CN106947714B - 鲍曼不动杆菌选择性增菌液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种鲍曼不动杆菌选择性增菌液，其中所述的鲍曼不动杆菌选择性增菌液按质量体积比包括：胰酪胨0.1～5％，大豆胨0.02～1.5％，酵母粉0.03～1.8％，氯化钠0.05～1.5％，万古霉素0.1×10‑4～1.5×10‑3％，多粘菌素0.2×10‑4～3×10‑3％，放线菌酮3×10‑4～7.5×10‑3％。本发明还提供了一种鲍曼不动杆菌选择性增菌液的制备方法。采用本发明中的鲍曼不动杆菌选择性增菌液，可选择性培养鲍曼不动杆菌、有效抑制革兰氏阳性菌的生长、抑制大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌、志贺菌和其他肠杆菌属等革兰氏阴性菌以及真菌。

Description

鲍曼不动杆菌选择性增菌液及其制备方法
技术领域
本发明涉及微生物检验技术领域，尤其涉及鲍曼不动杆菌检验，具体是指一种鲍曼不动杆菌选择性增菌液及其制备方法。
背景技术
鲍曼不动杆菌是一种不发酵糖类，氧化酶阴性，不能运动的革兰氏阴性杆菌，广泛分布于自然界、医院环境、人的体表及上呼吸道中，是引起医院感染的一种重要的条件致病菌。菌体大小为1～1.5×1.5～2微米，无芽孢无鞭毛，需氧，最适温度37℃，但在41～44℃条件下亦能生长。
近年鲍曼不动杆菌所致的感染明显增多，在非发酵菌感染中，其临床阳性分离率仅次于铜绿假单胞菌，该菌对生长条件的要求低，繁殖能力强，并且具有广泛的耐药性，耐药性强，多药耐药现象严重。特别近年发现，多重耐药(MDR)、广泛耐药(XDR)、全耐药(PDR)ABA菌株日趋增多，呈世界性流行，由其导致的感染也在不断增多，给临床治疗带来很大的威胁，已逐渐成为当今的“超级细菌”，引起临床和微生物学者的极度关注。
同时有报道显示，鲍曼不动杆菌可降解废水中的某些污染物质，具有很高的研究和应用价值。因此鲍曼不动杆菌的推广和应用，具有较强的临床意义。对于鲍曼不动杆菌的推广和应用，关键在于研发合适的增菌液和培养基质，目前经典的用于富集鲍曼不动杆菌的主要是常规的固体培养基，尚未见有关鲍曼不动杆菌选择性增菌液的发明专利。
发明内容
本发明的目的是克服了上述现有技术的缺点，提供了一种可选择性培养鲍曼不动杆菌、有效抑制革兰氏阳性菌的生长、抑制大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌、志贺菌和其他肠杆菌属等革兰氏阴性菌以及真菌的生长的鲍曼不动杆菌选择性增菌液及其制备方法。
为了实现上述目的，本发明的鲍曼不动杆菌选择性增菌液按质量体积比包括：
胰酪胨0.1～5％，大豆胨0.02～1.5％，酵母粉0.03～1.8％，氯化钠0.05～1.5％，万古霉素0.1×10-4～1.5×10-3％，多粘菌素0.2×10-4～3×10-3％，放线菌酮3×10-4～7.5×10-3％。
较佳地，所述的鲍曼不动杆菌选择性增菌液按质量体积比包括：胰酪胨1.5％，大豆胨0.5％，酵母粉0.3％，氯化钠0.5％，万古霉素8×10-4％，多粘菌素1.6×10-3％，放线菌酮5.0×10-3％。
本发明还提供了一种制备鲍曼不动杆菌选择性增菌液的方法，所述的方法包括步骤：
步骤(1)：基础粉剂称量：按所述的配方称取胰酪胨1～50g、大豆胨0.2～15g、酵母粉0.3～18g、氯化钠0.5～15g放置于洁净干燥的容器中；
步骤(2)：原料混合：向步骤(1)中的容器中加入1000mL纯化水，用玻璃棒搅拌容器中的混合物，使其均匀；
步骤(3)：高压灭菌：将步骤(2)中的混合物进行高压蒸汽灭菌，灭菌后冷却至50℃；
步骤(4)：补充添加剂：在无菌操作条件下将万古霉素0.1～15mg、多粘菌素0.2～30mg、放线菌酮3～75mg加入步骤(3)中冷却后的混合溶液中；
步骤(5)：分装：于无菌条件下，进行分装。
较佳地，所述的步骤(1)中胰酪胨为15.0g、大豆胨为5.0g、酵母粉为3.0g、氯化钠为5.0g，所述的步骤(4)中万古霉素为8mg、多粘菌素16mg、放线菌酮50mg。
较佳地，所述的步骤(3)中所述的高压蒸汽灭菌温度为115～121℃，灭菌时间为15～20分钟。
较佳地，所述的步骤(3)中所述的高压蒸汽灭菌温度为121℃，灭菌时间为15分钟。
较佳地，所述的步骤(5)中分装量为3ml、5ml、9ml。
采用了该发明中的鲍曼不动杆菌选择性增菌液及其制备方法，可选择性培养鲍曼不动杆菌。本发明制备的增菌液，有效抑制了革兰氏阳性菌的生长，抑制了大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌、志贺菌和其他肠杆菌属等革兰氏阴性菌以及真菌的生长，使得鲍曼不动杆菌在此培养液中能够选择性增长。
附图说明
图1为使用本发明模鲍曼不动杆菌选择性增菌液的制备工艺流程图。
具体实施方式
为了能够更清楚地描述本发明的技术内容，下面结合具体实施例来进行进一步的描述。
实施例1
鲍曼不动杆菌选择性增菌液及其制备方法具体为：
(1)基础粉剂称量：称取包括胰酪胨10g，大豆胨10g，酵母粉5g，氯化钠5g放置于洁净干燥的容器中；
(2)原料混合：向步骤(1)中的容器中加入1000mL纯化水，用玻璃棒搅拌容器中的混合物，使其均匀；
(3)高压灭菌：将步骤(2)中的混合物进行高压蒸汽灭菌，湿热灭菌温度为121℃，灭菌时间为15分钟，灭菌后冷却至50℃；
(4)补充添加剂：将万古霉素10mg，多粘菌素25mg，放线菌酮50mg加入步骤(3)中的混合溶液中，此过程注意无菌操作；
(5)分装：于无菌条件下，进行分装，分装量为5ml。
实施例2
鲍曼不动杆菌选择性增菌液及其制备方法具体为：
(1)基础粉剂称量：称取包括胰酪胨50g，大豆胨0.2g，酵母粉18g，氯化钠6g放置于洁净干燥的容器中；
(2)原料混合：向步骤(1)中的容器中加入1000mL纯化水，用玻璃棒搅拌容器中的混合物，使其均匀；
(3)高压灭菌：将步骤(2)中的混合物进行高压蒸汽灭菌，湿热灭菌温度为115℃，灭菌时间为20分钟，灭菌后冷却至50℃；
(4)补充添加剂：将万古霉素15mg，多粘菌素30mg，放线菌酮75mg加入步骤(3)中的混合溶液中，此过程注意无菌操作；
(5)分装：于无菌条件下，进行分装，分装量为3ml。
实施例3
鲍曼不动杆菌选择性增菌液及其制备方法具体为：
(1)基础粉剂称量：称取包括胰酪胨15g，大豆胨10g，酵母粉3g，氯化钠10g，放置于洁净干燥的容器中；
(2)原料混合：向步骤(1)中的容器中加入1000mL纯化水，用玻璃棒搅拌容器中的混合物，使其均匀；
(3)高压灭菌：将步骤(2)中的混合物进行高压蒸汽灭菌，湿热灭菌温度为121℃，灭菌时间为20分钟，灭菌后冷却至50℃；
(4)补充添加剂：将万古霉素10mg，多粘菌素3mg，放线菌酮15mg加入步骤(3)中的混合溶液中，此过程注意无菌操作；
(5)分装：于无菌条件下，进行分装，分装量为9ml。
实施例4
鲍曼不动杆菌增菌液胰酪胨10g，大豆胨6g，酵母粉8g，氯化钠2g，万古霉素6mg，多粘菌素1mg，放线菌酮20mg(以1L体积计算)。具体制备方法如同实施例1。
实施例5
鲍曼不动杆菌增菌液包括胰酪胨1g，大豆胨15g，酵母粉5g，氯化钠3g，万古霉素15mg，多粘菌素3mg，放线菌酮30mg(以1L体积计算)。具体制备方法如同实施例1。
实施例6
鲍曼不动杆菌增菌液包括胰酪胨6g，大豆胨4g，酵母粉5g，氯化钠6g，万古霉素10mg，多粘菌素20mg，放线菌酮60mg(以1L体积计算)。具体制备方法如同实施例1。
为了进一步验证本发明所提供的鲍曼不动杆菌选择性增菌液，提供以下方法：
试验方法如下：
本发明所制备的鲍曼不动杆菌选择性增菌液，分别接种培养鲍曼不动杆菌(ATCC19606)、金黄色葡萄球菌(ATCC25922)、大肠埃希氏菌(ATCC25923)、鼠伤寒沙门氏菌(CMCC50115)，铜绿假单胞菌(ATCC27853)、福氏志贺菌(CMCC51573)、白色念珠菌(ATCC10231)，于37℃恒温培养箱中培养18-24h，观察菌体生长情况。
(1)：将鲍曼不动杆菌(ATCC 19606)的菌悬液1.0×108/mL，按1:100稀释，混合均匀，分别取10μL稀释的菌悬液(约104CFU)，在鲍曼不动杆菌增菌液中接种，37℃恒温培养箱中培养18-24h；
(2)：将金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)的菌悬液1.0×108/mL，按1:100稀释，混合均匀，分别取10μL稀释的菌悬液(约104CFU)，在鲍曼不动杆菌增菌液中接种，37℃恒温培养箱中培养18-24h；
(3)：将大肠埃希氏菌(ATCC 25922)的菌悬液1.0×108/mL，按1:100稀释，混合均匀，分别取10μL稀释的菌悬液(约104CFU)，在鲍曼不动杆菌增菌液中接种，37℃恒温培养箱中培养18-24h；
(4)：将鼠伤寒沙门氏菌(CMCC50115)的菌悬液1.0×108/mL，按1:100稀释，混合均匀，分别取10μL稀释的菌悬液(约104CFU)，在鲍曼不动杆菌增菌液中接种，37℃恒温培养箱中培养18-24h；
(5)：将铜绿假单胞菌(ATCC 27853)的菌悬液1.0×108/mL，按1:100稀释，混合均匀，分别取10μL稀释的菌悬液(约104CFU)，在鲍曼不动杆菌增菌液中接种，37℃恒温培养箱中培养18-24h；
(6)：将福氏志贺菌(CMCC51573)的菌悬液1.0×108/mL，按1:100稀释，混合均匀，分别取10μL稀释的菌悬液(约104CFU)，在鲍曼不动杆菌增菌液中接种，37℃恒温培养箱中培养18-24h；
(5)：将白色念珠菌(ATCC 10231)的菌悬液1.0×108/mL，按1:100稀释，混合均匀，分别取10μL稀释的菌悬液(约104CFU)，在鲍曼不动杆菌增菌液中接种，37℃恒温培养箱中培养18-24h；
质控菌株接种至鲍曼不动杆菌选择性增菌液，37℃培养18～24小时后，菌体生长结果见下表。
Figure GDA0002552156370000051
由上表可以看出，在鲍曼不动杆菌选择性增菌液中，鲍曼不动杆菌生长良好；金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、福氏志贺菌、白色念珠菌生长均受到抑制，可选择性培养鲍曼不动杆菌。
采用了该发明中的鲍曼不动杆菌选择性增菌液及其制备方法，可选择性培养鲍曼不动杆菌。本发明制备的增菌液，有效抑制了革兰氏阳性菌的生长，抑制了大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌、志贺菌和其他肠杆菌属等革兰氏阴性菌以及真菌的生长，使得鲍曼不动杆菌在此培养液中能够选择性增长。
在此说明书中，本发明已参照其特定的实施例作了描述。但是，很显然仍可以作出各种修改和变换而不背离本发明的精神和范围。因此，说明书和附图应被认为是说明性的而非限制性的。

Claims (7)

1.一种鲍曼不动杆菌选择性增菌液，其特征在于，所述的鲍曼不动杆菌选择性增菌液按质量体积比包括：胰酪胨0.1～5％，大豆胨0.02～1.5％，酵母粉0.3～1.8％，氯化钠0.2～1％，万古霉素6×10-4～1.5×10-3％，多粘菌素1×10-4～3×10-3％，放线菌酮1.5×10-3～7.5×10-3％。
2.根据权利要求1所述的鲍曼不动杆菌选择性增菌液，其特征在于，所述的鲍曼不动杆菌选择性增菌液按质量体积比包括：胰酪胨1.5％，大豆胨0.5％，酵母粉0.3％，氯化钠0.5％，万古霉素8×10-4％，多粘菌素1.6×10-3％，放线菌酮5.0×10-3％。
3.一种制备权利要求1所述的鲍曼不动杆菌选择性增菌液的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：
步骤(1)：基础粉剂称量：称取胰酪胨1～50g、大豆胨0.2～15g、酵母粉3～18g、氯化钠2～10g放置于洁净干燥的容器中；
步骤(2)：原料混合：向步骤(1)中的容器中加入1000mL纯化水，用玻璃棒搅拌容器中的混合物，使其均匀；
步骤(3)：高压灭菌：将步骤(2)中的混合物进行高压蒸汽灭菌，灭菌后冷却至50℃；
步骤(4)：补充添加剂：在无菌操作条件下将万古霉素6～15mg、多粘菌素1～30mg、放线菌酮15～75mg加入步骤(3)中冷却后的混合溶液中；
步骤(5)：分装：于无菌条件下，进行分装。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中胰酪胨为15.0g、大豆胨为5.0g、酵母粉为3.0g、氯化钠为5.0g，所述的步骤(4)中万古霉素为8mg、多粘菌素16mg、放线菌酮50mg。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤(3)中所述的高压蒸汽灭菌温度为115～121℃，灭菌时间为15～20分钟。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤(3)中所述的高压蒸汽灭菌温度为121℃，灭菌时间为15分钟。
7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的步骤(5)中分装量为3mL、5mL、9mL。
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