JP5313998B2 - Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 - Google Patents
Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5313998B2 JP5313998B2 JP2010275025A JP2010275025A JP5313998B2 JP 5313998 B2 JP5313998 B2 JP 5313998B2 JP 2010275025 A JP2010275025 A JP 2010275025A JP 2010275025 A JP2010275025 A JP 2010275025A JP 5313998 B2 JP5313998 B2 JP 5313998B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- xaa
- peptide
- hiv
- seq
- peptides
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 99
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims description 28
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims description 28
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims description 28
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title description 26
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 8
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 41
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 33
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 33
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 25
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 18
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 18
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 18
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 17
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 description 16
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 16
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 description 16
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 16
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 13
- 238000004989 laser desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 13
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 12
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 11
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 11
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 11
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 5
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 4
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 3
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 3
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical group CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 2
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 2
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004213 tert-butoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C(O*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminohexanoic acid Chemical group CCCCC(N)C(O)=O LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124718 AIDS vaccine Drugs 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000178270 Canarypox virus Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- VLOLPWWCNKWRNB-LOKLDPHHSA-N Gln-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O VLOLPWWCNKWRNB-LOKLDPHHSA-N 0.000 description 1
- IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 229940033330 HIV vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108700020403 Human Immunodeficiency Virus Type 1 p24 Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)CC BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102100034353 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100039064 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N Leu-Asn-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(=O)N)C(=O)N1CCCC1C(=O)O WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- FKVNLUZHSFCNGY-RVMXOQNASA-N Pro-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 FKVNLUZHSFCNGY-RVMXOQNASA-N 0.000 description 1
- SUENWIFTSTWUKD-AVGNSLFASA-N Pro-Leu-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SUENWIFTSTWUKD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N aldrithiol Chemical compound C=1C=CC=NC=1SSC1=CC=CC=N1 HAXFWIACAGNFHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000006229 carbon black Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000172 cytosol Anatomy 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 108010032806 molgramostim Proteins 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000016379 mucosal immune response Effects 0.000 description 1
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N sec-butyl acetate Chemical group CCC(C)OC(C)=O DCKVNWZUADLDEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-N sodium;5-ethyl-5-pentan-2-yl-1,3-diazinane-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000012899 standard injection Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000048 toxicity data Toxicity 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000759 toxicological effect Toxicity 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
- C12Q1/702—Specific hybridization probes for retroviruses
- C12Q1/703—Viruses associated with AIDS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Information Retrieval, Db Structures And Fs Structures Therefor (AREA)
Description
偽性及び真性の診断を受けたHIV陽性血清標本間の弁別方法においてペプチドが使用される新しいHIVp24ペプチドが、W091/13360中で記述されている。
EP-A-0356007は、抗原決定基を開示しており、特に、HIV-1中に存在するタンパク質に関係づけられエイズに対する潜在的ワクチンのための基礎として使用可能である合成ポリペプチド配列に関するものである。
初期の研究は、Korber B.,ら、ヒトレトロウイルスとエイズ-1997, Theoretical Biology and Biophysics Group, Los Alamos National Labaratory, Los Alamos, NM(編)により公表された1つのエピトープに基づいていた。このエピトープのアミノ酸配列(203〜222)は以下のとおりであった:
特異性を改善するため、すなわち純粋な非交叉反応抗体応答に寄与するアミノ酸を定義づけするため、著しく短かくさらに修飾されたペプチドに対して類似の研究が適用された:
本発明に従ったペプチドは、HIV-1-エピトープの独自性(感受性及び特異性)を維持する特性をもつ、上述のHIV-1コアタンパク質p24の4つの異なる保存された領域に由来している。さらに、本発明に従った新しいペプチドは、認識された細胞障害性Tリンパ球(CTL)拮抗効果を全くもたず、少なくとも1つの潜在的CTLエピトープを有することになる。
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Ala Xaa8 Xaa9 Gln Thr Pro Trp Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Val Xaa20(配列番号1)
〔式中、鎖中のアミノ酸は、以下のような意味をもちうる:すなわち
ペプチド誘導体の位置1のXaaは、Lys又はArgであり、
位置2のXaaは、Ala, Gly, Ser又はArgであり、
位置3のXaaは、Leu又はMetであり、
位置4のXaaは、Gly又はArgであり、
位置5のXaaは、Pro, Thr, Val, Ser, Gln又はAlaであり、
位置6のXaaは、Gly, Ala, Lys, Arg, Gln又はGluであり、
位置8のXaaは、Thr又はSerであり、
位置9のXaaは、Leu又はIleであり、
位置14のXaaは、Thr, Ser又はValであり、
位置15のXaaは、Ala又はSerであり、
位置16のXaaは、Cys又はSerであり、
位置17のXaaは、Gln又はLeuであり、
位置18のXaaは、Gly, Glu又はArgであり、
位置20のXaaは、Gly又はArgである、
そしてペプチドは、配列番号1の配列の少なくとも9個の連続するアミノ酸を含む。〕;
〔式中、鎖中のアミノ酸は、以下のような意味をもつ:すなわち、
位置1のXaaは、Arg, Lys, Asp又は無であり、
位置2のXaaは、Trp, Gly, Lys又はArgであり、
位置3のXaaは、Ile, Leu, Val又はMetであり、
位置4のXaaは、Ile, Val又はLeuであり、
位置5のXaaは、Leu, Met, Val, 又はProであり、
位置12のXaaは、Arg, Lysであり、
位置13のXaaは、Met又はLeuであり、
位置15のXaaは、Ser, Cys又はGlnであり、
位置17のXaaは、Thr, Val, Ile, Ser又はAlaであり、
位置18のXaaは、Ser, Gly又はThrであり、
位置21のXaaは、Asp, Glu, Cys又はGlyであり、
位置22のXaaは、Gly又は無である、
そしてここで、配列番号4の配列は少なくとも6個の連続するアミノ酸を含み、n=0,1,2又は3である。〕
〔式中、
位置1のXaaは、Asn, Ser, Gly, His, Ala, Pro, Arg又は無であり、
位置2のXaaは、Asn, Ala又はLysであり、
位置3のXaaは、Pro, Gln, Gly, Ile又はLeuであり、
位置7のXaaは、Val又はAlaであり、
位置8のXaaは、Gly又はLysであり、
位置9のXaaは、Glu, Asp, Lys, Phe又はThrであり、
位置10のXaaは、Ile, Met, Val又はLeuであり、
位置11のXaaは、Tyr, Leu又は無であり、
位置12のXaaは、Ser又は無であり、
位置13のXaaは、Arg又は無であり、
位置14のXaaは、Asp, Arg, Trp, Ala又は無であり、
位置15のXaaは、Ile又は無であり、
位置16のXaaは、Tyr又は無であり、
位置17のXaaは、Lys又はArgであり、
位置18のXaaは、Arg, Lys又はAspであり、
位置19のXaaは、Trp又はGlyであり、
位置20のXaaは、Ile, Met, Val, Gln又はAlaであり、
位置21のXaaは、Ile, Val又はAlaであり、
位置22のXaaは、Leu, Met又はValであり、
位置23のXaaは、Gly又はCysであり、
位置24のXaaは、Leu又は無である、
そしてここで、配列番号9の配列は少なくとも6個の連続的アミノ酸から成り、n=1,2又は3である。〕;
Xaa1 Xaa2 Ile Ile Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Leu Xaa11 [Gly]n[Arg]m Xaa12, Xaa13, Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18 Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25(配列番号15)
〔式中、
位置1のXaaは、Pro, Lys, Arg又は無であり、
位置2のXaaは、Glu, Arg, Phe又はLysであり、
位置5のXaaは、Pro又はThrであり、
位置6のXaaは、Met, Thr又はNleuであり、
位置7のXaaは、Phe又はLeuであり、
位置8のXaaは、Ser, Thr, Ala又はMetであり、
位置9のXaaは、Ala, Glu又はLeuであり、
位置11のXaaは、Ser又は無であり、
位置12のXaaは、Ala, Arg又は無であり、
位置13のXaaは、Ile, Leu又は無であり、
位置14のXaaは、Ser, Ala, Leu又は無であり、
位置15のXaaは、Tyr, Glu又はAspであり、
位置16のXaaは、Gly又はAspであり、
位置17のXaaは、Ala又はLeuであり、
位置18のXaaは、Thr, Ile, Val, Leu又はAsnであり、
位置19のXaaは、Pro, Thr又はSerであり、
位置20のXaaは、Tyr, Phe, Nleu, His又はGlnであり、
位置21のXaaは、Asp, Asn, Leu又はAlaであり、
位置22のXaaは、Leu, Ile, Val又はAsnであり、
位置23のXaaは、Asn, Tyr, Cys又はGlyであり、
位置24のXaaは、Thr, Met, Ile, Ala, Val又は無であり、
位置25のXaaは、Gly又は無である、
そしてここで、配列番号15の配列は、少なくとも6個の連続するアミノ酸から成り、n=1,2又は3及びm=0,1,2又は3である。〕
Cys残基のうちの2個以上は、連鎖内又は連鎖間ジスルフィド結合、-S-(CH2)P-S-又は-(CH2)P-架橋の一部を成すことができ、ここでp=1〜8で、O,N,及びSといったような単数又は複数のヘテロ原子が任意に介在しており、そして/又は前記ペプチド配列が固体支持体に対し固定化されている。
ペプチド配列のC末端及びN末端は、末端NH2基及び/又はCOOH基の修飾によって天然配列から逸脱することができ、例えば、担体又はもう1つの分子のための結合部位を提供するべくアシル化、アセチル化、アミド化又は修飾され得る。
本発明に従ったペプチドは、6〜50個、好ましくは10〜30個のアミノ酸で構成されている。これらは、同定された位置におけるアミノ酸の全ての天然変異を網羅している。
例えば腸内の刺激及び吸収を増強させるためのもう1つのアプローチは、ジ、トリ又はテトラペプチドといったような小さいペプチドと共に、本発明のペプチドを投与することにある。これらのペプチドは、本発明のペプチドに付加して又はそれと組合せた形で投与することができる。好ましくは、ペプチドはD形又はL形、好ましくはD形のアミノ酸から成るトリペプチドYGGと合わせて投与される。
細胞性免疫が必要とされる持続性応答を発生させるための1つのアプローチは、1又は複数の特異的抗原をコードするプラスミドDNAを予防接種することにある。
本発明に従ったワクチンの好ましい実施形態においては、配列番号1,4,9及び15のペプチドを含有する抗原が含まれ、より好ましくはペプチドは、1:1:1:1の比率で発生する。
さらに好ましい実施形態では、ワクチン組成物は、次のような抗原を含有する:
RWLLLGLNPLVGGGRLYSPTSILG-NH2(配列番号:6)
RAIPIPAGTLLSGGGRAIYKRTAILG-NH2(配列番号:11)
及び
RFIIPNIFTALSGGRRALLYGATPYAIG-NH2(配列番号:18)
当該抗原を用いた体液標本中のHIV-1又はHIV-1特異的ペプチド又はタンパク質によって誘発された抗体の検出方法が、本発明のさらなる実施形態である。同様にこの検出向けに設計された免疫学的検定キット及び前記抗原と選択的に反応する能力をもつ抗体も、本発明によって包含されている。
本発明のペプチドは、組換え型DNA技術といったような、線形アミノ酸配列を産生する既知のあらゆる方法によって産生することができる。本発明のペプチド又はこのペプチドの多量体をコードする核酸配列が、発現ベクターの中に導入される。適切な発現ベクターは、例えば、複製及び発現のために必要な制御領域を含むプラスミド、コスミド、ウイルス及びYAC(酵母人工染色体)である。発現ベクターは、宿主細胞内で発現するに至るまで刺激を受けることができる。適切な宿主細胞は、例えば、細菌、酵母細胞及び哺乳動物細胞である。
以下で記した例において調製されている全てのペプチド誘導体は、標準的なプログラムを用いてMilligen9050ペプチド合成装置上で合成された。使用された樹脂は、Tenta Gel P RAMで(RAPP POLYMERE GmbH, Tubingen)、理論上の負荷は0.20meg/gであった。合成の最終産物を、真空下で一晩乾燥させた。次にペプチドを、スカベンジャとしてのエタンジチオール(5%)と水(5%)の存在下で90%のトリフルオロ酢酸で処理すること(RTで1.5時間)によって樹脂から分割させた。
Cys(Trt), Gln(Trt), Glu(OtBu), Thr(tBu)
カッコ内の略号は以下の通りである:
Trt=トリフェニルメチル
t-Bu=第3ブチル
OtBu=第3ブチルエステル
アミノ酸誘導体はスイスのBachem AG.から供給されたものである。
ペプチドは、合成の一般的説明に従って、対応する出発材料から、アミド形態で合成された。純度をHPLC分析によって決定し、構造をアミノ酸分析及び質量分析法(LDI-MS)により確認した。
純度(HPLC):87%
ペプチドは、合成の一般的説明に従って、対応する出発材料から、アミド形態で合成された。純度をHPLC分析によって決定し、構造をアミノ酸分析及び質量分析法(LDI-MS)により確認した。
純度(HPLC):95%以上
分子量(遊離塩基):1966
分子構造式:C88H144O25N26
ペプチドは、合成の一般的説明に従って、対応する出発材料から、アミド形態で合成された。純度をHPLC分析によって決定し、構造をアミノ酸分析及び質量分析法(LDI-MS)により確認した。
純度(HPLC):95%
質量分光分析:理論分子量:2454.9
実験分子量:2454.8 ES+
ペプチドは、合成の一般的説明に従って、対応する出発材料から、アミド形態で合成された。純度をHPLC分析によって決定し、構造をアミノ酸分析及び質量分析法(LDI-MS)により確認した。
純度(HPLC):95%以上
分子量(遊離塩基):2552
分子構造式:C119H195O29N33
ペプチドは、合成の一般的説明に従って、対応する出発材料から、アミド形態で合成された。純度をHPLC分析によって決定し、構造をアミノ酸分析及び質量分析法(LDI-MS)により確認した。
ペプチドは、合成の一般的説明に従って、対応する出発材料から、アミド形態で合成された。純度をHPLC分析によって決定し、構造をアミノ酸分析及び質量分析法(LDI-MS)により確認した。
純度(HPLC):85%
質量分光分析:理論分子量:2817.3
実験分子量:2813.7 ES+
ペプチドは、合成の一般的説明に従って、対応する出発材料から、アミド形態で合成された。純度をHPLC分析によって決定し、構造をアミノ酸分析及び質量分析法(LDI-MS)により確認した。
純度(HPLC):95%以上
分子量(遊離塩基):2707
分子構造式:C125H208O29N38
ペプチドは、合成の一般的説明に従って、対応する出発材料から、アミド形態で合成された。純度をHPLC分析によって決定し、構造をアミノ酸分析及び質量分析法(LDI-MS)により確認した。
ペプチドは、合成の一般的説明に従って、対応する出発材料から、アミド形態で合成された。配列中のNlはノルロインシンである。純度をHPLC分析によって決定し、構造をアミノ酸分析及び質量分析法(LDI-MS)により確認した。
純度(HPLC):80%以上
質量分光分析:理論分子量:2783.3
実験分子量:2783.3 ES+
ペプチドは、合成の一般的説明に従って、対応する出発材料から、アミド形態で合成された。配列中のNlはノルロイシンである。純度をHPLC分析によって決定し、構造をアミノ酸分析及び質量分析法(LDI-MS)により確認した。
純度(HPLC):80%以上
質量分光分析:理論分子量:2932.4
実験分子量:2931.8 ES+
ペプチドは、合成の一般的説明に従って、対応する出発材料から、アミド形態で合成された。配列中のNlはノルロイシンである。純度をHPLC分析によって決定し、構造をアミノ酸分析及び質量分析法(LDI-MS)により確認した。
純度(HPLC):95%以上
分子量(遊離塩基):2894
分子構造式:C137H217O32N37
ペプチドは、合成の一般的説明に従って、対応する出発材料から、アミド形態で合成された。純度をHPLC分析によって決定し、構造をアミノ酸分析及び質量分析法(LDI-MS)により確認した。
例1及び3のペプチド配列は、システイン残基がジスルフィド架橋を形成したジペプチドを形成するべく、酸化段階を介してリンクされた。架橋は、次のいずれかの方法で形成された:
A) l2での酸化。酢酸/メタノール(1:4)中で等量の複数のペプチドを溶解させ、メタノール中の0.1Mのl2を添加し、2量体混合物を生成した。又は
B) [Cys(Spy)16]−配列番号2を介しての酸化:2MのAcOH(aq)及び2−プロパノール(1:1)中に溶解した配列番号2のペプチド2,3mMを2,2ジチオジピリジン(3当量)で処理し、[Cys(Spy)16]−配列番号2を生成した。等量の[Cys(Spy)16]−配列番号2及び配列番号5を10mMのNH4Oac(aq pH=6.5)及びメタノール(5:2)中で溶解させて、配列番号21の2量体を生成した。ペプチドの純度をHPLC分析によって決定し、ペプチドの構造をアミノ酸分析によって確認した。ペプチド含有量(アミノ酸遊離残基)は80%であった。
純度(HPLC):92%
配列番号3,6,11及び18のペプチドを含むワクチンを調製した。凍結乾燥したペプチドを4mg/mlの最終濃度で無菌水中に溶解させた。最終塩濃度は0.9%であった。顆粒球−マクロファージ−コロニー刺激因子(GM-CSF)の調製物も同じくメーカーの使用指示事項に従って、最終濃度0.3mg/mlとなるように調製された。2つの溶液を、皮内投与した。標準的注射量は100μlである。
抗原溶液又は懸濁液を、等量のBehring の完全又は不完全フロイントアジュバントと混合し、次に注射器内に吸引し勢い良くそこから押出すことによってか又はホモジネータを用いて細かく乳化させる。エマルジョンは、少なくとも30分間安定した状態にとどまらなくてはならない。抗原−アジュバントエマルジョンは、デポー剤として皮下注射されるのが最もよい。
例13のジペプチドを0.9%のNaCl中で、4mg/mlのテスト溶液濃度まで希釈させた。ペプチドを、体重1kgにつき100μgの用量でNMFI雌マウスに対し注射により投与した。毒物学的効果は全く見られず、ペプチドは毒性のないものとみなされた。
これらの研究の結果は、マウス及びラットに投与された用量レベルが不利な反応を全く惹起しなかったこと、又効果レベルが3mg/kgを超えることはなかったことを示した。
磁性粒子試薬は、メーカーの推奨プロトコルに従って調製されなくてはならない。Dynal ASが、利用されるDynabeads のメーカーである。リガンドでコーティングされた磁性粒子は、試薬1と呼ばれる。本発明に従った1つのペプチドが磁性粒子の予め活性化された表面に共有結合によりカップリングされる。磁性粒子の表面に対しペプチドを物理的に吸収させることも同じく可能である。試薬1中の粒子の濃度は、1mg/mlから15mg/mlまでの範囲内にある。粒度は0.2μm〜15μmの間で変動する。ペプチド濃度は、粒子1mgにつき0.01mgから1mgの範囲内にある。
基質溶液フェノールフタレイン−モノホスファターゼは、FlukaAGの推奨プロトコルに従って調製されなければならない。このプロトコルは、この分野において標準的な手順である。基質溶液は、試薬3と呼ばれる。
使用される洗浄及びインキュベーション用緩衝液は、Tween 20(0.01%〜0.1%),グリセロール(0.1%〜10%)及び塩化ナトリウム(0.2%〜0.1%)という付加的化合物を伴う標準的な0.05Mのトリス塩基緩衝液である。
上述の例は単に本発明を例示するものにすぎない。当業者であれば、クレーム中で記されているような本発明の概念及び範囲から逸脱することなく、本書で記述されたペプチド、抗原及びワクチンを修正できる、ということを理解しなければならない。
ペプチド又はワクチン製剤は、保管に先立ち凍結乾燥することができる。ワクチンは、いつでも使用できる状態で単数又は複数の用量単位を含むアンプルの形で、好ましくは低温で保管され得る。
Claims (3)
- 配列番号5,配列番号6,配列番号7及び配列番号8の群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチド。
- 配列番号6のアミノ酸配列からなるペプチド。
- 請求項1又は2に記載の少なくとも1つのペプチドを含むことを特徴とする抗原。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
NO19991078A NO311807B1 (no) | 1999-03-04 | 1999-03-04 | HIV-peptider, antigener, vaksinepreparater, immunoassay- testsett og en metode for påvisning av antistoffer fremkalt av HIV |
NO19991078 | 1999-03-04 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000602264A Division JP2002541069A (ja) | 1999-03-04 | 2000-03-02 | Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 |
Related Child Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012239940A Division JP5695010B2 (ja) | 1999-03-04 | 2012-10-31 | Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 |
JP2012240131A Division JP5695012B2 (ja) | 1999-03-04 | 2012-10-31 | Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011074081A JP2011074081A (ja) | 2011-04-14 |
JP5313998B2 true JP5313998B2 (ja) | 2013-10-09 |
Family
ID=19903050
Family Applications (5)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000602264A Pending JP2002541069A (ja) | 1999-03-04 | 2000-03-02 | Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 |
JP2010275025A Expired - Fee Related JP5313998B2 (ja) | 1999-03-04 | 2010-12-09 | Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 |
JP2012240131A Expired - Fee Related JP5695012B2 (ja) | 1999-03-04 | 2012-10-31 | Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 |
JP2012239940A Expired - Fee Related JP5695010B2 (ja) | 1999-03-04 | 2012-10-31 | Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 |
JP2013249096A Expired - Fee Related JP5814331B2 (ja) | 1999-03-04 | 2013-12-02 | Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2000602264A Pending JP2002541069A (ja) | 1999-03-04 | 2000-03-02 | Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 |
Family Applications After (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012240131A Expired - Fee Related JP5695012B2 (ja) | 1999-03-04 | 2012-10-31 | Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 |
JP2012239940A Expired - Fee Related JP5695010B2 (ja) | 1999-03-04 | 2012-10-31 | Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 |
JP2013249096A Expired - Fee Related JP5814331B2 (ja) | 1999-03-04 | 2013-12-02 | Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 |
Country Status (23)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US6706859B1 (ja) |
EP (1) | EP1159298B1 (ja) |
JP (5) | JP2002541069A (ja) |
CN (4) | CN101328210A (ja) |
AT (1) | ATE397014T1 (ja) |
AU (1) | AU771827B2 (ja) |
BR (1) | BR0008741A (ja) |
CA (1) | CA2363947C (ja) |
CY (1) | CY1108299T1 (ja) |
CZ (1) | CZ300505B6 (ja) |
DE (1) | DE60039036D1 (ja) |
DK (1) | DK1159298T3 (ja) |
EA (1) | EA004802B9 (ja) |
ES (1) | ES2307496T4 (ja) |
HK (1) | HK1044778B (ja) |
HU (1) | HU229282B1 (ja) |
ID (1) | ID30497A (ja) |
NO (1) | NO311807B1 (ja) |
NZ (4) | NZ514619A (ja) |
PT (1) | PT1159298E (ja) |
SK (1) | SK287382B6 (ja) |
WO (1) | WO2000052040A1 (ja) |
ZA (1) | ZA200107072B (ja) |
Families Citing this family (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2398816A1 (en) | 2000-02-04 | 2001-08-09 | Duke University | Human immunodeficiency virus vaccine |
NO314588B1 (no) | 2000-09-04 | 2003-04-14 | Bionor Immuno As | HIV-peptider, antigener, vaksinesammensetning, immunoassay- testsett og en fremgangsmåte for å påvise antistoffer indusert av HIV |
NO314587B1 (no) * | 2000-09-04 | 2003-04-14 | Bionor Immuno As | HIV regulatoriske- og hjelpepeptider, antigener, vaksinepreparater, immunoassay testsett og en metode for påvisning av antistoffer fremkaltav HIV |
CA2645342A1 (en) | 2006-03-10 | 2007-09-20 | Peptcell Limited | Peptides of regulatory or accessory proteins of hiv, compositions and the utilization thereof |
WO2009155489A2 (en) | 2008-06-19 | 2009-12-23 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
AU2010270722B2 (en) | 2009-07-06 | 2015-06-04 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
WO2011005772A1 (en) | 2009-07-06 | 2011-01-13 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
ES2625406T3 (es) | 2010-03-25 | 2017-07-19 | Oregon Health & Science University | Glicoproteínas de CMV y vectores recombinantes |
WO2012006367A2 (en) | 2010-07-06 | 2012-01-12 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
NZ611176A (en) * | 2010-12-02 | 2015-07-31 | Bionor Immuno As | Peptide scaffold design |
WO2012097346A1 (en) | 2011-01-13 | 2012-07-19 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating viral infections |
SI2691530T1 (en) | 2011-06-10 | 2018-08-31 | Oregon Health & Science University | CMV glycoproteins and recombinant vectors |
US20130189754A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-07-25 | International Aids Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
US9402894B2 (en) | 2011-10-27 | 2016-08-02 | International Aids Vaccine Initiative | Viral particles derived from an enveloped virus |
EP2802353A4 (en) | 2012-01-12 | 2015-12-02 | Variation Biotechnologies Inc | COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE TREATMENT OF VIRUS INFECTIONS |
RU2698906C2 (ru) | 2012-01-27 | 2019-09-02 | Вэриэйшн Биотекнолоджиз, Инк. | Способы и композиции для терапевтических агентов |
WO2013182662A1 (en) * | 2012-06-06 | 2013-12-12 | Bionor Immuno As | Vaccine |
IN2014KN02769A (ja) * | 2012-06-06 | 2015-05-08 | Bionor Immuno As | |
EP2679596B1 (en) | 2012-06-27 | 2017-04-12 | International Aids Vaccine Initiative | HIV-1 env glycoprotein variant |
WO2015007337A1 (en) | 2013-07-19 | 2015-01-22 | Bionor Immuno As | Method for the vaccination against hiv |
EP3033106A1 (en) * | 2013-08-14 | 2016-06-22 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Immunoadjuvant compositions and uses thereof |
EP2848937A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-18 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel HIV-1 immunogens |
US10058604B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-08-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
WO2015086738A2 (en) * | 2013-12-11 | 2015-06-18 | Bionor Immuno As | Hiv vaccine |
WO2015110665A1 (en) * | 2014-01-27 | 2015-07-30 | Bionor Immuno As | Dosage regimen for hiv vaccine |
CA2936139A1 (en) | 2014-01-27 | 2015-07-30 | Bionor Immuno As | Method for the vaccination against hiv |
WO2015110659A1 (en) * | 2014-01-27 | 2015-07-30 | Bionor Immuno As | Methods of immunization with a vaccine inducing a humoral immune response and with a vaccine inducing a cellular immune response |
EP3708576B1 (en) * | 2014-04-03 | 2023-02-22 | Amgen Inc. | Method for preparing amg 416 |
WO2016005508A1 (en) | 2014-07-11 | 2016-01-14 | Bionor Immuno As | Method for reducing and/or delaying pathological effects of human immunodeficiency virus i (hiv) or for reducing the risk of developing acquired immunodeficiency syndrome (aids) |
US10174292B2 (en) | 2015-03-20 | 2019-01-08 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
US9931394B2 (en) | 2015-03-23 | 2018-04-03 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
CA2984991A1 (en) | 2015-05-04 | 2016-11-10 | Bionor Immuno As | Dosage regimen for hiv vaccine |
Family Cites Families (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK3687A (da) | 1986-01-06 | 1987-07-07 | Hoffmann La Roche | Polypeptider og fremgangsmaade til fremstilling deraf |
US4925784A (en) | 1986-04-04 | 1990-05-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein |
GB8629116D0 (en) | 1986-12-05 | 1987-01-14 | Hoffmann La Roche | Env/gag polypeptides |
NZ226026A (en) | 1987-09-04 | 1991-03-26 | Wellcome Found | Immunoassay for an antibody using recombinant antigens expressed in two different genera |
US4888290A (en) * | 1987-11-06 | 1989-12-19 | Coulter Corporation | Monoclonal antibody specific to HIV antigens |
EP0356007A3 (en) | 1988-07-22 | 1991-07-03 | Medical Research Council | Antigenic determinants |
KR940000755B1 (ko) * | 1990-02-16 | 1994-01-29 | 유나이티드 바이오메디칼 인코오포레이티드 | Hcv에 대한 항체 검출, hcv 감염의 진단 및 백신으로서의 그 예방에 특히 적합한 합성 펩티드 |
SE468168B (sv) | 1990-02-20 | 1992-11-16 | Replico Medical Ab | Hiv-1, p24 peptider, diagnostiska antigener och foerfarande foer saerskiljande diagnostik av preliminaert hiv-1 positiva serumprov |
US5288514A (en) * | 1992-09-14 | 1994-02-22 | The Regents Of The University Of California | Solid phase and combinatorial synthesis of benzodiazepine compounds on a solid support |
FR2703252B1 (fr) * | 1993-03-31 | 1996-09-06 | Fernand Narbey Torossian | Complexe immunomodulateur anti SIDA. |
WO1994028871A1 (en) | 1993-06-07 | 1994-12-22 | Endocon, Inc. | Implant stimulated cellular immunity |
CN1055701C (zh) * | 1993-10-19 | 2000-08-23 | 味之素株式会社 | 能诱导对hiv免疫应答的肽及含有该肽的预防、治疗aids的药物 |
FR2731013B1 (fr) * | 1995-02-27 | 1997-05-16 | Inst Nat Sante Rech Med | Vih-1 de groupe o, fragments desdits virus, ainsi que leurs applications |
ES2187947T5 (es) | 1997-03-10 | 2014-01-29 | Roche Diagnostics Gmbh | Procedimiento para la detección simultánea de antígenos de HIV y anticuerpos de HIV |
-
1999
- 1999-03-04 NO NO19991078A patent/NO311807B1/no not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-03-02 AU AU33358/00A patent/AU771827B2/en not_active Ceased
- 2000-03-02 WO PCT/NO2000/000075 patent/WO2000052040A1/en active IP Right Grant
- 2000-03-02 CZ CZ20013195A patent/CZ300505B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 CA CA002363947A patent/CA2363947C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-02 CN CNA2008100921326A patent/CN101328210A/zh active Pending
- 2000-03-02 US US09/674,674 patent/US6706859B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-02 PT PT00911492T patent/PT1159298E/pt unknown
- 2000-03-02 CN CNA2008100921311A patent/CN101328209A/zh active Pending
- 2000-03-02 BR BR0008741-6A patent/BR0008741A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 NZ NZ514619A patent/NZ514619A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 ES ES00911492T patent/ES2307496T4/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-02 CN CNB008057354A patent/CN100387617C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-02 HU HU0200265A patent/HU229282B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 NZ NZ525753A patent/NZ525753A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 EP EP00911492A patent/EP1159298B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-02 NZ NZ525751A patent/NZ525751A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 DK DK00911492T patent/DK1159298T3/da active
- 2000-03-02 CN CNA2008100921330A patent/CN101328208A/zh active Pending
- 2000-03-02 ID IDW00200102137A patent/ID30497A/id unknown
- 2000-03-02 JP JP2000602264A patent/JP2002541069A/ja active Pending
- 2000-03-02 SK SK1240-2001A patent/SK287382B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 AT AT00911492T patent/ATE397014T1/de active
- 2000-03-02 NZ NZ525752A patent/NZ525752A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 EA EA200100943A patent/EA004802B9/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 DE DE60039036T patent/DE60039036D1/de not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-08-27 ZA ZA200107072A patent/ZA200107072B/xx unknown
-
2002
- 2002-08-27 HK HK02106292.0A patent/HK1044778B/zh not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-09-11 US US10/659,324 patent/US7311915B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-10-01 US US11/865,106 patent/US7709003B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-10-01 US US11/865,109 patent/US7709004B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-08-28 CY CY20081100922T patent/CY1108299T1/el unknown
-
2010
- 2010-12-09 JP JP2010275025A patent/JP5313998B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-10-31 JP JP2012240131A patent/JP5695012B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-10-31 JP JP2012239940A patent/JP5695010B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-12-02 JP JP2013249096A patent/JP5814331B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5814331B2 (ja) | Hivペプチド、抗原、ワクチン組成物、免疫学的検定キット及びhivによって誘発された抗体を検出する方法 | |
US7612168B2 (en) | Modified HIV peptides, antigens, compositions, immunoassay kit and a method of detecting antibodies induced by HIV | |
AU2001282706A1 (en) | HIV peptides from conserved in gag p17 and 924 and their application in E.G. vaccines | |
JP2004508382A (ja) | Hiv調節及び補助ペプチド、抗原、ワクチン組成物、hivにより誘発される抗体を検出するためのイムノアッセイキット及び方法 | |
AU2004200155C1 (en) | HIV peptides, antigens, vaccine compositions, immunoassay kit and a method of detecting antibodies induced by HIV |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130319 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130514 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20130604 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20130704 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |