CN106860447B - 利鲁唑在抑制金黄色葡萄球菌方面的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种利鲁唑在抑制金黄色葡萄球菌方面的应用，用于解决现有抗生素类药物具有细菌耐药性的技术问题。技术方案是将利鲁唑化合物溶解于LB液体培养基中，超声使之成为均匀分散的容易液，利用LB液体培养基通过二倍稀释法配制成不同药物浓度的液体培养液，接种菌悬液于上述药物培养液中，37℃培养箱中培养18～24h，通过观察浊度确定利鲁唑的最底抑菌浓度。实验证明，利鲁唑最低抑菌浓度为256μg/mL～350μg/mL。本发明了提供了一种非抗生素类化合物利鲁唑的抑菌作用，为解决抗生素类耐药性提供有益帮助，在医药领域有潜在的应用前景。

Description

利鲁唑在抑制金黄色葡萄球菌方面的应用
技术领域
本发明属于医药用途领域，特别是涉及一种利鲁唑在抑制金黄色葡萄球菌方面的应用。
背景技术
利鲁唑(化学名：2-氨基-6-三氟甲氧基苯并噻唑)是苯并噻唑类化合物，有广泛的药理学作用，如调节谷氨酸及其转运体、神经保护作用、抗抑郁、抗焦虑、镇痛等。利鲁唑现在仍是美国食品与药物管理局批准惟一用于治疗肌萎缩侧索硬化症的药物，可延长存活期和/或推迟气管切开的时间。目前，没有见到利鲁唑应用于抑菌治疗方面的报道。
金黄色葡萄球菌是临床十分常见的病原菌之一，隶属于葡萄球菌属，有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，能够引起局部组织化脓感染、肺炎、败血症等疾病，严重威胁着人类的身体健康。
金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10～15％NaCl肉汤中生长。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物、青霉素、红霉素、土霉素、新霉素等抗生素敏感，但是由于菌株可产生青霉素酶等而产生耐药性。金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等抗菌药物耐药。金黄色葡萄球菌对青霉素G和红霉素耐药率大于50.0％，(参考文献：刘智勇，张波，吴昊等，2014年某院主要病原菌分布及耐药监测分析，检验医学与临床，2016年5月，第13卷第9期，页码1233至1236)金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、氟喹诺酮类等抗菌药物耐药。目前，细菌的耐药性已经成为日益严峻的全球性公共卫生问题，对于能够抑制细菌而不产生耐药性的非抗生素类药物的研发已经刻不容缓。
发明内容
为了克服现有抗生素类药物具有细菌耐药性的不足，本发明提供一种利鲁唑在抑制金黄色葡萄球菌方面的应用。该应用将利鲁唑化合物溶解于LB液体培养基中，超声使之成为均匀分散的容易液，利用LB液体培养基通过二倍稀释法配制成不同药物浓度的液体培养液，接种菌悬液于上述药物培养液中，37℃培养箱中培养18～24h，通过观察浊度确定利鲁唑的最底抑菌浓度。实验证明，利鲁唑最低抑菌浓度为256μg/mL～350μg/mL。本发明了提供了一种非抗生素类化合物利鲁唑的抑菌作用，为解决抗生素类耐药性提供有益帮助，在医药领域有潜在的应用前景。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种利鲁唑在抑制金黄色葡萄球菌方面的应用，所述利鲁唑的中文名称为2-氨基-6-三氟甲氧基苯并噻唑，英文名称为2-amino-6-trifluomethoxy-benzothiazole，分子式是C8H5F3N2OS，分子量是234.2，CAS号是1744-22-5，熔点是116～118℃，分子结构是：
Figure BDA0001203029970000021
其特点是包括以下步骤：
按照利鲁唑与LB液体培养基的质量/体积比为1.920:1～2.048:1g/L配料，将利鲁唑溶解在LB液体培养基中，超声振荡使其充分溶解，配成均匀含有利鲁唑的培养基溶液；
采用二倍稀释法用LB液体培养基将上述步骤制备的利鲁唑溶液稀释成不同浓度的受试液；
将含菌量为105cfu/mL的金黄色葡萄球菌的菌悬液接种于上述中含利鲁唑培养基中，作为实验组样本；
以同样方法将含菌量为105cfu/mL的金黄色葡萄球菌的菌悬液接种于不含利鲁唑的培养基中，作为阳性对照组样本；
将试验组样本、阳性对照组样本放置于37℃培养箱中，培养24h，观察样本浊度，确定最低抑菌浓度。
本发明的有益效果是：该应用将利鲁唑化合物溶解于LB液体培养基中，超声使之成为均匀分散的容易液，利用LB液体培养基通过二倍稀释法配制成不同药物浓度的液体培养液，接种菌悬液于上述药物培养液中，37℃培养箱中培养18～24h，通过观察浊度确定利鲁唑的最底抑菌浓度。实验证明，利鲁唑最低抑菌浓度为256μg/mL～350μg/mL。本发明了提供了一种非抗生素类化合物利鲁唑的抑菌作用，为解决抗生素类耐药性提供有益帮助，在医药领域有潜在的应用前景。
下面结合具体实施方式对本发明作详细说明。
具体实施方式
实施例1：
(1)培养基的制备：用蒸馏水配制LB(溶菌肉汤，Lysogeny Broth)液体培养基，其中胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，用氢氧化钠调制pH至7.4并且高温高压灭菌。
(2)接种菌液的制备：利用细菌生长法制备接种菌液。用接种环挑取金黄色葡萄球菌单菌落2～3个，接种于8～10mL LB液体培养基中，37℃孵育6～8h。增菌后的对数生长期菌液用多功能酶标仪(型号Synergy HT)检测波长600nm测定OD值，当OD值为0.6时及菌液含量约为5×108cfu/mL。
(3)将20.48mg利鲁唑溶于10mLLB液体培养基中，超声振荡使利鲁唑充分溶解，配制成分散均匀利鲁唑培养基溶液(2048μg/mL)。
在无菌操作台中操作，取无菌样品瓶(10mL)7个排成一排，除第一瓶外，每瓶加入2.5mLLB培养基，在第一样品瓶中加入5mL利鲁唑抗菌药物原液(2048μg/mL)混合均匀，然后吸取2.5mL至第二瓶，混匀后再吸取2.5mL至第三管，如此连续二倍稀释至第6瓶，并从第6瓶中吸取2.5mL弃去，第7瓶为不含药物的生长对照。此时各瓶药物浓度依次为2048、1024、512、256、128、64μg/mL。然后将制备好的接种菌悬液稀释，取2.5mL至各样品瓶中，使每瓶最终菌液浓度约为5×108cfu/mL。第1样品瓶到第6样品瓶药物浓度分别为1024、512、256、128、64、32μg/mL。
(4)孵育：将接种好的样品瓶盖紧盖子，至于37℃培养箱孵育18～24h。观察浊度，确定最低抑菌浓度。
表1.实施例1药物浓度与抑菌效果
序号 1 2 3 4 5 6 7
利鲁唑浓度μg/mL 1024 512 256 128 64 32 0
浊度 澄清 澄清 澄清 浑浊 浑浊 浑浊 浑浊
实验结果如表1所示，利鲁唑对于金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的最低抑菌浓度为512μg/mL。
实施例2：
(1)培养基的制备：用蒸馏水配制LB(溶菌肉汤，Lysogeny Broth)液体培养基，其中胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，用氢氧化钠调制pH至7.4并高温高压灭菌。
(2)接种菌液的制备：利用细菌生长法制备接种菌液。用接种环挑取金黄色葡萄球菌单菌落2～3个，接种于8～10mLLB液体培养基中，37℃孵育6～8h。增菌后的对数生长期菌液用多功能酶标仪(型号Synergy HT)检测波长600nm测定OD值，当OD值为0.6时及菌液含量约为5×108cfu/mL。
(3)将19.20mg利鲁唑溶于10mLLB液体培养基中，超声振荡使利鲁唑充分溶解，配制成分散均匀利鲁唑培养基溶液(1920μg/mL)。
在无菌操作台中操作，取无菌样品瓶(10mL)7个排成一排，除第一瓶外，每瓶加入2.5mLLB培养基，在第一样品瓶中加入5mL利鲁唑抗菌药物原液(1920μg/mL)混合均匀，然后吸取2.5mL至第二瓶，混匀后再吸取2.5mL至第三管，如此连续二倍稀释至第6瓶，并从第6瓶中吸取2.5mL弃去，第7瓶为不含药物的生长对照。此时各瓶药物浓度依次为1920、960、480、240、120、60μg/mL。然后将制备好的接种菌悬液稀释，取2.5mL至各样品瓶中，使每瓶最终菌液浓度约为5×108cfu/mL。第1样品瓶到第6样品瓶药物浓度分别为960、480、240、120、60、30μg/mL。
(4)孵育：将接种好的样品瓶盖紧盖子，至于37℃培养箱孵育18～24h。观察浊度，确定最低抑菌浓度。
表2.实施例2药物浓度与抑菌效果
序号 1 2 3 4 5 6 7
利鲁唑浓度μg/mL 960 480 240 120 60 30 0
浊度 澄清 澄清 浑浊 浑浊 浑浊 浑浊 浑浊
实验结果如表2所示，利鲁唑对于金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的最低抑菌浓度为480μg/mL。
实施例3：
(1)培养基的制备：用蒸馏水配制LB(溶菌肉汤，Lysogeny Broth)液体培养基，其中胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，用氢氧化钠调制pH至7.4并高温高压灭菌。
(2)接种菌液的制备：利用细菌生长法制备接种菌液。用接种环挑取金黄色葡萄球菌单菌落2～3个，接种于8～10mLLB液体培养基中，37℃孵育6～8h。增菌后的对数生长期菌液用多功能酶标仪(型号Synergy HT)检测波长600nm测定OD值，当OD值为0.6时及菌液含量约为5×108cfu/mL。
(3)将28.00mg利鲁唑溶于10mLLB液体培养基中，超声振荡使利鲁唑充分溶解，配制成分散均匀利鲁唑培养基溶液(2800μg/mL)。
在无菌操作台中操作，取无菌样品瓶(10mL)7个排成一排，除第一瓶外，每瓶加入2.5mLLB培养基，在第一样品瓶中加入5mL利鲁唑抗菌药物原液(2800μg/mL)混合均匀，然后吸取2.5mL至第二瓶，混匀后再吸取2.5mL至第三管，如此连续二倍稀释至第6瓶，并从第6瓶中吸取2.5mL弃去，第7瓶为不含药物的生长对照。此时各瓶药物浓度依次为2800、1400、700、350、175、87.5μg/mL。然后将制备好的接种菌悬液稀释，取2.5mL至各样品瓶中，使每瓶最终菌液浓度约为5×108cfu/mL。第1样品瓶到第6样品瓶药物浓度分别为1400、700、350、175、87.5、43.75μg/mL。
(4)孵育：将接种好的样品瓶盖紧盖子，至于37℃培养箱孵育18～24h。观察浊度，确定最低抑菌浓度。
表3.实施例3药物浓度与抑菌效果
序号 1 2 3 4 5 6 7
利鲁唑浓度μg/mL 1400 700 350 175 87.5 43.75 0
浊度 澄清 澄清 澄清 浑浊 浑浊 浑浊 浑浊
实验结果如表3所示，利鲁唑对于金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的最低抑菌浓度为350μg/mL。

Claims (1)

1.利鲁唑在制备抑制金黄色葡萄球菌药物的应用，所述利鲁唑的中文名称为2-氨基-6-三氟甲氧基苯并噻唑，英文名称为2-amino-6-trifluomethoxy-benzothiazole，分子式是C8H5F3N2OS，分子量是234.2，CAS号是1744-22-5，熔点是116～118℃，分子结构是：
Figure FDA0002453231630000011
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利鲁唑在脂多糖诱导眼内炎症中的干预研究;魏丽娟;《中国知网博士论文库》;20151231;第1页第1段，第2页结论 *

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