EA004802B1 - МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ВИЧ-ПЕПТИДЫ НА ОСНОВЕ БЕЛКА gag p24, АНТИГЕНЫ, ВАКЦИННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, НАБОР ДЛЯ ИММУНОАНАЛИЗА И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИЧ-ИНДУЦИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ - Google Patents
МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ВИЧ-ПЕПТИДЫ НА ОСНОВЕ БЕЛКА gag p24, АНТИГЕНЫ, ВАКЦИННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, НАБОР ДЛЯ ИММУНОАНАЛИЗА И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИЧ-ИНДУЦИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ Download PDFInfo
- Publication number
- EA004802B1 EA004802B1 EA200100943A EA200100943A EA004802B1 EA 004802 B1 EA004802 B1 EA 004802B1 EA 200100943 A EA200100943 A EA 200100943A EA 200100943 A EA200100943 A EA 200100943A EA 004802 B1 EA004802 B1 EA 004802B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- xaa
- haa
- peptide
- leu
- seq
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 180
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 59
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 43
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 43
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 38
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 88
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 27
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 21
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims abstract description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims abstract description 10
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 claims abstract description 10
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 10
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 8
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims abstract description 7
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims abstract description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 claims abstract 8
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract 2
- UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N Pro-Trp Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)[O-])C(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 UEKYKRQIAQHOOZ-KBPBESRZSA-N 0.000 claims description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 claims description 3
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 claims description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 2
- VLOLPWWCNKWRNB-LOKLDPHHSA-N Gln-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N)O VLOLPWWCNKWRNB-LOKLDPHHSA-N 0.000 abstract 1
- IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N 0.000 abstract 1
- BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)[C@@H](C)CC BCVIOZZGJNOEQS-XKNYDFJKSA-N 0.000 abstract 1
- WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N Leu-Asn-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CC(=O)N)C(=O)N1CCCC1C(=O)O WGNOPSQMIQERPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- FKVNLUZHSFCNGY-RVMXOQNASA-N Pro-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@@H]2CCCN2 FKVNLUZHSFCNGY-RVMXOQNASA-N 0.000 abstract 1
- SUENWIFTSTWUKD-AVGNSLFASA-N Pro-Leu-Val Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SUENWIFTSTWUKD-AVGNSLFASA-N 0.000 abstract 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 82
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 78
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 25
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 20
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 19
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 18
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 17
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 13
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 12
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 11
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 5
- 239000012458 free base Substances 0.000 description 5
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940033330 HIV vaccine Drugs 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 4
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 3
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 3
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.C=CC1=CC=CC=C1C=C CHRJZRDFSQHIFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 241000557752 Khaya Species 0.000 description 2
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 2
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 2
- 108091005601 modified peptides Proteins 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 2
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 230000008467 tissue growth Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- ANAZDOWEOOFEET-UHFFFAOYSA-N (4-hydroxyphenyl) [4-(3-oxo-1h-2-benzofuran-1-yl)phenyl] hydrogen phosphate Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1OP(O)(=O)OC1=CC=C(C2C3=CC=CC=C3C(=O)O2)C=C1 ANAZDOWEOOFEET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 2-aminohexanoic acid Chemical group CCCCC(N)C(O)=O LRQKBLKVPFOOQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUSNPFGLKGCWGN-UHFFFAOYSA-N 3-[4-(3-aminopropyl)piperazin-1-yl]propan-1-amine Chemical compound NCCCN1CCN(CCCN)CC1 XUSNPFGLKGCWGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001474033 Acar Species 0.000 description 1
- 101100434503 Arabidopsis thaliana AGO8 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101150114515 CTBS gene Proteins 0.000 description 1
- 241000178270 Canarypox virus Species 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 102000001189 Cyclic Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010069514 Cyclic Peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 101710146739 Enterotoxin Proteins 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 101150047834 SNAI2 gene Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 1
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 101150010487 are gene Proteins 0.000 description 1
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006229 carbon black Substances 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000000147 enterotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000655 enterotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- -1 for example Proteins 0.000 description 1
- 210000001061 forehead Anatomy 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229960004592 isopropanol Drugs 0.000 description 1
- 101150044508 key gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- PWPJGUXAGUPAHP-UHFFFAOYSA-N lufenuron Chemical compound C1=C(Cl)C(OC(F)(F)C(C(F)(F)F)F)=CC(Cl)=C1NC(=O)NC(=O)C1=C(F)C=CC=C1F PWPJGUXAGUPAHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 1
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 229940021993 prophylactic vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 231100000654 protein toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-N sodium;5-ethyl-5-pentan-2-yl-1,3-diazinane-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].CCCC(C)C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O QGMRQYFBGABWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
- C12Q1/701—Specific hybridization probes
- C12Q1/702—Specific hybridization probes for retroviruses
- C12Q1/703—Viruses associated with AIDS
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Information Retrieval, Db Structures And Fs Structures Therefor (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение раскрывает новые модифицированные пептиды, способные индуцировать специфичный для ВИЧ-1 иммунный ответ без антагонизма в отношении активности цитотоксических T-клеток с целью получения эффективной профилактической и лечебной вакцины против ВИЧ. Пептиды основаны на консервативных участках белков gag ВИЧ p24. Разработаны антигены в свободной форме или присоединённые к носителю, включающие по крайней мере один из упомянутых пептидов, вакцинные композиции, включающие по крайней мере один из антигенов, наборы для иммуноанализа и способ определения антител, индуцированных ВИЧ или ВИЧ-специфичными пептидами, с использованием таких антигенов.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области генной инженерии и иммунохимии и, в частности, к новым пептидам на основе консервативных участков белка дад ВИЧ р24, антигенам в свободной или связанной р носителем формы, включающим по крайней мере один из упомянутых пептидов, вакцинным композициям, содержащим по крайней мере один из антигенов, наборам для иммуноанализа и способу определения антител, индуцированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) или ВИЧспецифичными пептидами, с использованием таких антигенов.
Уровень техники
В настоящее время имеется насущная необходимость в борьбе с глобальным эпидемическим распространением ВИЧ-инфекции, а разработка вакцины против ВИЧ является одной из приоритетных задач в исследованиях СПИДа. В целом, вакцины должны активировать антигенсодержащие клетки, преодолевать генетическую ограниченность Т-клеточных ответов и генерировать Т- и В-клетки памяти. Изменчивость вирусной популяции создаёт дополнительные трудности в получении эффективной вакцины против ВИЧ. Поэтому до сих пор не было сообщений о прорывах в предпринимаемых попытках разработать вакцину против ВИЧ. В настоящее время в целом считается, что индукция антиген-специфичного гуморального и клеточного иммунитета является ключевым фактором в разработке эффективной профилактической и лечебной вакцины. Все три основных разветвления иммунной системы, включая нейтрализующие антитела, клетки СЭ8+СТЬ и Тхелперные клетки 1-го типа (ТЫ), должны быть необходимыми звеньями защитного иммунитета в отношении ВИЧ.
Известно, что лимфоциты СТЬ способны уничтожать другие вирусные инфекции (Лба, 1994, 1ттипо1. Се11 Вю1., 72, 447-454) и что СТЬ способны лизировать инфицированные мишени на ранней стадии инфекции, т.е. перед тем, как вирусное потомство может быть образовано с последующим выходом в результате лизиса клеток (Аба е1 а1., цит. выше).
Основное внимание было сосредоточено на выборе антигенов, а также на подборе и оценке различных вспомогательных компонентов. Все антигены, используемые в различных исследованиях ίη νίΐτο и ίη νίνο, начиная от белков из неочищенных экстрактов и вплоть до различных синтетических пептидов, в основном на основе др160 и иногда от р24. Было проведено значительное число исследований в отношении петли У3 в составе белка др120. Была выявлена индукция и В-клеточного, и Т-клеточного ответов: однако, по результатам исследований ίη νίΐτο было сообщено, что пептид из консервативного участка др41 способствует усилению инфекции (8.ЕВе11 е1 а1., 1992, С1ш. Ехр. 1ттипо1., 87 (1), 37-45).
Встречающиеся в нативных условиях последовательности ВИЧ в предполагаемых вакцинах неспособны стимулировать стабильный иммунный ответ из-за присущей вирусам способности «изменяться» за счёт изменения эпитопов клеточной поверхности инфицированных клеток. Это в буквальном смысле обманывает иммунную систему, которая воспринимает конкретную аминокислотную последовательность как свою, хотя на самом деле существенные аминокислоты «спрятаны».
Недавние исследования титров антител против белка дад р24 показали, что медленная прогрессия развития СПИДа связана с высокими титрами, в то время как быстрая прогрессия развития СПИДа связана с низкими титрами. Было показано, что субъекты с низким титром антитела к р24 характеризуются существенно более быстрым развитием СПИДа по сравнению с субъектами, имеющими высокие титры антител к р24 (Ό.Ζ\ν;·ιΠ е1 а1., 1994, У1го1оду, 201, р. 285-293): это указывает на то, что р24 может играть ключевую роль в контроле развития СПИДа.
Новые пептиды р24 ВИЧ описаны в международной патентной заявке XVО 91/13360, в которой пептиды были использованы в способе, дискриминирующем правильно и ложно диагностированными ВИЧ-позитивными образцами сыворотки.
У КРЧоИпкоп е1 а1., 1991, 1оитпа1 ой 1ттипо1оду, Уо1. 147, N 5 (8ер1етЬег 1), рр. 15121521 описан анализ установления точной специфичности дад-специфичных СТЬ-ответов у 3 больных, серопозитивных по ВИЧ-1, где было обнаружено, что дад-специфичные СТЬ-ответы опосредуются лимфоцитами СП3+/СЭ8+, которые ограничены классом I НЬА.
Европейская патентная заявка ЕР А0356007 описывает антигенные детерминанты, в частности, она касается синтетических полипептидных последовательностей, которые родственны белкам, присутствующим в ВИЧ-1, и которые могут быть использованы в качестве основы для потенциальной вакцины против ВИЧ.
У Е.8.ВокепЬетд е1 а1., 1997, 8е1епее, Уо1. 278 (21 NονетЬе^), р. 1447-1450 описано, что специфичные для вируса СЭ4+ Т-хелперные лимфоциты являются ключевыми для поддержания эффективного иммунитета при ряде хронических вирусных инфекций, однако, они не выявляются при хронической инфекции вируса иммунодефицита человека 1-го типа (ВИЧ-1). Специфичные для ВИЧ-1 пролиферативные ответы на р24 характеризуются обратно пропорциональной связью с вирусной нагрузкой. Авторы заключили, что специфичные для ВИЧ-1 хелперные клетки, по-видимому, важны с точки зрения иммунотерапевтического вмешательства и разработки вакцин.
Европейские патентные заявки ЕР 0230222, ЕР 0-270114, германский патент 3711016 и британский патент 2-188639, все от имени Р.НоЕГтапи-Ба Косйе & Со. АкйепдекеПксйай, касаются экспрессии и очистки рекомбинантного белка, кодируемого геном НТБУШ Сад/Επν. или химерных белков. Белки, состоящие из природных последовательностей, могут быть очищены до гомогенного состояния и использованы в качестве основы для диагностических тестов, предназначенных для выявления антител, специфичных в отношении вирусов, связанных со СПИДом. Белок дад/епу также может быть использован в качестве вакцины с целью защиты от СПИДа путём профилактической иммунизации.
С точки зрения диагностики и терапевтического применения основные проблемы использования р24 в качестве элемента тестирования или лечения связаны со значительным числом эпитопов в составе р24, которые стимулируют выработку большого числа антител, обладающих слабой специфичностью, которые в результате повторяющегося бустинга в отношении возможных мутировавших последовательностей могут вызывать появление аутоантител (И.Р.Баке е1 а1., 1994, Аи1оап11Ьоб1е8 1о 1йе а1Га/Ье1а Т-се11 гесерЮгк ш Н1У 1пГесИоп: букгедикШоп апб ш1ш1сгу, Ргос. №111. Асаб. ск И8А, (23), 10849-10853, Νυν. 8). Далее, сообщено, что титр антител к р24 не достигает таких же высоких уровней, что и в отношении оболочечных белков (др120 и др41). В норме антитела к р24 образуются на самой ранней стадии инфекции, однако, титр довольно быстро стабилизируется после начального периода инфекции. Позднее титр р24 постепенно снижается, в то время как в отношении др160 имеется противоположная тенденция. Также данные, полученные в недавних исследованиях, указывают на то, что варианты дад ВИЧ-1 проявляют антагонистическую активность в отношении цитотоксических Т-клеток (Р.К1епегтап е1 а1., 1994, №1иге, 369 (2) (6479), р. 355, 2 Чипе). Это может быть одной из причин того, что обнаруживается быстрая стабилизация титра р24 и позднее начинается его снижение.
Сущность изобретения
Основываясь на описанных выше предпосылках, авторы предприняли исследование возможности создания новых синтетических пептидов, которые способны имитировать эпитоп р24, не проявляя антагонизма в отношении активности цитотоксических Т-клеток, с целью удовлетворения необходимости в эффективной профилактической и лечебной вакцине.
Исходная работа была основана на одном эпитопе, который был опубликован у В.КогЬег е1 а1., 1997, Нитап Ке1гоу1ги8е8 апб А1И8, Ебк. Тйеогейса1 Вю1оду апб Вюрйукюк Сгоир, Бок
А1аток №1бопа1 БаЬога1огу, Бок А1аток, ΝΜ. Аминокислотная последовательность эпитопа (203-222) такова:
КАЮ ΡβΑΤίΕΕΜΜΤ α οαβνο ККМ КТК 51 КО Б 8 58 К К с νκ V
А А
8Е αα
Однобуквенные, равно как и трёхбуквенные аббревиатуры, определяющие аминокислоты в последовательностях, приведённых в настоящей заявке, соответствуют международным стандартам и расшифрованы в руководствах, например, у А.Б.Бейшпдег Рппс1р1е8 оГ Вюсйет18йу, 1982, \Уог1й РиЬйкйегк 1пс., Νον Уогк. Аминокислоты, приведённые ниже основной последовательности, отражают естественную изменчивость этой последовательности. Исходный анализ последовательности, включающей такой модифицированный эпитоп, был проведён на материале следующей последовательности:
ΑΝ Р О С КО I Б К5 БО РСАТБ Е ЕХХТАС О ον 6νη2 ι___________________________________________________________________________________________1 где X означает 2-аминогексановую кислоту, а остатки цистеина имеют окисленный тип, т.е. образуют внутрицепочечный дисульфидный «мостик». Результаты (неопубликованные) исследований с использованием данного пептида, как компонента диагностического набора, показали, что специфичность в отношении заранее отобранной панели Африканских сывороток достигает 87% (п=279). Неожиданно чувствительность составила 100% в отношении панели позитивных по ВИЧ-1 сывороток, включающих сыворотки ВИЧ-1 субтипа О, которые весьма значительно отличаются от других субтипов.
С целью повышения специфичности, т.е. с целью определения аминокислот, которые обусловливают «чистый» ответ по антителам без перекрёстной реактивности, сходный анализ был проведён на материале существенно более короткого и дополнительно модифицированного пептида:
ίίννεΑτεαΕΗχτΑοαενο-ΝΗ, ι___________________________I где X имеет указанное выше значение, а остатки цистеина образуют внутрицепочечный дисульфидный «мостик».
Результаты настоящего исследования показали, что специфичность теста увеличивалась до 96% (п=293), что сходно со специфичностью, выявленной в тесте без использования пептида р24. При специфичности на уровне 87% в тесте, в котором использовали первый пептид, можно было бы предположить, что пептид будет индуцировать иммунный ответ более чем на один эпитоп, поскольку он распознавался неспецифическими антителами, если его использовали в качестве предполагаемой вакцины. Последнее, однако, показывает, что пептидная последовательность вызывает иммунный ответ, который уникален для ВИЧ-1. Следовательно, если осно5 ванная на нём последовательность используется в качестве антигена в предполагаемой вакцине, то наиболее вероятно это вызовет уникальный иммунный ответ в отношении ВИЧ-1.
Для дальнейшего повышения числа Тклеточных эпитопов и снижения вероятности образования способных маскироваться мутантов три дополнительные пептидные последовательности были основаны на следующих трёх последовательностях, состоящих из остатков 264284, 253-271 и 166-186, соответственно, опубликованных в Нитап Ре1гоу|гикек аиб АГО8, 1997; А Сотрбабоп апб Апа1ук1к о£ Иис1е1с Ас1б апб Атшо Ас1б Зециепсек, Ебк. Тйеогебса1 Вю1оду апб Вюрбукюк Сгоир, Ьок А1аток Иабопа1 ЬаЬога!оту, Ьок А1аток:
К I I ί С 1_ N К I νΚΜΥδΡΤ 8 110
ΚθννΜ Μ Κ С V Ο Ε ϋ μ ν ν α ι ο
Α
ΝΝΡΡΙΡνΟΕΙΥΚΚννΐ I ίθί
О А V ΚϋΜΙ ΚΚ6Μ νΜ
С С 8 Ν κ ν ο ν ν Η ΘΤ Α Ρ и
Некоторые модифицированные пептиды были синтезированы с целью определения уникальных последовательностей, которые и специфичны, и чувствительны в отношении ВИЧ-1.
Пептиды в соответствии с настоящим изобретением разработаны на основе четырёх раз личных консервативных участков в составе основного белка р24 ВИЧ-1, который описан выше, и по свойствам уникальны (чувствительность и специфичность) в отношении эпитопа ВИЧ-1. Кроме того, новые пептиды в соответствии с настоящим изобретением не проявляют распознаваемого антагонистического эффекта в отношении цитотоксических Т-лимфоцитов (СТЬ) и должны включать по крайней мере один потенциальный эпитоп для СТЬ.
Пептиды в соответствии с настоящим изобретением, которые удовлетворяют указанным выше критериям, выбирают из следующих групп.
Хаа1 Хаа2 Хаа3 Хаа4 Хаа5 Хаа6 А1а Хаа8 Хаа9 С1п ТНг Рго Тгр Хаа!4 Хаа!5 Хаа!6 Хаа1Хаа18 Уа1 Хаа20 (8ЕО ΙΌ N0 1), где аминокисло ты в полипептиде могут иметь следующие значения:
Хаа в положении 1 пептидного производного представляет собой Ьук или Агд;
Хаа в положении 2 представляет собой А1а, С1у, 8ет или Агд;
Хаа в положении 3 представляет собой Ьеи или Ме1;
Хаа в положении 4 представляет собой С1у или Агд;
Хаа в положении 5 представляет собой Рго, ТНг, Уа1, 8ет, С1п или А1а;
Хаа в положении 6 представляет собой С1у, А1а, Ьук, Агд, С1п или С1и;
Хаа в положении 8 представляет собой ТНг или 8ет;
Хаа в положении 9 представляет собой Ьеи или Не;
Хаа в положении ТНг, 8ет или Уа1;
Хаа в положении А1а или 8ет;
Хаа в положении
Сук или 8ет;
Хаа в положении
С1п или Ьеи;
Хаа в положении
С1у, С1и или Агд;
Хаа в положении
С1у или Агд;
причём пептид включает по крайней мере представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой девять расположенных подряд аминокислот из состава последовательности 8Е0 ΙΌ N0 1.
Хаа1 Хаа2 Хаа3 Хаа4 Хаа5 С1у Ьеи Акп Рго Ьеи Уа1 [С1у]п Хаа12 Хаа13 Туг Хаа15 Рго Хаа1Хаа18 11е Ьеи Хаа21 Хаа22 (8Е0 ΙΌ N0 4), где аминокислоты в полипептиде имеют следующие значения:
Хаа в положении 1 представляет собой Агд, Ьук, Акр или отсутствует;
Хаа в положении 2 представляет собой Тгр, С1у, Ьук или Агд;
Хаа в положении 3 представляет собой Не, Ьеи, Уа1 или Ме1;
Хаа в положении 4 представляет собой Не, Уа1 или Ьеи;
Хаа в положении 5 представляет собой Ьеи, Ме1, Уа1 или Рго;
Хаа в положении 12 представляет собой Агд или Ьук;
Хаа в положении 13 представляет собой Ме! или Ьеи;
Хаа в положении 15 представляет собой 8ет, Сук или С1п;
Хаа в положении 17 представляет собой ТНг, Уа1, Не, 8ет или А1а;
Хаа в положении 18 представляет собой 8ет, С1у или ТНг;
Хаа в положении 21 представляет собой Акр, С1и, Сук или С1у;
Хаа в положении 22 представляет С1у или отсутствует;
где последовательность 8Е0 ΙΌ N0 4 состоит по крайней мере из шести расположенных подряд аминокислот, а п = 0, 1, 2 или 3.
Хаа1 Хаа2 Хаа3 Рго Не Рго Хаа7 Хаа8 Хаа9
Хааю Хаап Хаа^2 [С1у]п Хаа13 Хаа 14 Хаа85 Хаа 16
Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 Хаа22 Хаа23 Хаа24
Ί (8ЕО ΙΌ N0 9),где Хаа в положении 1 представляет собой Аки, 8сг, 61у, Ηίδ. А1а, Рго, Агд или отсутствует;
Хаа в положении 2 представляет собой Акп, А1а или Ьуз;
Хаа в положении 3 представляет собой Рго, 61п, 61у, 11е или Ьеи;
Хаа в положении 7 представляет собой Уа1 или А1а;
Хаа в положении 8 представляет собой С1у или Ьуз;
Хаа в положении 9 представляет собой 61и, Акр, Ьуз, Рйе или ΤΙιγ;
Хаа в положении 10 представляет собой 11е, Ме!, Уа1 или Ьеи;
Хаа в положении 11 представляет собой Туг, Ьеи или отсутствует;
Хаа в положении 12 представляет собой 8ег или отсутствует;
Хаа в положении 13 представляет собой Агд или отсутствует;
Хаа в положении 14 представляет собой Азр, Агд, Тгр, А1а или отсутствует;
Хаа в положении 15 представляет собой 11е или отсутствует;
Хаа в положении 16 Туг или отсутствует;
Хаа в положении 17 Ьуз или Агд;
Хаа в положении 18 Агд, Ьуз или Азр;
Хаа в положении 19 Тгр или 61у;
Хаа в положении 20 11е, Ме!, Уа1, 61п или А1а;
представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой
Хаа в положении 11е, Уа1 или А1а;
Хаа в положении Ьеи, Ме! или Уа1;
Хаа в положении 61у или Суз;
Хаа в положении Ьеи или отсутствует;
представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой где последовательность 8Е0 ГО N0 9 состоит по крайней мере из шести расположенных подряд аминокислот, а п = 1, 2 или 3.
Хаа1 Хаа2 11е 11е Хаа5 Хаа6 Хаа7 Хаа8 Хаа9
Ьеи Хаац [С1у]п [Агд]т Хаа,2 Хаа!3 Хаа!4 Хаа,5 Хаа16 Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 Хаа22 Хаа23
Хаа24 Хаа25 (8Е0 ГО N0 15), где Хаа в положении 1 представляет собой Рго, Ьуз, Агд или от сутствует;
Хаа в положении 2 представляет собой 61и, Агд, Рйе или Ьуз;
Хаа в положении 5 представляет собой Рго или Т1п;
Хаа в положении 6 представляет собой Ме!, ΤΙιγ или Меи;
Хаа в положении 7 представляет собой Рйе или Ьеи;
Хаа в положении 8 представляет собой 8ег, Тйт, А1а или Ме!;
представляет представляет представляет собой собой собой представляет собой представляет собой представляет собой собой собой собой представляет представляет представляет
Хаа в положении А1а, 61ц или Ьеи;
Хаа в положении 8ег или отсутствует;
Хаа в положении
А1а, Агд или отсутствует;
Хаа в положении 13 11е, Ьеи или отсутствует;
Хаа в положении 14
8ег, А1а, Ьеи или отсутствует;
Хаа в положении Туг, 61и или Азр;
Хаа в положении 61у или Азр;
Хаа в положении А1а или Ьеи;
Хаа в положении
Тйт, 11е, Уа1, Ьеи или Азп;
Хаа в положении 19
Рго, ΤΙιγ или 8ег;
Хаа в положении 20
Туг, Рйе, №еи, Н1з или 61п;
Хаа в положении
Азр, Азп, Ьеи или А1а;
Хаа в положении
Ьеи, 11е, Уа1 или Азп;
Хаа в положении
Азп, Туг, Суз или 61у;
Хаа в положении представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой собой собой представляет
ТНг, Ме!, 11е, А1а, Уа1 или отсутствует;
Хаа в положении 25 представляет
С1у или отсутствует;
где последовательность 8Е0 ГО N0 15 состоит по крайней мере из шести расположенных подряд аминокислот, а п = 1, 2 или 3 и т = 0, 1, 2 или 3;
концевые сегменты последовательностей могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами, ацетилами или их солями;
два или большее число остатков Суз могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи: -8-(СН2)р-8- или «мостик» -(СН2)р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, N или 8, и/или упомянутые пептидные последовательности иммобилизованы на твёрдую подложку.
Новые пептидные последовательности можно использовать в качестве эффективного антигена при том, что антиген включает по крайней мере один пептид, выбранный из группы последовательностей 8Е0 ГО N0 1, 8Е0 ГО N0 4, 8 ЕС) ГО N0 9 или 8 ЕС) ГО N0 15. Антигенность может быть адаптирована путём кор личных пептидов или длины пептидов, например, за счёт димеризации или полимеризации, и/или иммобилизации на твёрдую фазу. Антиген включает две или большее число полипептидных последовательностей по настоящему изобретению, которые либо соединены «мостиректировки отношения или концентрации раз9 ком», например, дисульфидным «мостиком» между остатками Сук в составе полипептидов, либо такими «мостиками», как С1-С8-алкилен, возможно прерываемый одним или несколькими гетероатомами типа О, 8 или Ν, либо предпочтительно они не связаны между собой. Полипептиды могут быть иммобилизованы на твёрдую фазу в мономерной, димерной или олигомерной формах. Кроме того, аминокислоты могут быть добавлены к концам с целью получения «плеч», облегчающих иммобилизацию.
Все аминокислоты в составе пептидов по настоящему изобретению могут находиться и в Ό-, и в Ь-форме, хотя предпочтительными являются природные Ь-аминокислоты.
С- и Ν-концевые участки пептидных последовательностей могут отклоняться от природных последовательностей в результате модификации концевых NΗ2-группы и/или СООНгруппы: они могут быть, например, ацилированы, ацетилированы, амидированы или модифицированы так, чтобы образовать сайт связывания с носителем или иной молекулой.
Пептиды в соответствии с настоящим изобретением состоят из 6-50 аминокислот, предпочтительно из 10-30 аминокислот. Они охватывают любую известную природную аминокислотную изменчивость в идентифицированных положениях.
Полипептидный антиген по настоящему изобретению находится либо в свободной форме, либо связан с носителем. Носитель или твёрдая фаза, с которой пептид необязательно связан, могут быть выбраны из широкого круга известных носителей. Его следует выбирать с учётом предполагаемого применения иммобилизованного полипептида в качестве диагностического антигена или в качестве иммунизующего компонента вакцины.
Примерами носителей, которые можно использовать, например, для целей диагностики, являются магнитные шарики или латекс из сополимеров, таких как стирендивинилбензол, гидроксилированный стирендивинилбензол, полистирен, карбоксилированный полистирен, шарики из углеродной сажи, неактивированное или активированное полистиреном или поливинлхлоридом стекло, активированное эпоксидами пористое магнитное стекло, желатиновые или полисахаридные частицы или иные белковые частицы, клетки красной крови, моно- или поликлональные антитела или ЕаЬ-фрагменты таких антител.
В соответствии со следующим вариантом настоящего изобретения антигены могут образовывать составную часть вакцины, возможно объединённую с носителями, адъювантами или объединённую с другими иммуностимулирующими компонентами, такими как вирус канареечной оспы, имеющей ген еиу. Примерами носителей и/или адъювантов, применяемых в вакцинах, является другие белки, такие как бычий или человеческий сывороточный альбумин и гемоцианин слизня. Иммуностимулирующие средства можно разделить на три группы: адъюванты, носители для антигенов и наполнители. Примерами адъювантов являются гидроксид алюминия, соли алюминия, сапонин, мурамильные ди- и трипептиды, монофосфориллипид-А, В.рейикДк и различные цитокины, включая цитокины 1Ь-12 и 1Ь-1 лимфоцитов ТЫ. Ряд белковых токсинов можно использовать для перемещения белков-«пассажиров» через клеточные мембраны в цитоплазму, которые применимы для создания СТЬ-направленных вакцин. Носителями являются бактериальные токроиды, такие как инактивированные столбнячные и холерные токсины, генетически детоксицированные бактериальные токсины, такие как термолабильный энтератоксин Ε.οοίί. жирные кислоты, живые векторы, такие как полиохимеры и химерные белки, которые образуют частицы, например, химерные частицы дрожжевого ретротранспозона ΤΥ и частицы НВсАд. Наполнители, которые обычно используют в качестве компонентов современных вакцин, представлены эмульсией минеральных масел, полным и неполным адьювантом Фройнда, эмульсиями растительных масел, поверхностно-активными неионогенными блокирующими сополимерами, скваленом или скваланом, липосомами и биологически разрушаемыми микросферами. Двумя новыми адъювантами, которые обладают существенным потенциалом по созданию новых вакцин, являются микроэмульсия «масло-в-воде» (МЕ59) и полимерные микрочастицы. Может быть использовано любое вещество, которое способно усиливать иммуногенность антигена, а некоторые дополнительные альтернативы носителей или адъювантов приведены в американской или европейской фармакопеях.
Подходящий препарат антигена, предназначенный для использования в качестве иммуностимулятора, также может содержать интерфероны, такие как γ-интерферон, антивирусные хемокины или факторы роста кроветворной ткани, такие как фактор роста гранулоцитов/макрофагов.
Другим подходом к усилению стимуляции и поглощения, например, в кишечнике, является введение пептидов по настоящему изобретению вместе с небольшими пептидами, такими как ди-, три- или тетрапептиды. Такие пептиды могут быть введены дополнительно или в сочетании с пептидами по настоящему изобретению. Предпочтительно пептиды вводят вместе с трипептидом ΥΟΟ, состоящим из аминокислот в Όили Ь-форме, предпочтительно в Ό-форме.
Современными подходами к непарентеральной доставке вакцин, например, через слизистые, являются технология химеризации генов, нацеленная на создание нетоксичных производных адъювантов для слизистых, генетически инактивированных антигенов, несущих де11 леции в ключевом гене, совместная экспрессия антигена и специфического цитокина, который является ключевым в модуляции и контроле иммунного ответа слизистых, и сам генетический материал, который обеспечивает поглощение ДНК или РНК и их эндогенную экспрессию в клетках-хозяевах.
Один из подходов к выработке длительных ответов, для которых необходим механизм клеточного иммунитета, связан с вакцинацией плазмидной ДНК, которая кодирует один или несколько специфичных антигенов.
С целью защиты против ВИЧ-инфекции вакцины должны индуцировать и иммунные ответы в слизистых, и системные иммунные ответы, и они могут быть введены по любому стандартному пути, например, парентерально или непарентерально, например подкожно, внутрикожно, внутривенно, внутримышечно, перорально, в слизистую или через нос.
В предпочтительном варианте вакцины по настоящему изобретению она содержит антигены, включающие пептиды 8ЕО ΙΌ N0 1, 4, 9 и 15, более предпочтительно эти пептиды включены в соотношении 1:1:1:1.
В следующем предпочтительном варианте вакцинная композиция содержит антигены
КА Ь О Р ААТ Ь О Т Р да Т А 8 Ь С V О - ΝΗ2 (8Е(2 ГО ΝΟ 3),
К да I. Ь ЕС. Ь N Р ί V 000 КЬ Υ8 РТ81Е С - ΝΗ2 <СЕО |Е> N0 6), К А 1 Р I Р А С Т Ь I. 3 С С С К А I ΥΚΚΤ ΑΙ Ь С - ΝΗ2 (8Ε01ϋΝΟ 11) И
К Р 11 Р N1 Р Т А Ь 8 О С К К А Ь Ь Υ О А Т Р Υ А I О - ЫН2 (5ЕЦ Ю N0 18).
Одна из последовательностей включает Вклеточный эпитоп и должна активировать систему гуморальных ответов, в то время как другие последовательности привносят СТЬэпитопы, а аминокислотные замены, внесённые в рамку СТЬ-эпитопа, сформированы таким образом, чтобы обеспечить усиленное связывание. Другие аминокислотные замены были произведены с целью облегчения синтеза пептида и/или повышения растворимости пептида.
Способ определения в образце жидкостей тела антител, индуцированных ВИЧ-1 или специфичными для ВИЧ-1 пептидами или белками, с использованием заявляемых антигенов является следующим вариантом изобретения. Также настоящим изобретением охватывается набор для иммунологического тестирования, сформированный с целью указанной детекции, а также антитела, способные избирательно взаимодействовать с упомянутыми антигенами.
Получение пептидов
Пептиды по настоящему изобретению могут быть получены с помощью любого известного метода получения линейной аминокислотной последовательности, такого как методы рекомбинантных ДНК. Последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует пептид по настоящему изобретению или мультимер упомянутых пептидов, вносят в состав экспрессирующего вектора. Подходящими экспресси рующими векторами являются, например, плазмиды, космиды, вирусы и УАС (искусственные дрожжевые хромосомы), которые включают необходимые регуляторные элементы, обеспечивающие репликацию и экспрессию. В клеткехозяине экспрессирующий вектор может быть простимулирован к экспрессу. Подходящими клетками-хозяевами являются, например, бактерии, дрожжевые клетки и клетки млекопитающих. Такие методы хорошо известны в данной области техники и описаны, например, у 8ашЬтоок е! а1., 1989, Мо1еси1аг Сопшд: А ЬаЬота!огу Мапиа1, Со 16 8рппд НагЬог ЬаЬогаЮгу Ргезз, Со1б 8ртшд НагЬог. Другими хорошо известными методами являются разделение на фрагменты или синтез путём сочетания одного аминокислотного остатка со следующим в жидкой фазе или, что предпочтительно, на твёрдой фазе (на полимере), например, с помощью так называемого синтеза по Мэррифилду: см., например, Вагапу & МетДеЮ, Ιη РерНбез: Апа1у818, 8уп!йез1з, ВюЮду, Уо1. 2, е6з. Е.Отозз & МеЮоГег *Аса6еш1с Ргезз, ΝΥ, 1980); Кпе1ЬСотошет & Ми11еп, 1987, 1п!. I. Рерббе Рто!еш Вез., 30, р. 705-739 и Ие16з & №Ь1е, 1990, 1п!. I. Рерббе Рто!еш Вез., 35, р. 161-214.
Если желательным является соединенный или циклический пептид, то аминокислотную последовательность подвергают реакции химического окисления с целью циклизации или соединения двух остатков цистеина в пределах одного полипептида или между двумя пептидыми последовательностями после того, как синтезированы подходящие линейные аминокислотные последовательности: см. Акар е! а1., 1992, Те1гайе6гоп ЬеИег, 33, 8, р. 1073-1076.
Синтез пептидов
Все пептидные производные, полученные в примерах, приведённых далее, были синтезированы с помощью пептидного синтезатора М1Шдеп-9050 с использованием стандартной программы. Использованным полимером являлся Теп!а Ое1 Р ВАМ с теоретической величиной загрузки 0,20 шец/г (ВАРР Р0^ΥМЕВЕ ОшЬН, ТиЬшдеп). Конечный продукт синтеза высушивали в вакууме в течение ночи. Затем пептид отщепляли от полимера обработкой 90%-ной трифторуксусной кислотой в присутствие этандитиола (5%) и воды (5%) (1,5 ч при комнатной температуре). Затем полимер отфильтровывали и промывали на фильтре дополнительно трифторуксусной кислотой (100%) (2 раза по 20 мл). Объединённые фильтраты упаривали в вакууме (водяная баня при комнатной температуре), и остаток растирали в этиловом эфире и отфильтровывали осаждённый продукт. Твёрдое вещество быстро растворяли на фильтре ледяной уксусной кислотой (100 мл) и добавляли к 1,5 л 20%-ной уксусной кислоты в метаноле и обрабатывали 0,1 М раствором иода в метаноле до установления бледно-коричневой окраски. Затем добавляли ионный обменник Ьотеех 1x8 в ацетатной форме (15 г) (Βίο-Кай, Кюйтопй, СА), и смесь отфильтровывали. Фильтрат выпаривали, и остаток лиофилизовали из уксусной кислоты. Затем продукт очищали методом жидкостной хроматографии с обращенной фазой на колонке, заполненной Ктотакй® 100-5 С8 (ЕКА Νοόοΐ. 8ит!е, Швеция) в подходящей системе, содержащей водный раствор ацетонитрила с 0,1% трифторуксусной кислоты. Образцы, собранные с колонки, анализировали методом аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (Весктап 8ук1ет (Со1й, США), оборудованной колонкой КготаШ® 1005 С8 (ЕКА №Ье1, 8ийе, Швеция). Фракции, содержащие чистое вещество, объединяли, растворитель выпаривали, и продукт лиофилизовали из уксусной кислоты. В отношении конечного продукта проводили окончательный ВЭЖХанализ, и структуру пептида подтверждали путём аминокислотного анализа и массспектроскопии (АКА-МС).
Все аминокислоты, использованный в ходе синтеза, являлись Ь-аминокислотами, защищенными флуоренилметоксикарбонильной группой по α-аминогруппе. Боковые цепи были защищены следующим образом:
Су8(Тй), С1п(Тй), О1и(О1Вц), Тйт(1Ви).
Тй - трифенилметил,
1-Вц - трет-бутил,
О1Вц - трет-бутиловый сложный эфир.
Аминокислотные производные были приобретены у Васйет АО, Швейцария.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Пример 1. Получение КАБСРСАТБОТРУ ТАСОСУС - ΝΗ2 (8ЕО ΙΌ ΝΟ 2).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - 87%.
Пример 2. Получение КАБСРААТБОТР УТА8ЬСУС (8ЕО ΙΌ ΝΟ 3).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - более 95%.
Молекулярная масса (свободное основание) - 1966.
Молекулярная формула - С88Н144О2^26.
Пример 3. Получение \ЛРСЬ№ЬУСССК ЬУЗРТЗШСб- ΝΗ2 (8ЕО ΙΌ ΝΟ 5).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - 95%.
Масс-спектральный анализ: теоретическая молекулярная масса - 2454,9.
Экспериментальная молекулярная масса 2454,8 Е8+.
Пример 4. Получение К\\БББСБ№БУС СЮКЬУЗРТЗШС (8ЕО ΙΌ ΝΟ 6).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - более 95%.
Молекулярная масса (свободное основание) - 2552.
Молекулярная формула - ^ι9Ηι95Ο29Ν33.
Пример 5. Получение К1ББСБ№БУ СССКБУ8РТ8!БС (8ЕО ΙΌ ΝΟ 7), КЕЕЕСЕМРЕУСССКЬУЗРТП ЬС (8ЕО ΙΌ ΝΟ 8) и ΜΕΙΕνΟυΙΥΟΟΟυΙΥΚΚΑ ОАБСБ (8ЕО ΙΌ ΝΟ 24).
Пептиды были синтезированы в форме амидов из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХанализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
Пример 6. Получение КМРШУСРГУС СС^IΥККУ^А ЬСЬ (8ЕО ΙΌ ΝΟ 10).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - 85%.
Масс-спектральный анализ: теоретическая молекулярная масса - 2817,3.
Экспериментальная молекулярная масса 2813,7 Е8+.
Пример 7. Получение КАФФАСТББЗСС СКАРУККУА! ЬС (8ЕО ΙΌ ΝΟ 11).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - более 95%.
Молекулярная масса (свободное основание) - 2707.
Молекулярная формула - ^25Π208Ο29Ν38.
Пример 8. Получение АБРФАСБУСССКРУККУрАБС (8ЕО ΙΌ ΝΟ 12),
КIРIРУСΕIСССУIΥККУАI ЬС (8ЕО ΙΌ ΝΟ13) и КIРIРУСТ^^8СССКIΥКК \\'АП.С1 (8ЕО ΙΌ
ΝΟ 14).
Пептиды были синтезированы в форме амидов из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХанализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
Пример 9. Получение ΚΕΙΙΡΝ1Ε8ΑΕ6 ΟΑΙδΎΏΕΝΤΝΙΕΝΟΙ (8ЕО ΙΌ ΝΟ 16).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Ν1 в последовательности представляет норлейцин. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - более 80%.
Масс-спектральный анализ: теоретическая молекулярная масса - 2783,3.
Экспериментальная молекулярная масса 2783,3 Е8+.
Пример 10. Получение ΚΕΙΙΡΝ1Ε8ΑΕ8Ο 6ΟΑΙ8ΥΌΕΝΤΕΕΝ СЮ (8ЕО ΙΌ ΝΟ 17).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Ν1 в последовательности представляет норлейцин. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - более 80%.
Масс-спектральный анализ: теоретическая молекулярная масса - 2932,4.
Экспериментальная молекулярная масса 2931,8 Е8+.
Пример 11. Получение ΡΕΙΙΡΝ1ΕΤΑΕ80 ΟΗΗΑΕΕΥΟΑΤΡΥ ΑΙΟ (8ЕО ΙΌ ΝΟ 18).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Ν1 в последовательности представляет норлейцин. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - более 95%.
Молекулярная масса (свободное основание) - 2894.
Молекулярная формула - ^37Η217Ο32Ν37.
Пример 12. Получение ΚΙΙΡΝ1Ε8ΑΕΟΟ ΟΡΕΤΥΟΛΤΡΥΑΙΟ (8 ЕС) ΙΌ ΝΟ 19), ΡΙΙΡΝ1ΕΤΑΕ8666ΡΕΕΥ6Α-ΤΡΥΑΙ6 (8 ЕС) ΙΌ ΝΟ 20) и νΙΙΡΝ1Ε8ΑΕ66Α8ΥΏΕΝΤΝ1ΕΝα (8ЕО ΙΌ ΝΟ 25).
Пептиды были синтезированы в форме амидов из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХанализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
Пример 13. Димеризация с помощью дисульфидного «мостика».
Пептидные последовательности примеров и 3 соединяли на стадии окисления с образованием дипептида, в котором остатки цистеина образовывали дисульфидную связь. Этот «мостик» образовывался по одному из путей:
(Α) Окисление иодом. Равные количества пептидов растворяли в уксусной кислоте/метаноле (1:4) и добавляли 0,1 М Ι2 в метаноле, получая смесь димера, или (В) Окисление с помощью [Суз(8ру)16]8 ЕС) ΙΌ ΝΟ 2. 2,3 мМ пептида 8 ЕС) ΙΌ ΝΟ 2, растворённого в 2 М АсОН (водном) и 2пропаноле (1:1), обрабатывали 2,2-дитиопиридином (3 экв.) с получением |Су5(8ру)|6|-8ЕО ΙΌ ΝΟ 2. Равные количества |Су5(8ру)16|-8ЕО ΙΌ ΝΟ 2 и пептида 8ЕО ΙΌ ΝΟ; 5 растворяли в 10 мМ ΝΗ4Οαο (водный, рН=6,5) и метаноле (5:2) с получением димера 8ЕО ΙΌ ΝΟ 21.
Чистоту пептида определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, и структуру пептида подтверждали с помощью аминокислотного анализа. Содержание пептида (свободное основание аминокислоты) составило 80%.
ВЭЖХ-чистота - 92%.
Пример 14.
Готовили вакцину, содержащую пептиды 8ЕО ΙΌ ΝΟ 3, 6, 11 и 18. Лиофилизованные пептиды растворяли в стерильной воде до конечной концентрации 4 мг/мл. Конечная концентрация соли составила 0,9%. Также включали препарат колоние-стимулирующего фактора гранулоцитов/макрофагов (ОМ-С8Е) в соответствии с руководством производителя по применению до конечной концентрации 0,3 мг/мл. Два раствора вводили внутрикожно. Типичная доза инъекции составляет 100 мкл.
Пример 15.
Раствор или суспензию антигена смешивали в равных долях с полным или неполным адъювантом Фройнда (Вейгшд) и затем окончательно эмульгировали путём втягивания (всасывания) и сильно сдавливали с помощью инъекционного шприца или гомогенизатора. Эмульсия должна оставаться стабильной на протяжении по крайней мере 30 мин. Эмульсии антигена/адъюванта лучше всего инъецировать подкожно в форме депо.
Пример 16. Данные по токсичности.
Дипептид примера 13 разводили в 0,9%ном растворе до концентрации тест-раствора 0,4 мг/мл. Пептид вводили с помощью инъекции самкам мышей линии ΝΜΕΙ дозой 100 мкг на 1 кг массы тела. Не было выявлено проявлений токсичности, поэтому пептид рассматривался как нетоксичный.
Анализ токсичности проводили на мышах и крысах на материале пептидной композиции вакцины примера 14. Мыши были выбраны для анализа с целью получения сравнительных данных по второму из наиболее часто используемых видов грызунов. Анализируемая субстанция представляла собой смесь четырёх пептидов, внесённую в одну ампулу, содержащую лиофилизованный материал для разведения физиологическим раствором, а величины доз выражали количеством общей белковой нагрузки. Отдельные пептиды присутствовали в соотношении 1:1:1:1, что давало дозу каждого пептида 0,0075 мг на 1 кг массы тела, 0,075 мг на 1 кг массы тела и 0,75 мг на 1 кг массы тела, что вплоть до 500 раз превышает предполагаемую дозу для человека. Анализируемых животных разделили на четыре группы по 10 особей в каждой (по пять самцов и пять самок): контрольную группу (только физиологический раствор) и группы с низкой, средней и высокой дозами. Анализируемую композицию вводили однократно путём внутривенной инфузии в хвостовую вену при скорости дозы 3 мл/мин. Животных умерщвляли на 15-й и 16-й дни путём внутрибрюшинной инъекции пентобарбитона натрия.
Результаты проведённых исследований показали, что величины доз, введённых мышам и крысам, не вызывают нежелательных реакций, и не было какого-либо эффекта при избыточной дозе 3 мг/кг.
Пример 17. Иммуноанализ для определения антител, индуцированных ВИЧ-1.
Магнитные частицы готовили в соответствии с рекомендациями производителя. Использовали шарики ЭупаЬсаШ (Эупа1 А8). Магнитные частицы, покрытые лигандом, называли реагентом-1. Пептид по настоящему изобретению ковалентно присоединяли к предварительно активированной поверхности магнитных частиц. Также возможной является физическая адсорбция пептида на поверхности магнитных частиц. Концентрация частиц реагента-1 составляла от 1 мг/мл до 15 мг/мл. Размер частиц составлял от 0,2 мкм до 15 мкм. Концентрация пептидов составляла от 0,01 мг/мг частиц до 1 мг/мг частиц.
Антитела против иммуноглобулинов человека, конъюгированные с щелочной фосфатазой (ЩФ), готовили в соответствии с рекомендациями Эако А8. Это стандартный метод в данной области. Данный реагент называли реагентом-2.
Раствор субстрата фенолфталеинмонофосфата готовили в соответствии с рекомендациями Р1ика АС. Это стандартный метод для данной области процедурой. Раствор субстрата называли реагентом-3.
Для промывки и инкубации использовали стандартный 0,05 М Трис-НС1 буфер со следующими дополнительными компонентами: Твин-20 (0,01-0,1%), глицерин (0,1-10%) и хлорид натрия (0,2-0,1%).
Процедура анализа включает стадию инкубации, на которой в каждой лунке 1 каплю реагента-1 смешивают с 2 каплями промывочного буфера. После смешивания добавляют 30 мкл образца, и полученный раствор инкубируют в течение 5 мин.
Магнитные шарики могут быть собраны с помощью магнита с удалением жидкости до снятия магнита. Затем лунки дважды промывают 4 каплями промывочного раствора с последующей инкубацией с реагентом-2. Одну каплю реагента-2 добавляют к 2 каплям промывочного буфера, и раствор инкубируют в течение 5 мин. Магнитные частицы могут быть собраны магнитом с удалением жидкости до снятия магнита. Затем стадию промывки повторяют с последующей инкубацией с реагентом-3. По 2 капли реагента-3 добавляют в каждую лунку, и раствор инкубируют в течение 3 мин. Полученные результаты просчитывают относительно белого фона. Положительные результаты представляют собой красную окраску (3+ = интенсивный красный цвет), в то время как негативные результаты представлены отчётливо светложелтыми/бурыми растворами, как это получено в негативном контроле.
Иммунологический набор может быть использован для выявления антител, индуцированных либо вирусом ВИЧ, либо ВИЧспецифичными пептидами или белками, например, пептидами по настоящему изобретению.
Приведённые выше примеры служат исключительно для иллюстрирования настоящего изобретения. Специалисту в данной области техники должно быть понятно, что он может модифицировать пептиды, антигены и вакцины, описанные здесь, без отклонения от сути и объёма настоящего изобретения в соответствии с указанным в формуле изобретения.
Полипептиды по настоящему изобретению могут быть использованы в сочетании по крайней мере с одним пептидом, выбранным из каждой группы последовательностей: 8ЕС ΙΌ N0 1, 8ЕС Ш N0 4, 8ЕС Ш N0 9 и 8ЕС ΙΌ N0 15, - с образованием антигенов и получением активных компонентов профилактической или лечебной вакцины, предназначенной для создания защиты против вируса иммунодефицита человека 1-го типа (ВИЧ1). Вакцина может содержать соединения, обладающие положительными свойствами по защите или стимуляции иммунной системы реципиента (человека или позвоночного животного), например, интерлейкины, интерфероны, факторы роста гранулоцитов/макрофагов, факторы роста кроветворной ткани или подобное. Предпочтительно вакцинная композиция дополнительно содержит адъювант или наполнитель, более предпочтительно адъювантом или наполнителем является монофосфориллипид-А (МРЬ®), возможно вместе с квасцами, адъювантом Фройнда (полным или неполным) или гидроксидом алюминия. Оптимальное количество адъюванта/наполнителя будет диктоваться выбранным его типом (типами).
Пептид или вакцинный препарат могут быть лиофилизованы для хранения. Вакцину можно предпочтительно хранить при низкой температуре в ампулах, содержащих одну или несколько стандартных доз, готовых к применению. Типичная стандартная доза пептида по настоящему изобретению находится в диапазоне концентраций от 1 мкг до 1 мг на 1 кг массы тела, предпочтительно от 2 мкг до 0,15 мг на 1 кг массы тела. Специалисту в данной области техники должно быть понятно, что подходящая доза будет зависеть от массы тела больного, типа заболевания, тяжести состояния, пути введения и ряда других факторов. Вакцина может быть введена вплоть до 12 раз с помощью инъекции, обычно её нужно вводить приблизительно трижды. В препаратах растворов для инъекций пептиды растворяют в стерильном растворе хлорида натрия при конечных концентрациях по 1 мг/мл каждого пептида и 0,9% хлорида натрия. Обычно объём инъекции составляет 100200 мкл (2 х 100 мкл). Пептид предпочтительно вводят вместе с подходящим адъювантом и/или фактором роста гранулоцитов/макрофагов, например, Ьеисотах® (8Ьегшд Р1оидЬ). Подходящим путём введения может быть внутрикожный, подкожный, внутривенный, пероральный, внутримышечный, интраназальный, через слизистую или любой иной подходящий путь введения. Для поддержания защиты могут потребоваться бустерные введения. Для специалиста в данной области техники будет понятно, что вакцинные композиции по настоящему изобретению применимы не только для профилактики инфекции, но также и для лечения инфекции.
Список последовательностей (1) ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ (ί) ЗАЯВИТЕЛЬ (A) НАЗВАНИЕ: Вюпог А/8 (B) АДРЕС: 31г0тс1а18)огс1е14, Р.О.Вох 1868 6и1зе( (C) ГОРОД: Зктеп (Е) СТРАНА: Норвегия (Г) ПОЧТОВЫЙ КОД: N-3705 (О) ТЕЛЕФОН: (+47) 35-50-57-50 (Н) ФАКС: (+47) 35-50-57-01 (ί) ЗАЯВИТЕЛЬ И АВТОР ИЗОБРЕТЕНИЯ (только для США):
(A) ИМЯ: В1гдег Загепзеп (B) УЛИЦА: Ме1егИа 3 (C) ГОРОД: 3727 ЗИеп (ϋ) СТРАНА: Норвегия (п) НАЗВАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ: ВИЧ-гтептиды, антигены, вакцинные композиции, набор для иммуноанализа и способ определения ВИЧ-индуцированных антител (ηί) КОЛИЧЕСТВО ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ: 25 (ίν) КОМПЬЮТЕРНАЯ ФОРМА:
(A) ВИД НОСИТЕЛЯ: дискета (B) КОМПЬЮТЕР: 1ВМ-совместимый (C) ОПЕРАЦИОННАЯ СИСТЕМА: №ίηάο\ν3-95 (Ц) ПРОГРАММА: №огй 7.0 (ν) ПАРАМЕТРЫ ТЕКУЩЕЙ ЗАЯВКИ:
приоритет № 199901078, поданной 4 марта 2000 г.
НОМЕР ЗАЯВКИ:
(2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЗЕС) Ю ΝΟ 1:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 20 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (Ц) ТОПОЛОГИЯ: обе (п) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ϋΐ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ν) ТИП ФРАГМЕНТА: внутренний (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 1 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 1 представляет собой Ьуз или Агд (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯМ (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 2 представляет собой А1а, СНу, 8ег или Агд (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 3 (Ώ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 3 представляет собой Ьеи или Ме1 (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 4 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 4 представляет собой Оу или Агд (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 5 (В) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 5 представляет собой Рго, ТЬг, Уа1, 8ег, Оп или А1а (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 6 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 6 представляет собой 61у, А1а, Ьуз, Агд, Оп или С1и (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 8 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 8 представляет собой ТЬг или Зег (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯМ (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 9 представляет собой Геи или Пе (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 14 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 14 представляет собой ТЬг, 8ег или Уа1 (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 15 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 15 представляет собой А1а или 8ег (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 16 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 16 представляет собой Суз или 8ег, необязательно Суз образует часть дисульфидной связи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 17 (Э) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 17 представляет собой О1п или Ьеи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 18 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 18 представляет собой О1у, С1и или Агд (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 20 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 20 представляет собой 61у или Агд (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е0 ГО ΝΟ 1:
Хаа, Хаа2 Хаа2 Хаа4 Хааг Хаа« А1а Хаа» Хаа9 О1п ТЬг Рго Тгр Хааы
5 10
Хаа15 Хаа^ Хаар Хааи Уа1 Хаа2о
20 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е0 ГО N0 2:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 20 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίϋ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нетОх) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 16 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: необязательно Суз в положении 16 образует часть дисульфидной связи (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е0 ГО ΝΟ 2:
Ьуз А1а Ьеи О1у Рго С1у А1а ТЬг Ьеи С1п ТЬг Рго Тгр ТЬг А1а Суз
5 10 15
С1п С1у Уа101у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е0 ГО ΝΟ 3;
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ (A) ДЛИНА: 20 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (п) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Ер ГО N0 3
Агд А1а Ьеи О1у Рго А1а А1а ТЬг Ьеи О1п ТЬг Рго Тгр ТЬг А1а Зег
10 15
Ьеи С1у Уа1 О1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Ες ГО N0 4:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 23-24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 1 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 1 представляет собой Агд, Ьуз, Азр или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 2 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 2 представляет собой Тгр, О1у, Ьуз или Агд (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 3 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 3 представляет собой Не, Ьеи, Уа1 или Ме!
(ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯМ (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 4 представляет собой Не, Уа1 или Ьеи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 5 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 5 представляет собой Ьеи, Ме!, Уа1 или Рго (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 12 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 12 представляет собой Агд или Ьуз (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 13 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 13 представляет собой Ме1 или Ьеи (1х) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 15 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 15 представляет собой 5ег, Суз или О1п, необязательно Суз образует часть дисульфидной связи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 17 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 17 представляет собой ТИг, Уа1, Пе, Зег или А1а (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 18 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 18 представляет собой 5ег, О1у или ТЬг (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 21 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 21 представляет собой Азр, О1и, Суз или О1у, необязательно Суз образует часть дисульфидной связи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 22 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 22 представляет собой О1у или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ. 11..12 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: необязательно внесён глициновый «мостик» из 0, 1,2 или 3 остатков (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 8Е0 Ю N0 4·
Хаа| Хаа2 Хааз Хаад Хаа5 С1у Ьеи Азп Рго Ьеи Уа1 [О1у]п Хаа^ Хаан
5 10
Туг Хаац Рго Хаан Хаа^ Не Ьеи Хаа21 Хаа22
20 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8ЕЦ Ю N0 5:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ (A) ДЛИНА: 24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (Ц) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (НО ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 23 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Суз в положении 23 может образовывать часть дисульфидной связи (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕЦ ΙΟ N0 5
Тгр Пе Пе Рго О1у Ьеи Азп Рго Ьеи Уа1 Ст1у О1у О1у Ьуз Ьеи Туг
10 15
Зег Рго ТЬг Зег Пе Ьеи Суз С1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЗЕО ГО N0 6:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе (Н) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ЗЕО ГО N0 6
Агд Тгр Ьеи Ьеи Ьеи О1у Ьеи Азп Рго Ьеи Уа! О1у О1у О1у Агд Ьеи
10 15
Туг Зег Рго ТЬг Зег Пе Ьеи О1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЗЕ() ГО N0 7:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 23 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Εζ> ГО N0 7:
Ьуз Не Ьеи Ьеи О1у Ьеи Азп Рго Ьеи Уа1 С1у О1у С1у Ατβ Ьеи Туг
10 15
Зег Рго ТЬг Зег Пе Ьеи О1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Εξ> ПО N0 8:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 23 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ЗЕГ) ГО N0 8
Агд Ьеи Ьеи Ьеи О1у Ьеи Азп Рго Ьеи Уа1 61у О1у СНу Агд Ьеи Туг
10 15
Зег Рго ТЬг ТЬг Не Ьеи С1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Εζ) ГО N0 9:
(ΐ) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 22-26 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (Ц) ТОПОЛОГИЯ: обе (И) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 1 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 1 представляет собой Азп, 8ег, О1у, ί5, А1а или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 2 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 2 представляет собой Азп. А1а или Еуз (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 3 (Э) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 3 представляет собой Рго, С1п, О1у, Пе или Ьеи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 7 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 7 представляет собой \'а1 или А1а (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 8 (Ω) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 8 представляет собой СИу или Туз (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 9 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 9 представляет собой О1и. Азр, Еуз, РЬе или ТЬг (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 10 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 10 представляет собой Пе, Ме!, Уа1 или 1_еч (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 11 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 11 представляет собой Туг. Ееи или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 12 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 12 представляет собой 8сг или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(Λ) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (В) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 13 (Г>) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 13 представляет собой Агд или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 14 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 14 представляет собой Азр, Агд. Тгр, А1а или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 15 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 15 представляет собой Пс или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 16 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 16 представляет собой Туг или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 17 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 17 представляет собой Еуз или Агд (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 18 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 18 представляет собой Агд. 1_у«з или Азр (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайг (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 19 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 19 представляет собой I гр или Ст1у (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 20 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 20 представляет собой Пе. Мс!, Уа1, С1п или А1а (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 21 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 21 представляет собой Пс. Уа1 или А1а (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 22 (Ω) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 22 представляет собой 1.сп. Ме! или Уа1 (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 23
О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 23 представляет собой О1у или Суз (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 24 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 24 представляет собой I сн или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 12...13 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ, необязательно внесён глициновый «мостик» из 1.2 или 3 остатков (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5Ер ГО ΝΟ 9
Ха<11 Хаа2 Хаа> Рго Йе Рго Хаа7 Хаа? Хаад Хаа>о Хаац Хаац [О1у]„
5 10 .\аа>з Хааы Хаац Хааи Хаац Хаац Хаац Хаа2о Хаа2) Хаа22 Хаа2з Хаа24
20
12) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 5Е<2 Ιϋ ΝΟ 10:
(ΐ) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ.
(A) ДЛИНА: 25 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίιί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(Λ) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (В) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 24 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Суз в положении 24 может образовывать часть дисульфидной связи (χί ) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 8Еф 10 N0 10:
Агц Азп Не Рго Не Рго Уа1 О1у Азр Не Туг О1у СНу О1у Азр Не
I 5 10 15
Туг Ьуз Аг» Тгр СИп А1а Ьеи Суз Ьеи (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 5Е<3 Ιϋ ΝΟ 11:
(ΐ) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 26 аминокислот (B) ТИП. аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (п) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίιί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е0 ГО N0 11
Аге А1а Не Рго Не Рго А1а 01у ТЬг Ьеи Ьеи Зег О1у СЛу О1у Аг§
10 15
А1а Не Туг I .уз Аге А1а Не Ьеи С1у
25
12) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е() ГО N0 12:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 23 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ- одноцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе (ϋ) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ш) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е(? Ш ΝΟ 12
А1а Ьеи Рго Не Рго А1а С1у РЬе Не Туг СНу О1у СНу Аг§ Не Туг
10 15
Ьуз Аге Тгр С1п А1а Ьеи О1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Ер ΙΟ N0 13:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 22 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίϋ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е(2 ГО N0 13:
Ьуз Пе Рго Не Рго Уа1 СНу РЬе Не СНу О1у С1у Тгр Не Туг Ьуз
10 15
Аге Тгр А1а Пе Ьеи СНу (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е0 ГО N0 14:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίϋ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е0 ГО N0 14:
Ьуз Пе Рго Пе Рго Уа1 С1у ТЬг Ьеи Ьеи Зег СЛу О1у С1у Аг£ Пе
10 15
Туг Ьуз Аг§ Тгр А1а Пе Ьеи О1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е0 ГО N0 15:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 24-28 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίϋ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 1 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 1 представляет собой Рго, Ьуз, Агд или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯМ (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 2 представляет собой С1и, Агд, РЬе или Ьуз (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 5 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 5 представляет собой Рго или ТНг (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 6 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 6 представляет собой Ме1, ТНг или Νίβ (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 7 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 7 представляет собой РЬе или Ьеи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 8 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 8 представляет собой Зег, ТЬг, А1а или Мег (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯМ (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 9 представляет собой А1а, <31и или Ьеи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 11 (Э) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении II представляет собой Зег или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 12 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 12 представляет собой А1а, Агд или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 13 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 13 представляет собой Не, Ьеи или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 14 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 14 представляет собой Зег, А1а, Геи или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 15 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 15 представляет собой Туг, 61и или Азр (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 16 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 16 представляет собой С1у или Азр (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайг (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 17 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 17 представляет собой А1а или Ьеи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 18 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 18 представляет собой ТЬг, Не, Уа1, Ьеи или Азп (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 19 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 19 представляет собой Рго, ТЬг или Зег (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 20 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 20 представляет собой Туг, РЬе, Ы1е, Н1з или О1п (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 21 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 21 представляет собой Азр, Азп, Геи или А1а (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 22 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 22 представляет собой Ьеи, Не, Уа1 или Азп (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 23 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 23 представляет собой Азп, Туг, Суз или С1у (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 24 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 24 представляет собой ТНг, Ме1, Не, А1а, Уа1 или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 25 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 25 представляет собой О1у или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 23 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: необязательно Суз в положении 23 образует часть дисульфидной связи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: И . .12 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: необязательно внесён глицинаргининовый «мостик» между Хаа 11 и 12, где η = 1, 2 или 3, а ш независимо от η составляет 0, 1, 2 или 3 (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8ЕО ГО ΝΟ 15:
Хаа1 Хаа2 Не Не Хааг Хаа« Хаа7 Хаав Хаа» Ьеи Хаац [Сг!у]п [Аг§]т
5 10
Хаа(2 Хаа1Э Хаан Хаа15 Хаа1б Хаап Хааи Хаа)» Хаа2о Хаал Хая22 Хаа2з
20
Хяя24 Хаа2з (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 5Е() ГО N0 16:
(1) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ (A) ДЛИНА: 25 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ΐχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ 24 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Суз в положении 24 необязательно образует часть дисульфидной связи (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5Е0 ГО N0 16:
Ьуз РЬе Не Не Рго 1Ч1е РЬе 8ег А1а Ьеи О1у О1у А1а Не 8ег Туг
5 10 15
Азр Ьеи Азп ТЬг ΝΙε Ьеи Азп Суз Не
25 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е<2 ГО N0 17 .
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 28 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (и) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ΐχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 26 (В) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Суз в положении 26 необязательно образует часть дисульфидной связи (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ЗЕО ГО ΝΟ 17:
Ьуз РЬе Не Не Рго Ы1е РЬе 8ет А1а Ьеи Зег О1у Оу Оу А1а Не
10 15
Зег Туг Азр Ьеи Азп ТЬг РЬе Ьеи Азп Суз Не О1у
25 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е() Ю N0 18:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 27 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕЦ ΙϋΝΟ 18:
Аг§ РЬе Не Не Рго Ме РЬе ТЬг А1а Ьеи Зег О1у О1у Агд Агд А1а 15 10 15
Ьеи Ьеи Туг С1у А1а ТЬг Рго Туг А1а Не О1у
25 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Εζ) ГО N0 19:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8ЕЦ ГО N0 19:
Ьуз Не Не Рго Ме РЬе Зег А1а Ьеи О1у О1у О1у Агд Ьеи Ьеи Туг
10 15
С1у А1а ТЬг Рго Туг А1а Не П1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8ЕО ГО ΝΟ 20:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 25 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е0 ГО N0 20:
Агд Не Не Рго Ме РЬе ТЬг А1а Ьеи Зег О1у О1у О1у Агд Ьеи Ьеи 15 10 15
Туг С1у А1а ТЬг Рго Туг А1а Не О1у
25 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е() ГО N0 21:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 44 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: двухцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: димерный пептид (ίϋ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: дисульфидная связь между положением 16 в 8Ε<2 ГО N0 2 и положением 23 в 8Е() Ю N0 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е6 ГО N0 22:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 40 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: двухцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: димерный пептид (ίϋ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: дисульфидная связь между положением 16 в 8Εζ) ГО N0 2 и положением 16 в 5Е() ГО N0 2 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ:
(2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Еф ГО N0 23:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 48 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: двухцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе - (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: димерный пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: дисульфидная связь между положением 23 в 5Ер ГО N0 5 и положением 23 в 8Е() ГО N0 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 5Е() ГО N0 24:
0) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (Э) ТОПОЛОГИЯ, обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 23 (Э) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Суз в положении 23 может образовывать часть дисульфидной связи (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е() 10 N0 24:
Азп Не Рго Не Рго Уа1 01у Азр Не Туг 0!у 01у О1у Азр Не Туг
Ю 15
Ьуз Агд Туг О1п А1а Ьеи Суз Ьеи (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е<> ГО N0 25:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная
ГО) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нетОх) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 23 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Суз в положении 23 необязательно образует часть дисульфидной связи (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е0 Ю N0 25
Тгр Не Не Рго Ме РЬе 5ег А1а Ьеи СИу 01у А1а Не 8ег Туг Азр
10 15
Ьеи Азп ТЬг Νΐε Ьеи Азп Суз Не
Claims (18)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Пептид на основе белка ВИЧ дад р24, включающий по крайней мере девять расположенных подряд аминокислот модифицированной по сравнению с природной аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0 1:Хаа) Хаа2 Хаа3 Хаац Хаа5 Хаа6 А1а Хаа8 Хаа9 С1п ТЬг Рго Тгр Хаа14 Хаа^ Хаа16 Хааг Хаа18 Уа1 Хаа20 (8Е0 ГО N0 1), где Хаа в положении 1 пептидного производного означает Ьуз или Агд;Хаа в положении 2 означает А1а, С1у, 8ег или Агд;Хаа в положении 3 означает Ьеи или Ме1;Хаа в положении 4 означает С1у или Агд;Хаа в положении 5 означает Рго, ТЬг, Уа1, 8ег, С1п или А1а;Хаа в положении 6 означает С1у, А1а, Ьуз, Агд, С1п или С1и;Хаа в положении 8 означает ТЬг или 8ег;Хаа в положении 9 означает Ьеи или 11е;Хаа в положении 14 означает ТЬг, 8ег или Уа1;Хаа в положении 15 означает А1а или 8ег;Хаа в положении 16 означает Суз или 8ег;Хаа в положении 17 означает С1п или Ьеи;Хаа в положении 18 означает С1у, С1и или Агд;Хаа в положении 20 означает С1у или Агд;причем концевые сегменты последовательности могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами, ацетилами или их солями; и два или большее число остатков Суз могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи - 8-(СН2)Р-8- или «мостик» -(СН2)Р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, N или 8.
- 2. Пептид по п.1, имеющий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0 2 или 8Е0 ГО N0 3.
- 3. Пептид на основе белка ВИЧ дад р24, включающий по крайней мере шесть расположенных подряд аминокислот модифицированной по сравнению с природной аминокислотной последовательности 8Е0 ГО Νο 4:Хаа1 Хаа2 Хаа3 Хаа4 Хаа5 С1у Ьеи Азп Рго Ьеи Уа1 [С1у]п Хаа12 Хаа|3 Туг Хаав Рго Хааг ХаЯ18 11е Ьеи Хаа21 Хаа22 (8Е0 ГО N0 4), где Хаа в положении 1 означает Агд, Ьуз, Азр или отсутствует;Хаа в положении 2 означает Тгр, С1у. Ьуз или Агд;Хаа в положении 3 означает 11е, Ьеи, Уа1 или Ме1;Хаа в положении 4 означает 11е, Уа1 или Ьеи;Хаа в положении 5 означает Ьеи, Ме!, Уа1, или Рго;Хаа в положении 12 означает Агд или Ьуз;Хаа в положении 13 означает Ме! или Ьеи;Хаа в положении 15 означает 8ег, Суз или С1п;Хаа в положении 17 означает ТЬг, Уа1, 11е, 8ег или А1а;Хаа в положении 18 означает 8ег, С1у или ТЬг;Хаа в положении 21 означает Азр, С1и, Суз или С1у;Хаа в положении 22 означает С1у или отсутствует ; а п = 0, 1, 2 или 3;причем концевые сегменты последовательности могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами, ацетилами или их солями; и два или большее число остатков Суз могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи - 8-(СН2)Р-8- или «мостик» -(СН2)Р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, N или 8.
- 4. Пептид по п.3, имеющий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0 5, 8Е0 ГО N0 6, 8ЕО ГО N0 7 или 8ЕО ГО N0 8.
- 5. Пептид на основе белка ВИЧ дад р24, включающий по крайней мере шесть расположенных подряд аминокислот модифицированной по сравнению с природной аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N 9:Хаа) Хаа2 Хаа3 Рго 11е Рго Хаа7 Хаа8 Хаа9 Хааю Хаап Хаав [01у]п Хаав Хаа14 Хаав Хаав, Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 Хаа22 Хаа23 Хаа24 (8ЕС) ГО N0 9), где Хаа в положении 1 означает Азп, 8ег, С1у, Н1з, А1а, Рго, Агд или отсутствует;Хаа в положении 2 означает Азп, А1а или Ьуз;Хаа в положении 3 означает Рго, С1п, С1у, 11е или Ьеи;Хаа в положении 7 означает Уа1 или А1а;Хаа в положении 8 означает С1у или Ьуз;Хаа в положении 9 означает С1и, Азр, Ьуз, РЬе или ТЬг;Хаа в положении 10 означает 11е, Ме!, Уа1 или Ьеи;Хаа в положении 11 означает Туг, Ьеи или отсутствует;Хаа в положении 12 означает 8ег или отсутствует;Хаа в положении 13 означает Агд или отсутствует;Хаа в положении 14 означает Агд, Тгр, А1а или отсутствует;Хаа в положении 15 означает 11е или отсутствует;Хаа в положении 16 означает Туг или отсутствует;Хаа в положении 17 означает Ьуз или Агд;Хаа в положении 18 означает Агд, Ьуз или Азр;Хаа в положении 19 означает Тгр или С1у;Хаа в положении 20 означает 11е, Ме!, Уа1, С1п или А1а;Хаа в положении 21 означает 11е, Уа1 или А1а;Хаа в положении 22 означает Ьеи, Ме! или Уа1;Хаа в положении 23 означает С1у или Суз;Хаа в положении 24 означает Ьеи или отсутствует; а п=1, 2 или 3;причем концевые сегменты последовательности могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами, ацетилами или их солями; и два или большее число остатков Суз могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи: -8-(СН2)Р-8- или «мостик» -(СН2)р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, N или 8.
- 6. Пептид по п.5, имеющий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0 10, 8Е0 ГО N0 11, 8ЕО ГО N0 12, 8ЕО ГО N0 13 или 8 ЕС) ГО N0 14.
- 7. Пептид на основе белка ВИЧ дад р24, включающий по крайней мере шесть расположенных подряд аминокислот модифицированной по сравнению с природной аминокислотной последовательности 8Е0 ГО № 15:Хаа1 Хаа2 11е 11е Хаа5 Хаа6 Хаа7 Хаа8 Хаа9 Ьеи Хаац [С1у]п [Агд]т Хаа12 Хаа13 Хаа14 Хаа15 Хаа16 Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 Хаа22 Хаа23 Хаа24 (8ЕС) ГО N0 15), где Хаа в положении 1 означает Рго, Ьуз,Агд или отсутствует;Хаа в положении 2 означает С1и, Агд, РЬе или Ьуз;Хаа в положении 5 означает Рго или ТЬг;Хаа в положении 6 означает МеЧ, ΤΙιγ или Меи;Хаа в положении 7 означает Ρίκ или Ьеи;Хаа в положении 8 означает 8ег, ΤΙιγ. Α1α или МеЧ;Хаа в положении 9 означает Α1α. 61и или Ьеи;Хаа в положении 11 означает 8ег или отсутствует;Хаа в положении 12 означает Л1а, Лгд или отсутствует;Хаа в положении 13 означает Не, Ьеи или отсутствует;Хаа в положении 14 означает 8ег, ΑΠ, Ьеи или отсутствует;Хаа в положении 15 означает Туг, 61и или Αδρ;Хаа в положении 16 означает 61у или Αδρ;Хаа в положении 17 означает Α1η или Ьеи;Хаа в положении 18 означает ΤΙιγ. Не, Уа1, Ьеи или Αδη;Хаа в положении 19 означает Ργο, ΤΙιγ или 8ег;Хаа в положении 20 означает Τυγ. ΡΙκ. Меи. Ηίδ или 61η;Хаа в положении 21 означает Αδρ, Αδη, Ьеи или Α1η;Хаа в положении 22 означает Ьеи, Не, Уа1 или Αδη;Хаа в положении 23 означает Αδη, Τγτ, Суδ или 61у;Хаа в положении 24 означает ΤΙιγ. МеЧ, Не, Α1η. Уа1 или отсутствует;Хаа в положении 25 означает 61у или отсутствует; а η=1, 2 или 3 и т=0, 1, 2 и 3, независимо друг от друга;причем концевые сегменты последовательности могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами, ацетилами или их солями; и два или большее число остатков Суδ могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи -8-(6Η2)Ρ-8- или «мостик» -(СН2)р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, Ν или 8.
- 8. Пептид по п.7, имеющий аминокислотную последовательность 8Е6 ΙΌ ΝΟ 16, 8Е6 ΙΌ ΝΟ 17, 8ЕО ΙΌ ΝΟ 18, 8ЕО ΙΌ ΝΟ 19 или 8ЕО ΙΌ ΝΟ 20.
- 9. ВИЧ-антиген, включающий по крайней мере один пептид по любому из пп.1-8.
- 10. Антиген по п.9, включающий по крайней мере один пептид по п.1, по крайней мере один пептид по п.3, по крайней мере пептид по п.5 и по крайней мере пептид по п.7.
- 11. Вакцинная композиция, включающая антиген по п.9 вместе с фармацевтически приемлемым растворителем и необязательно с адъювантом, носителем и/или наполнителем и необязательно с дополнительным(ми) иммуностимулирующим(ми) соединением(ями).
- 12. Вакцинная композиция по п.11, включающая по крайней мере четыре пептида, причем по крайней мере один пептид выбирают из пептида по п.1, по крайней мере один пептид выбирают из пептида по п.3, по крайней мере один пептид выбирают из пептида по п.5 и по крайней мере один пептид выбирают из пептида по п.7.
- 13. Вакцинная композиция по п.8, включающая пептиды с аминокислотной последовательностью 8Е6 ΙΌ ΝΟ 3 по п.2, с аминокислотной последовательностью 8Е6 ΙΌ ΝΟ 6 по п.4, с аминокислотной последовательностью 8Е6 ΙΌ ΝΟ 11 по п.6 и с аминокислотной последовательностью 8Е6 ΙΌ ΝΟ 18 по п.8.
- 14. Вакцинная композиция по любому из пп.12-13, в которой пептиды растворены в водном физиологическом растворе, а необязательным иммуностимулирующим соединением является фактор роста гранулоцитов/макрофагов.
- 15. Вакцинная композиция по любому из пп.12-14, включающая адъювант, выбираемый из группы монофосфориллипида-А (МРЬ®), полного или неполного адъюванта Фрейнда или гидроксида алюминия.
- 16. Способ определения антител, индуцированных ВИЧ или ВИЧ-специфичными пептидами или белками, в образце жидкостей тела, в котором упомянутый образец подвергают иммуноанализу с использованием антигена по любому из пп.9-10.
- 17. Набор для иммуноанализа с целью определения антител, индуцированных ВИЧ или ВИЧ-специфичными пептидами или белками, в образце жидкостей тела, в котором в качестве диагностического антигена использован антиген по любому из пп.9-10.
- 18. Антитело, способное избирательно взаимодействовать с антигеном по п.9 или 10.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NO19991078A NO311807B1 (no) | 1999-03-04 | 1999-03-04 | HIV-peptider, antigener, vaksinepreparater, immunoassay- testsett og en metode for påvisning av antistoffer fremkalt av HIV |
| PCT/NO2000/000075 WO2000052040A1 (en) | 1999-03-04 | 2000-03-02 | Hiv peptides, antigens, vaccine compositions, immunoassay kit and a method of detecting antibodies induced by hiv |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200100943A1 EA200100943A1 (ru) | 2002-02-28 |
| EA004802B1 true EA004802B1 (ru) | 2004-08-26 |
| EA004802B9 EA004802B9 (ru) | 2015-03-31 |
Family
ID=19903050
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200100943A EA004802B9 (ru) | 1999-03-04 | 2000-03-02 | МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ВИЧ-ПЕПТИДЫ НА ОСНОВЕ БЕЛКА gag p24, АНТИГЕНЫ, ВАКЦИННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, НАБОР ДЛЯ ИММУНОАНАЛИЗА И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИЧ-ИНДУЦИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US6706859B1 (ru) |
| EP (1) | EP1159298B1 (ru) |
| JP (5) | JP2002541069A (ru) |
| CN (4) | CN101328210A (ru) |
| AT (1) | ATE397014T1 (ru) |
| AU (1) | AU771827B2 (ru) |
| BR (1) | BR0008741A (ru) |
| CA (1) | CA2363947C (ru) |
| CY (1) | CY1108299T1 (ru) |
| CZ (1) | CZ300505B6 (ru) |
| DE (1) | DE60039036D1 (ru) |
| DK (1) | DK1159298T3 (ru) |
| EA (1) | EA004802B9 (ru) |
| ES (1) | ES2307496T4 (ru) |
| HK (1) | HK1044778B (ru) |
| HU (1) | HU229282B1 (ru) |
| ID (1) | ID30497A (ru) |
| NO (1) | NO311807B1 (ru) |
| NZ (4) | NZ514619A (ru) |
| PT (1) | PT1159298E (ru) |
| SK (1) | SK287382B6 (ru) |
| WO (1) | WO2000052040A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA200107072B (ru) |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2398816A1 (en) | 2000-02-04 | 2001-08-09 | Duke University | Human immunodeficiency virus vaccine |
| NO314588B1 (no) | 2000-09-04 | 2003-04-14 | Bionor Immuno As | HIV-peptider, antigener, vaksinesammensetning, immunoassay- testsett og en fremgangsmåte for å påvise antistoffer indusert av HIV |
| NO314587B1 (no) * | 2000-09-04 | 2003-04-14 | Bionor Immuno As | HIV regulatoriske- og hjelpepeptider, antigener, vaksinepreparater, immunoassay testsett og en metode for påvisning av antistoffer fremkaltav HIV |
| CA2645342A1 (en) | 2006-03-10 | 2007-09-20 | Peptcell Limited | Peptides of regulatory or accessory proteins of hiv, compositions and the utilization thereof |
| WO2009155489A2 (en) | 2008-06-19 | 2009-12-23 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
| AU2010270722B2 (en) | 2009-07-06 | 2015-06-04 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
| WO2011005772A1 (en) | 2009-07-06 | 2011-01-13 | Variation Biotechnologies, Inc. | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
| ES2625406T3 (es) | 2010-03-25 | 2017-07-19 | Oregon Health & Science University | Glicoproteínas de CMV y vectores recombinantes |
| WO2012006367A2 (en) | 2010-07-06 | 2012-01-12 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
| NZ611176A (en) * | 2010-12-02 | 2015-07-31 | Bionor Immuno As | Peptide scaffold design |
| WO2012097346A1 (en) | 2011-01-13 | 2012-07-19 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating viral infections |
| SI2691530T1 (en) | 2011-06-10 | 2018-08-31 | Oregon Health & Science University | CMV glycoproteins and recombinant vectors |
| US20130189754A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-07-25 | International Aids Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| US9402894B2 (en) | 2011-10-27 | 2016-08-02 | International Aids Vaccine Initiative | Viral particles derived from an enveloped virus |
| EP2802353A4 (en) | 2012-01-12 | 2015-12-02 | Variation Biotechnologies Inc | COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE TREATMENT OF VIRUS INFECTIONS |
| RU2698906C2 (ru) | 2012-01-27 | 2019-09-02 | Вэриэйшн Биотекнолоджиз, Инк. | Способы и композиции для терапевтических агентов |
| WO2013182662A1 (en) * | 2012-06-06 | 2013-12-12 | Bionor Immuno As | Vaccine |
| IN2014KN02769A (ru) * | 2012-06-06 | 2015-05-08 | Bionor Immuno As | |
| EP2679596B1 (en) | 2012-06-27 | 2017-04-12 | International Aids Vaccine Initiative | HIV-1 env glycoprotein variant |
| WO2015007337A1 (en) | 2013-07-19 | 2015-01-22 | Bionor Immuno As | Method for the vaccination against hiv |
| EP3033106A1 (en) * | 2013-08-14 | 2016-06-22 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Immunoadjuvant compositions and uses thereof |
| EP2848937A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-18 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel HIV-1 immunogens |
| US10058604B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-08-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| WO2015086738A2 (en) * | 2013-12-11 | 2015-06-18 | Bionor Immuno As | Hiv vaccine |
| WO2015110665A1 (en) * | 2014-01-27 | 2015-07-30 | Bionor Immuno As | Dosage regimen for hiv vaccine |
| CA2936139A1 (en) | 2014-01-27 | 2015-07-30 | Bionor Immuno As | Method for the vaccination against hiv |
| WO2015110659A1 (en) * | 2014-01-27 | 2015-07-30 | Bionor Immuno As | Methods of immunization with a vaccine inducing a humoral immune response and with a vaccine inducing a cellular immune response |
| EP3708576B1 (en) * | 2014-04-03 | 2023-02-22 | Amgen Inc. | Method for preparing amg 416 |
| WO2016005508A1 (en) | 2014-07-11 | 2016-01-14 | Bionor Immuno As | Method for reducing and/or delaying pathological effects of human immunodeficiency virus i (hiv) or for reducing the risk of developing acquired immunodeficiency syndrome (aids) |
| US10174292B2 (en) | 2015-03-20 | 2019-01-08 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| US9931394B2 (en) | 2015-03-23 | 2018-04-03 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| CA2984991A1 (en) | 2015-05-04 | 2016-11-10 | Bionor Immuno As | Dosage regimen for hiv vaccine |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK3687A (da) | 1986-01-06 | 1987-07-07 | Hoffmann La Roche | Polypeptider og fremgangsmaade til fremstilling deraf |
| US4925784A (en) | 1986-04-04 | 1990-05-15 | Hoffmann-La Roche Inc. | Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein |
| GB8629116D0 (en) | 1986-12-05 | 1987-01-14 | Hoffmann La Roche | Env/gag polypeptides |
| NZ226026A (en) | 1987-09-04 | 1991-03-26 | Wellcome Found | Immunoassay for an antibody using recombinant antigens expressed in two different genera |
| US4888290A (en) * | 1987-11-06 | 1989-12-19 | Coulter Corporation | Monoclonal antibody specific to HIV antigens |
| EP0356007A3 (en) | 1988-07-22 | 1991-07-03 | Medical Research Council | Antigenic determinants |
| KR940000755B1 (ko) * | 1990-02-16 | 1994-01-29 | 유나이티드 바이오메디칼 인코오포레이티드 | Hcv에 대한 항체 검출, hcv 감염의 진단 및 백신으로서의 그 예방에 특히 적합한 합성 펩티드 |
| SE468168B (sv) | 1990-02-20 | 1992-11-16 | Replico Medical Ab | Hiv-1, p24 peptider, diagnostiska antigener och foerfarande foer saerskiljande diagnostik av preliminaert hiv-1 positiva serumprov |
| US5288514A (en) * | 1992-09-14 | 1994-02-22 | The Regents Of The University Of California | Solid phase and combinatorial synthesis of benzodiazepine compounds on a solid support |
| FR2703252B1 (fr) * | 1993-03-31 | 1996-09-06 | Fernand Narbey Torossian | Complexe immunomodulateur anti SIDA. |
| WO1994028871A1 (en) | 1993-06-07 | 1994-12-22 | Endocon, Inc. | Implant stimulated cellular immunity |
| CN1055701C (zh) * | 1993-10-19 | 2000-08-23 | 味之素株式会社 | 能诱导对hiv免疫应答的肽及含有该肽的预防、治疗aids的药物 |
| FR2731013B1 (fr) * | 1995-02-27 | 1997-05-16 | Inst Nat Sante Rech Med | Vih-1 de groupe o, fragments desdits virus, ainsi que leurs applications |
| ES2187947T5 (es) | 1997-03-10 | 2014-01-29 | Roche Diagnostics Gmbh | Procedimiento para la detección simultánea de antígenos de HIV y anticuerpos de HIV |
-
1999
- 1999-03-04 NO NO19991078A patent/NO311807B1/no not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-03-02 AU AU33358/00A patent/AU771827B2/en not_active Ceased
- 2000-03-02 WO PCT/NO2000/000075 patent/WO2000052040A1/en active IP Right Grant
- 2000-03-02 CZ CZ20013195A patent/CZ300505B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 CA CA002363947A patent/CA2363947C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-02 CN CNA2008100921326A patent/CN101328210A/zh active Pending
- 2000-03-02 US US09/674,674 patent/US6706859B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-02 PT PT00911492T patent/PT1159298E/pt unknown
- 2000-03-02 CN CNA2008100921311A patent/CN101328209A/zh active Pending
- 2000-03-02 BR BR0008741-6A patent/BR0008741A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 NZ NZ514619A patent/NZ514619A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 ES ES00911492T patent/ES2307496T4/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-02 CN CNB008057354A patent/CN100387617C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-02 HU HU0200265A patent/HU229282B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 NZ NZ525753A patent/NZ525753A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 EP EP00911492A patent/EP1159298B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-03-02 NZ NZ525751A patent/NZ525751A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 DK DK00911492T patent/DK1159298T3/da active
- 2000-03-02 CN CNA2008100921330A patent/CN101328208A/zh active Pending
- 2000-03-02 ID IDW00200102137A patent/ID30497A/id unknown
- 2000-03-02 JP JP2000602264A patent/JP2002541069A/ja active Pending
- 2000-03-02 SK SK1240-2001A patent/SK287382B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 AT AT00911492T patent/ATE397014T1/de active
- 2000-03-02 NZ NZ525752A patent/NZ525752A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 EA EA200100943A patent/EA004802B9/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-03-02 DE DE60039036T patent/DE60039036D1/de not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-08-27 ZA ZA200107072A patent/ZA200107072B/xx unknown
-
2002
- 2002-08-27 HK HK02106292.0A patent/HK1044778B/zh not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-09-11 US US10/659,324 patent/US7311915B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2007
- 2007-10-01 US US11/865,106 patent/US7709003B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2007-10-01 US US11/865,109 patent/US7709004B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-08-28 CY CY20081100922T patent/CY1108299T1/el unknown
-
2010
- 2010-12-09 JP JP2010275025A patent/JP5313998B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2012
- 2012-10-31 JP JP2012240131A patent/JP5695012B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2012-10-31 JP JP2012239940A patent/JP5695010B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-12-02 JP JP2013249096A patent/JP5814331B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA004802B1 (ru) | МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ВИЧ-ПЕПТИДЫ НА ОСНОВЕ БЕЛКА gag p24, АНТИГЕНЫ, ВАКЦИННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, НАБОР ДЛЯ ИММУНОАНАЛИЗА И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИЧ-ИНДУЦИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ | |
| US7612168B2 (en) | Modified HIV peptides, antigens, compositions, immunoassay kit and a method of detecting antibodies induced by HIV | |
| AU2001282706A1 (en) | HIV peptides from conserved in gag p17 and 924 and their application in E.G. vaccines | |
| US7097971B2 (en) | HIV-1 peptide, antigen, immunogenic composition, diagnostic method and immunoassay kit |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TH4A | Publication of the corrected specification to eurasian patent | ||
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |