JP5464664B2 - ファージを含有する生体外殺菌組成物 - Google Patents
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Description
本発明の一つの態様において、前記ファージは、少なくとも一種のアシネトバクター・バウマニ・ファージの純系を含有するものである。例えば、二十面体の頭部と短尾部とを有する形態のアシネトバクター・バウマニ・ファージ、又は二十面体の頭部と収縮性尾部とを有する形態のアシネトバクター・バウマニ・ファージが挙げられる。本発明の組成物において、前記アシネトバクター・バウマニ・ファージはポドウイルス科(podoviridae)の2本鎖DNAウイルス及び/またはマイオウイルス科(Myoviridae)の2本鎖DNAウイルスであっても良い。
本発明の組成物中、前記ファージは、耐酸性と耐アルカリ性を有する。その一つの態様において、前記ファージは、pH4以上、pH12以下の条件下において、ファージの生物活性を保持する。
台湾の花蓮に所在する慈済医院より導管洗浄液、排水系統の廃水、未処理の汚水などの試料を収集し、当該試料をそれぞれ遠心分離機で、4℃、5,000×gで10分間遠心分離し、上澄液を口径0.45μmのメンブレンフィルターにより濾過し、続いて、以下のプラークテストを行う。
127株のアシネトバクター・バウマニ(Acinetobacter baumannii、下記においてAB菌とも略称する)を用いて、本発明の殺菌組成物における宿主特異性を調べて、その内の125菌株は花蓮慈済医院で収集したものであり、他の2菌株はATCC(American Type Culture Collection)より入手したものであって、それぞれATCC19606とATCC17978である。
これにより、界面活性剤の影響を調べ、該界面活性剤が1 重量%の場合を図4に示す。
(1) 温度
ファージを無菌水により108 PFU/mlに稀釈した後、それぞれ4℃、25℃、37℃、42℃、-20℃及び-80℃の異なる温度条件下に放置した。4℃、25℃と37℃における実験中、24時間培養している間、3時間ごとに試料を採取し、ファージ濃度を測定し、その後12週間毎週持続的に追跡した。その結果を図5Aに示す。-20℃と-80℃における実験では、それぞれ2組に分け、第1組は凍結と解凍を繰り返して12週間追跡し、第2組は1回だけ解凍して5週間追跡実験した。この結果を図5Bに示す。
ファージを酸性(pH4)とアルカリ性(pH11)の水溶液でそれぞれ稀釈し、ファージ濃度を108 PFU/mlに調製した後、pH4.7、pH7、pH11の実験において、24時間の間に3時間ごとにファージ濃度を測定し、その後毎週1回追跡し、12週間続けて追跡実験を行った。その結果を図6に示す。
ファージにクロロホルム溶液(0.5%と2%)を加え、ファージ濃度108 PFU/mlに稀釈した後、24時間の間に3時間ごとにファージ濃度を測定し、その後、0.5%のクロロホルム溶液中の実験においては、毎週1回追跡し、3週間続けて追跡し、2%のクロロホルム溶液中の実験においては、6週間追跡した。その結果を図7に示す。
濃度1010 PFU/mlのファージをA、B二組に分け、A組はペプトン(peptone)を、B組は無菌水を、それぞれ用いて、ファージ濃度を10倍に稀釈した後、更に真空遠心乾燥機(speed vac)で乾燥処理し、乾燥後のA、B二組を更にそれぞれ0.5 mlのペプトンと0.5 mlの無菌水に再溶解し、乾燥前後におけるファージの濃度変化を観察した。その結果を表2に示す。
同じ規格の容器中に、同じ濃度の細菌(107 CFU/ml)を入れ、107 PFU/mlのファージを含む本発明の殺菌組成物を容器中に噴霧し、異なる時点で試料を採取し、標準工程により細菌とファージの濃度をそれぞれ定量し、細菌の減少量により殺菌効果を調べた。
(1) AB菌ファージと無菌水
(2) AB菌ファージと界面活性剤
(3) AB菌ファージ、無菌水及び界面活性剤
(4) AB菌ファージ、第二のファージ(スタフィロコッカスのファージ)及び無菌水
(5) AB菌ファージ、第二のファージ(スタフィロコッカスのファージ)及び界面活性剤
(6) AB菌ファージ、第二のファージ(スタフィロコッカスのファージ)、無菌水及び界面活性剤
容器内の混合物が、混濁状から透明状に変化するのが観察によって確認された。このことは、ファージが宿主細菌を完全に溶解したことを示し、対数値(logs)で数ポイントの細菌量を効果的に減少させることができることから、本発明の殺菌組成物は確実に殺菌効果を達成できることが立証された。
Claims (10)
- アシネトバクター・バウマニ(Acinetobacter baumannii)・ファージと担体を含有する生体外殺菌組成物であって、前記ファージと前記担体とが適合性を有することで、前記アシネトバクター・バウマニ・ファージが生物活性を保持しており、前記アシネトバクター・バウマニ・ファージは、二十面体の頭部と短尾部とを有する形態のポドウイルス科(podoviridae)の2本鎖DNAウイルスであり、前記アシネトバクター・バウマニ・ファージの寄託番号が、DSM23599またはDSM23600であることを特徴とする生体外殺菌組成物。
- 前記アシネトバクター・バウマニ・ファージは、ゲンタマイシン(gentamicin)、アミカシン(amikacin)、ピペラシリン/タゾバクタム(piperacillin/tazobactam)、チカルシリン/クラブラン酸(ticarcillin/clavulanate)、セフタジジム(ceftazidime)、セフェピム(cefepime)、セフピロム(cefpirome)、アズトレオナム(aztreonam)、イミペネム(imipenem)、メロペネム(meropenem)、シプロフロキサシン(ciprofloxacin)及びレボフロキサシン(levofloxacin)からなる群より選ばれた少なくとも一種の抗生物質に対して薬剤耐性を持つ薬剤耐性アシネトバクター・バウマニに対して特異的に感染することを特徴とする請求項1に記載の生体外殺菌組成物。
- 前記アシネトバクター・バウマニ・ファージは溶菌性ファージであることを特徴とする請求項1に記載の生体外殺菌組成物。
- 前記アシネトバクター・バウマニ・ファージは、pH 4〜12範囲の条件下においてもアシネトバクター・バウマニ・ファージの生物活性を保有することを特徴とする請求項1に記載の生体外殺菌組成物。
- 前記生体外殺菌組成物は、溶液、懸濁液、粉末、噴霧剤又は軟膏の形態であり、前記担体は、水、オイル、界面活性剤、ペプトン又はこれらの組み合わせであることを特徴とする請求項1に記載の生体外殺菌組成物。
- 前記界面活性剤として、非イオン性界面活性剤が使用されることを特徴とする請求項5に記載の生体外殺菌組成物。
- アシネトバクター(Acinetobacter)、ブドウ球菌(スタフィロコッカス;Staphylococcus)、腸球菌(エンテロコッカス;Enterococci)、腸内細菌科(エンテロバクテリアセエ;Enterobacteriaceae)、非発酵グラム陰性桿菌(Non-fermentative gram-negative bacilli)、在郷軍人病菌(レジオネラ・ニューモフィラ;Legionella pneumophila)、クロストリジウム(Clostridium)、マイコバクテリウム(Mycobacterium)、及びシュードモナス菌(Pseudomonas)からなる群より選ばれた一種又は二種以上の院内感染細菌のファージである第二のファージを更に含むことを特徴とする請求項1に記載の生体外殺菌組成物。
- 前記アシネトバクター・バウマニ・ファージの組成物中における初期濃度は1x107 PFU/ml〜1x109 PFU/ml範囲にあることを特徴とする請求項1に記載の生体外殺菌組成物。
- 医療機関又は医療に関連する研究機関に適用される生体外殺菌方法であって、有効量の請求項1〜8のいずれか一項の殺菌組成物を前記医療機関又は医療に関連する研究機関に施用することで、前記医療機関又は医療に関連する研究機関内における細菌数量を減少させることを特徴とする生体外殺菌方法。
- 前記施用の方法は、直接噴霧、間接噴霧、浸漬、又は塗布によることを特徴とする請求項9に記載の生体外殺菌方法。
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