = 1.8 Hz, 1 H), 5.60-5.57 (m, 2 H), 4.56 (t, J = 7.1 Hz, 2 H), 4.31-4.20 (m, 6 H), 4.06-3.78 (m, 10 H), 3.32 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 2.05 (s, 3 H), 2.03 (s, 3 H), 1.61 (s, 6 H), 1.13 (t, J = 7.0 Hz, 3 H), 0.08 (s, 3 H), 0.06 (s, 3 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 170.91, 163.76, 156.42, 155.45, 150.51, 147.33, 143.92, 140.19, 126.20, 124.59, 122.69, 121.02, 112.43, 111.33, 101.68, 88.16, 83.91, 71.28, 67.98, 63.10, 62.77, 62.63, 60.14, 50.40, 47.63, 45.73, 31.11, 31.02, 20.83, 12.11, -0.66, -0.76。

化合物１７ｃのホスフィチル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物１７ｃ（７９．２ｇ、８４．１ｍｍｏｌ）から化合物１７ｄを収率９２％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.08 (b, 1 H), 8.31 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.90 (d, J = 8.70 Hz, 2 H), 7.84-7.78 (m, 3 H), 7.62 および7.61 (各々 s, 1 H), 6.71 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.97-5.93 (m, 1 H), 5.50 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 5.46 および 5.41 (各々 s, 1 H), 4.57 (t, J = 6.1 Hz, 2 H), 4.38-4.26 (m, 2 H), 4.15-4.07 (m, 6 H), 3.92-3.85 (m, 2 H), 3.82-3.77 (m, 1 H), 3.75-3.64 (m, 5 H), 3.62-3.53 (m, 2 H), 3.41-3.30 (m, 5 H), 1.98 (s, 6 H), 1.59 および 1.58 (各々 s, 6 H), 1.17-1.10 (m, 15 H), 0.06-0.03 (m, 6 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 150.77, 150.53。

Ｅ．５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２−シリル−２’−ＯＭｅ−Ａ（ＮｉＢｕ）アミダイト（１８ｄ）
化合物１８ａのシリル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物１８ａ（１７．６ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物１８ｂを収率７０％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.14 (b, 1 H), 8.63 (s, 1 H), 8.47 (s, 1 H), 6.21 (d, J = 3.5 Hz, 1 H), 4.45 (q, J = 5.3 Hz, 1 H), 4.15-4.11 (m, 2 H), 4.02 (dd, J = 11.7 Hz, J = 2.6 Hz, 1 H), 3.90 (dd, J = 11.7 Hz, J = 2.3 Hz, 1 H), 3.58 (d, J = 6.2 Hz, 1 H), 3.47 (s, 3 H), 3.11 (p, J = 6.8 Hz, 1 H), 2.42 (s, 1 H), 1.44 (s, 6 H), 1.20 (d, J = 6.8 Hz, 6 H), 0.17 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d176.41, 152.62, 151.03, 149.41, 122.41, 88.41, 86.53, 85.14, 84.55, 71.44, 69.23, 66.64, 61.43, 58.79, 36.05, 32.72, 19.26, -0.89。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた１８ｂの色素コンジュゲート化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物１８ｂ（１７．１ｇ、３５．０ｍｍｏｌ）から化合物１８ｃを収率８９％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.72 (b, 1 H), 8.65 (s, 1 H), 8.45 (s, 1 H), 8.25 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.87 (d, J = 9.6 Hz, 2 H), 7.84 (d, J = 9.4 Hz, 2 H), 7.44 (s, 1 H), 6.65 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 6.20 (d, J = 2.5 Hz, 1 H), 4.56-4.45 (m, 3 H), 4.11-3.98 (m, 3 H), 3.91-3.86 (m, 3 H), 3.57 (s, 4 H), 3.28 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.17 (p, J = 7.2 Hz, 1 H), 2.49 (m, 1 H), 1.62 (s, 6 H), 1.24 (d, J = 7.3 Hz, 6 H), 1.11 (t, J = 7.0 Hz, 3 H), 0.01 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d176.37, 156.75, 156.06, 152.78, 151.04, 150.72, 149.45, 147.76, 144.28, 141.45, 126.48, 124.91, 122.97, 122.66, 121.31, 111.62, 86.77, 84.70, 84.54, 71.74, 68.82, 60.91, 60.64, 59.06, 50.70, 47.83, 46.04, 36.33, 31.45, 31.37, 19.46, 12.39, -0.20, -0.33。

化合物１８ｃのホスフィチル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物１８ｃ（２２．５ｇ、３１．０ｍｍｏｌ）から化合物１８ｄを収率７９％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.85 (b, 1 H), 8.57 (s, 1 H), 8.39 および 8.38 (各々 s, 1 H), 8.29 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.87 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 7.75 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.67 および 7.65 (各々 s, 1 H), 6.67 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 6.12 および 6.11 (各々 d, J = 5.0 Hz, 1 H), 4.63-4.53(m, 3 H), 4.44-4.36 (m, 1 H), 4.22-4.17 (m, 1 H), 3.92-3.74 (m, 4 H), 3.68-3.56 (m, 2 H), 3.42-3.29 (m, 8 H), 3.09 (p, J = 6.8 Hz, 1 H), 1.58 および 1.57 (各々 s, 6 H), 1.21-1.15 (m, 18 H), 1.08 (t, J = 6.9 Hz, 3 H), 0.04-0.02 (m, 6 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 151.00, 149.85。

Ｆ．５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２−シリル−２’−ＯＭｅ−Ｇ（ＮｉＢｕ）アミダイト（１９ｄ）
化合物１９ａのシリル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物１９ａ（１８．４ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物１９ｂを収率５４％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.15 (s, 1 H), 5.80 (d, J = 3.7 Hz, 1 H), 4.43 (t, J = 16.2, 4.9 Hz, 1 H), 4.06-3.84 (m, 4 H), 3.25 (s, 3 H), 2.92 (p, J = 6.8 Hz, 1 H), 2.43 (s, 1 H), 1.42 (s, 6 H), 1.17-1.14 (m, 6 H) 0.14 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 180.64, 156.31, 148.70, 148.58, 137.63, 120.70, 88.35, 86.28, 85.26, 84.82, 71.47, 69.38, 66.59, 61.85, 58.48, 35.94, 32.68, 19.11, -0.95。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた１９ｂの色素コンジュゲート化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物１９ｂ（１３．６ｇ、２７．０ｍｍｏｌ）から化合物１９ｃを収率４４％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.20 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.11 (s, 1 H), 7.82 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.74 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.61 (s, 1 H), 6.61 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.85 (d, J = 3.6 Hz, 1 H), 4.62 (t, J = 5.9 Hz, 2 H), 4.42-4.39 (m, 1 H), 4.09-3.98 (m, 3 H), 3.90-3.79 (m, 4 H), 3.34-3.29 (m, 5 H), 2.82 (p, J= 6.8 Hz, 1 H), 1.58 (s, 6 H), 1.22-1.16 (m, 6 H), 1.07 (t, J = 7.1 Hz, 3 H), 0.04 (s, 3 H), 0.03 (s, 3 H). ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 180.10, 171.33, 156.67, 155.98, 155.79, 150.79, 148.42, 148.30, 147.44, 144.02, 137.66, 126.28, 124.71, 122.78, 121.57, 121.13, 111.45, 86.23, 84.76, 84.32, 71.53, 69.13, 61.35, 60.50, 58.63, 50.48, 47.80, 45.71, 36.09, 31.28, 31.18, 19.20, 19.11, -0.43, -0.55。

化合物１９ｃのホスフィチル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物１９ｃ（１０．１ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）から化合物１９ｄを収率６７％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.25 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 8.06 および 8.04 (各々 s, 1 H) 7.83 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.74-7.70 (m, 3 H), 6.65 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 5.86-5.84 (m, 1 H), 4.57 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 4.47-4.42 (m, 1 H), 4.27-4.11 (m, 2 H), 3.90-3.75 (m, 4 H), 3.74-3.53 (m, 2 H), 3.42-3.29 (m, 8 H), 2.72-2.63 (m, 1 H), 1.59 および 1.58 (各々 s, 6 H), 1.17-1.04 (m, 21 H), 0.06-0.03 (m, 6 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 150.90, 150.12。

Ｇ．５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２−シリル−２’−ＯＭｅ−Ｃ（ＮＡｃ）アミダイト（２０ｄ）
化合物２０ａのシリル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物２０ａ（１５．０ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物２０ｂを収率７４％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 10.59 (b, 1 H), 8.58 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.34 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 5.92 (s, 1 H), 4.15-4.09 (m, 2 H), 3.96-3.89 (m, 2 H), 3.69 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 3.62 (s, 3 H), 2.87 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 2.44 (s, 1 H), 2.23 (s, 3 H), 1.48 (s, 6 H), 0.20 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 171.54, 163.50, 155.08, 145.28, 96.62, 88.41, 88.25, 84.21, 84.09, 71.54, 67.18, 66.74, 59.78, 58.78, 37.79, 24.89, -0.84, -0.98。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた２０ｂの色素コンジュゲート化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物２０ｂ（１６．１ｇ、３７．０ｍｍｏｌ）から化合物２０ｃを収率８６％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 10.30 (b, 1 H), 8.53 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 8.22 (d, J = 8.1 Hz, 2 H), 7.83 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 7.79 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 7.43 (s, 1 H), 7.28 (d, J = 7.4 Hz, 1 H), 6.64 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 5.89 (s, 1 H), 4.56 (t, J = 6.1 Hz, 2 H), 4.15-4.13 (m, 1 H), 4.07-4.01 (m, 1 H), 3.96-3.84 (m, 4 H), 3.69 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 3.63 (s, 3 H), 3.39 (d, J = 9.1 Hz, 1 H), 3.27 (q, J = 6.9 Hz, 2 H), 2.22 (s, 3 H), 1.61 (s, 6 H), 1.08 (t, J = 6.9 Hz, 3 H), 0.08 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 171.33, 163.20, 156.59, 155.79, 155.01, 150.61, 147.56, 145.16, 144.10, 126.32, 124.74, 122.81, 121.15, 111.46, 96.30, 88.29, 84.00, 83.83, 71.55, 66.83, 60.48, 59.55, 58.76, 50.56, 47.68, 45.87, 31.22, 29.94, 12.25, -0.38, -0.56。

化合物２０ｃのホスフィチル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物２０ｃ（２５．１ｇ、３２．０ｍｍｏｌ）から化合物２０ｄを収率５８％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.34 (b, 1 H), 8.38 および 8.36 (各々 d, J = 6.3 Hz, 1 H), 8.23 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.82 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 7.73 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.63 および 7.62 (各々 s, 1 H), 7.20 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 6.65 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 5.83 (s, 1 H), 4.54 (t, J = 6.1 Hz, 2 H), 4.24-4.18 (m, 1 H), 4.12-3.94 (m, 2 H), 3.88-3.72 (m, 4 H), 3.58-3.51 (m, 5 H), 3.39-3.25 (m, 5 H), 2.10 (s, 3 H), 1.59 および 1.57 (各々s, 6 H), 1.10-1.07 (m, 15 H), 0.06-0.02 (m, 6 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 150.28, 149.78。

Ｈ．５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２−シリル−２’−ＯＭｅ−Ｕアミダイト（２１ｄ）
化合物２１ａのシリル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物２１ａ（１２．９ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物２１ｂを収率８１％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.76 (b, 1 H), 8.15 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 5.95 (d, J = 1.8 Hz, 1 H), 5.65 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.27-4.23 (m, 2 H), 4.10 (dd, J = 11.8 Hz, J = 1.7 Hz, 1 H), 3.97-3.91 (m, 2 H), 3.73 (dd, J = 5.1 Hz, J = 1.8 Hz, 1 H), 3.59 (s, 3 H), 2.44 (s, 1 H), 1.51 (s, 6 H), 0.22 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 164.74, 163.65, 151.40, 141.30, 102.84, 56.34, 88.02, 85.31, 85.13, 72.35, 68.86, 67.68, 61.28, 59.65, 37.55, 33.73, 33.71, 32.49, -0.49。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた２１ｂの色素コンジュゲート化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物２１ｂ（１６．１ｇ、４０．４ｍｍｏｌ）から化合物２１ｃを収率９３％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.51 (b, 1 H), 8.34 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 8.15 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.93 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 7.90 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.39 (s, 1 H), 6.71 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.91 (s, 1 H), 5.61 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 4.59 ( t, J = 6.2 Hz, 2 H), 4.26-4.22 (m, 1 H), 4.26-4.16 (m, 1 H), 4.07-3.87 (m, 5 H), 3.72 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 3.63 (s, 3 H), 3.33 (q, J = 7.1 Hz, 1 H), 3.23 (d, J = 8.6 Hz, 1 H), 1.62 (s, 6 H), 1.15 (t, J = 7.2 Hz, 3 H), 0.12 (s, 3 H), 0.11 (s, 3 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 171.85, 163.61, 157.21, 156.44, 151.10, 150.56, 148.35, 140.85, 126.95, 125.40, 123.45, 121.56, 112.10, 102.19, 87.82, 84.78, 84.52, 72.19, 67.96, 61.09, 60.34, 59.33, 51.16, 48.30, 46.55, 31.92, 31.82, 12.86, 0.68, 0.18。

化合物２１ｃのホスフィチル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物２１ｃ（１７．７ｇ、２４．０ｍｍｏｌ）から化合物２１ｄを収率７５％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.38 (b, 1 H), 8.31 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.91-7.81 (m, 3 H), 7.80 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.65 および 7.64 (各々 s, 1 H), 6.71 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 5.88 (d, J = 3.5 Hz, 1 H), 5.60 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.59 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 4.32-4.30 (m, 1 H), 4.11-4.07 (m, 1 H), 3.93-3.77 (m, 4 H), 3.54-3.56 (m, 3 H), 3.44- 3.36 (m, 8 H), 1.62 および 1.61 (各々 s, 6 H), 1.18-1.13 (m, 15 H), 0.08-0.06 (m, 6 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 150.95, 149.92。

Ｉ．５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２−シリル−２’−Ｆ−Ｃ（ＮＡｃ）アミダイト（２２ｄ）
化合物２２ａのシリル化：化合物２２ａ（２４．５ｇ、１００ｍｍｏｌ）のＮ−アセチル化保護は、実施例２の方法Ｉに記載と同様な製造方法で行った。そのシリル化反応は、２２ａを溶かすのを補助するジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）を加えた以外は、実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ａのシリル化と同様の製造方法により行なった。化合物２２ａ（２４．５ｇ、１００．０ｍｍｏｌ）から化合物２２ｂを収率３０％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.52 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 7.38 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 6.01 (d, J = 1.5 Hz, 1 H), 5.07 (dd, J = 51.9 Hz, J = 3.8 Hz, 1 H), 4.35-4.28 (m, 1 H), 4.26-4.13 (m, 3 H), 3.95 (d, J = 11.8 Hz, 1 H), 2.47 (s, 1 H), 2.24 (s, 3 H), 1.50 (s, 6 H), 0.22 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 171.31, 163.29, 155.34, 145.11, 96.86, 95.51, 93.03, 89.31, 88.87, 88.45, 83.28, 71.64, 67.57, 67.35, 66.85, 59.68, 46.17, 32.84, 25.07, 11.36, -0.75, -0.93; ¹⁹F NMR (CDCl ₃, 282.4 mHz) d-202.31。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた２２ｂの色素コンジュゲート化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物２２ｂ（１２．６ｇ、２９．５ｍｍｏｌ）から化合物２２ｃを収率５０％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.69 (b, 1 H), 8.55 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 8.30 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.91 (d, J = 9.7 Hz, 2 H), 7.85 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.36 (s, 1 H), 7.33 (d, J = 7.4 Hz, 1 H), 6.67 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 6.01 (d, J = 15.3 Hz, 1 H), 5.38-5.33 (m, 1 H), 5.05 (dd, J = 51.8 Hz, J = 5.9 Hz, 1 H), 4.58 (t, J = 6.2 Hz, 3 H), 4.21-4.01 (m, 2 H), 3.97-3.88 (m, 3 H), 3.32 (q, J = 7.0 Hz, 2 H), 2.26 (s, 3 H), 1.61 (s, 6 H), 1.12 (t, J = 6.9 Hz, 3 H), 0.10 (s, 3 H), 0.08 (s, 3 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 171.90, 163.69, 157.21, 155.90, 155.66, 151.12, 148.31, 145.75, 144.83, 126.97, 125.41, 123.48, 121.45, 112.12, 96.96, 96.13, 96.63, 90.01, 89.57, 83.52, 71.39, 67.27, 67.07, 65.09, 61.12, 59.81, 51.06, 48.51, 46.53, 31.77, 31.35, 25.70, 21.78, 19.84, 14.92, 14.43, 12.88, 0.72, 0.60; ¹⁹F NMR (CDCl ₃, 282.4 mHz) d -202.68。

化合物２２ｃのホスフィチル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物２２ｃ（１１．３ｇ、１４．７ｍｍｏｌ）から化合物２２ｄを収率６３％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.90 (s, 1 H), 8.32-8.29 (m, 3 H), 7.88 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.78 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.62 および7.61 (各々 s, 1 H), 7.21 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 6.69 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.89 (d, J = 16.8 Hz, 1 H), 4.95 (dt, J = 54.0 Hz, J = 3.8 Hz, 1 H), 4.56 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 4.38-4.26 (m, 2 H), 4.13-4.02 (m, 2 H), 3.90-3.75 (m, 3 H), 3.60-3.49 (m, 2 H), 3.41-3.28 (m, 5 H), 2.15 (s, 3 H), 1.59-1.58 (m, 6 H), 1.17-1.09 (m, 15 H), 0.06-0.03 (m, 6 H); ¹⁹F NMR (CD ₃CN, 282.4 mHz) d -200.94, -200.97, -201.05, -201.07; ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 151.05, 151.00, 150.86, 150.81。

Ｊ．５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２−シリル−２’−Ｆ−Ｕアミダイト（２３ｄ）
化合物２３ａのシリル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物２３ａ（１２．３ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物２３ｂを収率約９０％（溶媒を含有）で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.16 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.25 (b, 2 H), 6.15 (d, J = 15.0 Hz, IH), 5.77 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 5.07 (d, J = 54.8 Hz, 1 H), 4.53- 4.43 (m, 1 H), 4.23-4.02 (m, 3 H), 2.64 (s, 1 H), 1.61 (s, 6 H), 0.32 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 164.93, 150.85, 140.50, 102.09, 95.29, 92.80, 88.36, 87.76, 87.32, 83.39, 77.79, 77.36, 76.94, 71.72, 68.35, 68.13, 66.74, 60.33, 45.90, 45.22, 21.56, 21.46, 10.14, -0.96, -1.05; ¹⁹F NMR (CDCl ₃, 282.4 mHz) d-202.86。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた２３ｂの色素コンジュゲート化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物２３ｂ（１２．３ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物２３ｃを収率４９％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.25 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 8.08 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.88 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.85 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.45 (s, 1 H), 6.67 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.99 (d, J = 15.5 Hz, 1 H), 5.60 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.95 (dd, J = 52.4 Hz, J = 3.5 Hz, 1 H), 4.60 (t, J = 5.9 Hz, 2 H), 4.14-4.03 (m, 2 H), 3.97-3.94 (m, 4 H), 3.32 (q, J = 6.9 Hz, 2 H), 1.62 (s, 6 H), 1.12 (t, J = 7.1 Hz, 3 H). 0.09 (s, 3 H), 0.07 (s, 3 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 172.00, 163.36, 157.25, 155.96, 151.22, 150.85, 148.28, 14.84, 140.94, 127.02, 125.45, 123.54, 121.64, 112.18, 102.45, 96.30, 96.87, 88.89, 88.44, 83.59, 71.56, 67.96, 67.75, 65.15, 61.19, 60.21, 51.14, 48.58, 48.41, 46.60, 37.33, 31.85, 21.84, 14.97, 12.96, 0.78, 0.51; ¹⁹F NMR (CDCl ₃, 282.4 mHz) d -202.43。

