CN117625436B - 一株降解二甲基乙酰胺的乙酰微小杆菌及培养方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株降解二甲基乙酰胺的乙酰微小杆菌(Exiguobacterium acetylicum)及培养方法和应用，属于生物技术领域。所述乙酰微小杆菌于2023年4月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏编号为CGMCC No.27162。本发明提供的乙酰微小杆菌具有降解二甲基乙酰胺的能力，在30℃、pH 7.0的条件下，该菌株可以在6天内，将废水中一定浓度的DMAc降解至90％以上，为解决化工生产的含DMAc废水难处理的问题提供新的可行方案，为生物技术在污水治理方面的应用提供技术支持。
Description
技术领域
本申请属于生物技术领域，具体涉及一株降解二甲基乙酰胺的乙酰微小杆菌及培养方法和应用。
背景技术
N,N-二甲基乙酰胺(DMAc)作为重要的化工原料以及性能优良的溶剂，在聚合物分离膜领域中得到广泛应用。膜技术发展至今，DMAc作为生产工艺中的优良溶剂的性能决定其已成为膜工艺生产中的一种重要溶剂。随着经济发展不断进步的同时，聚合物分离膜生产量增加，生产过程中使用的DMAc溶剂也随着膜生产量的增加而增加，由于在生产过程中DMAc作为溶剂可不经消耗就随生产废水排出，对水质环境造成个很大的影响，也严重危害动植物的健康。二甲基乙酰胺化学性质稳定，难降解，生理毒性显著，且有机氮含量高，这是使聚合物分离膜生产废水难以达标处理排放的主要原因之一。
目前，国内外对DMAc降解的方法主要有铁炭内电解法、Fenton氧化、臭氧氧化、吸附和光催化氧化等处理方法，这些方法虽然对DMAc废水有较好的去除效果，但此类方法工艺条件复杂，处理成本较高，且容易产生二次污染。因此，有必要探索简单方便而且经济的处理方法。
生化法是利用微生物降解废水中污染物的方法，因其具有低成本、高处理效率和无二次污染的优点，被广泛使用在水处理工艺中。有研究报道生化法对DMAc的降解可起到较好的作用，但目前国内外筛选到的二甲基乙酰胺的降解菌种类还较少，如赤红球菌、副球菌属等较少微生物被分离出来用于处理含DMAc废水。因此，分离筛选出一株二甲基乙酰胺高效降解菌株对含DMAc废水的处理具有很重要意义。
发明内容
本发明公开了一株降解二甲基乙酰胺的乙酰微小杆菌及培养方法和应用，该乙酰微小杆菌可以使废水中二甲基乙酰胺的残留量降低到90%以上，从而可以有效解决背景技术中涉及的至少一个技术问题。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
一株降解二甲基乙酰胺的乙酰微小杆菌，微生物分类命名为乙酰微小杆菌（Exiguobacterium acetylicum），为革兰氏阳性好氧杆状菌，于2023年4月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；其保藏编号为CGMCC No.27162。
所述乙酰微小杆菌菌体呈短杆状，无鞭毛，不产芽孢，菌体大小约为1~2.5 μm×0.6~0.9 μm，其菌落呈圆形，边缘光滑，表面突起，菌落呈现橙黄色光泽，能以二甲基乙酰胺为碳源和氮源进行生长。
所述乙酰微小杆菌的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。
SEQ ID NO.1乙酰微小杆菌的16S rDNA序列：
CAGGCTCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGCAGGAAACTGACGGAACTCTTCGGAGGGAAGGCAGTGGAATGAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTAAGGAACCTGCCTCAAGGATTGGGATAACTCCGAGAAATCGGAGCTAATACCGGATAGTTCAACGGACCGCATGGTCCGCTGATGAAAGGCGCTTCGGCGTCACCTTGAGATGGCCTTGCGGTGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCCCACCAAGGCGACGATGCATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGAAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTAAGGGAAGAACACGTACGAGAGGTAATGCTCGTACCTTGACGGTACCTTACGAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGCCTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGCCATTGGAAACTGGAAGGCTTGAGTACAGAAGAGAAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTTTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTGGGGGGTTTCCGCCCCTCAGTGCTGAAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAACTCTTGACATCCCATTGACCGCTTGAGAGATCAAGTTTTCCCTTCGGGGACAATGGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTATCCTTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTAGGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGAGTTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACGGTACAAAGGGCAGCGAGACCGCGAGGTGGAGCCAATCCCATAAAGCCGTTCCCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCAGGTCAGCATACTGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGCAACACCCGAAGCCGGTGAGGTAACCGTAAGGAGCCAGCCGTCGAAGGTGGGGTAGATGATTGGGGTGAAGTCGTAA。
本发明还提供了一种所述的乙酰微小杆菌的培养方法，包括以下步骤：
步骤一：采集活性污泥样品10 g，加入到100 mL无菌水中，于30℃恒温振荡器中振荡1 h以摇匀，而后静置2 h待用；
步骤二：取步骤一中静置得到的第一上清液10 mL加入到100 mL无菌水中，摇匀后静置2 h；
步骤三：取步骤二中静置得到的第二上清液1 mL滴到50 mL含二甲基乙酰胺2 %体积比的LB液体培养基中，在恒温振荡器中以30℃的条件培养72 h后，取1 mL转接到50 mL含二甲基乙酰胺3 %体积比的LB液体培养基中，相同条件下培养72 h，如此连续转接，直到LB液体培养基中二甲基乙酰胺的体积比为6 %；
步骤四：取步骤三中最后一个培养步骤，即LB液体培养基中二甲基乙酰胺的体积比为6 %时的菌悬液用无菌水稀释到10-4倍后，取稀释液100 uL滴到含二甲基乙酰胺体积比为6 %的LB固体培养基中，在恒温培养箱中以30℃的条件培养72 h；
步骤五：挑选步骤四中生长较快、菌落较多的菌的单菌落进行划线分离，直至分离获得纯化单一菌株；
步骤六：对步骤五得到的菌株进行菌种鉴定，选用分子生物学鉴定方法。
本发明还提供了一种所述的乙酰微小杆菌在降解二甲基乙酰胺中的应用，将乙酰微小杆菌配置成种子液，加入到含500 mg/L 二甲基乙酰胺的无机盐培养基中，培养一段时间后采用高效液相色谱法测定培养基中残余二甲基乙酰胺的含量，即菌株对DMAc的降解能力。
作为本发明的一种优选改进，无机盐培养基的配制方法为：磷酸氢二钾 1500 mg/L、磷酸二氢钾 500 mg/L、MgSO4 · 7H2O 200 mg/L、NaCl 1000 mg/L、500 mg/L DMAc和100mL无菌水混合溶解，在高温灭菌锅中以121℃灭菌20 min。
作为本发明的一种优选改进，种子液的配置方法为：将乙酰微小杆菌接种到100mL 营养肉汤培养基中，30℃条件下150 rpm/min培养24 h后得到OD600值为1.5的乙酰微小杆菌种子液。
作为本发明的一种优选改进，所述营养肉汤培养基的配置方法为：取1 g肉汤粉、0.5 g蛋白胨、0.2 g酵母浸粉、0.5 g NaCl、0.2 g磷酸二氢钾、0.1 g麦芽糊精、0.1 g葡萄糖和100 mL无菌水混合溶解，在高温灭菌锅中以121℃灭菌20 min。
作为本发明的一种优选改进，在降解DMAc时，乙酰微小杆菌种子液的接种量为1-20%。
作为本发明的一种优选改进，在降解DMAc时，无机盐培养基的pH为5~10。
作为本发明的一种优选改进，在降解DMAc时，培养温度为20~40℃。
本发明的有益效果如下：
1、使用本发明得到的二甲基乙酰胺降解菌具有使用方便、去除效果好的优点，适合在含有低浓度DMAc的废水处理中推广使用；
2、本发明提供的乙酰微小杆菌可以在含二甲基乙酰胺的LB培养基中生长，对DMAc具有较好的耐受度，将乙酰微小杆菌种子液按10％的接种量在含二甲基乙酰胺的废水中，于30℃、pH 7.0条件下，振荡培养6天后，能使含500 mg/L DMAc废水中的 DMAc残留量降低到 90％以上，具有很好的降解效果，该降解菌的发现对生化法降解DMAc的进一步研究具有重要意义。
附图说明
图1为乙酰微小杆菌菌落示意图；
图2为乙酰微小杆菌在激光共聚焦显微镜下的菌体形态图；
图3为乙酰微小杆菌的扫描电镜图；
图4为乙酰微小杆菌接种量对降解DMAc效果的示意图；
图5为pH对乙酰微小杆菌降解DMAc效果的示意图；
图6为温度对乙酰微小杆菌降解DMAc效果的示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
需要说明，本发明实施例中所有方向性指示（诸如上、下、左、右、前、后……）仅用于解释在某一特定姿态（如附图所示）下各部件之间的相对位置关系、运动情况等，如果该特定姿态发生改变时，则该方向性指示也相应地随之改变。
在本发明中如涉及“第一”、“第二”等的描述仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示其相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。
另外，本发明各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。
本发明提供了一株降解二甲基乙酰胺的乙酰微小杆菌，其微生物分类命名为乙酰微小杆菌（Exiguobacterium acetylicum），为革兰氏阳性好氧杆状菌，于2023年4月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；其保藏编号为CGMCC No.27162。
本发明还提供了一种所述的乙酰微小杆菌的培养方法，包括以下步骤：
步骤一：取样，采集来自贵州省贵阳市白云区麦架污水处理厂的活性污泥样品10g，加入到100 mL无菌水中，于30℃恒温振荡器中振荡1 h以摇匀，而后静置2 h待用；
步骤二：取步骤一中静置得到的第一上清液10 mL加入到100 mL无菌水中，摇匀后静置2 h；
步骤三：取步骤二中静置得到的第二上清液1 mL滴到50 mL含二甲基乙酰胺2 %体积比的LB液体培养基中，在恒温振荡器中以30℃的条件培养72 h后，取1 mL转接到50 mL含二甲基乙酰胺3 %体积比的LB液体培养基中，相同条件培养72 h，如此连续转接，直到LB液体培养基中二甲基乙酰胺的体积比为6 %；
步骤四：取步骤三中最后一个培养步骤得到的菌悬液用无菌水稀释到10-4倍后，取稀释液100 uL滴到含DMAc体积比为6 %的LB固体培养基中，在恒温培养箱中以30℃的条件培养72 h；
步骤五：挑选步骤四中生长较快、菌落较多的菌的单菌落进行划线分离，直至分离获得纯化单一菌株；
步骤六：对步骤五得到的菌株进行菌种鉴定，选用分子生物学鉴定方法。
本发明还提供了一种所述的乙酰微小杆菌在降解二甲基乙酰胺中的应用，将乙酰微小杆菌配置成种子液，加入到含500 mg/L 二甲基乙酰胺的无机盐培养基中，培养一段时间后采用高效液相色谱法（HLPC）测定培养基中残余DMAc的含量，即菌株对DMAc的降解能力。
具体的，将乙酰微小杆菌接种到100 mL 营养肉汤培养基中，30℃条件下150 rpm/min培养24 h后得到OD600值为1.5的乙酰微小杆菌种子液。其中，所述营养肉汤培养基的配置方法为：取1 g肉汤粉、0.5 g蛋白胨、0.2 g酵母浸粉、0.5 g NaCl、0.2 g磷酸二氢钾、0.1g麦芽糊精、0.1 g葡萄糖和100 mL无菌水混合溶解，在高温灭菌锅中以121℃灭菌20 min
无机盐培养基的配制方法为：取磷酸氢二钾 1500 mg/L、磷酸二氢钾 500 mg/L、MgSO4 · 7H2O 200 mg/L、NaCl 1000 mg/L、500 mg/L DMAc和100 mL无菌水混合溶解，在高温灭菌锅中以121℃灭菌20 min。
在降解DMAc时，乙酰微小杆菌种子液的接种量为1~20%，无机盐培养基的pH为5~10，培养温度为20~40℃。
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述。
实施例1 乙酰微小杆菌的培养方法、鉴定与保藏。
（1）菌株的富集驯化
采集来自贵州省贵阳市白云区麦架污水处理厂的活性污泥样品10 g，加入到100mL无菌水中，于30℃恒温振荡器中振荡1 h以摇匀，静置2 h后，取10 mL上清液加入到100mL无菌水中，再摇匀静置2 h；
而后取上清液1 mL滴到50 mL含N,N-二甲基乙酰胺（DMAc）2 %体积比的LB液体培养基中，在恒温振荡器中以30℃的条件培养72 h；
再取上述步骤菌悬液1 mL转接到50 mL含DMAc 3 %体积比的LB液体培养基中，相同条件培养72 h，如此连续转接，直到LB液体培养基中DMAc的体积比为6 %。
LB液体培养基的配置方法：取0.5 g NaCl、0.5 g蛋白胨、0.25 g酵母浸粉、1~3 mLDMAc和47~49 mL无菌水混合溶解，在高温灭菌锅中以121℃灭菌20 min。
（2）菌株的富筛选分离
取（1）中最后一个培养步骤，即LB液体培养基中DMAc的体积比为6 %时的菌悬液，用无菌水稀释到10-4倍后，取稀释液100 uL滴到含DMAc体积比为6 %的LB固体培养基中，在恒温培养箱中以30℃的条件培养72 h。而后挑选其中生长较快、菌落较多的菌的单菌落进行划线分离，直至分离获得纯化单一菌株。
LB固体培养基的配置方法如下：取0.5 g NaCl、0.5 g蛋白胨、0.25 g酵母浸粉、1.1 g琼脂、3 mL DMAc和47 mL无菌水混合溶解，在高温灭菌锅中以121℃灭菌20 min。
（3）菌株的鉴定
将（2）中得到的菌株接种到斜面培养基后，寄到生工生物工程(上海)股份有限公司进行菌种鉴定，选用分子生物学鉴定方法，采用16S rDNA通用引物1492r进行16S rDNA的PCR扩增。
其中，斜面培养基的配置方法如下：取0.5 g NaCl、0.5 g蛋白胨、0.25 g酵母浸粉、1.1 g琼脂和50 mL无菌水混合溶解，在高温灭菌锅中以121℃灭菌20 min；待温度降到60℃时将培养基倒入灭菌试管中，呈1/3高度后加橡胶塞封闭，枕于1厘米厚木条上，待冷却即可得到斜面培养基。
PCR反应条件：95℃预变性5 min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸90s，30个循环后72℃延伸10 min。将PCR产物进行1.5％的琼脂糖凝胶电泳，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后回收纯化测序，根据获得的16S rDNA序列在GenBank中Blast搜索同源序列并进行同源序列分析对比。
经16SrDNA基因序列比对分析，该菌株属于微小杆菌属（Exiguobacterium），与乙酰微小杆菌（Exiguobacterium acetylicum）的序列比对一致度（Per. Ident）达到99.8%。
本发明所述乙酰微小杆菌的16SrDNA序列如下表1所示：
表1
（4）菌株的保藏
将菌株接种到斜面培养基后，送至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏编号为CGMCC No.27162。
如图1至3所示，本实施例1所述的菌株在LB固体培养基上的菌落形态呈圆形，边缘光滑，表面突起，菌落呈现橙黄色光泽，菌体大小约为1~2.5 μm×0.6~0.9 μm，呈短杆状，无鞭毛，不产芽孢。
实施例2 乙酰微小杆菌种子液的制备方法
将实施例1所述的乙酰微小杆菌配置成种子液，以用于后续对DMAc的降解实验。
乙酰微小杆菌种子液的配置方法为：将分离纯化得到的单一乙酰微小杆菌株接种到100 mL 营养肉汤培养基中，30℃条件下150 rpm/min培养24 h后得到OD600值为1.5的乙酰微小杆菌种子液。
营养肉汤培养基的配置方法为：取1 g肉汤粉、0.5 g蛋白胨、0.2 g酵母浸粉、0.5g NaCl、0.2 g磷酸二氢钾、0.1 g麦芽糊精、0.1 g葡萄糖和100 mL无菌水混合溶解，在高温灭菌锅中以121℃灭菌20 min。
实施例3 乙酰微小杆菌接种量对DMAc降解率的性能影响
将实施例2制备的乙酰微小杆菌种子液以体积浓度分别为1%、3%、5%、10%和20%的接种量接种于含500 mg/L DMAc的无机盐培养基中，在恒温振荡器中以30℃、150 r/min的条件连续振荡培养144 h（6天）后取样测定培养基中残余DMAc的浓度。
其中，无机盐培养基的配方为：磷酸氢二钾 1500 mg/L、磷酸二氢钾 500 mg/L、MgSO4 · 7H2O 200 mg/L、NaCl 1000 mg/L、500 mg/L DMAc和100 mL无菌水混合溶解，在高温灭菌锅中以121℃灭菌20 min。
如图4所示，接种量由1%增至10%时，随着接种量的增加，DMAc的降解效果也不断增加，原因可能是当接种量较少时，底物浓度相对较高，对细菌有一定的抑制作用，从而使细菌长期处于生长延滞期，同时菌株浓度低，也导致DMAc降解效率不高，而随着接种量的增加时，溶液中菌体浓度也得到提高，使得延滞期缩短，DMAc降解效率提升。当接种量继续增加至20%时，DMAc的去降解效果有所降低，原因是当接种量过大时，受培养基内营养的限制，菌株之间产生竞争，抑制了菌株的生长，致使菌株对 DMAc的降解能力无明显提升。故选取10%接种量作为 DMAc降解菌的最适宜接种量，接种量表明了微生物量和底物量之间的比例关系以及底物和微生物之间的相互影响。
实施例4 培养基pH值对乙酰微小杆菌降解DMAc的性能影响
将实施例2制备的乙酰微小杆菌种子液以10%体积浓度的接种量接种于含500 mg/L DMAc的无机盐培养基中，利用2 mol/L的HCl和NaOH将培养基的pH分别调至5.0，6.0，7.0，8.0，9.0和10.0，在恒温振荡器中以30℃、150 r/min的条件连续振荡培养144 h（6天）后取样测定培养基中残余DMAc的浓度。
无机盐培养基的配方为：磷酸氢二钾 1500 mg/L、磷酸二氢钾 500 mg/L、MgSO4· 7H2O 200 mg/L、NaCl 1000 mg/L、500 mg/L DMAc和100 mL无菌水混合溶解，在高温灭菌锅中以121℃灭菌20 min。
如图5所示，在不同的pH条件下，乙酰微小杆菌对DMAc均有降解作用。在pH为7.0时，DMAc的去除率最高，为90.8%。pH偏酸或偏碱性都会降低菌株对DMAc的降解率。这是由于DMAc代谢的最终产物为NH3，当初始pH过高会使培养基中游离NH3浓度增加，导致微生物出现中毒现象，降低DMAc的降解效率；反之，初始pH低于7.0时，酸性环境会抑制微生物的正常生理活动，造成菌体受到酸性侵害，从而导致DMAc的降解效率下降。
实施例5 培养温度对乙酰微小杆菌降解DMAc效果的影响
将实施例2制备的乙酰微小杆菌种子液以10%体积浓度的接种量接种于pH为7.0的含500 mg/L DMAc的无机盐培养基中，在恒温振荡器中以20~40℃、150 r/min的条件连续振荡培养144 h（6天）后取样测定培养基中残余DMAc的浓度。
无机盐培养基的配方为：磷酸氢二钾 1500 mg/L、磷酸二氢钾 500 mg/L、MgSO4· 7H2O 200 mg/L、NaCl 1000 mg/L、500 mg/L DMAc和100 mL无菌水混合溶解，在高温灭菌锅中以121℃灭菌20 min。
结果如图6所示，从图中可看出温度在20-30℃内，菌株对DMAc的降解效率上升，原因是在此温度区间内温度上升有利于菌株生长，从而加速了对DMAc的降解；当温度在30℃时，降解效率最佳，144 h后对DMAc降解效率达93%，表明30℃最适合乙酰微小杆菌生长；温度在25~35℃之间菌株对DMAc的降解效果均良好，但升到40℃时菌株对DMAc的降解效率急速下降，表明该温度使得菌株失活，不利于菌株生长。因此，该实验表明可选择25-35℃之间作为培养乙酰微小杆菌的温度区间，在该温度范围内菌株均能很好地发挥降解性能。
本发明的有益效果如下：
1、使用本发明得到的二甲基乙酰胺降解菌具有使用方便、去除效果好的优点，适合在含有低浓度DMAc的废水处理中推广使用；
2、本发明提供的乙酰微小杆菌可以在含二甲基乙酰胺的LB培养基中生长，对DMAc具有较好的耐受度，将乙酰微小杆菌种子液按10％的接种量在含二甲基乙酰胺的废水中，于30℃、pH 7.0条件下，振荡培养6天后，能使含500 mg/L DMAc废水中的 DMAc残留量降低到 90％以上，具有很好的降解效果，该降解菌的发现对生化法降解DMAc的进一步研究具有重要意义。
上面结合附图对本申请的实施例进行了描述，但是本申请并不局限于上述的具体实施方式，上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本申请的启示下，在不脱离本申请宗旨和权利要求所保护的范围情况下，还可做出很多形式，均属于本申请的保护之内。
Claims (9)
1.一株降解二甲基乙酰胺的乙酰微小杆菌，其特征在于，微生物分类命名为乙酰微小杆菌（Exiguobacterium acetylicum），于2023年4月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC No.27162。
2.根据权利要求1所述的一株降解二甲基乙酰胺的乙酰微小杆菌，其特征在于，所述乙酰微小杆菌的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种如权利要求1和2任意一项所述的乙酰微小杆菌在降解二甲基乙酰胺中的应用，其特征在于，将乙酰微小杆菌配置成种子液，加入到含500 mg/L 二甲基乙酰胺的无机盐培养基中，培养一段时间后采用高效液相色谱法测定培养基中残余二甲基乙酰胺的含量，即菌株对DMAc的降解能力。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，无机盐培养基的配制方法为：磷酸氢二钾1500 mg/L、磷酸二氢钾 500 mg/L、MgSO4 · 7H2O 200 mg/L、NaCl 1000 mg/L、500 mg/LDMAc和100 mL无菌水混合溶解，在高温灭菌锅中以121℃灭菌20 min。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，种子液的配置方法为：将乙酰微小杆菌接种到100 mL 营养肉汤培养基中，30℃条件下150 rpm/min培养24 h后得到OD600值为1.5的乙酰微小杆菌种子液。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述营养肉汤培养基的配置方法为：取1 g肉汤粉、0.5 g蛋白胨、0.2 g酵母浸粉、0.5 g NaCl、0.2 g磷酸二氢钾、0.1 g麦芽糊精、0.1g葡萄糖和100 mL无菌水混合溶解，在高温灭菌锅中以121℃灭菌20 min。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，在降解DMAc时，乙酰微小杆菌种子液的接种量为1-20%。
8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，在降解DMAc时，无机盐培养基的pH为5~10。
9.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，在降解DMAc时，培养温度为20~40℃。
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