EA004802B1 - МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ВИЧ-ПЕПТИДЫ НА ОСНОВЕ БЕЛКА gag p24, АНТИГЕНЫ, ВАКЦИННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, НАБОР ДЛЯ ИММУНОАНАЛИЗА И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИЧ-ИНДУЦИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ - Google Patents

МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ВИЧ-ПЕПТИДЫ НА ОСНОВЕ БЕЛКА gag p24, АНТИГЕНЫ, ВАКЦИННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, НАБОР ДЛЯ ИММУНОАНАЛИЗА И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИЧ-ИНДУЦИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ Download PDF

Info

Publication number
EA004802B1
EA004802B1 EA200100943A EA200100943A EA004802B1 EA 004802 B1 EA004802 B1 EA 004802B1 EA 200100943 A EA200100943 A EA 200100943A EA 200100943 A EA200100943 A EA 200100943A EA 004802 B1 EA004802 B1 EA 004802B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
xaa
haa
peptide
leu
seq
Prior art date
Application number
EA200100943A
Other languages
English (en)
Other versions
EA004802B9 (ru
EA200100943A1 (ru
Inventor
Биргер Сёренсен
Original Assignee
Бионор Иммуно Ас
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Бионор Иммуно Ас filed Critical Бионор Иммуно Ас
Publication of EA200100943A1 publication Critical patent/EA200100943A1/ru
Publication of EA004802B1 publication Critical patent/EA004802B1/ru
Publication of EA004802B9 publication Critical patent/EA004802B9/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12Antivirals
    • A61P31/14Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18Antivirals for RNA viruses for HIV
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12QMEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701Specific hybridization probes
    • C12Q1/702Specific hybridization probes for retroviruses
    • C12Q1/703Viruses associated with AIDS
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511Organic adjuvants
    • A61K2039/55522Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011Details
    • C12N2740/10011Retroviridae
    • C12N2740/16011Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16211Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
    • C12N2740/16222New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Information Retrieval, Db Structures And Fs Structures Therefor (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение раскрывает новые модифицированные пептиды, способные индуцировать специфичный для ВИЧ-1 иммунный ответ без антагонизма в отношении активности цитотоксических T-клеток с целью получения эффективной профилактической и лечебной вакцины против ВИЧ. Пептиды основаны на консервативных участках белков gag ВИЧ p24. Разработаны антигены в свободной форме или присоединённые к носителю, включающие по крайней мере один из упомянутых пептидов, вакцинные композиции, включающие по крайней мере один из антигенов, наборы для иммуноанализа и способ определения антител, индуцированных ВИЧ или ВИЧ-специфичными пептидами, с использованием таких антигенов.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к области генной инженерии и иммунохимии и, в частности, к новым пептидам на основе консервативных участков белка дад ВИЧ р24, антигенам в свободной или связанной р носителем формы, включающим по крайней мере один из упомянутых пептидов, вакцинным композициям, содержащим по крайней мере один из антигенов, наборам для иммуноанализа и способу определения антител, индуцированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ) или ВИЧспецифичными пептидами, с использованием таких антигенов.
Уровень техники
В настоящее время имеется насущная необходимость в борьбе с глобальным эпидемическим распространением ВИЧ-инфекции, а разработка вакцины против ВИЧ является одной из приоритетных задач в исследованиях СПИДа. В целом, вакцины должны активировать антигенсодержащие клетки, преодолевать генетическую ограниченность Т-клеточных ответов и генерировать Т- и В-клетки памяти. Изменчивость вирусной популяции создаёт дополнительные трудности в получении эффективной вакцины против ВИЧ. Поэтому до сих пор не было сообщений о прорывах в предпринимаемых попытках разработать вакцину против ВИЧ. В настоящее время в целом считается, что индукция антиген-специфичного гуморального и клеточного иммунитета является ключевым фактором в разработке эффективной профилактической и лечебной вакцины. Все три основных разветвления иммунной системы, включая нейтрализующие антитела, клетки СЭ8+СТЬ и Тхелперные клетки 1-го типа (ТЫ), должны быть необходимыми звеньями защитного иммунитета в отношении ВИЧ.
Известно, что лимфоциты СТЬ способны уничтожать другие вирусные инфекции (Лба, 1994, 1ттипо1. Се11 Вю1., 72, 447-454) и что СТЬ способны лизировать инфицированные мишени на ранней стадии инфекции, т.е. перед тем, как вирусное потомство может быть образовано с последующим выходом в результате лизиса клеток (Аба е1 а1., цит. выше).
Основное внимание было сосредоточено на выборе антигенов, а также на подборе и оценке различных вспомогательных компонентов. Все антигены, используемые в различных исследованиях ίη νίΐτο и ίη νίνο, начиная от белков из неочищенных экстрактов и вплоть до различных синтетических пептидов, в основном на основе др160 и иногда от р24. Было проведено значительное число исследований в отношении петли У3 в составе белка др120. Была выявлена индукция и В-клеточного, и Т-клеточного ответов: однако, по результатам исследований ίη νίΐτο было сообщено, что пептид из консервативного участка др41 способствует усилению инфекции (8.ЕВе11 е1 а1., 1992, С1ш. Ехр. 1ттипо1., 87 (1), 37-45).
Встречающиеся в нативных условиях последовательности ВИЧ в предполагаемых вакцинах неспособны стимулировать стабильный иммунный ответ из-за присущей вирусам способности «изменяться» за счёт изменения эпитопов клеточной поверхности инфицированных клеток. Это в буквальном смысле обманывает иммунную систему, которая воспринимает конкретную аминокислотную последовательность как свою, хотя на самом деле существенные аминокислоты «спрятаны».
Недавние исследования титров антител против белка дад р24 показали, что медленная прогрессия развития СПИДа связана с высокими титрами, в то время как быстрая прогрессия развития СПИДа связана с низкими титрами. Было показано, что субъекты с низким титром антитела к р24 характеризуются существенно более быстрым развитием СПИДа по сравнению с субъектами, имеющими высокие титры антител к р24 (Ό.Ζ\ν;·ιΠ е1 а1., 1994, У1го1оду, 201, р. 285-293): это указывает на то, что р24 может играть ключевую роль в контроле развития СПИДа.
Новые пептиды р24 ВИЧ описаны в международной патентной заявке XVО 91/13360, в которой пептиды были использованы в способе, дискриминирующем правильно и ложно диагностированными ВИЧ-позитивными образцами сыворотки.
У КРЧоИпкоп е1 а1., 1991, 1оитпа1 ой 1ттипо1оду, Уо1. 147, N 5 (8ер1етЬег 1), рр. 15121521 описан анализ установления точной специфичности дад-специфичных СТЬ-ответов у 3 больных, серопозитивных по ВИЧ-1, где было обнаружено, что дад-специфичные СТЬ-ответы опосредуются лимфоцитами СП3+/СЭ8+, которые ограничены классом I НЬА.
Европейская патентная заявка ЕР А0356007 описывает антигенные детерминанты, в частности, она касается синтетических полипептидных последовательностей, которые родственны белкам, присутствующим в ВИЧ-1, и которые могут быть использованы в качестве основы для потенциальной вакцины против ВИЧ.
У Е.8.ВокепЬетд е1 а1., 1997, 8е1епее, Уо1. 278 (21 NονетЬе^), р. 1447-1450 описано, что специфичные для вируса СЭ4+ Т-хелперные лимфоциты являются ключевыми для поддержания эффективного иммунитета при ряде хронических вирусных инфекций, однако, они не выявляются при хронической инфекции вируса иммунодефицита человека 1-го типа (ВИЧ-1). Специфичные для ВИЧ-1 пролиферативные ответы на р24 характеризуются обратно пропорциональной связью с вирусной нагрузкой. Авторы заключили, что специфичные для ВИЧ-1 хелперные клетки, по-видимому, важны с точки зрения иммунотерапевтического вмешательства и разработки вакцин.
Европейские патентные заявки ЕР 0230222, ЕР 0-270114, германский патент 3711016 и британский патент 2-188639, все от имени Р.НоЕГтапи-Ба Косйе & Со. АкйепдекеПксйай, касаются экспрессии и очистки рекомбинантного белка, кодируемого геном НТБУШ Сад/Επν. или химерных белков. Белки, состоящие из природных последовательностей, могут быть очищены до гомогенного состояния и использованы в качестве основы для диагностических тестов, предназначенных для выявления антител, специфичных в отношении вирусов, связанных со СПИДом. Белок дад/епу также может быть использован в качестве вакцины с целью защиты от СПИДа путём профилактической иммунизации.
С точки зрения диагностики и терапевтического применения основные проблемы использования р24 в качестве элемента тестирования или лечения связаны со значительным числом эпитопов в составе р24, которые стимулируют выработку большого числа антител, обладающих слабой специфичностью, которые в результате повторяющегося бустинга в отношении возможных мутировавших последовательностей могут вызывать появление аутоантител (И.Р.Баке е1 а1., 1994, Аи1оап11Ьоб1е8 1о 1йе а1Га/Ье1а Т-се11 гесерЮгк ш Н1У 1пГесИоп: букгедикШоп апб ш1ш1сгу, Ргос. №111. Асаб. ск И8А, (23), 10849-10853, Νυν. 8). Далее, сообщено, что титр антител к р24 не достигает таких же высоких уровней, что и в отношении оболочечных белков (др120 и др41). В норме антитела к р24 образуются на самой ранней стадии инфекции, однако, титр довольно быстро стабилизируется после начального периода инфекции. Позднее титр р24 постепенно снижается, в то время как в отношении др160 имеется противоположная тенденция. Также данные, полученные в недавних исследованиях, указывают на то, что варианты дад ВИЧ-1 проявляют антагонистическую активность в отношении цитотоксических Т-клеток (Р.К1епегтап е1 а1., 1994, №1иге, 369 (2) (6479), р. 355, 2 Чипе). Это может быть одной из причин того, что обнаруживается быстрая стабилизация титра р24 и позднее начинается его снижение.
Сущность изобретения
Основываясь на описанных выше предпосылках, авторы предприняли исследование возможности создания новых синтетических пептидов, которые способны имитировать эпитоп р24, не проявляя антагонизма в отношении активности цитотоксических Т-клеток, с целью удовлетворения необходимости в эффективной профилактической и лечебной вакцине.
Исходная работа была основана на одном эпитопе, который был опубликован у В.КогЬег е1 а1., 1997, Нитап Ке1гоу1ги8е8 апб А1И8, Ебк. Тйеогейса1 Вю1оду апб Вюрйукюк Сгоир, Бок
А1аток №1бопа1 БаЬога1огу, Бок А1аток, ΝΜ. Аминокислотная последовательность эпитопа (203-222) такова:
КАЮ ΡβΑΤίΕΕΜΜΤ α οαβνο ККМ КТК 51 КО Б 8 58 К К с νκ V
А А
8Е αα
Однобуквенные, равно как и трёхбуквенные аббревиатуры, определяющие аминокислоты в последовательностях, приведённых в настоящей заявке, соответствуют международным стандартам и расшифрованы в руководствах, например, у А.Б.Бейшпдег Рппс1р1е8 оГ Вюсйет18йу, 1982, \Уог1й РиЬйкйегк 1пс., Νον Уогк. Аминокислоты, приведённые ниже основной последовательности, отражают естественную изменчивость этой последовательности. Исходный анализ последовательности, включающей такой модифицированный эпитоп, был проведён на материале следующей последовательности:
ΑΝ Р О С КО I Б К5 БО РСАТБ Е ЕХХТАС О ον 6νη2 ι___________________________________________________________________________________________1 где X означает 2-аминогексановую кислоту, а остатки цистеина имеют окисленный тип, т.е. образуют внутрицепочечный дисульфидный «мостик». Результаты (неопубликованные) исследований с использованием данного пептида, как компонента диагностического набора, показали, что специфичность в отношении заранее отобранной панели Африканских сывороток достигает 87% (п=279). Неожиданно чувствительность составила 100% в отношении панели позитивных по ВИЧ-1 сывороток, включающих сыворотки ВИЧ-1 субтипа О, которые весьма значительно отличаются от других субтипов.
С целью повышения специфичности, т.е. с целью определения аминокислот, которые обусловливают «чистый» ответ по антителам без перекрёстной реактивности, сходный анализ был проведён на материале существенно более короткого и дополнительно модифицированного пептида:
ίίννεΑτεαΕΗχτΑοαενο-ΝΗ, ι___________________________I где X имеет указанное выше значение, а остатки цистеина образуют внутрицепочечный дисульфидный «мостик».
Результаты настоящего исследования показали, что специфичность теста увеличивалась до 96% (п=293), что сходно со специфичностью, выявленной в тесте без использования пептида р24. При специфичности на уровне 87% в тесте, в котором использовали первый пептид, можно было бы предположить, что пептид будет индуцировать иммунный ответ более чем на один эпитоп, поскольку он распознавался неспецифическими антителами, если его использовали в качестве предполагаемой вакцины. Последнее, однако, показывает, что пептидная последовательность вызывает иммунный ответ, который уникален для ВИЧ-1. Следовательно, если осно5 ванная на нём последовательность используется в качестве антигена в предполагаемой вакцине, то наиболее вероятно это вызовет уникальный иммунный ответ в отношении ВИЧ-1.
Для дальнейшего повышения числа Тклеточных эпитопов и снижения вероятности образования способных маскироваться мутантов три дополнительные пептидные последовательности были основаны на следующих трёх последовательностях, состоящих из остатков 264284, 253-271 и 166-186, соответственно, опубликованных в Нитап Ре1гоу|гикек аиб АГО8, 1997; А Сотрбабоп апб Апа1ук1к о£ Иис1е1с Ас1б апб Атшо Ас1б Зециепсек, Ебк. Тйеогебса1 Вю1оду апб Вюрбукюк Сгоир, Ьок А1аток Иабопа1 ЬаЬога!оту, Ьок А1аток:
К I I ί С 1_ N К I νΚΜΥδΡΤ 8 110
ΚθννΜ Μ Κ С V Ο Ε ϋ μ ν ν α ι ο
Α
ΝΝΡΡΙΡνΟΕΙΥΚΚννΐ I ίθί
О А V ΚϋΜΙ ΚΚ6Μ νΜ
С С 8 Ν κ ν ο ν ν Η ΘΤ Α Ρ и
Некоторые модифицированные пептиды были синтезированы с целью определения уникальных последовательностей, которые и специфичны, и чувствительны в отношении ВИЧ-1.
Пептиды в соответствии с настоящим изобретением разработаны на основе четырёх раз личных консервативных участков в составе основного белка р24 ВИЧ-1, который описан выше, и по свойствам уникальны (чувствительность и специфичность) в отношении эпитопа ВИЧ-1. Кроме того, новые пептиды в соответствии с настоящим изобретением не проявляют распознаваемого антагонистического эффекта в отношении цитотоксических Т-лимфоцитов (СТЬ) и должны включать по крайней мере один потенциальный эпитоп для СТЬ.
Пептиды в соответствии с настоящим изобретением, которые удовлетворяют указанным выше критериям, выбирают из следующих групп.
Хаа1 Хаа2 Хаа3 Хаа4 Хаа5 Хаа6 А1а Хаа8 Хаа9 С1п ТНг Рго Тгр Хаа!4 Хаа!5 Хаа!6 Хаа1Хаа18 Уа1 Хаа20 (8ЕО ΙΌ N0 1), где аминокисло ты в полипептиде могут иметь следующие значения:
Хаа в положении 1 пептидного производного представляет собой Ьук или Агд;
Хаа в положении 2 представляет собой А1а, С1у, 8ет или Агд;
Хаа в положении 3 представляет собой Ьеи или Ме1;
Хаа в положении 4 представляет собой С1у или Агд;
Хаа в положении 5 представляет собой Рго, ТНг, Уа1, 8ет, С1п или А1а;
Хаа в положении 6 представляет собой С1у, А1а, Ьук, Агд, С1п или С1и;
Хаа в положении 8 представляет собой ТНг или 8ет;
Хаа в положении 9 представляет собой Ьеи или Не;
Хаа в положении ТНг, 8ет или Уа1;
Хаа в положении А1а или 8ет;
Хаа в положении
Сук или 8ет;
Хаа в положении
С1п или Ьеи;
Хаа в положении
С1у, С1и или Агд;
Хаа в положении
С1у или Агд;
причём пептид включает по крайней мере представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой девять расположенных подряд аминокислот из состава последовательности 8Е0 ΙΌ N0 1.
Хаа1 Хаа2 Хаа3 Хаа4 Хаа5 С1у Ьеи Акп Рго Ьеи Уа1 [С1у]п Хаа12 Хаа13 Туг Хаа15 Рго Хаа1Хаа18 11е Ьеи Хаа21 Хаа22 (8Е0 ΙΌ N0 4), где аминокислоты в полипептиде имеют следующие значения:
Хаа в положении 1 представляет собой Агд, Ьук, Акр или отсутствует;
Хаа в положении 2 представляет собой Тгр, С1у, Ьук или Агд;
Хаа в положении 3 представляет собой Не, Ьеи, Уа1 или Ме1;
Хаа в положении 4 представляет собой Не, Уа1 или Ьеи;
Хаа в положении 5 представляет собой Ьеи, Ме1, Уа1 или Рго;
Хаа в положении 12 представляет собой Агд или Ьук;
Хаа в положении 13 представляет собой Ме! или Ьеи;
Хаа в положении 15 представляет собой 8ет, Сук или С1п;
Хаа в положении 17 представляет собой ТНг, Уа1, Не, 8ет или А1а;
Хаа в положении 18 представляет собой 8ет, С1у или ТНг;
Хаа в положении 21 представляет собой Акр, С1и, Сук или С1у;
Хаа в положении 22 представляет С1у или отсутствует;
где последовательность 8Е0 ΙΌ N0 4 состоит по крайней мере из шести расположенных подряд аминокислот, а п = 0, 1, 2 или 3.
Хаа1 Хаа2 Хаа3 Рго Не Рго Хаа7 Хаа8 Хаа9
Хааю Хаап Хаа^2 [С1у]п Хаа13 Хаа 14 Хаа85 Хаа 16
Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 Хаа22 Хаа23 Хаа24
Ί (8ЕО ΙΌ N0 9),где Хаа в положении 1 представляет собой Аки, 8сг, 61у, Ηίδ. А1а, Рго, Агд или отсутствует;
Хаа в положении 2 представляет собой Акп, А1а или Ьуз;
Хаа в положении 3 представляет собой Рго, 61п, 61у, 11е или Ьеи;
Хаа в положении 7 представляет собой Уа1 или А1а;
Хаа в положении 8 представляет собой С1у или Ьуз;
Хаа в положении 9 представляет собой 61и, Акр, Ьуз, Рйе или ΤΙιγ;
Хаа в положении 10 представляет собой 11е, Ме!, Уа1 или Ьеи;
Хаа в положении 11 представляет собой Туг, Ьеи или отсутствует;
Хаа в положении 12 представляет собой 8ег или отсутствует;
Хаа в положении 13 представляет собой Агд или отсутствует;
Хаа в положении 14 представляет собой Азр, Агд, Тгр, А1а или отсутствует;
Хаа в положении 15 представляет собой 11е или отсутствует;
Хаа в положении 16 Туг или отсутствует;
Хаа в положении 17 Ьуз или Агд;
Хаа в положении 18 Агд, Ьуз или Азр;
Хаа в положении 19 Тгр или 61у;
Хаа в положении 20 11е, Ме!, Уа1, 61п или А1а;
представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой
Хаа в положении 11е, Уа1 или А1а;
Хаа в положении Ьеи, Ме! или Уа1;
Хаа в положении 61у или Суз;
Хаа в положении Ьеи или отсутствует;
представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой где последовательность 8Е0 ГО N0 9 состоит по крайней мере из шести расположенных подряд аминокислот, а п = 1, 2 или 3.
Хаа1 Хаа2 11е 11е Хаа5 Хаа6 Хаа7 Хаа8 Хаа9
Ьеи Хаац [С1у]п [Агд]т Хаа,2 Хаа!3 Хаа!4 Хаа,5 Хаа16 Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 Хаа22 Хаа23
Хаа24 Хаа25 (8Е0 ГО N0 15), где Хаа в положении 1 представляет собой Рго, Ьуз, Агд или от сутствует;
Хаа в положении 2 представляет собой 61и, Агд, Рйе или Ьуз;
Хаа в положении 5 представляет собой Рго или Т1п;
Хаа в положении 6 представляет собой Ме!, ΤΙιγ или Меи;
Хаа в положении 7 представляет собой Рйе или Ьеи;
Хаа в положении 8 представляет собой 8ег, Тйт, А1а или Ме!;
представляет представляет представляет собой собой собой представляет собой представляет собой представляет собой собой собой собой представляет представляет представляет
Хаа в положении А1а, 61ц или Ьеи;
Хаа в положении 8ег или отсутствует;
Хаа в положении
А1а, Агд или отсутствует;
Хаа в положении 13 11е, Ьеи или отсутствует;
Хаа в положении 14
8ег, А1а, Ьеи или отсутствует;
Хаа в положении Туг, 61и или Азр;
Хаа в положении 61у или Азр;
Хаа в положении А1а или Ьеи;
Хаа в положении
Тйт, 11е, Уа1, Ьеи или Азп;
Хаа в положении 19
Рго, ΤΙιγ или 8ег;
Хаа в положении 20
Туг, Рйе, №еи, Н1з или 61п;
Хаа в положении
Азр, Азп, Ьеи или А1а;
Хаа в положении
Ьеи, 11е, Уа1 или Азп;
Хаа в положении
Азп, Туг, Суз или 61у;
Хаа в положении представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой представляет собой собой собой представляет
ТНг, Ме!, 11е, А1а, Уа1 или отсутствует;
Хаа в положении 25 представляет
С1у или отсутствует;
где последовательность 8Е0 ГО N0 15 состоит по крайней мере из шести расположенных подряд аминокислот, а п = 1, 2 или 3 и т = 0, 1, 2 или 3;
концевые сегменты последовательностей могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами, ацетилами или их солями;
два или большее число остатков Суз могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи: -8-(СН2)р-8- или «мостик» -(СН2)р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, N или 8, и/или упомянутые пептидные последовательности иммобилизованы на твёрдую подложку.
Новые пептидные последовательности можно использовать в качестве эффективного антигена при том, что антиген включает по крайней мере один пептид, выбранный из группы последовательностей 8Е0 ГО N0 1, 8Е0 ГО N0 4, 8 ЕС) ГО N0 9 или 8 ЕС) ГО N0 15. Антигенность может быть адаптирована путём кор личных пептидов или длины пептидов, например, за счёт димеризации или полимеризации, и/или иммобилизации на твёрдую фазу. Антиген включает две или большее число полипептидных последовательностей по настоящему изобретению, которые либо соединены «мостиректировки отношения или концентрации раз9 ком», например, дисульфидным «мостиком» между остатками Сук в составе полипептидов, либо такими «мостиками», как С1-С8-алкилен, возможно прерываемый одним или несколькими гетероатомами типа О, 8 или Ν, либо предпочтительно они не связаны между собой. Полипептиды могут быть иммобилизованы на твёрдую фазу в мономерной, димерной или олигомерной формах. Кроме того, аминокислоты могут быть добавлены к концам с целью получения «плеч», облегчающих иммобилизацию.
Все аминокислоты в составе пептидов по настоящему изобретению могут находиться и в Ό-, и в Ь-форме, хотя предпочтительными являются природные Ь-аминокислоты.
С- и Ν-концевые участки пептидных последовательностей могут отклоняться от природных последовательностей в результате модификации концевых NΗ2-группы и/или СООНгруппы: они могут быть, например, ацилированы, ацетилированы, амидированы или модифицированы так, чтобы образовать сайт связывания с носителем или иной молекулой.
Пептиды в соответствии с настоящим изобретением состоят из 6-50 аминокислот, предпочтительно из 10-30 аминокислот. Они охватывают любую известную природную аминокислотную изменчивость в идентифицированных положениях.
Полипептидный антиген по настоящему изобретению находится либо в свободной форме, либо связан с носителем. Носитель или твёрдая фаза, с которой пептид необязательно связан, могут быть выбраны из широкого круга известных носителей. Его следует выбирать с учётом предполагаемого применения иммобилизованного полипептида в качестве диагностического антигена или в качестве иммунизующего компонента вакцины.
Примерами носителей, которые можно использовать, например, для целей диагностики, являются магнитные шарики или латекс из сополимеров, таких как стирендивинилбензол, гидроксилированный стирендивинилбензол, полистирен, карбоксилированный полистирен, шарики из углеродной сажи, неактивированное или активированное полистиреном или поливинлхлоридом стекло, активированное эпоксидами пористое магнитное стекло, желатиновые или полисахаридные частицы или иные белковые частицы, клетки красной крови, моно- или поликлональные антитела или ЕаЬ-фрагменты таких антител.
В соответствии со следующим вариантом настоящего изобретения антигены могут образовывать составную часть вакцины, возможно объединённую с носителями, адъювантами или объединённую с другими иммуностимулирующими компонентами, такими как вирус канареечной оспы, имеющей ген еиу. Примерами носителей и/или адъювантов, применяемых в вакцинах, является другие белки, такие как бычий или человеческий сывороточный альбумин и гемоцианин слизня. Иммуностимулирующие средства можно разделить на три группы: адъюванты, носители для антигенов и наполнители. Примерами адъювантов являются гидроксид алюминия, соли алюминия, сапонин, мурамильные ди- и трипептиды, монофосфориллипид-А, В.рейикДк и различные цитокины, включая цитокины 1Ь-12 и 1Ь-1 лимфоцитов ТЫ. Ряд белковых токсинов можно использовать для перемещения белков-«пассажиров» через клеточные мембраны в цитоплазму, которые применимы для создания СТЬ-направленных вакцин. Носителями являются бактериальные токроиды, такие как инактивированные столбнячные и холерные токсины, генетически детоксицированные бактериальные токсины, такие как термолабильный энтератоксин Ε.οοίί. жирные кислоты, живые векторы, такие как полиохимеры и химерные белки, которые образуют частицы, например, химерные частицы дрожжевого ретротранспозона ΤΥ и частицы НВсАд. Наполнители, которые обычно используют в качестве компонентов современных вакцин, представлены эмульсией минеральных масел, полным и неполным адьювантом Фройнда, эмульсиями растительных масел, поверхностно-активными неионогенными блокирующими сополимерами, скваленом или скваланом, липосомами и биологически разрушаемыми микросферами. Двумя новыми адъювантами, которые обладают существенным потенциалом по созданию новых вакцин, являются микроэмульсия «масло-в-воде» (МЕ59) и полимерные микрочастицы. Может быть использовано любое вещество, которое способно усиливать иммуногенность антигена, а некоторые дополнительные альтернативы носителей или адъювантов приведены в американской или европейской фармакопеях.
Подходящий препарат антигена, предназначенный для использования в качестве иммуностимулятора, также может содержать интерфероны, такие как γ-интерферон, антивирусные хемокины или факторы роста кроветворной ткани, такие как фактор роста гранулоцитов/макрофагов.
Другим подходом к усилению стимуляции и поглощения, например, в кишечнике, является введение пептидов по настоящему изобретению вместе с небольшими пептидами, такими как ди-, три- или тетрапептиды. Такие пептиды могут быть введены дополнительно или в сочетании с пептидами по настоящему изобретению. Предпочтительно пептиды вводят вместе с трипептидом ΥΟΟ, состоящим из аминокислот в Όили Ь-форме, предпочтительно в Ό-форме.
Современными подходами к непарентеральной доставке вакцин, например, через слизистые, являются технология химеризации генов, нацеленная на создание нетоксичных производных адъювантов для слизистых, генетически инактивированных антигенов, несущих де11 леции в ключевом гене, совместная экспрессия антигена и специфического цитокина, который является ключевым в модуляции и контроле иммунного ответа слизистых, и сам генетический материал, который обеспечивает поглощение ДНК или РНК и их эндогенную экспрессию в клетках-хозяевах.
Один из подходов к выработке длительных ответов, для которых необходим механизм клеточного иммунитета, связан с вакцинацией плазмидной ДНК, которая кодирует один или несколько специфичных антигенов.
С целью защиты против ВИЧ-инфекции вакцины должны индуцировать и иммунные ответы в слизистых, и системные иммунные ответы, и они могут быть введены по любому стандартному пути, например, парентерально или непарентерально, например подкожно, внутрикожно, внутривенно, внутримышечно, перорально, в слизистую или через нос.
В предпочтительном варианте вакцины по настоящему изобретению она содержит антигены, включающие пептиды 8ЕО ΙΌ N0 1, 4, 9 и 15, более предпочтительно эти пептиды включены в соотношении 1:1:1:1.
В следующем предпочтительном варианте вакцинная композиция содержит антигены
КА Ь О Р ААТ Ь О Т Р да Т А 8 Ь С V О - ΝΗ2 (8Е(2 ГО ΝΟ 3),
К да I. Ь ЕС. Ь N Р ί V 000 КЬ Υ8 РТ81Е С - ΝΗ2 <СЕО |Е> N0 6), К А 1 Р I Р А С Т Ь I. 3 С С С К А I ΥΚΚΤ ΑΙ Ь С - ΝΗ2 (8Ε01ϋΝΟ 11) И
К Р 11 Р N1 Р Т А Ь 8 О С К К А Ь Ь Υ О А Т Р Υ А I О - ЫН2 (5ЕЦ Ю N0 18).
Одна из последовательностей включает Вклеточный эпитоп и должна активировать систему гуморальных ответов, в то время как другие последовательности привносят СТЬэпитопы, а аминокислотные замены, внесённые в рамку СТЬ-эпитопа, сформированы таким образом, чтобы обеспечить усиленное связывание. Другие аминокислотные замены были произведены с целью облегчения синтеза пептида и/или повышения растворимости пептида.
Способ определения в образце жидкостей тела антител, индуцированных ВИЧ-1 или специфичными для ВИЧ-1 пептидами или белками, с использованием заявляемых антигенов является следующим вариантом изобретения. Также настоящим изобретением охватывается набор для иммунологического тестирования, сформированный с целью указанной детекции, а также антитела, способные избирательно взаимодействовать с упомянутыми антигенами.
Получение пептидов
Пептиды по настоящему изобретению могут быть получены с помощью любого известного метода получения линейной аминокислотной последовательности, такого как методы рекомбинантных ДНК. Последовательность нуклеиновой кислоты, которая кодирует пептид по настоящему изобретению или мультимер упомянутых пептидов, вносят в состав экспрессирующего вектора. Подходящими экспресси рующими векторами являются, например, плазмиды, космиды, вирусы и УАС (искусственные дрожжевые хромосомы), которые включают необходимые регуляторные элементы, обеспечивающие репликацию и экспрессию. В клеткехозяине экспрессирующий вектор может быть простимулирован к экспрессу. Подходящими клетками-хозяевами являются, например, бактерии, дрожжевые клетки и клетки млекопитающих. Такие методы хорошо известны в данной области техники и описаны, например, у 8ашЬтоок е! а1., 1989, Мо1еси1аг Сопшд: А ЬаЬота!огу Мапиа1, Со 16 8рппд НагЬог ЬаЬогаЮгу Ргезз, Со1б 8ртшд НагЬог. Другими хорошо известными методами являются разделение на фрагменты или синтез путём сочетания одного аминокислотного остатка со следующим в жидкой фазе или, что предпочтительно, на твёрдой фазе (на полимере), например, с помощью так называемого синтеза по Мэррифилду: см., например, Вагапу & МетДеЮ, Ιη РерНбез: Апа1у818, 8уп!йез1з, ВюЮду, Уо1. 2, е6з. Е.Отозз & МеЮоГег *Аса6еш1с Ргезз, ΝΥ, 1980); Кпе1ЬСотошет & Ми11еп, 1987, 1п!. I. Рерббе Рто!еш Вез., 30, р. 705-739 и Ие16з & №Ь1е, 1990, 1п!. I. Рерббе Рто!еш Вез., 35, р. 161-214.
Если желательным является соединенный или циклический пептид, то аминокислотную последовательность подвергают реакции химического окисления с целью циклизации или соединения двух остатков цистеина в пределах одного полипептида или между двумя пептидыми последовательностями после того, как синтезированы подходящие линейные аминокислотные последовательности: см. Акар е! а1., 1992, Те1гайе6гоп ЬеИег, 33, 8, р. 1073-1076.
Синтез пептидов
Все пептидные производные, полученные в примерах, приведённых далее, были синтезированы с помощью пептидного синтезатора М1Шдеп-9050 с использованием стандартной программы. Использованным полимером являлся Теп!а Ое1 Р ВАМ с теоретической величиной загрузки 0,20 шец/г (ВАРР Р0^ΥМЕВЕ ОшЬН, ТиЬшдеп). Конечный продукт синтеза высушивали в вакууме в течение ночи. Затем пептид отщепляли от полимера обработкой 90%-ной трифторуксусной кислотой в присутствие этандитиола (5%) и воды (5%) (1,5 ч при комнатной температуре). Затем полимер отфильтровывали и промывали на фильтре дополнительно трифторуксусной кислотой (100%) (2 раза по 20 мл). Объединённые фильтраты упаривали в вакууме (водяная баня при комнатной температуре), и остаток растирали в этиловом эфире и отфильтровывали осаждённый продукт. Твёрдое вещество быстро растворяли на фильтре ледяной уксусной кислотой (100 мл) и добавляли к 1,5 л 20%-ной уксусной кислоты в метаноле и обрабатывали 0,1 М раствором иода в метаноле до установления бледно-коричневой окраски. Затем добавляли ионный обменник Ьотеех 1x8 в ацетатной форме (15 г) (Βίο-Кай, Кюйтопй, СА), и смесь отфильтровывали. Фильтрат выпаривали, и остаток лиофилизовали из уксусной кислоты. Затем продукт очищали методом жидкостной хроматографии с обращенной фазой на колонке, заполненной Ктотакй® 100-5 С8 (ЕКА Νοόοΐ. 8ит!е, Швеция) в подходящей системе, содержащей водный раствор ацетонитрила с 0,1% трифторуксусной кислоты. Образцы, собранные с колонки, анализировали методом аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) (Весктап 8ук1ет (Со1й, США), оборудованной колонкой КготаШ® 1005 С8 (ЕКА №Ье1, 8ийе, Швеция). Фракции, содержащие чистое вещество, объединяли, растворитель выпаривали, и продукт лиофилизовали из уксусной кислоты. В отношении конечного продукта проводили окончательный ВЭЖХанализ, и структуру пептида подтверждали путём аминокислотного анализа и массспектроскопии (АКА-МС).
Все аминокислоты, использованный в ходе синтеза, являлись Ь-аминокислотами, защищенными флуоренилметоксикарбонильной группой по α-аминогруппе. Боковые цепи были защищены следующим образом:
Су8(Тй), С1п(Тй), О1и(О1Вц), Тйт(1Ви).
Тй - трифенилметил,
1-Вц - трет-бутил,
О1Вц - трет-бутиловый сложный эфир.
Аминокислотные производные были приобретены у Васйет АО, Швейцария.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Пример 1. Получение КАБСРСАТБОТРУ ТАСОСУС - ΝΗ2 (8ЕО ΙΌ ΝΟ 2).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - 87%.
Пример 2. Получение КАБСРААТБОТР УТА8ЬСУС (8ЕО ΙΌ ΝΟ 3).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - более 95%.
Молекулярная масса (свободное основание) - 1966.
Молекулярная формула - С88Н144О2^26.
Пример 3. Получение \ЛРСЬ№ЬУСССК ЬУЗРТЗШСб- ΝΗ2 (8ЕО ΙΌ ΝΟ 5).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - 95%.
Масс-спектральный анализ: теоретическая молекулярная масса - 2454,9.
Экспериментальная молекулярная масса 2454,8 Е8+.
Пример 4. Получение К\\БББСБ№БУС СЮКЬУЗРТЗШС (8ЕО ΙΌ ΝΟ 6).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - более 95%.
Молекулярная масса (свободное основание) - 2552.
Молекулярная формула - ^ι9Ηι95Ο29Ν33.
Пример 5. Получение К1ББСБ№БУ СССКБУ8РТ8!БС (8ЕО ΙΌ ΝΟ 7), КЕЕЕСЕМРЕУСССКЬУЗРТП ЬС (8ЕО ΙΌ ΝΟ 8) и ΜΕΙΕνΟυΙΥΟΟΟυΙΥΚΚΑ ОАБСБ (8ЕО ΙΌ ΝΟ 24).
Пептиды были синтезированы в форме амидов из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХанализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
Пример 6. Получение КМРШУСРГУС СС^IΥККУ^А ЬСЬ (8ЕО ΙΌ ΝΟ 10).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - 85%.
Масс-спектральный анализ: теоретическая молекулярная масса - 2817,3.
Экспериментальная молекулярная масса 2813,7 Е8+.
Пример 7. Получение КАФФАСТББЗСС СКАРУККУА! ЬС (8ЕО ΙΌ ΝΟ 11).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - более 95%.
Молекулярная масса (свободное основание) - 2707.
Молекулярная формула - ^25Π208Ο29Ν38.
Пример 8. Получение АБРФАСБУСССКРУККУрАБС (8ЕО ΙΌ ΝΟ 12),
КIРIРУСΕIСССУIΥККУАI ЬС (8ЕО ΙΌ ΝΟ13) и КIРIРУСТ^^8СССКIΥКК \\'АП.С1 (8ЕО ΙΌ
ΝΟ 14).
Пептиды были синтезированы в форме амидов из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХанализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
Пример 9. Получение ΚΕΙΙΡΝ1Ε8ΑΕ6 ΟΑΙδΎΏΕΝΤΝΙΕΝΟΙ (8ЕО ΙΌ ΝΟ 16).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Ν1 в последовательности представляет норлейцин. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - более 80%.
Масс-спектральный анализ: теоретическая молекулярная масса - 2783,3.
Экспериментальная молекулярная масса 2783,3 Е8+.
Пример 10. Получение ΚΕΙΙΡΝ1Ε8ΑΕ8Ο 6ΟΑΙ8ΥΌΕΝΤΕΕΝ СЮ (8ЕО ΙΌ ΝΟ 17).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Ν1 в последовательности представляет норлейцин. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - более 80%.
Масс-спектральный анализ: теоретическая молекулярная масса - 2932,4.
Экспериментальная молекулярная масса 2931,8 Е8+.
Пример 11. Получение ΡΕΙΙΡΝ1ΕΤΑΕ80 ΟΗΗΑΕΕΥΟΑΤΡΥ ΑΙΟ (8ЕО ΙΌ ΝΟ 18).
Пептид был синтезирован в форме амида из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Ν1 в последовательности представляет норлейцин. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
ВЭЖХ-чистота - более 95%.
Молекулярная масса (свободное основание) - 2894.
Молекулярная формула - ^37Η217Ο32Ν37.
Пример 12. Получение ΚΙΙΡΝ1Ε8ΑΕΟΟ ΟΡΕΤΥΟΛΤΡΥΑΙΟ (8 ЕС) ΙΌ ΝΟ 19), ΡΙΙΡΝ1ΕΤΑΕ8666ΡΕΕΥ6Α-ΤΡΥΑΙ6 (8 ЕС) ΙΌ ΝΟ 20) и νΙΙΡΝ1Ε8ΑΕ66Α8ΥΏΕΝΤΝ1ΕΝα (8ЕО ΙΌ ΝΟ 25).
Пептиды были синтезированы в форме амидов из соответствующих исходных материалов в соответствии с базовым описанием синтеза. Чистоту определяли с помощью ВЭЖХанализа, а структуру подтверждали путём аминокислотного анализа и масс-спектроскопии (АКА-МС).
Пример 13. Димеризация с помощью дисульфидного «мостика».
Пептидные последовательности примеров и 3 соединяли на стадии окисления с образованием дипептида, в котором остатки цистеина образовывали дисульфидную связь. Этот «мостик» образовывался по одному из путей:
(Α) Окисление иодом. Равные количества пептидов растворяли в уксусной кислоте/метаноле (1:4) и добавляли 0,1 М Ι2 в метаноле, получая смесь димера, или (В) Окисление с помощью [Суз(8ру)16]8 ЕС) ΙΌ ΝΟ 2. 2,3 мМ пептида 8 ЕС) ΙΌ ΝΟ 2, растворённого в 2 М АсОН (водном) и 2пропаноле (1:1), обрабатывали 2,2-дитиопиридином (3 экв.) с получением |Су5(8ру)|6|-8ЕО ΙΌ ΝΟ 2. Равные количества |Су5(8ру)16|-8ЕО ΙΌ ΝΟ 2 и пептида 8ЕО ΙΌ ΝΟ; 5 растворяли в 10 мМ ΝΗ4Οαο (водный, рН=6,5) и метаноле (5:2) с получением димера 8ЕО ΙΌ ΝΟ 21.
Чистоту пептида определяли с помощью ВЭЖХ-анализа, и структуру пептида подтверждали с помощью аминокислотного анализа. Содержание пептида (свободное основание аминокислоты) составило 80%.
ВЭЖХ-чистота - 92%.
Пример 14.
Готовили вакцину, содержащую пептиды 8ЕО ΙΌ ΝΟ 3, 6, 11 и 18. Лиофилизованные пептиды растворяли в стерильной воде до конечной концентрации 4 мг/мл. Конечная концентрация соли составила 0,9%. Также включали препарат колоние-стимулирующего фактора гранулоцитов/макрофагов (ОМ-С8Е) в соответствии с руководством производителя по применению до конечной концентрации 0,3 мг/мл. Два раствора вводили внутрикожно. Типичная доза инъекции составляет 100 мкл.
Пример 15.
Раствор или суспензию антигена смешивали в равных долях с полным или неполным адъювантом Фройнда (Вейгшд) и затем окончательно эмульгировали путём втягивания (всасывания) и сильно сдавливали с помощью инъекционного шприца или гомогенизатора. Эмульсия должна оставаться стабильной на протяжении по крайней мере 30 мин. Эмульсии антигена/адъюванта лучше всего инъецировать подкожно в форме депо.
Пример 16. Данные по токсичности.
Дипептид примера 13 разводили в 0,9%ном растворе до концентрации тест-раствора 0,4 мг/мл. Пептид вводили с помощью инъекции самкам мышей линии ΝΜΕΙ дозой 100 мкг на 1 кг массы тела. Не было выявлено проявлений токсичности, поэтому пептид рассматривался как нетоксичный.
Анализ токсичности проводили на мышах и крысах на материале пептидной композиции вакцины примера 14. Мыши были выбраны для анализа с целью получения сравнительных данных по второму из наиболее часто используемых видов грызунов. Анализируемая субстанция представляла собой смесь четырёх пептидов, внесённую в одну ампулу, содержащую лиофилизованный материал для разведения физиологическим раствором, а величины доз выражали количеством общей белковой нагрузки. Отдельные пептиды присутствовали в соотношении 1:1:1:1, что давало дозу каждого пептида 0,0075 мг на 1 кг массы тела, 0,075 мг на 1 кг массы тела и 0,75 мг на 1 кг массы тела, что вплоть до 500 раз превышает предполагаемую дозу для человека. Анализируемых животных разделили на четыре группы по 10 особей в каждой (по пять самцов и пять самок): контрольную группу (только физиологический раствор) и группы с низкой, средней и высокой дозами. Анализируемую композицию вводили однократно путём внутривенной инфузии в хвостовую вену при скорости дозы 3 мл/мин. Животных умерщвляли на 15-й и 16-й дни путём внутрибрюшинной инъекции пентобарбитона натрия.
Результаты проведённых исследований показали, что величины доз, введённых мышам и крысам, не вызывают нежелательных реакций, и не было какого-либо эффекта при избыточной дозе 3 мг/кг.
Пример 17. Иммуноанализ для определения антител, индуцированных ВИЧ-1.
Магнитные частицы готовили в соответствии с рекомендациями производителя. Использовали шарики ЭупаЬсаШ (Эупа1 А8). Магнитные частицы, покрытые лигандом, называли реагентом-1. Пептид по настоящему изобретению ковалентно присоединяли к предварительно активированной поверхности магнитных частиц. Также возможной является физическая адсорбция пептида на поверхности магнитных частиц. Концентрация частиц реагента-1 составляла от 1 мг/мл до 15 мг/мл. Размер частиц составлял от 0,2 мкм до 15 мкм. Концентрация пептидов составляла от 0,01 мг/мг частиц до 1 мг/мг частиц.
Антитела против иммуноглобулинов человека, конъюгированные с щелочной фосфатазой (ЩФ), готовили в соответствии с рекомендациями Эако А8. Это стандартный метод в данной области. Данный реагент называли реагентом-2.
Раствор субстрата фенолфталеинмонофосфата готовили в соответствии с рекомендациями Р1ика АС. Это стандартный метод для данной области процедурой. Раствор субстрата называли реагентом-3.
Для промывки и инкубации использовали стандартный 0,05 М Трис-НС1 буфер со следующими дополнительными компонентами: Твин-20 (0,01-0,1%), глицерин (0,1-10%) и хлорид натрия (0,2-0,1%).
Процедура анализа включает стадию инкубации, на которой в каждой лунке 1 каплю реагента-1 смешивают с 2 каплями промывочного буфера. После смешивания добавляют 30 мкл образца, и полученный раствор инкубируют в течение 5 мин.
Магнитные шарики могут быть собраны с помощью магнита с удалением жидкости до снятия магнита. Затем лунки дважды промывают 4 каплями промывочного раствора с последующей инкубацией с реагентом-2. Одну каплю реагента-2 добавляют к 2 каплям промывочного буфера, и раствор инкубируют в течение 5 мин. Магнитные частицы могут быть собраны магнитом с удалением жидкости до снятия магнита. Затем стадию промывки повторяют с последующей инкубацией с реагентом-3. По 2 капли реагента-3 добавляют в каждую лунку, и раствор инкубируют в течение 3 мин. Полученные результаты просчитывают относительно белого фона. Положительные результаты представляют собой красную окраску (3+ = интенсивный красный цвет), в то время как негативные результаты представлены отчётливо светложелтыми/бурыми растворами, как это получено в негативном контроле.
Иммунологический набор может быть использован для выявления антител, индуцированных либо вирусом ВИЧ, либо ВИЧспецифичными пептидами или белками, например, пептидами по настоящему изобретению.
Приведённые выше примеры служат исключительно для иллюстрирования настоящего изобретения. Специалисту в данной области техники должно быть понятно, что он может модифицировать пептиды, антигены и вакцины, описанные здесь, без отклонения от сути и объёма настоящего изобретения в соответствии с указанным в формуле изобретения.
Полипептиды по настоящему изобретению могут быть использованы в сочетании по крайней мере с одним пептидом, выбранным из каждой группы последовательностей: 8ЕС ΙΌ N0 1, 8ЕС Ш N0 4, 8ЕС Ш N0 9 и 8ЕС ΙΌ N0 15, - с образованием антигенов и получением активных компонентов профилактической или лечебной вакцины, предназначенной для создания защиты против вируса иммунодефицита человека 1-го типа (ВИЧ1). Вакцина может содержать соединения, обладающие положительными свойствами по защите или стимуляции иммунной системы реципиента (человека или позвоночного животного), например, интерлейкины, интерфероны, факторы роста гранулоцитов/макрофагов, факторы роста кроветворной ткани или подобное. Предпочтительно вакцинная композиция дополнительно содержит адъювант или наполнитель, более предпочтительно адъювантом или наполнителем является монофосфориллипид-А (МРЬ®), возможно вместе с квасцами, адъювантом Фройнда (полным или неполным) или гидроксидом алюминия. Оптимальное количество адъюванта/наполнителя будет диктоваться выбранным его типом (типами).
Пептид или вакцинный препарат могут быть лиофилизованы для хранения. Вакцину можно предпочтительно хранить при низкой температуре в ампулах, содержащих одну или несколько стандартных доз, готовых к применению. Типичная стандартная доза пептида по настоящему изобретению находится в диапазоне концентраций от 1 мкг до 1 мг на 1 кг массы тела, предпочтительно от 2 мкг до 0,15 мг на 1 кг массы тела. Специалисту в данной области техники должно быть понятно, что подходящая доза будет зависеть от массы тела больного, типа заболевания, тяжести состояния, пути введения и ряда других факторов. Вакцина может быть введена вплоть до 12 раз с помощью инъекции, обычно её нужно вводить приблизительно трижды. В препаратах растворов для инъекций пептиды растворяют в стерильном растворе хлорида натрия при конечных концентрациях по 1 мг/мл каждого пептида и 0,9% хлорида натрия. Обычно объём инъекции составляет 100200 мкл (2 х 100 мкл). Пептид предпочтительно вводят вместе с подходящим адъювантом и/или фактором роста гранулоцитов/макрофагов, например, Ьеисотах® (8Ьегшд Р1оидЬ). Подходящим путём введения может быть внутрикожный, подкожный, внутривенный, пероральный, внутримышечный, интраназальный, через слизистую или любой иной подходящий путь введения. Для поддержания защиты могут потребоваться бустерные введения. Для специалиста в данной области техники будет понятно, что вакцинные композиции по настоящему изобретению применимы не только для профилактики инфекции, но также и для лечения инфекции.
Список последовательностей (1) ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ (ί) ЗАЯВИТЕЛЬ (A) НАЗВАНИЕ: Вюпог А/8 (B) АДРЕС: 31г0тс1а18)огс1е14, Р.О.Вох 1868 6и1зе( (C) ГОРОД: Зктеп (Е) СТРАНА: Норвегия (Г) ПОЧТОВЫЙ КОД: N-3705 (О) ТЕЛЕФОН: (+47) 35-50-57-50 (Н) ФАКС: (+47) 35-50-57-01 (ί) ЗАЯВИТЕЛЬ И АВТОР ИЗОБРЕТЕНИЯ (только для США):
(A) ИМЯ: В1гдег Загепзеп (B) УЛИЦА: Ме1егИа 3 (C) ГОРОД: 3727 ЗИеп (ϋ) СТРАНА: Норвегия (п) НАЗВАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ: ВИЧ-гтептиды, антигены, вакцинные композиции, набор для иммуноанализа и способ определения ВИЧ-индуцированных антител (ηί) КОЛИЧЕСТВО ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ: 25 (ίν) КОМПЬЮТЕРНАЯ ФОРМА:
(A) ВИД НОСИТЕЛЯ: дискета (B) КОМПЬЮТЕР: 1ВМ-совместимый (C) ОПЕРАЦИОННАЯ СИСТЕМА: №ίηάο\ν3-95 (Ц) ПРОГРАММА: №огй 7.0 (ν) ПАРАМЕТРЫ ТЕКУЩЕЙ ЗАЯВКИ:
приоритет № 199901078, поданной 4 марта 2000 г.
НОМЕР ЗАЯВКИ:
(2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЗЕС) Ю ΝΟ 1:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 20 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (Ц) ТОПОЛОГИЯ: обе (п) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ϋΐ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ν) ТИП ФРАГМЕНТА: внутренний (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 1 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 1 представляет собой Ьуз или Агд (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯМ (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 2 представляет собой А1а, СНу, 8ег или Агд (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 3 (Ώ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 3 представляет собой Ьеи или Ме1 (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 4 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 4 представляет собой Оу или Агд (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 5 (В) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 5 представляет собой Рго, ТЬг, Уа1, 8ег, Оп или А1а (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 6 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 6 представляет собой 61у, А1а, Ьуз, Агд, Оп или С1и (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 8 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 8 представляет собой ТЬг или Зег (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯМ (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 9 представляет собой Геи или Пе (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 14 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 14 представляет собой ТЬг, 8ег или Уа1 (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 15 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 15 представляет собой А1а или 8ег (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 16 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 16 представляет собой Суз или 8ег, необязательно Суз образует часть дисульфидной связи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 17 (Э) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 17 представляет собой О1п или Ьеи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 18 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 18 представляет собой О1у, С1и или Агд (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 20 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 20 представляет собой 61у или Агд (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е0 ГО ΝΟ 1:
Хаа, Хаа2 Хаа2 Хаа4 Хааг Хаа« А1а Хаа» Хаа9 О1п ТЬг Рго Тгр Хааы
5 10
Хаа15 Хаа^ Хаар Хааи Уа1 Хаа2о
20 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е0 ГО N0 2:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 20 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίϋ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нетОх) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 16 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: необязательно Суз в положении 16 образует часть дисульфидной связи (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е0 ГО ΝΟ 2:
Ьуз А1а Ьеи О1у Рго С1у А1а ТЬг Ьеи С1п ТЬг Рго Тгр ТЬг А1а Суз
5 10 15
С1п С1у Уа101у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е0 ГО ΝΟ 3;
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ (A) ДЛИНА: 20 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (п) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Ер ГО N0 3
Агд А1а Ьеи О1у Рго А1а А1а ТЬг Ьеи О1п ТЬг Рго Тгр ТЬг А1а Зег
10 15
Ьеи С1у Уа1 О1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Ες ГО N0 4:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 23-24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 1 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 1 представляет собой Агд, Ьуз, Азр или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 2 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 2 представляет собой Тгр, О1у, Ьуз или Агд (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 3 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 3 представляет собой Не, Ьеи, Уа1 или Ме!
(ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯМ (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 4 представляет собой Не, Уа1 или Ьеи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 5 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 5 представляет собой Ьеи, Ме!, Уа1 или Рго (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 12 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 12 представляет собой Агд или Ьуз (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 13 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 13 представляет собой Ме1 или Ьеи (1х) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 15 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 15 представляет собой 5ег, Суз или О1п, необязательно Суз образует часть дисульфидной связи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 17 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 17 представляет собой ТИг, Уа1, Пе, Зег или А1а (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 18 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 18 представляет собой 5ег, О1у или ТЬг (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 21 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 21 представляет собой Азр, О1и, Суз или О1у, необязательно Суз образует часть дисульфидной связи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 22 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 22 представляет собой О1у или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ. 11..12 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: необязательно внесён глициновый «мостик» из 0, 1,2 или 3 остатков (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 8Е0 Ю N0 4·
Хаа| Хаа2 Хааз Хаад Хаа5 С1у Ьеи Азп Рго Ьеи Уа1 [О1у]п Хаа^ Хаан
5 10
Туг Хаац Рго Хаан Хаа^ Не Ьеи Хаа21 Хаа22
20 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8ЕЦ Ю N0 5:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ (A) ДЛИНА: 24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (Ц) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (НО ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 23 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Суз в положении 23 может образовывать часть дисульфидной связи (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕЦ ΙΟ N0 5
Тгр Пе Пе Рго О1у Ьеи Азп Рго Ьеи Уа1 Ст1у О1у О1у Ьуз Ьеи Туг
10 15
Зег Рго ТЬг Зег Пе Ьеи Суз С1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЗЕО ГО N0 6:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе (Н) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: ЗЕО ГО N0 6
Агд Тгр Ьеи Ьеи Ьеи О1у Ьеи Азп Рго Ьеи Уа! О1у О1у О1у Агд Ьеи
10 15
Туг Зег Рго ТЬг Зег Пе Ьеи О1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЗЕ() ГО N0 7:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 23 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Εζ> ГО N0 7:
Ьуз Не Ьеи Ьеи О1у Ьеи Азп Рго Ьеи Уа1 С1у О1у С1у Ατβ Ьеи Туг
10 15
Зег Рго ТЬг Зег Пе Ьеи О1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Εξ> ПО N0 8:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 23 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ЗЕГ) ГО N0 8
Агд Ьеи Ьеи Ьеи О1у Ьеи Азп Рго Ьеи Уа1 61у О1у СНу Агд Ьеи Туг
10 15
Зег Рго ТЬг ТЬг Не Ьеи С1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Εζ) ГО N0 9:
(ΐ) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 22-26 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (Ц) ТОПОЛОГИЯ: обе (И) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 1 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 1 представляет собой Азп, 8ег, О1у, ί5, А1а или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 2 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 2 представляет собой Азп. А1а или Еуз (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 3 (Э) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 3 представляет собой Рго, С1п, О1у, Пе или Ьеи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 7 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 7 представляет собой \'а1 или А1а (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 8 (Ω) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 8 представляет собой СИу или Туз (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 9 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 9 представляет собой О1и. Азр, Еуз, РЬе или ТЬг (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 10 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 10 представляет собой Пе, Ме!, Уа1 или 1_еч (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 11 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 11 представляет собой Туг. Ееи или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 12 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 12 представляет собой 8сг или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(Λ) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (В) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 13 (Г>) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 13 представляет собой Агд или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 14 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 14 представляет собой Азр, Агд. Тгр, А1а или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 15 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 15 представляет собой Пс или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 16 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 16 представляет собой Туг или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 17 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 17 представляет собой Еуз или Агд (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 18 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 18 представляет собой Агд. 1_у«з или Азр (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайг (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 19 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 19 представляет собой I гр или Ст1у (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 20 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 20 представляет собой Пе. Мс!, Уа1, С1п или А1а (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 21 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 21 представляет собой Пс. Уа1 или А1а (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 22 (Ω) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 22 представляет собой 1.сп. Ме! или Уа1 (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 23
О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 23 представляет собой О1у или Суз (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 24 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 24 представляет собой I сн или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 12...13 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ, необязательно внесён глициновый «мостик» из 1.2 или 3 остатков (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5Ер ГО ΝΟ 9
Ха<11 Хаа2 Хаа> Рго Йе Рго Хаа7 Хаа? Хаад Хаа>о Хаац Хаац [О1у]„
5 10 .\аа>з Хааы Хаац Хааи Хаац Хаац Хаац Хаа2о Хаа2) Хаа22 Хаа2з Хаа24
20
12) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 5Е<2 Ιϋ ΝΟ 10:
(ΐ) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ.
(A) ДЛИНА: 25 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίιί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(Λ) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (В) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 24 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Суз в положении 24 может образовывать часть дисульфидной связи (χί ) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 8Еф 10 N0 10:
Агц Азп Не Рго Не Рго Уа1 О1у Азр Не Туг О1у СНу О1у Азр Не
I 5 10 15
Туг Ьуз Аг» Тгр СИп А1а Ьеи Суз Ьеи (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 5Е<3 Ιϋ ΝΟ 11:
(ΐ) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 26 аминокислот (B) ТИП. аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (п) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίιί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е0 ГО N0 11
Аге А1а Не Рго Не Рго А1а 01у ТЬг Ьеи Ьеи Зег О1у СЛу О1у Аг§
10 15
А1а Не Туг I .уз Аге А1а Не Ьеи С1у
25
12) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е() ГО N0 12:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 23 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ- одноцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе (ϋ) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ш) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е(? Ш ΝΟ 12
А1а Ьеи Рго Не Рго А1а С1у РЬе Не Туг СНу О1у СНу Аг§ Не Туг
10 15
Ьуз Аге Тгр С1п А1а Ьеи О1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Ер ΙΟ N0 13:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 22 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίϋ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е(2 ГО N0 13:
Ьуз Пе Рго Не Рго Уа1 СНу РЬе Не СНу О1у С1у Тгр Не Туг Ьуз
10 15
Аге Тгр А1а Пе Ьеи СНу (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е0 ГО N0 14:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίϋ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е0 ГО N0 14:
Ьуз Пе Рго Пе Рго Уа1 С1у ТЬг Ьеи Ьеи Зег СЛу О1у С1у Аг£ Пе
10 15
Туг Ьуз Аг§ Тгр А1а Пе Ьеи О1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е0 ГО N0 15:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 24-28 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίϋ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 1 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 1 представляет собой Рго, Ьуз, Агд или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯМ (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 2 представляет собой С1и, Агд, РЬе или Ьуз (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 5 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 5 представляет собой Рго или ТНг (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 6 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 6 представляет собой Ме1, ТНг или Νίβ (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 7 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 7 представляет собой РЬе или Ьеи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 8 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 8 представляет собой Зег, ТЬг, А1а или Мег (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯМ (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 9 представляет собой А1а, <31и или Ьеи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 11 (Э) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении II представляет собой Зег или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 12 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 12 представляет собой А1а, Агд или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 13 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 13 представляет собой Не, Ьеи или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 14 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 14 представляет собой Зег, А1а, Геи или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 15 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 15 представляет собой Туг, 61и или Азр (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 16 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 16 представляет собой С1у или Азр (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайг (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 17 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 17 представляет собой А1а или Ьеи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 18 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 18 представляет собой ТЬг, Не, Уа1, Ьеи или Азп (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 19 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 19 представляет собой Рго, ТЬг или Зег (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 20 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 20 представляет собой Туг, РЬе, Ы1е, Н1з или О1п (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 21 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 21 представляет собой Азр, Азп, Геи или А1а (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 22 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 22 представляет собой Ьеи, Не, Уа1 или Азп (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 23 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 23 представляет собой Азп, Туг, Суз или С1у (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 24 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 24 представляет собой ТНг, Ме1, Не, А1а, Уа1 или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 25 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Хаа в положении 25 представляет собой О1у или отсутствует (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 23 (Ц) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: необязательно Суз в положении 23 образует часть дисульфидной связи (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: И . .12 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: необязательно внесён глицинаргининовый «мостик» между Хаа 11 и 12, где η = 1, 2 или 3, а ш независимо от η составляет 0, 1, 2 или 3 (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8ЕО ГО ΝΟ 15:
Хаа1 Хаа2 Не Не Хааг Хаа« Хаа7 Хаав Хаа» Ьеи Хаац [Сг!у]п [Аг§]т
5 10
Хаа(2 Хаа Хаан Хаа15 Хаа1б Хаап Хааи Хаа)» Хаа2о Хаал Хая22 Хаа2з
20
Хяя24 Хаа2з (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 5Е() ГО N0 16:
(1) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ (A) ДЛИНА: 25 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ΐχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ 24 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Суз в положении 24 необязательно образует часть дисульфидной связи (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ 5Е0 ГО N0 16:
Ьуз РЬе Не Не Рго 1Ч1е РЬе 8ег А1а Ьеи О1у О1у А1а Не 8ег Туг
5 10 15
Азр Ьеи Азп ТЬг ΝΙε Ьеи Азп Суз Не
25 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е<2 ГО N0 17 .
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 28 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (и) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ΐχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 26 (В) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Суз в положении 26 необязательно образует часть дисульфидной связи (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ЗЕО ГО ΝΟ 17:
Ьуз РЬе Не Не Рго Ы1е РЬе 8ет А1а Ьеи Зег О1у Оу Оу А1а Не
10 15
Зег Туг Азр Ьеи Азп ТЬг РЬе Ьеи Азп Суз Не О1у
25 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е() Ю N0 18:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 27 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 5ЕЦ ΙϋΝΟ 18:
Аг§ РЬе Не Не Рго Ме РЬе ТЬг А1а Ьеи Зег О1у О1у Агд Агд А1а 15 10 15
Ьеи Ьеи Туг С1у А1а ТЬг Рго Туг А1а Не О1у
25 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Εζ) ГО N0 19:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8ЕЦ ГО N0 19:
Ьуз Не Не Рго Ме РЬе Зег А1а Ьеи О1у О1у О1у Агд Ьеи Ьеи Туг
10 15
С1у А1а ТЬг Рго Туг А1а Не П1у (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8ЕО ГО ΝΟ 20:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 25 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е0 ГО N0 20:
Агд Не Не Рго Ме РЬе ТЬг А1а Ьеи Зег О1у О1у О1у Агд Ьеи Ьеи 15 10 15
Туг С1у А1а ТЬг Рго Туг А1а Не О1у
25 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е() ГО N0 21:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 44 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: двухцепочечная (ϋ) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: димерный пептид (ίϋ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: дисульфидная связь между положением 16 в 8Ε<2 ГО N0 2 и положением 23 в 8Е() Ю N0 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е6 ГО N0 22:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 40 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: двухцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: димерный пептид (ίϋ) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: дисульфидная связь между положением 16 в 8Εζ) ГО N0 2 и положением 16 в 5Е() ГО N0 2 (ϋ) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ:
(2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Еф ГО N0 23:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 48 аминокислот (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: двухцепочечная (О) ТОПОЛОГИЯ: обе - (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: димерный пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: дисульфидная связь между положением 23 в 5Ер ГО N0 5 и положением 23 в 8Е() ГО N0 5 (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 5Е() ГО N0 24:
0) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная (Э) ТОПОЛОГИЯ, обе (ίί) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нет (ίχ) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 23 (Э) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Суз в положении 23 может образовывать часть дисульфидной связи (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е() 10 N0 24:
Азп Не Рго Не Рго Уа1 01у Азр Не Туг 0!у 01у О1у Азр Не Туг
Ю 15
Ьуз Агд Туг О1п А1а Ьеи Суз Ьеи (2) ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ 8Е<> ГО N0 25:
(ί) ХАРАКТЕРИСТИКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ:
(A) ДЛИНА: 24 аминокислоты (B) ТИП: аминокислота (C) ЧИСЛО ЦЕПЕЙ: одноцепочечная
ГО) ТОПОЛОГИЯ: обе (й) МОЛЕКУЛЯРНЫЙ ТИП: пептид (ίίί) ГИПОТЕТИЧЕСКИЙ: нетОх) СВОЙСТВО:
(A) ИМЯ/КЛЮЧ: модифицированный сайт (B) ЛОКАЛИЗАЦИЯ: 23 (О) ДРУГАЯ ИНФОРМАЦИЯ: Суз в положении 23 необязательно образует часть дисульфидной связи (χί) ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ: 8Е0 Ю N0 25
Тгр Не Не Рго Ме РЬе 5ег А1а Ьеи СИу 01у А1а Не 8ег Туг Азр
10 15
Ьеи Азп ТЬг Νΐε Ьеи Азп Суз Не

Claims (18)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Пептид на основе белка ВИЧ дад р24, включающий по крайней мере девять расположенных подряд аминокислот модифицированной по сравнению с природной аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N0 1:
    Хаа) Хаа2 Хаа3 Хаац Хаа5 Хаа6 А1а Хаа8 Хаа9 С1п ТЬг Рго Тгр Хаа14 Хаа^ Хаа16 Хааг Хаа18 Уа1 Хаа20 (8Е0 ГО N0 1), где Хаа в положении 1 пептидного производного означает Ьуз или Агд;
    Хаа в положении 2 означает А1а, С1у, 8ег или Агд;
    Хаа в положении 3 означает Ьеи или Ме1;
    Хаа в положении 4 означает С1у или Агд;
    Хаа в положении 5 означает Рго, ТЬг, Уа1, 8ег, С1п или А1а;
    Хаа в положении 6 означает С1у, А1а, Ьуз, Агд, С1п или С1и;
    Хаа в положении 8 означает ТЬг или 8ег;
    Хаа в положении 9 означает Ьеи или 11е;
    Хаа в положении 14 означает ТЬг, 8ег или Уа1;
    Хаа в положении 15 означает А1а или 8ег;
    Хаа в положении 16 означает Суз или 8ег;
    Хаа в положении 17 означает С1п или Ьеи;
    Хаа в положении 18 означает С1у, С1и или Агд;
    Хаа в положении 20 означает С1у или Агд;
    причем концевые сегменты последовательности могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами, ацетилами или их солями; и два или большее число остатков Суз могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи - 8-(СН2)Р-8- или «мостик» -(СН2)Р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, N или 8.
  2. 2. Пептид по п.1, имеющий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0 2 или 8Е0 ГО N0 3.
  3. 3. Пептид на основе белка ВИЧ дад р24, включающий по крайней мере шесть расположенных подряд аминокислот модифицированной по сравнению с природной аминокислотной последовательности 8Е0 ГО Νο 4:
    Хаа1 Хаа2 Хаа3 Хаа4 Хаа5 С1у Ьеи Азп Рго Ьеи Уа1 [С1у]п Хаа12 Хаа|3 Туг Хаав Рго Хааг ХаЯ18 11е Ьеи Хаа21 Хаа22 (8Е0 ГО N0 4), где Хаа в положении 1 означает Агд, Ьуз, Азр или отсутствует;
    Хаа в положении 2 означает Тгр, С1у. Ьуз или Агд;
    Хаа в положении 3 означает 11е, Ьеи, Уа1 или Ме1;
    Хаа в положении 4 означает 11е, Уа1 или Ьеи;
    Хаа в положении 5 означает Ьеи, Ме!, Уа1, или Рго;
    Хаа в положении 12 означает Агд или Ьуз;
    Хаа в положении 13 означает Ме! или Ьеи;
    Хаа в положении 15 означает 8ег, Суз или С1п;
    Хаа в положении 17 означает ТЬг, Уа1, 11е, 8ег или А1а;
    Хаа в положении 18 означает 8ег, С1у или ТЬг;
    Хаа в положении 21 означает Азр, С1и, Суз или С1у;
    Хаа в положении 22 означает С1у или отсутствует ; а п = 0, 1, 2 или 3;
    причем концевые сегменты последовательности могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами, ацетилами или их солями; и два или большее число остатков Суз могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи - 8-(СН2)Р-8- или «мостик» -(СН2)Р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, N или 8.
  4. 4. Пептид по п.3, имеющий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0 5, 8Е0 ГО N0 6, 8ЕО ГО N0 7 или 8ЕО ГО N0 8.
  5. 5. Пептид на основе белка ВИЧ дад р24, включающий по крайней мере шесть расположенных подряд аминокислот модифицированной по сравнению с природной аминокислотной последовательности 8Е0 ГО N 9:
    Хаа) Хаа2 Хаа3 Рго 11е Рго Хаа7 Хаа8 Хаа9 Хааю Хаап Хаав [01у]п Хаав Хаа14 Хаав Хаав, Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 Хаа22 Хаа23 Хаа24 (8ЕС) ГО N0 9), где Хаа в положении 1 означает Азп, 8ег, С1у, Н1з, А1а, Рго, Агд или отсутствует;
    Хаа в положении 2 означает Азп, А1а или Ьуз;
    Хаа в положении 3 означает Рго, С1п, С1у, 11е или Ьеи;
    Хаа в положении 7 означает Уа1 или А1а;
    Хаа в положении 8 означает С1у или Ьуз;
    Хаа в положении 9 означает С1и, Азр, Ьуз, РЬе или ТЬг;
    Хаа в положении 10 означает 11е, Ме!, Уа1 или Ьеи;
    Хаа в положении 11 означает Туг, Ьеи или отсутствует;
    Хаа в положении 12 означает 8ег или отсутствует;
    Хаа в положении 13 означает Агд или отсутствует;
    Хаа в положении 14 означает Агд, Тгр, А1а или отсутствует;
    Хаа в положении 15 означает 11е или отсутствует;
    Хаа в положении 16 означает Туг или отсутствует;
    Хаа в положении 17 означает Ьуз или Агд;
    Хаа в положении 18 означает Агд, Ьуз или Азр;
    Хаа в положении 19 означает Тгр или С1у;
    Хаа в положении 20 означает 11е, Ме!, Уа1, С1п или А1а;
    Хаа в положении 21 означает 11е, Уа1 или А1а;
    Хаа в положении 22 означает Ьеи, Ме! или Уа1;
    Хаа в положении 23 означает С1у или Суз;
    Хаа в положении 24 означает Ьеи или отсутствует; а п=1, 2 или 3;
    причем концевые сегменты последовательности могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами, ацетилами или их солями; и два или большее число остатков Суз могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи: -8-(СН2)Р-8- или «мостик» -(СН2)р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, N или 8.
  6. 6. Пептид по п.5, имеющий аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0 10, 8Е0 ГО N0 11, 8ЕО ГО N0 12, 8ЕО ГО N0 13 или 8 ЕС) ГО N0 14.
  7. 7. Пептид на основе белка ВИЧ дад р24, включающий по крайней мере шесть расположенных подряд аминокислот модифицированной по сравнению с природной аминокислотной последовательности 8Е0 ГО № 15:
    Хаа1 Хаа2 11е 11е Хаа5 Хаа6 Хаа7 Хаа8 Хаа9 Ьеи Хаац [С1у]п [Агд]т Хаа12 Хаа13 Хаа14 Хаа15 Хаа16 Хаа17 Хаа18 Хаа19 Хаа20 Хаа21 Хаа22 Хаа23 Хаа24 (8ЕС) ГО N0 15), где Хаа в положении 1 означает Рго, Ьуз,
    Агд или отсутствует;
    Хаа в положении 2 означает С1и, Агд, РЬе или Ьуз;
    Хаа в положении 5 означает Рго или ТЬг;
    Хаа в положении 6 означает МеЧ, ΤΙιγ или Меи;
    Хаа в положении 7 означает Ρίκ или Ьеи;
    Хаа в положении 8 означает 8ег, ΤΙιγ. Α1α или МеЧ;
    Хаа в положении 9 означает Α1α. 61и или Ьеи;
    Хаа в положении 11 означает 8ег или отсутствует;
    Хаа в положении 12 означает Л1а, Лгд или отсутствует;
    Хаа в положении 13 означает Не, Ьеи или отсутствует;
    Хаа в положении 14 означает 8ег, ΑΠ, Ьеи или отсутствует;
    Хаа в положении 15 означает Туг, 61и или Αδρ;
    Хаа в положении 16 означает 61у или Αδρ;
    Хаа в положении 17 означает Α1η или Ьеи;
    Хаа в положении 18 означает ΤΙιγ. Не, Уа1, Ьеи или Αδη;
    Хаа в положении 19 означает Ργο, ΤΙιγ или 8ег;
    Хаа в положении 20 означает Τυγ. ΡΙκ. Меи. Ηίδ или 61η;
    Хаа в положении 21 означает Αδρ, Αδη, Ьеи или Α1η;
    Хаа в положении 22 означает Ьеи, Не, Уа1 или Αδη;
    Хаа в положении 23 означает Αδη, Τγτ, Суδ или 61у;
    Хаа в положении 24 означает ΤΙιγ. МеЧ, Не, Α1η. Уа1 или отсутствует;
    Хаа в положении 25 означает 61у или отсутствует; а η=1, 2 или 3 и т=0, 1, 2 и 3, независимо друг от друга;
    причем концевые сегменты последовательности могут быть свободными карбоксильными или аминогруппами, амидами, ацилами, ацетилами или их солями; и два или большее число остатков Суδ могут образовывать внутрицепочечные или межцепочечные дисульфидные связи -8-(6Η2)Ρ-8- или «мостик» -(СН2)р-, где р=1-8, необязательно прерываемый одним или несколькими гетероатомами, такими как О, Ν или 8.
  8. 8. Пептид по п.7, имеющий аминокислотную последовательность 8Е6 ΙΌ ΝΟ 16, 8Е6 ΙΌ ΝΟ 17, 8ЕО ΙΌ ΝΟ 18, 8ЕО ΙΌ ΝΟ 19 или 8ЕО ΙΌ ΝΟ 20.
  9. 9. ВИЧ-антиген, включающий по крайней мере один пептид по любому из пп.1-8.
  10. 10. Антиген по п.9, включающий по крайней мере один пептид по п.1, по крайней мере один пептид по п.3, по крайней мере пептид по п.5 и по крайней мере пептид по п.7.
  11. 11. Вакцинная композиция, включающая антиген по п.9 вместе с фармацевтически приемлемым растворителем и необязательно с адъювантом, носителем и/или наполнителем и необязательно с дополнительным(ми) иммуностимулирующим(ми) соединением(ями).
  12. 12. Вакцинная композиция по п.11, включающая по крайней мере четыре пептида, причем по крайней мере один пептид выбирают из пептида по п.1, по крайней мере один пептид выбирают из пептида по п.3, по крайней мере один пептид выбирают из пептида по п.5 и по крайней мере один пептид выбирают из пептида по п.7.
  13. 13. Вакцинная композиция по п.8, включающая пептиды с аминокислотной последовательностью 8Е6 ΙΌ ΝΟ 3 по п.2, с аминокислотной последовательностью 8Е6 ΙΌ ΝΟ 6 по п.4, с аминокислотной последовательностью 8Е6 ΙΌ ΝΟ 11 по п.6 и с аминокислотной последовательностью 8Е6 ΙΌ ΝΟ 18 по п.8.
  14. 14. Вакцинная композиция по любому из пп.12-13, в которой пептиды растворены в водном физиологическом растворе, а необязательным иммуностимулирующим соединением является фактор роста гранулоцитов/макрофагов.
  15. 15. Вакцинная композиция по любому из пп.12-14, включающая адъювант, выбираемый из группы монофосфориллипида-А (МРЬ®), полного или неполного адъюванта Фрейнда или гидроксида алюминия.
  16. 16. Способ определения антител, индуцированных ВИЧ или ВИЧ-специфичными пептидами или белками, в образце жидкостей тела, в котором упомянутый образец подвергают иммуноанализу с использованием антигена по любому из пп.9-10.
  17. 17. Набор для иммуноанализа с целью определения антител, индуцированных ВИЧ или ВИЧ-специфичными пептидами или белками, в образце жидкостей тела, в котором в качестве диагностического антигена использован антиген по любому из пп.9-10.
  18. 18. Антитело, способное избирательно взаимодействовать с антигеном по п.9 или 10.
EA200100943A 1999-03-04 2000-03-02 МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ВИЧ-ПЕПТИДЫ НА ОСНОВЕ БЕЛКА gag p24, АНТИГЕНЫ, ВАКЦИННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, НАБОР ДЛЯ ИММУНОАНАЛИЗА И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИЧ-ИНДУЦИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ EA004802B9 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
NO19991078A NO311807B1 (no) 1999-03-04 1999-03-04 HIV-peptider, antigener, vaksinepreparater, immunoassay- testsett og en metode for påvisning av antistoffer fremkalt av HIV
PCT/NO2000/000075 WO2000052040A1 (en) 1999-03-04 2000-03-02 Hiv peptides, antigens, vaccine compositions, immunoassay kit and a method of detecting antibodies induced by hiv

Publications (3)

Publication Number Publication Date
EA200100943A1 EA200100943A1 (ru) 2002-02-28
EA004802B1 true EA004802B1 (ru) 2004-08-26
EA004802B9 EA004802B9 (ru) 2015-03-31

Family

ID=19903050

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200100943A EA004802B9 (ru) 1999-03-04 2000-03-02 МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ВИЧ-ПЕПТИДЫ НА ОСНОВЕ БЕЛКА gag p24, АНТИГЕНЫ, ВАКЦИННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, НАБОР ДЛЯ ИММУНОАНАЛИЗА И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИЧ-ИНДУЦИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ

Country Status (23)

Country Link
US (4) US6706859B1 (ru)
EP (1) EP1159298B1 (ru)
JP (5) JP2002541069A (ru)
CN (4) CN101328210A (ru)
AT (1) ATE397014T1 (ru)
AU (1) AU771827B2 (ru)
BR (1) BR0008741A (ru)
CA (1) CA2363947C (ru)
CY (1) CY1108299T1 (ru)
CZ (1) CZ300505B6 (ru)
DE (1) DE60039036D1 (ru)
DK (1) DK1159298T3 (ru)
EA (1) EA004802B9 (ru)
ES (1) ES2307496T4 (ru)
HK (1) HK1044778B (ru)
HU (1) HU229282B1 (ru)
ID (1) ID30497A (ru)
NO (1) NO311807B1 (ru)
NZ (4) NZ514619A (ru)
PT (1) PT1159298E (ru)
SK (1) SK287382B6 (ru)
WO (1) WO2000052040A1 (ru)
ZA (1) ZA200107072B (ru)

Families Citing this family (32)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2398816A1 (en) 2000-02-04 2001-08-09 Duke University Human immunodeficiency virus vaccine
NO314588B1 (no) 2000-09-04 2003-04-14 Bionor Immuno As HIV-peptider, antigener, vaksinesammensetning, immunoassay- testsett og en fremgangsmåte for å påvise antistoffer indusert av HIV
NO314587B1 (no) * 2000-09-04 2003-04-14 Bionor Immuno As HIV regulatoriske- og hjelpepeptider, antigener, vaksinepreparater, immunoassay testsett og en metode for påvisning av antistoffer fremkaltav HIV
CA2645342A1 (en) 2006-03-10 2007-09-20 Peptcell Limited Peptides of regulatory or accessory proteins of hiv, compositions and the utilization thereof
WO2009155489A2 (en) 2008-06-19 2009-12-23 Variation Biotechnologies, Inc. Compositions and methods for treating influenza
AU2010270722B2 (en) 2009-07-06 2015-06-04 Variation Biotechnologies, Inc. Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom
WO2011005772A1 (en) 2009-07-06 2011-01-13 Variation Biotechnologies, Inc. Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom
ES2625406T3 (es) 2010-03-25 2017-07-19 Oregon Health & Science University Glicoproteínas de CMV y vectores recombinantes
WO2012006367A2 (en) 2010-07-06 2012-01-12 Variation Biotechnologies, Inc. Compositions and methods for treating influenza
NZ611176A (en) * 2010-12-02 2015-07-31 Bionor Immuno As Peptide scaffold design
WO2012097346A1 (en) 2011-01-13 2012-07-19 Variation Biotechnologies, Inc. Compositions and methods for treating viral infections
SI2691530T1 (en) 2011-06-10 2018-08-31 Oregon Health & Science University CMV glycoproteins and recombinant vectors
US20130189754A1 (en) 2011-09-12 2013-07-25 International Aids Vaccine Initiative Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies
US9402894B2 (en) 2011-10-27 2016-08-02 International Aids Vaccine Initiative Viral particles derived from an enveloped virus
EP2802353A4 (en) 2012-01-12 2015-12-02 Variation Biotechnologies Inc COMPOSITIONS AND METHOD FOR THE TREATMENT OF VIRUS INFECTIONS
RU2698906C2 (ru) 2012-01-27 2019-09-02 Вэриэйшн Биотекнолоджиз, Инк. Способы и композиции для терапевтических агентов
WO2013182662A1 (en) * 2012-06-06 2013-12-12 Bionor Immuno As Vaccine
IN2014KN02769A (ru) * 2012-06-06 2015-05-08 Bionor Immuno As
EP2679596B1 (en) 2012-06-27 2017-04-12 International Aids Vaccine Initiative HIV-1 env glycoprotein variant
WO2015007337A1 (en) 2013-07-19 2015-01-22 Bionor Immuno As Method for the vaccination against hiv
EP3033106A1 (en) * 2013-08-14 2016-06-22 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Immunoadjuvant compositions and uses thereof
EP2848937A1 (en) 2013-09-05 2015-03-18 International Aids Vaccine Initiative Methods of identifying novel HIV-1 immunogens
US10058604B2 (en) 2013-10-07 2018-08-28 International Aids Vaccine Initiative Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers
WO2015086738A2 (en) * 2013-12-11 2015-06-18 Bionor Immuno As Hiv vaccine
WO2015110665A1 (en) * 2014-01-27 2015-07-30 Bionor Immuno As Dosage regimen for hiv vaccine
CA2936139A1 (en) 2014-01-27 2015-07-30 Bionor Immuno As Method for the vaccination against hiv
WO2015110659A1 (en) * 2014-01-27 2015-07-30 Bionor Immuno As Methods of immunization with a vaccine inducing a humoral immune response and with a vaccine inducing a cellular immune response
EP3708576B1 (en) * 2014-04-03 2023-02-22 Amgen Inc. Method for preparing amg 416
WO2016005508A1 (en) 2014-07-11 2016-01-14 Bionor Immuno As Method for reducing and/or delaying pathological effects of human immunodeficiency virus i (hiv) or for reducing the risk of developing acquired immunodeficiency syndrome (aids)
US10174292B2 (en) 2015-03-20 2019-01-08 International Aids Vaccine Initiative Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers
US9931394B2 (en) 2015-03-23 2018-04-03 International Aids Vaccine Initiative Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers
CA2984991A1 (en) 2015-05-04 2016-11-10 Bionor Immuno As Dosage regimen for hiv vaccine

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK3687A (da) 1986-01-06 1987-07-07 Hoffmann La Roche Polypeptider og fremgangsmaade til fremstilling deraf
US4925784A (en) 1986-04-04 1990-05-15 Hoffmann-La Roche Inc. Expression and purification of an HTLV-III gag/env gene protein
GB8629116D0 (en) 1986-12-05 1987-01-14 Hoffmann La Roche Env/gag polypeptides
NZ226026A (en) 1987-09-04 1991-03-26 Wellcome Found Immunoassay for an antibody using recombinant antigens expressed in two different genera
US4888290A (en) * 1987-11-06 1989-12-19 Coulter Corporation Monoclonal antibody specific to HIV antigens
EP0356007A3 (en) 1988-07-22 1991-07-03 Medical Research Council Antigenic determinants
KR940000755B1 (ko) * 1990-02-16 1994-01-29 유나이티드 바이오메디칼 인코오포레이티드 Hcv에 대한 항체 검출, hcv 감염의 진단 및 백신으로서의 그 예방에 특히 적합한 합성 펩티드
SE468168B (sv) 1990-02-20 1992-11-16 Replico Medical Ab Hiv-1, p24 peptider, diagnostiska antigener och foerfarande foer saerskiljande diagnostik av preliminaert hiv-1 positiva serumprov
US5288514A (en) * 1992-09-14 1994-02-22 The Regents Of The University Of California Solid phase and combinatorial synthesis of benzodiazepine compounds on a solid support
FR2703252B1 (fr) * 1993-03-31 1996-09-06 Fernand Narbey Torossian Complexe immunomodulateur anti SIDA.
WO1994028871A1 (en) 1993-06-07 1994-12-22 Endocon, Inc. Implant stimulated cellular immunity
CN1055701C (zh) * 1993-10-19 2000-08-23 味之素株式会社 能诱导对hiv免疫应答的肽及含有该肽的预防、治疗aids的药物
FR2731013B1 (fr) * 1995-02-27 1997-05-16 Inst Nat Sante Rech Med Vih-1 de groupe o, fragments desdits virus, ainsi que leurs applications
ES2187947T5 (es) 1997-03-10 2014-01-29 Roche Diagnostics Gmbh Procedimiento para la detección simultánea de antígenos de HIV y anticuerpos de HIV

Also Published As

Publication number Publication date
SK287382B6 (sk) 2010-08-09
CZ300505B6 (cs) 2009-06-03
HK1044778A1 (en) 2002-11-01
US20040259797A1 (en) 2004-12-23
JP5814331B2 (ja) 2015-11-17
CN101328209A (zh) 2008-12-24
NZ525751A (en) 2004-10-29
US20080107670A1 (en) 2008-05-08
CZ20013195A3 (cs) 2002-02-13
BR0008741A (pt) 2002-01-08
HK1044778B (zh) 2009-04-24
JP2011074081A (ja) 2011-04-14
CN101328208A (zh) 2008-12-24
CA2363947A1 (en) 2000-09-08
ID30497A (id) 2001-12-13
CY1108299T1 (el) 2014-02-12
EA004802B9 (ru) 2015-03-31
HUP0200265A2 (en) 2002-06-29
NZ525753A (en) 2004-10-29
EP1159298B1 (en) 2008-05-28
ZA200107072B (en) 2002-11-27
JP2014043468A (ja) 2014-03-13
JP2002541069A (ja) 2002-12-03
WO2000052040A1 (en) 2000-09-08
DE60039036D1 (de) 2008-07-10
NO991078D0 (no) 1999-03-04
DK1159298T3 (da) 2008-08-25
ATE397014T1 (de) 2008-06-15
US6706859B1 (en) 2004-03-16
CA2363947C (en) 2008-05-20
CN100387617C (zh) 2008-05-14
JP5695010B2 (ja) 2015-04-01
CN1346367A (zh) 2002-04-24
JP5313998B2 (ja) 2013-10-09
EP1159298A1 (en) 2001-12-05
AU771827B2 (en) 2004-04-01
ES2307496T3 (es) 2008-12-01
NZ514619A (en) 2003-10-31
CN101328210A (zh) 2008-12-24
NZ525752A (en) 2004-10-29
JP5695012B2 (ja) 2015-04-01
US7709004B2 (en) 2010-05-04
EA200100943A1 (ru) 2002-02-28
US20080107669A1 (en) 2008-05-08
PT1159298E (pt) 2008-09-04
US7311915B2 (en) 2007-12-25
AU3335800A (en) 2000-09-21
SK12402001A3 (sk) 2002-02-05
ES2307496T4 (es) 2015-03-06
HU229282B1 (en) 2013-10-28
NO991078L (no) 2000-09-05
NO311807B1 (no) 2002-01-28
JP2013032384A (ja) 2013-02-14
JP2013032386A (ja) 2013-02-14
US7709003B2 (en) 2010-05-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA004802B1 (ru) МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ВИЧ-ПЕПТИДЫ НА ОСНОВЕ БЕЛКА gag p24, АНТИГЕНЫ, ВАКЦИННЫЕ КОМПОЗИЦИИ, НАБОР ДЛЯ ИММУНОАНАЛИЗА И СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИЧ-ИНДУЦИРОВАННЫХ АНТИТЕЛ
US7612168B2 (en) Modified HIV peptides, antigens, compositions, immunoassay kit and a method of detecting antibodies induced by HIV
AU2001282706A1 (en) HIV peptides from conserved in gag p17 and 924 and their application in E.G. vaccines
US7097971B2 (en) HIV-1 peptide, antigen, immunogenic composition, diagnostic method and immunoassay kit

Legal Events

Date Code Title Description
TH4A Publication of the corrected specification to eurasian patent
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU