TWI380777B - 包含噬菌體之活體外殺菌組成物 - Google Patents

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Description

包含噬菌體之活體外殺菌組成物
本發明係關於一種殺菌組成物及應用該殺菌組成物之殺菌方法，尤係關於一種包括噬菌體及載劑之殺菌組成物及應用該殺菌組成物之殺菌方法。
院內感染(nosocomial infection)是醫院最棘手的難題，據統計，醫院的院內感染率一般約為3%至5%。院內感染的細菌通常為伺機性病原菌(opportunistic pathogen)，亦即，對於免疫力正常的宿主而言，該等細菌為無害的，有些細菌甚至是人體表面的正常菌叢(normal flora)；但在宿主免疫力下降時，該等細菌就容易引起感染，造成疾病。
常見院內感染的細菌包括，例如，葡萄球菌(Staphylococcus )、假單胞菌(Pseudomonas )、不動桿菌(Acinetobacter )、腸球菌(Enterococci )、腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、非發酵革蘭陰性桿菌(Non-fermentative gram-negative bacilli)、退伍軍人病菌屬(Legionella )、梭菌屬(Clostridium )、分枝桿菌屬(Mycobacterium )等。
目前，最常見的院內感染細菌包括綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa )、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )以及鮑氏不動桿菌(Acinetobacter baumannii )等。
院內感染細菌可能生存於聽診器、病歷、止血帶、手套、針頭、呼吸器、潮濕瓶、家具、地板、通風口、監視器等設備；或存在於水、土壤及食物(水果、蔬菜中)和下水道污物中；或存在於人體，如皮膚、腋下、結膜、口腔、上呼吸道、鼻咽及腸胃道等處。
院內感染的發生，以加護病房為例，由於病患多為重症患者，人體免疫力較差，且常需要接受侵入性治療，例如插管、血管裝置等，大幅提高院內感染的可能，據統計，加護病房之感染率約為千分之20至30左右。
一般細菌感染之治療方法即為使用抗生素。然而，由於抗生素的濫用，細菌會被篩選而演化出更多的抗藥性，目前院內感染已出現越來越多對抗生素具有抗藥性之細菌。要治療感染此種細菌的病患，則必須使用昂貴的新型抗生素，且若細菌的抗藥性繼續發展，將會致使無有效抗生素可供應用。有鑑於此，研發降低及/或預防院內感染的替代方法係有其必要性。
噬菌體(phage、bacteriophage)為病毒的一種，特徵在於噬菌體的宿主為細菌，必須在細菌體內才能夠生長與複製。噬菌體可分為溶裂型(lytic)和溶原型(lysogenic)，溶裂型噬菌體會感染宿主細菌，在宿主內複製完成後，噬菌體會將細菌溶裂而釋出，細菌則破裂死亡。溶原型噬菌體是較溫和的噬菌體，可以進行溶裂型或溶原型的生活史，在溶原型的路徑中，會與宿主共存。
已有利用噬菌體進行治療細菌性疾病之前案，例如可見美國專利案第5,688,501號、第5,997,862號等、第6,248,324號、第6,485,902號，分別揭露利用包括噬菌體之醫藥組成物治療細菌性疾病、A型鏈球菌(Streptococcus A)、造成皮膚感染之細菌、大腸桿菌O157菌株等；美國專利案第6,121,036號揭露包括一種以上的噬菌體的醫藥組成物；美國專利案第6,699,701號揭露利用沙門氏桿菌(Salmonella enteritidis )特異性噬菌體進行食品包裝的方法，係將該噬菌體塗佈至包裝材料上，再以包裝材料包覆食品(如蔬果)。
綜上述，目前已知噬菌體之應用，尚未提供針對院內感染之細菌有效的預防或治療的方法，特別是，上述前案皆未揭露鮑氏不動桿菌之噬菌體，亦未揭露針對減少院內感染細菌之鮑氏不動桿菌之數量之方法。
為克服上述及其他問題，本發明係提供一種活體外殺菌組成物，包括至少一種鮑氏不動桿菌(Acinetobacter baumannii )之噬菌體(以下有時簡稱AB菌噬菌體)及載劑，其中，該噬菌體係專一性感染鮑氏不動桿菌。於一態樣中，該噬菌體係包含至少一種純系鮑氏不動桿菌噬菌體。
於本發明組成物中，該噬菌體具有酸耐受性及鹼耐受性。於一態樣中，該噬菌體於pH 4以上至pH 12以下之條件下係保有噬菌體之生物活性。
於一態樣中，該AB菌噬菌體可於界面活性劑中保有噬菌體之生物活性。
其中，『噬菌體之生物活性』意指該噬菌體於環境中仍保有對宿主鮑氏不動桿菌之感染力，能夠感染宿主、於宿主細胞內增殖、及/或將宿主細胞溶裂之能力。
於一態樣中，本發明之噬菌體為溶裂型噬菌體，感染鮑氏不動桿菌，並於細菌細胞內增殖完成後，能夠溶裂鮑氏不動桿菌的細胞壁而釋出增殖之噬菌體，鮑氏不動桿菌則死亡，藉此，本發明之噬菌體可用於抑制鮑氏不動桿菌之活性、或減少鮑氏不動桿菌之數量。
於本發明組成物中，並未特別限制該載劑，只要該載劑與AB菌噬菌體為可相容性(compatible)以令該噬菌體可於載劑中保有生物活性，即可用於該殺菌組成物中。
於一態樣中，該載劑為溶液、懸浮液、粉末、噴霧劑、或軟膏之型式，但不限於此。於實施例中，該載劑係選自水、油、界面活性劑(如清潔劑、肥皂)、蛋白腖(peptone)等，亦可為兩種以上之組合，其中，以水及/或界面活性劑為較佳。
於較佳實施例中，該界面活性劑係為至少一種選自由陰離子性界面活性劑、陽離子性界面活性劑、兩性離子性界面活性劑及非離子性界面活性劑所組成之群組之界面活性劑。
於實施例中，該陰離子性界面活性劑係為，舉例但非限制，月桂酯硫酸銨、月桂醇聚醚磺基琥珀酸酯二鈉、辛基磺醯基琥珀酸酯二鈉、軟性十二烷基苯磺酸、十二烷基磷酸酯(MAP)、次級烷基磷酸鹽(SAS)、椰油醯羥基乙基磺酸鈉(SCID)、月桂醇聚醚硫酸酯鈉(SLES)、月桂醯肌胺酸鈉、月桂醯醚硫酸鈉(SLS)、甲基椰油醯基牛磺酸鈉等。
於實施例中，該陽離子性界面活性劑係為，舉例但非限制，十六烷基(Cetyl)三甲基氯化銨、二椰油基二甲基氯化銨、二癸基二甲基氯化銨、雙酯季銨鹽、烷基芐基二甲基氯化銨、牛油烷基二甲基氯化銨(DTDMAC)、咪唑啉季銨鹽等。
於實施例中，該兩性離子性界面活性劑係為，舉例但非限制，椰油基咪唑啉甜菜鹼(cocoyl lmidazolinium betaine)、椰油醯胺丙基羥基磺基甜菜鹼、椰油醯胺丙基二甲基甜菜鹼、椰油酰兩性基二丙酸二鈉、月桂醯胺丙基二甲基甜菜鹼、烷基兩性基丙酸鈉(sodium alkylamphopropionate)、牛脂基二羥乙基甜菜鹼等。
於實施例中，該非離子性界面活性劑係為，舉例但非限制，烷基聚葡萄糖苷(APG)、椰子醯胺(cocoamide DEA)、月桂基胺氧化物、月桂基醚羧酸酯、Triton X(如TX-100、TX-405等)、PEG-150di-stearate、Tween(如Tween-40、Tween-80等)、Span(如Span-20、Span-80等)等。
於較佳實施例中，該界面活性劑可為市售產品，特別是清潔劑產品。
本發明之組成物視需要復包括第二噬菌體，其中，該第二噬菌體係為院內感染細菌之噬菌體。
於一態樣中，該院內感染細菌係選自由不動桿菌(Acinetobacter )、葡萄球菌(Staphylococcus )、腸球菌(Enterococci )、腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、非發酵革蘭陰性桿菌(Non-fermentative gram-negative bacilli)、退伍軍人病菌屬(Legionella )、梭菌屬(Clostridium )、分枝桿菌屬(Mycobacterium )以及假單胞菌屬(Pseudomonas )所組成之群組中之一者或多者。
於實施例中，該不動桿菌係選自由鮑氏不動桿菌(A. baumannii )、A. calcoaceticus 、A. haemolyticus 、A. junii 、A. johnsonii 以及A. lwoffii 所組成之群組中之一者或多者。
於實施例中，該葡萄球菌係選自由S.epidermidis,S.hemolyticus,S. auricularis 、S.capitis,S.caprae,S. hominis,S. pasteuri 、S.simulans,S. warneri,S.cohnii,S.sciuri,S.xylosus 以及S.saprophyticus 所組成之群組中之一者或多者。
於實施例中，該腸桿菌科係選自由大腸桿菌(Escherichia ),肺炎克雷柏氏菌(Klebsiella pneumoniae )、變形桿菌(Proteus )、腸桿菌(Enterobacter )、檸檬酸桿菌(Citrobacter )、摩干氏菌(Morganella )、沙門氏桿菌(Salmonella )、沙雷氏菌(Serrartia )、志賀桿菌(Shigella )以及耶耳辛氏菌(Yersinia )所組成之群組中之一者或多者。
於實施例中，該假單胞菌屬係為綠膿桿菌(Pseudomonas aeruginosa )。
本發明組成物所含之第二噬菌體係為溶裂型噬菌體，可感染宿主(細菌)，並於細菌細胞內增殖完成後，能夠溶裂宿主的細胞壁而釋出增殖之噬菌體，宿主則死亡，藉此，本發明之第二噬菌體可用於抑制其宿主之活性、或減少宿主之數量。
於一態樣中，該第二噬菌體可於界面活性劑中保有噬菌體之生物活性。
於一態樣中，該鮑氏不動桿菌噬菌體於該組成物中的初始濃度為1x107 PFU/ml至1x109 PFU/ml。藉此，可依使用者之需求，以AB菌噬菌體與其他細菌之噬菌體之組成而製備本發明組成物，藉此，可達到同時減少多種細菌之效果。
於另一面向中，本發明係提供一種用於醫療機構或與醫療相關之研究機構之活體外殺菌方法，係包括：將包括鮑氏不動桿菌之噬菌體及載劑之殺菌組成物施用於該醫療機構或與醫療相關之研究機構，以減少該醫療機構或與醫療相關之研究機構中的細菌數量。於一態樣中，本發明之方法特別是針對減少鮑氏不動桿菌之數量。
其中，該鮑氏不動桿菌之噬菌體及該載劑係如上述所定義。視需要，該殺菌組成物復包括第二噬菌體，該第二噬菌體係如上述所定義。藉此，可依使用者之需求，以AB菌噬菌體單獨或與其他細菌之噬菌體之組合而製備本發明組成物，藉此，可達到減少鮑氏不動桿菌之數量、或同時減少多種細菌之數量之效果。
於一態樣中，係將該殺菌組成物施用於醫療機構或與醫療相關之研究機構，例如，醫院或療養院。於一實施例中，係將該殺菌組成物施用於該醫院或療養院之環境中，例如，舉例但非限制，加護病房、手術室、恢復室、診療室、會客室等；或於該醫院或療養院之設備，例如，舉例但非限制，插管、血管裝置、聽診器、病歷、止血帶、手套、呼吸器、潮濕瓶、家具、地板、通風口、監視器等的表面。該施用的方法為，視施用的標的物而選擇，直接噴灑、間接噴灑、浸泡或塗抹。
本發明之殺菌組成物及殺菌方法可藉由噬菌體與宿主間的專一性而有效降低標的細菌之數量或抑制標的細菌之活性，故可解決因細菌產生抗生素抗藥性而無法使用抗生素殺菌之困擾，且利用本發明之殺菌組成物亦不會造成標的細菌產生進一步的抗藥性。本發明之殺菌組成物可與市售清潔劑搭配使用，在商業化上具有優勢。另外，本發明之殺菌方法步驟簡單、效果良好，且無化學殺菌劑毒性殘留、無細菌之抗藥性產生之疑慮，因此可有效解決院內感染的問題。
以下係藉由特定的具體實施例說明本發明之實施方式，熟習此技藝之人士可由本說明書所揭示之內容瞭解本發明之其他優點與功效。
實施例1
噬菌體之製備：自花蓮慈濟醫院收集之導管洗液、排水系統之廢水、未經處理之污水等樣本，將樣本分別於4℃以5,000×g離心10分鐘，將上清液以0.45-μm孔徑之膜過濾，接著進行溶菌斑測試。
將10μl之樣本濾液滴至覆於一般LB瓊脂培養基上之AB菌之細菌層(bacterial lawns)(於0.7%之LB瓊脂培養基中)，樣本濾液中若含有噬菌體，會於細菌層上產生清除區(clear zone)，將其挑出並浸於LB培養基，進行過濾以去除AB菌，即可得到高濃度之噬菌體。再將噬菌體稀釋後，平塗於培養基上形成溶菌斑。進行至少兩次之單一溶菌斑單離步驟以得噬菌體純株。
自樣本所單離之AB菌噬菌體經鑑定後共得到5株AB菌噬菌體，各株皆可感染AB菌，且各自對AB菌之不同菌株(strain)之感染力略有差異。
實施例2
為測試本發明殺菌組成物之宿主專一性，選用如表1所示之菌種，其中，鮑氏不動桿菌(Acinetobacter baumannii ，本說明書中有時簡稱AB菌)來源：35株係自花蓮慈濟醫院收集，2株來自ATCC(American Type Culture Collection)。
將細菌培養於LB培養基(Difco Laboratories,Detroit,MI,USA)，37℃，並以混濁度監測細菌生長，於600nm(OD600 )測定吸光值，OD為1時表示細菌濃度為3×108 細胞/毫升。並於一般LB瓊脂培養基上覆蓋一層含有宿主細菌(例如表1中之菌株)之0.7%之LB瓊脂培養基，藉此製備宿主細菌層(bacterial lawns)。
將10μl之噬菌體(純株或混合物)培養液(噬菌體濃度為1010 PFU/ml)滴至細菌層，將培養基平盤於無菌層流操作台中乾燥10分鐘，於37℃培養18至20小時，並觀察溶菌斑產生與否。
MDRAB：多重抗藥性之AB菌，對健達黴素(gentamicin),安黴素(amikacin),達比黴素(piperacillin/tazobactam),特泯菌(ticarcillin/clavulanate),頭孢他啶(ceftazidime),頭孢吡肟(cefepime),頭孢匹羅(cefpirome),胺曲南(aztreonam),亞安培南(imipenem),美羅培南(meropenem),環丙沙星(ciprofloxacin),及左氧氟沙星(levofloxacin)具有抗藥性。Amp：安比西林(ampicillin);Imi：亞安培南(imipenem);Mer：美羅培南(meropenem);r：抗藥性；s：敏感性。
結果顯示，依實施例1之方法所製備之AB菌噬菌體(純株或是混合物)於10株A. calcoaceticus 、E. coli 之菌株、6株K. pneumoniae 之菌株、及3株P. aeruginosa 之菌株之細菌層上皆未產生溶菌斑，且皆僅於AB菌之細菌層上產生溶菌斑，顯示本發明之殺菌組成物確實對於AB菌具有宿主專一性。
另外，依實施例1之方法所製備之AB菌噬菌體(純株或是混合物)，除了對於ATCC之兩個標準菌株具有感染力，亦對於臨床分離之多重抗藥性AB菌具備感染力，確實可以解決院內感染與多重抗藥性AB菌感染之問題。
實施例3
當宿主細菌濃度達OD600 為0.6U時，將AB菌噬菌體(純株或是混合物)以0.0005之MOI(Multiplicity Of Infection)值添加至宿主細菌培養液中，於室溫下培養。於培養0、1、2、3、4、5、10、20、30分鐘之時間點取樣100μl，並以0.9mL之冷LB稀釋，以12,000×g離心5分鐘，取上清液，測定未吸附至宿主細菌之噬菌體的量。結果如第1圖所示。
觀察添加噬菌體之宿主細菌培養液，發現培養液於100分鐘內自混濁轉為澄清，顯示噬菌體將宿主細菌完全溶裂掉，證實本發明之殺菌組成物確實可達到殺菌效果。
由第1圖可知，約75%之噬菌體顆粒於2分鐘內吸附至宿主細菌，約95%之噬菌體顆粒於4分鐘內吸附至宿主細菌，於10分鐘時達到100%之吸附。
另外，以一步生長曲線(one-step growth curve)測定噬菌體複製曲線，將OD600 為0.8U之宿主細菌離心後收取細胞，再以0.8ml之LB培養基重新溶散，使濃度為109 CFU/ml。將AB菌噬菌體以0.0001之MOI值添加至宿主細菌培養液中，置於4℃下30分鐘，俾使噬菌體吸附至宿主細菌。將混合物以12,000×g離心10分鐘，再將包含受感染細菌之沈澱物以20ml之LB培養基重新溶散，於37℃下培養，每隔5分鐘取樣，並將樣本立刻稀釋及定量。結果如第2圖所示。
潛伏期之定義為自吸附(不包含預處理之10分鐘)至第一次爆發(burst，噬菌體溶裂細菌而釋出)開始，如第2圖所示潛伏期為15分鐘。以最終噬菌體顆粒量與受感染細菌初始量之比例，計算得到平均爆發量約為200PFU/細胞。
因此，本實施例證實本發明之殺菌組成物之殺菌效果迅速、需時短、效果良好；且能在溶裂宿主細菌後釋出更多量的噬菌體至環境中，可使殺菌效果持續存在。
實施例4
以界面活性劑TWEEN 20、TWEEN 80以及Triton X-100(購自Sigma-Aldrich Biotechnology,USA)與自實施例1單離出之AB菌噬菌體(純株或是混合物)製備本發明殺菌組成物。
習知界面活性劑之常用濃度多落在0.1~1wt%之間，因此，製備本發明殺菌組成物時，係包括0.1~1wt%之界面活性劑，以及起始濃度為5x107 PFU/ml之噬菌體，將兩者混合後置於室溫，每隔24小時採樣測定噬菌體濃度，如下式計算噬菌體存活率(survival fraction)：
噬菌體存活率=取樣之噬菌體濃度/噬菌體原始濃度
以測定界面活性劑之影響，當界面活性劑為1wt%之結果如第3圖所示。
經測定，包含0.1~1wt%之界面活性劑，皆不會對AB菌噬菌體之活性造成影響。另外，由第3圖可知，AB菌噬菌體於Triton X-100中最穩定，TWEEN 20次之；而在TWEEN 80中雖然AB菌噬菌體之存活率變化較大，但仍然可維持足夠感染宿主細菌的活性。且隨著時間進展，噬菌體濃度下降的趨勢則趨於緩和，再逐漸升高。以變異係數(coefficient of variation)評估，三種界面活性劑的CV值均低於20%，因此，證實噬菌體於此三種界面活性劑中皆非常穩定。表示本發明殺菌組成物係為安定。
實施例5
在不同環境條件下測定本發明殺菌組成物之穩定性。
(1)　溫度
將噬菌體以無菌水稀釋至108 PFU/ml後，置於不同的溫度條件下，分別為4℃、25℃、37℃、42℃、-20℃以及-80℃。在4℃、25℃及37℃的實驗中，於培養24小時內每3小時採樣測定噬菌體濃度，而後每星期持續追蹤至12週，結果如第4A圖所示。在-20℃及-80℃的實驗則各分為兩組，第一組是重複冷凍解凍，追蹤時間為12週，第二組只解凍一次，追蹤時間為5週，結果如第4B圖所示。
(2)　酸鹼度
將噬菌體以酸性(pH值為4)及鹼性(pH值為11)水溶液稀釋到噬菌體濃度為108 PFU/ml後，在pH值為4.7、7、11的實驗中24小時內每3小時測定濃度，而後每週固定追蹤一次，連續追蹤12週，結果如第5圖所示。
(3)　化學物質
將噬菌體加入氯仿溶液(0.5%及2%)稀釋濃度到108 PFU/ml後，在24小時內每3小時測定濃度，而後在0.5%之氯仿溶液的實驗中，每週固定追蹤一次，連續追蹤3週；2%之氯仿溶液的實驗則是追蹤6週，結果如第6圖所示。
(4)　乾燥處理
將1010 PFU/ml的噬菌體分為A、B兩組，A組以蛋白腖(peptone)，B組以無菌水分別將噬菌體濃度稀釋10倍之後再以真空離心乾燥系統(speed vac)乾燥處理，乾燥後的A、B兩組再分別復溶於0.5ml之蛋白腖及0.5ml之無菌水，觀察噬菌體在乾燥前後的濃度變化，結果如表2所示。
由上述測試結果發現，本發明殺菌組成物在低溫(-20℃、-80℃、4℃)條件下，噬菌體至少可存活8週以上且存活率達5%以上。在環境溫度(25℃以及37℃)條件下，噬菌體可存活11週以上且存活率達14.9%以上。而在高溫環境(42℃)下追蹤2週，噬菌體存活率仍達到14.8%。
本發明殺菌組成物在鹼性(pH=11)環境下，約11週後噬菌體的存活率可維持約30%，而在酸性(pH=4)環境下，至第11週仍可測得存活之噬菌體。另，於真空乾燥及復溶後所測得之AB菌噬菌體存活率高達20%以上。再者，本發明殺菌組成物在0.5%及2%之氯仿溶液中，噬菌體可存活3週以上且存活率達30%。
綜上述，對於環境之溫度、乾濕度、酸鹼值及化學物質皆噬菌體可維持存活率，證實本發明殺菌組成物之安定性。
實施例6
殺菌測試條件：於相同規格之容器中置入相同濃度之細菌(107 CFU/ml)，將包括107 PFU/ml之噬菌體之本發明殺菌組成物噴灑至容器中，於不同時間點取樣，依標準程序分別測量細菌及噬菌體濃度，藉由細菌減少量以測定殺菌效果。
本發明殺菌組成物之成分可包括如下所示之成分：
(1) AB菌噬菌體及無菌水
(2) AB菌噬菌體及界面活性劑
(3) AB菌噬菌體、無菌水、及界面活性劑
(4) AB菌噬菌體、第二噬菌體(葡萄球菌(Staphylococcus )噬菌體)、及無菌水
(5) AB菌噬菌體、第二噬菌體(葡萄球菌(Staphylococcus )噬菌體)、及界面活性劑
(6) AB菌噬菌體、第二噬菌體(葡萄球菌(Staphylococcus )噬菌體)、無菌水、及界面活性劑
另外，以噴灑無菌水作為對照組。
觀察發現容器內之混合物會自混濁轉為澄清，顯示噬菌體將宿主細菌完全溶裂掉，並可有效降低細菌量達數個對數值(logs)，證實本發明之殺菌組成物確實可達到殺菌效果。
上述實施例僅例示性說明本發明之組成物與製備方法，而非用於限制本發明。任何熟習此項技藝之人士均可在不違背本發明之精神及範疇下，對上述實施例進行修飾與改變。因此，本發明之權利保護範圍如後述申請專利範圍所載。
第1圖係為鮑氏不動桿菌噬菌體對於宿主細菌之吸附率；
第2圖係為鮑氏不動桿菌噬菌體之一步生長曲線；
第3圖係為在界面活性劑中，鮑氏不動桿菌噬菌體之活性；
第4A圖係說明在不同溫度條件下，本發明殺菌組成物之穩定性；
第4B圖係說明在不同溫度及解凍條件下，本發明殺菌組成物之穩定性；
第5圖係說明在不同酸鹼度條件下，本發明殺菌組成物之穩定性；以及
第6圖係說明在化學物質存在下，本發明殺菌組成物之穩定性。

Claims (13)

  1. 一種活體外殺菌組成物，係包括：鮑氏不動桿菌(Acinetobacter baumannii )噬菌體；及載劑；其中，該載劑係為油、界面活性劑、蛋白腖或上述之組合，且該噬菌體與該載劑間具可相容性，以令該鮑氏不動桿菌噬菌體保有生物活性。
  2. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中，該鮑氏不動桿菌噬菌體包含至少一種純系鮑氏不動桿菌噬菌體。
  3. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中，該鮑氏不動桿菌噬菌體係專一性感染鮑氏不動桿菌。
  4. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中，該鮑氏不動桿菌噬菌體係為溶裂型噬菌體。
  5. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中，該鮑氏不動桿菌噬菌體於pH 4至12之條件下保有鮑氏不動桿菌噬菌體之生物活性。
  6. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中，該載體為溶液、懸浮液、粉末、噴霧劑或軟膏之型式。
  7. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中，該界面活性劑係為至少一種選自由陰離子性界面活性劑、陽離子性界面活性劑、兩性離子性界面活性劑及非離子性界面活性劑所組成之群組之界面活性劑。
  8. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中，該界面活性 劑係為非離子性界面活性劑。
  9. 如申請專利範圍第1項之組成物，復包括第二噬菌體，其中，該第二噬菌體係為院內感染細菌之噬菌體。
  10. 如申請專利範圍第9項之組成物，其中，該院內感染細菌係選自由不動桿菌(Acinetobacter )、葡萄球菌(Staphylococcus )、腸球菌(Enterococci )、腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、非發酵革蘭陰性桿菌(Non-fermentative gram-negative bacilli)、退伍軍人病菌屬(Legionella )、梭菌屬(Clostridium )、分枝桿菌屬(Mycobacterium )以及假單胞菌屬(Pseudomonas )所組成之群組中之一者或多者。
  11. 如申請專利範圍第1項之組成物，其中該鮑氏不動桿菌噬菌體於該組成物中的初始濃度為1x107 PFU/ml至1x109 PFU/ml。
  12. 一種用於醫療機構或與醫療相關之研究機構之活體外殺菌方法，係包括將有效量之如申請專利範圍第1至10項中任一項之殺菌組成物施用於該醫療機構或與醫療相關之研究機構，以減少該醫療機構或與醫療相關之研究機構中細菌的數量。
  13. 如申請專利範圍第12項之方法，其中，該施用的方式為直接噴灑、間接噴灑、浸泡或塗抹。
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葉哲銘，以噬菌體phikm18p治療受多重抗藥性鮑氏不動桿菌感染小鼠之研究，義守大學生物技術與化學工程研究所 碩士論文，中華民國九十六年六月。 *

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