化合物２３ｃのホスフィチル化：実施例３の方法Ａに記載の化合物１４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物２３ｃ（１７．７ｇ、２４．４ｍｍｏｌ）から化合物２３ｄを収率７５％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.27 (b, 1 H), 8.33 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 7.91 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.86-7.80 (m, 3 H), 7.64 および7.63 (各々 s, 1 H), 6.72 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 5.93 (d, J = 16.8 Hz, 1 H), 5.58 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 5.00 (dd, J = 52.3 Hz, J = 4.1 Hz, 1 H), 4.59 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 4.52-4.26 (m, 1 H), 4.12-3.56 (m, 9 H), 3.43- 3.33 (m, 5 H), 1.61 および 1.60 (各々 s, 6 H), 1.17-1.14 (m, 15 H), 0.08-0.06 (m, 6 H); ¹⁹F NMR (CD ₃CN, 282.4 mHz) d -196.23, -196.27, -196.63, -196.66; ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) I´ 151.15, 151.09, 150.89, 150.78。

５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２シリルアミダイト類の合成
Ａ．５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２−シリル−ｒＡ（ＮｉＢｕ）アミダイト（２４ｄ）
２’−ＭＰ−オルトホルメート保護化および５’，３’−ＴｉｐｄｓｒＡＮ（ｉＢｕ）（２４ａ）の脱シリル化：５’，３’−ＴｉｐｄｓｒＡＮ（ｉＢｕ）（６０．０ｇ、１０３．５ｍｍｏｌ）、ＰＴＳ（５．２ｇ、２０．７ｍｍｏｌ）、およびＭＰ−オルトホルメート（４７．９ｇ、２１７．３ｍｍｏｌ）の混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２（２００ｍＬ）に溶かした。２時間後、ＴＢＤＭＳ−ペンタジオン（３９．９ｇ、１８６．３ｍｍｏｌ）を加え、反応溶液を室温で撹拌した。５日後、ＴＬＣ分析は反応の終了を示し、すぐにＴＥＭＥＤ（６．０ｇ、５１．７ｍｍｏｌ）を加えた。シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル１５００ｍＬ；溶出液（ヘキサン／酢酸エチル＝８０：２０（ｖ/ｖ）０．１％（ｖ/ｖ）ＴＥＭＥＤ含有からヘキサン／酢酸エチル＝５０：５０（ｖ/ｖ）により、過剰の試薬類を反応混合物から分離した。その後、この混合物をほぼ乾固するまで濃縮し、脱シリル化にそのまま使用した。
ＣＨ_３ＣＮ（２００ｍＬ）中のＴＥＭＥＤ（５８．１ｇ、５００ｍｍｏｌ）氷冷溶液に、４８％ＨＦ水溶液（１２．６ｍＬ、３５０ｍｍｏｌ）をゆっくりと加えた。この溶液を５分間撹拌し、先に調製した脱シリル化する混合物に室温で加えた。反応溶液を３時間撹拌し、その後、乾固するまで濃縮した。得られた粗製物を、シリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル１０００ｍＬ；溶出液（酢酸エチル／ヘキサン＝８０：２０（ｖ/ｖ）０．１％（ｖ/ｖ）ＴＥＭＥＤ含有から酢酸エチル／ＭｅＯＨ＝９６：４（ｖ/ｖ）により精製し、化合物２４ａを白色泡状物（３９．０ｇ、２工程の収率８０％）として得た。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.77 (b, 1 H), 8.67 (s, 1 H), 8.04 (s, 1 H), 6.08 (d, J = 11.2 Hz, 1 H), 5.98 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 5.40 (s, 1 H), 5.11 (dd, J = 7.4 Hz, J = 4.8 Hz, 1 H), 4.57 (d, J = 4.7 Hz, 1 H), 4.34 (b, 1 H), 4.11-3.87 (m, 5 H), 3.79-3.71 (m, 1 H), 3.26 (p, J = 6.8 Hz, 1 H), 3.19 (s, 1 H), 1.76 (s, 3 H), 1.68 (s, 3 H), 1.27 (d, J = 6.8 Hz, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 176.84, 151.90, 150.22, 150.09, 143.58, 123.34, 110.88, 89.40, 87.59, 83.44, 83.27, 75.90, 73.39, 73.18, 71.98, 63.10, 53.77, 53.61, 35.88, 19.18, 19.12, 3.43, 3.35。

化合物２４ａのシリル化：化合物２４ａ（３４．２ｇ、７０．２ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（７５０ｍＬ）にジイソプロピルアミン（１９．９ｇ、１４０．３ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を０℃に冷やした。別のフラスコ中にＢＴＭＢＳｉＣｌ（２７．４ｇ、８４．２ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（２５０ｍＬ）にて希釈した。このシリル化溶液にジイソプロピルアミン（１４．３ｇ、１０１．０ｍｍｏｌ）を加え、この溶液をヌクレオシド溶液に滴下して加える前に、２分間撹拌した。滴下は２時間以内で終了し、反応溶液を終夜にて室温にまでゆっくりと昇温した。翌朝、ＴＬＣ分析により、約８５％の原料が消費されたことが示された。さらに、０．２当量のＢＴＭＢＳｉＣｌ（４．６ｇ、１４．０ｍｍｏｌ−上記と同様に活性化した）を室温で１５分間かけて加え、乾固するまで濃縮した。この粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル１．２Ｌ；溶出液（酢酸エチル／アセトン／ヘキサン＝０：２：８（ｖ/ｖ/ｖ）から２：２：６（ｖ/ｖ/ｖ）０．１％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有）により精製した。生成物を含むフラクションを合して減圧濃縮し、２４ｂを無色油状物として得た。収量は４４．９ｇ（収率８３％）であった。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.85 (b, 1 H), 8.65 (s, 1 H), 8.36 (s, 1 H), 6.30 (d, J = 5.7 Hz, 1 H), 5.55 (s, 1 H), 4.84 (t, J = 5.4 Hz, 1 H), 4.47-4.42 (m, 1 H), 4.20-4.17 (m, 1 H), 4.07-4.03 (m, 2 H), 4.00-3.94 (m, 1 H), 3.87-3.82 (m, 3 H), 3.32-3.16 (m, 2 H), 2.38 (s, 1 H), 1.69 (s, 3 H), 1.66 (s, 3 H), 1.47 (s, 6 H), 1.21 (d, J= 7.1 Hz, 6 H), 0.07 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 176.47, 152.59, 151.50, 149.28, 142.07, 122.22, 110.68, 88.14, 86.63, 85.40, 83.27, 83.24, 76.53, 73.54, 73.51, 71.36, 70.78, 67.16, 63.00, 53.90, 53.74, 35.97, 32.20, 19.24, 3.51, 1.68。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた２４ｂの色素コンジュゲート化：ヨウ化銅（１．１０ｇ、５．８ｍｍｏｌ）を、２４ｂ（４４．７ｇ、５７．６ｍｍｏｌ）、ＤＲ−Ｎ_３（２５．４ｇ、７４．９ｍｍｏｌ）およびｉＰｒ_２ＮＥｔ（７．４５ｇ、５７．６ｍｍｏｌ）を溶かしたトルエン溶液（６００ｍＬ）に加えた。この溶液を１分間ソニケーションし、続いて室温で４時間撹拌した後、酢酸エチルおよび飽和食塩水により分液した。水層から赤色が消えるように水層を１回酢酸エチルで再抽出した。得られた有機層を合して減圧濃縮した。この粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル１．２Ｌ；溶出液（酢酸エチル／アセトン／ヘキサン＝２：２：６（ｖ/ｖ/ｖ）から４：２：４（ｖ/ｖ/ｖ）０．１％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有）により精製した。生成物を含むフラクションを合して減圧濃縮し、２４ｃを赤色泡状物として得た。収量は６１．２ｇ（収率９５％）であった。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.64 (b, 1 H), 8.32-8.28 (m, 4 H), 7.90 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.83 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.44 (s, 1 H), 6.66 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 6.24 (d, J = 5.3 Hz, 1 H), 5.60 (s, 1 H), 4.90 (t, J = 5.2 Hz, 1 H), 4.52 (t, J = 6.3 Hz, 2 H), 4.46-4.42 (m, 1 H), 4.18-4.14 (m, 3 H), 3.98- 3.81 (m, 6 H), 3.29 (q, J = 7.1 Hz, 3 H), 3.12-3.11 (m, 1 H), 1.74-1.72 m, 6 H), 1.66 (s, 6 H), 1.27 (d, J = 6.8 Hz, 6 H), 1.10 (t, J = 7.1 Hz, 3 H), 0.09 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 176.37, 156.56, 156.25, 152.52, 151.37, 150.56, 149.18, 147.47, 144.02, 141.86, 126.26, 125.07, 122.72, 122.28, 121.05, 111.74, 110.92, 86.85, 85.05, 83.31, 83.26, 76.12, 73.55, 72.48, 70.79, 62.68, 53.91, 53.83, 50.52, 47.52, 45.73, 36.77, 30.81, 30.76, 19.21, 12.16, 3.94, 1.65。

化合物２４ｃのホスフィチル化：ビス（ジイソプロピルアミノ）メトキシホスフィン（２１．５ｇ、８２．０ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（１５０ｍＬ）に溶かし、０．５Ｍ濃度の５−エチルチオ−１−Ｈ−テトラゾールの無水アセトニトリル溶液（５４．７ｍＬ、２７．３ｍｍｏｌ）を加えた。続いて、ジイソプロピルアミン（５．５ｇ、５４．７ｍｍｏｌ）を加え、このホスフィン溶液を室温にて５分間撹拌した。別のフラスコの中に、２４ｃ（６１．０ｇ、５４．７ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアミン（５．５ｇ、５４．７ｍｍｏｌ）を、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３５０ｍＬ）により溶かした。こうして活性化させたホスフィン溶液をヌクレオシド溶液に加え、反応溶液を室温で撹拌した。１８時間撹拌後、無水エタノール（５０ｍＬ）で反応を止め、溶液を乾固するまで濃縮した。得られたペースト状物質をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル２Ｌ；溶出液（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ヘキサン＝５：９５（ｖ/ｖ）２％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有、続いて、アセトン／へキサン＝１：９（ｖ/ｖ）から３：７（ｖ/ｖ）０．５％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有）により精製した。生成物を含むフラクションを合して減圧濃縮し、２４ｄを赤色泡状物として得た。収量は６４．５ｇ（収率９２％）であった。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.76 (b, 1 H), 8.56 (s, 1 H), 8.36 および 8.34 (各々 s, 1 H), 8.30 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 7.88 (d, J = 8.6 Hz, 2 H), 7.75 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.63 および 7.62 (各々 d, 1 H), 6.64 (d, J = 9.3 Hz, 2 H), 6.18-6.14 (m, 1 H), 5.46 および 5.43 (各々 s, 1 H), 5.03-4.98 (m, 1 H), 4.63-4.52 (m, 3 H), 4.28-4.20 (m, 1 H), 4.06-3.96 (m, 4 H), 3.87-3.77 (m, 4 H), 3.70-3.60 (m, 2 H), 3.41 および 3.35 (各々 d, J = 13.2 Hz, 3 H), 3.31-3.24 (m, 2 H), 3.10 (p, J = 6.9 Hz, 1 H), 1.74-1.65 (m, 6 H), 1.62- 1.60 (m, 6 H), 1.23-1.16 (m, 18 H) 1.06 および 1.05 (各々 t, J = 7.1 Hz, 3 H), 0.10-0.08 (m, 18 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 151.02, 149.98。

Ｂ．５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２−シリル−ｒＧ（ＮｉＢｕ）アミダイト（２５ｄ）
２’−ＭＰ−オルトホルメート保護化および５’，３’−ＴｉｐｄｓｒＧＮ（ｉＢｕ）（２４ａ）の脱シリル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ａの２’保護化および脱シリル化と同様の製造方法により、５’，３’−ＴｉｐｄｓｒＧＮ（ｉＢｕ）（６０．０ｇ、１００．７ｍｍｏｌ）から化合物２５ｂを収率５２％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.25 (b, 1 H), 7.96 (s, 1 H), 5.91 (d, J = 6.5 Hz, 1 H), 5.49 (s, 1 H), 5.08 (b, 1 H), 4.91 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 4.53- 4.51 (m, 1 H), 4.23-4.21 (m, 1 H), 4.10-4.01 (m, 2 H), 3.95-3.87 (m, 3 H), 3.78-3.74 (m, 1 H), 5.52 (b, 1 H), 2.80 (p, J = 6.8 Hz, 1 H), 1.75 (s, 6 H), 1.26-1.20 (m, 6 H), ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 180.20, 155.79, 148.38, 148.30, 139.36, 121.37, 110.90, 87.96, 86.34, 83.32, 75.84, 73.67, 71.00, 62.39, 54.02, 53.73, 36.16, 19.10, 19.06, 3.54。

化合物２５ａのシリル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物２５ａ（３０．６ｇ、６０．８１ｍｍｏｌ）から化合物２５ｂを収率７７％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.81 (b, 1 H), 8.09 (s, 1 H), 5.98 (d, J = 6.9 Hz, 1 H), 5.47 (s, 1 H), 4.77 (t, J = 5.4 Hz, 1 H), 4.41-4.40 (m, 1 H), 4.22-4.20 (m, 1 H), 4.10-4.08 (m, 1 H), 3.95-3.84 (m, 4 H), 2.97 (b, 1 H), 2.69 (p, J = 6.9 Hz, 1 H), 2.46 (s, 1 H), 1.75 (s, 6 H), 1.53 (s, 6 H), 1.25-1.21 (m, 6 H), 0.13-0.10 (m, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 179.56, 156.04, 148.95, 147.92, 137.87, 121.14, 110.62, 88.14, 85.88, 85.57, 83.25, 83.20, 73.61, 73.54, 71.64, 70.95, 67.26, 63.40, 53.88, 53.77, 35.26, 32.22, 19.15, 19.09, 3.55, 1.72。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた２５ｂの色素コンジュゲート化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物２５ｂ（３７．０ｇ、４６．７ｍｍｏｌ）から化合物２５ｃを収率８４％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.85 (b, 1 H), 8.24 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 8.11 (s, 1 H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.53 (d, J = 9.2 Hz, 3 H), 6.61 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.95 (d, J = 6.1 Hz, 1 H), 5.47 (s, 1 H), 4.75-4.62 (m, 3 H), 4.32-4.28 (m, 1 H), 4.13-4.05 (m, 3 H), 3.89-3.74 (m, 6 H), 3.46 (b, 1 H), 3.36-3.31 (m, 2 H), 2.80 (p, J = 6.8 Hz, 1 H), 1.68 (s, 6 H), 1.64 (s, 3 H), 1.62 (s, 3 H), 1.22-1.17 (m, 6
H), 1.08 (t, J = 7.0 Hz, 3 H), 0.07 (s, 9 H), 0.05 (s, 9 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 179.55, 156.79, 155.94, 155.84, 150.99, 148.81, 148.01, 147.44, 144.00, 137.95, 126.31, 124.73, 122.75, 121.83, 121.21, 111.44, 110.72, 86.23, 85.32, 83.30. 73.67. 72.49. 71.33. 62.85. 53.94. 53.77, 50.52, 47.81, 45.59, 36.20, 30.97, 30.60, 19.16, 19.13, 12.16, 3.57, 1.74。

化合物２５ｃのホスフィチル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物２５ｃ（４４．０ｇ、３８．９ｍｍｏｌ）から化合物２５ｄを収率９６％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.31 (d, J = 9.7 Hz, 2 H), 8.09 および 8.07 (各々 s, 1 H), 7.89 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 7.77 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.70 および 7.68 (各々 s, 1 H), 6.68 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.96-5.92 (m, 1 H), 5.46 および 5.43 (各々 s, 1 H), 4.81-4.75 (m, 2 H), 4.61 -4.56 (m, 1 H), 4.50-4.39 (m, 1 H), 4.20-4.18 (m, 1 H), 4.10- 4.04 (m, 2 H), 3.99-3.97 (m, 1 H), 3.89-3.73 (m, 5 H), 3.69-3.57 (m, 2 H), 3.43-3.31 (m, 5 H), 2.72-2.62 (m, 1 H), 1.75-1.71 (m, 6 H), 1.64 および1.63 (各々 s, 6 H), 1.22-1.16 (m, 18 H), 1.09 (t, J = 5.9 Hz, 3 H), 0.12-0.10 (m, 18 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 151.21, 150.64。

Ｃ．５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２−シリル−ｒＣ（Ｎｄｍｆ）アミダイト（２６ｄ）
２’−ＭＰ−オルトホルメート保護化および５’，３’−ＴｉｐｄｓｒＣＮ（ｄｍｆ）（２６ａ）の脱シリル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ａの２’保護化および脱シリル化と同様の製造方法により、５’，３’−ＴｉｐｄｓｒＣＮ（ｄｍｆ）（５４．０ｇ、１００．７ｍｍｏｌ）から化合物２６ｂを収率３０％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.62 (s, 1 H), 7.79 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 5.94 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 5.65-5.62 (m, 1 H), 4.58-4.54 (m, 1 H), 4.32- 4.29 (m, 1 H), 4.13-4.10 (m, 5 H), 4.02-3.95 (m , 2 H), 3.87-3.83 (m, 1 H), 3.72 -3.68 (m, 1 H), 3.02 (d, J = 13.3 Hz, 6 H), 1.69 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 171.94, 158.57, 143.94, 111.31, 102.88, 92.38, 85.28, 82.98, 76.37, 74.12, 73.98, 69.02, 61.14, 53.62, 53.48, 41.52, 35.79, 3.53。

化合物２６ａのシリル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物２６ａ（１７．０ｇ、２３．０ｍｍｏｌ）から化合物２６ｂを収率７９％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.78 (s, 1 H), 8.02 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 6.08 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 5.98 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 5.79 (d, 1 H), 4.32-4.26 (m, 3 H), 4.22-4.14 (m, 4 H), 4.08-3.99 (m, 2 H), 3.98 (dd, J = 11.6 Hz, J = 1.8 Hz, 1 H), 3.08 (d, J = 4.4 Hz, 6 H), 2.36 (s, 1 H), 1.79-1.75 (m, 6 H), 1.49 (s, 6 H), 0.10 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 171.81, 158.52, 156.25, 141.78, 111.30, 102.72, 88.56, 88.00, 83.97, 82.80, 77.85, 74.26, 74.14, 70.60, 68.45, 66.98, 61.41, 53.80, 53.65, 41.35, 35.06, 32.14, 3.57, 1.63。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた２６ｂの色素コンジュゲート化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物２６ｂ（１７．４ｇ、２３．６ｍｍｏｌ）から化合物２６ｃを収率７９％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.78 (s, 1 H), 8.31 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.94-7.85 (m, 5 H), 7.42 (s, 1 H), 6.68 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 6.06 (d, J = 2.3 Hz, 1 H), 5.90 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 5.82 (s, 1 H), 4.54-4.50 (m, 2 H), 4.37-4.34 (m, 1 H), 4.31-4.30 (m, 2 H), 4.25-4.23 (m, 1 H), 4.19-4.13 (m, 2 H), 4.02-4.01 (m, 2 H), 3.91-3.87 (m, 3 H), 3.33 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.09-3.06 (m, 7 H), 1.81-1.77 (m, 6 H), 1.64 (s, 6 H), 1.13 (t, J = 7.0 Hz, 3 H), 0.09 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 171.92, 158.66, 156.70, 156.61, 156.29, 150.68, 147.61, 144.17, 141.59, 126.39, 124.77, 122.84, 121.05, 111.51, 111.45, 102.81, 89.11, 83.85, 83.12, 83.07, 74.34, 74.22, 72.69, 68.32, 61.44, 54.08, 53.99, 50.57, 47.56, 45.77, 41.53, 35.25, 30.98, 12.28, 3.75, 1.80, 1.77。

化合物２６ｃのホスフィチル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物２６ｃ（２０．０ｇ、１８．６ｍｍｏｌ）から化合物２６ｄを収率８６％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.65 (s, 1 H), 8.31 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.89 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.86 (d, J = 7.3 Hz, 1 H), 7.79 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.57 および 7.56 (各々 s, 1 H), 6.69 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 6.04-6.04 (m, 1 H), 5.82 および 5.81 (各々 d, J = 7.2 Hz, 1 H), 5.65 および 5.61 (各々 s, 1 H), 4.58-4.54 (m, 2 H), 4.34- 4.27 (m, 2 H), 4.20-4.07 (m, 5 H), 3.95-3.75 (m, 4 H), 3.65-3.52 (m, 2 H), 3.39-3.30 (m, 5 H), 3.07 (d, J = 23.7 Hz, 6 H), 1.78-1.76 m, 6 H), 1.61 および 1.60 (各々 s, 6 H), 1.18- 1.07 (m, 15 H), 0.11 および 0.10 (各々 s, 18 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 150.74, 150.37。

Ｄ．５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２−シリル−ｒＵアミダイト（２７ｄ）
２’−ＭＰ−オルトホルメート保護化および５’，３’−ＴｉｐｄｓｒＵ（２５ａ）の脱シリル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ａの２’保護化および脱シリル化と同様の製造方法により、５’，３’−ＴｉｐｄｓｒＵ（５０．０ｇ、１０２．７ｍｍｏｌ）から化合物２７ａを収率６３％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 10.05 (b, 1 H), 7.66 (d, J = 7.0 Hz, 1 H), 5.77 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 5.70 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 5.57 (s, 1 H), 4.57 (t, J = 5.0 Hz, 1 H), 4.32-4.29 (m, 1 H), 4.18-4.14 (m, 4 H), 4.04-4.00 (m, 1 H), 3.87-3.83 (m, 1 H), 3.75- 3.71 (m, 1 H), 3.42 (b, 2 H), 1.76 (s, 6 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 164.26, 150.78, 142.51, 111.08, 102.44, 90.37, 85.26, 83.53, 69.98, 61.81, 54.02, 53.96, 3.57。

化合物２７ａのシリル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物２７ａ（２２．０ｇ、５５．７８ｍｍｏｌ）から化合物２７ｂを収率８０％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 7.83 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 6.08 (d, J = 5.4 Hz, 1 H), 5.65 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 5.57 (s, 1 H), 4.33 (t, J = 5.2 Hz, 1 H), 4.22-4.19 (m, 1 H), 4.16-4.14 (m, 2 H), 4.09-3.99 (m, 3 H), 3.94-3.79 (m, 2 H), 2.37 (s, 1 H), 1.74-1.72 (m, 6 H), 1.45 (s, 6 H), 0.07 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 171.16, 163.94, 150.82, 140.67, 110.70, 102.71, 87.98, 86.75, 84.80, 83.27, 83.23, 76.30, 73.88, 73.84, 70.85, 70.29, 67.16, 32.58, 60.39, 54.00, 53.79, 32.21, 32.19, 21.02, 14.21, 3.54, 1.69。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた２７ｂの色素コンジュゲート化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物２７ｂ（３９．４ｇ、４３．０ｍｍｏｌ）から化合物２７ｃを収率９１％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.31 (d, J = 7.2 Hz, 2 H), 8.11 (b, 1 H), 7.92 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.88 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.79 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.33 (s, 1 H), 6.69 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 6.05 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 5.65 (s, 1 H), 5.58 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.54 (t, J = 6.3 Hz, 2 H), 4.39 (d, J = 5.1 Hz, 1 H), 4.24-4.19 (m, 3 H), 4.16-4.14 (m, 2 H), 4.06-4.05 (m, 1 H), 3.95-3.89 (m, 3 H), 3.82-3.78 (m, 1 H), 3.33 (q, J = 6.9 Hz, 2 H), 3.05 (d, J = 4.1 Hz, 1 H), 1.80-1.78 (m, 6 H), 1.64 (s, 6 H), 1.13 (t, J = 7.0 Hz, 3 H), 0.09 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 163.68, 156.63, 156.16, 150.63, 147.57, 144.13, 140.53, 126.36, 124.74, 122.82, 120.94, 111.45, 111.02, 110.80, 102.53, 87.29, 84.49, 83.45, 76.07, 73.90, 73.87, 72.49, 69.77, 62.28, 54.10, 53.97, 47.65, 45.84, 30.87, 12.24, 3.65, 1.74。

化合物２７ｃのホスフィチル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物２７ｃ（３７．０ｇ、３６．２ｍｍｏｌ）から化合物２７ｄを収率８２％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.17 (b, 1 H), 8.31 (d, J = 7.1 Hz, 2 H), 7.89 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.80 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.67 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 7.56 および 7.55 (各々 s, 1 H), 6.70 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.97 および 5.96 (各々 d, J = 6.7 Hz, 1 H), 5.55-5.50 (m, 2 H), 4.57 (t, J = 5.9 Hz, 2 H), 4.41-4.26 (m, 2 H), 4.17-4.07 (m, 5 H), 3.91-3.86 (m, 2 H), 3.84-3.71 (m, 2 H), 3.66-3.54 (m, 2 H), 3.41-3.27 (m, 5 H), 1.78- 1.76 (m, 6 H), 1.61 および 1.60 (各々 s, 6 H), 1.20-1.08 (m, 15 H), 0.11 および 0.09 (各々 s, 18 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d150.59, 149.55。

Ｅ．５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２−シリル−２’−ＯＭｅ−Ａ（ＮｉＢｕ）アミダイト（２８ｄ）
化合物２８ａのシリル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物２８ａ（１７．６ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物２８ｂを収率７７％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.69 (s, 1 H), 8.47 (s, 1 H), 8.44 (b, 1 H), 6.26 (d, J = 4.7 Hz, 1 H), 4.48 (q, J = 4.4 Hz, 1 H), 4.23 (t, J = 4.8 Hz, 1 H), 4.20-4.17 (m, 1 H), 4.06 (dd, J = 12.0 Hz, J = 2.8 Hz, 1 H), 3.94 (dd, J = 12.0 Hz, J = 2.31 Hz, 1 H), 3.48 (s, 3 H), 3.31 (p, J = 6.8 Hz, 1 H), 2.80 (d, J = 4.9 Hz, 1 H), 2.40 (s, 1 H), 1.55 (s, 6 H), 1.28 (d, J = 6.8 Hz, 6 H), 0.14 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75 MHz) d 176.55, 152.73, 151.23, 149.40, 141.57, 122.32, 88.20, 86.40, 85.39, 84.67, 70.87, 69.89, 67.31, 62.62, 58.86, 36.09, 32.33, 32.30, 19.32, 1.80。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた２８ｂの色素コンジュゲート化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物２８ｂ（２４．５ｇ、３８．３ｍｍｏｌ）から化合物２８ｃを収率８３％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.65 (s, 1 H), 8.41 (b, 1 H), 8.32 (d, J = 8.6 Hz, 2 H), 7.91 (d, J = 8.6 Hz, 2 H), 7.82 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 7.45 (s, 1 H), 6.65 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 6.21 (d, J = 3.2 Hz, 1 H), 4.55 (t, J = 6.3 Hz, 2 H), 4.44 (q, J = 5.7 Hz, 1 H), 4.17-4.09 (m, 2 H), 4.02 (dd, J= 12.0 Hz, J= 3.0 Hz, 1 H), 3.92- 3.87 (m, 3 H), 3.54 (s, 3 H), 3.35-3.24 (m, 2 H), 3.07 (d, J = 6.3 Hz, IH), 1.67 (s, 6 H), 1.28 (d, J = 6.9 Hz, 6 H), 1.09 (t, J = 7.0 Hz, 3 H), 0.10 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 176.55, 156.73, 156.22, 152.74, 151.00, 150.62, 149.29, 147.77, 144.23, 141.44, 126.40, 124.88, 122.91, 121.20, 111.52, 86.64, 84.79, 84.40, 72.43, 69.08, 61.97, 58.99, 50.71, 47.74, 45.99, 36.12, 30.99, 30.85, 19.38, 19.36, 12.32, 1.85。

化合物２８ｃのホスフィチル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物２８ｃ（３１．０ｇ、３１．７ｍｍｏｌ）から化合物２８ｄを収率９５％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.65 (b, 1 H), 8.55 (s, 1 H), 8.39 および 8.38 (各々 s, 1 H), 8.32 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 7.89 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 7.74 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.65 および 7.64 (各々 s, 1 H), 6.65 (d, J = 7.7 Hz, 2 H), 6.11 (t, J = 4.5 Hz, 1 H), 4.62-4.53 (m, 3 H), 4.43-4.37 (m, 1 H), 4.25-4.21 (m, 1 H), 3.96 および 3.92 (各々 d, J = 3.4 Hz, 1 H), 3.87-3.78 (m, 3 H), 3.70-3.57 (m, 2 H), 3.44-3.32 (m, 6 H), 3.30-3.24 (m, 2 H), 3.10 (p, J = 6.8 Hz, 1 H), 1.62 および 1.61 (各々 s, 6 H) 1.22-1.16 (m, 18 H), 1.05 (t, J = 5.3 Hz, 3 H), 0.1 および 0.09 (各々 s, 18 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz), d 151.18, 149.89。

Ｆ．５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２−シリル−２’−ＯＭｅ−Ｇ（ＮｉＢｕ）アミダイト（２９ｄ）
化合物２９ａのシリル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物２９ａ（１８．４ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物２９ｂを収率７１％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.99 (s, 1 H), 8.13 (s, 1 H), 5.91 (d, J = 5.6 Hz, 1 H), 4.43 (q, J = 3.6 Hz, 1 H), 4.15-4.11 (m, 2 H), 3.96-3.85 (m, 2 H), 3.30 (s, 3 H), 3.17 (d, J = 4.0 Hz, 1 H), 2.78 (p, J = 6.8 Hz, 1 H), 2.41 (s, 1 H), 1.50 (s, 6 H), 1.21-1.17 (m, 6 H), 0.10 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d179.66, 162.91, 159.09, 148.71, 148.17, 137.50, 121.13, 88.13, 85.78, 85.60, 84.93, 70.97, 70.38, 67.33, 63.18, 58.45, 36.71, 36.31, 32.33, 31.63, 19.16, 1.80。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた２９ｂの色素コンジュゲート化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物２９ｂ（２３．３ｇ、３５．６ｍｍｏｌ）から化合物２９ｃを収率８０％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.12 (b, 1 H), 8.30 (d, J = 8.7 Hz, 2 H), 8.13 (s, 1 H), 7.92-7.75 (m, 5 H), 6.62 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.91 (d, J = 4.8 Hz, 1 H), 4.70-4.68 (m, 2 H), 4.38 (q, J = 4.3 Hz, 1 H), 4.13-4.06 (m, 3 H), 3.94- 3.80 (m, 4 H), 3.39-3.30 (m, 5 H), 3.16 (d, J = 4.7 Hz, 1 H), 2.66 (p, J = 6.9 Hz, 1 H), 2.02 (s, 2 H), 1.64 (s, 6 H), 1.21 (d, J = 6.9 Hz, 8 H), 1.10 (t, J = 6.8 Hz, 3 H), 0.09 (d, J = 7.9 Hz, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 178.96, 156.86, 155.94, 155.73, 151.04, 148.29, 147.87, 147.55, 144.04, 137.55, 126.41, 126.34, 124.82, 122.91, 121.81, 121.87, 121.42, 111.50, 85.96, 85.17, 84.83, 72.64, 69.82, 62.38, 60.56, 58.83, 50.56, 47.86, 45.60, 36.49, 30.99, 30.74, 21.22, 19.22, 19.12, 14.35, 12.20, 1.80。

化合物２９ｃのホスフィチル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物２９ｃ（２８．４ｇ、２８．５ｍｍｏｌ）から化合物２９ｄを収率８７％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.30 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 8.11 および 8.10 (各々 s, 1 H), 7.88 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.74 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.72 および 7.71 (各々 s, 1 H), 6.65 (d, J = 8.3 Hz, 2 H), 5.89 および 5.88 (各々 d, J = 3.5 Hz, 1 H), 4.59 (t, J = 5.8 Hz, 2 H), 4.51-4.44 (m, 1 H), 4.22-4.16 (m, 2 H), 3.91-3.75 (m, 4 H), 3.67-3.52 (m, 2 H), 3.41 および 3.39 (各々 s, 3 H), 3.36-3.28 (m, 5 H), 2.70-2.60 (m, 1 H), 1.63 (s, 6 H), 1.19-1.15 (m, 18 H), 1.07 (t, J = 6.9 Hz, 3 H), 0.13-0.10 (m, 18 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 151.10, 150.36。

Ｇ．５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２−シリル−２’−ＯＭｅ−Ｃ（ＮＡｃ）アミダイト（３０ｄ）
化合物３０ａのシリル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物３０ａ（１５．０ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物３０ｂを収率７７％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.56 (d, J= 7.5 Hz, 1 H), 8.48 (b, 1 H), 7.39 (d, J= 7.4 Hz, 1 H), 6.01 (s, 1 H), 4.28-4.22 (m, 1 H), 4.16 (dd, J = 12.0 Hz, J = 2.3 Hz, 1 H), 3.98 (s, 1 H), 3.95 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 3.75 (d, J = 5.3 Hz, IH), 3.70 (s, 3 H), 2.56 (d, J= 9.6 Hz, 1 H), 2.41 (s, 1 H), 2.20 (s, 3 H), 1.56-1.54 (m, 6 H), 0.15 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 171.18, 163.37, 155.22, 145.44, 88.24, 88.18, 84.32, 84.26, 70.95, 67.49, 67.36, 60.67, 58.93, 32.38, 24.99, 1.81。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた３０ｂの色素コンジュゲート化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物３０ｂ（２２．７ｇ、３８．６ｍｍｏｌ）から化合物３０ｃを収率８８％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.48 (d, J= 7.5 Hz, 1 H), 8.42 (b, 1 H), 8.32 (d, J= 8.9 Hz, 2 H), 7.91 (d, J= 8.9 Hz, 2 H), 7.87 (d, J= 9.0 Hz, 2 H), 7.42 (s, 1 H), 7.31 (d, J= 7.4 Hz, 1 H), 6.69 (d, J= 9.1 Hz, 2 H), 5.94 (s, 1 H), 4.57 (t, J= 6.4 Hz, 2 H), 4.22-4.14 (m, 1 H), 4.11-4.04 (m, 1 H), 3.95-3.90 (m, 4 H), 3.73-3.69 (m, 4 H), 3.30 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.04 (d, J = 9.6 Hz, 1 H), 2.17 (s, 3 H), 1.65 (s, 6 H), 1.56 (s, 1 H), 1.11 (t, J = 7.1 Hz, 3 H), 0.11 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 170.64, 162.84, 156.74, 156.22, 155.07, 150.66, 147.77, 145.21, 144.27, 126.45, 124.88, 122.92, 121.02, 111.55, 96.45, 88.37, 84.10, 83.87, 72.46, 67.03, 60.59, 60.47, 58.97, 50.72, 47.68, 45.99, 31.00, 30.92, 25.10, 13.50, 1.87。

化合物３０ｃのホスフィチル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物３０ｃ（３１．５ｇ、３４．０ｍｍｏｌ）から化合物３０ｄを収率９０％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.89 (b, 1 H), 8.34-8.30 (m, 3 H), 7.90 (d, J = 9.8 Hz, 2 H), 7.79 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.55 および7.54 (各々 s, 1 H), 7.24 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 6.68 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.90-5.87 (m, 1 H), 4.56 (t, J = 5.9 Hz, 2 H), 4.33-4.18 (m, 1 H), 4.12-4.07 (m, 1 H), 4.03-3.99 (m, 1 H), 3.90-3.77 (m, 4 H), 3.64- 3.53 (m, 2 H), 3.50 および 3.48 (各々 s, 3 H), 3.37-3.27 (m, 5 H), 2.10 (s, 3 H), 1.62-1.59 (m, 6 H), 1.14-1.07 (m, 15 H), 0.11-0.10 (m, 18 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 150.58, 150.03。

Ｈ．５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２−シリル−２’−ＯＭｅ−Ｕアミダイト（３１ｄ）
化合物３１ａのシリル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物３１ａ（１２．９ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物３１ｂを収率７５％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.99 (b, 1 H), 8.02 (d, J = 8.2 Hz, 1 H), 6.01 (d, J = 3.2 Hz, 1 H), 5.70 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.32-4.26 (m, 1 H), 4.12-3.96 (m, 2 H), 3.96-3.93 (m, 1 H), 3.77 (dd, J= 5.0 Hz, J= 3.3 Hz, 1 H), 3.56 (s, 3 H), 2.38 (s, 1 H), 1.52 (s, 6 H), 0.13 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 163.95, 150.67, 140.50, 102.55, 88.10, 86.87, 84.55, 84.12, 70.86, 68.51, 67.31, 61.57, 58.75, 32.33, 1.84。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた３１ｂの色素コンジュゲート化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物３１ｂ（２０．０ｇ、３６．６ｍｍｏｌ）から化合物３１ｃを収率８３％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.38 (b, 1 H), 8.27 (d, J = 7.2 Hz, 2 H), 7.93-7.82 (m, 5 H), 7.35 (s, 1 H), 6.66 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.90 (d, J = 1.9 Hz, 1 H), 5.55 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.54 (t, J = 6.2 Hz, 2 H), 4.24-4.17 (m, 1 H), 4.01-3.83 (m, 4 H), 3.69 (dd, J= 5.2 Hz, J= 1.9 Hz, 1 H), 3.55 (s, 3 H), 3.28 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.09 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 1.63 (s, 6 H), 1.10 (t, J = 7.0 Hz, 3 H), 0.07 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 163.84, 156.66, 156.09, 150.62, 150.46, 147.65, 144.18, 140.26, 126.40, 124.51, 122.87, 120.98, 111.50, 102.17, 87.13, 84.06, 84.00, 72.37, 67.83, 61.06, 58.78, 50.66, 47.70, 45.96, 30.91, 12.29, 1.85。

化合物３１ｃのホスフィチル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物３１ｃ（２６．２ｇ、３０．２ｍｍｏｌ）から化合物３１ｄを収率９１％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.24 (b, 1 H), 8.30 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.88 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 7.88-7.74 (m, 3 H), 7.54 および7.53 (各々 s, 1 H), 6.69 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.88 (d, J = 5.0 Hz, 1 H), 5.51 および 5.50 (各々 d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.56 (t, J = 5.9 Hz, 2 H), 4.36-4.27 (m, 1 H), 4.12-4.07 (m, 1 H), 3.90-3.74 (m, 5 H), 3.40- 3.28 (m, 8 H), 1.60 および 1.59 (各々 s, 6 H), 1.71-1.07 (m, 15 H), 0.10 および 0.09 (各々 s, 18 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 151.06, 150.13。

Ｉ．５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２−シリル−２’−ＯＭｅ−Ｕアミダイト（３１ｄ）
化合物３２ａのシリル化：実施例２の方法Ｉに記載と同様の方法により化合物３２ａ（２４．５ｇ、１００ｍｍｏｌ）のＮ−アセチル化保護を行った。シリル化反応は、化合物３２ａを溶かすのを補助するジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）を加えた以外は、実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ａのシリル化と同様の製造方法により行った。化合物３２ａ（２４．５ｇ、１００ｍｍｏｌ）から化合物３２ｂを収率６５％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 10.16 (b, 1 H), 8.38 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 7.37 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 5.97 (d, J = 15.5 Hz, 1 H), 4.94 (dd, J = 52.0 Hz, J = 3.51 Hz, 1 H), 4.46-4.43 (m, 1 H), 4.24-4.08 (m, 3 H), 3.91-3.88 (m, 1 H), 2.37 (s, 1 H), 2.17 (s, 3 H), 1.45 (s, 6 H), 0.05 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 niHz) d171.18, 163.24, 155.21, 144.86, 96.97, 95.41, 92.92, 89.01, 88.56, 87.95, 82.88, 70.90, 67.59, 67.36, 67.18, 60.29, 32.17, 24.82, 1.67; ¹⁹F NMR (CDCl ₃, 282.4 mHz) d -203.35。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた３２ｂの色素コンジュゲート化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物３２ｂ（３７．７ｇ、６５．０ｍｍｏｌ）から化合物３２ｃを収率７２％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 10.05 (b, 1 H), 8.44 (d, J = 7.5 Hz, 1 H), 8.27 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.88 (d, J = 8.8 Hz, 2 H), 7.83 (d, J = 9.0 Hz, 2 H) 7.43-7.40 (m, 2 H), 6.68 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 6.04 (d, J = 15.9 Hz, 1 H), 5.47- 5.44 (m, 1 H) 5.05 (dd, J = 51.9 Hz, J = 3.6 Hz, 1 H), 4.60 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 4.44-4.34 (m, 1 H), 4.21-3.92 (m, 6 H), 3.32 (q, J = 6.8 Hz, 2 H), 2.27 (s, 3 H), 1.65 (s, 6 H), 1.12 (t, J = 6.9 Hz, 3 H), 0.14 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 171.28, 163.38, 162.95, 156.75, 155.60, 155.07, 150.73, 147.70, 144.96, 144.27, 126.50, 124.90, 122.98, 120.96, 111.62, 96.95, 95.70, 93.21, 89.47, 89.03, 82.88, 71.68, 67.00, 66.78, 60.66, 60.31, 50.66, 47.94, 46.05, 36.80, 31.71, 30.84, 30.78, 25.16, 21.31, 12.10, 1.97; ¹⁹F NMR (CDCl ₃, 282.4 mHz) d -202.42。

化合物３２ｃのホスフィチル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物３２ｃ（４２．６１ｇ、４６．６ｍｍｏｌ）から化合物３２ｄを収率６５％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.18 (b, 1 H), 8.30-8.23 (m, 3 H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.75 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 7.55 および7.54 (各々 s, 1 H), 7.25 (d, J = 7.6 Hz, 1 H), 6.65 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 5.91 (d, J = 17.3 Hz, 1 H), 4.97 (dt, J = 51.6 Hz, J = 4.9 Hz, 1 H), 4.56 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 4.42-4.25 (m, 1 H), 4.14-4.06 (m, 2 H), 3.89-3.80 (m, 3 H), 3.70-3.48 (m, 2 H), 3.36-3.27 (m, 5 H), 2.10 (s, 3 H), 1.61-1.59 (m, 6 H), 1.12-1.05 (m, 15 H) 0.10-0.08 (m, 18 H); ¹⁹F NMR (CD ₃CN, 283.4 mHz) d - 200.72, -200.75, -200.85, -200.87; ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 151.29, 151.24, 151.07, 151.01。

Ｊ．５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２−シリル−２’−Ｆ−Ｕアミダイト（３３ｄ）
化合物３３ａのシリル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ａのシリル化と同様の製造方法により、化合物３３ａ（１２．３ｇ、５０．０ｍｍｏｌ）から化合物３３ｂを収率７８％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 7.96 (s, 1 H), 7.90 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 6.13 (dd, J = 14.7 Hz, J = 2.8 Hz, 1 H), 5.68 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.92 (dt, J = 52.7 Hz, J = 3.5 Hz, 1 H), 4.38-430 (m, 1 H), 4.11-3.90 (m, 3 H), 2.40 (s, 1 H), 1.49 (s, 6 H), 0.10 (s, 18 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 163.85, 162.93, 150.52, 140.24, 102.70, 95.02, 92.52, 88.01, 87.12, 86.67, 83.67, 70.93, 69.01, 68.79, 67.32, 61.42, 36.69, 32.25, 31.61, 1.75; ¹⁹F NMR (CDCl ₃, 282.4 mHz) d -206.13。

ＤＲ−Ｎ_３を用いた３３ｂの色素コンジュゲート化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｂの色素コンジュゲート化と同様の製造方法により、化合物３３ｂ（２１．０ｇ、３９．０ｍｍｏｌ）から化合物３３ｃを収率７８％で製造した。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 8.82 (b, 1 H), 8.29 (d, J = 8.9 Hz, 2 H), 7.91-7.84 (m, 5 H), 7.29 (s, 1 H), 6.67 (d, J = 9.1 Hz, 2 H), 6.00 (d, J = 16.0 Hz, 1 H), 5.59 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 4.93 (dd, J = 52.4 Hz, J = 4.1 Hz, 1 H), 4.88 (d, J = 6.8 Hz, 1 H), 4.55 (t, J = 6.0 Hz, 2 H), 4.46-4.37 (m, 1 H), 4.10-3.90 (m, 5 H), 3.29 (q, J = 6.9 Hz, 2 H), 1.61 (s, 6 H), 1.10 (t, J = 6.8 Hz, 3 H), 0.08 (s, 9 H), 0.06 (s, 9 H); ¹³C NMR (CDCl ₃, 75.5 mHz) d 163.15, 156.69, 155.47, 150.54, 150.03, 147.87, 144.33, 140.10, 126.45, 124.88, 122.95, 120.66, 116.59, 111.58, 102.27, 93.53, 93.03, 88.17, 87.72, 82.89, 71.52, 67.63, 67.41, 60.62, 50.59, 47.87, 46.06, 30.76, 30.69, 12.35, 20.9, 1.90, 1.81 ; ¹⁹F NMR (CDCl ₃, 282.4 mHz) d -202.68。

化合物３３ｃのホスフィチル化：実施例４の方法Ａに記載の化合物２４ｃのホスフィチル化と同様の製造方法により、化合物３３ｃ（２６．５ｇ、３０．４ｍｍｏｌ）から化合物３３ｄを収率８２％で製造した。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.40 (b, 1 H), 8.32 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.90 (d, J = 9.0 Hz, 2 H), 7.80 (d, J = 9.2 Hz, 2 H), 7.74 および 7.73 (各々 d, J = 2.2 Hz, 1 H), 7.57 および 7.56 (各々 s, 1 H), 6.71 (d, J = 9.3 Hz, 2 H), 5.94 (d, J = 16.9 Hz, 1 H), 5.52 (各々 d, J = 3.2 Hz, 1 H), 5.13-5.11 および 4.95-4.94 (各々 m, 1 H), 4.59 (t. J = 6.0 Hz, 2 H), 4.52-4.34 (m, 1 H), 4.13-4.01 (m, 1 H), 3.93-3.86 (m, 4 H), 3.65-3.56 (m, 2 H), 3.40-3.33 (m, 5 H), 1.62 (s, 6 H), 1.17-1.12 (m, 15 H), 0.12-0.11 (m, 18 H); ¹⁹F NMR (CD ₃CN, 282.4 mHz) d -201.48, -201.51, -202.13, -202.16; ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 mHz) d 151.42, 151.35, 151.03, 150.94。

５’−ＤＢおよびＡＲ（ＯｉＰｒ）_２シリルアミダイト類の合成
Ａ．５’−ＤＢ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−ｒＧ（ｉＢｕ）アミダイト（３４ｂ）
ＤＢ−Ｎ_３を用いた５ｂの色素コンジュゲート化：ヨウ化銅（０．０３ｇ、０．１９ｍｍｏｌ）を、５ｂ（１．５４ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）、ＤＢ−Ｎ_３（１．０ｇ、２．８９ｍｍｏｌ）およびｉＰｒ_２ＮＥｔ（０．２５ｇ、１．９２ｍｍｏｌ）を溶かしたトルエン溶液（３８ｍＬ）に加えた。この溶液を１分間ソニケーションし、続いて室温で１時間撹拌した後、酢酸エチルおよび飽和食塩水により分液した。水層から青色が消えるように水層を１回酢酸エチルで再抽出した。得られた有機層を合して減圧濃縮した。この粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル３００ｍＬ；溶出液（酢酸エチル／アセトン／ヘキサン＝２：２：６（ｖ/ｖ/ｖ）から８：２：０（ｖ/ｖ/ｖ）０．１％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有）により精製した。生成物を含むフラクションを合して減圧濃縮し、３４ａを青色泡状物として得た。収量は１．６５ｇ（収率７６％）であった。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.82 (b, 1 H), 8.54 (s, 1 H), 8.09 (s, 1 H), 7.78 (s, 1 H), 7.70 (d, J= 9.2 Hz, 2 H), 6.68 (d, J= 9.2 Hz, 2 H), 5.95 (d, J= 5.2 Hz, 1 H), 5.43 (s, 1 H), 4.71-4.63 (m, 3 H), 4.45-4.40 (m, 1 H), 4.25-4.16 (m, 2 H), 4.13-4.03 (m, 6 H), 3.98-3.83 (m, 5 H), 3.74-3.53 (m, 5 H), 3.44-3.37 (m, 2 H), 2.78-2.70 (m, 1 H), 1.97 (s, 3 H), 1.96 (s, 3 H), 1.63 (s, 6 H), 1.18 (d, J= 6.6 Hz, 6 H), 1.14 (d, J= 6.6 Hz, 12 H); ¹³C NMR (CD ₃CN, 75.5 mHz) d 182.63, 181.42, 172.01, 171.95, 156.70, 156.66, 155.68, 150.04, 149.63, 147.96, 145.55, 143.94, 138.93, 122.97, 122.13, 113.96, 113.83, 87..32, 86.22, 77.98, 73.46, 71.51, 67.52, 67.49, 67.38, 67.23, 64.33, 64.27, 64.18, 64.05, 51.63, 48.75, 47.08, 37.21, 31.54, 31.46, 26.15, 21.46, 21.14, 21.06, 19.72, 19.67, 12.87。

化合物３４ｃのホスフィチル化：ビス（ジイソプロピルアミノ）メトキシホスフィン（０．５７ｇ、２．１９ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（３ｍＬ）に溶かし、０．５Ｍ濃度の５−エチルチオ−１−Ｈ−テトラゾールの無水アセトニトリル溶液（１．５ｍＬ、０．７３ｍｍｏｌ）を加えた。続いて、ジイソプロピルアミン（０．１５ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を加え、このホスフィン溶液を室温にて５分間撹拌した。別のフラスコの中に、３４ａ（１．６５ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアミン（０．１５ｇ、１．４６ｍｍｏｌ）を、ＣＨ_２Ｃｌ_２（３ｍＬ）により溶かした。こうして活性化させたホスフィン溶液をヌクレオシド溶液に加え、反応溶液を室温で撹拌した。１６時間撹拌後、無水エタノール（１ｍＬ）で反応を止め、溶液を乾固するまで濃縮した。得られたペースト状物質をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル３００ｍＬ；溶出液（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ヘキサン＝５：９５（ｖ/ｖ）２％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有に続いてアセトン／へキサン＝２：８（ｖ/ｖ）から４：６（ｖ/ｖ）０．５％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有）を用いて精製した。生成物を含むフラクションを合して減圧濃縮し、３４ｂを青色泡状物として得た。収量は１．０ｇ（収率５３％）であった。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 8.59 (b, 1 H), 8.10 および 8.08 (各々 s, 1 H), 7.76-7.65 (m, 3 H), 6.65-6.62 (m, 2 H), 5.98-5.93 (m, 1 H), 5.36 および 5.30 (各々 s, 1 H), 4.75-4.60 (m, 3 H), 4.60-4.41 (m, 1 H), 4.30-4.15 (m, 3 H), 4.04- 3.82 (m, 7 H), 3.70-3.45(m, 7 H), 3.40-3.30 (m, 5 H), 2.79-2.64 (m, 1 H), 1.96-1.92 (m, 6 H), 1.58 および 1.57 (各々 s, 6 H), 1.23-1.10 (m, 33 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 rnHz) d 151.05, 150.85。

Ｂ．５’−ＡＲ（ＯｉＰｒ）_２−シリル−ｒＡ（ｉＢｕ）アミダイト（３５ｂ）
ＡＲ−Ｎ_３を用いた４ｂの色素コンジュゲート化：ヨウ化銅（０．１５ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）を、４ｂ（６．０４ｇ、７．７ｍｍｏｌ）、ＡＲ−Ｎ_３（２．９２ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）およびｉＰｒ_２ＮＥｔ（１．０ｇ、７．７ｍｍｏｌ）を溶かしたトルエン溶液（１５４８ｍＬ）に加えた。この溶液を１分間ソニケーションし、続いて室温で２時間撹拌した後、酢酸エチルおよび飽和食塩水により分液した。水層から赤色が消えるように水層を１回酢酸エチルで再抽出した。得られた有機層を合して減圧濃縮した。この粗製物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル２００ｍＬ；溶出液（酢酸エチル／アセトン／ヘキサン＝２：２：６（ｖ/ｖ/ｖ）から６：２：２（ｖ/ｖ/ｖ）０．１％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有）を用いて精製した。生成物を含むフラクションを合して減圧濃縮し、３５ａを赤色泡状物として得た。収量は６．７ｇ（収率８１％）であった。¹H NMR (CDCl ₃, 300 mHz) d 9.88 (bs, 1 H), 8.64 (s, 1 H), 8.32-8.19 (m, 4 H), 7.77-7.43 (m, 5 H), 6.88 (d, J= 8.2 Hz, 1 H), 6.30 (d, J= 4.2 Hz, 1 H), 5.50 (s, 1 H), 4.78 (t, J= 4.7 Hz, 1 H), 4.61 (t, J= 6.3 Hz,
2 H), 4.47 (q, J= 5.0 Hz, 1 H), 4.25-4.08 (m, 7 H), 4.00-3.86 (m, 4 H), 3.81-3.70 (m, 3 H), 3.66-3.67 (m, 2 H), 3.29-3.21 (m, 1 H), 2.02 (s, 3 H), 2.00 (s, 3 H), 1.66 (s, 6 H), 1.28 (d, J= 6.8 Hz, 6 H), 1.10 (d, J= 6.1 Hz, 12 H)。

化合物３５ａのホスフィチル化：ビス（ジイソプロピルアミノ）メトキシホスフィン（２．４０ｇ、９．３ｍｍｏｌ）をＣＨ_２Ｃｌ_２（１２ｍＬ）に溶かし、０．５Ｍ濃度の５−エチルチオ−１−Ｈ−テトラゾールの無水アセトニトリル溶液（６．２ｍＬ、３．１ｍｍｏｌ）を加えた。続いて、ジイソプロピルアミン（０．６３ｇ、６．２ｍｍｏｌ）を加え、このホスフィン溶液を室温にて５分間撹拌した。別のフラスコの中に、３５ａ（６．７ｇ、６．２ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアミン（０．６３ｇ、６．２ｍｍｏｌ）を、ＣＨ_２Ｃｌ_２（１２ｍＬ）により溶かした。こうして活性化させたホスフィン溶液をヌクレオシド溶液に加え、反応溶液を室温で撹拌した。１６時間撹拌後、無水エタノール（２ｍＬ）で反応を止め、溶液を乾固するまで濃縮した。得られたペースト状物質をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル２５０ｍＬ；溶出液（ＣＨ_２Ｃｌ_２／ヘキサン＝５：９５（ｖ/ｖ）２％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有からアセトン／へキサン＝２：８（ｖ/ｖ）に続いて３：７（ｖ/ｖ）０．５％（ｖ/ｖ）Ｅｔ_３Ｎ含有）を用いて精製した。生成物を含むフラクションを合して減圧濃縮し、３５ｂを赤色泡状物として得た。収量は６．４ｇ（収率８３％）であった。¹H NMR (CD ₃CN, 300 mHz) d 9.72 (b, 1 H), 8.65 (s, 1 H), 8.56 および 8.54 (各々 s, 1 H), 8.32 (s, 1 H), 8.19-8.12 (m, 2 H), 7.82-7.69 (m, 3 H), 7.52-7.45 (m, 2 H), 7.02-6.95 (m, 1 H), 5.31 および 5.27 (各々 s, 1 H), 4.91-4.88 (m, 1 H), 4.63-4.51 (m, 3 H), 4.63-4.52 (m, 3 H), 4.22-4.11 (m, 3 H), 4.07-3.79 (m, 7 H), 3.68-3.48 (m, 6 H), 3.42-3.29 (m, 3 H), 3.09 (m, 1 H), 1.95-1.89 (m, 6 H), 1.63 および1.61 (各々 s, 6 H), 1.24-1.04 (m, 30 H); ³¹P NMR (CD ₃CN, 121.5 Hz) d 150.98, 150.28。

ＲＮＡ合成条件および合成例
全てのオリゴヌクレオチドは、５’−シリル−２’−オルトエステル化学合成用のＡＢＩ３９４ＤＮＡ／ＲＮＡシンセサイザーにより合成された。５’−ＤＲ（ＯｉＰｒ）_２シリル−２’−ＡＣＥ保護ホスホラミダイト類を用い、５’−ＢＺＨ−シリル保護ホスホラミダイト類を用いたＲＮＡ合成用に開発された標準合成サイクルを変更することなく用いた（米国特許第６，５９０，０９３参照）。５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２シリル−２’−ＡＣＥ保護ホスホラミダイト類および５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２シリル−２’−ＭＰ保護ホスホラミダイト類については、Ｅｔ_３Ｎ−ＨＦ送液時間に変更を加えた標準サイクルを用いた。Ｅｔ_３Ｎ−ＨＦ送液時間を、３５秒から、それぞれ１５０秒および１２０秒に延長した。ホスホラミダイト類は全て無水アセトニトリルにより０．０６７Ｍに希釈され、６０秒間カップリングさせた。オリゴヌクレオチド合成は全て、０．２マイクロモルから０．６マイクロモルスケールで行われ、標準５’−ＢＺＨ−シリル保護ホスホラミダイト類を用いた同じ配列のコントロール合成と平行して行った。合成終了後、固定化されたＲＮＡを脱保護し、担体から切り出して標準的な手順を用いて分析した。
カップリング効率の定量は、Ｅｔ_３Ｎ−ＨＦ脱保護溶液および洗浄過程に入る前に脱保護に続いて行ったアセトニトリル洗浄の溶液を収集して行った。試料は全て、合成スケールに従って１０ｍＬから２５ｍＬへと０．５ＭＨ_２ＳＯ_４により希釈し、ＵＶ−可視分光器を用いて５４０ｎＭで定量した。カップリング効率（平均ステップ収率）は、以下の式に従って算出した。

平均ステップ収率＝（最終カップリングステップの吸光度／
第１カップリングステップの吸光度）^１／ｎ × １００
上式において、ｎはカップリングステップの全体数を表す。

以下に記載した塩基配列は、５’−ＤＲ（Ｍｅ）_２シリル−２’−ＡＣＥ保護ホスホラミダイト類を用いて合成し、カップリング効率を算出して単離収量と比較した（表１参照）。証明用に、ＳＥＤＩＤＮＯ：１およびＳＥＤＩＤＮＯ：２の色素反応を図１５および図１７にプロットした。また、以下に記載した塩基配列のアニオン交換ＨＰＬＣクロマトグラムも、図１６、図１８−図２４に示した。
SEQ ID NO: 1 33 mer: GCAACUGCUA CGUGUCAUGC AGCUUCAUGC CAU
SEQ ID NO: 2 21 mer: UCGAUCGAUC GAUCGAUCGA U
SEQ ID NO: 3 12 mer: AAAAAAAAAA AA
SEQ ID NO: 4 12 mer: CCCCCCCCCC CC
SEQ ID NO: 512 mer: GGGGGGGGG GG
SEQ ID NO: 6 12 mer: UUUUUUUUU UU
SEQ ID NO: 7 45 mer: AGCUAUCGGA UCGACUAUCA GUUAGGCGGA UUCAAUUGGC UAGCU
SEQ ID NO: 8 21 mer: GUUAACCGUCUGACUCAUGUU

表１．単離収量およびSEQ ID NO: 1−8の合成から算出したステップ収率

比較試験も、５’−ＤＲＭｅ_２シリル、および５’−ＤＲ（ＯＴＭＳ）_２シリルホスホラミダイト類を用いて行った。

Claims

オリゴヌクレオチドの合成方法であって、前記合成方法は、
（ａ）式（１）

で表される５’−Ｏ−保護基を有する、基質結合リボヌクレオチド、リボヌクレオシドまたはオリゴリボヌクレオチドを生成する工程
｛式中、
Ｙはアゾ染料、アントラキノン染料、トリフェニルメタン染料、クマリン染料、キサンテン染料、ローダミン染料またはシアニン染料を含む発色団であり、
Ｑは１，２，３−トリアゾリル基であり、
Ｒ_１およびＲ_２はＣ_１−８アルキル、シクロアルキル、アリール、Ｃ_１−８アルキルオキシ、シクロアルキルオキシ、アルキルシリルオキシ、およびアリールシリルオキシからなる群よりお互いに独立して選ばれる｝、
（ｂ）５’−Ｏ−保護基を除去して遊離の５’−ＯＨ基を生成する工程、
（ｃ）３’−ホスホラミダイトを有するリボヌクレオシドモノマーを基質結合リボヌクレオチド、リボヌクレオシドまたはオリゴリボヌクレオチドと反応させて、それによって前記３’−ホスホラミダイトをホスホトリエステルを生成するために前記基質結合リボヌクレオチド、リボヌクレオシドまたはオリゴリボヌクレオチドの前記遊離の５’−ＯＨとカップリングさせる工程、および、
（ｄ）前記ホスホトリエステルをリン酸トリエステルに変換するために、（ｃ）で生成した前記ホスホトリエステルを好適な酸化剤と反応させる工程を有する。
前記工程（ａ）から工程（ｄ）を繰り返して行うことを特徴とする請求項１に記載の合成方法。
前記リボヌクレオシドモノマーおよび基質結合リボヌクレオチド、リボヌクレオシドまたはオリゴリボヌクレオチドが、さらに２’−Ｏ−保護基を有することを特徴とする請求項１記載の合成方法。
前記工程（ｂ）で除去される５’−Ｏ−保護基を検出する工程をさらに有することを特徴とする請求項１に記載の合成方法。